一种HIV-1逆转录酶抑制剂及其合成方法

一种hiv-1逆转录酶抑制剂及其合成方法
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，具体涉及一种hiv-1逆转录酶抑制剂及其合成方法。


背景技术：

2.逆转录过程(reverse transcription)是hiv-1病毒入侵宿主细胞之后的首要环节，在hiv-1生命周期中起着关键作用。在该环节中，逆转录酶(reverse transcriptase,rt)负责将病毒rna逆转录成dna-rna杂合体及杂合体中rna降解形成单链病毒dna，之后再由整合酶将病毒dna整合到宿主细胞之中。因此，rt可作为抗hiv-1病毒的药物设计的重要的选择性靶点1。
3.在现有靶向hiv-1逆转录酶化合物中，非核苷类逆转录酶抑制剂(nnrtis)具有较强的抗病毒活性和较低的细胞毒性2，因而成为抗hiv-1治疗的高效抗逆转录病毒疗法(haart)鸡尾酒疗法的首选药物3。经美国fda批准上市的抗hiv逆转录酶抑制剂有五种：奈维拉平(nevirapine)、德拉韦定(delavirdine)、依非韦伦(efavirenz)、依曲韦林(etravirine)、利匹韦林(rilpivirine)。另外，rdea806、idx899、uk-453061正在进行临床研究4。然而，逆转录酶上的氨基酸突变会使得原本有效的药物失去活性，即产生耐药hiv病毒株5。因此研发具有广谱抗耐药性的新型高效非核苷类逆转录酶抑制剂成为药物化学家们研究的热点之一6。
4.本发明旨在对依曲韦林及利匹韦林进行结构优化，通过在该类化合物的左翼芳环与中间嘧啶环的链接基团上进行结构改造，设计合成一系列含取代芳基脲亚胺基二芳基嘧啶类衍生物，并芳环上引入各种取代基，增强化合物与逆转录酶非核苷类药物的结合口袋内壁的保守芳香性氨基酸之间的相互作用，以期能够提高这该系列化合物的抗耐药病毒株的生物活性。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提出一种性能优异的hiv-1非核苷类逆转录酶抑制剂及其合成方法。
6.本发明提供的hiv-1逆转录酶抑制剂，是一种含取代芳基脲亚胺基的二芳基嘧啶类衍生物，具有如下(ⅰ)式所示结构式：
[0007][0008]
其中，r1独立选自氢、甲基、氰基、硝基、甲氧基、乙氧基、羟基、卤素，取代位置可以是邻位、对位或者间位；x为卤素。
[0009]
本发明的hiv-1逆转录酶抑制剂，还包括所述含取代芳基脲亚胺基的二芳基嘧啶类衍生物的药用盐，其水合物和溶剂化物，其多晶和共晶，其同样生物功能的前体和衍生物。
[0010]
所述药用盐具体包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、醋酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐或苹果酸盐。
[0011]
本发明还提出上述hiv-1逆转录酶抑制剂-取代芳基脲亚胺基二芳基嘧啶类衍生物的合成方法，其合成路线如下：
[0012][0013]
合成的具体步骤如下；
[0014]
(一)以廉价易得的硫脲嘧啶(5,1.5～1.6equiv.)为起始原料，以碘甲烷(6,1.0～1.1equiv.)为甲基化试剂，在氢氧化钠(摩尔浓度约为1.25m左右,1.0～1.1equiv.)作用下，在室温条件下反应20～24h，进行s-烷基化反应，得到高纯度的白色固体，即2-甲硫基嘧啶-4-酮(7),产率为89.7％7；
[0015]
(二)将2-甲硫基嘧啶-4-酮(7,1.0～1.1equiv.)与过量的4-氰基苯胺(8,2.5～3.0equiv.)在无溶剂条件下180～185℃熔融状态反应10～18h，经过乙腈溶解后进行适当后处理，可以得到黄色固体2-(4-氰基苯胺基)嘧啶-4-酮(9),产率为67.6％8；
[0016]
(三)将2-(4-氰基苯胺基)嘧啶-4-酮(9,1.0～1.1equiv.)在大大过量的三氯氧磷(10.0～11.0equiv.)中溶解回流，将嘧啶杂环c-4位的羟基进行氯代反应，经过后处理，溶解于适量冷水中，以氢氧化钠(20％)中和至中性，得到黄色沉淀，过滤干燥后，即可得黄色固体2-(4-氰基苯胺基)-4-氯-嘧啶(10),产率为84.0％，该化合物为合成目标化合物的重要中间体；
[0017]
(四)2-(4-氰基苯胺基)-4-氯-嘧啶(10,1.0～1.1equiv.)与2-卤代苯乙腈(11a,11b,1.5～1.6equiv.)在氢化钠(60％,2.0～2.2equiv.)作用下，于干燥处理过的n,n-二甲基甲酰胺(2.5～3.0equiv.ml)中进行亲核取代反应，无水无氧条件，得到不稳定的中间体cyan-ch
2-dapys(12a,12b)。；
[0018]
(五)因为上述中间体cyan-ch
2-dapys(12a,12b)不稳定，反应后可以去除氮气保护，将其置于空气中，室温条件下反应48-72h，可以缓慢氧化，得到关键中间体oxo-ch
2-dapys，经后处理和柱层析分离可以得到2-卤代苯基2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶酮纯品(13a,13b)；
[0019]
