新型螺旋吡咯烷衍生的抗病毒药物的制作方法

新型螺旋吡咯烷衍生的抗病毒药物
1.发明人包括：王国强、沈瑞超、何勇、马骏、邢学超、曹晖、高旭日、彭小文、龙江、李卫、张嘉俊、j
·d·
帕那若瑟、n
·
t
·
肯特、s
·
巴特莱特和柯日新。
2.相关申请
3.本技术要求2020年11月23日递交的美国临时专利申请第63/117,170号、2021年1月28日递交的美国临时专利申请第63/142,663号、2021年9月20日递交的美国申请第17/479,244号以及2021年9月20日递交的美国临时专利申请第17/479,530号的优先权。上述专利申请的全部教导通过引证在此全部并入本文。
技术领域
4.本发明涉及通过用治疗有效量的3c样蛋白酶抑制剂靶向3c样蛋白酶(有时称为“3clpro”、“主蛋白酶”或“mpro”)来抑制冠状病毒复制活性的化合物和方法。本发明还涉及药物组合物，所述药物组合物包含冠状病毒3c样蛋白酶抑制剂，并对哺乳动物施用有效量的这种冠状病毒3c样蛋白酶抑制剂。


背景技术：

5.冠状病毒是具有病毒包膜的单链、正链rna病毒家族，分类为巢状病毒目。冠状病毒家族包括许多动物物种的病原体，包括人类、马、牛、猪、鸟、猫和猴子，并且在60年前就已经广为人知。例如，1949年报道了小鼠冠状病毒原型株jhm的分离。冠状病毒是一种常见的病毒，通常会引起人类轻度至中度上呼吸道疾病，并因其包膜表面的皇冠状突起而得名。冠状病毒有四个主要的亚组，称为α、β、γ和δ冠状病毒，第一批冠状病毒是在20世纪60年代中期发现的。已知能够感染人类的冠状病毒包括α冠状病毒229e和nl63；以及β冠状病毒oc43、hku1、sars-冠状病毒(导致严重急性呼吸综合征或sars的冠状病毒)和mers-冠状病毒(导致中东呼吸综合征或mers的冠状病毒)。人们通常感染人类冠状病毒229e、nl63、0c43和hku1，症状通常包括持续时间短的轻度至中度上呼吸道疾病，如流鼻涕、咳嗽、喉咙痛和发烧。偶尔，人类冠状病毒会导致下呼吸道疾病，如肺炎，尽管这在患有心肺疾病或免疫系统受损的人或老年人中更为常见。普通人类冠状病毒的传播还不完全清楚。然而，人类冠状病毒很可能通过咳嗽和打喷嚏，以及通过密切的个人接触，如触摸或握手，从受感染者通过空气传播给他人。这些病毒也可能通过接触受污染的物体或表面，然后接触口腔、鼻子或眼睛而传播。
6.冠状病毒是膜包覆的、阳性的、单链rna病毒。冠状病毒基因组rna具有5
′
帽结构和3
′
聚-a尾，并且至少包含6个开放阅读框(orf)。第一个orf(orf1a/b)直接翻译两个多蛋白：pp1a和pp1ab。这些多蛋白由3c样蛋白酶(3clpro，也称为主蛋白酶(mpro)加工成16种非结构蛋白。这些非结构蛋白参与亚基因组rna的产生，亚基因组rna编码四种结构蛋白，即包膜蛋白、膜蛋白、棘蛋白和核衣壳蛋白以及其他辅助蛋白。因此，人们了解3c样蛋白酶在冠状病毒生命周期中起着关键作用。
7.3clpro是一种半胱氨酸蛋白酶，参与前体多蛋白内的大多数裂解事件。活性
3clpro是一种含有两个原单体的同型二聚体，具有位于结构域i和ii之间的cys-his二元结构。3clpro在冠状病毒中是保守的，不同冠状病毒的3clpro底物具有一些共同特征。由于没有3clpro的人类同源物，它是一个理想的抗病毒靶点。尽管有报道称某些化合物可以抑制3clpro活性，但它们尚未被批准作为冠状病毒疗法。(参见wo 2004101742 a2，us 2005/0143320 al，us 2006/0014821 al，us 2009/0137818 al，wo 2013/049382 a2，wo 2013/166319 a1，wo2018042343，wo2018023054，wo2005113580和wo2006061714).
8.由于这一高度未满足的临床需求，需要对冠状病毒感染进行更有效的治疗。本发明提供抑制冠状病毒生命周期的化合物以及制备和使用这些化合物的方法。这些化合物可用于治疗或预防冠状病毒感染和减少疾病并发症(如器官衰竭或死亡)的发生。


技术实现要素：

9.本发明涉及新型抗病毒化合物、包含所述化合物的药物组合物以及用所述化合物治疗或预防需要此类治疗的受试者中病毒(尤其是冠状病毒)感染的方法。本发明化合物抑制由冠状病毒编码的蛋白质或干扰冠状病毒的生命周期，并且还可用作抗病毒剂。此外，本发明提供了制备所述化合物的方法。
10.在某些实施方案中，本发明提高了式(ia)所示化合物及其药学上可接受的盐、酯及其前体药物，
[0011][0012]
其中：
[0013]
a选自：
[0014]
1)-r
11
；
[0015]
2)-or
12
；和
[0016]
3)-nr
13r14
；
[0017]
b是任选取代的芳基或者任选取代的杂芳基；
[0018]
x选自：
[0019]
1)-cn；
[0020]
2)-c(o)r
15
；
[0021]
3)-ch(oh)so3r
16
；
[0022]
4)-c(o)nr
13r14
以及
[0023]
5)-c(o)c(o)nr
13r14
；
[0024]
r1，r2和r3相互独立的选自：
[0025]
1)氢；
[0026]
2)任选取代的-c
1-c8烷基；
[0027]
3)任选取代的-c
2-c8烯基；
[0028]
4)任选取代的-c
2-c8炔基；
[0029]
5)任选取代的-c
3-c8环烷基；
[0030]
6)任选取代的3-到8-元杂环烷基；
[0031]
7)任选取代的芳基；
[0032]
8)任选取代的芳基烷基；
[0033]
9)任选取代的杂芳基；以及
[0034]
10)任选取代的杂芳基烷基；
[0035]
选择性的，r1和r2与其所附着的碳原子一起形成一种任选取代的3-到8-元碳圆环或者一种任选取代的3-到8-元杂环基环。
[0036]
r4是氢，任选取代的-c
1-c4烷基，任选取代的c
2-c
4-烯基或者任选取代的-c
3-c6环烷基。
[0037]r11
和r
12
分别独立的选自：
[0038]
1)任选取代的-c
1-c8烷基；
[0039]
2)任选取代的-c
2-c8烯基；
[0040]
3)任选取代的-c
2-c8炔基；
[0041]
4)任选取代的-c
3-c8环烷基；
[0042]
5)任选取代的3-到8-元杂环烷基；
[0043]
6)任选取代的芳基；
[0044]
7)任选取代的芳基烷基；
[0045]
8)任选取代的杂芳基；并且
[0046]
9)任选取代的杂芳基烷基；
[0047]r13
和r
14
相互独立的选自：
[0048]
1)氢；
[0049]
2)任选取代的-c
1-c8烷基；
[0050]
3)任选取代的-c
2-c8烯基；
[0051]
4)任选取代的-c
2-c8炔基；
[0052]
5)任选取代的-c
3-c8环烷基；
[0053]
6)任选取代的3-到8-元杂环烷基；
[0054]
7)任选取代的芳基；
[0055]
8)任选取代的芳基烷基；
[0056]
9)任选取代的杂芳基；以及
[0057]
10)任选取代的杂芳基烷基；
[0058]
选择性的，r
13
和r
14
与其所附着的氮原子一起形成一种任选取代的3-到8-元杂环基环；
[0059]r15
是氢、羟基或者任选取代的-c
1-c8烷基；以及
[0060]r16
是氢或者na

。
[0061]
在某些实施方案中，本发明提供了式(i)所示的化合物及其药学上可接受的盐、酯和前体药物,
[0062][0063]
其中：
[0064]
a选自：
[0065]
1)-r
11
；
[0066]
2)-or
12
；以及
[0067]
3)-nr
13r14
；
[0068]
b是任选取代的芳基或者任选取代的杂芳基；
[0069]
x选自：
[0070]
1)-cn；
[0071]
2)-c(o)r
15
；
[0072]
3)-ch(oh)so3r
16
；
[0073]
4)-c(o)nr
13r14
；以及
[0074]
5)-c(o)c(o)nr
13r14
；
[0075]
r1，r2和r3相互独立的选自：
[0076]
1)氢；
[0077]
2)任选取代的-c
1-c8烷基；
[0078]
3)任选取代的-c
2-c8烯基；
[0079]
4)任选取代的-c
2-c8炔基；
[0080]
5)任选取代的-c
3-c8环烷基；
[0081]
6)任选取代的3-到8-元杂环烷基；
[0082]
7)任选取代的芳基；
[0083]
8)任选取代的芳基烷基；
[0084]
9)任选取代的杂芳基；和
[0085]
10)任选取代的杂芳基烷基；
[0086]
选择性的，r1和r2与其所附着的碳原子一起形成一种任选取代的3-到8-元碳圆环或者任选取代的3-到8-元杂环基环.
[0087]r11
和r
12
相互独立的选自：
[0088]
1)任选取代的-c
1-c8烷基；
[0089]
2)任选取代的-c
2-c8烯基；
[0090]
3)任选取代的-c
2-c8炔基；
[0091]
4)任选取代的-c
3-c8环烷基；
[0092]
5)任选取代的3-到8-元杂环烷基；
[0093]
6)任选取代的芳基；
[0094]
7)任选取代的芳基烷基；
[0095]
8)任选取代的杂芳基；以及
[0096]
9)任选取代的杂芳基烷基；
[0097]r13
和r
14
相互独立的选自：
[0098]
1)氢；
[0099]
2)任选取代的-c
1-c8烷基；
[0100]
3)任选取代的-c
2-c8烯基；
[0101]
4)任选取代的-c
2-c8炔基；
[0102]
5)任选取代的-c
3-c8环烷基；
[0103]
6)任选取代的3-到8-元杂环烷基；
[0104]
7)任选取代的芳基；
[0105]
8)任选取代的芳基烷基；
[0106]
9)任选取代的杂芳基；以及
[0107]
10)任选取代的杂芳基烷基；
[0108]
选择性的，r
13
和r
14
与其所附着的氮原子一起形成一种任选取代的3-到8-元杂环基环；
[0109]r15
是氢、羟基或者任选取代的-c
1-c8烷基；和
[0110]r16
是氢或者na

