程序性细胞死亡1配体1（PD-L1）的iRNA组合物及其使用方法与流程

技术特征：
1.一种用于抑制程序性细胞死亡1配体1(pd-l1)表达的双链核糖核酸(rnai)试剂，其中所述rnai试剂包括有义链和反义链，其中所述有义链包括至少15个连续核苷酸，所述至少15个连续核苷酸与seq id no:1所示的核苷酸序列中的第3221-3243位、第351-372位、第618-641位、第618-639位、第619-640位、第620-641位、第1093-1115位、第1093-1114位、第1094-1115位、第1167-1188位、第1293-1314位、第1518-1539位、第2103-2124位、第2220-2261位、第2220-2241位、第2240-2261位、第2648-2680位、第2648-2669位、第2658-2679位、第2659-2680位、第3143-3164位、第3198-3219位、第3221-3242位或第3222-3243位核苷酸中任一项的差异不超过3个核苷酸，并且所述反义链包括至少15个连续核苷酸，所述至少15个连续核苷酸与seq id no：2所示的核苷酸序列的互补部分的差异不超过3个核苷酸，并且其中所述rnai试剂包括至少一个经修饰的核苷酸。2.一种用于抑制程序性细胞死亡1配体1(pd-l1)表达的双链核糖核酸(rnai)试剂，其中所述rnai试剂包括有义链和反义链，所述反义链包括互补区，所述互补区包含至少15个连续核苷酸，所述至少15个连续核苷酸与ad-67635、ad-67637、ad-67658、ad-67632、ad-67629、ad-67631、ad-67633、ad-67643、ad-67653、ad-67640、ad-67650、ad-67676、ad-67661、ad-67667、ad-67655、ad-67672、ad-67659、ad-67673、ad-67664、ad-67662、ad-67660、ad-67656、ad-67628、ad-67647、ad-67626或ad-67645双链体中任一个的任一反义序列的差异不超过3个核苷酸。3.根据权利要求1或2所述的dsrna试剂，其中所述有义链和反义链包括选自下组的核苷酸序列：ad-67635、ad-67637、ad-67658、ad-67632、ad-67629、ad-67631、ad-67633、ad-67643、ad-67653、ad-67640、ad-67650、ad-67676、ad-67661、ad-67667、ad-67655、ad-67672、ad-67659、ad-67673、ad-67664、ad-67662、ad-67660、ad-67656、ad-67628、ad-67647、ad-67626或ad-67645双链体中任一个的任一核苷酸序列。4.根据权利要求1-3中任一项所述的dsrna试剂，其中所述有义链的基本上所有核苷酸或者所述反义链的基本上所有核苷酸都包括核苷酸修饰。5.根据权利要求1-3中任一项所述的dsrna试剂，其中所述有义链的所有核苷酸以及所述反义链的所有核苷酸都包括修饰。6.一种用于抑制程序性细胞死亡1配体1(pd-l1)表达的双链核糖核酸(rnai)试剂，其中所述双链rnai试剂包括形成双链区的有义链和反义链，其中所述有义链包括至少15个连续核苷酸，所述至少15个连续核苷酸与seq id no:1所示核苷酸序列的第3221-3243位、第351-372位、第618-641位、第618-639位、第619-640位、第620-641位、第1093-1115位、第1093-1114位、第1094-1115位、第1167-1188位、第1293-1314位、第1518-1539位、第2103-2124位、第2220-2261位、第2220-2241位、第2240-2261位、第2648-2680位、第2648-2669位、第2658-2679位、第2659-2680位、第3143-3164位、第3198-3219位、第3221-3242或第3222-3243位核苷酸中的任一项的差异不超过3个核苷酸，并且所述反义链包括至少15个连续核苷酸，所述连续核苷酸与seq id no：2所示的核苷酸序列的互补部分的差异不超过3个核苷酸，其中所述有义链的基本上所有核苷酸以及所述反义链的基本上所有核苷酸都包括核苷酸修饰，并且其中所述有义链与连接在3'-末端的配体缀合。
