同位素精神活性物质标记化合物、制备方法、用途及其应用与流程

1.本发明属于精神活性物质标准物质制备与应用技术领域，具体涉及一种同位素精神活性物质标记化合物、制备方法、用途及其应用。


背景技术：

2.针对检材中微量、痕量物质的检测，液相色谱-质谱联用仪搭配同位素标记标准物质内标的同位素稀释质谱法是最常见、高效的检测手段。以同位素标记的标准物质作为内标，同位素标记内标和待测化合物除了分子量之外化学性质完全一致，因此，同位素稀释质谱法可以达到很高的检测精度和灵敏度，是微量精神活性物质准确检测不可或缺的工具。
[0003][0004]
目前生物检材中微量的n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸甲酯 (mdmb-4en-pinaca)及其代谢物n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸 (mdmb-4en-pinaca metabolite)检测的方法一般为液相质谱法，通过选择与mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca及其代谢物化学性质相近的化合物作为内标，通过标准曲线法确定检材中mdmb
‑ꢀ
4en-pinaca及其代谢物的含量。内标物性质与目标物越是接近，其基质效应就越低。目前选择的内标一般为较为常见的d9-apinaca或d5-地西泮。
[0005]
因此，提供一种同位素精神活性物质标记化合物并用于提高检材中精神活性物质mdmb
‑ꢀ
4en-pinaca及其代谢物检测的精准度和灵敏度是本领域技术人员亟需解决的问题之一。


技术实现要素：

[0006]
本发明的主要目的就是针对现有技术中所存在的精神活性物质检测精准度和灵敏度低的问题，本发明一方面提供了一种同位素精神活性物质标记化合物，该化合物的结构式如下：
[0007][0008]
其中，r1、r2、r3、r4至少一者为d，r为甲基或氢，所述的精神活性物质含有n-(3,3
‑ꢀ
二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸甲酯(mdmb-4en-pinaca)及其代谢物n
‑ꢀ
(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸(mdmb-4en-pinaca metabolite)。
[0009]
优选地，所述的同位素精神活性物质标记化合物的结构式为：
[0010][0011]
本发明另一方面提供了上述同位素精神活性物质标记化合物的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：
[0012]
(1)n-(3-甲基-丁酰苄胺-2-基)甲酰胺和n-5-氟戊基吲哚在三氯化铝催化下发生傅克酰基化反应，生成mdmb-4en-pinaca；
[0013][0014]
(2)步骤(1)中的所述的中间体与在碱性条件脱保护生成n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)
‑ꢀ
1-(5-1-烯戊基)-吲唑4,5,6,7-d4-3-丁酸(d4-mdmb-4en-pinaca metabolite)。
[0015]
本发明再一方面提供了上述同位素精神活性物质标记化合物在检测生物检材或污水中精神活性物质n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸甲酯(mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca)及其代谢物n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸(mdmb-4en
‑ꢀ
pinacametabolite)的含量中的用途。
[0016]
在上述用途中，利用所述的同位素精神活性物质标记化合物检测生物检材或污水中精神活性物质mdmb-4en-pinaca及其代谢物含量的方法包括以下步骤：
[0017]
(1)设定液相色谱-质谱检测条件；
[0018]
(2)标准曲线的绘制：在与待测样品所对应的阴性检材中，加入不同比例的mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca、d4-mdmb-4en-pinaca、mdmb-4en-pinaca metabolite及d4-mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca metabolite标准溶液，经过与待测样品相同的前处理步骤后，进lc-ms/ms检测,对 mdmb-4en-pinaca与d4-mdmb-4en-pinaca，mdmb-4en-pinaca metabolite与d4
‑ꢀ
mdmb-4en-pinaca metabolite的峰面积比和浓度做标准曲线；其中所述的内标物是权利要求1或2所述的同位素毒品标记化合物。