(六)在进行(一)～(五)步骤的同时，可以各种取代的苯胺为起始原料，经过两步反应平行开展各种取代氨基脲(18a-18t)的制备。具体方法如下:将各种取代苯胺(14a-14t,1.0～1.1equiv.)溶于四氢呋喃中，同时将nahco3(1.2～1.4equiv.)溶于水中，将nahco3水溶液与取代苯胺的四氢呋喃溶液混合并置于冰浴中，温度稳定为0～5℃后加入氯甲酸苯酯(15,1.2～1.4equiv.)。反应速度极快，反应物加入后即可完成。由于取代的氨基甲酸苯酯中间体在反应液中不稳定，反应过程中温度要控制在0～5℃，以防中间体分解，影响产率和纯度。后处理过程简单，用乙酸乙酯萃取后旋蒸即得各种室温下稳定的取代氨基甲酸苯酯中间体9。将取代的氨基甲酸苯酯中间体(16a-16t,1.0～1.1equiv.)溶于乙腈中，加入80％水合肼(17,2.5～3.0equiv.)，超声室温反应1～3h，得相应的取代氨基脲(18a-18t)。；
[0020]
(七)最后，将该中间体oxo-ch
2-dapys(13a,13b,1.0～1.1equiv.)与各种取代的氨基脲(18a-18t,1.0～1.1equiv.)在盐酸作催化剂条件下，于乙醇中加热回流脱水反应4～5h，即得到相应的目标化合物(1a，1b，
…
，1z，1aa)。
[0021]
步骤六中，取代苯胺(14a-14t)、取代的氨基甲酸苯酯中间体(16a-16t)、取代氨基脲(18a-18t)，以及步骤七得到的27种目标物(1a，1b，
…
，1z，1aa)，其对应的x，r，具体列表如下：
[0022][0023]
[0024]
表中取代基对应的编号(a～v)分别对应各个系列中间体(14,16,18)和相应系列目标化合物(1a～v)，中间体编号和取代基类型编号相互组合，分别代表相应的化合物各种编号，如中间体(14a～v,16a～v,18a～v)和目标化合物(1a～v)。
[0025]
本发明的化合物(ⅰ)为hiv-1非核苷类逆转录酶抑制剂，不仅具有较强的生物活性，还具有较高的选择系数，细胞毒性较小。
[0026]
本发明还涉及一种药物组合物，该组合物含有有效剂量的上述化合物(ⅰ)和相关的药用载体，以及所述化合物或组合物在制备预防和治疗艾滋病药物中的应用。
[0027]
综上，本发明根据上市药物依曲韦林和利匹伟伦的结构特征，并根据对ch-dapys的构效关系，保留主要药效团，运用拼合原理，将具有抗病毒活性的缩氨基脲的结构引入到dapy类化合物的左翼芳环的亚甲基连接基上，设计合成一系列具有缩氨基脲结构的二芳基嘧啶类化合物。分子模拟显示：该化合物在与逆转录酶结合时呈经典的u形构象，左翼芳环进入疏水区域内，与y181和y188形成π-π堆积作用，连接右翼芳环和嘧啶环的nh可与k101形成氢键。试图由此提高化合物与靶标的相互作用，以期提高目标化合物抗耐药hiv病毒株的生物活性。本发明以硫脲嘧啶和碘甲烷为起始原料，依次经s-甲基化、亲核取代、氯代、氧化、第二次亲核取代和缩合反应得到目标化合物。所有新化合物经1h nmr和
13
c nmr等波谱分析方法鉴定，部分化合物经esi-ms验证。对目标化合物进行了体外细胞水平和酶水平的抗hiv-1活性筛选实验。细胞水平活性测试结果表明，目标化合物对hiv-1野生型毒株具有低微摩尔水平的抑制活性，部分化合物对双突变hiv-1毒株res056和hiv-2rod具有较低的抑制活性。其中，目标化合物1h活性最佳(ec
50
值为0.0329μm,si值为3712)，活性强于参考药物nev和dev，且细胞毒性小，选择性高。酶水平对hiv-1rt活性测试结果表明，目标化合物对hiv-1rt有较强的抑制活性。
附图说明
[0028]
图1为由上市药物依曲韦林和利匹伟伦到本发明目标化合物的设计策略。
[0029]
图2为目标物与hiv-1rt非核苷类抑制剂结合口袋的结合模式。其中，(a)目标物1q，(b)目标物1p，(c)目标物1k，(d)目标物1d。
具体实施方式
[0030]
通过下述实施实例可以更好地理解本发明内容，但是不能限制本发明的内容。
[0031]
实施例1：中间体的制备
[0032]
(1)2-(4-氰基苯胺基)-4-氯尿嘧啶(10)的制备
[0033]
将氢氧化钠(50.4g,1.26mol)配成水溶液(1.0l)，后将2-硫代尿嘧啶(5,212.9g,1.50mol)加到氢氧化钠溶液中，搅拌至完全溶解，静置，冷却至室温。加入碘甲烷(6,153.6g,1.2mol)，继续搅拌24h，薄层色谱显示原料完全转化。调节ph至中性，析出白色固体，过滤、水洗、干燥，得白色固体(153g,89.7％)，即为2-甲硫基嘧啶-4-酮(7)。
[0034]
取2-甲硫基嘧啶-4-酮(7,42.7g,0.30mol)和对氨基苯腈(8,88.6g,0.75mol)充分混合，缓慢升温至180℃反应10h。薄层色谱显示10h时有少量原料未转化，延长反应时间至18h，原料转化完全，但是产物变杂，收率反而降低。反应结束后，缓慢冷却至室温，反应液凝固，形成淡黄色固体粘在烧瓶底部，用乙腈打浆，得到2-(4-氰基苯胺基)嘧啶-4-酮粗品(9,
43.0g,67.6％)。
[0035]
将上述得到的2-(4-氰基苯胺基)嘧啶-4-酮(9,32.0g,0.165mol)溶于三氯氧磷(150ml，1.64mol)中，三氯氧磷现取现用，既为氯代试剂，又作溶剂。加热回流30min，反应即完全。冷至室温，剧烈搅拌下缓慢倒入冰水中，控制温度，且速度不宜过快，否则容易引起爆沸且影响产物纯度。析出淡黄色固体，冷却，过滤，后将固体悬浮于(200ml)冷水中，以20％氢氧化钠中和至中性。过滤，水洗，烘干，得到淡黄色固体2-(4-氰基苯胺基)-4-氯尿嘧啶(10,32.0g,84.0％)。