.
具体实施方式
[0111]
在本发明的一个实施方案中，本发明涉及如上所述式(i)或者式(ia)化合物，或其药学上可接受的盐。
[0112]
在本发明的一个实施方案中，式(ia)所示化合物可以表示为式(ia-a)或者式(ia-b)，或其药学上可接受的盐、酯或者前体药物：
[0113][0114]
其中，a、b、x、r1、r2、r3、和r4如之前的定义。
[0115]
在优选的实施方案中，式(ia)所示化合物的立体化学结构如式(ia-a)所示。
[0116]
在本发明的一个实施方案中，式(i)所示化合物可以表示为式(i-a)或者式(i-b)，或其药学上可接受的盐、酯或者前体药物：
[0117][0118]
其中，a，b，x，r1，r2,和r3如之前的定义。
[0119]
在优选的实施方案中，式(i)所示化合物的立体化学结构如式(i-a)所示。
[0120]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，r1是氢或者任选取代的-c
1-c4烷基；任选取代的-c
3-c6环烷基；任选取代的芳基；任选取代的芳基烷基；任选取代的杂芳基烷基。在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，r1是氢或者任选取代的-c
1-c6烷基；任选取代的-c
3-c6环烷基；任选取代的c
3-c6环烷基-c
1-c
2-烷基-；任选取代的芳基；任选取代的芳基烷基；任选取代的杂芳基烷基。
[0121]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，r2是氢或者任选取代的-c
1-c4烷基；任选取代的-c
3-c6环烷基；任选取代的芳基；任选取代的芳基烷基；任选取代的杂芳基烷基。
[0122]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，r3是氢或者任选取代的-c
1-c4烷基；r4是氢或者或者任选取代的-c
1-c4烷基。
[0123]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，r3是氢，-me，-et，-pr，-i-pr，-烯丙基，-cf3，-cd3或者环丙基。
[0124]
在式(ia)所示化合物的某些实施方案中，r4是氢、-me，-et，-pr，-i-pr，-烯丙基，-cf3或者环丙基。
[0125]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，x是-cn。
[0126]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，x是-c(o)h。
[0127]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，x是-c(o)ch2oh，-c(o)ch2cl或者-c(o)ch2f。
[0128]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，x是-c(o)c(o)nr
13r14
，其中，r
13
和r
14
如之前的定义。
[0129]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，a通过除去一个氢原子衍生自以下任一基团，并且可以是任选取代的：
[0130][0131]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，a选自下列基团，并且a是任选取代的：
[0132][0133]
优选的，所述取代基相互独立的选自卤素、cn、nh2，任选取代的-c
1-c3烷氧基，任选取代的-c
1-c3烷基，任选取代的-c
3-c6环烷基，任选取代的芳基,和任选取代的杂芳基。优选的，取代基的数目是0到3。
[0134]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，a选自下列基团并且a是任选取代的：
[0135][0136]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，a选自下列基团并且a是任选
取代的：
[0137][0138]
优选的，所述a取代基相互独立的选自卤素、cn、nh2，任选取代的-c
1-c3烷氧基，任选取代的-c
1-c3烷基，任选取代的-c
3-c6环烷基，任选取代的芳基,和任选取代的杂芳基。优选的，取代基的数目是0到3。
[0139]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，a选自下列基团并且a是任选取代的：
[0140][0141]
，优选的，所述取代基相互独立的选自卤素，cn，nh2，任选取代的-c
1-c3烷氧基，任选取代的-c
1-c3烷基，任选取代的-c
3-c6环烷基，任选取代的芳基，和任选取代的杂芳基。优选的，取代基的数目是0到3。
[0142]
在式(i)或者式(ia)所示化合物的某些实施方案中，b是选自下列基团，并且b是任选取代的：
[0143][0144]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物被表示为式(ia-1)：
[0145][0146]
其中，a，b，r1，r2，r4和x如之前的定义。
[0147]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物被表示为式(ia-2)：
[0148][0149]
其中，a，b，r1，r3，r4和x如之前的定义。
[0150]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物被表示为式(ia-3)：
[0151][0152]
其中，a，b，r1，r4和x如之前的定义。
[0153]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物被表示为式(i-1)：
[0154][0155]
其中，a，b，r1，r2和x如之前的定义。
[0156]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物被表示为式(i-2)：
[0157][0158]
其中，a，b，r1，r3和x如之前的定义。
[0159]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物被表示为式(i-3)：
[0160][0161]
其中，a，b，r1和x如之前的定义。
[0162]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物被表示为式(iia)：
[0163][0164]
其中，a，r1，r2，r3，r4和x如之前的定义，并且每个r9相互独立的选自：
[0165]
1)卤素；
[0166]
2)-cn；
[0167]
3)-or
13
；
[0168]
4)-sr
13
；
[0169]
5)-nr
13r14
；
[0170]
6)-oc(o)nr
13r14
；
[0171]
7)任选取代的-c
1-c6烷基；
[0172]
8)任选取代的-c
3-c8环烷基；
[0173]
9)任选取代的3-到8-元杂环烷基；
[0174]
10)任选取代的芳基；和
[0175]
11)任选取代的杂芳基；
[0176]
且n是0、1、2、3或者4。
[0177]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物被表示为式(ii)：
[0178][0179]
其中，a，r1，r2，r3和x如之前的定义，并且
[0180]
每个r9相互独立的选自：
[0181]
1)卤素；
[0182]
2)-cn；
[0183]
3)-or
13
；
[0184]
4)-sr
13
；
[0185]
5)-nr
13r14
；
[0186]
6)-oc(o)nr
13r14
；
[0187]
7)任选取代的-c
1-c6烷基；
[0188]
8)任选取代的-c
3-c8环烷基；
[0189]
9)任选取代的3-到8-元杂环烷基；
[0190]
10)任选取代的芳基；和
[0191]
11)任选取代的杂芳基；
[0192]
并且n是0，1，2，3或者4。
[0193]
在某些实施方案中，每个r9相互独立的选自氯、氟、甲氧基和三氟甲氧基。
[0194]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物被表示为式(iiia-1)：
[0195][0196]
其中，a，r1，r3，r4，r9，n和x如之前的定义。
[0197]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物被表示为式(iiia-2)：
[0198][0199]
其中，a，r1，r2，r4，r9，n和x如之前的定义。
[0200]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物被表示为式(iii)：
[0201][0202]
其中，a，r1，r2，r9，n和x如之前的定义。
[0203]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(iva-1)到(iva-6)中任意一个所表示：
[0204]
[0205]
其中，a，b，r1，r2，r3，r4，r
13
和r
14
如之前的定义。
[0206]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物由式(iv-1)到(iv-6)中任意一个所表示：
[0207][0208]
其中，a，b，r1，r2，r3，r
13
和r
14
如之前的定义。
[0209]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(va-1)到(va-6)中任意一个所表示：
[0210][0211]
其中，a，r1，r2，r3，r4，r9，r
13
，r
14
和n如之前的定义。
[0212]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物由式(v-1)到(v-6)中任意一个所表示：
[0213][0214]
其中，a，r1，r2，r3，r9，r
13
，r
14
和n如之前的定义。
[0215]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(via-1)到(via-6)中任意一个所表示：
[0216][0217]
，其中，a，r1，r3，r4，r9，r
13
，r
14
和n如之前的定义。
[0218]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物由式(vi-1)到(vi-6)中任意一个所表示：
[0219][0220]
其中，a，r1，r3，r9，r
13
，r
14
和n如之前的定义。
[0221]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物由式(vii-1)到(vii-5)中任意一个所表示：
[0222][0223]
其中，a，r1，r3,和x如之前的定义。优选的，a选自以下：
[0224]
r1选自以下：
[0225]
[0226]
且x选自以下：
[0227][0228]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物由式(vii-6)到(vii-9)中任意一个所表示：
[0229][0230]
其中，a,r1,r3,r9和x如之前的定义。优选的，a选自以下：
[0231]
r1选自以下：
[0232][0233]
并且x选自以下：
[0234]
[0235]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物由式(vii-1a)到(vii-5a)中任意一个所表示：
[0236][0237]
其中，a，r1，r3,和x如之前的定义。优选的，a选自以下：
[0238]
r1选自以下：
[0239][0240]
并且，x选自以下：
[0241][0242]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物由式(vii-6a)到(vii-9a)中任意一个所表示：
[0243][0244]
其中，a，r1，r3,r9和x如之前的定义。优选的，a选自以下：
[0245][0246]
r1选自以下：
[0247][0248]
并且x选自以下：
[0249][0250]
在某些实施方案中，式(i)所示化合物由式(vii-1)到(vii-9)和式(vii-1a)到(vii-9a)中任意一个所表示，其中，a选自，以下：
[0251][0252]
，x选自以下：
[0253][0254]
并且r1选自以下：
[0255][0256]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(viii-1)到(viii-5)中任意一个所表示：
[0257][0258]
其中，a，x，r1，r3，r4,和r9如之前的定义。
[0259]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(viii-1a)到(viii-5a)中任意一个所表示：
[0260][0261]
其中，a、r1，r3和r9如之前的定义。
[0262]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(ix-1)到(ix-5)中任意一个所表示：
[0263][0264]
其中，a，x，r1，r3，r4,和r9如之前的定义。
[0265]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(ix-1a)到(ix-5a)
[0266]
中任意一个所表示：
[0267][0268]
其中，a,r1,r3,和r9如之前的定义。
[0269]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(viii-1)到(viii-5)和式(ix-1)到(ix-5)中任意一项所表示，其中，r3是氢，-me，-et，-pr，-i-pr，-烯丙基，-cf3，-cd3或者环丙基；r4是氢，-me，-et，-pr，-i-pr，-烯丙基，-cf3或者环丙基；r9是卤素，-och3，-nh2，-ch3或者-cf3；a选自以下：
[0270][0271]
x选自以下：
[0272][0273]
并且r1选自以下：
[0274][0275]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(x-1)到(x-3)中任意一项所表示：
[0276]
[0277]
其中，m是0，1，2，3，4或者5；v是0，1或者2；r
10
是任选取代的-c
1-c4烷基或者
[0278]
任选取代的-c
3-c6环烷基；x，r1，r3，r4，r9和n如之前的定义。
[0279]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xi-1)到(xi-3)所示的任意一项所表示：
[0280][0281]
其中，r1，r3，r4，r9，r
10
，m，n和v如之前的定义。
[0282]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xi-1a)到(xi-3a)所示的任意一项所表示：
[0283][0284]
其中，r1,r3,r9,r
10
,m,n,和v如之前的定义。
[0285]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xi-1b)到(xi-3b)所示的任意一项所表示：
[0286][0287]
其中，r1,r3,r9,r
10
,m,n和v如之前的定义。
[0288]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xii-1)到(xii-6)所示的任意一项所表示：
[0289][0290]
其中，其中，r1，r4，r9，r
10
，m，n,和v如之前的定义。
[0291]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xii-1a)到(xii-6a)所示的任意一项所表示：
[0292][0293]
其中，r1,r9,r
10
,m,n和v如之前的定义。
[0294]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xii-1b)到(xii-6b)所示的任意一项所表示：
[0295][0296]
其中，r1,r9,r
10
,m,n和v如之前的定义。
[0297]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xii-1c)到(xii-6c)所示的任意一项所表示：
[0298][0299]
其中，r1,r9,r
10
,m,n和v如之前的定义。
[0300]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xii-1c)到(xii-6d)所示的任意一项所表示：
[0301][0302]
其中，r1,r9,r
10
,m,n和v如之前的定义。
[0303]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xiii-1)到(xiii-6)所示的任意一项所表示：
[0304][0305]
其中，r4，r9，r
10
，m，n,和v如之前的定义。
[0306]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xiii-1a)到(xiii-6a)所示的任意一
项所表示：
[0307][0308]
其中，r9,r
10
,m,n和v如之前的定义。
[0309]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xiv-1)到(xiv-6)所示的任意一项所表示：
[0310][0311]
其中，r4，r9，r
10
，m，n,和v如之前的定义。
[0312]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xiv-1a)到(xiv-6a)所示的任意一项所表示：
[0313][0314]
其中，r9,r
10
,m,n,和v如之前的定义。
[0315]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xv)所表示：
[0316][0317]
其中，a,r1,r4,r9,n和x如之前的定义。
[0318]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xvi-1)到(xvi-3)所示的任意一项所表示：
[0319][0320]
其中，r1,r4,r9,r
10
,m,n和v如之前的定义。
[0321]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xvii-1)到(xvii-3)所示的任意一项所表示：
[0322][0323]
其中，r9,r
10
,m,n和v如之前的定义。
[0324]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xviii-1)到(xviii-2)所示的任意一项所表示：
[0325][0326]
其中，一个u是n或者nr
13
,另一个u是n,nr
13
,或者cr
13
,另一个u是n,nr
13
,、或者cr
13
,并且第四个u是o,s,n,nr
13
,或者cr
13
；每个v相互独立的是cr
13
或者n；并且r1,r3,r4,r9,n和x如之前的定义。
[0327]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xix-1)到(xix-9)所示的任意一项所表示：
[0328][0329]
，其中，r1,r3,r4,r9,n和x如之前的定义。
[0330]
在某些实施方案中，式(ia)所示化合物由式(xx-1)到(xx-9)所示的任意一项所表示：
2-丁烯-2-基、庚烯基、辛烯基等等。
[0341]
如这里所使用的术语“炔基”指的是一种通过移除一个氢原子衍生的具有至少一个碳-碳三键的直链的或者支链的碳氢基团。“c
2-c8炔基”、“c
2-c
12
炔基”、“c
2-c4炔基”、“c
3-c4炔基”或者“c
3-c6炔基”分别指的是由两个到八个、两个到十二个、两个到四个、三个到四个或者三个到六个碳原子组成的炔基基团。代表性的炔基基团包括但不限于(例如)乙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基、庚炔基、辛炔基等等。
[0342]
如这里所使用的术语“环烷基”指的是，表示的是单环或者多环的饱和的碳环化合物，或者双环或者三环融合基团、桥连基团或者螺旋系统，并且所述碳原子可以选择性的被氧取代、或者任选的被外源环烯烃双键所任选取代。优选的环烷基基团包括c
3-c
12
环烷基，c
3-c6环烷基，c
3-c8环烷基和c
4-c7环烷基.并且c
3-c
12
环烷基的例子包括，但不局限于，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环戊基、环辛基、4-亚甲基环己基、双环[2.2.1]庚基，双环[3.1.0]己烯，螺旋[2.5]辛基，3-亚甲基双环[3.2.1]辛基，螺旋[4.4]壬基，等等。
[0343]
如这里所使用的术语“环烯基”指的是来自于单环或者多环碳环化合物的、或者双环或者三环融合基团、桥连基团或者螺旋系统，并且具有至少一条碳-碳双键的基团，并且其中碳原子可以选择性的被氧取代，或者任选的被外源环烯烃双键所任选取代。优选的环烯基基团包括c
3-c
12
环烯基，c
3-c8环烯基或者c
5-c7环烯基基团。c
3-c
12
环烯基的实施例包括，但是不局限于环丙烯基，环丁烯基，环戊烯基，环己烯基，环庚烯基，环辛烯基，双环[2.2.1]庚-2-烯基，双环[3.1.0]己-2-烯基，螺旋[2.5]辛-4-烯基，螺旋[4.4]壬-2-烯基，双环[4.2.1]壬-3-烯-12-基，等等。
[0344]
如这里所使用的术语“芳基烷基”指的是一种功能性基团，其中亚烷基链与芳基基团相附着，例如，-ch2ch
2-苯基。术语“取代的芳基烷基”指的是芳基烷基功能性基团，其中，芳基基团被取代。相似的，术语“杂芳基烷基”指的是一种功能性基团，其中，亚烷基链与杂芳基基团相附着。术语“取代的杂芳基烷基”指的是杂芳基烷基功能性基团，其中，所述杂芳基基团被取代。优选的，如这里所使用的，芳基烷基是芳基
–c1-c6烷基,和杂芳基烷基是杂芳基
–c1-c6烷基。
[0345]
如这里所使用的，术语“烷氧基”，当单独使用或者与其他术语结合使用时，除非另有指明，指的是一种具有指定碳原子数的烷基基团，其通过氧原子与该分子的剩余部分相连，例如，甲氧基、乙氧基、2-丙氧基、2-丙氧基(异丙氧基)和高级类似物及异构体。优选的烷氧基是(c
2-c3)烷氧基。
[0346]
应该理解的是，本文所描述的任何烷基，烯基，炔基，环烷基，杂环基和环烯基基团也可以是脂肪族基团或者脂环族基团。
[0347]“脂肪族”基团是一种非芳香族基团，可以包含碳原子、氢原子、卤素原子、氧、氮或其他原子的任意组合，并且任选地含有一个或多个不饱和单元，例如双链和/或三键。脂肪族基团的实施例是功能性基团，例如，烷基，烯基，炔基，o，oh，nh，nh2，c(o)，s(o)2，c(o)o，c(o)nh，oc(o)o，oc(o)nh，oc(o)nh2，s(o)2nh，s(o)2nh2，nhc(o)nh2，nhc(o)c(o)nh，nhs(o)2nh，nhs(o)2nh2，c(o)nhs(o)2，c(o)nhs(o)2nh或者c(o)nhs(o)2nh2，等等，包括一个或者一个以上功能性基团、非芳香族碳氢基团(任选取代的)的基团，以及某些其他基团，在其中，非芳香族碳氢基团(任选取代的)中一个或者一个以上的碳原子被功能性基团所取代。脂肪族基团的碳原子可以是任选氧取代的。脂肪族基团可以是直链的、支链的或环状的，或者是
其结合，并且优选的含有约1至约24个碳原子，更典型地含有约1至约12个碳原子。除了脂肪族烃基之外，例如这里所使用的，脂肪族基团还包括，例如，烷氧基烷基、聚烷氧基烷基，例如，聚亚烷基醇、聚胺和聚亚胺，例如，这样的脂族基团可以被进一步被任选取代。
[0348]
所述术语“杂环烷基”以及“杂环”可以相互替换使用，并且指的是一个非芳香族环或者一种双环基团或者三环基团的稠和(fused)、螺旋(spiro)或者侨联系统，其中(i)每个环含有至少1个杂原子，分别独立的选自氧，硫以及氮；(ii)每个环系统可以是饱和的或者不饱和的，(iii)所述的氮杂原子以及硫杂原子可以被任选氧化，(iv)所述的氮杂原子可以任选地被季铵化，(v)上述环中的任意一个可以与一个苯环发生稠和，和(vi)剩余的环原子是碳原子，这些碳原子可以任选的被氧取代或者被外源环烯烃双键任选取代。代表性的杂环烷基基团包括，但不局限于，[1，3]二氧戊环，吡咯烷基，吡唑啉基，吡唑烷基，咪唑啉基，咪唑烷基，哌啶基，哌嗪基，唑烷基，异唑烷基，吗啉基，噻唑基，异噻唑基，喹喔啉基，哒嗪基、2-氮杂双环[2.2.1]-庚烯，8-氮杂双环[3.2.1]辛基，5-氮杂螺旋[2.5]辛基，2-氧杂-7-氮杂螺旋[4.4]壬基，7-氧己内酯-4-基和四氢呋喃。这些杂环基团可以进一步的被取代。杂芳基或者杂环基基团可以是c-附着的或者n-附着的(可能的地方)。
[0349]
可以理解的是，这里描述的所有烷基，烯基，炔基，脂环基，环烷基，环烯基，芳基，杂芳基，杂环基，脂肪族部分等等当用作连接体连接两个或者多个基团或者取代基(可以是相同的或者不同的)时，可以是二价的或者多价基团。本领域普通技术人员容易地从它发生的上下文中确定任何这样的基团的化合价。
[0350]
本文所用的术语“取代的”是指其上的1个、2个或3个或更多个氢原子独立地被下列取代基替代，所述取代基包括但不限于：-f，-cl，-br，-i，-oh，c
1-c
12-烷基；c
2-c
12-烯基，c
2-c
12-炔基，-c
3-c
12-环烷基，保护的羟基，-no2，-n3，-cn，-nh2，保护的氨基，氧，硫基，-nh-c
1-c
12-烷基，-nh-c
2-c
8-烯基，-nh-c
2-c
8-炔基，-nh-c
3-c
12-环烷基，-nh-芳基，-nh-杂芳基，-nh-杂环烷基，-二烷基氨基，-二芳基氨基，-二杂芳基氨基，-o-c
1-c
12-烷基，-o-c
2-c
8-烯基，-o-c
2-c
8-炔基，-o-c
3-c
12-环烷基，-o-芳基，-o-杂芳基，-o-杂环烷基，-c(o)-c
1-c
12-烷基，-c(o)-c
2-c
8-烯基，-c(o)-c
2-c
8-炔基，-c(o)-c
3-c
12-环烷基，-c(o)-芳基，-c(o)-杂芳基，-c(o)-杂环烷基，-conh2，-conh-c
1-c
12-烷基，-conh-c
2-c
8-烯基，-conh-c
2-c
8-炔基，-conh-c
3-c
12-环烷基，-conh-芳基，-conh-杂芳基，-conh-杂环烷基，-oco
2-c
1-c
12-烷基，-oco
2-c
2-c
8-烯基，-oco
2-c
2-c
8-炔基，-oco
2-c
3-c
12-环烷基，-oco
2-芳基，-oco
2-杂芳基，-oco
2-杂环烷基，-co
2-c
1-c
12
烷基，-co
2-c
2-c8烯基，-co
2-c
2-c8炔基，co
2-c
3-c
12-环烷基，-co
2-芳基，co
2-杂芳基，co
2-杂环烷基，-oconh2，-oconh-c1c
12-烷基，-oconh-c
2-c
8-烯基，-oconh-c
2-c
8-炔基，-oconh-c
3-c
12-环烷基，-oconh-芳基，-oconh-杂芳基，-oconh-杂环-烷基，-nhc(o)h，-nhc(o)-c
1-c
12-烷基，-nhc(o)-c
2-c
8-烯基，-nhc(o)-c
2-c
8-炔基，-nhc(o)-c
3-c
12-环烷基，-nhc(o)-芳基，-nhc(o)-杂芳基，-nhc(o)-杂环-烷基，-nhco
2-c
1-c
12-烷基，-nhco
2-c
2-c
8-烯基，-nhco
2-c
2-c
8-炔基，-nhco
2-c
3-c
12-环烷基，-nhco
2-芳基，-nhco
2-杂芳基，-nhco
2-杂环烷基，-nhc(o)nh2，-nhc(o)nh-c
1-c
12-烷基，-nhc(o)nh-c
2-c
8-烯基，-nhc(o)nh-c
2-c
8-炔基，-nhc(o)nh-c
3-c
12-环烷基，-nhc(o)nh-芳基，-nhc(o)nh-杂芳基，-nhc(o)nh-杂环烷基，nhc(s)nh2，-nhc(s)nh-c
1-c
12-烷基，-nhc(s)nh-c
2-c
8-烯基，-nhc(s)nh-c
2-c
8-炔基，-nhc(s)nh-c
3-c
12-环烷基，-nhc(s)nh-芳基，-nhc(s)nh-杂芳基，-nhc(s)nh-杂环烷基，-nhc(nh)nh2，-nhc(nh)nh-c
1-c
12-烷基，-nhc(nh)nh-c
2-c
8-烯基，-nhc(nh)nh-c
2-c
8-炔
基，-nhc(nh)nh-c
3-c
12-环烷基，-nhc(nh)nh-芳基，-nhc(nh)nh-杂芳基，-nhc(nh)nh-杂环烷基，-nhc(nh)-c
1-c
12-烷基，-nhc(nh)-c
2-c
8-烯基，-nhc(nh)-c
2-c
8-炔基，-nhc(nh)-c
3-c
12-环烷基，-nhc(nh)-芳基，-nhc(nh)-杂芳基，-nhc(nh)-杂环烷基，-c(nh)nh-c
1-c
12-烷基，-c(nh)nh-c
2-c
8-烯基，-c(nh)nh-c
2-c
8-炔基，-c(nh)nh-c
3-c
12-环烷基，-c(nh)nh-芳基，-c(nh)nh-杂芳基，-c(nh)nh-杂环烷基，-s(o)-c
1-c
12-烷基，-s(o)-c
2-c
8-烯基，-s(o)-c
2-c
8-炔基，-s(o)-c
3-c
12-环烷基，-s(o)-芳基，-s(o)-杂芳基，-s(o)-杂环烷基，-so2nh2，-so2nh-c
1-c
12-烷基，-so2nh-c
2-c
8-烯基，-so2nh-c
2-c
8-炔基，-so2nh-c
3-c
12-环烷基，-so2nh-芳基，-so2nh-杂芳基，-so2nh-杂环烷基，-nhso
2-c
1-c
12-烷基，-nhso
2-c
2-c
8-烯基，-nhso
2-c
2-c
8-炔基，-nhso
2-c
3-c
12-环烷基，-nhso
2-芳基，-nhso
2-杂芳基，-nhso
2-杂环烷基，-ch2nh2，-ch2so2ch3，-芳基，-芳基烷基，-杂芳基，-杂芳基烷基，-杂环烷基，-c
3-c
12-环烷基，聚烷氧基烷基，聚烷氧基，-甲氧基甲氧基，-甲氧基乙氧基，-sh，-s-c
1-c
12-烷基，-s-c
2-c
8-烯基，-s-c
2-c
8-炔基，-s-c
3-c
12-环烷基，-s-芳基，-s-杂芳基，-s-杂环烷基，或者甲基硫基-甲基。在某些实施方案中，所述取代基相互独立的选自卤素，优选的cl和f；c
1-c
4-烷基，优选的是甲基和乙基；卤代-c
1-c
4-烷基，例如氟代甲基，二氟代甲基,和三氟代甲基；c
2-c
4-烯基；卤代-c
2-c
4-烯基；c
3-c
6-环烷基，例如环丙基；c
1-c
4-烷氧基，例如甲氧基和乙氧基；卤代-c
1-c
4-烷氧基，例如氟代甲氧基，二氟代甲氧基和三氟代甲氧基；酰基；-cn；-oh；nh2；c
1-c
4-烷基氨基；二(c
1-c
4-烷基)氨基；和no2。应了解，芳基、杂芳基、烷基等等可被进一步取代。在一些情形下，被取代部分的每一取代基另外任选地被一个或多个基团取代，每一基团独立地选自c
1-c
4-烷基；-cf3，-och3，-ocf3，-f，-cl，-br，-i，-oh，-no2，-cn,和-nh2.优选的，取代的烷基基团可进一步被一个或者一个以上卤素原子取代，更优选的，一个或者一个以上氟原子或者氯原子所取代。
[0351]
术语“卤代”或者“卤素”，单独或者作为其它取代基的一部分时，如这里所使用的，指的是氟、氯、溴、或者碘原子。优选的卤素是氟、氯和溴。
[0352]
这里所使用的术语“任选取代的”，意味着所涉及的基团可以被取代或未取代。在一个实施方案中，所涉及的基团被零取代基选择性取代，例如，所涉及的基团未被取代。在另一个实施方案中，所涉及的基团被一个或多个其他基团所取代，所述其他基团单独并独立地从本文所描述的基团中选择。
[0353]
术语“氢”包括氢和氘。此外，该分子的描述包括该分子的同位素，只要所得化合物是药学上可接受的即可。
[0354]
如这里所使用的术语“羟基活化基团”是指一种本领域已知的不稳定化学基团，其可活化羟基以使其在合成过程期间(例如在取代或消除反应中)脱除。羟基活化基团的实例包括，但不限于，甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基、三氟甲磺酸酯基、对-硝基苯甲酸酯基、膦酸酯基等等。
[0355]
如这里所使用的术语“被活化的羟基”是指被如上文所定义的羟基活化基团活化的羟基，例如，该羟基活化基团包括甲磺酸酯基、甲苯磺酸酯基、三氟甲磺酸酯基、对-硝基苯甲酸酯基、膦酸酯基。
[0356]
如这里所使用的术语“羟基保护基团”是指本领域已知的不稳定化学集团，其可在合成过程期间保护羟基免于不期望反应。在所述的合成程序后，可选择性移除如本文所述的羟基保护基团。本领域已知的羟基保护基团概述于t.h.greene和p.g.，s.m.wuts，
protective groups in organic synthesis，第三版，john wiley&sons，new york(1999)中。羟基保护基团的实例包括苄基氧基羰基、4-甲氧基苯甲基氧基羰基，叔丁氧基-羰基，异丙基氧基羰基，二苯基甲氧基羰基，2,2,2-三氯乙氧基羰基，烯丙基氧基羰基，乙酰基，甲酰基，氯代乙酰基，三氟代酰基，甲氧基酰基，苯氧基酰基，苯甲酰基，甲基，叔丁基，2,2,2-三氯乙基，2-三甲基硅甲烷基乙基，烯丙基，苯甲基，三苯基-甲基(trityl)，甲氧基甲基，甲基硫基甲基，苯甲基氧基甲基，2-(三甲基甲硅烷基)-乙氧基甲基，甲磺酰基，三甲基甲硅烷基，三异丙基甲硅烷基，等等。
[0357]
如这里所使用的术语“被保护的羟基”是指受如上文所定义的羟基保护基团保护的羟基，该羟基保护基团包括苯甲酰基、乙酰基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、甲氧基甲基。
[0358]
本文所用的术语“羟基前体药物基团”是指在本领域中已知的能够通过覆盖或掩蔽羟基改变母体药物的物理化学性质，从而以瞬时方式改变其生物学特性的促进基团。在所述合成步骤之后，如本文所述的羟基前体药物基团必须能够在体内恢复到羟基。本领域内已知的羟基前体药物基团主要被描述在kenneth b.sloan,prodrugs,topical and ocular drug delivery,(drugs and the pharmaceutical sciences；volume 53),marcel dekker,inc.,new york(1992)中。
[0359]
如这里所使用的术语“氨基保护基团”是指本领域已知的可在合成过程期间保护氨基免于不期望反应的不稳定化学部分。在所述的合成程序后，可选择性移除如本文所述的氨基保护基团。本领域已知的氨基保护基团主要被描述在t.h.greene和p.g.m.wuts，protective groups in organic synthesis，第三版，john wiley&sons，new york(1999)中。氨基保护基团的实例包括，但不限于，甲氧基羰基、叔丁氧基羰基、12-芴基甲氧基羰基、苄基氧基羰基等等。
[0360]
如这里所使用的术语“被保护的氨基”指的是被如上定义的氨基保护基团所保护的氨基基团。
[0361]
术语“离去基团”是指在取代反应(如亲核取代反应)中可被另一功能性基团或原子取代的功能性基团或原子。举例来说，代表性的离去基团包括氯、溴和碘基团；磺酸酯基团，例如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、溴溴酸盐、诺赛特等；以及酰基氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等
[0362]
这里所使用的所述术语“疏质子溶剂”指的是对质子的活性具有相对惰性的溶剂，即，没有质子供体活性。例子包括，但不局限于，碳氢化合物，例如己烷和甲苯，例如，卤素碳氢化合物，例如，比方说，亚甲基氯、亚乙基氯，氯仿等等；杂环化合物，例如，比分说，四氢呋喃和n-甲基吡咯烷酮，和乙醚例如二乙基乙醚，双-甲氧基甲基乙醚。这类溶剂是本领域技术人员熟知的，并且对于具体化合物以及反应条件而言，单独的溶剂或者所述溶剂的混合物可能是优选的，这取决于下列因素，例如试剂的溶解性，试剂的反应性以及优选的温度范围。对于疏质子溶剂的进一步探讨可以在organic chemistry textbooks(有机化学手册)或者专题论著中找到，例如：由john a.riddick等人编辑的organic solvents physical properties and methods of purification(有机溶剂的物理性质以及纯化方法)，第四版，第ii卷，techniques of chemistry series(化学技术丛书)，john wiley&sons，纽约，1986年
[0363]
这里所使用的所述术语“给质子有机溶剂”或者“给质子溶剂”指的是趋向于提供质子的溶剂，例如一种醇，例如，甲醇，乙醇，丙醇，异丙醇，丁醇，叔丁醇，以及类似的醇类。这类溶剂是本领域技术人员熟知的，并且对于具体化合物以及反应条件而言，单独的溶剂或者所述溶剂的混合物可能是优选的，这取决于下列因素，例如试剂的溶解性，试剂的反应性以及优选的温度范围。对于给质子溶剂的进一步探讨可以在organic chemistry textbooks(有机化学手册)或者专题论著中找到，例如：由john a.riddick等人编辑的organic solvents physical properties and methods of purification(有机溶剂的物理性质以及纯化方法)，第四版，第ii卷，techniques of chemistry series(化学技术丛书)，john wiley&sons，纽约，1986年。
[0364]
本发明仅包括那些能够得到稳定化合物形式的取代基和变体组合。本文使用的术语“稳定”是指所述化合物具有足以允许工业制造的稳定性并在足够长的时间内保持化合物的完整性，从而能有效用于这里描述的本发明的目的(例如，治疗性或者对受试者进行预防性给药)。
[0365]
可从反应混合物中分离所合成的化合物并通过分离方法进一步纯化，所述分离方法例如，柱色谱法、高压液相色谱法或者再结晶等等。如本领域技术人员可以理解的，合成本文各个化学式所示化合物的进一步方法对于本领域普通技术人员将是显而易见的。此外，各种合成步骤可以交替顺序执行或者以得到所需的化合物。如这里所描述的，能够有效合成这里所述化合物的化学转化和保护基团方法(保护和去保护作用)是本领域已知的，例如，那些描述于r.larock,comprehensive organic transformations(综合有机转化法)，vch出版社(1989年)；t.w.greene与p.g.m.wuts,protective groups in organic synthesis(有机合成中的保护基团)，第二版，johns wiley&sons(1991年)；l.fieser与m.fieser,fieser and fieser's reagents for organic synthesis(费舍尔以及用于有机合成中的费舍尔试剂)，johns wiley&sons(1994年)；以及l.paquette编辑的encyclopedia of reagents for organic synthesis(有机合成试剂百科全书)，johns wiley&sons(1995年)以及相关的出版物中的方法。
[0366]
这里所使用的所述术语“主体”指的是动物，优选的，所述动物是哺乳动物。更优选的，所述哺乳动物是人。主体还可以指的是，例如，狗，猫，马，牛，猪，豚鼠，鱼、鸟等等。
[0367]
本发明的化合物可以通过添加适当的官能团来修饰，以增强选择性生物性质。此类修饰在本领域中是已知的，并且可以包括增加生物渗透到特定生物系统(如血液、淋巴系统、中枢神经系统)、增加口服利用率、增加溶解度以允许通过注射给药、改变代谢的药物和改变排泄率等功能。
[0368]
这里所描述的化合物含有一个或者多个对称中心，并且因此形成了对映异构体、非对映异构体、以及其他立体异构形式，依照绝对立体化学(absolute stereochemistry)，可以使用(r)-或者(s)-、或者使用(d)-或者(l)-来表示氨基酸。本发明意在包括所有这类可能的异构体，以及它们的外消旋形式以及光学纯净形式。光学异构体可以通过它们各自的光学活性前体利用如上所述的步骤进行制备，或者通过解析所述外消旋混合物的步骤进行制备。所述的解析反应可以在解析制剂的存在下进行，通过色谱技术或者反复结晶技术或者通过这些技术的某种组合，这些技术是本领域熟练技术人员已知的。关于解析反应的进一步的细节可以在jacques等人的enantiomers，racemates，and resulutions(对映异构
体，外消旋体，以及解析反应)(john wiley&sons，1981年)中找到。当本发明所述化合物含有烯族双键或者其他几何对称中心时，并且除非特别指明，其意在表示所述化合物包括e几何异构体以及z几何异构体。同样的，所有的互变异构体形式也都意在被包括在内。所述互变异构体可以是环状的或者非环状的。对这里所出现的任何碳-碳双键的构型的选择仅仅是为了方便，并不意在指定特定的构型，除非文中特别指明；因此在本发明被随意描述为反式(trans)的碳-碳双键可以是顺式(cis)，反式，或者是以任意比例存在的上述两种构型的混合。
[0369]
本发明的某些化合物也可以以不同的稳定构象形式存在，它们是可分离的。由于不对称的单键，例如由于空间位阻或环应变而受到限制的扭转不对称，可能允许不同构象的分离。本发明包括这些化合物和它们的混合物的每个构象异构体。
[0370]
这里所使用的所述术语“药物可接受性盐类”指的是由本发明所述的方法所制成的所述化合物的盐类，所述的盐类在合理的医学判断(sound medical judgment)的范围之内，适合用于与人类组织以及低等动物的组织发生接触，不会产生不适当的毒性、刺激性、变态反应以及类似情形，并且具有合理的利益/风险比。药物可接受性盐类是本领域熟知的。例如，s.m.berge等人在j.pharmaceutical sciences，66：2-19(1977)中详细阐述了药学上可接受的盐。所述盐可在本发明化合物的最后分离和纯化期间原位制备，或通过使游离碱官能团与适宜的有机酸反应单独制备。药学上可接受的盐的实例包括(但不限于)无毒酸加成盐，例如，氨基与无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，或有机酸例如乙酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸形成的盐；或者通过使用本领域使用的其它方法例如离子交换法形成的盐。其它药学上可接受的盐包括，但不限于，己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对-甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等等。代表性的碱或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等等。其它药学上可接受的盐包括(如果适宜)使用抗衡离子(例如卤素离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、具有1个至6个碳原子的烷基磺酸根和芳基磺酸根)形成的无毒的铵、季铵和胺阳离子。
[0371]
在某些实施方案中，本发明提供了这里所描述的化合物的药学上可接受的酯。当在本发明中被进行使用时，所述的术语“药学上可接受的酯”指的是能够在体内发生水解的酯类并且包括那些在人体的机体内很容易发生分解从而与所述的母本化合物或者所述化合物的盐发生分离的酯类。适当的酯类基团包括，例如，那些来自于药物学可接受性的脂肪族羧酸，特别是链烷酸、链烯酸、环链烷酸以及链烷二羧酸的酯类基团，其中每个烷基或者烯基半族有利的具有不多于6个碳原子。具体的酯类的例子包括，但不局限于，甲酸酯，乙酸酯，丙酸酯，丁酸酯，丙烯酸酯以及乙基琥珀酸酯。
[0372]
药物组合物
[0373]
本发明所述的药物组合物包括治疗有效剂量的本发明所述化合物，以及与所述化
合物一同配制的一种或者多种药物可接受性载体。
[0374]
这里所使用的所述术语“药物可接受性载体”指的是无毒的、惰性固体、半固体或者液体填充剂、稀释剂、胶囊材料或者任何类型的配制助剂。可以作为药物可接受性载体材料的一些例子是糖类例如乳糖，葡萄糖以及蔗糖；淀粉类例如玉米淀粉以及马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物类例如羧甲基纤维素钠，乙基纤维素以及醋酸纤维素；粉末状黄芪胶；麦芽；凝胶；滑石；赋形剂例如可可油以及栓蜡；油类例如花生油；棉花籽油；红花油；芝麻油；橄榄油；玉米油以及大豆油；乙二醇类，例如丙二醇；酯类例如油酸乙酯以及月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂例如氢氧化镁以及氢氧化铝；褐藻酸；不含热原的水；等压生理盐水；罗格氏溶液；乙醇，以及磷酸缓冲溶液，以及其他无毒的相容性润滑剂例如十二烷硫酸钠以及硬脂酸镁，以及着色剂，释放剂，涂覆剂，甜味剂，风味剂以及香味剂，依照配方设计者的判断，防腐剂以及抗氧化剂也可以出现在所述化合物中。
[0375]
本发明所述药物组合物可以经由口服形式、肠胃外形式、吸入式喷雾形式、局部形式、直肠形式、鼻内形式、口腔形式、阴道内形式或者经由植入囊(implanted reservoir)的形式进行施用，优选通过口服形式或者注射形式进行施用。本发明所述药物组合物可以包含任意常规的无毒的药物可接受性载体，佐剂或者溶媒。在某些情况中，可以使用药物可接受性酸、碱或者缓冲剂对所述配方的ph进行调整，从而加强配方化合物的稳定性或者所述化合物的释放形式的稳定性。这里所使用的所述术语肠胃外包括皮下，皮内，静脉内，肌肉内，关节内，动脉内，滑膜内，胸骨内，鞘内，病灶内以及颅骨内注射或者输液技术。
[0376]
口服给药的液体制剂形式包括药物可接受性乳状液，微乳液，溶液，悬浮液，糖浆以及酏剂。除了上述活性化合物之外，所述的液体制剂形式可以包含本领域普遍使用的惰性稀释剂，例如，水或者其他溶剂，增溶剂以及乳化剂例如乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1，3-丁二醇，二甲基甲酰胺，油类(特别是，棉花籽油，落花生油，玉米油，胚芽油，橄榄油，蓖麻油，以及芝麻油)，甘油，四氢糠醇，聚乙二醇以及山梨聚糖脂肪酸酯，以及上述物质的混合物。除了惰性稀释剂，所述的口服组合物还可以包括佐剂例如润湿剂，乳化剂以及悬浮剂，甜味剂，风味剂，以及香味剂。
[0377]
根据已知的技术，使用适当的分散剂或者润湿剂以及悬浮剂可以配制可注射制品，例如，无菌注射水性悬浮液或者油质悬浮液。所述的无菌注射制品还可以是一种无菌注射溶液、悬浮液或者乳状液，其存在于无毒的肠胃外可接受性稀释剂或者溶剂之中，例如，存在于1，3-丁二醇中的溶液。在这些可接受性溶媒以及溶剂当中可以使用的是水，罗格氏溶液，u.s.p.以及等压氯化钠溶液。除此之外，无菌的不挥发性油类通常被用作溶剂或者悬浮介质。对于此种目的，可以使用任意温和的不挥发性油包括合成的单甘油酯或者甘油二酯。除此之外，脂肪酸例如油酸也被用在上述的可注射制品当中。
[0378]
所述的可注射制剂可以通过例如下述方法进行灭菌：经过一个截留细菌的过滤器进行过滤，或者导入以无菌固体组合物的形式存在的灭菌剂，其中所述灭菌剂在使用之前可以被溶解或者分散在无菌水或者其他无菌可注射介质中。
[0379]
为了延长药物的作用，通常期望减慢来自于皮下注射或者肌肉内注射中的药物的吸收。这可以通过使用具有差的水溶性的晶体材料或者无定形材料的液体悬浮液来完成。那么所述药物的吸收速率取决于其分解速率，所述分解速率又可能取决于结晶大小以及晶体形式。或者，通过将所述药物分解于或者悬浮于一种油溶媒之中，从而以达到肠胃外形式
给药的药物的延缓吸收。通过在生物可降解聚合物中形成所述药物的微胶囊基质，可以制造可注射形式的载体，所述聚合物是例如聚交酯-聚乙醇酸。根据药物与聚合物的比例以及所使用的具体聚合物的性质，可以控制所述药物的释放速率。其他生物可降解性聚合物的例子包括聚酯碳酸酯以及聚酸酐。载体可注射性制剂也可以通过将所述药物包裹在脂质体或者微乳液中的方法进行制备，其中所述的脂质体或者微乳液是能够与机体组织相容的。
[0380]
用于直肠给药或者阴道给药的组合物优选是栓剂，可以通过将本发明所述化合物与适当的无刺激性赋形剂或者载体进行混合的方法进行制备，其中所述的无刺激性赋形剂或者载体是例如可可油，聚乙二醇或者栓蜡，上述物质在环境温度下呈固体，但是在机体温度下呈液体并且因此在直肠腔内或者阴道腔内溶化并且释放所述的活性化合物。
[0381]
口服给药的固体制剂形式包括胶囊，片剂，丸剂，粉末，以及颗粒。在这些固体制剂形式中，所述活性化合物与至少一种惰性的药物可接受性赋形剂或者载体进行混合，所述惰性的药物可接受性赋形剂或者载体是例如柠檬酸钠或者磷酸氢钙和/或：a)填充剂或者膨胀剂例如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露醇，以及硅酸，b)粘合剂例如，羧甲基纤维素，藻酸盐，凝胶，聚乙烯吡咯啉酮，蔗糖，以及阿拉伯树胶，c)湿润剂例如甘油，d)分解剂例如琼脂-琼脂，碳酸钙，马铃薯淀粉或者木薯淀粉，褐藻酸，某些硅酸盐，以及碳酸钠，e)溶解阻滞剂例如石蜡，f)吸收加速剂例如季铵类化合物，g)润湿剂例如，鲸蜡醇以及硬脂酸单甘油酯，h)吸收剂例如高岭土以及斑脱土粘土，以及i)润滑剂例如滑石，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固体聚乙二醇，十二烷基硫酸钠，以及上述物质的混合物。当为胶囊、片剂以及丸剂形式时，所述制剂形式还可以包括缓冲剂。
[0382]
也可以使用一种相似类型的固体组合物，作为填充剂填充至软填充以及硬填充凝胶胶囊中，上述填充使用到赋形剂例如乳糖(lactose)或者乳糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇以及类似物质。
[0383]
所述活性化合物还可以与一种或者多种上述提及的赋形剂一同被制成微胶囊形式。片剂、糖衣丸、胶囊、药丸、以及颗粒的固体制剂形式可以通过包衣以及壳物质例如肠溶包衣、控释包衣以及药物配制领域熟知的其他包衣来制备。在这类固体制剂形式中，可以将所述活性化合物与至少一种惰性稀释剂例如蔗糖、乳糖或者淀粉进行混合。按照常规的惯例，这类制剂形式还可以包括其他物质而不是惰性稀释剂，例如压片润滑剂以及其他压片助剂例如硬脂酸镁以及微晶纤维素。如果是胶囊、片剂以及药丸，上述制剂形式还可以包括缓冲试剂。它们可以任选的包含乳浊剂，并且可以是一种只在或者优先在肠道内的某一部分、以一种缓释的形式释放所述活性成分的组合物。可以被利用的包埋组合物的例子包括聚合物以及蜡。
[0384]
用于局部给药或者透皮给药的本发明所述化合物的制剂形式包括药膏，药糊，霜，乳液，啫喱，粉末，溶液，喷雾，吸入剂或者贴剂。在无菌状态下将所述活性组分与一种药物可接受性载体进行混合，如果需要的话，还可以混合任意所需的防腐剂或者缓冲剂。眼科制剂，耳用滴剂，眼药膏，粉末以及溶液也同样是本发明范围之内所预期的。
[0385]
上述药膏、药糊、霜以及啫喱中除含有本发明所述活性化合物之外，还可以含有赋形剂，例如动物脂肪以及植物脂肪，油类，蜡，石蜡，淀粉，黄芪胶，纤维素衍生物，聚乙二醇，硅树脂，斑脱土，硅酸，滑石以及氧化锌，或者上述物质的混合物。
[0386]
粉末以及喷雾剂中除含有本发明所述化合物之外，还可以含有赋形剂，例如乳糖，
滑石，硅酸，氢氧化铝，硅酸钙以及聚酰胺粉末，或者这些物质的混合物。喷雾剂还可以含有常规的推进剂例如氯氟烃。
[0387]
透皮贴剂具有控制化合物向所述机体的释放这一额外优点。可以通过使所述化合物在适当的介质中分解或者分散的方法制备这种制剂形式。还可以使用吸收促进剂来增加所述化合物透过皮肤的通量。可以通过提供一种速率控制膜或者通过将所述化合物分散在一种聚合基质或者凝胶中的方法来控制所述速率。
[0388]
用于肺传递时，本发明的治疗组合物被配制成以固体形式给患者服用或者被配制成液体颗粒形式直接给药，例如吸入呼吸系统。为实施本发明所制备的本发明活性化合物的固体或者液体颗粒形式包括可吸入尺寸的颗粒：即，尺寸足够小以通过口腔的颗粒并吸入喉和进入支气管和肺泡肺的肺泡。提供雾化疗法，尤其是雾化抗生素是本领域已知(例如，参见van devanter等人的美国专利第5,767,068号、smith等人的美国专利第5,508,269号和蒙哥马利等人的wo 98/43650，这些专利和专利申请全部通过引用并入本文)。
[0389]
抗病毒活性
[0390]
在某些实施方案中，本发明提供了一种用于治疗或者预防有需要的主体内病毒感染的方法，包括对所述主体给药治疗有效量的式(i)化合物或者其药学上可接受的盐。所述病毒感染优选是冠状病毒感染。在某些实施方案中，所述冠状病毒是sars-cov-1、sars-cov-2或者mers-cov。优选的，所述冠状病毒是sars-cov-2。
[0391]
本发明中所述的化合物所具有的一种抑制性的量或者剂量可以存在于大约0.01毫克/千克至大约500毫克/千克的范围之内，或者可供选择的存在于大约1至大约50毫克/千克的范围之内。抑制性的量或者剂量将同样依据施用的路径以及与其他试剂进行共同使用的可能性而发生变化。
[0392]
根据本发明中所述的治疗方法，通过向所述的患者施用治疗有效剂量的本发明中所述的化合物的方式，对宿主的病毒感染、病症进行治疗或者预防，其中所述的宿主是，例如人类或者另外的动物，其中所施用的剂量以及施用的次数是为达到所期望的结果所必需的剂量以及次数。
[0393]
本发明中所述的化合物所具有的“治疗有效剂量”指的是所述化合物的这样一种剂量，所述的剂量能够以一种合理的利益/风险比为接受治疗的所述的宿主提供一种治疗效果，其中所述的利益/风险比是适用于任何的药物治疗的利益风险比。所述的治疗效果可以是客观的(即，通过某种测试或者标记物可以测量的)或者是主观的(即，宿主表现出一种效果的迹象或者感觉)。上文中所描述的所述化合物所具有的有效剂量可以存在于大约0.1毫克/千克至大约500毫克/千克的范围之内，优选的存在于大约1至大约50毫克/千克的范围之内。有效剂量还将依据给药路径以及与其他制剂共同使用的可能性而发生改变。然而，应当被理解的是，本发明中所述的化合物以及组合物所具有的每日总使用量将由主治医师在合理的医学判断范围之内决定。对于任意特定的患者而言，具体的治疗有效剂量的水平将取决于各种各样的因素，包括需要治疗的障碍以及所述障碍的严重程度；所使用的具体化合物所具有的活性；所使用的具体组合物；患者的年龄，体重，一般健康状况，性别以及饮食情况；所使用的具体化合物的给药时间，给药路径，以及排泄速率；所述的治疗周期；与所使用的具体化合物连合使用或者一同使用的药物；以及医学领域中所熟知的类似因素。
[0394]
以单一的剂量或者分割的剂量的形式向人类或者其他的动物施用的本发明中所
述化合物所具有的每日总剂量可以是，例如，从0.01至50毫克/千克体重或者更多的量，通常是从0.1至25毫克/千克体重。单一剂量的组合物可以含有这样的剂量或者是能够组成这一每日剂量的约数(submultiples)。一般而言，根据本发明所述的治疗方案包括每天以单一剂量或者多重剂量的形式向需要进行这类治疗的患者施用大约10毫克至大约1000毫克本发明中所述的化合物
[0395]
在本发明中所描述的化合物可以，例如，以注射、静脉内、动脉内、真皮下、腹膜内、肌肉内、或者皮下的方式来进行施用；或者通过口服，口腔内，鼻内，透黏膜，局部，以眼科制剂的形式，或者通过吸入的方式来进行施用，所述的施用剂量为每4小时至120小时大约0.1至大约500毫克/千克体重的剂量范围，或者可供选择的每4小时至120小时大约1毫克至1000毫克/剂量的范围，或者依照特定药物的需要来进行施用。本发明中所述的方法能够预期的是进行有效剂量的所述化合物或者化合物的组合物的施用能够达到所期望的效果或者所声称的效果。通常情况下，将以每天大约1次至大约6次的方式施用本发明中所述的药物组合物，或者可供选择的，以一种连续输液的方式来进行施用。这样的施用方式可以被用来作为一种慢性的治疗或者急性的治疗。所述的活性成分所具有的剂量将取决于进行治疗的所述的宿主以及具体的施用方式，其中所述的活性成分可以与药物学赋形剂或者载体进行组合从而制成一种单一的剂量形式。一种典型的制剂中将含有大约5％至大约95％的活性化合物(重量/重量)。或者可供选择的，这样的制剂中可以含有大约20％至大约80％的活性化合物。
[0396]
比上文中所叙述的那些剂量更低或者更高的剂量可能是需要的。对于任意特定的患者而言，具体的剂量以及治疗方案将取决于各种各样的因素，包括所使用的具体化合物所具有的活性，所述的年龄，体重，一般健康状况，性别，饮食情况，给药时间，排泄速率，药物的组合，所述的疾病、病症或者症状所具有的严重程度以及过程，所述的患者对于所述疾病、病症或者症状的部署，以及所述的治疗医师的判断。
[0397]
当患者的病症发生改善时，如果必要时，可以施用本发明中所述的化合物、组合物或其组合的维持剂量。随后，所述的给药剂量或者频率或者两者可以按照所述症状的函数而被减少，使其达到一定的水平，当所述的症状已经被减轻到所期望的水平上时，能够维持这种改善的情形。然而，当疾病的症状发生了任何的复发时，患者可能在一段长期的时间基础上需要进行间歇性的治疗。
[0398]
联合治疗和替换治疗
[0399]
本发明的化合物可与一种或者一种以上有助于预防或者治疗病毒性疾病或相关病理生理学的抗病毒治疗剂或者抗炎剂的联合使用。因此，本发明的化合物及其盐、溶剂化物或其它医药上可接受的衍生物可单独被使用或者与其他抗病毒药物或者抗炎症性治疗剂联合使用。本文中的化合物和其医药上可接受的盐可与一种或者一种以上其他试剂组合使用，所述其他试剂可以有效的预防或者治疗呼吸系统疾病、炎症疾病、自身免疫性疾病，例如抗组胺药、皮质类固醇(例如，丙酸氟替卡松、糠酸氟替卡松、丙酸倍氯米松、布地奈德、环索奈德、糠酸莫米松、曲安奈德、氟尼醇)、非甾体抗炎药、尿激酶三烯调节剂(如孟鲁司特、扎鲁司特、普兰鲁司特)、类胰蛋白酶抑制剂、ikk2抑制剂、p38抑制剂、syk抑制剂、蛋白酶抑制剂，例如弹性蛋白酶抑制剂、整合素拮抗剂(如，β-2整合素拮抗剂)、腺苷a2a激动剂、介质释放抑制剂(例如5-脂氧合酶抑制剂(zyflo)、dp1拮抗剂、dp2拮抗剂、pi3kδ抑制剂、
itk抑制剂、lp(碘代磷酸)抑制剂或者flap(5-脂氧合酶激活蛋白)抑制剂(例如，3-(3-(叔丁基硫基)-1-(4-(6-乙氧基吡啶-3-基)苯甲基)-5-((5-乙基吡啶-2-基)甲氧基)-1h-吲哚-2-基)-2,2-二甲基丙酸钠)、支气管扩张剂(如毒蕈碱拮抗剂、β-2激动剂)、甲氨蝶呤、和类似的试剂；单克隆抗体疗法例如抗lge、抗tnf、抗il-5、抗il-6、抗il-12、抗il-1和类似药物；细胞因子受体疗法，如依那西普和类似试剂；抗原非特异性免疫疗法(如干扰素或者其他细胞因子/趋化因子、趋化因子受体调节剂例如ccr3，ccr4或者cxcr2拮抗剂、其他细胞因子/趋化因子激动剂或者拮抗剂，tlr激动剂和类似药剂)，合适的抗感染试剂，包括抗生素试剂、抗真菌试剂、驱虫试剂、抗疟试剂、抗原虫试剂、抗结核试剂和抗病毒试剂，包括在以下网页中记载的试剂：https://www.drugs.com/drug-class/anti-infectives.html.总体来说，与替换疗法相比，结合疗法通常更为优选，这是由于结合疗法能够同时对病毒产生多重压力。
[0400]
当本发明的组合物包括这里所描述的化学式所示化合物和一个或者一个以上其他治疗试剂或者预防试剂的组合时，所述化合物和其他试剂均在通常以单一给药方案施用的剂量形式中以1到100％之间的剂量水平存在，并且更优选的，以5％-95％之间的剂量水平存在。所述其他试剂可以作为多个剂量方案的一部分单独被给药，与本发明化合物分开。作为选择，这些试剂可以是单一剂量形式的一部分，在单一组合物中与本发明的化合物相结合。
[0401]“其他治疗试剂或者预防试剂”包括，但不限于，免疫疗法(如干扰素)、治疗性疫苗、抗纤维化剂、抗炎剂，例如，皮质类固醇或者非甾体抗炎药(nsaids)、支气管扩张剂，例如，β-2肾上腺素能激动剂和黄嘌呤(如，茶碱)、粘液溶解剂、抗毒蕈碱、抗白三烯、细胞粘附抑制剂(例如，icam拮抗剂)、抗氧化剂(如n-酰基半胱氨酸)、细胞因子激动剂、细胞因子拮抗剂、肺表面活性剂和/或抗菌剂和抗病毒药物(如利巴韦林和阿曼替丁)。根据本发明的组合物也可与基因替代疗法结合使用。
[0402]
缩写
[0403]
在下文的方案和实施例的说明中将使用下列缩写：ac指酰基；acoh指醋酸；boc2o指二-叔丁基-碳酸氢酯；boc指叔丁氧基羰基；bz指苯甲酰；bn是指苯甲基；t-buok指的是叔丁酸钾；brine指的是氯化钠水溶液；cdi指的是羰基二咪唑；dcm或者ch2cl2指的是二氯甲烷；ch3指的是甲基；ch3cn指的是乙腈；cs2co3指的是碳酸铯；cucl指的是氯化铜(i)；cui指的是碘化酮(i)；dba指的是二亚苯甲基丙酮；dbu指的是1，8-二氮杂二环十一-7-烯；dead指的是二乙基氮杂二羧酸；diad指的是偶氮二甲酸二异丙酯；dipea或者(i-pr)2etn指的是n，n，-二异丙基乙胺；dmp或者戴斯-马汀氧化剂指的是1，1，2-顺式(酰基氧基)-1，2-二氢-1，2-苯碘噁唑-3-(1h)-酮；dmap指的是4-二甲基氨基-吡啶；dme指的是1，2-二甲氧基乙烷；dmf指的是n，n-二甲基甲酰胺；dmso指的是二甲亚砜；etoac指的是乙酸乙酯；etoh指的是乙醇；et2o指的是二乙醚；hatu指的是o-(7-氮杂苯并三唑-2-基)-n，n，n’，n’，-四甲基脲鎓六氟磷酸盐；hcl指的是盐酸；k2co3指的是碳酸钾；n-buli指的是n-丁基锂；ddq指的是2，3-二氯代-5，6-二氰-1，4-苯醌；lda指的是二异丙基胺化锂；litmp指的是2，2，6，6-四甲基-哌啶酸锂；meoh指的是甲醇；mg指的是镁；mom指的是甲氧基甲基；ms指的是甲磺酰基或者-so
2-ch3；nahmds指的是双(三甲基甲硅烷基)氨钠；nacl指的是氯化钠；nah指的是氢化钠；nahco3指的是碳酸氢钠或者重碳酸钠；na2co3指的是碳酸钠；naoh指的是氢氧化钠；na2so4指的是
硫酸钠；nahso3指的是亚硫酸钠或者硫酸氢钠；na2s2o3指的是硫代硫酸钠；nh2nh2指的是水合联氨；nh4cl指的是氯化铵；ni指的是镍；oh指的是羟基；oso4指的是四氧化锇；otf指的是三氟甲基磺酸盐；ppa指的是聚磷酸；ptsa指的是对甲苯磺酸；ppts指的是对苯甲磺酸吡啶；tbaf指的是四丁基氟化铵；tea或者et3n指的是三乙胺；tes指的是三乙基甲硅烷基；tescl指的是三乙基硅甲烷基氯；tesotf指的是硅甲烷基三氟代甲烷磺酸三乙酯；tfa指的是三氟代乙酸；thf指的是四氢呋喃；tmeda指的是n，n，n’，n
’‑
四甲基亚乙基二胺；tpp或者pph3指的是三苯基-膦；tos或者ts指的是对甲苯磺酰基或者
–
so
2-c6h4ch3；ts2o指的是对甲苯磺酸酐或者对甲苯磺酰酐；tsoh指的是对苯甲磺酸；pd指的是钯；ph指的是苯；pd2(dba)3指的是三(二苯唑丙酮)二钯(0)；pd(pph3)4指的是四(三苯基膦)-钯(0)；pdcl2(pph3)2指的是反式-二氯-(三苯基膦)钯(ii)；pt指的是铂；rh指的是铑；rt指的是室温；ru指的是钌；tbs指的是叔丁基二甲基甲硅烷基；tms指的是三甲基甲硅烷基；和tmscl指的是三甲基硅甲烷基氯。
[0404]
合成方法
[0405]
结合下列举例说明制备本发明化合物的方法的合成方案将更好地理解本发明的化合物和方法，其仅意欲作为举例说明和并非限制本发明的范围。所公开的实施方案的各种改变和改进对于本领域技术人员而言是显而易见的，并且这种改变和改进是在不背离本发明的精神和附加权利要求书的范围而作出的，包括(不限于)与本发明的化学结构、取代基、衍生物和/或方法相关的改变和改进。
[0406]
方案1
[0407][0408]
方案1说明了从氨基酯化合物(x-1)制备式(iv-1)化合物的一般方法，其中，b如之
前的定义并且pg1是c1-c4烷基或者bn。用甲醛处理胺(x-1)得到环化胺(x-2)，使用适当的保护基团pg2(例如boc)将环化胺(x-2)转换为(x-3)。在含有acoh的溶剂中，在低温下用nbs处理(x-3)可提供重新排列的螺旋脯氨酸衍生物(x-4)。在下列文献中已经报道了这种转换序列的示例：(pellegrini c.et al.“synthesis of the oxindole alkaloid(-)-horsfiline”tetrahedron asymmetry，1994，vol.5，no.10，pp 1979-1992；efremov，i.v.et al.“discovery和optimization of a novel spiral pyrrolidine inhibitor ofβ-secretase(bace1)through fragment-based drug design”journal of medicinal chemistry，2012，55，9069-9088).用nh3(例如甲醇中的氨、nh3oh等)处理酯(x-4)可得到酰胺化合物(x-5)，通过去保护基团pg2(例如tfa、hcl等)将酰胺化合物(x-5)转化为胺化合物(x-6)。在酰胺偶联条件下(例如hatu、edc、dcc等)完成胺(x-6)与酸(x-7)的缩合，其中，a、r1，r2和r3是先前定义的，产生酰胺化合物(x-8)。酰胺(x-8)在脱水条件下转化为腈化合物(iv-1)，例如，但不局限于，tfaa/et3n，或者pd(ococf3)2/cl2chcn、伯吉斯试剂或者t3p。
[0409]
选择性的，在酰胺偶联条件下(例如hatu、edc、dcc等)完成胺(x-6)与酸(x-9)的缩合产生酰胺化合物(x-10)，其中，r1，r2和r3如先前定义，并且pg3是适当的保护基团(例如cbz)。去除pg3(例如，氢化反应)提供胺化合物(x-11)。在酰胺偶联条件下(例如hatu、edc、dcc等)或者酰基内酯生成条件(如ghosez试剂)进行胺(x-11)与酸(a-cooh)的缩合反应产生酰胺化合物(x-8)，其中，a如先前的定义。
[0410]
方案2
[0411][0412]
方案2描述了合成式(iv-2)所示醛化合物的一般方法，其中，a，r1，r2，r3，和b如之前的定义。使用还原剂，例如(但是不局限于)libh4，nabh4，或者dibal-h将式(x-4)所示酯化合物还原为醇化合物(xi-1)，其中，b，pg1和pg2如之前的定义。在酸性条件下，例如，使用tfa，hcl，甲酸，tmsotf/二甲基吡啶，等等，除去保护基团pg2(例如boc)(xi-1)。使用耦合剂(例如hatu，edc，或者dcc)将胺化合物(xi-2)与酸性化合物(x-7)相耦合产生化合物(xi-3)，其中，a，r1，r2，和r3如上述定义。用温和氧化剂，例如dmso/ac2o，戴斯-马丁氧化剂，ibx，so
3-吡啶/dmso/et3n，氧化(xi-3)醇化合物产生醛化合物(iv-2)。
[0413]
方案3
[0414][0415]
方案3显示了合成式(iv-3)所示羟甲基酮化合物的一般方法。水解酯化合物(x-4)产生酸化合物(xii-1)，其中，b，pg1和pg2如之前的定义。通过使用例如hatu，edc，dcc，等试剂将酸化合物(xii)-1与n，o-二甲基羟基胺耦合可以产生胺(xii-2)。在低温下(大约-60℃)用bom-cl，mg和hgcl2产生的有机金属试剂处理酰胺(xii-2)产生酮化合物(xii-3)。去除pg2(例如ptsa，如果pg2是boc的话)提供胺化合物(xii-4)。使用酰胺偶联试剂(例如，hatu、edc、dcc等)将胺(xii-4)与酸(x-7)的偶联，产生化合物(xii-5)，其中，a、r1，r2和r3如先前的定义，在氢化条件下(pd/c，h2)除去(xii-5)中的苯甲基基团产生式(iv-3)化合物。
[0416]
方案4
[0417][0418]
方案4说明了合成式(iv-4)的氯代甲基酮化合物的一般方法。用ich2cl和适当的碱基(例如lda、meli/libr、或者buli)生成的有机金属试剂处理酯化合物(x-4)产生氯酮化合物(xiii-1)。去除pg2(例如ptsa，如果pg2是boc的话)产生胺化合物(xiii-2)。使用偶联试剂(例如hatu、edc、dcc等)偶联胺(xiii-2)与酸(x-7)，产生化合物(iv-4)，其中，a、r1，r2和r3如先前的定义。
[0419]
方案5
[0420][0421]
方案5说明了合成式(iv-5)的氯代甲基酮化合物的一般方法。用pd催化的氢化反应除去化合物(xii-3)的bn基团，产生醇化合物(xiv-1)。在某些条件下，例如，sf4，tf2o/二甲基吡啶/tbaf，c4f9so2f/hf-et3n等等，将醇(xiv-1)转化为氟代甲酮化合物(xiv-2)。除去pg2(例如，ptsa，如果pg2是boc的话)产生胺化合物(xiv-3)。使用胺偶联试剂(例如hatu，edc，dcc等等)将胺(xiv-3)和酸(x-7)偶联产生化合物(iv-5)，其中，a，r2，和r3如之前的定义。
[0422]
方案6
[0423][0424]
方案6说明了合成式(iv-6)的α-酮酰胺化合物的一般方法。用异腈化合物(xv-1)(其中r
13
如之前的定义)处理式(iv-2)所示醛化合物，其中，a，r1，r2，r3，和b如之前的定义，产生α-羟基酰胺(xv-2)。用合适的氧化剂，例如，戴斯-马汀氧化剂、(cocl)2/dmso/et3n，pcc，so
3-吡啶/dmso/et3n等氧化化合物(xv-2)产生α-酮酰胺化合物(iv-6)。
[0425]
方案7
[0426][0427]
选择性的，腈化合物(iv-1)可使用方案7所示的方法由醛化合物(iv-2)合成。在适当的溶剂(例如，二甲基亚砜、i-脯氨酸、吡啶等)中将醛(iv-2)与羟基盐酸胺缩合产生肟化合物(xvi-1)。在酸催化脱水条件下(例如(cu(oac)2/mecn、hcl等))处理肟化合物(xvi-1)产生腈化合物(iv-1)。
[0428]
方案8
[0429][0430]
方案8显示了合成功能性式xx-2螺旋环的一般方法(q1被定义为卤素或者任选取代的烷基)。用亲电试剂(包括但不限于：磺酰氯、n-氯丁二酰亚胺、n-溴代丁二酰亚胺、selectfluor或者nfsi)处理螺旋式xx-1的环状化合物(其中，b、pg1和pg2如先前的定义)，可产生功能化螺旋环xx-2。
[0431]
实施例
[0432]
结合下列实施例可以更好的理解本发明的化合物和方法，这些实施例只起到示意作用而不是对本发明范围的限制。对这里所公开的实施方案可以进行多种变化和修饰，这些变化和修饰是本领域普通技术人员显而易见的，这些变化和修饰包括但是不局限于涉及本发明化学结构、取代基、衍生物、制剂和/或方法的变化和修饰，在不脱离本发明精神和所附权利要求书范围的情况下，这些变化和修饰是可以进行的。
[0433]
一般条件：
[0434]
使用电喷雾电离在lc-ms系统上运行质谱。使用带有安捷伦6120四极探测器的安捷伦1290infinity ii系统。使用zorbax eclipse xdb-c18柱(4.6x30mm，1.8微米)获得光谱。使用0.1％甲酸水溶液(a)和在乙腈中浓度为0.1％甲酸(b)为流动相在298k下获得光谱。光谱是以以下溶剂梯度获得的：0-1.5分钟为5％(b)，1.5-4.5分钟为5-95％(b)和95％(b)从4.5-6分钟。溶剂流速为1.2ml/min。在210nm和254纳米波长处检测化合物。[m h] 指单同位素分子量。
[0435]
核磁共振谱在bruker 400mhz光谱仪上运行。在298k下测量光谱并使用溶剂峰作为参考。1h nmr的化学位移报告单位为百万分之一(ppm)。
[0436]
使用gilson gx-281自动液体处理系统，通过反相高效液相色谱(rphplc)纯化化合物。在phenomenex kinetex evo c18柱(250x21.2mm，5微米)上纯化化合物。在298k下使用水(a)和乙腈(b)作为流动相，使用0％和100％之间的梯度洗脱纯化化合物，除非另有规定。溶剂流速为20ml/min，在254nm波长处检测化合物。
[0437]
选择性的，使用teledyne isco combiflash纯化系统，通过正相液相色谱法(nplc)纯化化合物。在redisep硅胶柱上纯化化合物。化合物在298k下纯化和在254nm波长下检测。
[0438]
实施例1
[0439][0440]
步骤1-1
[0441]
(s)-2，3，4，9-四氢-1h-吡啶基[3，4-b]吲哚-3-羧酸甲酯盐酸盐(500mg，1.875mmol)被溶解在ch2cl2(10ml)中。加入三乙胺(523μl，3.75mmol)和2.0m二-叔丁基碳酸氢酯在dcm(1031μl，2.062mmol)中的溶液。在室温条件下搅拌反应混合物3h，用饱和nahco3淬火，和用dcm提取。用盐水洗涤有机层，用mgso4干燥，并在真空中浓缩。用0-30％乙酸乙酯/环己烷在硅胶柱上纯化残余物产生化合物(1-1)(578mg，1.749mmol，93％产率)。
[0442]
步骤1-2
[0443]
将化合物(1-1)溶解在thf(15ml)，acoh(10ml)，和water(10ml)中。将溶液冷却至-15℃。逐滴加入nbs(328mg，1.843mmol)在thf(5ml)中的溶液。在1小时内将反应混合物缓慢回暖至5℃。用na2so3和饱和nahco3淬火反应，并用dcm(2x)提取。用盐水洗涤有机层，用mgso4干燥并在真空中浓缩。用0-50％乙酸乙酯/环己烷在硅胶柱上纯化残余物产生化合物(1-2)(328mg，0.947mmol，53.9％产率)。
[0444]
步骤1-3
[0445]
将化合物(1-2)(328mg，0.947mmol)溶解在meoh(3ml)中。加入7n铵在meoh(5ml，35.0mmol)中的溶液。在室温条件下搅拌反应混合物5天。真空条件下除去溶剂。使用0-10％meoh/dcm在硅胶柱上纯化残余物，并在c18柱上用0-50％mecn/h2o纯化产生化合物(1-3)(101mg，0.305mmol，32.2％产率)。
[0446]
步骤1-4
[0447]
将化合物(1-3)(100mg，0.302mmol)溶解在dcm中并加入三氟乙酸(232μl，3.02mmol)。在0℃下搅拌反应混合物1h，然后在室温条件下搅拌2h。加入dcm(10ml)和甲苯(10ml)。真空条件下除去溶剂。将残余物溶解在meoh中并加入1m hcl(0.6ml，2eq)。除去溶剂。所得化合物(1-4)(91mg，0.340mmol，定量产率)被用于下一步骤中。
[0448]
步骤1-5
[0449]
将化合物(1-4)(15mg，0.056mmol)和((苯甲基氧基)羰基)-l-亮氨酸(14.87mg，0.056mmol)溶解在thf(0.5ml)和dmf(0.1ml)中。加入dipea(30.0μl，0.168mmol)和hatu
(21.30mg，0.056mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物20min，用水淬火，并用etoac(2x)萃取。将有机层装载在硅胶柱上并用0-70％丙酮/环己烷洗脱，产生化合物(1-5)(15mg，0.031mmol，55.9％产率)。
[0450]
步骤1-6
[0451]
将化合物(1-5)(60mg，0.125mmol)溶解在dcm(1.254ml)中(未溶解)。加入三乙胺(140μl，1.003mmol)和tfaa(70.8μl，0.502mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物30min.用dcm稀释反应并用饱和nahco3淬火。将有机层装载在硅胶柱上并用0-50％丙酮/环己烷洗脱，然后在制备型-hplc上用含有0.1％甲酸的20-85％mecn/h2o洗脱产生实施例1(14mg，0.056mmol)白色粉末。1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ9.70(s，1h)，7.42
–
7.31(m，5h)，7.28(td，j＝7.7，1.3hz，1h)，7.12(d，j＝7.4hz，1h)，7.04
–
6.96(m，2h)，6.65(d，j＝8.3hz，1h)，5.17(t，j＝8.3hz，1h)，5.06
–
4.94(m，2h)，4.48(td，j＝9.0，5.0hz，1h)，4.26(d，j＝10.4hz，1h)，3.99(d，j＝10.3hz，1h)，2.78
–
2.63(m，2h)，1.80(dd，j＝13.8，6.9hz，1h)，1.74
–
1.56(m，2h)，0.96(dd，j＝8.7，6.6hz，6h).[m na]m/e 483.18.
[0452]
使用如上所述的相似的方案制备以下实施例。
[0453]
[0454]
[0455]
[0456]
[0457][0458]
实施例11&12
[0459][0460][0461]
步骤14-甲氧基-1h-吲哚-2-羧酸(1g，5.23mmol)溶解在thf(25ml)中，顺序加入乙基l-亮氨酰盐酸盐(1.024g，5.23mmol)，hunig's碱(2.3ml，13.08mmol)，dmap(0.032g，
0.262mmol)，和hatu(2.0g，5.23mmol).在室温条件下搅拌反应混合物1.5h，用水淬火，并用mtbe提取。用盐水洗涤有机层，用mgso4干燥，并在真空中浓缩。在硅胶柱上用0-50％etoac/环己烷纯化残余物产生化合物(11-1)(1.47g，4.42mmol，85％产率)。
[0462]
步骤2
[0463]
将化合物(11-1)(1.47g，4.42mmol)溶解在thf(29.5ml)和水(14.74ml)中。在0℃下，加入lioh-h2o(0.278g，6.63mmol)。在0℃下剧烈搅拌反应混合物30min，用1m hcl(6.6ml)淬火，和用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤有机层，用硫酸镁干燥，和在真空中浓缩。在硅胶柱上用0-15％meoh/dcm纯化残余物产生化合物(11-2)(1.32g)。
[0464]
步骤3
[0465]
将化合物(1-4)(50mg，0.187mmol)和化合物(11-2)(56.8mg，0.187mmol)溶解在thf(1.6ml)和dmf(0.3ml)中，加入hunig's碱(98μl，0.560mmol)和hatu(56.8mg，0.149mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物30min，用水淬火，并用乙酸乙酯提取。将有机层装载在硅胶柱上并用0-50％丙酮/环己烷洗脱产生化合物(11-3)(75mg，0.145mmol，78％产率)，是两种对映异构体的混合物。
[0466]
步骤4
[0467]
在0℃下向化合物(11-3)(67mg，0.129mmol)在dcm(1.3ml)中的悬浮液中加入三乙胺(144μl，1.036mmol)和tfaa(73.1μl，0.518mmol)。将反应混合物回暖至室温并搅拌10分钟。用dcm稀释反应混合物并用饱和nahco3淬火。将有机层装载在硅胶柱上并用0-50％etoac/环己烷洗脱，产生化合物(11-4)(48mg，0.096mmol，74.2％产率)是两种对映异构体的混合物。
[0468]
步骤5
[0469]
在制备型hplc上用含有0.1％甲酸的20-85％mecn/h2o纯化化合物(11-4)(5mg)产生实施例11(1.8mg)和实施例12(1.9mg)。
[0470]
实施例11：1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.47(s，1h)，9.56(s，1h)，7.74(d，j＝8.1hz，1h)，7.21(d，j＝2.2hz，1h)，7.10
–
6.89(m，5h)，6.85(d，j＝7.7hz，1h)，6.76(td，j＝7.5，1.0hz，1h)，6.41(dd，j＝7.3，1.1hz，1h)，5.03(t，j＝8.2hz，1h)，4.84
–
4.74(m，1h)，4.23(d，j＝10.2hz，1h)，3.91(d，j＝10.3hz，1h)，3.81(s，3h)，2.56(td，j＝13.5，8.2hz，2h)，1.71(ddd，j＝14.5，9.9，3.9hz，2h)，1.58(ddd，j＝13.8，9.7，4.9hz，1h)，0.86(dd，j＝11.9，6.4hz，6h).[m na]m/e 522.19.
[0471]
实施例12 1
h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.75(s，0.33h)，10.59(s，0.67h)，9.58(s，0.67h)，9.54(s，0.33h)，8.10(d，j＝7.8hz，0.33h)，7.90(d，j＝8.7hz，0.67h)，7.34
–
6.71(m，8h)，6.42(m，1h)，5.90(t，j＝8.0hz，0.33h)，5.06(t，j＝8.3hz，0.67h)，4.98(ddd，j＝11.3，7.7，4.0hz，0.33h)，4.83(td，j＝9.1，4.7hz，0.67h)，4.00(dd，j＝11.7，1.4hz，0.39h)，3.97
–
3.87(m，1.41h)，3.81(m，3h)，3.51(d，j＝11.7hz，0.39h)，2.65
–
2.49(m，1h)，1.91(s，2h)，1.71
–
1.51(m，2h)，0.96
–
0.90(m，2h)，0.75(dd，j＝6.3，4.1hz，4h).[m na]m/e 522.19.
[0472]
使用如上所述的相似的方案制备以下实施例。
[0473][0474][0475]
实施例17
[0476][0477]
步骤1
[0478]
在0℃下，向(2s)-2-氨基-3-环丁基丙酸盐酸盐(0.359g，2mmol)和naoh(240mg，6.00mmol)在甲苯/水(4ml/4ml)中的混合物中加入cbz-cl(0.314ml，2.200mmol)。在室温条件下搅拌2h，分离两层并用mbte洗涤水相层。然后用1m hcl溶液处理水相层使其ph值在～2。用乙酸乙酯提取所得混合物。用盐水洗涤所收集的有机层，用na2so4干燥，过滤，和并浓缩，产生化合物(17-1)(0.46g，1.659mmol，83％产率)。
[0479]
步骤2
[0480]
室温条件下，向化合物(17-1)(104mg，0.374mmol)，化合物(1-4)(80mg，0.299mmol)，和dipea(183μl，1.046mmol)在dcm/dmf(1.0/0.5ml)中的混合物中加入hatu(136mg，0.359mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物20h，用水淬火，和用乙酸乙酯提取。用1n hcl、nahco3饱和溶液、盐水洗涤结合的有机层，并用na2so4干燥并过滤。在真空中浓缩滤出物。在硅胶柱上纯化残余物产生化合物(17-2)(98mg，0.200mmol，66.9％产率)。[m-h]-，489.16
[0481]
步骤3
[0482]
用1大气压氢气处理(17-2)(25mg，0.051mmol)和pd-c(5.42mg，5.10μmol)在meoh(1ml)中的悬浮液40mins.用dcm稀释混合物，用硅藻土过滤，用dcm洗涤，并在真空中浓缩。所得产物(17-3)直接用于下一步骤。[m-h]-，355.15
[0483]
步骤4
[0484]
向4-甲氧基-1h-吲哚-2-羧酸(15mg，0.077mmol)，化合物(17-3)(18mg，0.051mmol)和hatu(0.029g，0.077mmol)在dcm(0.3ml)中的悬浮液中加入dipea(0.031ml，0.179mmol)在dmf(0.3ml)中的溶液。在室温条件下搅拌反应混合物1h，用水淬火，并用乙酸乙酯提取。用1n hcl、nahco3饱和溶液、盐水洗涤结合的有机层，并用na2so4干燥并过滤。在真空中浓缩。用硅胶柱纯化残余物产生化合物(17-4)(19mg，0.036mmol，70.3％产率)。[m-h]-，528.18
[0485]
步骤50℃下向化合物(17-4)(19mg，0.036mmol)和et3n(60.0μl，0.431mmol)在dcm(0.6ml)中的混合物中加入tfaa(30.4μl，0.215mmol)。将反应混合物回暖至室温并搅拌1小
时。用冷的nahco3饱和溶液淬火反应并用乙酸乙酯提取.用1n hcl、nahco3饱和溶液、盐水洗涤结合的有机层，并用na2so4干燥并浓缩。用硅胶柱纯化残余物产生实施例17(12mg，0.023mmol，65.4％产率)。[m-h]-510.17；1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.26(d，j＝0.9hz，1h)，7.22
–
7.10(m，3h)，7.02(d，j＝8.3hz，1h)，6.99
–
6.89(m，2h)，6.53(d，j＝7.7hz，1h)，5.17(t，j＝7.9hz，1h)，4.71(dd，j＝8.0，6.4hz，1h)，4.30(d，j＝10.5hz，1h)，4.08(d，j＝10.5hz，1h)，3.96(s，3h)，2.75
–
2.62(m，2h)，2.52(hept，j＝7.7hz，1h)，2.20
–
2.12(m，3h)，2.15
–
2.02(m，1h)，2.05
–
1.88(m，2h)，1.90
–
1.80(m，1h)，1.83
–
1.70(m，1h)。
[0486]
[0487]
[0488]
[0489]
[0490]
[0491]
[0492]
[0493][0494]
使用如上所述的相似的方案制备以下实施例。
[0495]
实施例23
[0496][0497]
[0498]
步骤1
[0499]
向化合物(1-2)(2.5g，7.22mmol)在thf(24.06ml)中的溶液中逐滴加入2m libh4在thf(10.83ml，21.65mmol)中的溶液。在室温条件下搅拌反应混合物2小时。并且在真空下除去大量thf。用1n hcl小心的将反应淬火至ph＝5-6(～22ml)和用乙酸乙酯提取(3x40 ml)。用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤结合的有机相，干燥并浓缩。在用0-50％etoac/环己烷在硅胶柱上纯化残余物产生理想的醇(23-1)(1.54g，67％产率)。
[0500]
步骤2
[0501]
化合物(23-1)(0.5g，1.570mmol)溶解在4m hcl在二噁烷中的溶液中(3.93ml，15.70mmol，在室温条件下搅拌反应混合物1小时并浓缩至干燥。得到黄色固体状的化合物(23-2)(492mg，80％产率)。lc-ms，es ：218.85[m 1].
[0502]
步骤30℃下，向化合物(23-2)(960mg，3.13mmol)和((苯甲基氧基)羰基)-l-亮氨酸(913mg，3.44mmol)在干燥的dmf(15.64ml)中的溶液中加入hatu(1546mg，4.07mmol)和hunig's碱(1912μl，10.95mmol)。在0℃下搅拌反应混合物1小时，用etoac稀释并用10％柠檬酸，水，和盐水洗涤。干燥有机层并浓缩。在硅胶柱上用0-40％etoac/环己烷纯化残余物产生1.2g的化合物(23-3)。lc-ms，es ：466.19[m 1].
[0503]
步骤4
[0504]
将化合物(23-3)(800mg，1.718mmol)溶解在meoh(17ml)中。加入在碳中含量为10％pd(40mg，0.038mmol)。在氢气环境下搅拌反应混合物2.5小时，并且用硅藻土垫过滤。除去溶剂得到粗产物(23-4)(543mg，1.638mmol，95％产率)，粗产物直接用于下一步骤。[m 1]332.20.
[0505]
步骤5
[0506]
化合物(23-4)(195mg，0.588mmol)和4-甲氧基-1h-吲哚-2-羧酸(118mg，0.618mmol)溶解在ch2cl2(5.9ml)。在0℃下，加入hunig's碱(308μl，1.765mmol)和hatu(235mg，0.618mmol)。在0℃下搅拌反应混合物30分。用水淬火反应混合物并且用dcm提取.将有机层装载在硅胶柱上并用0-50％丙酮/环己烷洗脱，产生化合物(23-5)(213mg，0.422mmol，71.7％产率)。
[0507]
步骤6
[0508]
在火焰干燥的烧瓶中，在室温条件下将醋酸酐(422μl，4.46mmol)加入到无水dmso(3.10ml)中。搅拌10分钟之后，一次性加入化合物(23-5)(150mg，0.297mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物6h.将反应混合物冷却至0℃并用水稀释(～8ml)。过滤收集白色沉淀物，用水冲洗，并在真空条件下干燥。在硅胶柱上用0-45％丙酮/环己烷纯化所得沉淀物产生无色固体状的实施例23(112mg，75％产率)。[m h]