[0019]
(3)待测样品的前处理及测定：待测样品加入权利要求2中所述的同位素精神活性物质标记化合物作为内标，经过与标准曲线绘制时所使用的相同前处理步骤后，进lc-ms/
ms检测，得到待测样品和内标物的定量参数，用内标法标准曲线的公式计算即可得待测样品的含量。
[0020]
优选地，步骤(1)中，所述的液相色谱-质谱检测的流动相为：a:乙腈(0.01％甲酸)，b：水(0.01％甲酸，5％甲酸铵)，梯度：1min 10％a,2min 50％a,4min 90％a,6min 95％a；色谱柱：poroshell120 pfp 3.0x100mm 1.9um；柱温：30℃；流速：0.5ml/min；进样量：5μl；离子源：电喷雾离子源，正模式(esi )；喷雾电压3500v；离子源温度：340℃；碰撞气：氮气。
[0021]
优选地，步骤(2)中，混合标准溶液中所述的内标物的质量浓度为0.1％-99.9％。
[0022]
优选地，步骤(3)中，待测样品中内标物的质量浓度为0.1％-99.9％。
[0023]
优选地，步骤(3)中，所述的内标法公式计算为,
[0024][0025]
其中，x是待测样品浓度，y是液相色谱-质谱检测所得的峰面积，b0是标准曲线的截距， b1是标准曲线的斜率。
[0026]
优选地，上述生物检材或所述污水中精神活性物质mdmb-4en-pinaca及其代谢物的质量含量为10-9
％-10％。
[0027]
本发明再一方面提供了一种检测生物检材或污水中精神活性物质mdmb-4en-pinaca 及其代谢物的含量的方法，所述的方法包括利用同位素精神活性物质标记化合物d4-mdmb
‑ꢀ
4en-pinaca和d4-mdmb-4en-pinaca metabolite作为内标物检测精神活性物质。
[0028]
本发明所提供的同位素精神活性物质标记化合物d4-n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1
‑ꢀ
烯戊基)-吲唑-3-丁酸甲酯及其代谢物n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸可用于污水检材中精神活性物质n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸甲酯及其代谢物n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸含量测定的内标，可以降低检材的基质效应，在司法鉴定等方面具有很好的应用前景。
附图说明
[0029]
图1为实施例1中d4-mdmb-4en-pinaca高分辨质谱图。
[0030]
图2为实施例1中d4-mdmb-4en-pinaca的1h-nmr谱图。
[0031]
图3为实施例1中d4-mdmb-4en-pinaca的
13
c-nmr谱图。
[0032]
图4为实施例2中d4-mdmb-4en-pinacametabolite高分辨质谱图。
[0033]
图5为实施例2中d4-mdmb-4en-pinaca metabolite的1h-nmr谱图。
[0034]
图6为实施例2中d4-mdmb-4en-pinaca metabolite的
13
c-nmr谱图。
[0035]
图7为实施例3中毛发mdmb-4en-pinaca及mdmb-4en-pinaca metabolite样品检测色谱图1。
[0036]
图8为实施例3中毛发mdmb-4en-pinaca及mdmb-4en-pinaca metabolite样品检测色谱图2。
[0037]
图9为实施例3中毛发mdmb-4en-pinaca标准曲线。
[0038]
图10为实施例3中毛发mdmb-4en-pinaca metabolite标准曲线。
[0039]
图11为实施例4中毛发mdmb-4en-pinaca及mdmb-4en-pinaca metabolite样品检测色谱图1。
[0040]
图12实施例4中毛发mdmb-4en-pinaca及mdmb-4en-pinaca metabolite样品检测色谱图2。
[0041]
图13为实施例4中毛发mdmb-4en-pinaca标准曲线。
[0042]
图14为实施例4中毛发mdmb-4en-pinaca metabolite标准曲线。
[0043]
图15为实施例5中毛发mdmb-4en-pinaca及mdmb-4en-pinaca metabolite样品检测色谱图1。
[0044]
图16为实施例5中毛发mdmb-4en-pinaca及mdmb-4en-pinaca metabolite样品检测色谱图2。
[0045]
图17为实施例5中毛发mdmb-4en-pinaca标准曲线。
[0046]
图18为实施例5中毛发mdmb-4en-pinaca metabolite标准曲线。
[0047]
图19为本发明的同位素精神活性物质标记化合物的结构式。
具体实施方式
[0048]