7.根据权利要求6所述的双链rnai试剂，其中所述有义链的所有核苷酸以及所述反义链的所有核苷酸都包括修饰。8.根据权利要求1-6中任一项所述的rnai试剂，其中至少一个所述核苷酸修饰选自下组：脱氧核苷酸、3
’‑
末端脱氧胸腺嘧啶(dt)核苷酸、2'-o-甲基修饰的核苷酸、2'-氟代修饰的核苷酸、2'-脱氧修饰的核苷酸、锁定核苷酸、解锁核苷酸，构象限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、脱碱基核苷酸、2
’‑
氨基修饰的核苷酸、2
’‑
o-烯丙基修饰的核苷酸、2
’‑
c-烷基修饰的核苷酸、2
’‑
羟基修饰的核苷酸、2
’‑
甲氧基乙基修饰的核苷酸、2
’‑
o-烷基修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然碱基的核苷酸、四氢吡喃修饰的核苷酸、1,5-失水己糖醇修饰的核苷酸、环己烯基修饰的核苷酸、包含硫代磷酸酯基团的核苷酸、包含甲基膦酸酯基团的核苷酸、包含5’磷酸的核苷酸、以及包含5'-磷酸模拟物的核苷酸。9.根据权利要求8所述的rnai试剂，其中所述核苷酸修饰包括3'-末端脱氧胸腺嘧啶核苷酸(dt)短序列。10.根据权利要求2所述的rnai试剂，其中所述互补区的长度为至少17个核苷酸。11.根据权利要求2所述的rnai试剂，其中所述互补区的长度为19-21个核苷酸。12.根据权利要求11所述的rnai试剂，其中所述互补区的长度为19个核苷酸。13.根据权利要求1、2和6中任一项所述的rnai试剂，其中每条链的长度都不超过30个核苷酸。14.根据权利要求1、2和6中任一项所述的rnai试剂，其中至少有一条链包含具有至少1个核苷酸的3'悬端。15.根据权利要求1、2和6中任一项所述的rnai试剂，其中至少有一条链包含具有至少2个核苷酸的3'悬端。16.根据权利要求1-5中任一项所述的rnai试剂，其还包括配体。17.根据权利要求16所述的rnai试剂，其中所述配体与所述dsrna试剂的所述有义链的3'端缀合。18.根据权利要求6或16所述的rnai试剂，其中所述配体是n-乙酰半乳糖胺(galnac)衍生物。19.根据权利要求18所述的rnai试剂，其中所述配体为20.根据权利要求18所述的rnai试剂，其中所述dsrna试剂如以下所示地与所述配体缀合：
并且，其中x为o或s。21.根据权利要求20所述的rnai试剂，其中所述x为o。22.根据权利要求2所述的rnai试剂，其中所述互补区包括表3和表5中所示的任一个反义序列。23.根据权利要求2所述的rnai试剂，其中所述互补区由表3或表5中所示的任一个反义序列组成。24.一种能够抑制pd-l1表达的双链核糖核酸(rnai)试剂，其中所述双链rnai试剂包括与反义链互补的有义链，其中所述反义链包括与编码pd-l1的mrna的一部分互补的区域，其中每条链的长度为约14个到约30个核苷酸，其中所述双链rnai试剂由式(iii)表示：有义链：5'n
p-n
a-(x x x)
i-n
b-y y y-n
b-(z z z)
j-n
a-n
q 3'反义链：3'n
p
′‑
n
a
′‑
(x
′
x
′
x
′
)
k-n
b
′‑
y
′
y
′
y
′‑
n
b
′‑
(z
′
z
′
z
′
)
l-n
a
′‑
n
q
′
5'
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(iii)其中：i、j、k和l各自独立地为0或1；p、p'、q和q'各自独立地为0-6；每个n
a
和n
a
′
均独立地表示包含0-25个经修饰的或未经修饰的或其混合的核苷酸的寡核苷酸序列，每个序列都包含至少两个以不同的方式修饰的核苷酸；每个n
b
和n
b
′
均独立地表示包含0-10个经修饰的或未经修饰的或其混合的核苷酸的寡核苷酸序列，每个n
p
、n
p
′
、n
q
和n
q
′
均独立地表示悬端核苷酸，每个n
p
、n
p
′
、n
q
和n
q
′
均可能存在或可能不存在；xxx、yyy、zzz、x'x'x'、y'y'y'和z'z'z'各自独立地表示一个在三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的基序；n