503.16.1h nmr(500mhz，dmso-d6)δ11.52(d，j＝2.3hz，1h)，10.66(s，1h)，9.52(d，j＝2.1hz，1h)，8.61(d，j＝7.7hz，1h)，7.40
–
7.32(m，1h)，7.26(d，j＝7.9hz，1h)，7.26
–
7.18(m，1h)，7.17
–
7.02(m，1h)，7.04
–
6.97(m，2h)，6.89(d，j＝8.9hz，1h)，6.52(t，j＝8.4hz，1h)，4.75(s，1h)，4.62(td，j＝8.1，7.1，3.8hz，1h)，4.11(d，j＝10.5hz，1h)，3.97(d，j＝10.5hz，1h)，3.89(s，3h)，3.88(d，j＝7.4hz，1h)，2.41(dd，j＝13.0，9.0hz，1h)，2.21(dd，j＝13.2，6.2hz，1h)，1.77(m，1h)，1.60(m，1h)，0.96(d，j＝7.0hz，3h)，0.89(d，j＝7.0hz，3h)。
[0509]
使用如上所述的相似的方案制备以下实施例。
[0510]
[0511][0512]
实施例26
[0513][0514]
[0515]
步骤1
[0516]
将化合物23-4(45mg，0.136mmol)溶解在dcm(1.358ml)中。加入dipea(48.5μl，0.272mmol)，6-氰基-4-甲氧基-1h-吲哚-2-羧酸(32.3mg，0.149mmol)，和hatu(51.6mg，0.136mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物1h，用水淬火，和用dcm提取。将有机层装载在硅胶柱上并用0-50％丙酮/环己烷洗脱产生化合物26-1(22mg，0.042mmol，30.6％产率)。[m-oh]