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示，进一步阐述本发明。
[0049]
本发明的描述中，“基质效应”是指检材中除了被测物mdmb-4en-pinaca及其代谢物之外的物质对分析过程和检测结果的影响和干扰。
[0050]
本发明的描述中，毛发中mdmb-4en-pinaca及其代谢物的质量浓度为10-9
％-10％。
[0051]
本发明提供的同位素精神活性物质标记化合物d4-3,3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-基)-1h
‑ꢀ
吲唑-3-甲酰胺)丁酸甲酯，其结构式如下：
[0052][0053]
其代谢物n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸，其结构式如下：
[0054][0055]
下面结合具体的实施例进一步说明本发明。
[0056]
实施例1
[0057]
d4-3,3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-基)-1h-吲唑-3-甲酰胺)丁酸甲酯(d4-mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca)制备方法。
[0058]
在-20℃下，n-(3-甲基-丁酰苄胺-2-基)甲酰胺(750mg,3mmol)溶解于50ml无水无氧四氯化碳，加入三氯化铝(400mg,3mmol)，之后逐滴加入n-戊-4-烯基吲哚(200mg,1 mmol)的无水无氧四氯化碳溶液(25ml)，搅拌并缓慢升温至室温，在室温保持12小时后加热至40℃并加热2小时。冷却后加入氯化铵溶液淬灭反应，旋转蒸发除去溶剂，加入150 ml乙酸乙酯溶解后，硅藻土过滤除去不溶物，用30ml乙醚-乙酸乙酯1：1溶液洗涤硅藻土，合并有机相，用5％盐酸水溶液洗涤后水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相用无水硫酸镁干燥。过滤除去干燥剂，旋转蒸发除去溶剂。硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)得到 d4-3,3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-基)-1h-吲唑-3-甲酰胺)丁酸甲酯(d4-mdmb-4en-pinaca)，白色固体(207mg，54％)。
[0059]1h nmr(600mhz,methanol-d4)δ5.51(ddt,j＝16.8,10.1,6.3hz,1h),4.78
–
4.63(m,2h), 4.57(s,1h),4.30(s,1h),4.17(t,j＝6.6hz,2h),3.46(s,3h),1.84
–
1.66(m,4h),0.77(s,9h). 13c nmr(151mhz,cd3od)δ173.05,164.18,142.40,138.48,137.37,127.57,123.80,123.47, 122.60,116.14,110.75,61.23,52.46,49.69,35.82,31.80,29.99,27.09.hr-ms(esi/tof)m/z: calcd.for c
20h24
d4n3o3[m h] 362.2382；found:362.2381.谱图见附图1，2，3。
[0060]
实施例2
[0061]
d4-3,3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-基)-1h-吲唑-3-甲酰胺)丁酸(d4-mdmb-4en-pinacametabolite)制备方法。
[0062]
d4-3,3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-基)-1h-吲唑-3-甲酰胺)丁酸甲酯(d4-mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca)(362mg，1mmol)，溶解于5％氢氧化锂的甲醇-水1:1溶液，加热至60℃搅拌过夜。反应液用乙醚洗涤，水相用30％盐酸调节至ph＝1，析出大量固体，过滤，固体晾干后用丙酮-石油醚重结晶，得其代谢物d4-3,3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-基)-1h-吲唑-3-甲酰胺) 丁酸(d4-mdmb-4en-pinaca metabolite)，白色固体(223mg，62％)。
[0063]1h nmr(600mhz,methanol-d4)δ8.23
–
8.10(m,1h),7.60(d,j＝8.6hz,1h),7.42(ddd,j ＝8.4,6.9,1.0hz,1h),7.34
–
