药用核酸合成工艺的制作方法

技术特征：
1.药用核酸合成工艺，其特征在于，包括如下步骤：第一步，将配制好的原料加入全自动合成仪中，在常温、全封闭的条件下进行合成操作，整个合成周期为24小时；链的延长反应过程从3
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方向延伸，包含脱保护、活化偶联、硫化/氧化、盖帽4步反应；待4步反应完成后，再进行下一轮的链的延长反应；所述脱保护反应包括：用二氯乙酸脱去核苷酸上的保护基团dmt，得5
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羟基端即核苷酸单体，供下一步偶联；所述活化偶联反应包括：在偶联之前，亚磷酰胺保护的5
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羟基端与活化剂乙硫基四氮唑混合，得到核苷亚磷酸活化中间体，它的3’端被活化，5
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羟基被dmt保护，与溶液中游离的5
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羟基发生缩合反应；所述硫化/氧化反应包括：在硫化试剂苯乙酰二硫化物或氧化剂碘液的作用下，亚磷酰形式转变为磷酸三酯；所述盖帽反应包括：用乙酸酐终止5
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羟基后续发生反应；第二步，胺洗；第三步，氨解；第四步，纯化；第五步，超滤；第六步，冻干，得到成品。2.根据权利要求1所述的药用核酸合成工艺，其特征在于，硫化反应与氧化反应在单个链延长反应过程中不同时进行，在单个批次生产过程中反应次数相同。3.根据权利要求1所述的药用核酸合成工艺，其特征在于，活化偶联反应中，乙硫基四氮唑过量。4.根据权利要求1所述的药用核酸合成工艺，其特征在于，胺洗采用二乙胺对产品进行冲洗，脱出保护基团氰乙基，胺洗过程二乙胺、乙腈混合液冲洗时间为10min。5.根据权利要求4所述的药用核酸合成工艺，其特征在于，胺洗完成后采用乙腈对合成仪以及合成仪中的合成柱进行清洗。6.根据权利要求4所述的药用核酸合成工艺，其特征在于，氨解是将合成柱中反应后产品与固相载体一起转入氨解罐中，采用氮气将25％氨水压送至氨解罐，将固相支持物上合成的寡核酸洗脱，再将含寡核酸产品的氨水通过氮气密闭管道压至移动罐中。7.根据权利要求4所述的药用核酸合成工艺，其特征在于，合成柱的两端分别安装进水口与出水口，并在合成柱的两端分别设置一个阀门，进水口与出水口上同样设置有阀门，在进行氨解时，关闭合成柱两端的阀门，通过氮气将25％氨水由储桶压送至合成柱，将固相支持物上合成的寡核酸洗脱下来，再将含寡核酸产品的氨水通过合成柱的出水口排出并压送至移动罐中。8.根据权利要求1所述的药用核酸合成工艺，其特征在于，纯化方法包括离子交换法与反相层析法。9.根据权利要求1所述的药用核酸合成工艺，其特征在于，超滤前采用质量比16％naoh溶液对超滤膜进行润洗，润洗完成后采用注射水进行置换脱盐。

技术总结
本发明公开了一种药用核酸合成工艺，本发明在合成过程中尽可能的将不需要的基团暂时保护起来，在一轮偶联反应之后，再将上一轮基团上的保护基选择性的脱下来，以形成专一的磷酸二酯键，从而尽可能减少副反应，提升目的产物的产率，降低纯化难度。本发明能够通过对合成柱进行简单的改造，从而能够实现在氨解过程中不对合成柱进行转移，在线氨解，将合成柱内的固相负载物表面负载的寡核酸产品洗脱，对含有寡核酸产品的洗脱液收集并进行后续的纯化处理工序，由于整个过程合成柱无需下线，从而一方面大大降低了工作难度与复杂程度，另一方面显著降低了拆卸安装过程中的废气泄露。面显著降低了拆卸安装过程中的废气泄露。面显著降低了拆卸安装过程中的废气泄露。


技术研发人员：刘宗文 钱鑫 潘红 刘倩 李孝才 朱桃花
受保护的技术使用者：通用生物（滁州）有限公司
技术研发日：2022.03.15
技术公布日：2022/6/4