，512.20.
[0517]
步骤2
[0518]
在室温下将醋酸酐(78μl，0.831mmol)加入到dmso(0.415ml)中。在室温条件下搅拌反应混合物5分钟，并将反应混合物转移到含有化合物26-1(22mg，0.042mmol)的试管瓶中。在室温下搅拌所得反应混合物6小时，0℃下用水淬火，并用乙酸乙酯提取。用水、盐水洗涤有机层，并浓缩。在硅胶柱上用0-50％丙酮/环己烷纯化残余物产生化合物26-2(15mg，0.028mmol，68.4％产率)。[m h]

，528.21.
[0519]
步骤3
[0520]
将化合物26-2(15mg，0.028mmol)溶解在2-丙醇中。加入1m羟基胺盐酸盐(56.9μl，0.057mmol)在t-buoh/h2o(1：1)中的溶液。在室温条件下搅拌反应混合物30分钟，用无水nahco3淬火，并用乙酸乙酯提取。用na2so4干燥有机层并在真空中浓缩。所得粗产物化合物26-3(14mg，0.026mmol，91％产率)直接用于下一步骤.[m h]

，543.22
[0521]
步骤4
[0522]
向含有化合物26-3(14mg，0.026mmol)的试管瓶中加入mecn(0.516ml)和醋酸铜(ii)(1.406mg，7.74μmol)。在70℃搅拌所得反应混合物2小时，并在真空中浓缩。在硅胶柱上用0-50％etoac/环己烷纯化残余物，随后用制备型-hplc纯化，产生实施例26(2.8mg，5.34μmol，20.69％产率)。[m h]

，525.22；1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ11.06(s，1h)，9.57(s，1h)，7.96(d，j＝8.3hz，1h)，7.45(s，1h)，7.32(d，j＝1.9hz，1h)，7.08
–
6.92(m，2h)，6.84(d，j＝7.8hz，1h)，6.77
–
6.68(m，2h)，5.03(t，j＝8.3hz，1h)，4.84
–
4.75(m，1h)，4.23(d，j＝10.4hz，1h)，3.91(m，5h)，2.58(qd，j＝13.3，8.4hz，2h)，1.72(m，2h)，1.61(m，1h)，0.85(m，6h)
[0523]
使用如上所述的相似的方案制备以下实施例。
[0524]
[0525]
[0526][0527]
实施例29
[0528][0529][0530]
向实施例23(45mg，0.090mmol)在etoh(2ml)和水(0.2ml)中的溶液中加入过硫酸钠(9.32mg，0.090mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物4小时然后浓缩。将dcm加入到残余物中获得白色固体沉淀物。用丙酮洗涤收集的固体并干燥产生白色固体状的实施例29。[m-na]-583.0.1h nmr(500mhz，dmso-d6)δ11.42(s，1h)，10.57(d，j＝7.9hz，1h)，9.88(s，1h)，
8.47(d，j＝8.2hz，1h)，7.35
–
7.31(m，1h)，7.14
–
7.05(m，2h)，7.02
–
6.96(m，1h)，6.86(ddt，j＝24.0，15.0，8.1hz，3h)，6.50(d，j＝7.7hz，1h)，5.65(d，j＝5.5hz，1h)，4.83
–
4.78(m，1h)，4.70(t，j＝9.3hz，2h)，3.96(d，j＝9.3hz，1h)，3.90(s，3h)，3.61(d，j＝9.8hz，1h)，2.79(dd，j＝13.1，9.8hz，1h)，1.81
–
1.67(m，3h)，0.99(td，j＝15.4，7.0hz，1h)，0.90(d，j＝6.4hz，3h)，0.85(d，j＝6.1hz，3h)。
[0531]
使用上面描述的相似的方法制备以下实施例。
[0532][0533][0534]
实施例31
[0535][0536]
步骤1
[0537]
在0℃下，向实施例23(18mg，0.036mmol)中加入醋酸(2.4μl，0.041mmol)和异氰基环丙烷(2.64mg，0.039mmol)在dcm(0.20ml)中的溶液。在0℃到室温的温度范围内下搅拌反应混合物5小时。将反应混合物浓缩至干燥并再次溶解在meoh(0.35ml)中。加入0.5m k2co3在水(179μl，0.090mmol)中的溶液。在室温条件下搅拌反应混合物2小时。真空中除去meoh然后用乙酸乙酯提取水相层(3x)。用水和盐水洗涤结合的有机层，干燥并浓缩。所得粗产物
(31-1)直接用于下一步骤中。[m 1]，588.2.
[0538]
步骤2
[0539]
在0℃下，向化合物(31-1)在dcm(0.360ml)中的溶液中加入戴斯-马丁氧化剂(0.023g，0.054mmol)。在0℃下搅拌反应混合物2.5小时。在0℃下，用dcm稀释反应混合物，用10％na2s2o3退火，并用5％nahco3洗涤。用水和盐水洗涤收集的有机层，干燥，并浓缩。在硅胶柱上用0-60％丙酮/环己烷纯化残余物产生实施例31(6.5mg)。[m-1]-584.07.1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.62(s，1h)，9.67(s，1h)，7.90(d，j＝4.9hz，1h)，7.78(d，j＝8.2hz，1h)，7.31(dd，j＝2.3，0.8hz，1h)，7.29
–
7.10(m，4h)，7.14
–
6.95(m，2h)，6.92(td，j＝7.6，1.1hz，1h)，6.53(dd，j＝7.2，1.2hz，1h)，5.69
–
5.54(m，1h)，4.93(td，j＝8.4，6.0hz，1h)，4.34(d，j＝9.9hz，1h)，4.02(d，j＝9.9hz，1h)，3.94(s，3h)，4.00
–
3.86(m，1h)，2.92
–
2.78(m，1h)，2.52
–
2.38(m，2h)，1.89(dt，j＝12.9，6.5hz，1h)，1.72(ddd，j＝8.1，5.7，2.3hz，2h)，1.13
–
0.93(m，6h)，0.83
–
0.65(m，4h)。
[0540]
使用如上所述的相似的方案制备以下实施例。
[0541]
[0542]
[0543]
[0544][0545]
实施例37
[0546][0547]
室温条件下向实施例23(105mg，0.209mmol)在叔丁醇(2.79ml)中的混合物中加入2-甲基-2-丁烯，2m在thf中的溶液(2.09ml，4.18mmol)产生澄清的溶液。在10分钟内逐滴加入亚氯酸钠(236mg，2.089mmol)和一元磷酸钠(251mg，2.089mmol)在水(1.39ml)中的溶液。在室温条件下搅拌1h，浓缩反应混合物除去大多数的挥发性物质。用乙酸乙酯稀释所得混合物，用水、盐水洗涤，干燥并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-10％meoh/dcm纯化残余物产生实施例37(40mg，36％产率)。lc-ms，es-：516.94[m-h]-.
[0548]
实施例38
[0549][0550]
将实施例37(18mg，0.035mmol)，环丙烷磺酰胺(8.41mg，0.069mmol)，edci(7.2mg，0.038mmol)和dmap(4.59mg，0.038mmol)在干dcm中的溶液在室温条件下搅拌4小时。用dcm稀释反应混合物，用盐水洗涤，干燥，并浓缩。在硅胶柱上用0到50％丙酮/环己烷色谱纯化所得残余物产生白色固体状的实施例38(3.5mg，16％产率)。lc-ms，es-：619.80[m-h]-.
[0551]
实施例157
[0552][0553][0554]
步骤1：在0℃下，向甲基三苯基溴化磷(479mg，1.34mmol)(在使用前与干燥的甲苯共同蒸发两次)在thf(4.2ml)中的悬浮液中加入在thf中的叔丁酸钾(1m，1.26ml，1.26mmol)。混合物变成黄色的泥浆状。在0℃下搅拌0.5小时。在0℃下逐滴加入157-(200mg，0.419mmol)在thf(1.0ml)中的溶液。在0℃下搅拌所得黄色泥浆1小时。加入过量的饱和nh4cl溶液退火反应。用乙酸乙酯和水稀释混合物。分离有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-50％在环己烷中的乙酸乙酯纯化残余物产生157-2(160mg，80％产率)。lc-ms，es

：476.10[m 1].
[0555]
步骤2：在室温条件下向157-2(112mg，0.235mmol)和nmo(83mg，0.706mmol)在丙酮
(2.10ml)/水(0.24ml)中的混合物加入四氧化锇2.5％在tbuoh中的溶液(443μl，0.035mmol)。室温下搅拌大约3小时后，用饱和na2so3溶液淬火所得反应混合物，然后用乙酸乙酯提取(2x)。用盐水洗涤所述结合的有机相，用硫酸钠干燥，并浓缩。粗产品157-3(118mg，98％产率)无需进一步纯化就在下一步骤中直接使用。lc-ms，es-：508.1[m-h].
[0556]
步骤3：在0℃下，向157-3(118mg，0.232mmol)在ch2cl2(2.32ml)和1h-咪唑(23.65mg，0.347mmol)中的溶液中加入叔丁基氯代二甲基硅烷(36.6mg，0.243mmol)。在室温条件下搅拌大约2hrs，用饱和亚硫酸钠使所得反应混合物淬火并用乙酸乙酯提取(2x)。用盐水洗涤所述结合的有机相，用硫酸钠干燥，并真空条件下浓缩。在硅胶色谱柱上用0-40％在环己烷中的乙酸乙酯纯化残余物产生157-4(126mg，87％产率)。lc-ms，es

：624.28[m 1].
[0557]
步骤4：在氢气气氛中，室温条件下搅拌157-4(126mg，0.202mmol)和10％pd-c(21.49mg，0.020mmol)在meoh(2.0ml)中的混合物。大约～1h后，用硅藻土过滤所得反应混合物，用甲醇洗涤，并浓缩产生粗产品157-5(99mg，100％产率)，所述粗产品直接用于下一步骤中.lc-ms，es

：490.5[m 1].
[0558]
步骤5：在0℃下，向157-5(99mg，0.202mmol)和4,6-二氟-1h-吲哚-2-羧酸(39.9mg，0.202mmol)在dmf(0.81ml)中的溶液中加入4-甲基吗啉(66.7μl，0.606mmol)，随后加入hatu(85mg，0.222mmol)。然后再室温条件下搅拌所得反应混合物3-4小时。检查：用乙酸乙酯稀释反应混合物，用水(2x)、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-40％在环己烷中的乙酸乙酯纯化残余物产生157-6(105mg，0.157mmol，78％产率)。lc-ms，es

：669.22[m 1].
[0559]
步骤6：在0℃下，向157-6(104mg，0.155mmol)在dcm(1.56ml)中的溶液中加入戴斯-马丁氧化剂(198mg，0.46mmol)。在0℃下搅拌反应混合物4-5小时直至tlc(丙酮/环己烷1/3)显示所有的sm都被消耗完。检查：用dcm稀释所述反应混合物，用10％na2s2o3和5％nahco3对反应混合物淬火。分离有机层，用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-40％丙酮/环己烷纯化残余物产生157-7(50mg，0.075mmol，48.2％产率)。lc-ms，es-：665.0[m-h].
[0560]
步骤7：在室温条件下向157-7(42mg，0.063mmol)在meoh(0.63ml)中的悬浮物中加入浓缩的高浓度盐酸水溶液(31.5μl，0.378mmol)。在室温条件下搅拌大约15分钟，在真空条件下浓缩所述反应混合物直至干燥。用乙酸乙酯稀释所述残余物，用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-50％丙酮在环己烷中的溶液纯化残余物产生实施例157-(26mg，0.047mmol，74.7％产率)。lc-ms，es-：550.90[m-h].1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.83(s，1h)，9.63(s，1h)，7.07(dd，j＝7.7，4.5hz，3h)，6.97
–
6.83(m，3h)，6.74(td，j＝10.3，2.1hz，1h)，5.55(t，j＝7.6hz，1h)，5.12(dd，j＝9.6，8.1hz，1h)，4.56(dd，j＝18.6，5.7hz，1h)，4.42(dd，j＝18.6，5.8hz，1h)，4.26(d，j＝10.3hz，1h)，4.09(t，j＝5.7hz，1h)，3.93(d，j＝10.2hz，1h)，3.46(s，3h)，2.44(ddd，j＝12.7，8.1，1.3hz，1h)，2.36(dd，j＝12.7，9.6hz，1h)，1.81(tq，j＝14.0，7.4，6.7hz，2h)，1.63(ddd，j＝14.3，12.9，6.7hz，1h)，1.02(d，j＝6.6hz，3h)，0.96(d，j＝6.5hz，3h)。
[0561]
实施例158
[0562][0563]
使用如上所述的相似的方案制备实施例158。[m-1]569.0；1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ11.25(s，1h)，9.63(s，1h)，7.13
–
7.02(m，2h)，6.96
–
6.81(m，4h)，5.54(t，j＝7.6hz，1h)，5.14(dd，j＝9.7，8.1hz，1h)，4.57(dd，j＝18.7，5.7hz，1h)，4.42(dd，j＝18.7，5.8hz，1h)，4.23(d，j＝10.5hz，1h)，4.11(t，j＝5.7hz，1h)，3.95(d，j＝10.3hz，1h)，3.45(s，3h)，2.45(dd，j＝12.7，8.1hz，1h)，2.36(dd，j＝12.7，9.7hz，1h)，1.90
–
1.74(m，2h)，1.67(dp，j＝13.6，6.7hz，1h)，1.03(d，j＝6.6hz，3h)，0.97(d，j＝6.5hz，3h)。
[0564]
实施例159
[0565][0566]
0℃下，向实施例158(11.6mg，0.020mmol)在thf(0.25ml)中的溶液中加入氯化锂(11.20mg，0.264mmol)和hunig's碱(10.6μl，0.061mmol)。然后，加入甲烷磺酰氯(3.78μl，0.048mmol)。在0℃到室温环境下搅拌反应混合物大约6小时。检查：用饱和nh4cl淬火反应混合物，用乙酸乙酯提取。分离有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-30％丙酮在环己烷中的溶液纯化残余物产生实施例159(4.5mg，37.6％产率)。lc-ms，es-：586.86[m-h]；1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ11.22(s，1h)，9.64(s，1h)，7.18
–
7.06(m，2h)，7.00
–
6.85(m，3h)，5.55(t，j＝7.7hz，1h)，5.13(t，j＝8.5hz，1h)，4.81(d，j＝16.5hz，1h)，4.65(d，j＝16.5hz，1h)，4.23(d，j＝10.6hz，1h)，4.00(d，j＝10.3hz，1h)，3.44(s，3h)，2.55
–
2.38(m，2h)，1.92
–
1.74(m，2h)，1.65(dt，j＝13.9，6.7hz，1h)，1.00(dd，j＝22.0，6.6hz，6h)。
[0567]
实施例39
[0568][0569]
步骤1
[0570]
化合物(1-4)(300mg，1.121mmol)和n-((苯甲基氧基)羰基)-n-甲基-l-亮氨酸(344mg，1.233mmol)被放入ch2cl2(5ml)和dmf(1ml)中。向其中加入4-甲基吗啉(246μl，2.241mmol)和hatu(469mg，1.233mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物1h，用dcm(30ml)稀释，和用饱和nahco3洗涤。用1m hcl和盐水洗涤收集的有机层，用na2so4过滤，并在真空中浓缩。在硅胶柱上用0-100％丙酮/环己烷纯化残余物产生化合物(39-1)(417mg，0.847mmol，76％产率)。[m-1]-，491.02.
[0571]
步骤20℃下向(39-1)(28mg，0.057mmol)在dcm(0.6ml)中的悬浮液中加入et3n(79μl，0.568mmol)和tfaa(40.1μl，0.284mmol)。将反应混合物回暖至室温并搅拌1小时。用冷的nahco3溶液退火反应并用乙酸乙酯提取。用水，1n hcl，饱和nahco3和盐水洗涤有机层，用na2so4干燥，过滤，并浓缩。在硅胶柱上纯化残余物产生实施例39(24mg，0.051mmol，89％产率)。[m-h]-473.17.1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.35
–
7.15(m，5h)，7.07
–
6.88(m，4h)，5.21
–
4.88(m，2h)，4.77(dd，j＝12.1，3.8hz，1h)，4.19
–
4.07(m，1h)，3.92(d，j＝10.7hz，1h)，3.71(p，j＝10.8hz，1h)，2.93(d，j＝4.8hz，3h)，2.75
–
2.57(m，2h)，1.79(ddt，j＝14.4，9.2，5.0hz，1h)，1.67(dq，j＝14.8，7.2，6.6hz，1h)，1.56
–
1.47(m，1h)，1.05
–
0.88(m，6h)。
[0572]
使用如上所述的相似的方案制备以下实施例。
[0573][0574][0575]
实施例42
[0576][0577]
步骤1
[0578]
将化合物(39-1)(1323mg，2.69mmol)溶解在meoh(30ml)中。加入10％pd-c(143mg，0.134mmol。在氢气(气球)中搅拌反应混合物1小时并用硅藻土垫过滤。在真空中浓缩滤出物产生化合物(42-1)。[m h]

359.2
[0579]
步骤2
[0580]
向4-甲氧基-1h-吲哚-2-羧酸(0.111g，0.583mmol)，化合物(42-1)(0.182g，0.507mmol)和hatu(0.212g，0.558mmol)在dcm(0.3ml)中的悬浮液中加入dipea(0.266ml，1.521mmol)在dmf(0.35ml)中的溶液。在室温条件下搅拌反应混合物1h，用水淬火，并用乙酸乙酯提取.用1n hcl，饱和nahco3和盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩.在硅胶柱上纯化残余物产生化合物(42-2)(160mg，0.301mmol，59.4％产率)。[m-h]-530.18.
[0581]
步骤3
[0582]
将化合物(42-2)(150mg，0.282mmol)溶解在ch2cl2(1.9ml)中。0℃下加入et3n(0.32ml，2.26mmol)和tfaa(0.16ml，1.13mmol)。在0℃下搅拌反应混合物20分钟，用nahco3水溶液萃取，并用dcm提取(2x)。用硫酸钠干燥结合的有机层并在真空中浓缩。在硅胶柱上用0-40％丙酮/环己烷纯化残余物产生实施例42(114mg，0.222mmol，79％产率)。[m-h]-512.18；1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.15(t，j＝8.0hz，1h)，7.05(t，j＝7.8hz，1h)，7.01
–
6.94(m，2h)，6.90(s，1h)，6.85(dd，j＝15.4，7.7hz，2h)，6.52(d，j＝7.7hz，1h)，5.53(brs，1h)，5.19(t，j＝8.0hz，1h)，4.21(d，j＝11.0hz，1h)，3.99(d，j＝11.0hz，1h)，3.96(s，3h)，3.40(s，3h)，2.75
–
2.60(m，2h)，1.96
–
1.76(m，2h)，1.63(ddt，j＝14.6，13.0，6.6hz，1h)，1.47(s，1h)，1.26(t，j＝7.1hz，1h)，1.01(m，6h)。
[0583]
使用如上所述的相似的方案制备以下实施例。
[0584]
[0585]
[0586]
[0587]
[0588]
[0589]
[0590]
[0591]
[0592]
[0593]
[0594]
[0595]
[0596]
[0597]
[0598]
[0599]
[0600]
[0601]
[0602]
[0603]
[0604]
[0605]
[0606]
[0607]
[0608]
[0609]
[0610]
[0611]
[0612]
[0613]
[0614]
[0615]
[0616]
[0617]
[0618]
[0619]
[0620]
[0621]
[0622]
[0623]
[0624]
[0625]
[0626]
[0627]
[0628]
[0629]
[0630]
[0631]
[0632]
[0633]
[0634]
[0635]
[0636]
[0637]
[0638]
[0639]
[0640]
[0641]
[0642]
[0643]
[0644]
[0645]
[0646]
[0647]
[0648]
[0649]
[0650]
[0651]
[0652][0653]
实施例367
[0654][0655]
向实施例366(17mg，0.033mmol)在dcm(2ml)中的溶液中加入tfa(0.03ml)，并且在室温条件下搅拌所得反应混合物4小时。除去溶剂，产生标题化合物实施例367(17mg，100％)。[m 1]412.47.
[0656]
实施例368
[0657][0658]
向实施例367(61mg，0.12mmol)和2,4-二氟苯甲酸(19mg，0.12mmol)在dmf(2ml)中的溶液中加入hatu(46mg，0.12mmol)和dipea(0.04ml，0.36mol)。在室温条件下搅拌所得反应混合物4小时并浓缩。在硅胶柱上色谱纯化所述粗产品产生实施例368(17mg，21％)。[m-1]550.36
[0659]
实施例89
[0660][0661]
步骤1
[0662]
在0℃下向(s)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-3-环丁基丙酸(2.68g，9.66mmol)和mei(4.83ml，77mmol)在thf(30ml)中的混合物中分部分加入nah(1.16g，29mmol)。在室温条件下搅拌所得反应混合物2天，用冰水退火并用mbte(2x)洗涤。用1n hcl将水相层酸化到ph～2并用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤收集的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩产生理想化合物(89-1)(2.54g，90％产率)。esi-ms m/z＝290.12[m-h]-.
[0663]
步骤2
[0664]
向化合物(1-4)(2.33g，6.96mmol)，化合物(89-1)(2.54g，8.70mmol)和4-甲基吗啉(3.06ml，27.9mmol)在dcm/dmf(5/5ml)中的溶液中加入hatu(2.78g，7.31mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物2h，用水淬火，并用乙酸乙酯提取。用水，1n hcl，饱和nahco3和盐水洗涤收集的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。在硅胶柱上纯化残余物产生化合物(89-2)(3.16g，90％产率)。esi-ms m/z＝503.19[m-h]-.
[0665]
步骤3
[0666]
在0℃下，向化合物(89-2)(45mg，0.089mmol)和et3n(99μl，0.713mmol)在dcm(1ml)中的混合物中逐滴加入tfaa(50.4μl，0.357mmol)。在室温下搅拌所得反应混合物30分钟，用冷的饱和nahco3水溶液退火，和用乙酸乙酯提取。用水，1n hcl，饱和nahco3，和盐水洗涤收集的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。在硅胶柱上纯化残余物产生实施例89(23mg，53％产率)。esi-ms m/z＝485.19[m-h]-.
[0667]
按照上面描述的相似的方法制备以下实施例。
[0668][0669][0670]
实施例91
[0671][0672]
步骤1
[0673]
使用氢气球向化合物(89-2)(65mg，0.13mmol)和pd-c(13.7mg，0.013mmol)在meoh(1ml)中的溶液中通入氢气。1小时后，用dcm稀释混合物，用硅藻土过滤，并浓缩产生化合物(91-1)(48mg，100％)。esi-ms m/z＝369.19[m-h]-.
[0674]
步骤2
[0675]
在室温下向化合物(91-1)(0.032g，0.086mmol)，4，6-二氟代-1h-吲哚-2-羧酸(0.021g，0.108mmol)，dipea(0.045ml，0.258mmol)在dcm/dmf(0.5/0.5ml)中的混合物中加
入hatu(39mg，0.103mmol)。在室温条件下搅拌所得反应混合物20h，用水退火，并用乙酸乙酯提取。用水和盐水洗涤收集的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩.在硅胶柱上纯化残余物产生化合物(91-2)(34mg，72％产率)。esi-ms m/z＝548.21[m-h]-.
[0676]
步骤3
[0677]
在0℃下，向化合物(91-2)(34mg，0.062mmol)和et3n(86μl，0.619mmol)在dcm(1ml)中的混合物中加入tfaa(44μl，0.31mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物30min，用冷的饱和nahco3水溶液退火，并用乙酸乙酯提取.用1n hcl、饱和nahco3、盐水洗涤收集的有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。在硅胶柱上用0-40％丙酮/环己烷纯化残余物产生实施例91(17mg，52％产率)。esi-ms m/z＝530.20[m-h]-.1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.65(s，1h)，9.51(s，1h)，6.97
–
6.83(m，3h)，6.81
–
6.72(m，2h)，6.67(t，j＝7.6hz，1h)，6.60(td，j＝10.3，2.1hz，1h)，5.28(t，j＝7.4hz，1h)，5.05(t，j＝8.2hz，1h)，4.08(d，j＝10.7hz，1h)，3.82(d，j＝10.6hz，1h)，3.28(s，3h)，2.69(s，1h)，2.67
–
2.48(m，2h)，2.22(hept，j＝7.7hz，1h)，1.89(d，j＝7.4hz，3h)，1.74
–
1.53(m，4h)。
[0678]
使用如上所述的相似的方案制备以下实施例。
[0679]
[0680]
[0681]
[0682]
[0683]
[0684]
[0685]
[0686]
[0687]
[0688]
[0689]
[0690][0691]
实施例96
[0692][0693]
步骤1
[0694]
在0℃下，向((苯甲基氧基)羰基)-l-亮氨酸(1.56g，5.88mmol)和3-碘代丙-1-烯(0.807ml，8.82mmol)在thf(30ml)中的溶液中分部分加入nah(0.706g，17.64mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物4天，用冰水退火，并用mbte洗涤两次。用1n hcl将水相层酸化到ph～2，并用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤收集的有机层，用na2so4干燥，过滤，并浓缩产生化合物(96-1)(1.15g，64.0％产率)。esi-ms m/z＝304.12[m-h]-.
[0695]
步骤2
[0696]
向化合物(1-4)(221mg，0.826mmol)，化合物(96-1)(265mg，0.868mmol)和dipea(577μl，3.31mmol)在dcm/dmf(0.8/0.8ml)中的溶液中加入hatu(314mg，0.826mmol)。在室温下搅拌所得反应混合物16h，用水淬火，并用乙酸乙酯提取。用水，1n hcl，饱和nahco3和盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩.在硅胶色谱上用0-10％meoh/dcm纯化所得残余物得到化合物(96-2)(262mg，61.1％产率)。esi-ms m/z＝517.20[m-h]-.
[0697]
步骤3
[0698]
在0℃下，向化合物(96-2)(22mg，0.042mmol)和et3n(59.1μl，0.424mmol)在dcm(1ml)中的溶液中加入tfaa(30.0μl，0.212mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物30分钟，用冷的饱和nahco3水溶液退火，并用乙酸乙酯提取。用水，1n hcl，饱和nahco3和盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。在硅胶柱上用0-50％丙酮/环己烷纯化残余物产生实施例96(20mg，94％产率)。esi-ms m/z＝499.20[m-h]-.
[0699]
实施例97
[0700][0701]
步骤1
[0702]
使用氢气球，在氢气环境中搅拌化合物(96-2)(105mg，0.202mmol)和pd-c(21.55mg，0.020mmol)在meoh(3ml)中的混合物。1小时后，用dcm稀释混合物，用硅藻土过滤，并浓缩产生化合物(97-1)(79mg，100％)。esi-ms m/z＝385.19[m-h]-.
[0703]
步骤2
[0704]
向化合物(97-1)(0.039g，0.10mmol)在dcm/dmf(0.5/0.5ml)和et3n(0.098ml，0.70mmol)中的混合物中加入cbz-cl(0.042ml，0.30mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物16h，用液态nh3淬火，并用乙酸乙酯提取。用水和盐水洗涤有机层，n2so4干燥，过滤，并浓缩。在硅胶色谱上使用0-10％meoh/dcm纯化所得残余物产生化合物(97-2)(10mg，19％产率)。esi-ms m/z＝519.22[m-h]-.
[0705]
步骤30℃下，向化合物(97-2)(10mg，0.019mmol)和et3n(53.5μl，0.384mmol)在dcm(0.5ml)中的混合物中加入tfaa(27.1μl，0.192mmol)。用冷饱和nahco3水溶液淬火，并用乙酸乙酯提取。用1n hcl，饱和nahco3溶液和盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。在硅胶色谱上使用0-50％丙酮/环己烷纯化所得残余物产生实施例97(7.0mg，72.5％产率)esi-ms m/z＝501.22[m-h]-.
[0706]
实施例98
[0707][0708]
步骤1
[0709]
在室温条件下搅拌4-氟代-1h-吲哚-2-羧酸(0.054g，0.30mmol)和1-氯代-n，n，2-三甲基丙-1-烯-1-胺(0.044ml，0.330mmol)在dcm(1ml)中的混合物1小时。将所得混合物加入到化合物(97-1)和et3n(0.108ml，0.85mmol)在dcm/dmf(0.5/0.5ml)中的溶液中。在室温条件下搅拌所得反应混合物20小时，用液态nh3淬火并用乙酸乙酯提取。用水和盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩.在硅胶色谱中使用0-10％meoh/dcm纯化所得残余物产生化合物(98-1)(40mg，69％产率)。esi-ms m/z＝546.23[m-h]-.
[0710]
步骤2
[0711]
在0℃下，向化合物(98-1)(40mg，0.073mmol)和et3n(10.18μl，0.073mmol)在dcm(1ml)中的溶液中加入tfaa(10.32μl，0.073mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物30min，用冷的饱和nahco3溶液淬火，并用乙酸乙酯提取。用1n hcl，饱和nahco3和盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。在硅胶色谱中使用0-50％丙酮/环己烷纯化所得残余物产生实施例98(35mg，90％产率)。esi-ms m/z＝528.20[m-h]-.
[0712]
按照上面描述的相似的方法制备以下实施例。
[0713][0714]
实施例100
[0715]
[0716][0717]
合成(s)-2-(((苯甲基氧基)羰基)(甲基)氨基)-5-甲基己酸
[0718]
步骤1：
[0719]
在0℃下，向(s)-2-氨基-5-甲基己酸(0.9g，6.20mmol)在甲苯/水(12.4ml/3ml)中的溶液中加入2n naoh(9.30ml，18.59mmol)，随后加入cbz-cl(0.973ml，6.82mmol)。在室温条件下搅拌2小时，分离两层，并用mbte(2x)洗涤水相层，并在0℃下用1n hcl溶液将所得反应溶液酸化到ph～2。用乙酸乙酯提取(3x)反应混合物。用盐水洗涤结合的有机相，用硫酸钠干燥，并浓缩产生(s)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-5-甲基己酸(1.42g，5.08mmol，82％产率)，该化合物不需要进一步纯化就可以在下一步骤中使用。lc-ms，es-：277.77[m-1].
[0720]
步骤2：
[0721]
向(s)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-5-甲基己酸(660mg，2.363mmol)和多聚甲醛(426mg，14.18mmol))在干燥的乙腈(11.8ml)中的混合物中加入4-甲基苯甲基磺酸水合物(44.9mg，0.236mmol)。在130℃下微波加热所得混合物10分钟。冷却至室温之后，用硅藻土过滤所得混合物，浓缩并用dcm捕获，产生粘稠的油状粗产品苯甲基(s)-4-异戊基-5-氧代噁唑烷-3-羧酸盐，该化合物不需要进一步纯化就可以在下一步骤中使用。
[0722]
步骤3：
[0723]
像上述步骤中得到的苯甲基(s)-4-异戊基-5-氧代噁唑烷-3-羧酸盐粗品中加入dcm(24ml)，三乙基硅烷(1.89ml，11.81mmol)，和2，2，2-三氟乙酸(7.28ml，95mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物2小时，浓缩并用dcm(3x)捕获。在0℃下用1n naoh碱化残余物至ph～10，并用etoac(1x)和mbte(1x)洗涤。用1n hcl将水相层酸化到ph～2，并用乙酸乙酯提取(2x)。用盐水洗涤结合的有机相，干燥，并浓缩产生化合物(s)-2-(((苯甲基氧基)羰基)(甲基)氨基)-5-甲基己酸(715mg，2个步骤产量为92％产率)。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ12.56(s，1h)，7.41
–
7.27(m，5h)，5.17
–
5.00(m，2h)，4.48(ddd，j＝27.4，11.1，4.7hz，1h)，2.81(s，2h，n-me旋转异构体)，2.78(s，1h，n-me旋转异构体)，1.84(tq，j＝9.6，4.6，4.1hz，1h)，1.70(ddd，j＝14.4，9.6，4.5hz，1h)，1.52(dt，j＝12.8，6.5hz，1h)，1.21
–
0.99(m，2h)，0.84(dd，j＝9.2，6.6hz，6h)。
[0724][0725]
合成实施例100
[0726]
步骤1：
[0727]
在0℃下，向(s)-2-(((苯甲基氧基)羰基)(甲基)氨基)-5-甲基己酸(300mg，1.023mmol)和(1-4)(261mg，0.974mmol)在干ch2cl2(2.96ml)中的混合物中加入dipea(510μl，2.92mmol)和hatu(481mg，1.266mmol)。在室温条件下搅拌所得反应混合物2小时。用dcm稀释混合物，用水(2x)、盐水洗涤，干燥，并浓缩。在硅胶柱上用0-10％meoh/dcm纯化残余物得到苯甲基((s)-1-((3r，5's)-5'-氨基甲酰-2-氧螺旋[吲哚啉-3，3'-吡咯烷]-1'-基)-5-甲基-1-氧己-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(100-1)(189mg，38％产率)。lc-ms，es-：505.0[m-1].
[0728]
步骤2
[0729]
在0℃下，向化合物(100-1)(31mg，0.061mmol)和et3n(85μl，0.612mmol)在干dcm(0.8ml)中的混合物中加入tfaa(43.2μl，0.306mmol)。在室温条件下搅拌1h，用dcm稀释反应混合物，用饱和nahco3、水、盐水洗涤，干燥并浓缩。在硅胶色谱上用0-40％丙酮/环己烷纯化所得残余物产生实施例100(25mg，84％产率)。lc-ms，es