7.11(m,1h),4.47(t,j＝7.0hz,2h),2.32(t,j＝7.4hz,2h),2.19(d, j＝2.0hz,6h),2.11(s,3h),1.97(td,j＝14.9,14.0,6.6hz,2h),1.77(s,7h),1.59(p,j＝7.5hz, 2h).13c nmr(151mhz,cd3od)δ174.13,164.20,142.46,
138.51,137.50,127.56,123.82,123.45, 122.65,116.14,110.80,61.17,49.69,35.65,31.83,30.01,27.20.hr-ms(esi/tof)m/z:calcd.forc
19h22
d4n3o3[m h] 348.2225；found:348.2225。谱图见附图4,5,6。
[0064]
实施例3
[0065]
以d4-3,3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-基)-1h-吲唑-3-甲酰胺)丁酸甲酯(d4-mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca)和d4-3,3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-基)-1h-吲唑-3-甲酰胺)丁酸(d4-mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca metalolite)为内标检测毛发中n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸甲酯及其代谢物n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸(mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca metalolite)的含量。
[0066]
(1)液相色谱-质谱检测条件：
[0067]
a)仪器型号：agilent 1290-6470qqq；
[0068]
b)色谱柱：poroshell120 pfp 3.0x100mm 1.9um；
[0069]
c)柱温：30℃；
[0070]
d)流动相：a:乙腈(0.01％甲酸)，b：水(0.01％甲酸，5％甲酸铵)，梯度：1min 50％a, 2min 50％a,4min 90％a,6min 95％a；
[0071]
e)流速：0.5ml/min；
[0072]
f)进样量：5μl；
[0073]
g)离子源：电喷雾离子源，正模式(esi )；
[0074]
h)喷雾电压3500v；
[0075]
i)离子源温度：340℃；
[0076]
j)碰撞气：氮气。
[0077]
离子对及相应条件如表1所示：
[0078]
表1
[0079][0080]
(2)样品的前处理及检测
[0081]
将毛发样本经超纯水、洗洁精水、丙酮清洗，晾干后剪碎，每一份称量20.0mg，加入1 ml甲醇(含10ng/ml d4-mdmb-4en-pinaca和10ng/ml d4-mdmb-4en-pinaca metabolite)，经研磨后，在冷冻超声仪中超声30min，4000r离心5min，取上清800μl，在60℃水浴空气流下挥干，用80μl甲醇复溶，过0.22μl的滤膜后，5μl进lc-ms/ms分析，得到如附图7、8所示的图谱。其中定量离子对为348.2/232.0，两次检测中的mdmb-4en-pinaca和内标物d4-mdmb-4en-pinaca的峰面积比分别为29599/58699，39086/78513，mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca metabolite和内标物d4-mdmb-4en-pinaca metabolite的峰面积比分别为 7481/156380，
35925/743680。
[0082]
(3)标准曲线绘制
[0083]
将空白阴性毛发样本经超纯水、洗洁精水、丙酮清洗，晾干后剪碎，每一份称量20.0mg，加入1ml甲醇(含10ng/ml d4-mdmb-4en-pinaca和10ng/ml d4-mdmb-4en-pinacametabolite)，添加20μl浓度为0、100、200、400、1000、2000、20000ng/ml的mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca标准对照品，配制成浓度为0、0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、10、20ng/mg的毛发添加样本，每个浓度平行制备3份，涡旋3min，室温下静置浸泡30min，按样品前处理过程处理后，进lc-ms/ms检测,对mdmb-4en-pinaca、d4-mdmb-4en-pinaca的峰面积比和浓度做标准曲线，得到如附图9所示的图谱。标准曲线公式为y＝2.947854*x-0.436116，其中， x是待测样品浓度，y是液相色谱-质谱检测所得的峰面积，b0＝-0.436116是标准曲线的截距，b1＝2.947854是标准曲线的斜率。
