一种具有免疫力改善作用的组合物及其应用的制作方法

1.本发明属于食品技术领域，具体涉及一种具有免疫力改善作用的组合物及其应用。


背景技术：

2.季节交替、气候善变、早晚温差、环境污染、工作压力等多种因素造成人体免疫力低下，每年有数千万以上人群受到感冒、流感等细菌、病毒性疾病的侵扰，和免疫力低下相关的亚健康困扰，免疫力泛功能产品的消费场景和需求潜力巨大；根据市场研究消费者洞察，免疫力低下问题是青少年人群和中老年人群的首要困扰问题，是重要的市场机会；国内外专家和权威机构建议居民通过摄入营养素或功能性食品提高免疫力，增强对抗病毒或细菌的自身能力，从而减少患病几率，降低疾病反应和伤害程度，缩短病程。
3.免疫系统包含多种免疫细胞，巨噬细胞是一种位于组织内的白血球，在脊椎动物体内参与非特异性免疫和特异性免疫。其主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行吞噬以及消化，继而激活淋巴细胞和其他免疫细胞，令其对病原体作出免疫防御。巨噬细胞是免疫系统发挥免疫作用尤其是初始阶段的重要免疫细胞，在机体免疫力低下的情况下，巨噬细胞整体数量、细胞活性以及吞噬功能都可能发生降低的表现。


技术实现要素：

4.有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种具有免疫力改善作用的组合物及其应用，本发明提供的组合物在合理配比下，通过低剂量添加实现在机体免疫调节方面的协同作用，尤其是保护巨噬细胞的数量和吞噬功能。
5.本发明提供了一种具有免疫力改善作用的组合物，由以下质量份的原料组成：
6.0.336～0.69质量份的红参提取物；
7.0.032～0.063质量份的接骨木莓浓缩果汁粉。
8.优选的，所述红参提取物为红参水提物。
9.优选的，所述红参水提物包括红参水提物粉0.32～0.663质量份和红参浸膏0.016～0.027质量份。
10.优选的，所述红参水提取物粉中红参皂苷含量≥1wt％，所述红参浸膏中红参皂苷含量≥3wt％，所述接骨木莓浓缩果汁粉中花青素含量≥10％。
11.优选的，以每人每日食用量计，所述具有免疫力改善作用的组合物由红参水提物粉0.32～0.663g，红参浸膏0.016～0.027g，接骨木莓浓缩果汁粉0.032～0.063组成。
12.优选的，以每人每日食用量计，所述具有免疫力改善作用的组合物由红参水提物粉0.32g，红参浸膏0.016g，接骨木莓浓缩果汁粉0.032g组成；
13.或者，
14.以每人每日食用量计，所述具有免疫力改善作用的组合物由红参水提物粉0.663g，红参浸膏0.027g，接骨木莓浓缩果汁粉0.063g组成。
15.优选的，所述组合物中还包括植物提取物。
16.本发明还提供了一种上述组合物在制备具有免疫力改善作用食品或保健食品中的应用。
17.优选的，所述食品为乳制品，饮料或休闲食品。
18.优选的，所述保健食品的剂型包括片剂、粉剂、颗粒剂、茶剂、冲剂、丸剂、膏剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、饮料、酒剂、糖浆、滴剂、饼干类、糖果类、糕点类、乳液乳类。
19.与现有技术相比，本发明提供了一种具有免疫力改善作用的组合物，由以下质量份的原料组成：0.336～0.69质量份的红参提取物；0.032～0.063质量份的接骨木莓浓缩果汁粉。本发明提供的组合物在合理配比的情况下，通过低剂量添加实现在机体免疫调节方面的协同作用，尤其是保护巨噬细胞的数量和吞噬功能。
附图说明
20.图1为对比例与实施例处理后斑马鱼巨噬细胞数量典型图(注：框内的亮光点为分析部位巨噬细胞)；
21.图2为对比例与实施例对斑马鱼巨噬细胞减少改善作用；与模型对照组比较：***p《0.001；
22.图3为对比例与实施例处理后斑马鱼巨噬细胞吞噬功能典型图(注：亮光点为分析荧光颗粒)；