[0036]
(2)2-卤代苯基2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶酮(13a,13b)的制备
[0037]
2-(4-氰基苯胺基)-4-氯尿嘧啶(10,2.77g,12.0mmol)与邻卤代苯乙腈(11a,11b,2.73g/3.53g,18.0mmol)在nah(0.96g,24.0mmol,60％)存在下无水dmf(30ml)作溶剂发生芳香亲核取代反应，得2-(对氰基苯氨基)-4-(2-卤代苯基氰基)亚甲基嘧啶中间体(12a,12b)。该反应对空气敏感，需要氮气保护，并且无水条件要求较高，dmf需用活化分子筛干燥过夜后使用。2-(对氰基苯氨基)-4-(2-氯苯基氰基)亚甲基嘧啶(12a,12b)不稳定，去除氮气保护，在空气中氧化即得2-(对氰基苯氨基)-4-芳酰基嘧啶(13a,13b)。该步反应为整个合成中的限速反应，耗时较长，且副反应较多，反应不易控制。反应48-72h后，tlc显示反应完全。将反应液倒入水中，用稀盐酸中和至中性，后以乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯层合并后，用无水硫酸钠干燥并旋蒸除去，将得到的粗品经快速减压柱层析(pe:ea＝5:1)，得纯品2-卤代苯基2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶酮(13a,13b)。
[0038]
(3)各种取代的氨基脲的合成
[0039]
本文采用以各种取代的苯胺为起始原料，经过两步得到取代氨基脲。该路线简单易行，条件温和，而且经济高效，产率高，纯度高。
[0040]
将各种取代苯胺(14a-t,1.86～3.44g,20.0mmol)溶于四氢呋喃中，同时将nahco3(2.0g,24.0mmol)溶于水中，将nahco3水溶液与取代苯胺的四氢呋喃溶液混合并置于冰浴中，温度稳定为0℃后加入氯甲酸苯酯(15,3.8g,24.0mmol)。反应速度极快，反应物加入后即可完成。由于取代的氨基甲酸苯酯中间体在反应液中不稳定，反应过程中温度要控制在0℃，以防中间体分解，影响产率和纯度。后处理过程简单，用乙酸乙酯萃取后旋蒸即得各种取代的氨基甲酸苯酯中间体，该中间体在室温下稳定9。
[0041]
将取代的氨基甲酸苯酯中间体(16a-t,2.13～2.92g,10.0mmol)溶于乙腈中，加入80％水合肼(17,1.6g,25.0mmol)，超声室温反应1～3h，得相应的取代氨基脲(18a-t)，具体的实验数如表1所示。
[0042]
表1.各种中间体取代氨基脲18a-t的物理性质和产率
[0043][0044][0045]
实施例2：dapy类目标物1a-aa合成
[0046]
将取代氨基脲(18a-t，0.23～0.35g,1.5mmol)与2-氯苯基2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶酮(13a,13b,0.50g/0.57g,1.5mmol)溶于无水乙醇(10.0ml)中，加入浓盐酸(2-3滴)为催化剂，升温回流4～5.5h。反应过程中有淡黄色固体析出，薄层色谱显示反应完全，过滤。产物的溶解度不佳，乙酸乙酯洗可得到纯度较高的目标物。
[0047]
表2目标化合物1a-1aa制备的反应时间，产率和物理性质
[0048][0049][0050]
目标化合物物表征
[0051]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-苯基缩氨基脲(1a).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.15(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.83(s,1h,＝n-nh-co),9.24(s,1h,co-nh-ph”),8.61(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.87(d,j＝5.1hz,1h,嘧啶环ch5),7.78
–
7.67(m,2h,ph’h),7.59(dd,j＝10.4,4.2hz,1h,ph’h),7.54(d,j＝7.9hz,2h,ph”h
2,6
),7.44(t,j＝7.0hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.37(d,j＝8.8hz,2h,phh
2,6
),7.31(t,j＝7.9hz,2h,ph”h
3,5
),7.03(t,j＝7.4hz,1h,ph”h4)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.74,159.48,159.04,
152.02,145.26,143.96,139.15,133.15,132.95,131.81,131.57,130.27,129.20,128.45,123.35,120.10,119.99,118.29,109.27,102.48ppm；ms(esi )490(m na)