[0084]
对mdmb-4en-pinaca metabolite与d4-mdmb-4en-pinaca metabolite的峰面积比和浓度做标准曲线，得到如附图10所示的图谱。标准曲线公式为y＝0.936315*x 0.153274，其中，x是待测样品浓度，y是液相色谱-质谱检测所得的峰面积，b0＝-0.153274是标准曲线的截距，b1＝0.936315是标准曲线的斜率。
[0085]
根据标准曲线中峰面积比和浓度的定量关系，根据计算公式：
[0086][0087]
计算出待测样品中mdmb-4en-pinaca的含量为0.32ng/mg,mdmb-4en-pinacametabolite的含量为0.22ng/mg。
[0088]
实施例4
[0089]
以d4-3,3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-基)-1h-吲唑-3-甲酰胺)丁酸甲酯(d4-mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca)和d4-3,3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-基)-1h-吲唑-3-甲酰胺)丁酸(d4-mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca metalolite)为内标检测污水中n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸甲酯及其代谢物n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸(mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca metalolite)的含量。
[0090]
(1)液相色谱-质谱检测条件：与实施例3相同。
[0091]
(2)样品的前处理及检测
[0092]
将污水样本经滤纸过滤，取100ml，加入2ml甲醇(含10ng/ml d4-mdmb-4en-pinaca 和10ng/ml d4-mdmb-4en-pinaca metabolite)，每一份50ml以5ml/min的速度过spe柱上样，上样完成后先用甲醇5ml淋洗，最后用5％的氨水-乙腈溶液5ml洗脱，洗脱液在40℃水浴空气流下挥干，用80μl甲醇复溶，过0.22μl的滤膜后，15μl进lc-ms/ms分析，得到如附图11、12所示的图谱。其中定量离子对为348.2/232.0，两次检测中的mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca和内标物d4-mdmb-4en-pinaca的峰面积比分别为9241/23730，8987/24300， mdmb-4en-pinaca metabolite和内标物d4-mdmb-4en-pinaca metabolite的峰面积比分别为42510/57918，43840/58351。
[0093]
(3)标准曲线绘制
[0094]
在阴性污水样品50ml中加入1ml甲醇(含10ng/ml d4-mdmb-4en-pinaca和10 ng/ml d4-mdmb-4en-pinaca metabolite)，添加20μl浓度为0、1.25、2.5、5、12.5、25、 125、
250ng/ml的mdmb-4en-pinaca标准对照品，配制成浓度为0、0.5、1.0、2.0、5.0、 10、50、100ng/l的污水添加样本，每个浓度平行制备3份，涡旋3min，室温下静置浸泡 30min，按样品前处理过程处理后，进lc-ms/ms检测,对mdmb-4en-pinaca、d4-mdmb
‑ꢀ
4en-pinaca的峰面积比和浓度做标准曲线，得到如附图13所示的图谱。标准曲线公式为y ＝0.579400*x-0.403656，其中，x是待测样品浓度，y是液相色谱-质谱检测所得的峰面积， b0＝-0.403656是标准曲线的截距，b1＝0.579400是标准曲线的斜率。
[0095]
对mdmb-4en-pinaca metabolite与d4-mdmb-4en-pinaca metabolite的峰面积比和浓度做标准曲线，得到如附图14所示的图谱。标准曲线公式为y＝0.188053*x 0.166259，其中，x是待测样品浓度，y是液相色谱-质谱检测所得的峰面积，b0＝-0.166259是标准曲线的截距，b1＝0.188053是标准曲线的斜率。
[0096]
根据标准曲线中峰面积比和浓度的定量关系，根据计算公式：
[0097][0098]
计算出待测样品中mdmb-4en-pinaca的含量为1.35ng/mg,mdmb-4en-pinacametabolite的含量为4.82ng/mg。
[0099]
实施例5
[0100]
