检测毛霉菌病病原体的试剂盒及方法与流程

技术特征：
1.一种检测毛霉菌病病原体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括毛霉菌病病原体寡核苷酸探针，所述毛霉菌病病原体寡核苷酸探针包括以下探针中的至少一种：毛霉菌病病原体寡核苷酸探针1：5'-agtcataataaacavgcccaa-3'；毛霉菌病病原体寡核苷酸探针2：5'-agtcaaaagaaacacgcccaa-3'；毛霉菌病病原体寡核苷酸探针3：5'-agccttaatagccaagccc-3'；毛霉菌病病原体寡核苷酸探针4：5'-tgtccaaaggatcaagcc-3'；毛霉菌病病原体寡核苷酸探针5：5'-aagccatagagcaaaccc-3'；或毛霉菌病病原体寡核苷酸探针6：5'-ctgccagtggcgaggac-3'。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：毛霉菌病病原体正向引物1：5'-accacaaactatgccgactagagat-3'和毛霉菌病病原体反向引物1：5'-cccaaaaactttactttcgctaag-3'；或毛霉菌病病原体正向引物2：5'-gggatcgaagacgattagataccg-3'和毛霉菌病病原体反向引物2：5'-cagaacccaaaaactttactttcgc-3'。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述毛霉菌病病原体寡核苷酸探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团和/或mgb。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光报告基团选自fam、nex、rox、tet、tamra、joe、vic、cy3、cy5或texas red。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光淬灭基团选自bhq、tamra、eclipse、dabcyl、lowa blacktm rq或lowa blacktm fq。6.根据权利要求1至5中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括pcr反应液和酶制剂。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述pcr反应液包括datps、dutps、dgtps和dctps四种核苷酸及含有镁离子的缓冲液。8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述酶制剂为包含有热启动的taq dna聚合酶和udg酶；可选地，所述试剂盒还包括质控品，优选为阳性质控品。9.一种检测毛霉菌病病原体的方法，其特征在于，包括采用如权利要求1至8中任一项所述的检测毛霉菌病病原体的试剂盒进行pcr检测，包括以下步骤：从样本中提取dna，得到样本dna；将所述样本dna、毛霉菌病病原体寡核苷酸探针加入到复溶液复溶的酶制剂中制得pcr反应体系进行pcr扩增，检测毛霉菌病病原体。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述pcr扩增的程序为：93～97℃ 1～3min，93～97℃ 3～7s和58～62℃ 18～22s 45个循环；优选的，所述pcr反应体系中还包括：毛霉菌病病原体正向引物和毛霉菌病病原体反向引物：优选的，所述pcr检测为荧光pcr检测，所述毛霉菌病病原体寡核苷酸探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团，pcr扩增采用的pcr仪设定包括信号收集：fam通道信号收集和vic通道信号收集。

技术总结
本发明公开了一种检测毛霉菌病病原体的试剂盒及方法。该试剂盒包括毛霉菌病病原体寡核苷酸探针，毛霉菌病病原体寡核苷酸探针包括以下探针中的至少一种：毛霉菌病病原体寡核苷酸探针1；毛霉菌病病原体寡核苷酸探针2；毛霉菌病病原体寡核苷酸探针3；毛霉菌病病原体寡核苷酸探针4；毛霉菌病病原体寡核苷酸探针5；或毛霉菌病病原体寡核苷酸探针6。本申请结合主要针对于引起毛霉菌6个属和1个种的18s rDNA序列设计通用引物，以及针对于以上种属设计各自的特异性探针，该引物探针组合适配于PCR仪平台，可以在保证检测的特异性和灵敏度的基础上出检测结果。的基础上出检测结果。的基础上出检测结果。


技术研发人员：黄超杰 张萌 黄华香 张涛
受保护的技术使用者：广东润鹏生物技术有限公司
技术研发日：2021.12.24
技术公布日：2022/6/3