23.图4为对比例与实施例对斑马鱼巨噬细胞吞噬促进作用；与模型对照组比较：**p《0.01，***p《0.001。
具体实施方式
24.本发明提供了一种具有免疫力改善作用的组合物，由以下质量份的原料组成：
25.0.336～0.69质量份的红参提取物；
26.0.032～0.063质量份的接骨木莓浓缩果汁粉。
27.本发明对所述红参提取物的提取方式并没有特殊限制，本领域技术人员公知的提取方法即可。在本发明中，所述红参提取物优选为红参水提物。
28.在本发明的一些具体实施方式中，所述红参水提物采用红参水提物粉和红参浸膏组合的形式。其中，所述红参水提物包括红参水提物粉0.32～0.663质量份和红参浸膏0.016～0.027质量份。
29.在本发明中，所述红参提取物中的红参水提物粉中红参皂苷含量≥1％，红参浸膏中红参皂苷含量≥3％。
30.本发明提供的具有免疫力改善作用的组合物中包括0.336～0.69质量份的红参提取物，优选为0.336、0.35、0.40、0.50、0.69，或0.336～0.69质量份之间的任意质量份。
31.在本发明的一些具体实施方式中，所述具有免疫力改善作用的组合物包括红参水提物粉0.32～0.663质量份和红参浸膏0.016～0.027质量份。
32.具体的，所述具有免疫力改善作用的组合物包括0.32～0.663质量份的红参水提物，优选为0.32、0.35、0.40、0.50、0.663，或0.32～0.663质量份之间的任意质量份。
33.所述具有免疫力改善作用的组合物还包括0.016～0.027质量份的红参浸膏，优选
为0.016、0.018、0.020、0.022、0.024、0.027，或0.016～0.027质量份之间的任意质量份。
34.本发明对所述红参水提物粉与红参浸膏的制备方法并没有特殊限制，本领域技术人员公知的制备方法即可。
35.优选的，所述红参水提物粉的制备方法为：
36.红参与水混合加热浸提，得到浸提液；
37.将所述浸提液浓缩干燥，得到红参水提物粉。
38.所述红参浸膏的制备方法为：
39.红参与水混合加热浸提，得到浸提液；
40.将所述浸提液浓缩，得到红参浸膏。
41.在本发明中，具有免疫力改善作用的组合物包括0.032～0.063质量份的接骨木莓浓缩果汁粉。
42.所述接骨木莓浓缩果汁粉中花青素含量≥10％。
43.在本发明中，所述具有免疫力改善作用的组合物包括0.032～0.063质量份的接骨木莓浓缩果汁粉，优选为0.032、0.040、0.045、0.050、0.055、0.063，或0.032～0.063质量份之间的任意质量份。
44.所述接骨木莓浓缩果汁粉的制备方法为：
45.接骨木莓酶解后压榨，得到果浆；
46.将所述果浆灭菌后依次进行酶解、澄清、过滤，再次进行灭菌，然后进行超滤，得到浓缩果汁；
47.将所述浓缩果汁干燥，得到接骨木莓浓缩果汁粉。
48.在本发明中，以每人每日食用量计，所述具有免疫力改善作用的组合物由红参水提物粉0.32～0.663g，红参浸膏0.016～0.027g，接骨木莓浓缩果汁粉0.032～0.063组成。在上述范围内配比的情况下，通过低剂量添加实现在机体免疫调节方面的协同作用，尤其是保护巨噬细胞的数量和吞噬功能。
49.在本发明的一些具体实施方式中，以每人每日食用量计，所述具有免疫力改善作用的组合物由红参水提物粉0.32g，红参浸膏0.016g，接骨木莓浓缩果汁粉0.032g组成。
50.在该剂量条件下，该组合物对巨噬细胞减少改善作用以及巨噬细胞吞噬促进作用都具有显著的提高。
51.在本发明的一些具体实施方式中，以每人每日食用量计，所述具有免疫力改善作用的组合物由红参水提物粉0.663g，红参浸膏0.027g，接骨木莓浓缩果汁粉0.063g组成。
52.在该剂量条件下，该组合物对巨噬细胞减少改善作用具有显著的提高。