；hplc:tr＝17.60min,98.5％。
[0052]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-甲基苯基)缩氨基脲(1b).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.15(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.78(s,1h,＝n-nh-co),9.16(s,1h,co-nh-ph”),8.61(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.88(d,j＝5.1hz,1h,嘧啶环ch5),7.74
–
7.68(m,2h,ph’h),7.59(t,j＝7.3hz,1h,ph’h),7.43(t,j＝9.0hz,5h,phh
3,5
ph’h ph”h
2,6
),7.37(d,j＝8.8hz,2h,phh
2,6
),7.11(d,j＝8.3hz,2h,ph”h
3,5
),1.98(s,3h,ch3)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.76,159.47,159.03,152.06,145.27,143.57,136.55,133.15,132.95,132.29,131.79,131.59,130.27,129.59,128.44,120.22,120.00,118.29,109.27,102.46,20.88ppm；ms(esi )504(m na)

；hrms(esi ):m/z＝482.1495,484.1470[m h]

；calcd.482.1496,484.1467for c
26h21
cln7o h；hplc:tr＝18.60min,99.2％。
[0053]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-氰基苯基)缩氨基脲(1c).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.17(s,1h,ph-nh-嘧啶环),10.08(s,1h,＝n-nh-co),9.67(s,1h,co-nh-ph”),8.63(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.86(d,j＝4.6hz,1h,嘧啶环ch5),7.74
–
7.68(m,6h,ph’h,ph”h
2,3,5,6
),7.60(t,j＝6.7hz,1h,ph’h),7.43(t,j＝7.0hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.37(d,j＝8.8hz,2h,phh
2,6
)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.55,159.48,159.18,151.85,145.21,145.05,143.72,133.68,132.96,131.90,131.55,131.47,130.28,128.44,119.98,119.73,119.65,118.30,109.38,104.83,102.53ppm。
[0054]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-硝基苯基)缩氨基脲(1d).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.23(s,1h,ph-nh-嘧啶环),10.20(s,1h,＝n-nh-co),10.13(s,1h,co-nh-ph”),8.63(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),8.21(d,j＝9.1hz,2h,ph”h
2,6
),7.82(d,j＝8.9hz,3h,嘧啶环ch5,ph”h
3,5
),7.71(q,j＝7.9hz,2h,ph’h),7.59(t,j＝7.3hz,1h,ph’h),7.44(t,j＝8.6hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.37(d,j＝8.8hz,2h,phh
2,6
)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.64,159.38,159.06,151.80,145.93,145.32,145.16,142.19,133.04,132.96,131.92,131.54,131.40,130.29,128.45,125.45,119.97,119.06,118.34,109.36,102.57,56.49,19.03ppm；hrms(esi ):m/z＝513.1191,515.1165[m h]

；calcd.513.1190,515.1161for c
25h18
cln8o3 h。
[0055]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-甲氧基苯基)缩氨基脲(1e).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.14(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.78(s,1h,＝n-nh-co),9.12(s,1h,co-nh-ph”),8.60(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.91(d,j＝5.0hz,1h,嘧啶环ch5),7.77
–
7.64(m,2h,ph’h),7.59(t,j＝7.4hz,1h,ph’h),7.43(dt,j＝7.6,5.1hz,5h,phh
3,5
ph’h ph”h
2,6
),7.37(d,j＝8.9hz,2h,phh
2,6
),6.89(d,j＝8.9hz,2h,ph”h
3,5
),3.35(s,3h,ch3)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.77,159.47,158.98,155.71,152.32,145.28,143.56,133.17,132.95,132.03,131.76,131.61,130.26,128.42,122.23,120.01,118.29,114.34,109.29,102.45,55.66ppm；ms(esi )520.5(m na)

；hplc:tr＝17.35min,99.1％。
[0056]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-乙氧基苯基)缩氨基脲(1f).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.14(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.76(s,1h,＝n-nh-co),9.11(s,1h,co-nh-ph”),8.60(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.91(d,j＝5.1hz,1h,嘧啶环ch5),7.77
–
7.65(m,2h,ph’h),7.59(t,j＝7.3hz,1h,ph’h),7.43(t,j＝9.8hz,5h,phh
3,5
,ph’h ph”h
2,6
),7.37(d,j＝8.8hz,2h,phh
2,6
),6.88(d,j＝8.9hz,2h,ph”h
3,5
),3.98(q,j＝7.0hz,2h,ch2),1.30(t,j＝7.0hz,3h,ch3)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.78,159.47,158.98,154.98,152.31,145.28,143.53,133.17,132.95,131.93,131.76,131.61,130.26,128.48,122.23,120.00,118.28,114.87,109.29,102.45,63.58,15.19ppm；ms(esi )534.5(m na)

；hrms(esi )m/z:＝512.1602,514.1572[m h]

；calcd.512.1602,514.1572for c
27h23
cln7o2 h；hplc:tr＝18.15min,98.5％。
[0057]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-羟基苯基)缩氨基脲(1g).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.13(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.69(s,1h,＝n-nh-co),9.19(s,1h,oh),9.02(s,1h,co-nh-ph”),8.60(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.91(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch5),7.76
–
7.64(m,2h,ph’h),7.58(t,j＝7.3hz,1h,ph’h),7.42(dd,j＝12.1,8.3hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.37(d,j＝8.8hz,2h,phh
2,6
),7.28(d,j＝8.8hz,2h,ph”h
2,6
),6.72(d,j＝8.8hz,2h,ph”h
3,5
)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.81,159.46,158.95,153.89,152.36,145.28,143.33,133.17,132.95,131.61,131.58,130.41,130.25,128.48,122.65,120.00,118.28,115.58,109.27,102.43,56.51,19.03ppm；ms(esi )506(m na)

；hrms(esi )m/z:＝484.1283,486.1256[m h]

；calcd.484.1289,486.1259for c
25h19
cln7o2 h；hplc:tr＝15.25min,98.1％。
[0058]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-氟苯基)缩氨基脲(1h).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.15(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.87(s,1h,＝n-nh-co),9.29(s,1h,co-nh-ph”),8.62(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.91(d,j＝4.8hz,1h,嘧啶环ch5),7.71(dt,j＝15.3,7.8hz,2h,ph’h),7.57(dt,j＝8.9,6.3hz,3h,ph’h ph”h
2,6
),7.43(t,j＝8.3hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.37(d,j＝8.6hz,2h,phh
2,6
),7.15(d,j＝8.8hz,2h,ph”h
3,5
)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.70,159.47,159.04,157.30,145.26,143.99,135.45,133.15,132.95,131.79,131.58,130.26,128.41,122.27,120.00,118.29,115.82,115.60 109.33,102.47ppm；ms(esi )486.5(m na)