：488.96[m 1].
[0730]
使用如上所述的相似的方案制备以下实施例。
[0731]
[0732][0733]
实施例104
[0734][0735]
步骤1：
[0736]
在氢气环境中，室温条件下搅拌化合物(100-1)(152mg，0.300mmol)和10％pd-c(31.9mg，0.030mmol)在meoh(3.00ml)中的混合物。1小时后，用硅藻土过滤，用meoh冲洗，并浓缩产生粗品(3r，5's)-1'-((s)-5-甲基-2-(甲基氨基)己酰基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3，3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(104-1)(112mg，0.301mmol，100％产率)，该化合物可以在下一步骤中直接使用。lc-ms，es ：372.99[m h]

.
[0737]
步骤2：
[0738]
在0℃下，向化合物(104-1)(85mg，0.228mmol)和4，6-二氟代-1h-吲哚-2-羧酸(47.2mg，0.240mmol)在干dmf(1.14ml)中的混合物中加入hunig’s碱(122μl，0.685mmol)和hatu(113mg，0.297mmol)。然后在室温条件下搅拌所得反应混合物1小时，用dcm稀释，用水(2x)和盐水洗涤。干燥有机层并浓缩。粗产品(104-2)无需进一步纯化直接在下一步骤中使用。lc-ms，es-：550.2[m-h]-.
[0739]
步骤3：
[0740]
0℃下，用tfaa(0.155ml，1.100mmol)处理粗品(3r，5's)-1'-((s)-2-(4，6-二氟代-n-甲基-1h-吲哚-2-羧酰胺)-5-甲基己酰基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3，3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(104-2)(0.121g，0.22mmol)和et3n(0.307ml，2.20mmol)在dcm(2.9ml)中的混合物，在
室温条件下搅拌30min，用dcm稀释反应混合物，用饱和nahco3，水和盐水洗涤，干燥，并浓缩。在硅胶色谱上用0-40％丙酮/环己烷纯化所得反应残余物产生实施例104(62mg，53％产率for 3步骤s)。lc-ms，es-：532.01[m-h]-.1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.84(s，1h)，9.69(s，1h)，7.12
–
6.99(m，3h)，6.97
–
6.93(m，1h)，6.90(d，j＝7.6hz，1h)，6.86
–
6.78(m，1h)，6.74(td，j＝10.3，2.1hz，1h)，5.45(dd，j＝8.8，6.4hz，1h)，5.22(t，j＝8.2hz，1h)，4.26(d，j＝10.7hz，1h)，3.99(d，j＝10.7hz，1h)，3.46(s，3h)，2.74
–
2.64(m，2h)，2.04
–
1.91
[0741]
使用如上所述的相似的方案制备以下实施例。
[0742]
[0743]
[0744]
[0745]
[0746]
[0747]
[0748]
[0749][0750]
实施例413
[0751][0752]
步骤1.
[0753][0754]
在-45℃下，向((苯甲氧)羰基)-l-丝氨酸(1.25g，5.23mmol)在dmf(20ml)中的溶液中加入nahmds(1m在thf中的溶液)(10.97ml，10.97mmol)，然后在-45℃下搅拌所得反应混合物20分钟，加入烯丙基溴(0.543ml，6.27mmol)(在k2co3中摇匀)，然后将反应混合物缓慢回暖至室温，并搅拌18小时。将反应混合物冷却至-20℃，用acoh(0.359ml，6.27mmol)淬火，用etoac/1n hcl稀释，并分离有机层，用水、盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。在硅胶上用combiflash纯化所得残余物用0-60％丙酮/环己烷洗脱产生o-烯丙基-n-((苯甲氧)羰基)-l-丝氨酸(1.04g，3.72mmol，71.3％产率)。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.45
–
7.25(m，5h)，5.96
–
5.71(m，1h)，5.65(d，j＝8.5hz，1h)，5.26
–
5.12(m，2h)，5.10(d，j＝3.3hz，2h)，4.49(dt，j＝7.6，3.4hz，1h)，3.97(d，j＝5.8hz，2h)，3.90(dd，j＝9.5，3.2hz，1h)，3.68(dd，j＝9.5，3.6hz，1h)。
[0755]
步骤2.
[0756][0757]
向o-烯丙基-n-((苯甲氧)羰基)-l-丝氨酸(500mg，1.790mmol)，多聚甲醛(323mg，
10.74mmol)在乙腈(8ml)中的混合物中加入ptsa(23.84mg，0.125mmol)，并在70℃下搅拌所得反应混合物14小时，将混合物冷却至室温，用硅藻土过滤并收集滤出物，然后浓缩。用dcm追踪残余物。
[0758]
向残余物中加入dcm(8ml)和tfa(2759μl，35.8mmol)，三乙基硅烷(858μl，5.37mmol)，并在室温条件下搅拌所得反应混合物6小时。浓缩反应混合物，并用dcm追踪。用etoac、naoh(1n)溶液稀释所得混合物，然后用hcl(1n)将ph调节到～4。分离有机层，并用乙酸乙酯提取(2x)水相层。结合有机层，用盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩并在硅胶上用combiflash纯化所得残余物，用0-5％meoh/dcm洗脱产生o-烯丙基-n-((苯甲氧)羰基)-n-甲基-l-丝氨酸(287mg，0.978mmol，54.7％产率)。
[0759]
步骤3.
[0760][0761]
向o-烯丙基-n-((苯甲氧)羰基)-n-甲基-l-丝氨酸(70mg，0.239mmol),(3r,5's)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-盐酸甲酰胺(80mg，0.239mmol)和hatu(109mg，0.286mmol)在dcm(2ml)/dmf(0.4ml)中的混合物中加入4-甲基吗啉(121mg，1.193mmol)。在室温条件下搅拌所得反应混合物14小时，浓缩反应混合物，并用乙酸乙酯稀释残余物，用水、盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。在硅胶上用combiflash纯化残余物用0到10％meoh/dcm洗脱产生苯甲基((s)-3-(烯丙基氧)-1-((3r,5's)-5'-氨基甲酰-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-1-氧丙-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(163mg)。lc-ms，es

：507.22[m h].
[0762]
步骤4.
[0763][0764]
向苯甲基((s)-3-(烯丙基氧)-1-((3r,5's)-5'-氨基甲酰-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-1-氧丙-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(30mg，0.06mmol)，pd-c(6.39mg，6.00μmol)中加入meoh(1.5ml)，并在氢气环境中搅拌所得反应混合物1.5小时。使用硅藻土过滤所得混合物，并浓缩滤出物。
[0765]
向滤出物中加入4,6-二氟-1h-吲哚-2-羧酸(15mg，0.078mmol)，hatu(32mg，0.084mmol)，dcm(1ml)和dmf(0.25ml)和4-甲基吗啉(24mg，0.240mmol)，然后再室温条件下搅拌所得反应混合物18小时。浓缩反应混合物，在硅胶上纯化所得残余物用0-10％meoh/dcm洗脱产生(3r,5's)-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-o-丙基-l-丝氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(36mg)。lc-ms，es

：576.2[m na].
[0766]
步骤5.
[0767][0768]
室温条件下向(3r,5's)-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-o-丙基-l-丝氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(36mg，0.065mmol)在dcm(2ml)中的溶液中加入tea(72.5μl，0.52mmol)和tfaa(45.9μl，0.325mmol)，室温条件下搅拌所得反应混合物30分钟。浓缩反应混合物，用meoh(1.2ml)稀释，并加入nh3(conc.0.8ml)并在室温条件下搅拌30分钟。浓缩反应混合物。在硅胶上用combiflash纯化残余物用0-60％丙酮/环己烷洗脱产生n-((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-1-氧-3-丙氧丙-2-基)-4,6-二氟-n-甲基-1h-吲哚-2-甲酰胺(12mg)。lc-ms，es

：558.2[m na].
[0769]
实施例414
[0770][0771]
步骤1：用n-甲基吗啉(50μl，0.455mmol)和hatu(52mg，0.137mmol)处理(3r,5's)-1'-((s)-3-环丙基-2-(甲基氨基)丙基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(44mg，0.123mmol)和(s)-2-(4-氟代苯基)-2-羟基乙酸(22.00mg，0.129mmol)在dmf(0.1ml)和ch2cl2(0.4ml)中的溶液。在室温条件下搅拌所得反应混合物过夜。用二氯甲烷稀释所得混合物并用饱和碳酸氢钠水溶液淬火。用二氯甲烷提取水相层3次。用硫酸钠干燥结合的有机层，过滤并真空条件下浓缩。粗产品被加入4g硅胶柱中并用0％-100％的丙酮/环己烷洗脱，产生(3r,5's)-1'-((s)-3-环丙基-2-((s)-2-(4-氟代苯基)-2-羟基-n-甲基酰胺基)丙基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(16mg，0.031mmol，25.5％产率)白色固体。lc-ms，es-：507.36[m-h].
[0772]
步骤2：在0℃下，用tea(40μl，0.287mmol)和tfaa(16μl，0.113mmol)处理(3r,5's)-1'-((s)-3-环丙基-2-((s)-2-(4-氟代苯基)-2-羟基-n-甲基乙酰胺)丙基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(14mg，0.028mmol)在ch2cl2(0.4ml)中的溶液。在0℃下搅拌反应混合物1小时，然后用氢氧化铵淬火并继续搅拌30分钟。用二氯甲烷提取水相层三次。用硫酸钠干燥结合的有机层，过滤并真空条件下浓缩。粗产品被加入到4克硅胶柱中并
用0％到100％的乙酸乙酯/环己烷洗脱产生(s)-n-((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-3-环丙基-1-氧丙-2-基)-2-(4-氟代苯基)-2-羟基-n-甲基乙酰胺(12mg，0.024mmol，89％产率)白色固体。lc-ms，es-：489.34[m-h]；1h nmr(500mhz，甲醇-d4)δ7.35
–
7.18(m，3h)，7.03
–
6.86(m，5h)，5.37
–
5.27(m，2h)，5.05(t，j＝7.9hz，2h)，3.98(d，j＝10.6hz，1h)，3.79(d，j＝10.5hz，1h)，2.93(s，3h)，2.67
–
2.52(m，2h)，1.88(dt，j＝14.5，7.5hz，1h)，1.64(dt，j＝14.0，7.0hz，1h)，0.73(ddt，j＝10.3，7.4，3.7hz，1h)，0.57
–
0.44(m，2h)，0.22
–
0.10(m，2h)。
[0773]
使用如上所述的相似的方法制备下列实施例.
[0774]
[0775]
[0776]
[0777]
[0778]
[0779][0780]
实施例429
[0781][0782]
步骤1：向甲基l-亮氨酸盐酸(200mg，1.10mmol)在thf(3.3ml)中的溶液中加入4-甲氧基苯甲醛(300mg，2.2mmol)，dipea(192μl，1.1mmol)和mgso4(225mg，1/87mmol)。在室温条件下搅拌所得反应混合物过夜。用硅藻土过滤粗产品并蒸发至干燥.粗产品被放入甲醇(3.3ml)中并加入硼氢化钠(83mg，2.2mmol)。用饱和nh4cl淬火反应混合物，用乙酸乙酯提取。分离有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-70％在环己烷中的乙酸乙酯纯化残余物产生理想产物(249mg，85％)。
[0783]
步骤2：向来自步骤1(249mg，0.94mmol)中的材料在thf(3ml)和甲醇(2ml)中的溶液中加入lioh(1ml，2m，2mmol)。完成后，用1m hcl将所得反应混合物酸化至ph为3，用乙酸乙酯提取，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥产生理想产物，所述产物不需要纯化就可以使用。
[0784]
步骤3：向来自步骤3(35mg，0.139mmol)中的材料和螺环中间体(37mg，0.139mmol)中的溶液中加入hatu(53mg，0.139mmol)和dipea(73μl，0.418mmol)。在室温条件下搅拌所得反应混合物过夜。用水淬火反应混合物，用乙酸乙酯提取。分离有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-80％丙酮在环己烷中的溶液纯化残余物产生理想产物(41mg，63％)。
[0785]
步骤4：在0℃下，向来自步骤3(41mg，0.088mmol)中的材料在dcm(1ml)中的溶液中加入tfaa(37μl，0.265mmol)和et3n(74μl，0.530mmol)。粗产品被直接装载在硅胶柱上并用0-80％丙酮在环己烷中的溶液洗脱色谱纯化，产生ep-037611(30mg，63％)。lc-ms，es 543.056[m h].1h nmr(400mhz，丙酮-d6 1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ9.65(s，1h)，7.38
–
7.26(m，3h)，7.19(d，j＝7.4hz，1h)，7.11
–
7.05(m，1h)，7.07
–
6.95(m，3h)，6.97(s，1h)，5.04(s，1h)，4.81(s，2h)，4.06(s，1h)，4.00(d，j＝10.7hz，1h)，3.88(d，j＝10.2hz，1h)，3.82(s，3h)，2.63(t，j＝5.9hz，2h)，2.56(s，1h)，1.94(s，1h)，1.37(s，1h)，0.85(d，j＝7.1hz，4h)，0.75(d，j＝5.9hz，2h)，0.62(s，1h)。19f nmr(400mhz，丙酮-d6)δ69.4使用如上所述的相似的方法制备下列实施例。
[0786]
[0787]
[0788][0789]
实施例119
[0790][0791]
步骤1
[0792]
在室温条件下向化合物(23-5)(64mg，0.127mmol)在干丙酮(0.634ml)的溶液中加入k2co3(26.3mg，0.190mmol)和二甲基磺酸酯(18.04μl，0.190mmol)。然后加热所得反应混合物并回流2小时。2小时后，加入另一份二甲基磺酸酯(6.0μl，0.06mmol)并再次加热反应混合物3小时。浓缩所得反应混合物至干燥。用乙酸乙酯稀释残余物，用水，盐水洗涤，干燥，并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-50％丙酮/环己烷纯化所得残余物产生化合物(119-1)(53mg，81％产率)。lc-ms，es ：519.14[m h]

.
[0793]
步骤2
[0794]
在0℃下，向化合物(119-1)(51mg，0.098mmol)在干dcm(0.98ml)中的溶液中加入戴斯-马汀氧化剂(62.6mg，0.148mmol)。在0℃下搅拌反应混合物3小时。在硅胶色谱上用0-55％etoac/环己烷纯化所得反应残余物产生实施例119(28mg，55％产率)。lc-ms，es ：517.06[m h]

.1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.52(s，1h)，9.52(d，j＝1.9hz，1h)，7.75
–
7.69(m，1h)，7.23
–
7.16(m，3h)，7.03
–
6.95(m，2h)，6.92
–
6.85(m，2h)，6.40(dd，j＝7.2，1.2hz，1h)，4.84(ddd，j＝9.7，8.3，4.8hz，1h)，4.54(ddd，j＝9.2，6.1，2.0hz，1h)，4.12(d，j＝10.4hz，1h)，3.96(d，j＝10.4hz，1h)，3.79(s，3h)，3.07(s，3h)，2.37
–
2.29(m，1h)，2.20(dd，j＝13.1，6.1hz，1h)，1.71(ddd，j＝14.5，9.8，4.2hz，2h)，1.66
–
1.58(m，1h)，0.84(dd，j＝10.7，6.4hz，6h)。
[0795]
实施例120
[0796][0797]
步骤1
[0798]
向实施例119(24mg，0.046mmol)在干dmso(0.186ml)中的溶液中加入羟基胺盐酸盐(4.36mg，0.063mmol)。在室温条件下搅拌1h，用乙酸乙酯稀释反应混合物，用水(2x)、盐水洗涤，干燥，并浓缩产生粗品肟中间体(118-1)(21mg)，可以在下一步骤中直接使用.lc-ms，es ：532.13[m h]

.
[0799]
步骤2
[0800]
向粗品肟中间体(120-1)(21mg，0.046mmol)在干乙腈(0.79ml)中的溶液中加入cu(oac)2(1.4mg，7.9μmol)。将反应混合物加热到70℃并维持1小时，然后浓缩。在硅胶色谱上使用0到50％丙酮/环己烷纯化所得残余物产生实施例120(8mg，40％产率)。lc-ms，es ：514.09[m h]

.1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.60(s，1h)，7.88(d，j＝8.2hz，1h)，7.35(dd，j＝2.3，0.8hz，1h)，7.29(td，j＝7.7，1.2hz，1h)，7.20
–
7.08(m，3h)，7.02(d，j＝7.8hz，1h)，6.95(td，j＝7.6，1.0hz，1h)，6.55(dd，j＝7.4，1.0hz，1h)，5.17(t，j＝8.3hz，1h)，4.91(ddd，j＝9.8，8.2，4.6hz，1h)，4.34(d，j＝10.3hz，1h)，4.05(d，j＝10.4hz，1h)，3.95(s，3h)，3.24(s，3h)，2.70(dd，j＝8.3，3.9hz，2h)，1.85(ddd，j＝12.7，9.4，4.7hz，2h)，1.73(dt，j＝9.4，5.3hz，1h)，0.99(dd，j＝15.9，6.4hz，6h)。
[0801]
实施例121
[0802][0803]
步骤1
[0804]
室温条件下向实施例42(30mg，0.058mmol)在干丙酮(0.29ml)中的混合物中加入k2co3(12.11mg，0.088mmol)和二甲基磺酸酯(8.31μl，0.088mmol)。然后加热所得反应混合
物回流3小时。然后浓缩反应混合物除去丙酮，用乙酸乙酯稀释反应混合物，用水、盐水洗涤，干燥并浓缩。在硅胶柱上用0-50％丙酮/环己烷纯化残余物产生实施例121(16mg，81％产率)。lc-ms，es-：526.03[m-1].1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.36(s，1h)，7.20
–
7.10(m，2h)，7.10
–
7.03(m，2h)，7.00
–
6.91(m，2h)，6.87(t，j＝7.5hz，1h)，6.55(d，j＝7.7hz，1h)，5.57(dd，j＝9.6，5.6hz，1h)，5.20(t，j＝8.1hz，1h)，4.25(d，j＝10.7hz，1h)，4.00(d，j＝10.6hz，1h)，3.97(s，3h)，3.45(s，3h)，3.22(s，3h)，2.77
–
2.63(m，2h)，1.93(ddd，j＝14.4，9.6，5.1hz，1h)，1.77(ddd，j＝14.2，8.7，5.6hz，1h)，1.62(dtd，j＝8.6，6.6，5.0hz，1h)，0.98(dd，j＝23.1，6.6hz，6h)。
[0805]
实施例122
[0806][0807]
步骤1
[0808]
将化合物(1-3)(425mg，1.38mmol)悬浮在dcm(5ml)中。逐滴加入et3n(0.54ml，3.9mmol)和tfaa(0.36ml，2.57mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物30分钟。在加入第二部分的et3n(0.2ml)，随后加入tfaa(0.12ml)。在室温条件下搅拌反应混合物20分钟并浓缩。在硅胶柱上纯化残余物产生化合物(122-1)(320mg，80％)。esi-ms m/z＝314.05[m h]

[0809]
步骤2：
[0810]
将二甲基吡啶(0.18ml，1.05mmol)在dcm(1ml)中的混合物冷却至0℃.加入tmsotf(0.2ml，0.95mmol)并在0℃下搅拌反应混合物5分钟。在另一个试管中，将化合物(122-1)(100mg，0.32mmol)在dcm(1ml)中的混合物冷却至0℃。逐滴加入tmsotf/二甲基吡啶溶液(1.9ml)并在0℃下搅拌所得反应混合物20分钟。加入nahco3(4ml)水溶液和搅拌反应混合物10分钟和用dcm提取(2x)。用csf(0.5m)水溶液和盐水洗涤结合的有机相，用na2so4干燥，并浓缩产生黄色固体状的化合物(122-2)(68mg，100％)。esi-ms m/z＝213.88[m h]

.
[0811][0812]
步骤3
[0813]
将亮氨酸叔丁酯盐酸盐(1.0g，4.47mmol)和苯甲基异氰酸酯(595mg，4.47mmol)在dcm(6ml)中混合。在0℃下加入tea(1.25ml，8.95mmol)。在室温条件下搅拌反应混合物3小时并浓缩。在硅胶上纯化所得残余物产生无色泥浆状的化合物(122-3)(1.5g)。esi-ms m/z＝321.07[m h]
.
[0814]
步骤4
[0815]
向化合物(122-3)(1.5g)在dcm(12ml)中的溶液中加入tfa(1.27ml，23mmol)。室温条件下搅拌反应混合物过夜并浓缩。在硅胶上纯化所得残余物产生黄色油状的化合物(122-4)(301mg，两步骤25％)。esi-ms m/z＝265.02[m h]
.
[0816]
步骤5
[0817]
向化合物(122-2)(20mg，0.094mmol)和化合物(122-4)(32mg，1.122mol)在dmf(1ml)中的溶液中加入tcfh(39mg，0.14mmol)和甲基咪唑(23mg，0.38mmol)。在室温条件下搅拌所得反应混合物15分钟，用乙酸乙酯稀释，并用水和盐水洗涤。用硫酸钠干燥并浓缩有机层。在硅胶上纯化残余物产生黄色油状的实施例122(30mg，70％)。esi-ms m/z＝460.31[m h]

；1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ9.06(br，1h)，7.21(d，j＝4.3hz，4h)，7.18
–
7.11(m，1h)，7.06(t，j＝7.8hz，1h)，6.85(d，j＝7.6hz，1h)，6.83
–
6.73(m，1h)，6.65(d，j＝7.9hz，1h)，6.03(br，1h)，5.61(br，1h)，4.63(d，j＝7.8hz，1h)，4.45(t，j＝8.3hz，1h)，4.33(d，j＝14.6hz，1h)，4.20(dd，j＝20.2，12.6hz，2h)，3.85(d，j＝10.3hz，1h)，2.72
–
2.58(m，1h)，2.24(dd，j＝13.0，8.0hz，1h)，1.80
–
1.46(m，3h)，0.98
–
0.81(m，6h)。
[0818]
实施例433
[0819][0820]
步骤1：向n-((苯甲氧)羰基)-n-甲基-l-亮氨酸(300mg，1.07mmol)在meoh(10ml)中的溶液中加入pd/c(w/w 10％，23mg，0.02eq)。脱气之后引入氢气球。在室温条件下搅拌所得混合物1小时，lcms显示反应完成。过滤混合物并浓缩滤出物。粗产品直接用于下一步骤中。
[0821]
步骤2：来自步骤1(n-me-亮氨酸)的粗产品和(异氰基甲基)苯(0.15g，1.12mmol，1.05eq)一起混合在吡啶(5ml)中，在室温条件下搅拌3小时。过滤并浓缩。粗产品直接用于下一步骤。esi-ms m/z＝279.07[m h]

.
[0822]
步骤3，向步骤2(037625-1)(125mg，calc.0.45mmol)的粗产物和中间物122-2(48mg，0.225mmol)在dmf(2ml)中的溶液中加入n-(氯代(二甲基氨基)亚甲基)-n-甲基甲胺六氟代磷酸盐(126mg，0.45mmol)和1-甲基-1h-咪唑(92mg，1.13mmol)。在室温下搅拌所得混合物并浓缩。在硅胶柱上色谱纯化所述粗产品产生标题化合物(40mg，38％)。esi-ms m/z＝472.19，[m-1].1hnmr(500mhz，丙酮-d6)δ9.71(s，1h)，7.27(td，j＝7.5，1.7hz，1h)，7.25
–
7.18(m，2h)，7.20
–
7.14(m，1h)，7.12
–
7.06(m，2h)，7.05
–
6.96(m，3h)，6.19(t，j＝5.9hz，1h)，5.31(dd，j＝9.3，5.8hz，1h)，5.15(t，j＝8.4hz，1h)，4.37(dd，j＝10.7，1.3hz，1h)，4.22
–
4.10(m，2h)，3.91(d，j＝10.7hz，1h)，2.92(s，3h)，2.82
–
2.78(m，1h)，2.72(ddd，j＝13.1，8.5，1.2hz，1h)，2.66(dd，j＝13.2，8.2hz，1h)，1.73(ddd，j＝14.3，9.4，5.2hz，1h)，1.62(ddd，j＝14.0，8.5，5.9hz，1h)，1.52(dddd，j＝15.1，11.8，7.6，5.9hz，1h)，1.31(s，1h)，0.95(dd，j＝12.2，6.6hz，6h)。
[0823]
实施例434
[0824][0825]
步骤1，向n-((苯甲氧)羰基)-n-甲基-l-亮氨酸(3.0g，10.74mmol)在dcm(30ml)中的溶液中加入叔丁基醇(2.05ml，21.48mmol)和dcc(2.66g，12.89mmol)。室温条件下搅拌所得反应混合物并过滤。浓缩滤出物。在硅胶柱上色谱纯化所述粗产品产生cbz-n-me-l-leu-otbu(3.2g，89％)。esi-ms m/z＝336.03[m h]

.
[0826]
步骤2：向cbz-n-me-l-leu-otbu(3.2g，9.54mmol)在meoh(30ml)中的溶液中加入pd/c(w/w 10％，355mg，0.035eq)。脱气之后，在氢气环境中，室温条件下搅拌所得混合物1小时。lcms显示反应完成。除去溶剂，产生理想产物n-me-l-leu-otbu(1.68，87％)。esi-ms m/z＝202.02[m h]

.
[0827]
步骤3，将双(三氯代甲基)碳酸盐(103mg，0.35mmol)溶解于dcm(3ml)中。0℃下，加入n-me-l-leu-otbu(200mg，0.99mmol)和tea(0.54ml，3.97mmol)在dcm(2ml)中的溶液并在0℃下搅拌反应混合物30分钟。加入1,4,5,6-四氢吡咯[3,4-c]吡唑二盐酸(i81 mg，0.99mmol)和tea(0.45ml)在thf(3ml)中的溶液。在室温条件下搅拌所得反应混合物。浓缩后，在硅胶柱上色谱纯化所述粗产品产生(037826-1)(225mg，67％)。esi-ms m/z＝337.12[m h]

.
[0828]
按照实施例122中描述的方法从(434-1)开始合成实施例434。[m-1]，473.97.
[0829]
实施例435
[0830]
[0831][0832]
步骤1
[0833]
向化合物1-4(4.65g，17.37mmol，1.0当量)和(s)-2-(((苯甲氧)羰基)氨基)-4,4-二甲基戊酸(1.1当量)在ch2cl2(80ml)和dmf(8ml)中搅拌后的溶液中加入diea(3当量)和hatu(1.1当量)。室温条件下搅拌所得反应混合物1小时。在室温条件下用10％的柠檬酸淬火反应。用ch2cl2提取反应混合物。用盐水洗涤所述结合的有机相，用无水硫酸钠干燥。过滤之后，在减少的压力下浓缩滤出物。用硅胶色谱纯化残余物，用环己烷/丙酮(0～50％)洗脱产生灰白色固体状的理想产物。(es，m/z)：[m h] ＝493.35.
[0834]
步骤2
[0835]
在氮气环境中，在50ml圆底烧瓶中，向435-1(500.00mg，1.015mmol，1.00当量)在10ml meoh中的溶液中加入pd/c(10％，50mg)。使用氢气球，在氢气环境中室温条件下将反应混合物氢化1小时，用硅藻土垫过滤，并在减少的压力下浓缩产生理想产物。(es，m/z)：[m h]

＝359.25.
[0836]
步骤3
[0837]
在0℃下，向435-2(79.74mg，0.222mmol，1当量)和diea(57.50mg，0.444mmol，2当量)在ch2cl2(2ml)中搅拌后的溶液中逐滴加入异氰基苯(26.5mg，0.222mmol，1当量)在ch2cl2(3ml)中的溶液。用lc-ms监控反应直到完全转化。用饱和碳酸氢钠溶液淬火反应，用ch2cl2萃取并在真空下浓缩产生黄色固体状的理想产物(95.5mg，89.89％)，所述产物不需要进一步纯化就可以在下一步骤中直接使用。
[0838]
步骤4
[0839]
在80℃下搅拌435-3(95.5mg，0.200mmol，1当量)，diea(206.77mg，1.600mmol，8当量)和t3p(763.53mg，1.200mmol，6当量，50％)在乙酸乙酯(1ml)中的混合物1小时。用乙酸乙酯(30ml)萃取反应混合物并在真空条件下浓缩有机层。使用反相快速色谱纯化残余物产生标题化合物(21.5mg，23.40％)白色固体。[m h]