b
上的修饰与所述y上的修饰不同，并且n
b
′
上的修饰与所述y'上的修饰不同；并且其中所述有义链与至少一个配体缀合。25.一种能够抑制细胞中pd-l1的表达的双链核糖核酸(rnai)试剂，其中所述双链rnai试剂包括与反义链互补的有义链，其中所述反义链包括与编码pd-l1的mrna的一部分互补的区域，其中每条链的长度为约14个到约30个核苷酸，其中所述双链rnai试剂由式(iii)表示：有义链：5'n
p-n
a-(x x x)
i-n
b-y y y-n
b-(z z z)
j-n
a-n
q 3'
反义链：3'n
p
′‑
n
a
′‑
(x
′
x
′
x
′
)
k-n
b
′‑
y
′
y
′
y
′‑
n
b
′‑
(z
′
z
′
z
′
)
l-n
a
′‑
n
q
′
5'
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(iii)其中：i、j、k和l各自独立地为0或1；p、p'、q和q'各自独立地为0-6；每个n
a
和n
a
′
均独立地表示包含0-25个经修饰的或未经修饰的或其混合的核苷酸的寡核苷酸序列，每个序列包含至少两个以不同方式修饰的核苷酸；每个n
b
和n
b
′
均独立地表示包含0-10个经修饰的或未经修饰的或其混合的核苷酸的寡核苷酸序列，每个n
p
、n
p
′
、n
q
和n
q
′
均独立地表示悬端核苷酸，每个n
p
、n
p
′
、n
q
和n
q
′
均可能存在或可能不存在；xxx、yyy、zzz、x'x'x'、y'y'y'和z'z'z'各自独立地表示一个在三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的基序，并且其中所述修饰是2'-o-甲基或2'-氟代修饰；n
b
上的修饰与y上的所述修饰不同，并且n
b
′
上的修饰与y'上的所述修饰不同；以及其中所述有义链与至少一个配体缀合。26.一种能够抑制细胞中pd-l1的表达的双链核糖核酸(rnai)试剂，其中所述双链rnai试剂包括与反义链互补的有义链，其中所述反义链包括与编码pd-l1的mrna的一部分互补的区域，其中每条链的长度为约14个到约30个核苷酸，其中所述双链rnai试剂由式(iii)表示：有义链：5'n
p-n
a-(x x x)
i-n
b-y y y-n
b-(z z z)
j-n
a-n
q 3'反义链：3'n
p
′‑
n
a
′‑
(x
′
x
′
x
′
)
k-n
b
′‑
y
′
y
′
y
′‑
n
b
′‑
(z
′
z
′
z
′
)
l-n
a
′‑
n
q
′
5'
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(iii)其中：i、j、k和l各自独立地为0或1；每个n
p
、n
q
和n
q
′
均独立地表示悬端核苷酸，每个n
p
、n
q
和n
q
′
均可能存在或可能不存在；p、q和q'各自独立地为0-6；n
p
′
>0并且至少有一个n
p
′
通过硫代磷酸酯键与相邻的核苷酸连接；每个n
a
和n
a
′
均独立地表示包含0-25个经修饰的或未经修饰的或其混合的核苷酸的寡核苷酸序列，每个序列都包含至少两个以不同的方式修饰的核苷酸；每个n
b
和n
b
′
均独立地表示包含0-10个经修饰的或未经修饰的或其混合的核苷酸的寡核苷酸序列，xxx、yyy、zzz、x'x'x'、y'y'y'和z'z'z'各自独立地表示一个在三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的基序，并且其中所述修饰是2'-o-甲基或2'-氟代修饰；n
b
上的修饰与y上的所述修饰不同，并且n
b
′
上的修饰与y'上的所述修饰不同；以及其中所述有义链与至少一个配体缀合。27.一种能够抑制细胞中pd-l1的表达的双链核糖核酸(rnai)试剂，其中所述双链rnai试剂包括与反义链互补的有义链，其中所述反义链包括与编码pd-l1的mrna的一部分互补的区域，其中每条链的长度为约14个到约30个核苷酸，其中所述双链rnai试剂由式(iii)表示：有义链：5'n
p-n
a-(x x x)
i-n
b-y y y-n
b-(z z z)
j-n
a-n
q 3'反义链：3'n
p
′‑