；hplc:tr＝17.52min,98.5％。
[0059]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-氯苯基)缩氨基脲(1i).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.16(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.93(s,1h,＝n-nh-co),9.43(s,1h,co-nh-ph”),8.62(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.88(d,j＝4.8hz,1h,嘧啶环ch5),7.76-7.65(m,2h,ph’h),7.58(d,j＝8.9hz,3h,ph’h ph”h
2,6
),7.42(t,j＝9.1hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.36(dd,j＝8.8,3.8hz,4h,phh
2,6
ph”h
3,5
)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.69,159.42,159.03,152.09,145.22,144.29,138.19,133.11,132.95,131.52,130.26,129.05,128.43,126.96,121.63,119.99,118.31,109.33,102.50ppm；ms(esi )502.5(m na)

；hrms(esi )m/z:＝502.0957,504.0933[m h]

；calcd.502.0950,504.0920for c
25h18
cl2n7o2 h；hplc:tr＝14.84min,98.2％。
[0060]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-溴苯基)缩氨基脲(1j).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.16(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.93(s,1h,＝n-nh-co),9.36(s,1h,co-nh-ph”),8.62(d,j＝5.1hz,1h,嘧啶环ch6),7.89(d,j＝4.2hz,1h,嘧啶环ch5),7.71(q,j＝7.8hz,2h,ph’h),7.63-7.52(m,3h,ph’h ph”h
2,6
),7.49(d,j＝8.6hz,2h,ph”h
3,5
),7.43(t,j＝7.4hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.37(d,j＝8.5hz,2h,phh
2,6
)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:
162.65,159.48,159.09,152.06,145.25,144.30,138.62,133.13,132.95,131.95,131.83,131.55,130.26,128.43,122.04,119.99,118.29,114.95,109.35,102.49ppm；ms(esi )568.5(m na)

；hrms(esi )m/z:＝546.0439,548.0419[m h] ；calcd.546.0445,548.0424for c
25h18
brcln7o2 h；hplc:tr＝19.58min,99.2％。
[0061]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(3-甲基苯基)缩氨基脲(1k).yield:48.2％；light黄色solid；mp:258.4-259.1℃；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.16(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.83(s,1h,＝n-nh-co),9.21(s,1h,co-nh-ph”),8.61(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.86(d,j＝5.0hz,1h,嘧啶环ch5),7.77
–
7.66(m,2h,ph’h),7.59(t,j＝7.3hz,1h,ph’h),7.43(t,j＝7.9hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.36(t,j＝11hz,4h,phh
2,6
ph”h
2,6
),7.18(t,j＝7.7hz,1h,ph”h5),6.85(d,j＝7.4hz,1h,ph”h4),2.28(s,3h,ch3)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.76,159.44,159.02,151.99,145.25,143.88,139.06,138.40,132.96,131.81,131.56,130.27,129.05,128.45,124.07,120.56,120.00,118.30,117.22,109.25,102.47,21.66ppm；ms(esi )582(m na)

；hrms(esi )m/z:＝482.1493,484.1474[m h]

；calcd.482.1496,484.1467for c
26h21
cln7o h；hplc:tr＝14.55min,99.1％。
[0062]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(3-硝基苯基)缩氨基脲(1l).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.17(s,1h,ph-nh-嘧啶环),10.13(s,1h,＝n-nh-co),9.78(s,1h,co-nh-ph”),8.62(s,1h,ph”h2),8.65(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.94(s,2h,ph”h
4,6
),7.89(d,j＝9.8hz,1h,嘧啶环ch5),7.73(d,j＝7.4hz,2h,ph’h),7.60(t,j＝8.3hz,2h,ph’h ph”h5),7.44(t,j＝8.8hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.37(d,j＝8.8hz,2h,phh
2,6
)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.57,159.48,159.14,152.34,148.49,145.23,144.84,140.59,133.12,132.94,131.84,131.54,130.47,130.26,128.40,119.98,118.30,117.75,114.13,109.46,102.50ppm；ms(esi )513.5(m h)