以d4-3,3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-基)-1h-吲唑-3-甲酰胺)丁酸甲酯(d4-mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca)和d4-3,3-二甲基-2-(1-(戊-4-烯-1-基)-1h-吲唑-3-甲酰胺)丁酸(d4-mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca metalolite)为内标检测尿液中n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸甲酯及其代谢物n-(3,3-二甲基-丁酰胺-2-基)-1-(5-1-烯戊基)-吲唑-3-丁酸(mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca metalolite)的含量。
[0101]
(2)液相色谱-质谱检测条件：与实施例3相同。
[0102]
(2)样品的前处理及检测
[0103]
将尿液样本经滤纸过滤，取10ml，加入0.2ml甲醇(含10ng/ml d4-mdmb-4en-pinaca 和10ng/ml d4-mdmb-4en-pinaca metabolite)，每一份5ml以5ml/min的速度过spe柱上样，上样完成后先用甲醇5ml淋洗，最后用5％的氨水-乙腈溶液5ml洗脱，洗脱液在40℃水浴空气流下挥干，用80μl甲醇复溶，过0.22μl的滤膜后，15μl进lc-ms/ms分析，得到如附图15、16所示的图谱。其中定量离子对为348.2/232.0，两次检测中的mdmb-4en
‑ꢀ
pinaca和内标物d4-mdmb-4en-pinaca的峰面积比分别为46180/27779，46063/27825， mdmb-4en-pinaca metabolite和内标物d4-mdmb-4en-pinacametabolite的峰面积比分别为6092/249909，10500/257039。
[0104]
(3)标准曲线绘制
[0105]
在阴性尿液样品5ml中加入0.1ml甲醇(含10ng/ml d4-mdmb-4en-pinaca和10 ng/ml d4-mdmb-4en-pinaca metabolite)，添加20μl浓度为0、1.25、2.5、5、12.5、25、 125、250μg/ml的mdmb-4en-pinaca标准对照品，配制成浓度为0、5、10、20、50、100、 500、1000ng/ml的尿液添加样本，每个浓度平行制备3份，涡旋3min，按样品前处理过程处理后，进lc-ms/ms检测,对mdmb-4en-pinaca、d4-mdmb-4en-pinaca的峰面积比和浓度做标准曲线，得到如附图17所示的图谱。标准曲线公式为y＝0.059264*x-0.500630，其中，x是待测样品浓度，y是液相色谱-质谱检测所得的峰面积，b0＝-0.059264是标准曲线的截距，b1＝0.500630是标准
曲线的斜率。
[0106]
对mdmb-4en-pinaca metabolite与d4-mdmb-4en-pinaca metabolite的峰面积比和浓度做标准曲线，得到如附图18所示的图谱。标准曲线公式为y＝0.018206*x 0.170602，其中，x是待测样品浓度，y是液相色谱-质谱检测所得的峰面积，b0＝-0.170602是标准曲线的截距，b1＝0.018206是标准曲线的斜率。
[0107]
根据标准曲线中峰面积比和浓度的定量关系，根据计算公式：
[0108][0109]
计算出待测样品中mdmb-4en-pinaca的含量为36.4ng/ml,mdmb-4en-pinacametabolite的含量为11.1ng/ml。
[0110]
本发明提供的同位素精神活性物质标记化合物在检测检材中精神活性物质mdmb-4en
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pinaca时，通过在检材中加入适量该同位素精神活性物质标记化合物d4-mdmb-4en
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pinaca，根据检测要求进行适当的预处理之后进行液相色谱-质谱联用(lc-ms/ms)检测，以同位素精神活性物质标记化合物为内标，在多反映监测(multiple reaction monitoring，mrm) 模式下，通过对比目标物质和待测物质峰面积的比例，实现待测物质的定性、定量检测，可以检测的精神活性物质为mdmb-4en-pinaca，专一性强，灵敏度高。
[0111]
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
[0112]
在此说明书中，本发明已参照其特定的实施例作了描述。但是，很显然仍可以作出各种修改和变换而不背离本发明的精神和范围。因此，说明书和附图应被认为是说明性的而非限制性的。