53.在本发明中，所述具有免疫力改善作用的组合物中还包括植物提取物，所述植物提取物为可以添加至食品或保健食品中的植物提取物。在本发明中，所述植物提取物优选为人参提取物、当归提取物、甘草提取物、枸杞子提取物、茯苓提取物、金银花提取物、蒲公英提取物、沙棘提取物、鱼腥草提取物、山药提取物、山楂提取物、黄精提取物、枣提取物、接骨木莓提取物、山楂提取物、小麦胚芽肽、针叶樱桃提取物、百合提取物、红参提取物、蘑菇粉、香菇多糖、盐藻提取物、灵芝多糖、灵芝三萜、雨生红球藻类提取物、葡萄糖酸、桑椹提取物、樱桃提取物、苹果提取物和蔓越莓提取物中的一种或多种。
54.本发明还提供了一种具有免疫力改善作用的组合物在制备具有免疫力改善作用
食品或保健食品中的应用。
55.其中，所述食品为乳制品，饮料或休闲食品。
56.所述保健食品的剂型包括片剂、粉剂、颗粒剂、茶剂、冲剂、丸剂、膏剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、饮料、酒剂、糖浆、滴剂、饼干类、糖果类、糕点类、乳液乳类。
57.本发明对所述添加了具有免疫力改善作用的组合物的食品或保健食品的制备方法并没有特殊限制，直接将所述具有免疫力改善作用的组合物在食品的制备过程中添加即可，需要注意的是，添加过程中，要保证红参提取物与接骨木莓浓缩果汁粉中的活性物质不被破坏。
58.本技术组方针对红参和接骨木莓在一定提取技术、添加比例和剂量的情况下，可以获得有效保护巨噬细胞，改善低免疫力个体巨噬细胞数量减少和吞噬功能降低的情况的组合物，从而发挥增强低免疫力机体免疫系统功能，尤其是免疫反应初期功能，或者说非特异性免疫功能的作用。
59.为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的具有免疫力改善作用的组合物及其应用进行说明，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。
60.以下实施例中，红参水提物粉中红参皂苷含量为1wt％，红参浸膏中红参皂苷含量为3wt％，接骨木莓浓缩果汁粉中花青素含量为10％。
61.对比例1：
62.保健食品“增强免疫力”功能低温酸奶，批准文号国食健字g20090243，每日200g推荐剂量。
63.对比例2：
64.红参水提物粉0.02g，红参浸膏0.001g，接骨木莓浓缩果汁粉0.002g充分混合备用。
65.对比例3.
66.红参水提物粉0.08g，红参浸膏0.004g，接骨木莓浓缩果汁粉0.008g充分混合备用。
67.实施例1：
68.红参水提物粉0.32g，红参浸膏0.016g，接骨木莓浓缩果汁粉0.032g充分混合备用。
69.实施例2
70.红参水提物粉0.663g，红参浸膏0.027g，接骨木莓浓缩果汁粉0.063g充分混合备用。
71.对比例4
72.红参水提物粉2.650g，红参浸膏0.108g，接骨木莓浓缩果汁粉0.250g充分混合备用。
73.实施例3
74.1.样品信息
75.对比例1～3和实施例1制备的样品
76.2.实验动物
77.巨噬细胞数量减少改善实验：巨噬细胞荧光斑马鱼(tg(coro1a:egfp)hkz04ttg/
)，以自然成对交配繁殖方式进行。年龄为3dpf，每实验组为30尾。用于供试品对斑马鱼巨噬细胞减少改善功效评价。
78.巨噬细胞吞噬功能改善实验：野生型ab品系，以自然成对交配繁殖方式进行。年龄为3dpf，每实验组为30尾。用于供试品对斑马鱼巨噬细胞吞噬促进功效评价。
79.斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中(水质：每1l反渗透水中加入200mg速溶海盐，电导率为450～550μs/cm；ph为6.5～8.5；硬度为50～100mg/l caco3)，由杭州环特生物科技有限公司养鱼中心繁殖提供。饲养管理符合国际aaalac认证的要求。
80.3.仪器和试剂
