一种假单胞菌及其在河豚毒素制备中的应用的制作方法

技术特征：
1.一种假单胞菌，被命名为假单胞菌hty-1(pseudomonas.sp hty-1)，其特征在于，保藏号为cgmcc no.23768。2.如权利要求1所述的假单胞菌在河豚毒素制备中的应用。3.一种河豚毒素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将如权利要求1所述的假单胞菌hty-1接种到液体培养基中进行发酵培养，将得到的发酵液进行离心处理后，收集发酵上清液；浓缩发酵上清液后，进行纯化处理。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、将权利要求1所述的假单胞菌进行发酵培养后，离心分离分离发酵上清液；s2、通过减压旋蒸浓缩上一步的发酵上清液；s3、使用c18固相萃取柱纯化发酵浓缩液毒素；s4、将得到洗脱液进行过滤，再将过滤液冷冻干燥后，溶解在无菌水中。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，s1步骤中发酵培养采用的发酵培养基包括以下成分：5g/l的胰蛋白胨，5g/l的大豆蛋白胨，10g/l的酵母抽提物，20g/l的蔗糖，10g/l的nacl，ph为7.0-7.2。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，采用减压旋蒸的方式浓缩发酵上清液，条件为：水浴温度40-60℃，压力为0.01mpa，浓缩比例为1：(50-200)。7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，纯化方法为：将c18柱进行活化；加入发酵浓缩液，控制流速为1滴/min，使用1倍柱体积的0.3％甲酸水冲洗，用2倍柱体积0.3％甲酸水洗脱。8.一种河豚毒素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：s1、将权利要求1所述的假单胞菌进行发酵培养后，进行离心处理，并收集菌体细胞；s2、向菌体细胞中加入乙酸甲醇提取液，吹吸上一步得到的菌体细胞；s3、进行超声破碎细胞并提取毒素；s4、离心去除细胞沉淀后，将得到的液体进行0.22um有机滤膜的过滤。9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述超声波破碎的条件为：功率90-120w，频率30-50hz，超声20-40min；离心条件为：3000-5000rpm条件下，离心10-30min。

技术总结
本发明公开了一种假单胞菌及其在河豚毒素制备中的应用，该假单胞菌是从黄鳍东方鲀(Pseudomonas adaceae)的卵巢组织中分离得到，被命名为假单胞菌HTY-1(Pseudomonas.sp HTY-1)，于2021年11月10日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC No.23768。本申请还提供该假单胞菌HTY-1在在河豚毒素制备中的应用以及该毒素的制备方法，本发明所分离的假单胞菌，经液体发酵培养后可从发酵液中大规模分离提取获得河豚毒素粗提取。取。取。


技术研发人员：高延伟 高伟 于秋香 刘红兵 苏东海
受保护的技术使用者：青岛普瑞邦生物工程有限公司
技术研发日：2022.04.08
技术公布日：2022/6/3