＝460.30，1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ1.03(s，9h)，1.56
–
1.71(m，1h)，1.82(dd，j＝14.5，4.3hz，1h)，2.69(d，j＝8.0hz，2h)，3.98(d，j＝10.3hz，1h)，4.35(d，j＝10.3hz，1h)，4.61(dd，j＝8.5，4.2hz，1h)，5.17(t，j＝8.0hz，1h)，6.77
–
7.09(m，3h)，7.13
–
7.76(m，6h)。
[0840]
使用如上所述的相似的方法制备下列实施例。
[0841][0842][0843]
实施例442
[0844][0845][0846]
步骤1：
[0847]
向圆底烧瓶中冲入氮气并维持氮气环境，向其中加入boc-asp-ome 1(20g，81mmol)，dmf(300ml)，碳酸铯(52.7g，162mmol)和苯甲基溴(11.55ml，97mmol)。在室温条件下搅拌所得溶液2h，然后用乙酸乙酯稀释。用水洗涤所得混合物3次并用盐水洗涤三次，然后用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩产生粗产品2。
[0848]
将粗产品直接带到下一步。
[0849][0850]
步骤2：
[0851]
向圆底烧瓶中冲入氮气并维持氮气环境，向含有此粗产品2(27.3g，81mmol)的圆底烧瓶中加入dmf(162ml)，氧化银(56.3g，243mmol)和碘化甲烷(101ml，1618mmol)。在60℃下加热所得反应溶液1小时然后用乙酸乙酯稀释。用水洗涤所得混合物3次并用盐水洗涤三次，然后用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。用快速色谱纯化粗产品(乙酸乙酯/环己烷0-20％)产生3(17g，两步骤产率60％.)1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.44
–
7.27(m，5h)，5.27
–
5.10(m，2h)，4.86
–
4.56(m，1h)，3.73
–
3.65(m，3h)，3.13(dd，j＝16.5，6.4hz，1h)，3.01
–
2.85(m，3h)，2.78(dq，j＝15.7，8.0hz，1h)，1.41(d，j＝12.7hz，9h)。
[0852][0853]
步骤3：
[0854]
在氮气环境下将钯碳(2.120g，10wt％，1.992mmol)加入到圆底烧瓶中。加入3(7.0g，19.92mmol)在甲醇(100ml)中的溶液。排空反应试管并用氢气重新充满3次，同时在室温条件下搅拌2小时。排空并重新冲入氮气，然后用硅藻土过滤并浓缩产生粗品4(5.2g，
100％产率.)将粗产品带入下一步.1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ10.24(br s，1h)，4.64(dt，j＝26.4，6.9hz，1h)，3.67(dd，j＝13.9，6.9hz，3h)，3.07(dd，j＝15.6，6.7hz，1h)，2.97
–
2.80(m，3h)，2.80
–
2.52(m，1h)，1.43(s，9h)。
[0855][0856]
步骤4：
[0857]
在-78℃下，氮气环境中，向含有化合物4(967mg，3.70mmol)在thf(35ml)中的溶液的圆底烧瓶中逐滴加入甲基溴化镁(7.4ml，22.2mmol，3.0m in et2o)溶液。在相同的温度下搅拌所得混合物1小时，然后回暖至室温，在继续搅拌1小时。用饱和氯化铵溶液淬火反应，用dcm萃取三次。用硫酸钠干燥有机层，过滤，并浓缩。用快速色谱纯化粗产品(meoh：dcm 0-10％)产生6(85mg，9％.)1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ11.10(s，1h)，4.65(q，j＝6.3hz，1h)，3.31(ddd，j＝17.6，10.9，6.5hz，1h)，2.95(d，j＝6.3hz，3h)，2.80(dd，j＝17.6，6.1hz，1h)，2.22(d，j＝2.3hz，3h)，1.45(d，j＝7.7hz，9h)。
[0858][0859]
步骤5：
[0860]
5(85mg，0.347mmol)和(3r,5's)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺盐酸盐(93mg，0.347mmol)被倒入dcm(1.16ml)和dmf(0.23ml)中。在0℃下，加入4-甲基吗啉(114μl，1.04mmol)，搅拌5分钟。在相同的温度下加入hatu(132mg，0.347mmol)。在0℃下搅拌所得混合物5分钟，然后回暖至室温并搅拌2小时。用dcm稀释所得混合物，用饱和碳酸氢钠水溶液、1m hcl和盐水洗涤。用dcm提取hcl水层3次。用硫酸钠干燥收集的有机层，过滤并浓缩。粗产品残余物直接用于下一步骤。观察的m h＝458.92.
[0861][0862]
步骤6：
[0863]
用hcl(1.73ml，6.94mmol，4.0m在二氧杂环乙烷中的溶液)处理化合物6(159mg，
0.347mmol)。室温条件下搅拌所得混合物30分钟然后再氮气流中除去挥发性物质。粗产品盐直接用于下一步骤。观察的m h＝340.87.
[0864][0865]
步骤7：
[0866]
7(137mg，0.347mmol)和4,6,-二氟-1h-吲哚-2-羧酸(68mg，0.347mmol)被倒入dcm(1.5ml)和dmf(0.3ml)中。加入4-甲基吗啉(114μl，1.04mmol)，室温下搅拌5分钟。加入hatu(132mg，0.347mmol)。搅拌反应混合物2小时，用dcm稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液、1m hcl和盐水洗涤。所得水相层用dcm额外提取三次。收集的有机层通过相分离器并浓缩。粗产品盐直接用于下一步骤。观察的m h＝537.84.
[0867][0868]
步骤8：
[0869]
氮气环境中，将粗品8(187mg，0.347mmol)溶解于水(1.74ml)/乙腈(1.74ml)中。加入2,2-二氯乙腈(0.56ml，6.94mmol)，随后加入三氟代乙酸钯(ii)(115mg，0.347mmol)。将所得混合物加热至65℃并搅拌15分钟。用dcm和盐水稀释反应，用dcm提取3次。收集的有机层通过相分离器并浓缩。通过rphplc(0.1％tfa/mecn/0.1％tfa/水20-95％)纯化残余物产生30mg 9，实施例442(17％.)观察的m na＝541.7.1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.79(s，1h)，9.66(s，1h)，7.12
–
6.96(m，3h)，6.96
–
6.65(m，4h)，5.80(dd，j＝8.9，5.2hz，1h)，5.21(t，j＝8.2hz，1h)，4.20(s，1h)，3.97(d，j＝10.6hz，1h)，3.52(dd，j＝17.2，9.0hz，1h)，3.40(s，3h)，2.96
–
2.68(m，3h)，2.23(s，3h)。
[0870]
实施例443
[0871][0872]
在氮气环境下，试管中将实施例442(30mg，0.058mmol)溶解于thf(0.58ml)中。将溶液冷却至-78℃并逐滴加入甲基溴化镁溶液(58μl，0.173mmol，3.0m在et2o中的溶液)。在相同的温度下搅拌所得混合物1小时，然后回暖至室温并继续搅拌1小时。用饱和氯化铵溶液淬火反应，用dcm提取三次并用硫酸钠干燥。过滤有机层，浓缩并用shimadzu制备性hplc(0-95％0.1％fa/h2o和0.1％fa/乙腈)纯化产生实施例443(2mg，6％.)观察的m h＝535.9.1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ11.16(s，1h)，9.69(s，1h)，7.36
–
7.22(m，1h)，7.18
–
7.06(m，3h)，7.06
–
6.84(m，2h)，6.84
–
6.49(m，1h)，5.23(t，j＝8.2hz，1h)，4.10
–
3.81(m，2h)，3.45(s，3h)，2.72(dd，j＝18.5，8.4hz，2h)，2.56
–
2.38(m，1h)，2.25(s，1h)，1.95
–
1.81(m，1h)，1.21(s，6h)。
[0873]
实施例444
[0874][0875]
按照实施例443中描述的相似的方法合成实施例444。
[0876]
实施例123
[0877][0878][0879]
步骤1
[0880]
将化合物(1-2)(5.00g)溶解在醋酸(115ml)中。在室温条件下向所得反应溶液中缓慢的加入硫酰氯(2.09g)。在室温条件下搅拌反应混合物过夜，然后浓缩反应混合物。将所得粗产物溶解在亚甲基氯(100ml)中并加入三乙胺(5.84g，8.05ml，4.0当量)，随后加入碳酸氢叔丁酯(4.73g，1.5当量)。然后，用1m hcl(2x50ml)洗涤有机层，然后盐水(100ml)洗涤有机层，然后用硫酸镁干燥。浓缩之后，用rphplc纯化所得粗产物，产生化合物(123-1)(2.81g，51％产率)。[m h]

，381.1.
[0881]
步骤2
[0882]
在100毫升压力瓶中，将化合物(123-1)(2.81g)溶解在7m甲醇胺(36.1ml)中。将所得混合物加热到60℃维持36小时。在浓缩之后，与乙腈一起研磨所得粗产物得到无色固体状的化合物(123-2)(1.92g，71％产率)。[m h]

，366.1.
[0883]
步骤3
[0884]
将化合物(123-2)(1.61g)溶解在4m hcl/1，4-二噁烷(22.0ml)中。在室温下搅拌所得反应混合物2小时。浓缩产生白色固体状的化合物(123-4)(1.33g)，其不经过进一步纯化就可以使用。[m h]

，266.1.
[0885]
步骤4
[0886]
将化合物(123-3)(103.0mg)，化合物(123-3b)(98.0mg)，和hatu(149.0mg)混合在40毫升装有搅拌条的烧瓶中。加入dmf(2.27ml)，随后加入dipea(179μl)。在室温条件下搅
拌所得反应混合物过夜。完成之后，用乙酸乙酯(50毫升)稀释反应混合物，用1m hcl(2x20ml)和盐水(20ml)洗涤，然后用硫酸镁干燥。在浓缩后，用硅胶色谱纯化所得粗品残余物(0到10％meoh/dcm)产生化合物(123-4)(58.1mg，34％产率)。[m h]

，497.2.
[0887]
步骤5
[0888]
将化合物(123-4)(58.1mg)溶解在4m hcl/1、4-二噁烷(585μl)中。搅拌所得反应混合物1.5小时。浓缩所得反应混合物产生化合物(123-5)(51.0mg)。该化合物无需进一步纯化就可以在下一步骤中使用。[m h]

，397.2.
[0889]
步骤6
[0890]
将化合物(123-5)(51.0mg)，化合物(121-5b)(26.7mg)，和hatu(51.5mg)混合在40毫升装有搅拌条的烧瓶中。加入dmf(785μl)，随后加入dipea(62μl)。在室温条件下搅拌所得反应混合物2.5小时。用乙酸乙酯(100毫升)稀释反应混合物并用1m hcl(3x20ml)和盐水(20ml)洗涤。用硫酸镁干燥有机层，然后浓缩。使用硅胶色谱纯化所得粗产物(0到10％meoh/dcm)产生化合物(123-6)(26.9mg，40％产率)。[m h]

，576.1.
[0891]
步骤7
[0892]
在20毫升烧瓶中将化合物(123-6)(26.9mg)溶解在mecn(500μl)和水(500μl)的混合物中。随后加入2，2-二氯代乙腈(56μl)，在之后加入三氟代醋酸钯(ii)(1.5mg)。封闭烧瓶并将反应混合物加热到65℃2小时。再次加入2，2-二氯代乙腈(56μl)和三氟代醋酸钯(ii)(1.5mg)，并在70℃下加热反应混合物20分钟。随后冷却至室温，通过rphplc纯化反应混合物产生白色固体状的实施例123(10.0mg，38％产率)。esi ms m/z＝558.1[m h]

.1h nmr(400mhz，丙酮-d6，δppm)：δ10.96(s，1h)，9.80(s，1h)，8.18
–
8.16(m，1h)，7.35
–
7.34(m，1h)，7.15
–
7.09(m，3h)，6.97
–
6.95(m，1h)。6.77
–
6.72(m，1h)，5.23(app t，j＝8.2，8.2hz，1h)，5.15
–
5.09(m，1h)，4.46(d，j＝10.5hz，1h)，4.06(10.5hz)，2.85
–
2.67(m，2h)，2.42
–
2.18(m，2h)，1.47(d，j
19f-1h
＝3.2hz，3h)，1.41(d，j
19f-1h
＝3.2hz，3h)。
[0893]
使用如上所述的相似的方法制备下列实施例。
[0894]
[0895][0896]
实施例447
[0897][0898]
步骤1
[0899]
在装有搅拌棒和压力释放隔膜的40ml螺旋盖小瓶中，将(s)-1-((3r,5's)-5'-氨基甲酰-5-氯代-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-氟代-4-甲基-1-氧戊-2-氯化铵(1.0当量)与3-(三氟代甲氧基)苯甲酸(26.9mg，1.15当量)和hatu(49.5mg，1.15当量)结合。下一步，加入dmf(0.76ml，0.15m)，随后立即加入dipea(60μl，3.0当量)。室温条件下搅拌所得反应混合物直至通过lcms确定起始材料完全消耗。用dcm(20ml)稀释所得混合物并用1.2m盐酸和盐水洗涤。将有机层通过相分离器并浓缩产生粗品(3r,5's)-5-氯代-1'-((s)-4-氟代-4-甲基-2-(3-(三氟代甲氧基)苯甲胺)戊基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺.[m h]

，585.3.
[0900]
步骤2
[0901]
在装有搅拌棒和压力释放隔膜的40ml螺旋盖小瓶中，将步骤1中产生的(3r,5's)-5-氯代-1'-((s)-4-氟代-4-甲基-2-(3-(三氟代甲氧基)苯甲胺)戊基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺溶解于dcm(1.5ml，0.075m)中。冰浴冷却所得溶液并加入三乙基胺(126μl，8.0当量)，随后加入三氟乙酸酐(64μl，4.0当量)。室温条件下搅拌所得反应混合物1小时。这时，用dcm(10ml)稀释所得混合物并加入2.0ml 30％氢氧化铵。轻轻摇晃混合物，并用饱和碳酸氢钠水溶液(7.5ml)洗涤。有机相通过相分离器并浓缩.粗产品被rphplc(mecn/水，0.1％tfa)纯化产生标题化合物1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ9.83(s，1h)，8.27(d，j＝7.7hz，1h)，7.91(dt，j＝7.8，1.3hz，1h)，7.82
–
7.80(m，1h)，7.64
–
7.60(m，1h)，7.54
–
7.51(m，1h)，7.25(dd，j＝8.3，2.1hz，1h)，7.20(d，j＝2.1hz，1h)，7.01(d，j＝8.3hz，1h)，5.24(t，j＝8.3hz，1h)，5.08
–
5.03(m，1h)，4.54(d，j＝10.5，1h)，4.06(d，j＝10.5hz，1h)，2.86
–
2.81(m，1h)，2.72(dd，j＝13.3，8.2hz，1h)，2.41
–
2.22(m，2h)，1.50(d，j＝6.7hz，3h)，1.44(d，j＝6.7hz，3h)。[m-1]，564.7.
[0902]
使用如上所述的相似的方法制备下列实施例.
[0903]
[0904]
[0905]
[0906]
[0907][0908]
实施例454
((3r,5's)-5'-氨基甲酰-5-氯代-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-氟代-4-甲基-1-氧戊-2-基)(甲基-d3)氨基甲酸酯白色固体(4.02g，87％)。[m 1]，514.2.
[0914]
步骤3
[0915]
在250毫升的装有搅拌棒的圆底烧瓶中，用4m hcl在二氧杂环乙烷(39.1ml，20当量)中的溶液处理((s)-1-((3r,5's)-5'-氨基甲酰-5-氯代-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-氟代-4-甲基-1-氧戊-2-基)(甲基-d3)氨基甲酸酯(4.02g，1.0当量)。搅拌所得反应混合物1h，同时用lcms检测显示完全的转化。浓缩反应产生白色固体状的(3r,5's)-5-氯代-1'-((s)-4-氟代-4-甲基-2-((甲基-d3)氨基)戊基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺盐酸，不需要纯化直接使用。[m h]，414.2.
[0916]
步骤4
[0917]
在250毫升的装有搅拌棒的圆底烧瓶中，步骤3中产生的粗品(3r,5's)-5-氯代-1'-((s)-4-氟代-4-甲基-2-((甲基-d3)氨基)戊基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺盐酸盐(1.0当量)与4,6-二氟-1h-吲哚-2-羧酸(1.54g，1.0当量)在dcm/dmf(5：1，0.2m，32.6ml dcm，6.5ml dmf)中结合。在冰浴中冷却所得混合物并加入n-甲基吗啉(2.58ml，3.0当量)，随后加入hatu(2.97g，1.0当量)。搅拌反应混合物14小时，此时，通过lcms观察到起始材料的完全消耗。用45ml饱和碳酸氢钠水溶液淬火反应混合物并分离各个层。用dcm提取水层，并用硫酸镁干燥所述结合的有机相。浓缩后，用硅胶色谱纯化粗品残余物(0到80％丙酮/环己烷)产生白色固体状的(3r,5's)-5-氯代-1'-((s)-2-(4,6-二氟-n-(甲基-d3)-1h-吲哚-2-羧酸胺)-4-氟代-4-甲基戊基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(3.59g，77％)。[m-h]，591.0.
[0918]
步骤5
[0919]
在250毫升的装有搅拌棒的圆底烧瓶中，将(3r,5's)-5-氯代-1'-((s)-2-(4,6-二氟-n-(甲基-d3)-1h-吲哚-2-羧酸胺)-4-氟代-4-甲基戊基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(3.59g，1.0当量)溶解于dcm(40.4ml，0.15m)中。冰浴冷却所得溶液并加入三乙胺(5.06ml，6.0当量)，随后加入三氟代乙酸酐(2.57ml，3.0当量)。将反应混合物回暖至室温并搅拌45分钟，此时，通过lcms观察到起始材料的完全消耗。用150ml dcm稀释所得混合物并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤(60ml)。用亚甲基氯提取水相。用盐水洗涤结合的有机层并用硫酸镁干燥。浓缩后，用c18色谱柱纯化粗产品残余物(梯度洗脱，水/mecn)产生白色固体状的n-((s)-1-((3r,5's)-5-氯代-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-氟代-4-甲基-1-氧戊-2-基)-4,6-二氟-n-(甲基-d3)-1h-吲哚-2-甲酰胺(3.08g，88％产率)。1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.68(s，1h)，9.80(s，1h)，7.09
–
7.06(m，1h)，6.97
–
6.88(m，4h)，6.75(td，j＝10.3，2.1hz，1h)，5.84(dd，j＝7.6，5.6hz，1h)，5.33(dd，j＝8.8，7.7hz，1h)，4.50(d，j＝10.9hz，1h)，3.95(d，j＝11.0hz，1h)，2.84
–
2.65(m，2h)，2.52
–
2.25(m，2h)，1.45(d，j＝6.8hz，3h)，1.40(d，j＝7.0hz，3h)。[m-1]，573.2.
[0920]
使用如上所述的相似的方法制备下列实施例.
[0921]
[0922]
[0923]
[0924]
[0925]
[0926]
[0927]
[0928][0929]
实施例472
[0930][0931]
步骤1
[0932]
在100毫升schlenk试管中向(s)-2-(双(叔丁氧羰基)氨基)-5-氧戊酸甲酯(1.10g，1.0当量)，dabco(1.07g，3.0当量)，和2-碘代-5-(三氟代甲基)苯胺(1.01g，1.1当量)在dmf(16ml，0.2m)中的溶液中冲入氮气20分钟。随后加入醋酸钯(ii)(72.0mg，0.10当量)，然后再氮气环境中将反应混合物加热到90℃维持30小时。完成之后，用水稀释所得混合物并用乙酸乙酯提取水相。用硫酸镁干燥所述结合的有机相。浓缩后，用硅胶色谱纯化粗品残余物(梯度洗脱，0到40％乙酸乙酯/环己烷)产生(s)-2-(双(叔丁氧羰基)氨基)-3-(6-(三氟代甲基)-1h-吲哚-3-基)丙酸甲酯(1.09g，70％)。[m 1]，487.2.
[0933]
步骤2
[0934]
在配有压力释放隔膜和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中，用4m hcl在二氧杂环乙烷(11.2ml，20当量hcl)中的溶液处理(s)-2-(双(叔丁氧羰基)氨基)-3-(6-(三氟代甲基)-1h-吲哚-3-基)丙酸甲酯(1.09g，1.0当量)，室温条件下搅拌所得反应混合物12小时。完成之后，浓缩反应混合物产生(s)-2-氨基-3-(6-(三氟代甲基)-1h-吲哚-3-基)丙酸甲酯盐酸盐，其不需要纯化直接用于下一步骤中。[m 1]，287.1.
[0935]
步骤3
[0936]
在配有压力释放隔膜和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中，(s)-2-氨基-3-(6-(三氟代甲基)-1h-吲哚-3-基)丙酸甲酯盐酸(722mg，1.0当量)与甲醛(183μl，37wt％，1.1当量)在meoh(4.5ml，0.5m)中的溶液结合。在65℃下加热反应混合物3小时。通过lcms判断反应完成之后，浓缩反应混合物产生粗品(s)-7-(三氟代甲基)-2,3,4,9-四氢-1h-吡咯[3,4-b]吲哚-3-羧酸甲酯盐酸盐，其不需要纯化直接用于下一步骤中。[m 1]，299.1.
[0937]
步骤4
[0938]
在配有压力释放隔膜和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中,(s)-7-(三氟代甲基)-2,3,4,9-四氢-1h-吡咯[3,4-b]吲哚-3-羧酸酯盐酸盐(1.0当量)被悬浮在dcm(5.6ml，0.4m)中。加入三乙胺(2.0当量，623μl)，随后加入boc-酸酐(1.23ml，1.1当量，2m dcm)。室温条件下搅拌所得反应混合物20h，然后浓缩反应混合物并用硅胶色谱纯化产生2-(叔丁基)3-甲基(s)-7-(三氟代甲基)-1,3,4,9-四氢-2h-吡咯[3,4-b]吲哚-2,3-碳酸氢酯(681mg，76％)。[m-1]，397.0.
[0939]
步骤5
[0940]
在配有压力释放隔膜和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中，在-40℃下，2-(叔丁基)3-甲基(s)-7-(三氟代甲基)-1,3,4,9-四氢-2h-吡咯[3,4-b]吲哚-2,3-碳酸氢酯(681.0mg，1.0当量)被悬浮在thf，水，和乙酸(10ml thf，1ml di水，685μl乙酸)混合物中，向此溶液中分部分加入n-溴代琥珀酰亚胺(304mg，1.0当量)。在2.5小时后，冰浴将混合物回暖至0℃，并额外加入乙酸(685μl)。20分钟后，通过lcms观察到起始材料的完全消耗并向反应混合物中缓慢加入75毫升的饱和碳酸氢钠水溶液。用乙酸乙酯提取反应混合物并用硫酸镁干燥所述结合的有机相。浓缩后，用硅胶色谱纯化粗品残余物(梯度洗脱，0到100％mtbe/环己烷)产生无色油状的1'-(叔丁基)5'-甲基(3r,5's)-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1',5'-碳酸氢酯(591.7mg，84％，6：1非对映异构体混合物)。[m-1]，413.0.
[0941]
步骤6
[0942]
在装有搅拌棒的25ml压力试管中，将步骤5中产生的1'-(叔丁基)5'-甲基(3r,5's)-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1',5'-碳酸氢酯(591.7mg，1.0当量)溶解于7m nh3在meoh(6.1ml，30当量nh3)中的溶液中。将所得反应混合物加热到60℃维持48h。此时，浓缩反应混合物并用rphplc(mecn/水，0.1％tfa)纯化所得粗产品产生单一非对映异构体(3r,5's)-5'-氨基甲酰-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-羧酸叔丁酯(311.0mg，55％)。[m na]，422.1.
[0943]
步骤7
[0944]
在配有压力释放隔膜和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中，用4m hcl在二氧杂环乙烷(3.9ml，20当量hcl)处理(3r,5's)-5'-氨基甲酰-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-羧酸叔丁酯(311.0mg，1.0当量)。室温条件下搅拌所得反应混合物1小时并浓缩产生(3r,5's)-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺盐酸白色固体(261.0mg)。[m 1]，300.1.
[0945]
步骤8
[0946]
在配有压力释放隔膜和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中，用(s)-2-((叔丁氧羰基)(甲基-d3)氨基)-4-氟代-4-甲基戊酸(91.0mg，1.15当量)和hatu(130.0mg，1.15当量)在dmf
(2.0ml，0.15m)中的溶液处理(3r,5's)-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺盐酸(261.0mg，1.0当量)。随后加入dipea(156μl，3.0当量)并搅拌所得反应混合物14h.然后过滤所得粗品反应混合物并用rphplc(mecn/水，.1％tfa)纯化产生白色固体状的((s)-1-((3r,5's)-5'-氨基甲酰-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-氟代-4-甲基-1-氧戊-2-基)(甲基-d3)氨基甲酸叔丁酯(106.6mg，65％)。[m-1]，546.3.
[0947]
步骤9
[0948]
在配有压力释放隔膜和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中，在室温条件下用4m hcl在二氧杂环乙烷(973μl，20当量hcl)中的溶液处理((s)-1-((3r,5's)-5'-氨基甲酰-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-氟代-4-甲基-1-氧戊-2-基)(甲基-d3)氨基甲酸叔丁酯(107mg，1.0当量)。1小时后，浓缩反应混合物产生(3r,5's)-1'-((s)-4-氟代-4-甲基-2-((甲基-d3)氨基)戊基)-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺盐酸，其不需要进一步纯化就可以在下一步骤中使用。[m 1]，448.2.
[0949]
步骤10
[0950]
在配有压力释放隔膜和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中，将步骤9中产生的(3r,5's)-1'-((s)-4-氟代-4-甲基-2-((甲基-d3)氨基)戊基)-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺盐酸(1.0当量)与4,6-二氟-1h-吲哚-2-羧酸(44.1mg，1.15当量)和hatu(85.0mg，1.15当量)在dmf(1.3ml，0.15m)中结合。随后加入dipea(102μl，3.0当量)，并在室温条件下搅拌所得反应混合物14小时。过滤粗品反应混合物并用rphplc(mecn，水，0.1％tfa)纯化产生白色固体状的(3r,5's)-1'-((s)-2-(4,6-二氟-n-(甲基-d3)-1h-吲哚-2-羧酸胺)-4-氟代-4-甲基戊基)-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(88.3mg，72％).[m-1]，625.1.
[0951]
步骤11
[0952]
在配有压力释放隔膜和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中，0℃下，(3r,5's)-1'-((s)-2-(4,6-二氟-n-(甲基-d3)-1h-吲哚-2-羧酸胺)-4-氟代-4-甲基戊基)-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(88.3mg，1.0当量)被溶解于dcm(2.8ml，0.05m)中。向溶液中加入三乙胺(1.27ml，9.0当量)，随后加入三氟代醋酸酐(634μl，4.5当量)。在室温条件下搅拌所得反应混合物1.5小时，完成之后，加入氢氧化铵(250μl，30wt％)然后轻轻摇晃所得混合物。然后用饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和dcm(5.0ml)稀释反应混合物并通过相分离器。浓缩后，用rphplc(mecn，水，0.1％tfa)纯化粗产品产生n-((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-2-氧-6-(三氟代甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-氟代-4-甲基-1-氧戊-2-基)-4,6-二氟-n-(甲基-d3)-1h-吲哚-2-甲酰胺(1.7mg，2％)。1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.76(s，1h)，9.96(s，1h)，7.19
–
6.99(m，5h)，6.74(td，j＝10.3，2.1hz，1h)，5.83(dd，j＝7.6，5.5hz，1h)，5.28(t，j＝8.2hz，1h)，4.52(d，j＝11.0hz，1h)，4.01(d，j＝10.9hz，1h)，2.88
–
2.71(m，2h)，2.48
–
2.29(m，2h)，1.45(d，j＝6.3hz，3h)，1.40(d，j＝6.5hz，3h)。[m-1]，607.4.
[0953]
实施例473
[0954][0955]
步骤1
[0956]
在配有压力释放隔膜和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中，用4m hcl在二氧杂环乙烷(3.1ml，20当量hcl)中处理((s)-1-((3r,5's)-5'-氨基甲酰-5-氯代-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-氟代-4-甲基-1-氧戊-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(318.0mg，1.0当量)。室温条件下搅拌所得反应混合物1.5h。通过lcms判断起始材料被完全消耗，浓缩反应混合物产生(3r,5's)-5-氯代-1'-((s)-4-氟代-4-甲基-2-(甲基氨基)戊基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺盐酸(278mg)白色固体，其不需要进一步纯化就可以在步骤2中使用。[m 1]，411.2.
[0957]
步骤20℃下，在配有压力释放隔膜和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中加入(3r,5's)-5-氯代-1'-((s)-4-氟代-4-甲基-2-(甲基氨基)戊基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺盐酸(50.0mg，1.0当量)与1-(吡啶-4-基)环丙-1-羧酸(18.2mg，1.0当量)和n-甲基吗啉(40μl，3.2当量)在dcm/dmf(5：1dcm/dmf，0.15m，620μl dcm/120μl dmf)中的混合物。随后，加入hatu(42.5mg，1.0当量)并搅拌反应混合物14小时。完成之后，加入100ul甲酸并浓缩反应混合物。用rphplc(mecn/水/0.1％tfa)纯化粗品残余物产生(3r,5's)-5-氯代-1'-((s)-4-氟代-4-甲基-2-(n-甲基-1-(吡啶-4-基)环丙基-1-羧酸胺)戊基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(36.2mg，58％)。[m 1]，556.4.
[0958]
步骤3
[0959]
在配有压力释放隔膜和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中，将(3r,5's)-5-氯代-1'-((s)-4-氟代-4-甲基-2-(n-甲基-1-(吡啶-4-基)环丙基-1-羧酸胺)戊基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(36.2mg，1.0当量)溶解于dcm(870μl，0.075m)中并加入伯吉斯试剂(46.5mg，3.0当量)。在室温条件下搅拌所得混合物14h。用饱和碳酸氢水溶液(3ml)和dcm(5ml)稀释所得混合物并穿过相分离器。浓缩后，用rhplc纯化残余物产生n-((s)-1-((3r,5's)-5-氯代-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-氟代-4-甲基-1-氧戊-2-基)-n-甲基-1-(吡啶-4-基)环丙基-1-甲酰胺(11.1mg，32％)白色固体。1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ8.70(d，j＝6.7hz，2h)，7.54(d，j＝6.7hz，2h)，7.35(dd，j＝8.3，
2.1hz，1h)，7.12(d，j＝2.1hz，1h)，7.07(d，j＝8.3hz，1h)，5.61(dd，j＝7.4，5.6hz，1h)，5.26(t，j＝8.4hz，1h)，4.24(d，j＝10.6hz，1h)，4.08(d，j＝10.6hz，1h)，3.00(s，2h)，2.85
–
2.67(m，1h)，2.44
–
2.19(m，2h)，1.68
–
1.58(m，2h)，1.46(d，j＝7.8hz，3h)，1.41(d，j＝7.7hz，3h)，1.39
–
1.24(m，2h)。[m 1]，538.2.
[0960]
使用如上所述的相似的方法制备下列实施例。
[0961]
[0962]
[0963]
[0964]
[0965]
[0966]
[0967]
[0968][0969]
实施例492
[0970][0971][0972]
步骤1：
[0973]
在装有压力释放盖和搅拌棒的40ml小瓶中将(2,6-二氟苯基)甲醇(802.0mg，1.0
当量)溶解于dmf(7.4ml，0.75m)中。随后，在冰浴中冷却溶液并加入cdi(903.0mg，1.0当量)。将所得混合物回暖至室温。在搅拌20分钟后，加入(s)-2-氨基-3-环丙基丙酸甲酯盐酸盐(1.00g，1.0当量)并将反应混合物加热到55℃维持14h。随后冷却至室温，用压水稀释反应混合物并且用乙酸乙酯提取水相。用硫酸镁干燥所述结合的有机相。浓缩后，用硅胶色谱纯化粗品残余物(梯度洗脱，0到40％乙酸乙酯/环己烷)产生(s)-3-环丙基-2-((((2,6-二氟苯甲基)氧)羰基)氨基)丙酸甲酯(1.23g，71％)。[m 1]，314.2.
[0974]
步骤2
[0975]
在装有搅拌棒的50毫升的圆底烧瓶中，在0℃下，将(s)-3-环丙基-2-((((2,6-二氟苯甲基)氧)羰基)氨基)丙酸酯(1.23g，1.0当量)溶解于meoh和水(1：1，0.26m，7.6ml meoh，7.6ml水)的混合物中。随后，加入lioh(235.0mg，2.5当量)。将反应混合物缓慢回暖至室温并搅拌14小时。浓缩反应混合物从而除去meoh并用6m hcl酸化。用dcm提取水层，并用硫酸镁干燥所述结合的有机相。浓缩后，用硅胶色谱纯化粗品残余物(梯度洗脱，0到70％乙酸乙酯/环己烷)产生(s)-3-环丙基-2-((((2,6-二氟苯甲基)氧)羰基)氨基)丙酸(431.0mg，37％)。[m 1]，300.2.
[0976]
步骤3
[0977]
在装有压力释放盖和搅拌棒的40ml小瓶中将(3r,5's)-5-氯代-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺盐酸盐(100.0mg，1.0当量)和(s)-3-环丙基-2-((((2,6-二氟苯甲基)氧)羰基)氨基)丙酸(114.0mg，1.15当量)结合在dmf(2.2ml，0.15m)中。随后，加入hatu(145.0mg，1.15当量)，随后立刻加入dipea(173μl，3.0当量)。在室温条件下搅拌所得反应混合物14h。完成之后，用dcm稀释反应物并用1.2m hcl和盐水洗涤，并穿过相分离器。浓缩产生粗品2,6-二氟苯甲基((s)-1-((3r,5's)-5'-氨基甲酰-5-氯代-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-3-环丙基-1-氧丙-2-基)氨基甲酸酯，其不需要进一步纯化就可以在下一步骤中使用。[m 1]，547.2.
[0978]
步骤4：
[0979]
在装有压力释放盖和搅拌棒的40ml小瓶中，在0℃下，将步骤3中产生的粗产品2,6-二氟苯甲基((s)-1-((3r,5's)-5'-氨基甲酰-5-氯代-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-3-环丙基-1-氧丙-2-基)氨基甲酸酯溶解于dcm(4.7ml，0.075m)中。向所得溶液中加入三乙胺(346μl，7.0当量)，随后加入三氟代乙酸酐(200μl，4.0当量)。在室温条件下搅拌反应1h并用饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和2.0ml氢氧化铵(30wt％)淬火。用dcm(5毫升)进一步稀释反应物并穿过相分离器。浓缩后，用rphplc(mecn/水/0.1％tfa)纯化粗品残余物产生2,6-二氟苯甲基((s)-1-((3r,5's)-5-氯代-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-3-环丙基-1-氧丙-2-基)氨基甲酸酯(7.9mg，4.2％)。1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ9.83(s，1h)，7.54
–
7.46(m，1h)，7.33
–
7.27(m，2h)，7.10
–
7.01(m，3h)，6.73(d，j＝7.6hz，1h)，7.10
–
7.02(m，3h)，6.73(d，j＝7.6hz，1h)，5.26(t，j＝8.1hz，1h)，5.20(d，j＝11.8hz，1h)，5.11(d，j＝11.8hz，1h)，4.51(q，j＝7.3hz，1h)，4.38(d，j＝10.5hz，1h)，4.07(d，j＝10.5hz，1h)，2.88
–
2.81(m，1h)，2.71(dd，j＝13.3，7.8hz，1h)，1.76
–
1.65(m，2h)，0.92
–
0.82(m，1h)，0.54
–
0.46(m，2h)，0.27
–
0.14(m，2h)。[m-1]，527.0.
[0980]
使用如上所述的相似的方法制备下列实施例。
[0981]
[0982][0983]
实施例497
[0984]
2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-羧酸甲酯(224.4mg，79％)。[m-1]，585.1.
[0994]
步骤5
[0995]
在配有压力释放瓶和搅拌棒的40ml螺旋盖小瓶中，(3r,5's)-5-氯代-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-羧酸甲酯(224.4mg，1.0当量)被溶解于1,2-dce(3.82ml，0.1m)中。随后加入三甲基氢氧化锡(207.0mg，3.0当量)，并将所得反应混合物加热到75℃维持16h。随后冷却至室温，用dcm稀释所述反应混合物(20ml)，用1.2m hcl(5ml)洗涤两次，用盐水洗涤一次，将有机层穿过相分离器。浓缩后，用rphplc纯化粗品残余物产生白色固体状的(3r,5's)-5-氯代-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-羧酸(1.44mg，0.7％)。1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.71(s，1h)，9.78(s，1h)，7.12
–
7.05(m，1h)，7.02
–
6.95(m，3h)，6.89(d，j＝8.3hz，1h)，6.74(td，j＝10.3，2.1hz，1h)，5.59(t，j＝7.5hz，1h)，4.94(t，j＝8.8hz，1h)，4.38(d，j＝10.4hz，1h)，3.97(d，j＝10.5hz，1h)，3.47(s，3h)，2.63
–
2.46(m，2h)，1.81(t，j＝7.2hz，2h)，1.70
–
1.58(m，1h)，1.00(d，j＝6.6hz，3h)，0.95(d，j＝6.6hz，3h)。[m-1]，570.9.
[0996]
实施例498
[0997][0998][0999]
步骤1：用nbs(2.23g，12.5mmol)处理1'-(叔丁基)5'-甲基(3r,5's)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1',5'-碳酸氢酯(3.94g，11.4mmol，dr 10/1)在乙腈(40ml)中的澄清的无色溶液，在室温下分成三个部分。在室温条件下搅拌反应混合物3h。使其变成亮黄色溶液。lcms显示没有起始材料。用na2s2o3水溶液淬火反应混合物。在室温条件下继续搅拌所得反应混合物30分钟。用etoac(80ml)进一步稀释所得浑浊的反应混合物。用乙酸乙酯提取水层两次。用盐水洗涤所述结合的有机相，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩产生灰白色固体状的粗品产物。粗产品溶解于dcm(10ml)中并通过80g硅胶垫过滤(mtbe)产生白色固体状的理想产
1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(41mg，0.067mmol)在n-proh(0.5ml)中的溶液。用氮气鼓泡所得混合物5分钟。将反应混合物回暖至90℃并搅拌过夜。用硅藻土过滤所得混合物并真空条件下浓缩。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的丙酮/环己烷洗脱产生橘色固体状的(3r,5's)-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧-5-(丙-1-烷-2-基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(19mg，0.033mmol，49.5％产率)。lc-ms，es-：576.57[m-h]-.
[1006]
步骤8：在0℃下用tea(30μl，0.215mmol)和tfaa(15μl，0.106mmol)逐滴处理(3r,5's)-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧-5-(丙-1-烷-2-基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(19mg，0.033mmol)在dcm(0.4ml)中的溶液。在0℃下搅拌反应30分钟，然后用饱和碳酸氢钠溶液淬火。用二氯甲烷提取水相层三次。用硫酸钠干燥结合的有机层，过滤并真空条件下浓缩。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的乙酸乙酯/环己烷洗脱产生白色固体状的n-((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-2-氧-5-(丙-1-烷-2-基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧丙烷-2-基)-4,6-二氟-n-甲基-1h-吲哚-2-甲酰胺(13mg，0.023mmol，70.6％产率)。lc-ms，es-：558.36[m-h]-；1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ9.07(s，1h)，8.25(s，1h)，7.19(dd，j＝8.2，1.8hz，1h)，6.96(d，j＝1.8hz，1h)，6.91
–
6.73(m，3h)，6.63(td，j＝10.0，1.9hz，1h)，5.38(dd，j＝9.0，6.2hz，1h)，5.09(dd，j＝17.1，8.6hz，2h)，4.91(t，j＝1.5hz，1h)，4.51(d，j＝10.5hz，1h)，3.98(d，j＝10.5hz，1h)，3.46(s，3h)，2.89(dd，j＝13.2，8.9hz，1h)，2.66
–
2.50(m，1h)，1.98
–
1.75(m，5h)，1.01(d，j＝6.6hz，3h)，0.96(d，j＝6.5hz，3h)。
[1007]
实施例499
[1008][1009]
步骤1：用二水合锇酸钾(3.4mg，9.23μmol)处理n-((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-2-氧-5-(丙-1-烷-2-基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧丙烷-2-基)-4,6-二氟-n-甲基-1h-吲哚-2-甲酰胺(8mg，0.014mmol)在thf(0.2ml)和水(0.1ml)中的溶液。在室温条件下搅拌反应混合物3h，然后用饱和硫代硫酸钠水溶液淬火。在室温条件下额外搅拌所得混合物30分钟。用二氯甲烷提取水相层三次。用硫酸钠干燥结合的有机层，过滤并真空条件下浓缩。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的乙酸乙酯/环己烷洗脱白色固体状的产生n-((s)-1-((3r,5's)-5-酰基-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)-4,6-二氟-n-甲基-1h-吲哚-2-甲酰胺(6mg，10.68μmol，
74.7％产率)。lc-ms，es-：560.37[m-h]-；1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ9.73(s，1h)，8.23(s，1h)，7.77(d，j＝1.7hz，1h)，7.68(dd，j＝8.2，1.7hz，1h)，6.92(dd，j＝8.4，2.2hz，2h)，6.84
–
6.76(m，1h)，6.62(td，j＝10.0，2.0hz，1h)，5.24(dd，j＝8.4，6.8hz，1h)，5.12(t，j＝8.3hz，1h)，4.75(d，j＝10.6hz，1h)，3.99(d，j＝10.5hz，1h)，3.51(s，3h)，2.89(dd，j＝13.4，8.3hz，1h)，2.54(dd，j＝13.5，8.3hz，1h)，2.38(s，3h)，1.98
–
1.79(m，2h)，1.70
–
1.62(m，1h)，1.02(d，j＝6.6hz，3h)，0.97(d，j＝6.5hz，3h)，0.86(d，j＝14.2hz，1h)。
[1010]
实施例500
[1011][1012]
步骤1：在氮气中用碘化亚铜(i)(3mg，0.016mmol)，l-脯氨酸钠(6mg，0.044mmol)和甲烷磺酰钠(13mg，0.127mmol)处理(3r,5's)-5-溴代-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(43mg，0.070mmol)在dmso(0.5ml)中的溶液。用氮气鼓泡所得反应混合物5分钟。将反应混合物回暖至90℃并搅拌过夜。通过v10蒸发器浓缩反应混合物。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的丙酮/环己烷洗脱，产生(3r,5's)-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-5-(甲基磺酰基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(16mg，0.026mmol，37.3％产率)白色固体。lc-ms，es-：614.24[m-h]-.
[1013]
步骤2：在0℃下用tea(30μl，0.215mmol)和tfaa(11μl，0.078mmol)逐滴处理(3r,5's)-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-5-(甲基磺酰基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(15mg，0.024mmol)在dcm(0.04ml)中的溶液。在0℃下搅拌反应30分钟，然后用碳酸氢钠饱和溶液淬火反应，用二氯甲烷提取水相层三次。用硫酸钠干燥结合的有机层，过滤并真空条件下浓缩。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的乙酸乙酯/环己烷洗脱产生n-((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-5-(甲基磺酰基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)-4,6-二氟-n-甲基-1h-吲哚-2-甲酰胺(12mg，0.020mmol，82％产率)白色固体。lc-ms，es-：596.31[m-h]-；1h nmr(500mhz，甲醇-d4)δ7.80(dd，j＝8.3，1.8hz，1h)，7.64(d，j＝1.9hz，1h)，7.10(d，j＝8.2hz，1h)，6.98
–
6.89(m，2h)，6.65(td，j＝10.2，2.0hz，1h)，5.38(dd，j＝8.9，6.3hz，1h)，5.26(t，j＝8.0hz，1h)，4.36(d，j＝10.9hz，1h)，4.02(d，j＝10.8hz，1h)，3.44(s，3h)，2.95(s，3h)，2.74(d，j＝8.1hz，1h)，1.92(ddd，j＝14.4，8.9，5.6hz，1h)，1.82(ddd，j＝14.2，8.1，6.2hz，1h)，1.65(ddd，j＝12.2，7.9，6.1hz，1h)，1.34
–
1.22(m，2h)，1.04(d，j＝6.7hz，3h)，0.99(d，j＝6.6hz，3h)，0.93
–
0.85(m，1h)。
[1014]
实施例501
[1015][1016]
步骤1：在一氧化碳环境中(6.22mg，0.222mmol)(1atm)，用tea(100μl，0.717mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(xantphos)(20mg，0.035mmol)和醋酸钯(ii)(6.8mg，0.030mmol)处理(3r,5's)-5-溴代-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(137mg，0.222mmol)在dmf(0.5ml)和meoh(0.5ml)中的溶液。用一氧化碳(6.22mg，0.222mmol)鼓泡所得反应混合物5分钟。将反应回暖至70℃并搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的丙酮/环己烷洗脱产生(3r,5's)-5'-氨基甲酰-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5-羧酸甲酯(85mg，0.143mmol，64.2％产率)灰白色固体。lc-ms，es-：594.26[m-h]-.
[1017]
步骤2：在0℃下，用tea(20μl，0.143mmol)和tfaa(7μl，0.050mmol)逐滴处理(3r,5's)-5'-氨基甲酰-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5-羧酸甲酯(8mg，0.013mmol)在dcm(0.3ml)中的溶液。在0℃下搅拌反应30分钟，然后用饱和碳酸氢钠溶液淬火。用二氯甲烷提取水相层三次。用硫酸钠干燥结合的有机层，过滤并真空条件下浓缩。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的乙酸乙酯/环己烷洗脱产生(3r,5's)-5'-氰基-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5-羧酸甲酯(7mg，0.012mmol，90％产率)白色固体。lc-ms，es-：576.34[m-h]-；1h nmr(500mhz，氯仿-d)δ9.61(s，1h)，8.03(s，1h)，7.80(dd，j＝8.1，1.7hz，1h)，7.76(d，j＝1.7hz，1h)，6.91(d，j＝8.1hz，1h)，6.89
–
6.82(m，2h)，6.63(td，j＝10.0，2.0hz，1h)，5.25(dd，j＝8.4，6.9hz，1h)，5.10(t，j＝8.4hz，1h)，4.78(d，j＝10.5hz，1h)，3.99(d，j＝10.5hz，1h)，3.80(s，3h)，3.54(s，3h)，2.90(dd，j＝13.4，8.5hz，1h)，2.55(ddd，j＝13.5，8.4，1.2hz，1h)，1.93(ddd，j＝14.3，8.4，6.1hz，1h)，1.84(dt，j＝14.2，7.3hz，1h)，1.64(dt，j＝13.7，6.8hz，2h)，1.03(d，j＝6.6hz，3h)，0.97(d，j＝6.6hz，3h)，0.90
–
0.79(m，1h)。
[1018]
实施例502
[1019][1020]
步骤1：在氮气中用pd(oac)2(3mg，0.013mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(xantphos)(8mg，0.014mmol)，co2(co)8(8mg，0.023mmol)，dmap(9mg，0.074mmol)和吗啉(10μl，0.115mmol)处理(3r,5's)-5-溴代-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(21mg，0.034mmol)在1,4-二氧杂环乙烷(0.4ml)中的溶液。用氮气鼓泡所得反应混合物3分钟。将反应物回暖至90℃并在微波辐射的条件下搅拌反应物30分钟。反应完成后，混合物变成黑色的悬浮液。用硅藻土过滤反应混合物并用丙酮冲洗三次。真空浓缩滤出物。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的丙酮/环己烷洗脱产生亮黄色固体状的(3r,5's)-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-5-(吗啉-4-羰基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(15mg，0.023mmol，67.7％产率)。lc-ms，es-：649.43[m-h]-.
[1021]
步骤2：用伯吉斯试剂(11mg，0.046mmol)处理(3r,5's)-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-5-(吗啉-4-羰基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(5mg，7.68μmol)在thf(0.3ml)中的溶液。在室温条件下搅拌反应混合物3h。混合物粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的乙酸乙酯/环己烷洗脱产生n-((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-5-(吗啉-4-羰基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)-4,6-二氟-n-甲基-1h-吲哚-2-甲酰胺(4mg，6.32μmol，82％产率)白色固体。lc-ms，es-：631.26[m-h]-；1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ11.35(s，1h)，8.26(s，1h)，7.25(d，j＝1.7hz，1h)，7.13(dd，j＝8.0，1.6hz，1h)，6.98(dd，j＝9.8，2.3hz，1h)，6.89
–
6.83(m，1h)，6.71(d，j＝8.0hz，1h)，6.60(td，j＝10.0，2.0hz，1h)，5.05
–
4.88(m，2h)，4.82(d，j＝10.2hz，1h)，3.98(d，j＝10.1hz，2h)，3.89
–
3.64(m，5h)，3.58(s，3h)，3.54
–
3.32(m，3h)，2.89(dd，j＝13.1，10.4hz，1h)，2.55
–
2.41(m，1h)，2.18(d，j＝2.3hz，1h)，1.92(dq，j＝17.2，6.7hz，2h)，1.71(p，j＝6.7hz，2h)，1.09(d，j＝6.6hz，3h)，1.03(d，j＝6.5hz，3h)，0.84(s，1h)。
[1022]
实施例503
[1023][1024]
步骤1：在氮气环境中，用叠氮化钠(18mg，0.277mmol)，碘化亚铜(i)(4.6mg，0.024mmol),(1s,2s)-n1,n2-二甲基环己烷-1,2-二胺(7μl，0.044mmol)和抗坏血酸钠(5.4mg，0.027mmol)处理(3r,5's)-5-溴代-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(65mg，0.105mmol)在乙醇(0.3ml)和水(0.15ml)中的溶液。用氮气鼓泡所得反应混合物5分钟。将反应加热到100℃并在微波辐射下搅拌30分钟。真空浓缩反应混合物。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的丙酮/环己烷洗脱产生黄色固体状的(3r,5's)-5-叠氮-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(33mg，0.057mmol，54.1％产率)。lc-ms，es-：577.36[m-h]-.
[1025]
步骤2：在0℃下逐滴用tea(50μl，0.359mmol)和tfaa(25μl，0.177mmol)处理(3r,5's)-5-叠氮-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(33mg，0.057mmol)在dcm(0.5ml)中的溶液。在0℃下搅拌反应30分钟，然后用饱和碳酸氢钠溶液淬火。用二氯甲烷提取水相层三次。用硫酸钠干燥结合的有机层，过滤并真空条件下浓缩。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的乙酸乙酯/环己烷洗脱产生n-((s)-1-((3r,5's)-5-叠氮-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)-4,6-二氟-n-甲基-1h-吲哚-2-甲酰胺(14mg，0.025mmol，43.8％产率)白色固体。lc-ms，es-：559.34[m-h]-；1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ9.17(s，1h)，8.27(s，1h)，6.93(s，1h)，6.83(dd，j＝8.9，3.0hz，2h)，6.71
–
6.55(m，2h)，6.42(d，j＝2.2hz，1h)，5.39(dd，j＝9.2，6.0hz，1h)，5.03(t，j＝8.4hz，1h)，4.55(d，j＝10.6hz，1h)，3.95(d，j＝10.6hz，1h)，3.50(s，3h)，2.88(dd，j＝13.4，8.5hz，1h)，2.53(dd，j＝13.4，8.5hz，1h)，2.18(d，j＝2.5hz，1h)，1.95(ddd，j＝14.4，9.1，5.4hz，1h)，1.79(ddd，j＝14.2，8.4，6.0hz，1h)，1.02(d，j＝6.6hz，3h)，0.96(d，j＝6.5hz，3h)，0.87(d，j＝11.0hz，1h)。
[1026]
实施例504
[1027]
[1028][1029]
步骤1：在氮气环境中，用叠氮化钠(18mg，0.277mmol)，碘化亚铜(i)(4.6mg，0.024mmol),(1s,2s)-n1,n2-二甲基环己烷-1,2-二胺(7μl，0.044mmol)和抗坏血酸钠(5.4mg，0.027mmol)处理(3r,5's)-5-溴代-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(65mg，0.105mmol)在乙醇(0.3ml)和水(0.15ml)中的溶液。用氮气鼓泡所得反应混合物5分钟。将反应加热到100℃并在微波辐射下搅拌30分钟。真空浓缩反应混合物。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的丙酮/环己烷洗脱产生黄色固体状的(3r,5's)-5-氨基-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(19mg，0.034mmol，32.6％产率)。lc-ms，es-：551.27[m-h]-.
[1030]
步骤2：用hatu(15mg，0.039mmol)和n-甲基吗啉(20μl，0.182mmol)处理(3r,5's)-5-氨基-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(15mg，0.027mmol)和1-氟代环丙基-1-羧酸(4.7mg，0.045mmol)在dmf(0.1ml)和dcm(0.3ml)中的溶液。在室温条件下搅拌反应混合物3h，然后用碳酸氢钠饱和溶液淬火反应。用乙酸乙酯提取水相层三次。用硫酸钠干燥结合的有机层，过滤并真空条件下浓缩。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的丙酮/环己烷洗脱产生亮黄色固体状的(3r,5's)-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-5-(1-氟代环丙基-1-羧酸胺)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(15mg，0.023mmol，87％产率)。lc-ms，es-：637.69[m-h]-.
[1031]
步骤3：用伯吉斯试剂(17mg，0.071mmol)处理(3r,5's)-1'-(n-(4,6-二氟-1h-吲哚-2-羰基)-n-甲基-l-亮氨酰)-5-(1-氟代环丙基-1-羧酸胺)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺(15mg，0.023mmol)在dcm(0.3ml)中的溶液。在室温条件下搅拌反应混合物3h。所得混合物被加入到4g硅胶柱中并用0％到100％的乙酸乙酯/环己烷洗脱产生白色固体状的n-((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-5-(1-氟代环丙基-1-羧酸胺)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)-4,6-二氟-n-甲基-1h-吲哚-2-甲酰胺(12mg，0.019mmol，82％产率)。lc-ms，es-：619.25[m-h]-；1h nmr(500mhz，氯仿-d)δ9.43(s，1h)，8.28(s，1h)，8.20(d，j＝5.1hz，1h)，7.35(dd，j＝8.4，2.1hz，1h)，7.25(d，j＝2.2hz，1h)，6.92(d，j＝2.3hz，1h)，6.79(dd，j＝24.3，8.5hz，2h)，6.63(td，j＝10.0，2.0hz，1h)，5.20(dd，j＝10.0，5.2hz，1h)，5.04(t，j＝8.6hz，1h)，4.42(d，j＝10.6hz，1h)，3.98(d，j＝10.5hz，1h)，3.52(s，3h)，2.88(dd，j＝13.2，9.0hz，1h)，2.61
–
2.49(m，1h)，1.99(ddd，j＝14.4，10.1，4.8hz，1h)，1.81
–
1.56(m，4h)，1.52
–
1.34(m，4h)，1.03(d，j＝6.4hz，3h)，0.94
(d，j＝6.3hz，3h)，0.78
–
0.90(m，1h)。
[1032]
实施例505
[1033][1034][1035]
步骤1：用五水合硫酸铜(ii)(1.7mg，6.81μmol)和抗坏血酸钠(3.3mg，0.017mmol)处理n-((s)-1-((3r,5's)-5-叠氮-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)-4,6-二氟-n-甲基-1h-吲哚-2-甲酰胺(8mg，0.014mmol)和乙基环丙基(3μl，0.035mmol)在tbuoh(0.2ml)和水(0.2ml)中的溶液。在室温条件下搅拌所得反应混合物过夜。用饱和碳酸氢钠水溶液淬火反应。用二氯甲烷提取水相层三次。用硫酸钠干燥结合的有机层，过滤并真空条件下浓缩。粗产品被加入到4克硅胶柱中并用0％到100％的乙酸乙酯/环己烷洗脱产生n-((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-5-(4-环丙基-1h-1,2,3-triazol-1-基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)-4,6-二氟-n-甲基-1h-吲哚-2-甲酰胺(2.4mg，3.83μmol，26.8％产率)白色固体。lc-ms，es