81.解剖显微镜(szx7，olympus，japan)；荧光显微镜(az100，nikon，japan)；显微注射仪(im-300，narishige)；拉针仪(pc-10，narishige，japan)；精密电子天平(cp214，ohaus，china)；6孔板(nestbiotech，china)；甲基纤维素(sigma，usa)；酒石酸长春瑞滨注射液(民生药业，中国)；过碳酸钠(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，中国)；荧光微球(sigma-aldrich，china)。
82.4.实验方法
83.巨噬细胞数量减少改善实验：随机选取3dpf转基因巨噬细胞荧光斑马鱼，静脉注射长春瑞滨建立斑马鱼巨噬细胞免疫功能损伤模型。注射完后，随机选取模型斑马鱼每实验组30尾，按照对比例和实施例的给药剂量浓度列表中进行给药处理，同时设置正常对照组(养鱼用水处理未注射斑马鱼)和模型对照组，每个实验组容量为20ml。每个实验组均加入0.01％过碳酸钠增氧。每天换取新鲜的样液，各浓度组处理4天，至7dpf时，每组随机选取10尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照，用nis-elements d 3.2高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，统计斑马鱼泄殖孔至尾部静脉中巨噬细胞荧光强度总和(s)，以巨噬细胞荧光强度总和的统计学分析结果分别评价供试品的巨噬细胞减少改善作用。统计学处理结果用mean
±
se表示。巨噬细胞减少改善作用计算公式如下：
[0084][0085]
巨噬细胞吞噬功能改善实验：随机选取3dpf野生型ab品系斑马鱼，同时静脉注射长春瑞滨和荧光颗粒建立斑马鱼免疫功能损伤模型。注射完后，随机选取模型斑马鱼于烧杯中，每个烧杯(即每实验组)30尾，按照对比例和实施例的给药剂量浓度列表中进行给药处理，同时设置正常对照组(养鱼用水处理未注射斑马鱼)和模型对照组，每个烧杯(实验组)容量为20ml。每个实验组均加入0.01％过碳酸钠增氧。每天换取新鲜的样液，各浓度组处理4天，至7dpf时，每组随机选取10尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照，用image j高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，统计斑马鱼体内剩余荧光颗粒的数量(n)，以荧光颗粒的数量的统计学分析结果分别评价供试品的巨噬细胞吞噬促进作用。统计学处理结果用mean
±
se表示。巨噬细胞吞噬促进作用计算公式如下：
[0086][0087]
两组间用ttest，多组间用方差分析和dunnett’s t-检验进行统计学分析，p《0.05表明具有显著性差异。
[0088]
5.实验结果
[0089]
表格中对应描述人体的日服用剂量和对应的斑马鱼实验组给药方式及浓度，由图1可见各组斑马鱼泄殖孔至尾部静脉中巨噬细胞荧光强度差异，显示个体巨噬细胞数量情况；图2为对应荧光强度转化为数值后经统计学分析的对比例与实施例对斑马鱼巨噬细胞减少改善作用效果的结果。
[0090]
由图表可见对比例1，即保健食品“增强免疫力”功能低温酸奶(批准文号国食健字g20090243)依照每日200g推荐剂量，可以对巨噬细胞数量有47％的极显著保护和修复作用；对比例2和对比例3采用本发明涉及的三种功效原料(红参水提粉、红参浸膏和接骨木莓浓缩果汁粉)，用量与实施例不同，在图2中可见其巨噬细胞数量减少的改善作用与模型组对比无显著差异；依照本发明中的实施例剂量浓度添加的红参和接骨木莓功效成分混合物组斑马鱼的巨噬细胞数量保护和修复作用达到78％的极显著程度，甚至超过保健食品对比例1的1.66倍，接近健康模型斑马鱼的水平，可以通过复合添加的方式提高巨噬细胞数量的保护作用。