n
a
′‑
(x
′
x
′
x
′
)
k-n
b
′‑
y
′
y
′
y
′‑
n
b
′‑
(z
′
z
′
z
′
)
l-n
a
′‑
n
q
′
5'
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(iii)
其中：i、j、k和l各自独立地为0或1；每个n
p
、n
q
和n
q
′
均独立地表示悬端核苷酸，每个n
p
、n
q
和n
q
′
均可能存在或可能不存在；p、q和q'各自独立地为0-6；n
p
′
>0并且至少有一个n
p
′
通过硫代磷酸酯键与相邻的核苷酸连接；每个n
a
和n
a
′
均独立地表示包含0-25个经修饰的或未经修饰的或其混合的核苷酸的寡核苷酸序列，每个序列都包含至少两个以不同的方式修饰的核苷酸；每个n
b
和n
b
′
均独立地表示包含0-10个经修饰的或未经修饰的或其混合的核苷酸的寡核苷酸序列，xxx、yyy、zzz、x'x'x'、y'y'y'和z'z'z'各自独立地表示一个在三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的基序，并且其中所述修饰是2'-o-甲基或2'-氟代修饰；n
b
上的修饰与y上的所述修饰不同，并且n
b
′
上的修饰与y'上的所述修饰不同；以及其中所述有义链与至少一个配体缀合，其中所述配体是通过二价或三价枝化接头连接的一个或多个galnac衍生物。28.一种能够抑制细胞中pd-l1的表达的双链核糖核酸(rnai)试剂，其中所述双链rnai试剂包括与反义链互补的有义链，其中所述反义链包括与编码pd-l1的mrna的一部分互补的区域，其中每条链的长度为约14个到约30个核苷酸，其中所述双链rnai试剂由式(iii)表示：有义链：5'n
p-n
a-(x x x)
i-n
b-y y y-n
b-(z z z)
j-n
a-n
q 3'反义链：3'n
p
′‑
n
a
′‑
(x
′
x
′
x
′
)
k-n
b
′‑
y
′
y
′
y
′‑
n
b
′‑
(z
′
z
′
z
′
)
l-n
a
′‑
n
q
′
5'
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(iii)其中：i、j、k和l各自独立地为0或1；每个n
p
、n
q
和n
q
′
均独立地表示悬端核苷酸，每个n
p
、n
q
和n
q
′
均可能存在或可能不存在；p、q和q'各自独立地为0-6；n
p
′
>0并且至少有一个n
p
′
通过硫代磷酸酯键与相邻的核苷酸连接；每个n
a
和n
a
′
均独立地表示包含0-25个经修饰的或未经修饰的或其混合的核苷酸的寡核苷酸序列，每个序列都包含至少两个以不同的方式修饰的核苷酸；每个n
b
和n
b
′
均独立地表示包含0-10个经修饰的或未经修饰的或其混合的核苷酸的寡核苷酸序列，xxx、yyy、zzz、x'x'x'、y'y'y'和z'z'z'各自独立地表示一个在三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的基序，并且其中所述修饰是2'-o-甲基或2'-氟代修饰；n
b
上的修饰与y上的所述修饰不同，并且n
b
′
上的修饰与y'上的所述修饰不同；其中所述有义链包含至少一个硫代磷酸酯键；以及其中所述有义链与至少一个配体缀合，其中所述配体是通过二价或三价枝化接头连接的一个或多个galnac衍生物。29.一种能够抑制细胞中pd-l1的表达的双链核糖核酸(rnai)试剂，其中所述双链rnai试剂包括与反义链互补的有义链，其中所述反义链包括与编码pd-l1的mrna的一部分互补的区域，其中每条链的长度为约14个到约30个核苷酸，其中所述双链rnai试剂由式(iii)表示：
有义链：5'n
p-n
a-y y y-n
a-n
q 3'反义链：3'n
p
′‑
n
a
′‑
y
′
y
′
y
′‑
n
a
′‑
n
q
′
5'
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(iiia)其中：每个n
p
、n
q
和n
q
′
均独立地表示悬端核苷酸，每个n
p
、n
q
和n
q
′
均可能存在或可能不存在；p、q和q'各自独立地为0-6；n
p
′
>0并且至少有一个n