：627.53[m h]

；1h nmr(500mhz，氯仿-d)δ10.34(s，1h)，7.86(s，1h)，7.69(d，j＝2.0hz，1h)，7.54(s，1h)，7.32(dt，j＝9.2，2.6hz，2h)，7.00(d，j＝8.3hz，1h)，6.83(d，j＝2.2hz，1h)，6.62(td，j＝10.0，2.1hz，1h)，5.00(ddd，j＝20.4，8.9，7.3hz，2h)，4.85(d，j＝10.3hz，1h)，4.04(d，j＝10.3hz，1h)，3.56(s，3h)，2.94(dd，j＝13.3，9.4hz，1h)，2.57(dd，j＝13.2，8.0hz，1h)，2.18(d，j＝2.9hz，2h)，2.08
–
1.94(m，2h)，1.80(dt，j＝14.1，7.1hz，1h)，1.70(dt，j＝13.5，6.7hz，1h)，1.26(s，2h)，1.05(dd，j＝7.6，4.5hz，4h)，1.02
–
0.95(m，3h)，0.95
–
0.87(m，3h)，0.85(d，j＝12.7hz，1h)。
[1036]
实施例506
[1037][1038]
步骤1：向溴化物(85mg，0.138mmol)和吡啶-3-基硼酸(25mg，0.207mmol)在thf(0.7ml)中的溶液中加入xphospd g3(12mg，0.014mmol)和k3po4(0.55ml，0.5m aq)。将反应混合物加热到85℃维持18h。用水淬火反应混合物，用乙酸乙酯提取。分离有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-80％丙酮在环己烷中的溶液纯化残余物产生理想产物(25mg，30％)。
[1039]
步骤2：0℃下，向来自步骤1中的材料(25mg，0.041mmol)在dcm(1ml)中的溶液中加入tfaa(17μl，0.122mmol)和et3n(34μl，0.244mmol)。粗产品直接被装载在硅胶柱上用0-80％丙酮在环己烷中的溶液进行色谱分离，产生ep-040278(15mg，62％)。595.343[m-h].1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ11.07(s，1h)，9.89(s，1h)，9.02(d，j＝2.5hz，1h)，8.57(dd，j＝4.8，1.6hz，1h)，7.72(dt，j＝8.1，1.9hz，1h)，7.48(dd，j＝8.1，1.9hz，1h)，7.37(d，j＝1.9hz，1h)，7.26(dd，j＝8.0，4.8hz，1h)，7.21
–
7.15(m，1h)，7.15
–
7.07(m，1h)，6.86(dd，j＝2.5，0.9hz，1h)，6.77(td，j＝10.3，2.1hz，1h)，5.56(dd，j＝10.7，4.6hz，1h)，5.37(t，j＝8.5hz，1h)，4.53(d，j＝10.8hz，1h)，4.06(d，j＝10.7hz，1h)，3.39(s，3h)，2.83(td，j＝6.4，3.0hz，5h)，2.75(dd，j＝13.2，8.6hz，1h)，2.12
–
1.92(m，5h)，1.83
–
1.57(m，2h)，1.00(dd，j＝26.6，6.3hz，6h)。
[1040]
实施例507
[1041][1042]
步骤1：向溴化物(252mg，0.409mmol)在二氧杂环乙烷(2ml)中的溶液中加入乙炔基三甲基硅烷(87μl，0.613mmol)，pd(pph3)cl2(28.7mg，0.041mmol)，cui(15.6mg，0.082mmol)，和et3n(171μl，1.23mmol)。将反应混合物加热到85℃维持18h。用水淬火反应混合物，用乙酸乙酯提取。分离有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-80％丙酮在环己烷中的溶液纯化残余物产生理想产物(165mg，64％)。
[1043]
步骤2：向来自步骤1的材料(139mg，0.219mmol)在甲醇(2ml)中的溶液中加入k2co3(61mg，0.439mmol)。在室温条件下搅拌所得反应混合物18h。用水淬火反应混合物，用乙酸乙酯提取。分离有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-80％丙酮在环己烷中的溶液纯化残余物产生理想产物(77mg，63％)。
[1044]
步骤3：向步骤2所得材料(77mg，0.137mmol)和四唑并[1,5-a]吡啶(25mg，0.206mmol)在dmf(2ml)中的溶液中加入cuso
4-五水合物(9mg，0.036mmol)，抗坏血酸钠(7mg，0.035mmol)，和水(1ml)。将反应混合物加热到80℃维持18h。用水淬火反应混合物，用乙酸乙酯提取。分离有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。在硅胶色谱柱上用0-80％丙酮在环己烷中的溶液纯化残余物产生理想产物(50mg，54％)。
[1045]
步骤4：0℃下，向步骤3所得材料(50mg，0.041mmol)在dcm(1ml)中的溶液中加入tfaa(31μl，0.220mmol)和et3n(62μl，0.440mmol)。粗产品直接被装载在硅胶柱上并用0-80％丙酮在环己烷中的溶液进行色谱分离产生ep-040469.662.405[m-h]。1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.49(s，1h)，9.87(s，1h)，8.58
–
8.49(m，2h)，8.18
–
8.08(m，2h)，7.71(d，j＝8.2hz，1h)，7.67(d，j＝1.7hz，1h)，7.52(ddd，j＝6.3，4.8，2.2hz，1h)，7.05(d，j＝8.0hz，1h)，7.03
–
6.94(m，1h)，6.70(dd，j＝2.3，1.0hz，1h)，6.44(td，j＝10.3，2.1hz，1h)，5.67
–
5.59(m，1h)，5.40(t，j＝8.4hz，1h)，4.71(d，j＝10.7hz，1h)，4.00(d，j＝10.8hz，1h)，3.53(s，3h)，3.25(s，1h)，2.77(dd，j＝13.3，8.1hz，1h)，2.09
–
2.04(m，2h)，1.98(ddd，j＝14.3，
9.4，5.2hz，1h)，1.79(ddd，j＝14.1，8.6，5.7hz，1h)，1.62(dt，j＝14.4，6.9hz，1h)，1.44(d，j＝0.9hz，2h)，1.31(s，2h)，0.98(dd，j＝22.7，6.5hz，7h)。
[1046]
使用如上所述的相似的方法制备下列实施例。
[1047]
[1048]
[1049]
[1050]
[1051]
[1052][1053]
实施例517
[1054][1055]
步骤11'-(叔丁基)5'-甲基(3r,5's)-5-溴代-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1',5'-碳酸氢酯(897mg，2.11mmol)溶解于mtbe(14ml)中并被冷却到0℃。缓慢的加入硼氢化锂(2.0m in thf，5.3ml，5eq.)，并在0℃下搅拌所得反应混合物。40分钟后再次加入2.5ml硼氢化锂溶液，并在60分钟后再次加入。用饱和氯化铵淬火反应。用乙酸乙酯和二乙醚提取反应混合物，然后用盐水洗涤收集的有机部分，用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩.将粗产品装入制备型hplc中产生叔丁基(3r,5's)-5-溴代-5'-(羟基甲基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-羧酸酯(202mg，0.508mmol，24％产率)。
[1056]
步骤2
[1057]
叔丁基(3r,5's)-5-溴代-5'-(羟基甲基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-羧酸酯(60mg，0.151mmol)溶解于dcm/tfa(1ml，1：1ratio)并在室温条件下搅拌。45分钟后，直接浓缩反应混合物。将残余物再次溶解在甲醇中并再次浓缩。然后将残余物再次溶解在乙酸乙酯中并再次浓缩。不需要进一步纯化直接使用所得残余物。
[1058]
步骤3
[1059]
粗品(3r,5's)-5-溴代-5'-(羟基甲基)螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-2-酮2,2,2-三氟代醋酸酯(粗品，假定0.161mmol)溶解于dmf(0.644ml，0.25m)中，然后加入ipr2net(87mg，0.676mmol，4.2eq.)和n-((苯甲氧)羰基)-n-甲基-l-亮氨酸(54mg，0.193mmol，1.2eq.)。一旦获得均质溶液，就加入hatu(73mg，0.193mmol，1.2eq.)。16小时后，用水稀释反应混合物并在oasis hlb(200mg)萃取筒上对混合物进行固相萃取，用水和甲醇洗脱，产生苯甲基((s)-1-((3r,5's)-5-溴代-5'-(羟基甲基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(94mg)。
[1060]
步骤4
[1061]
苯甲基((s)-1-((3r,5's)-5-溴代-5'-(羟基甲基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)氨基甲酸酯(粗品，假定0.173mmol)溶解于ch2cl2(1.5ml)中并被冷却到0℃.加入戴斯-马丁氧化剂(110mg，0.259mmol)。在0℃下搅拌反应混
合物2h，然后tlc显示初始材料消耗完成(1：1己烷s/乙酸乙酯)。然后在dcm和饱和na2s2o3中使反应物分层，随后用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤有机层，用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩。粗产品残余物不经过进一步纯化就可以使用。
[1062]
步骤5
[1063]
苯甲基((s)-1-((3r,5's)-5-溴代-5'-甲酰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(粗品，假定0.173mmol)溶解于ch2cl2(6ml)中，随后加入ipr2net(67mg，0.519mmol，3eq.)和羟基胺盐酸盐(240mg，3.46mmol)。4天之后，加入乙酸乙酯和水。用盐水洗涤有机相，并用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩。粗产品残余物不经过进一步纯化就可以使用.
[1064]
步骤6
[1065]
苯甲基((s)-1-((3r,5's)-5-溴代-5'-((羟基亚氨基)甲基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(假定0.161mmol)溶解于mecn(3.22ml)中并加入醋酸铜(ii)(9mg，0.05mmol)。将反应混合物加热到70℃维持80min。用制备型hplc纯化混合物产生苯甲基((s)-1-((3r,5's)-5-溴代-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(1.1mg，0.002mmol，5个步骤产率为1％)。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.40(dd，j＝8.3，2.0hz，1h)，7.35
–
7.15(m，4h)，7.13
–
7.05(m，2h)，6.89(dd，j＝8.4，3.3hz，1h)，5.18(t，j＝8.2hz，1h)，4.99(dd，j＝9.1，6.1hz，1h)，4.95
–
4.89(m，1h)，4.76(d，j＝12.3hz，1h)，4.22(d，j＝10.9hz，1h)，3.87(d，j＝10.8hz，1h)，1.77(ddd，j＝14.3，9.0，5.4hz，1h)，1.65(ddd，j＝13.9，8.2，5.9hz，1h)，1.48(dt，j＝13.9，6.8hz，1h)，0.94(dd，j＝15.3，6.5hz，6h)。[m na]m/z 574.82.
[1066]
实施例518
[1067]
[1068][1069]
步骤1
[1070]
在80℃下，在充满氮气的密封容器中，叔丁基(3r,5's)-5-溴代-5'-(羟基甲基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-羧酸酯(60mg，0.151mmol)，碳酸铯(148mg，0.453mmol)，三氟代(甲基)硼酸钾(36.8mg，0.302mmol)，和pd(dppf)cl2(27.6mg，0.038mmol)被加热过夜。将反应混合物用制备型hplc纯化产生叔丁基(3r,5's)-5'-(羟基甲基)-5-甲基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-羧酸酯(9mg，0.27mmol，18％)。
[1071]
步骤2
[1072]
将叔丁基(3r,5's)-5'-(羟基甲基)-5-甲基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-羧酸酯(60mg，0.151mmol)溶解于dcm/tfa(1ml，1：1比率)并在室温下搅拌。45分钟后，直接浓缩反应混合物。将残余物再次溶解在甲醇中并再次浓缩。然后将残余物再次溶解在乙酸乙酯中并再次浓缩。不需要进一步纯化直接使用所得残余物。
[1073]
步骤3
[1074]
粗品(3r,5's)-5'-(羟基甲基)-5-甲基螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-2-酮(粗品，假定0.045mmol)被溶解于dmf(0.563ml，0.08m)中，然后加入ipr2net(38mg，0.293mmol，6.5eq.)和n-((苯甲氧)羰基)-n-甲基-l-亮氨酸(38mg，0.135mmol，3eq.)。一旦获得均质溶液，就加入hatu(51mg，0.135mmol，3eq.)。16小时后，用水稀释反应混合物并在oasis hlb(200mg)萃取筒上对混合物进行固相萃取，用水和甲醇洗脱，产生苯甲基((s)-1-((3r,5's)-5'-(羟基甲基)-5-甲基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(42mg)。[m h]m/z494.387.
[1075]
步骤4
[1076]
苯甲基((s)-1-((3r,5's)-5'-(羟基甲基)-5-甲基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)氨基甲酸酯(42mg，假定0.088mmol)被溶解于ch2cl2(1.5ml)中并被冷却到0℃.然后加入戴斯-马汀氧化剂(110mg，0.259mmol)。在0℃下搅拌反应混合物2h，然后tlc确定初始材料的消耗(1：1己烷/乙酸乙酯)。随后将反应混合物放置在dcm和饱和na2s2o3中分层，用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤结合的有机相，用硫酸镁干燥，过滤，
((s)-1-((3r,5's)-5-氯代-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-3-环丙基-1-氧丙-2-基)-4-氟代-3-甲基苯并[b]噻吩-2-甲酰胺(1.20mg，0.0022mmol，2％产率)。1h nmr(500mhz，丙酮-d6)δ9.82(s，1h)，7.80
–
7.70(m，2h)，7.48(td，j＝8.0，4.8hz，1h)，7.36
–
7.25(m，2h)，7.16(ddd，j＝12.2，8.0，0.8hz，1h)，7.02(d，j＝8.2hz，1h)，5.29(t，j＝8.2hz，1h)，4.88(q，j＝7.0hz，1h)，4.50
–
4.44(m，1h)，4.13(d，j＝10.5hz，1h)，2.86(ddd，j＝13.3，8.5，1.1hz，1h)，2.80(s，3h)，2.73(dd，j＝13.3，7.9hz，1h)，1.85(t，j＝7.0hz，2h)，0.95(dddd，j＝15.1，10.2，5.2，2.4hz，1h)，0.58
–
0.52(m，2h)，0.30(dddd，j＝9.4，4.7，2.7，1.4hz，1h)，0.24(dddd，j＝9.0，6.3，2.8，1.2hz，1h)。[m h]