；hrms(esi )m/z:＝513.1191,515.1165[m h] ；calcd.513.1191,515.1164for c
25h18
cln8o3 h；hplc:tr＝14.05min,98.1％。
[0063]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(3-羟基苯基)缩氨基脲(1m).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.19(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.82(s,1h,＝n-nh-co),9.24(s,1h,co-nh-ph”),8.60(d,j＝5.3hz,1h,嘧啶环ch6),7.81(d,j＝5.1hz,1h,嘧啶环ch5),7.77
–
7.63(m,2h,ph’h),7.59(t,j＝7.3hz,1h,ph’h),7.43(t,j＝8.8hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.37(t,j＝8.8hz,2h,phh
2,6
),7.15-6.99(m,2h,ph”h
2,5
),6.89(d,j＝8.3hz,1h,ph”h2),6.44(d,j＝9.5hz,1h,ph”h4)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.92,159.29,158.81,158.19,151.73,145.18,143.82,140.22,133.11,132.96,131.83,131.60,131.50,130.28,129.85,128.47,119.98,118.35,110.43,106.87,102.55,56.50,19.03ppm。
[0064]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(3-甲氧基苯基)缩氨基脲(1n).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.19(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.86(s,1h,＝n-nh-co),9.36(s,1h,co-nh-ph”),8.61(d,j＝5.3hz,1h,嘧啶环ch6),7.82(d,j＝5.0hz,1h,嘧啶环ch5),7.78
–
7.65(m,2h,ph’h),7.59(t,j＝7.4hz,1h,ph’h),7.43(t,j＝9.0hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.38(t,j＝9.5hz,2h,phh
2,6
),7.20(dd,j＝11.2,4.9hz,2h,ph”h
2,5
),7.07(d,j＝8.0hz,1h,ph”h6),6.61(d,j＝8.2hz,1h,ph”h4),2.49(s,3h,ch3)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.87,160.07,159.31,158.86,151.86,145.18,144.02,133.10,132.96,131.84,131.58,131.49,130.28,129.99,128.47,119.97,118.36,112.13,109.21,108.67,105.68,102.56,
nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.35(s,1h,ph-nh-嘧啶环),10.21(s,1h,＝n-nh-co),8.94(s,1h,co-nh-ph”),8.60(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),8.00(d,j＝7.9hz,1h,嘧啶环ch5),7.74
–
7.67(m,2h,ph’h),7.59(dd,j＝13.7,6.3hz,2h,ph’h ph”h6),7.43(t,j＝7.6hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.37(d,j＝8.8hz,2h,phh
2,6
),6.90(d,j＝7.8hz,1h,ph”h3),6.84(t,j＝7.5hz,1h,ph”h4),6.76(t,j＝7.6hz,1h,ph”h5)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:163.10,159.34,158.80,151.87,146.97,145.15,143.52,133.14,132.97,131.78,131.72,130.18,128.36,127.16,123.32,119.98,119.87,119.58,118.38,115.16,108.57,102.59ppm。
[0070]
2-氯苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(2-甲氧基苯基)缩氨基脲(1t).δ:10.35(s,1h,ph-nh-嘧啶环),10.21(s,1h,＝n-nh-co),8.94(s,1h,co-nh-ph”),8.61(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.83(d,j＝4.9hz,1h,嘧啶环ch5),7.75
–
7.68(m,2h,ph’h),7.59(t,j＝7.2hz,1h,ph’h),7.43(t,j＝9.2hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.37(d,j＝8.6hz,2h,phh
2,6
),7.21-7.18(m,2h,ph”h
4,5
),7.07(d,j＝8.0hz,1h,ph”h6),6.60(d,j＝8.0hz,1h,ph”h3),2.49(s,3h,ch3)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.88,160.06,159.30,158.83,151.85,145.17,144.00,140.42,133.11,132.96,131.84,131.59,131.50,130.28,129.99,128.47,119.98,118.36,112.13,109.20,108.66,105.67,102.56,55.47ppm。
[0071]
2-溴苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-溴苯基)缩氨基脲(1u).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.17(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.96(s,1h,＝n-nh-co),9.51(s,1h,co-nh-ph”),8.64(d,j＝4.8hz,1h,嘧啶环ch6),7.91(d,j＝4.2hz,3h,嘧啶环ch5 ph”h
2,6
),7.63(s,2h,ph’h),7.51(d,j＝7.3hz,1h,ph’h),7.45(d,j＝8.0hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.38(d,j＝7.9hz,2h,phh
2,6
),7.28(d,j＝7.8hz,2h,ph”h
3,5
)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.53,159.41,159.06,145.67,145.23,145.23,140.89,133.68,133.46,133.26,132.92,131.92,131.62,131.10,128.84,123.08,122.00,119.97,119.05,118.30,109.42,102.46ppm。
[0072]