p
′
通过硫代磷酸酯键与相邻的核苷酸连接；每个n
a
和n
a
′
均独立地表示包含0-25个经修饰的或未经修饰的或其混合的核苷酸的寡核苷酸序列，每个序列都包含至少两个以不同的方式修饰的核苷酸；yyy和y'y'y'各自独立地表示一个在三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的基序，并且其中所述修饰是2'-o-甲基或2'-氟代修饰；其中所述有义链包含至少一个硫代磷酸酯键；以及其中所述有义链与至少一个配体缀合，其中所述配体是通过二价或三价枝化接头连接的一个或多个galnac衍生物。30.一种用于抑制pd-l1表达的双链核糖核酸(rnai)试剂，其中所述双链rnai试剂包括形成双链区的有义链和反义链，其中所述有义链包括至少15个连续核苷酸，所述至少15个连续核苷酸与seq id no:1所示的核苷酸序列中的第3221-3243位、第351-372位、第618-641位、第618-639位、第619-640位、第620-641位、第1093-1115位、第1093-1114位、第1094-1115位、第1167-1188位、第1293-1314位、第1518-1539位、第2103-2124位、第2220-2261位、第2220-2241位、第2240-2261位、第2648-2680位、第2648-2669位、第2658-2679位、第2659-2680位、第3143-3164位、第3198-3219位、第3221-3242或第3222-3243位核苷酸的差异不超过3个核苷酸，并且所述反义链包括至少15个连续核苷酸，所述至少15个连续核苷酸与seq id no：2所示的核苷酸序列的互补部分的差异不超过3个核苷酸，其中所述有义链的基本上全部核苷酸都包含选自下组的核苷酸修饰：2'-o-甲基修饰和2'-氟代修饰，其中所述有义链在5'-末端包含两个硫代磷酸酯核苷酸间键，其中所述反义链的基本上所有核苷酸都包含选自下组的核苷酸修饰：2'-o-甲基修饰和2'-氟代修饰，其中所述反义链在5'-末端包含两个硫代磷酸酯核苷酸间键并且在3'-末端包含两个硫代磷酸酯核苷酸间键，以及其中所述有义链与在3'-末端通过二价或三价枝化接头连接的一个或多个galnac衍生物缀合。31.一种细胞，所述细胞含有权利要求1、2、6和24-30中任一项所述的rnai试剂。32.一种用于抑制pd-l1基因表达的药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-30中任一项所述的rnai试剂。33.根据权利要求32所述的药物组合物，其中所述rnai试剂以非缓冲溶液形式施用。34.根据权利要求33所述的药物组合物，其中所述非缓冲溶液是盐或水。35.根据权利要求32所述的药物组合物，其中将所述rnai试剂与缓冲溶液一起进行施用。
36.根据权利要求35所述的药物组合物，其中所述缓冲溶液包括乙酸盐、柠檬酸盐、醇溶谷蛋白盐、碳酸盐或磷酸盐或其任意组合。37.根据权利要求35所述的药物组合物，其中所述缓冲溶液是磷酸缓冲盐(pbs)。38.一种药物组合物，所述药物组合物包括权利要求1-5中任一项所述的双链rnai试剂，以及脂质制剂。39.根据权利要求38所述的药物组合物，其中所述脂质制剂包括lnp。40.根据权利要求38所述的药物组合物，其中所述脂质制剂包括mc3。41.一种抑制细胞中pd-l1的表达的方法，所述方法包括：使所述细胞与权利要求1-30中任一项所述的双链rnai试剂或者权利要求32-40中任一项所述的药物组合物接触，从而抑制所述pd-l1基因在所述细胞中的表达。42.一种治疗患有能够因pd-l1表达的减少而受益的疾病或病症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1-30中任一项所述的rnai试剂或者权利要求32-40中任一项所述的药物组合物，从而治疗所述受试者。

技术总结
本发明涉及靶向程序性细胞死亡1配体1(PD-L1)基因的RNAi试剂，例如，双链RNAi试剂，以及使用此类RNAi试剂来抑制PD-L1基因表达的方法和治疗患有PD-L1相关疾病的受试者的方法。法。


技术研发人员：G
受保护的技术使用者：阿尔尼拉姆医药品有限公司
技术研发日：2016.08.22
技术公布日：2022/5/25