[0091]
由图3可见各组斑马鱼全身荧光微粒的数量和强度差异，显示个体巨噬细胞对外来荧光微粒清除后的残留情况；图4为对应荧光强度数量转化为数值后经统计学分析的对比例与实施例对斑马鱼巨噬细胞吞噬功能改善作用效果的结果。由图表可见对比例1，即保健食品“增强免疫力”功能低温酸奶(批准文号国食健字g20090243)依照每日200g推荐剂量，显示出一定的对巨噬细胞吞噬功能保护和修复趋势，但是未见统计学意义；对比例2和对比例3采用本发明涉及的三种功效原料(红参水提粉、红参浸膏和接骨木莓浓缩果汁粉)，用量与实施例不同，在图4中可见其巨噬细胞吞噬功能降低的改善作用与模型组对比无显著差异；依照本发明中的实施例剂量浓度添加的红参和接骨木莓功效成分混合物组斑马鱼的巨噬细胞吞噬功能的保护和修复作用达到74％的极显著程度，甚至超过保健食品对比例1的1.45倍，接近健康模型斑马鱼的水平，可以通过复合添加的方式提高巨噬细胞吞噬功能的保护作用。
[0092]
由上述可见，基于特定比例和剂量的红参和接骨木莓的浓缩物，具有对免疫反应初期承担主要生理功能的巨噬细胞及其功能具有保护作用，对于免疫力降低带来的巨噬细胞数量减少和吞噬功能减弱的典型表征，有统计学意义的显著改善作用，即具有免疫力调节作用，同时对比具备保健食品批文的低温酸奶产品有更好的表现，可以把免疫系统修复到接近正常健康机体的水平。
[0093]
表1.供试品处理后巨噬细胞减少及吞噬功能的改善作用实验结果(n＝10)
elements d 3.2高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，统计斑马鱼泄殖孔至尾部静脉中巨噬细胞荧光强度总和(s)，以巨噬细胞荧光强度总和的统计学分析结果分别评价供试品的巨噬细胞减少改善作用。统计学处理结果用mean
±
se表示。巨噬细胞减少改善作用计算公式如下：
[0108][0109]
巨噬细胞吞噬功能改善实验：随机选取3dpf野生型斑马鱼，下午13:00同时静脉注射长春瑞滨和荧光颗粒建立斑马鱼免疫功能损伤模型，正常对照组仅静脉注射荧光微球。注射完后，随机选取模型斑马鱼于六孔板中，每孔(即每实验组)30尾，水溶给予hsa-hsb-jgm三组(浓度分别为55 2.3 5.3μg/ml、111 4.5 11μg/ml和442 18 42μg/ml)；hsa代表红参水提物粉，hsb代表红参浸膏，jgm代表接骨木莓浓缩果汁粉；
[0110]
同时设置正常对照组(养鱼用水处理注射荧光颗粒的斑马鱼)；
[0111]
模型对照组，每孔(实验组)容量为3ml。
[0112]
每天换取新鲜的样液，各浓度组处理4天，至7dpf时，每组随机选取10尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照，用image j高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，统计斑马鱼体内剩余荧光颗粒的数量(n)，以荧光颗粒的数量的统计学分析结果分别评价供试品的巨噬细胞吞噬促进作用。统计学处理结果用mean
±
se表示。巨噬细胞吞噬促进作用计算公式如下：
[0113][0114]
两组间用ttest，多组间用方差分析和dunnett’s t-检验进行统计学分析，p《0.05表明具有显著性差异。
[0115]
1.4实验结果
[0116]
表2.供试品处理后巨噬细胞减少及吞噬功能的改善作用实验结果(n＝10)
[0117][0118]
由表2的数据可知，实施例1～2具有显著巨噬细胞数量减少改善作用和吞噬功能改善作用，而相应的增加组合物各成分添加量后，其巨噬细胞数量减少改善作用和吞噬功能改善作用呈现逐渐降低的趋势，可见实施例1～2较对比例为更佳适用剂量。
[0119]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。