2-溴苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-氯苯基)缩氨基脲(1v).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.18(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.93(s,1h,＝n-nh-co),9.52(s,1h,co-nh-ph”),8.62(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.88(d,j＝4.8hz,1h,嘧啶环ch5),7.76-7.65(m,2h,ph’h),7.58(d,j＝8.9hz,3h,ph’h ph”h
2,6
),7.42(t,j＝9.1hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.36(dd,j＝8.8,3.8hz,4h,phh
2,6
ph”h
3,5
)ppm；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ:162.59,159.32,158.95,152.02,145.41,145.21,138.21,133.68,133.32,132.92,131.90,131.63,129.03,128.91,126.85,123.02,121.45,119.85,118.32,102.49ppm。
[0073]
2-溴苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-氟苯基)缩氨基脲(1w).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.16(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.85(s,1h,＝n-nh-co),9.36(s,1h,co-nh-ph”),8.63(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.91(d,j＝3.5hz,2h,嘧啶环ch5 ph’h),7.65
–
7.62(m,2h,ph’h),7.57(dd,j＝8.8,4.9hz,2h,ph’h),7.45(d,j＝8.8hz,2h,phh
3,5
),7.38(d,j＝8.8hz,3h,phh
2,6
ph’h),7.19-7.10(m,2h,ph”3,5
)ppm。
[0074]
2-溴苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(3-硝基苯基)缩氨基脲(1x).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.19(s,1h,ph-nh-嘧啶环),10.11(s,1h,＝n-nh-co),9.90(s,1h,co-nh-ph”),8.66(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),8.63(s,1h,ph”h2),7.95(d,j＝6.6hz,2h,ph”h
4,6
),7.92-7.87(m,2h,嘧啶环ch5 ph’h),7.64-7.59(m,3h,ph’h),7.45(t,j＝
8.8hz,2h,phh
3,5
),7.40(dd,j＝13.7,5.8hz,3h,phh
2,6
ph’h)ppm。
[0075]
2-溴苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(4-氰基苯基)缩氨基脲(1y).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.16(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.85(s,1h,＝n-nh-co),9.36(s,1h,co-nh-ph”),8.63(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.86(d,j＝4.6hz,1h,嘧啶环ch5),7.74
–
7.68(m,6h,ph’h,ph”h
2,3,5,6
),7.60(t,j＝6.7hz,1h,ph’h),7.43(t,j＝7.0hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.37(d,j＝8.8hz,2h,phh
2,6
)ppm。
[0076]
2-溴苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(3-溴苯基)缩氨基脲(1z).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.17(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.95(s,1h,＝n-nh-co),9.46(s,1h,co-nh-ph”),8.64(d,j＝5.2hz,1h,嘧啶环ch6),7.91(d,j＝5.0hz,2h,嘧啶环ch5 ph”h2),7.78
–
7.66(m,2h,ph’h),7.59(t,j＝7.3hz,1h,ph’h),7.50(d,j＝8.0hz,1h,ph”h6),7.43(t,j＝4.6hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.37(d,j＝8.7hz,2h,phh
2,6
),7.27(t,j＝8.0hz,1h,ph”h5),7.21(d,j＝8.0hz,1h,ph”h4)ppm.
[0077]
2-溴苯基-2-(4-氰基苯氨基)-嘧啶-4-基酮-n-(3-甲氧基苯基)缩氨基脲(1aa).1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.17(s,1h,ph-nh-嘧啶环),9.95(s,1h,＝n-nh-co),9.46(s,1h,co-nh-ph”),8.64(d,j＝5.3hz,1h,嘧啶环ch6),7.90(d,j＝5.0hz,1h,嘧啶环ch5),7.78
–
7.65(m,2h,ph’h),7.59(t,j＝7.4hz,1h,ph’h),7.43(t,j＝9.0hz,3h,phh
3,5
ph’h),7.38(t,j＝9.5hz,2h,phh
2,6
),7.20(dd,j＝11.2,4.9hz,2h,ph”h
2,5
),7.07(d,j＝8.0hz,1h,ph”h6),6.61(d,j＝8.2hz,1h,ph”h4),2.49(s,3h,och3)ppm。
[0078]
实施例3：抗hiv生物活性测试
[0079]
体外细胞水平的抗hiv病毒活性测试主要包括：对hiv感染的mt-4细胞的抑制活性及细胞毒性两方面。方法如下：使化合物在hiv感染的mt-4细胞中，于感染hiv不同时间，用mtt法测定药物对hiv诱变的细胞病变的保护作用，计算使50％的细胞免于hiv诱导的细胞病变所需的浓度半数有效浓度ec
50
，毒性测定与抗hiv活性实验平行进行，也是在mt-4细胞培养中，用mtt法测定使50％的未感染细胞发生细胞病变的浓度(cc
50
)，并计算选择性指数si＝cc
50
/ec
50
。
[0080]
材料与方法：
[0081]
各化合物的抗hiv活性由药物对hiv在细胞中引起的细胞病变的抑制作用效率来监控。采用mt-4细胞进行细胞培养。采用的病毒株有：hiv-1病毒株ⅲb及hiv-2病毒株rod。
[0082]
具体操作如下：将化合物用dmso或水溶解后在磷酸盐缓冲食盐水溶液稀释，将3
×
105mt-4细胞用100μl各化合物不同浓度此溶液在37℃预培养1h，然后向该化合物中加入100μl适当的病毒稀释液，将细胞于37℃培养1h。洗涤三次后，将细胞再次分别悬浮于含有或不含有化合物的培养介质中。接着将细胞在5％co2氛围中，于37℃下再培养7天，并于感染后第三天用含有或不含有化合物的培养介质替换补充培养液。每种培养液条件重复操作两次。对病毒的细胞病变作用每天都用反向光学显微镜监控。典型来讲，本实验中所用的病毒稀释液常常会在病毒感染后第五天导致细胞病变。药物抑制浓度以药物对病毒细胞病变作用产生50％抑制作用而同时对细胞无直接毒性的浓度(cc
50