550.741
[1084]
使用如上所述相似得方法制备以下实施例。
[1085]
[1086]
[1087]
[1088]
[1089][1090]
实施例527
[1091][1092]
ipr2net(35.0μl，0.200mmol)被加入到2,5-二氧吡咯烷-1-基(((s)-2,2,2-三氟代-1-苯基乙氧)羰基)-l-亮氨酸酯(66.3mg，0.154mmol),(3r,5's)-5-氟代-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺盐酸(44mg，0.154mmol)，和mecn(0.380ml)中搅拌后得溶液中。室温条件下搅拌所得反应混合物3h，然后回暖到50℃并维持16h。在此之后，加入15ul ipr2net和20ul 2,5-二氧吡咯烷-1-基(((s)-2,2,2-三氟代-1-苯基乙氧)羰基)-l-亮氨酸酯，并且进一步将所得混合物回暖至65℃。24h之后，加入三氟代醋酸钯(ii)(51mg，0.154mmol)，二氯代乙腈(0.38ml)，和水(0.38ml)，在65℃下持续搅拌。25分钟后，反应混合物被冷却至室温，过滤，并使用制备型hplc处理产生(s)-2,2,2-三氟代-1-苯基乙基((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-5-氟代-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-甲基-1-氧戊-2-基)氨基甲酸酯(0.96mg，0.0017mmol，1％产率)。1h nmr(500mhz，丙酮-d6)δ9.70(s，1h)，7.52(dt，j＝6.6，3.8hz，2h)，7.46(dp，j＝4.6，1.7hz，3h)，7.32(d，j＝8.0hz，1h)，7.07(ddd，j＝9.4，8.6，2.6hz，1h)，7.03
–
6.95(m，2h)，6.09(q，j＝7.1hz，1h)，5.24(t，j＝8.2hz，1h)，4.43(ddd，j＝9.7，7.9，4.6hz，1h)，4.31
–
4.18(m，1h)，4.00(d，j＝10.4hz，1h)，2.82(ddd，j＝13.3，8.5，1.0hz，2h)，2.70(dd，j＝13.3，7.9hz，1h)，1.83
–
1.59(m，3h)，0.95(d，j＝6.6hz，3h)，0.88(d，j＝6.5hz，3h)。[m h]

547.20.
[1093]
实施例528
[1094][1095]
步骤1
[1096]
室温条件下，37％的甲醛(0.312ml，4.19mmol，1.12eq.)水溶液被加入到(s)-2-氨基-3-(4-氯代-1h-吲哚-3-基)丙酸(892mg，3.74mmol)和0.5n naoh(1.1eq.naoh，8.22ml)中的溶液中。室温条件下搅拌所得反应混合物2h，然后在104℃下搅拌24h.在此过程中，如果需要的话，向反应混合物中再次冲入甲醛溶液(在此情况下3小时后加入0.3ml)。将反应混合物冷却至室温并加入乙酸(0.449ml，7.85mmol，2.1eq.)。然后过滤所得混合物，用水和thf顺序冲洗，产生粗品a-1，其不需要进一步纯化就被使用。
[1097]
步骤2
[1098]
a-1(假定100％产率)被加入到0.44m socl2在meoh(15ml，相对于底物浓度为0.25m)中的溶液中。40℃下搅拌所得反应混合物5天。通过lcms判断起始材料被完全消耗，直接浓缩混合物产生粗品b-1，其不需要被进一步纯化就可以使用。[m h]m/z 265.051.
[1099]
步骤3.
[1100]
化合物b-1(假定100％产率)被悬浮在dcm(14ml)中，然后加入hunig's碱(1.25ml，7.2mmol)，随后加入二-叔丁基碳酸氢酯(1.2g，5.5mmol)在dcm(2.5ml)中的溶液。当tlc(10：1dcm/meoh)显示初始材料被消耗时，直接浓缩反应混合物。用硅胶色谱处理残余物，用0-35％乙酸乙酯在己烷中的溶液洗脱，产生c-1(404mg，1.16mmol，3步骤产率为31％)。
[1101]
步骤4
[1102]
在0℃下，将nbs(177mg，0.997mmol，0.9eq.)加入到剧烈搅拌后的c-1(404mg，1.107mmol)在2-methf/水/乙酸(63：28：9比率，7.7ml总体积，0.114m)中的混合物中。在0℃下搅拌所得反应混合物90分钟，然后缓慢的回暖至室温。当tlc显示初始材料被消耗完时，
用饱和nahco3水溶液淬火反应，用et2o提取。用硫酸镁干燥有机相，过滤，并浓缩。用硅胶色谱处理残余物，用0-50％乙酸乙酯在己烷中的溶液洗脱，产生d-1(251mg，0.66mmol，60％产率)。
[1103]
步骤5
[1104]
将d-1(251mg，0.659mmol)溶解于thf(3.30ml，0.2m)中并冷却至0℃。然后加入硼氢化锂(2.0m在thf中的溶液，1.98ml，6eq.)。当tlc(1：1己烷s/etoac)显示初始材料被完全消耗时，将反应物倒入冰冻的饱和氯化铵水溶液中。用乙酸乙酯和二乙醚提取反应混合物，用盐水洗涤收集的有机部分，用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩，产生粗产品e-1(228mg)，其不需要被进一步纯化就可以使用.
[1105]
步骤6
[1106]
将粗产品e-1(50mg，0.142mmol)溶解于dcm/tfa(4ml，1：1比率)中并在室温下搅拌。45分钟后，直接浓缩反应混合物。将残余物再次溶解在甲醇中并再次浓缩。然后将残余物再次溶解在乙酸乙酯中并再次浓缩，产生f-1，其不需要被进一步纯化就可以使用.
[1107]
步骤7
[1108]
化合物f-1被溶解于dmf(0.947ml)和ipr2net(92mg，0.71mmol)中，随后加入(4-氟代-1h-吲哚-2-羰基)-l-亮氨酸(50mg，0.17mmol)。当反应物均质化后，加入hatu(65mg，0.17mmol)。在室温条件下搅拌所得混合物2.5天，然后用水和dcm稀释。用饱和nahco3水溶液和盐水洗涤有机相，然后用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩，产生粗产品g-1(假定100％产率)。[m h]m/z 526.913.
[1109]
步骤8
[1110]
粗产品g-1被溶解于ch2cl2(1.42ml)中并冷却至0℃。加入戴斯-马汀氧化剂(110mg)并在0℃条件下搅拌所得混合物。1小时后，再次加入戴斯-马汀氧化剂(80mg)。2小时后，再次加入戴斯-马汀氧化剂(200mg)。然后用饱和na2s2o3水溶液淬火反应混合物，随后所得混合物被dcm提取。用饱和nahco3水溶液和盐水洗涤有机相，然后用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩。
[1111]
通过以上步骤得到的粗产品被溶解于dcm(10ml)中并加入ipr2net(92mg，0.71mmol)。随后加入盐酸羟胺(247mg，3.55mmol)，并在室温条件下搅拌所得混合物16小时。加入水，分离各个相，然后用硫酸镁干燥有机相并浓缩。上述步骤得到的粗产品被溶解于mecn(3ml)中并加入醋酸铜(ii)(9mg，0.05mmol)。将所得混合物加热到70℃并维持1小时。将所得混合物冷却至室温并用制备型hplc处理产生实施例528(0.70mg)。1h nmr(500mhz，丙酮-d6)δ7.42
–
7.36(m，1h)，7.26
–
7.19(m，1h)，6.96(m，1h)，6.81(m，1h)，5.35(m，1h)，5.05(m，1h)，4.76(mf，1h)，4.69(d，j＝11.0hz，1h)，4.13(d，j＝11.0hz，1h)，3.12(dd，j＝14.1，9.7hz，1h)，2.69(dd，j＝14.1，4.5hz，1h)，1.83(m，2h)，1.78
–
1.68(m，1h)，1.06
–
0.93(m，6h)。[m h]m/z 521.835.
[1112]
使用如上所述的相似的方法制备下列实施例。
[1113]
[1114]
[1115]
[1116][1117]
实施例535
[1118][1119]
步骤1
[1120]
将(3r,5's)-1'-((s)-4-氟代-4-甲基-2-(甲基氨基)戊基)-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-5'-甲酰胺盐酸盐(198mg，0.48mmol)悬浮在dcm(4.80ml)中并加入et3n(334ul，2.40mmol，5eq.)。将所得混合物冷却至0℃，然后逐滴加入乙酰氯(42.9μl，
0.528mmol)。在0℃下维持45分钟，加入meoh(1ml)并直接浓缩反应混合物。将残余物与乙酸乙酯一起蒸发并不需要进一步纯化直接使用。
[1121]
步骤2
[1122]
来自步骤1(假定100％产率)的粗产物被重新悬浮在dcm(3.43ml)中，然后加入伯吉斯试剂(0.343g，1.440mmol)。在室温条件下搅拌所得混合物过夜，然后直接浓缩。用硅胶色谱处理残余物，用0-80％etoac在环己烷中的溶液洗脱，产生n-((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-氟代-4-甲基-1-氧戊-2-基)-n-甲基乙酰胺(181mg，0.439mmol，2步骤产率为91％)。1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ9.67(s，1h)，7.22(td，j＝7.6，1.5hz，1h)，7.03
–
6.91(m，3h)，6.48(dd，j＝16.7，10.4hz，1h)，5.85(dd，j＝16.7，2.4hz，1h)，5.70(dd，j＝7.5，5.7hz，1h)，5.49(dd，j＝10.4，2.4hz，1h)，5.16(t，j＝8.3hz，1h)，4.27(dd，j＝10.7，1.2hz，1h)，3.89(d，j＝10.7hz，1h)，2.77
–
2.58(m，2h)，2.36
–
2.23(m，1h)，2.23
–
2.08(m，1h)，1.41
–
1.35(m，6h)。[m na]m/z 435.33.
[1123]
使用如上所述的相似的方法制备下列实施例。
[1124]
[1125][1126]
实施例539
[1127][1128]
将三乙胺(47ul，7eq.)加入到n-((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-氟代-4-甲基-1-氧戊-2-基)-n-甲基乙酰胺(20mg，0.048mmol)和二甲基胺盐酸盐(59mg，0.727mmol)在meoh(0.485ml)中的溶液中。当lcms显示产物形成时，使用制备型hplc处理反应混合物产生n-((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-4-氟代-4-甲基-1-氧戊-2-基)-3-(二甲基氨基)-n-甲基丙胺(1.95mg，0.0043mmol，9％产率)。1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ7.32(td，j＝7.7，1.2hz，1h)，7.12(td，j＝7.5，1.1hz，1h)，7.04(d，j＝7.7hz，1h)，6.97(dt，j＝7.4，1.0hz，1h)，5.68(dd，j＝7.2，6.0hz，1h)，5.19(t，j＝8.4hz，1h)，4.28(dd，j＝10.8，1.3hz，1h)，3.86(d，j＝10.7hz，1h)，3.01(s，3h)，2.79
–
2.62(m，3h)，2.62
–
2.44(m，2h)，2.44
–
2.24(m，4h)，2.16
–
2.10(m，1h)，1.37(m，6h)。[m h]m/z 458.488.
[1129]
使用如上所述的相似的方法制备下列实施例.
[1130]
[1131]
[1132]
[1133][1134]
实施例548
[1135][1136]
步骤1
[1137]
将boc dap oh(2g，9.79mmol)悬浮在thf(70.0ml)和ipr2etn(3.42ml，19.59mmol)的混合物中，然后冷却至0℃。然后逐滴加入4-氯代丁酰氯(1.096ml，9.79mmol)(10：25am)。在室温条件下搅拌大约40分钟，将反应混合物冷却到0℃。从11：15开始，在2分钟的时间内分部分加入kotbu(4.40g，39.2mmol)。10分钟后，用1n hcl将反应ph值调整到ph 1，然后用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤有机相，用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩。用硅胶色谱处理残余物，用30-100％乙酸乙酯在环己烷中的溶液洗脱，产生(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(2-氧吡咯烷-1-基)丙酸(1.42g，2.87mmol，29％产率)。1h nmr(400mhz，dmso-d6)δ12.73(s，1h)，7.09(d，j＝8.5hz，1h)，4.15(td，j＝8.5，5.4hz，1h)，3.59(dd，j＝13.7，5.4hz，1h)，3.40
–
3.28(m，4h)，2.24
–
2.11(m，2h)，1.91
–
1.80(m，2h)，1.37(s，9h)。[m na]m/z 295.326.
[1138]
步骤2
[1139]
室温条件下，将(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(2-氧吡咯烷-1-基)丙酸(389mg，1.43mmol)添加到4n hcl在二氧杂环乙烷(4.3ml，12eq.hcl)中的溶液中。在室温中维持30分钟后，直接浓缩所得白色悬浮液产生(s)-2-氨基-3-(2-氧吡咯烷-1-基)丙酸盐酸盐
(408mg，粗产品)。白色固体状的粗产品不需要进一步纯化就可以使用。1h nmr(400mhz，氧化氘)δ4.17(dd，j＝6.4，4.2hz，1h)，3.89(dd，j＝15.1，4.2hz，1h)，3.79(d，j＝6.4hz，1h)，3.54(td，j＝7.3，1.6hz，2h)，2.45(dd，j＝9.1，7.6hz，2h)，2.08(qd，j＝8.2，6.9hz，2h)。
[1140]
步骤3
[1141]
将(s)-2-氨基-3-(2-氧吡咯烷-1-基)丙酸盐酸盐(20mg，粗产品)溶解于thf(0.48ml)和水(0.48ml)的混合物中，然后加入固体nahco3(40mg，0.48mmol)。将反应混合物冷却至0℃，然后加入cbzcl(15ul，0.105mmol)。在室温条件下搅拌所得混合物3天，然后再乙酸乙酯和1n hcl之间分层。用盐水洗涤有机相，用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩产生粗产品(s)-2-(((苯甲氧)羰基)氨基)-3-(2-氧吡咯烷-1-基)丙酸，其不需要被进一步纯化就可以使用(假定100％产率)。[m h]m/z 307.322.
[1142]
步骤4
[1143]-10℃下，按顺序将hatu(35mg，0.092mmol)和ipr2net(74ul，0.424mmol)加入到化合物1-4(29.5mg，0.11mmol)和(s)-2-(((苯甲氧)羰基)氨基)-3-(2-氧吡咯烷-1-基)丙酸(粗品，假定0.085mmol)在dmf(0.42ml)中搅拌后的溶液中。将混合物回暖至室温。反应物在乙酸乙酯和水之间分层，然后依次使用饱和nahco3水溶液和盐水洗涤有机层，用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩.粗产品残余物(假定100％产率)无需进一步纯化直接用于下一步骤。[m h]m/z 520.468.
[1144]
步骤5
[1145]
在室温下将伯吉斯试剂(122mg，0.51mmol)添加到((s)-1-((3r,5's)-5'-氨基甲酰-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-1-氧-3-(2-氧吡咯烷-1-基)丙-2-基)氨基甲酸苯甲酯(假定0.085mmol)溶液中。45分钟后，加入meoh，然后用制备型hplc处理反应混合物进行纯化，产生苯甲基((s)-1-((3r,5's)-5'-氰基-2-氧螺旋[吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1'-基)-1-氧-3-(2-氧吡咯烷-1-基)丙-2-基)氨基甲酸酯(1.28mg)。1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ9.69(s，1h)，7.37
–
7.29(m，5h)，7.26(td，j＝7.7，1.2hz，1h)，7.18(d，j＝7.4hz，1h)，7.00(t，j＝7.8hz，2h)，6.82(d，j＝8.1hz，1h)，5.16(dd，j＝8.7，7.0hz，1h)，5.03(d，j＝12.6hz，1h)，4.95(d，j＝12.6hz，1h)，4.77(td，j＝7.9，4.9hz，1h)，4.16(q，j＝10.6hz，2h)，3.68(dd，j＝14.1，7.8hz，1h)，3.60
–
3.40(m，4h)，2.78(dd，j＝13.4，8.8hz，1h)，2.66(dd，j＝13.3，7.1hz，1h)，2.20(td，j＝8.2，2.1hz，2h)，2.09
–
2.00(m，4h)，2.00
–
1.87(m，2h)。[m h]m/z 502.481.
[1146]
实施例549
[1147][1148]
步骤1
[1149]
向500-ml圆底烧瓶中充入(s)-2-氨基-3-(1h-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)丙酸(3g，14.62mmol)和磁力搅拌棒。加入甲醇(50ml)产生白色悬浮液。向烧瓶中吹入氮气，用橡胶隔膜密封，并冷却至0℃。在氮气正压条件下缓慢加入亚硫酰氯(3.20ml，43.9mmol)，然后将烧瓶旋入冰浴中。搅拌所得浅黄色溶液10分钟随后使其回暖至接近室温，然后加热回流2小时。蒸发反应溶液产生白色固体，所述白色固体不需要进一步纯化就带入下一步骤。
[1150]
步骤2
[1151]
向500-ml含有粗产品7-氮杂色氨酸甲酯的圆底烧瓶中加入磁力搅拌棒，随后加入吡啶(37ml)，形成白色气体，并注意到轻微放热。超声反应混合物直至产生浅金色溶液。加入甲醛(1.197ml，37％w/w含有10％甲醇的水溶液，16.08mmol，1.10eq)。将冷凝器安装在反应容器上加热回流并搅拌1小时，与此同时通过lcms判断反应完全。将反应容器防止在冰浴上20分钟，产生浓稠的灰白色泥浆状液体。然后用烧结的漏斗过滤泥浆并用预先冷却的吡啶(2x20ml)洗涤滤饼，随后用dcm(10ml)洗涤。在氮气流中干燥所得固体过夜，产生β-卡柏林549-1白色固体，其不需要进一步纯化直接用于下一步骤。
[1152]
步骤3
[1153]
向250-ml含有粗产品β-卡柏林549-1(3.38g，14.62mmol)和磁力搅拌棒的圆底烧瓶中加入水(7.5ml)和thf(30ml)，得到浑浊的溶液。将反应容器冷却到0℃并加入三乙胺(6.11ml，43.9mmol)，随后加入二-叔丁基碳酸氢酯(8.49ml，36.6mmol)。向反应容器中吹入氮气，并维持正压强的氮气气压放置。搅拌2天后，使反应混合物在乙酸乙酯和水中分层并分离各个层。然后用乙酸乙酯提取(3x20ml)水相，用硫酸钠干燥结合的有机相，过滤，并浓缩产生黄色残渣。在硅胶柱上进行快速色谱法纯化，用乙酸乙酯在环己烷中的溶液洗脱产生无色残余物549-2(1.61g，总共三个步骤产率为33％)。1h nmr(400mhz，dmso-d6)，旋转异构体混合物：δ11.40(app.d，j＝24.6hz，1h)，8.13(dd，j＝4.8，1.5hz，1h)，7.85(dd，j＝7.8，1.6hz，1h)，7.02(dd，j＝7.8，4.7hz，1h)，5.31
–
5.13(m，1h)，4.75(t，j＝16.9hz，1h)，4.49
–
4.27(m，1h)，3.57(d，j＝8.0hz，3h)，3.27(m，1h)，3.00(dd，j＝15.5，7.1hz，1h)，1.46(app.d，j＝17.6hz，9h)。
[1154]
步骤4
[1155]
添加化合物549-2(1.60g，4.83mmol)并将其溶解在thf(22.80ml)中倒入1000毫升含有磁力搅拌棒的圆底烧瓶中。加入水(2.85ml)，得到无色的、磁力搅拌的溶液，将此溶液冷却至0℃。在几分钟内分部分加入n-溴代琥珀酰亚胺(0.859g，4.83mmol)，产生黄色溶液。然后用橡胶隔膜盖住烧瓶并加入冰醋酸(1.935ml，33.8mmol)。反应混合物溶液的颜色显著变深直到形成浓重的橙黄色，持续搅拌30分钟。随后加入碳酸钾(3.34g，24.14mmol)和水，并允许反应混合物回暖至室温。分离各个层并用乙酸乙酯提取水相。用硫酸钠干燥结合的有机相，倒入，并在减少的压力下浓缩产生棕褐色胶状物或者泡沫。在硅胶上用快速色谱法纯化，用乙酸乙酯在环己烷中的溶液洗脱，产生单一非对映异构体的纯产物549-3(220mgs)，以及作为非对映异构体混合物存在的杂质产物(1.44g，d.r.～3：1理想产物/非理想产物)。
[1156]
步骤5
[1157]
向100-ml含有549-3(220mg，0.633mmol)和磁力搅拌棒的圆底烧瓶中加入甲醇胺(4.52ml 7m的溶液，31.7mmol)。用带有一根针的塑料膜密封烧瓶，并将黄色的反应溶液加热到55℃并搅拌6天。然后蒸发反应混合物直到剩下棕褐色固体549-4.
[1158]
步骤6
[1159]
将粗产品胺549-4悬浮在hcl在二氧杂环乙烷(3ml of a 4.0m solution，12mmol)中的溶液中。在室温下剧烈搅拌所得悬浮液过夜，然后蒸发得到灰白色固体状得盐酸胺549-5(95mg，三个步骤产率为49％)。1h nmr(400mhz，氧化氘)δ8.19(dd，j＝5.7，1.4hz，1h)，8.01(ddd，j＝7.5，1.5，0.6hz，1h)，7.30(dd，j＝7.7，5.9hz，1h)，4.94(t，j＝8.5hz，1h)，3.94(t，j＝13.2hz，1h)，3.81(d，j＝12.9hz，1h)，2.92(dd，j＝14.1，9.1hz，1h)，2.73(dd，j＝14.1，7.9hz，1h)。
[1160]
步骤7
[1161]
向40毫升玻璃反应容器中加入化合物549-5(181mg，0.593mmol)，n-(叔丁氧羰基)-n-甲基-l-亮氨酸(198mg，0.807mmol)，和磁力搅拌棒。加入dcm(3ml)和dmf(0.750ml)，产生白色悬浮液。将反应混合物冷却至0℃；加入n-甲基吗啉(0.261ml，2.373mmol)，随后加入hatu(226mg，0.593mmol)。向反应容器中吹入氮气并允许反应混合物回暖至室温，搅拌过
夜。然后在硅藻土上蒸发反应混合物，在硅胶(4g)上使用快速色谱法纯化粗产品混合物，用dcm/meoh洗脱产生中间体纯净产物，随后用反相hplc纯化所述产物产生无色固体状的产物549-6。
[1162]
步骤8
[1163]
以上步骤获得的549-6被倒入含有磁力搅拌棒的透明玻璃容器中，用hcl在二氧杂环乙烷(2ml浓度为4.0m的溶液，8.00mmol)中的溶液处理。搅拌所得均质悬浮液11小时，在减少的压力下除去挥发性物质，产生白色固体549-7。
[1164]
步骤9
[1165]
以上步骤获得的化合物549-7被溶解于dcm(0.8ml)和dmf(0.200ml)中产生白色悬浮液。加入n-甲基吗啉(0.0717ml，0.652mmol)；所得混合物立马变澄清得到无色液体。在氮气流中加入hatu(62.0mg，0.163mmol)，随后加入4,6-二氟-1h-吲哚-2-羧酸(32.1mg，0.163mmol)。向容器中吹入氮气、盖上盖子并搅拌所得反应混合物3小时，此时通过在四分之一饱和得碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯中分层淬火反应。分离各个层并用乙酸乙酯(3x10ml)提取水层；用硫酸钠干燥结合得有机物，过滤并在减少得压力下浓缩，产生灰白色残余物549-8.
[1166]
步骤10
[1167]
向40-ml含有粗产品胺化合物549-8和磁力搅拌棒得玻璃反应容器中加入dcm(1.25ml)。向反应容器中吹入氮气，将其冷却到0℃并倒入三乙胺(0.1555ml，1.116mmol)。然后逐滴加入三氟代醋酸酐(0.0787ml，0.557mmol)，产生黄色反应混合物，允许所述反应混合物回暖至室温，并搅拌1.25小时，此时，通过lcms显示起始材料完全消耗。用饱和碳酸氢钠水溶液淬火反应，分离各个层，用盐水洗涤有机物并在减少的压力下浓缩，产生黄色胶状物。用反相hplc纯化粗产品产生无色薄膜，冷冻干燥产生自由流动的白色粉末状的实施例549(34mgs，四个步骤产率为11％产率)。1h nmr(400mhz，丙酮-d6)δ10.87(s，1h)，10.26(s，1h)，7.93(s，1h)，7.36(d，j＝7.3hz，1h)，7.12
–
7.00(m，2h)，6.81
–
6.67(m，2h)，5.55(dd，j＝9.7，5.4hz，1h)，5.21(t，j＝8.3hz，1h)，4.43(d，j＝10.8hz，1h)，4.03(d，j＝10.8hz，1h)，3.47(s，3h)，2.83(ddd，j＝13.4，8.6，1.2hz，1h)，2.72(dd，j＝13.4，8.0hz，1h)，1.96(ddd，j＝14.4，9.7，4.9hz，1h)，1.76(ddd，j＝14.2，8.8，5.4hz，1h)，1.62(dtd，j＝8.9，6.6，4.9hz，1h)，1.00(d，j＝6.7hz，3h)，0.94(d，j＝6.5hz，3h)。lcms[m h]

521.0.
[1168]
使用如上所述相似的方法制备下列实施例：
[1169]
[1170][1171]
生物活性
[1172]
sars-cov-2 3c-样(3cl)蛋白酶荧光实验(fret)：表达并纯化重组sars-cov-2 3cl-蛋白酶。合成tamra-sitsavlqsgfrkmk-dabcyl-oh肽3clpro底物。使用黑色的、低容量、圆底385孔微孔板。在常规实验中，将0.85μl待检测化合物溶解在dmso中，然后在室温下与sars-cov-2 3cl-蛋白酶(10nm)一起在10μl实验缓冲液(50mm hepes[ph 7.5]，1mm dtt，0.01％bsa，0.01％triton-x 100)中培养30分钟。随后，加入10μl在实验缓冲液中的3cl-蛋白酶底物(40mm)并在envision多模式平板阅读器中持续监控本实验1小时，所述平板阅读器在荧光动力学模式下工作，在室温下的激发波长为540nm，发射波长为580nm。在每个微孔板中均包含无化合物(只有dmso)和无酶的参照物，按照此方法常规运行。所有的实验一式两份运行。
[1173]
数据分析：测量sars-cov-2 3cl蛋白酶活性作为线性相的初始速度(rfu/s)并将此数值根据参照样品dmso(100％活性)和无酶(0％活性)进行标准化测定不同浓度的试验化合物(0-10μm)的残余活性百分比。在graphpad prism 7中拟合数据使活性相对于浓度标准化(可变斜率)与浓度拟合，以确定ic
50
。所有的实验一式两份运行，和ic
50
范围读数如下所示：a《0.1mm；b 0.1-1mm；c》1mm。
[1174]
表1.活性总结
[1175]
[1176]
[1177]
[1178]
[1179]
[1180]
[1181]
[1182][1183]
229e实验方案
[1184]
病毒储备制剂：mrc-5细胞(一种由成纤维细胞组成的二倍体细胞培养系，最初由一个14周龄流产的高加索男性胎儿的肺组织发育而来)用于229e人类冠状病毒(hcov)的培
养。烧瓶接种hcov-229e，并且当细胞病变效应(cpe)大于70％时，收集病毒储备。使用液氮快速冷冻处于生长介质(emem，1％penn/strep，1％非必需氨基酸，10％热灭活fbs)中的病毒储备加5％甘油并储存在-80℃下。如其他地方所述，通过tcid
50
(50％组织培养感染剂量中值)实验对病毒存量滴度进行量化。
[1185]
229e活病毒实验：本试验使用384孔黑色细胞培养处理的塑料透明底孔板。使用echo液体分配器，3倍连续稀释参照物和悬浮在二甲基亚砜中的待检测化合物一式两份添加到板孔中，每孔总体积为125nl/孔。将第17代以下的mrc-5细胞接种到384孔板的内部240孔中，每孔1500个细胞，体积为12.5μl，使用生长培养基。然后向每个孔中加入病毒储备，以0.05的感染倍数(moi)添加到各孔中，每个孔的体积为12.5μl，使各孔的总体积达到约25μl。每个孔板有一排20孔的参照孔，其中含有细胞加dmso和病毒，但没有化合物(阳性参照，最大cpe，最小atplite信号)，还有一排孔中含有细胞加二甲基亚砜但不含化合物或者病毒(阴性参照，最小cpe，最大atplite信号)，另外还有一排小孔不含有细胞或者病毒或者化合物(背景板/试剂参照)。向含有细胞但是不含病毒的参照孔中另外加入12.5μl的生长培养基，其中含有的甘油量与接受病毒储备的孔相等，以保持等量的培养基和体积条件。外部2排/列孔填充30μl护城河介质(dmem，1％penn/strep)作为待检测孔的热屏障和挥发屏障。添加所有成分后，用手轻轻敲打孔板的侧面，以促进细胞均匀分布在整个孔中。确认细胞分布后，在34℃条件下，在co2湿度控制培养箱中培养孔板6天。在6天的培养期后，使用atplite(每孔添加12.5μl)读取培养皿，其量化每个孔中存在的atp(细胞健康的度量)量。使用envision光度计读取实验孔板。这些数据用于计算每个孔相对于阴性对照孔的细胞健康百分比，并且每种化合物的ec
50
是使用excelfit软件计算和四参数逻辑曲线拟合分析的。
[1186]
所有的实验一式两份运行，并且ec
50
的范围如下所示：a《0.1μm；b 0.1-1μm；c》1μm.
[1187]
表2.活性总结
[1188]
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[1195][1196]
尽管本发明已经参照其优选的实施方案进行了具体的显示和表述，但是本领域普通技术人员应该理解，在不脱离本发明范围的情况下，在形式和细节上可以存在各种各样的变化，本发明的范围由所附的权利要求书概括。