一种人绒毛膜促性腺激素的制备方法与流程

技术特征：
1.一种人绒毛膜促性腺激素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将人绒毛膜促性腺激素粗制品经过染料亲和层析纯化，得到中间体i；(2)将所述中间体i经过阴离子交换层析纯化，得到中间体ii；(3)将所述中间体ii经过凝胶过滤层析纯化，得到中间体iii；(4)将所述中间体ⅲ经过冷冻干燥，得到人绒毛膜促性腺激素成品。2.根据权利要求1所述的人绒毛膜促性腺激素的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述染料亲和层析纯化包括以下步骤：将所述人绒毛膜促性腺激素粗制品上样至染料亲和层析柱，然后用缓冲液洗脱，收集洗脱峰溶液，即为中间体i。3.根据权利要求2所述的人绒毛膜促性腺激素的制备方法，其特征在于，所述缓冲液洗脱包括以下步骤：用ph6.0－6.2的0.1m磷酸盐缓冲液洗涤，然后用ph8.0－8.4且含0.3m nacl的0.1m磷酸盐缓冲液洗涤，再用ph8.0－8.4且含1.1－1.2mnacl的0.1m磷酸盐缓冲液洗脱。4.根据权利要求1－3任一项所述的人绒毛膜促性腺激素的制备方法，其特征在于，步骤(1)中进行所述染料亲和层析纯化前还包括：将所述人绒毛膜促性腺激素粗制品溶解于ph值为6.0－6.2的0.1m磷酸盐缓冲液。5.根据权利要求1所述的人绒毛膜促性腺激素的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述阴离子交换层析纯化包括以下步骤：将所述中间体i上样至阴离子交换层析柱，然后用缓冲液洗脱，收集洗脱峰溶液，即为中间体ii。6.根据权利要求5所述的人绒毛膜促性腺激素的制备方法，其特征在于，所述缓冲液洗脱包括以下步骤：用ph5.6－6.0的0.01m磷酸盐缓冲液洗涤，再用ph4.5－5.0且含0.1m nacl的0.01m磷酸盐缓冲液洗脱。7.根据权利要求1、5、6任一项所述的人绒毛膜促性腺激素的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述阴离子交换层析纯化前还包括：将所述中间体i进行超滤脱盐，脱盐后溶液电导率为1－2ms/cm，蛋白浓度为20－30mg/ml。8.根据权利要求1所述的人绒毛膜促性腺激素的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述凝胶过滤层析纯化包括以下步骤：将所述中间体ii上样至凝胶过滤层析柱，然后用缓冲液洗脱，收集洗脱峰溶液，即为中间体iii。9.根据权利要求8所述的人绒毛膜促性腺激素的制备方法，其特征在于，所述缓冲液洗脱采用的是ph7.0－7.5且含0.1m nacl的0.01m磷酸盐缓冲液。10.根据权利要求1所述的人绒毛膜促性腺激素的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述冷冻干燥前还包括：将所述中间体iii进行超滤脱盐，脱盐后溶液电导率为0.5－1.0ms/cm，蛋白浓度为10－20mg/ml。

技术总结
本发明涉及生物技术领域，公开了一种人绒毛膜促性腺激素的制备方法，包括以下步骤：(1)将人绒毛膜促性腺激素粗制品经过染料亲和层析纯化，得到中间体I；(2)将所述中间体I经过阴离子交换层析纯化，得到中间体II；(3)将所述中间体II经过凝胶过滤层析纯化，得到中间体III；(4)将所述中间体Ⅲ经过冷冻干燥，得到人绒毛膜促性腺激素成品。本发明以HCG粗制品为起始原料，依次采用染料亲和层析、阴离子交换层析以及凝胶过滤层析工艺，制备方法操作简便、生产成本低，获得的人绒毛膜促性腺激素效价及纯度更高，无外源蛋白的污染，HCG成品的效价不低于9000IU/mg，总收率不低于90％。总收率不低于90％。总收率不低于90％。


技术研发人员：胡著阳 魏超娟 熊磊 徐富勇 耿卫锋 夏鑫水
受保护的技术使用者：江西浩然生物制药有限公司
技术研发日：2022.03.24
技术公布日：2022/6/7