)表示。需要强调的是，当化合物水溶性较差，需要dmso才能溶解时，dmso比浓度相对于水来讲，一般低于10％(dmso在mt-4细胞培养介质中最终浓度小于2％)。因为dmso能影响测试化合物的抗病毒活性，对含有相同浓度dmso溶液抗病毒活性对比空白实验也应该平行进行。另外，dmso最终浓度(1/1000)
远远低于hiv-1在t细胞中复制所需的浓度。
[0083]
本发明用已上市药物奈维拉平(nevirapine,nvp)、依非韦伦(efavirenz,efv)和依曲韦林(etravirine,etv)作对照品，部分目标化合物对hiv的抑制活性结果总结在表3～4。实验结果表明，化学通式中所包含的化合物普遍具有较强的抗hiv-1病毒活性，较小的细胞毒性和较高的选择性指数。dapy-sc类化合物对hiv-1iiib，变异病毒株res056和hiv-2病毒株rod的活性胞毒性结果如表3所示。
[0084]
表3目标化合物的抗hiv活性和细胞毒性
[0085][0086][0087]
如表3所示，20个目标化合物对野生型hiv-1的ec
50
值在0.0329～1.1538μm范围内，对hiv-1野生型毒株具有低微摩尔水平的抑制活性，si值在22～3712范围内，相比先导化合物，抑制活性降低。其中，目标化合物1h的活性最佳(r＝4-f,ec
50
值为0.0329μm,si值为
3712)，强于参考药物nev(ec
50
值为0.114μm,si值为132),dev(ec
50
值为0.0366μm,si值为1200)和ddi(ec
50
值为19.96μm,si值为11)。另外，1a(h,ec
50
值为0.0449μm,si值为1575),1c(4-cn,ec
50
值为0.0650μm,si值为519),1n(3-och3,ec
50
值为0.0402μm,si值为213),1p(3-cl,ec
50
值为0.0737μm,si值为1729)和1s(2-oh,ec
50
值为0.0372μm,si值为135)的活性也较强，优于参考药物nev和ddi。而中间体13a的ec
50
值为0.0111μm,si值为5548，强于参考药物nev,dev和ddi，活性强于20个目标化合物。
[0088]
对双突变毒株res056，部分化合物表现较弱抑制活性，包括1f(4-oc2h5,ec
50
值为5.12μm),1g(4-oh,ec
50
值为4.92μm),1m(3-oh,ec
50
值为5.21μm),1n(3-och3,ec
50
值为8.01μm),1s(2-oh,ec
50
值为5.31μm)和1t(2-och3,ec
50
值为8.49μm)，优于参考药物nev(ec
50
值为15.04μm)和dev(ec
50
值为43.86μm)。
[0089]
另外，部分化合物对hiv-2rod表现出一定活性，包括1f(4-oc2h5,ec
50
值为6.84μm),1g(4-oh,ec
50
值为5.14μm),1m(3-oh,ec
50
值为5.97μm),1n(3-och3,ec
50
值为8.99μm),1s(2-oh,ec
50
值为4.67μm)和1t(2-och3,ec
50
值为9.94μm)。值得注意的是，这与对双突变毒株res056的抑制活性相符。
[0090]
实施例4，目标化合物在酶水平抗hiv-1rt活性测试
[0091]
为证实目标化合物的作用靶点为hiv-1rt，本专利对目标化合物进行了酶水平的抑制活性测试。实验材料所用逆转录酶活性检测试剂盒(enzcheck reverse transcriptase assay kit)购自invitrogen公司。阳性对照:nevirapine(nev)和efavirenz(efv)。
[0092]
(1)测试原理和方法
[0093]
根据文献已报道的方法进行表达和纯化重组野生型逆转录酶p66/p51 hiv-1rt，并用商业化逆转录酶活性检测试剂盒(enzcheck reverse transcriptase assay kit)进行逆转录酶活性检测，所有步骤都严格按照测试盒的说明书进行。该检测盒的作用原理是染料picogreen在结合双链dna或rna/dna杂合双链时，其荧光信号会显着增强，从而达到对双链核酸的定量作用。而即使存在非常高的染料：碱基配对比，单链核酸都只有轻微的荧光信号。
[0094]
(2)实验过程
[0095]
以350个碱基poly(ra)为模板，oligo(dt)
16
为引物，按摩尔比1:1.2在室温下退火60分钟：在96孔板中每孔加入20μl包含52ng rna/dna混合物的聚合缓冲液(含60mm tri-hcl,60mm kcl,8mm mgcl2,13mm dtt,100mm dttp,ph 8.1)；用酶稀释液(含50mm tri-hcl,20％glycerol,2mm dtt,ph 7.6)将5μl rt酶溶液稀释至合适的浓度；将反应液在25℃条件下孵育40分钟，加入15mm edta终止反应，之后通过加入picogreen染料检测杂交双链。通过酶标仪测定在490nm激发波长下，523nm发射波长处的吸光度值。为了检测化合物抗逆转录酶的活性，加逆转录酶溶液前，每孔先预加1μl的化合物溶液于dmso的溶液。待测样品溶于dmso配到适当浓度，然后用dmso稀释5倍，各8个稀释度。而对照孔加入1μl不含化合物的dmso。结果以相对荧光值表示，即含化合物孔的荧光强度/不含化合物孔的荧光强度。
[0096]
(3)结果与讨论
[0097]
目标化合物对野生型hiv-rt的抑制活性结果如表4所示。
[0098]
表4目标化合物对hiv-1rt的抑制活性
[0099][0100][0101]
如表4所示，20个目标化合物和13a均对hiv-1rt有较强抑制活性，目标化合物的ic
50
值在0.438～10.14μm。其中，1h的抑制活性最强(ic
50
值为0.438μm)，优于参考药物nev(ic
50
值为0.971μm)。另外，1a(ic
50
值为0.522μm),1l(ic
50
值为0.970μm),1n(ic
50
值为0.833μm),1q(ic
50
值为0.955μm)和1s(ic
50
值为0.594μm)的抑制活性也较强，优于参考药物nev。说明目标化合物的作用靶点是hiv-1rt。
[0102]
总之，通过细胞水平和酶水平的实验结果均表明，化学通式中所包含的化合物普遍具有较强的抗hiv-1病毒活性，较小的细胞毒性和较高的选择性指数。
[0103]
化合物与靶标rt之间的分子对接(docking)分析
[0104]
为了获得分子潜在的活性构象，我们借助sybyl分子模拟软件包中的surflex-dock模块，根据2d-qsar的研究结果，选取tmc125/hiv-1复合物3mec，提取配体后对酶蛋白除水、加氢。在tripos力场下利用最陡能量梯度下降法进行构象优化后加载gasteig-h
ü
ckel电荷。以提取出的tmc125构象为参考，将优化后的分子与准备好的受体蛋白进行模拟对接。对接结果的参数在附录中。以total score(ts)值进行比较，1ac最高，1q,1p,1j和1k的ts值也较高。对接打分值值利用qsar模型对目标化合物的活性预测相符。
[0105]
观察配体与逆转录酶的相互作用，以预测活性较强的1q,1p,1k和预测结果较差的1d和3mec的结合模式为例，结合模式如图2分析所示。
[0106]
预测活性较强的1q和1p在rt的nnibp中的构象相似，呈现u形构象，配体进入到tyr181,tyr188和trp229等氨基酸形成的疏水口袋内，形成疏水相互作用，左翼芳环与tyr181和tyr188的苯环在同一平面内，形成π-π堆积相互作用。同时，右翼芳环连接基nh与lys101的形成氢键。1q的缩氨基脲上的nh还可与ile180形成氢键，与酶的结合更紧密。
[0107]
而1k和预测活性较差的1d在酶的疏水性结合口袋中的构象与经典的u形构象不同。1k的左翼芳环的位置与缩氨基脲的芳环相比1q和1p发生了互换，缩氨基脲上的苯环进入疏水口袋中，形成π-π堆积相互作用。1d离tyr181,tyr188和trp229等氨基酸形成的疏水口袋较远，不能与酶形成π-π堆积相互作用和疏水相互作用，虽然1d也可以与lys101形成氢键，但其与酶的亲和力相比1p,1q和1k大大降低，可见与疏水口袋的相互作用对于配体与
hiv-1rt的结合是非常重要的。
[0108]
本发明不限于上述实例。
[0109]
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