一种青稞麸皮多肽的制备方法及其应用与流程

1.本发明涉及功能性多肽制备及应用领域，具体涉及一种青稞麸皮多肽的制备方法及其应用。


背景技术：

2.青稞又称裸大麦，主要种植于我国西藏自治区、青海、甘肃和四川等地，面积约270万公顷，产量较高。青稞是我国藏区人民的主要粮食来源，其中蛋白质和多不饱和脂肪酸尤为丰富。同时，青稞还富含β-葡聚糖、阿拉伯木聚糖，这些成分具有显著的抗氧化、抑菌和抗肿瘤活性。
3.虽然青稞具有较高的营养价值，但是青稞籽粒较硬，直接食用口感粗糙，因此常常将青稞进行脱除麸皮处理。青稞麸皮是青稞加工中的主要副产物，常被当做饲料来喂养家畜，附加值较低。目前对青稞麸皮的研究和利用较少，主要集中于β-葡聚糖和青稞麸皮油的提取、分离上，影响其进一步加工利用。
4.青稞麸皮中蛋白质含量丰富，约占总量的7%-17%。目前，青稞麸皮蛋白质受到的关注较低，通过文献调查并未发现有将青稞麸皮中的蛋白质提取、酶解成多肽的报道出现。本发明将青稞麸皮进行超微粉碎、碱提酸沉得到青稞麸皮蛋白，并将其酶解制备成具有抗氧化功能的多肽，不仅提高了青稞麸皮的附加值，也增加了藏区人民的收入。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于，提供一种青稞麸皮多肽的制备方法，并指出该产品可以作为潜在的天然抗氧化剂应用于功能性食品或保健食品中。
6.一种青稞麸皮多肽的制备方法，包括以下步骤：步骤一、超微粉碎：将青稞麸皮超微粉碎后过80
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150目筛网并收集筛下物，用质量分数为60-95%的乙醇进行浸泡后固液分离，获得处理后的青稞麸皮超微粉；步骤二、碱提酸沉：在ph为9-11条件下，加入25-40倍量的纯净水提取青稞麸皮超微粉，收集提取液，浓缩至原体积的1/50-1/80后调酸至ph为3-5，离心，收集沉淀；步骤三、酶解并过膜：将步骤二中得到的沉淀重新溶于10-30倍量的纯净水中，加入0.5-2%的中性蛋白酶，在30-60 ℃条件下进行酶解，收集酶解液并过50-200 nm的陶瓷膜，收集陶瓷膜透过液，干燥，即得青稞麸皮多肽。
7.优选的是，所述步骤一中，筛网的目数为120目。
8.优选的是，所述步骤一中，所用乙醇的质量分数为95%。
9.优选的是，所述步骤二中，碱性条件的ph为10。
10.优选的是，所述步骤二中，纯净水与青稞麸皮超微粉的质量比为30:1。
11.优选的是，所述步骤二中，提取温度为60 ℃，提取时间为1.5 h，提取次数为2次。
12.优选的是，所述步骤二中，将收集到的提取液浓缩至原体积的1/60。
13.优选的是，所述步骤二中，调酸的ph为4.5。
14.优选的是，所述步骤二中，离心后的沉淀干燥方式为真空冷冻干燥。
15.优选的是，所述步骤三中，沉淀与纯净水的质量比为1:25。
16.优选的是，所述步骤三中，酶解温度为55 ℃。
17.优选的是，所述步骤三中，酶相对于沉淀的添加量为1.5 %。
18.优选的是，所述步骤三中，陶瓷膜的孔径为50 nm。
19.优选的是，所述步骤三中，干燥方式为真空冷冻干燥。
20.本发明产生的有益效果是：1.青稞麸皮为青稞加工过程中产生的主要副产物，对青稞麸皮进行精深加工，提高了青稞麸皮的附加值，拓宽了青稞麸皮的应用渠道。
21.2.首次将青稞麸皮中的蛋白质进行提取、酶解、过膜制备成具有抗氧化功能的多肽，并将其作为天然抗氧化剂应用于功能性食品中，具有一定的先进性。
附图说明
22.图1为不同实施例中青稞麸皮多肽对dpph自由基清除率趋势图；图2为不同实施例中青稞麸皮多肽fe
3
还原能力趋势图。
具体实施方式
23.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
24.实施例1本实施例提供了一种青稞麸皮多肽的制备方法，其方法步骤具体如下：（1）首先，将青稞麸皮超微粉碎后过80目筛网并收集筛下物，用质量分数为85%的乙醇进行浸泡后固液分离，获得处理后的青稞麸皮超微粉。
25.（2）然后将处理后的青稞麸皮超微粉在ph=10，提取温度60 ℃，提取时间0.5 h条件下，加入30倍量的纯净水提取青稞麸皮超微粉3次，收集提取液，浓缩至原体积的1/60后调酸至ph=4，离心，收集沉淀。
26.（3）将得到的沉淀重新溶于15倍量的纯净水中，加入0.5%的中性蛋白酶，在55 ℃条件下进行酶解，收集酶解液并过50 nm的陶瓷膜，收集陶瓷膜透过液，干燥，即得青稞麸皮多肽。
27.实施例2本实施例提供了一种青稞麸皮多肽的制备方法，其方法步骤具体如下：（1）首先，将青稞麸皮超微粉碎后过120目筛网并收集筛下物，用质量分数为95%的乙醇进行浸泡后固液分离，获得处理后的青稞麸皮超微粉。
28.（2）然后将处理后的青稞麸皮超微粉在ph=9.5，提取温度50 ℃，提取时间1.0 h条件下，加入25倍量的纯净水提取青稞麸皮超微粉2次，收集提取液，浓缩至原体积的1/50后调酸至ph=5、离心，收集沉淀。
29.（3）将得到的沉淀重新溶于20倍量的纯净水中，加入1.5%的中性蛋白酶，在60 ℃
条件下进行酶解，收集酶解液并过200 nm的陶瓷膜，收集陶瓷膜透过液，干燥，即得青稞麸皮多肽。
30.实施例3本实施例提供了一种青稞麸皮多肽的制备方法，其方法步骤具体如下：（1）首先，将青稞麸皮超微粉碎后过120目筛网并收集筛下物，用质量分数为95%的乙醇进行浸泡后固液分离，获得处理后的青稞麸皮超微粉。
31.（2）然后将处理后的青稞麸皮超微粉在ph=10，提取温度60 ℃，提取时间1.5 h条件下，加入30倍量的纯净水提取青稞麸皮超微粉2次，收集提取液，浓缩至原体积的1/60后调酸至ph=4.5、离心，收集沉淀。
32.（3）将得到的沉淀重新溶于25倍量的纯净水中，加入1.5%的中性蛋白酶，在55 ℃条件下进行酶解，收集酶解液并过50 nm的陶瓷膜，收集陶瓷膜透过液，干燥，即得青稞麸皮多肽。
33.试验例一、不同实施例中青稞麸皮多肽dpph自由基清除率测定。
34.以维生素c作为阳性对照品，测定各实施例中的样品dpph自由基清除率情况。
35.主要试剂与仪器：1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（dpph）购于sigma公司；无水乙醇购于国药集团化学试剂有限公司。
36.实验步骤：（1）dpph溶液（0.25mm）的配制：精确称取4.929 mg dpph溶于50ml容量瓶中，加入无水乙醇定容至50 ml，冷藏避光保存；（2）阳性对照品溶液的制备：将维生素c配制成母液（0.24 mg/ml），经过梯度稀释成0.12、0.10、0.08、0.06、0.04、0.02 mg/ml；（3）样品溶液的制备：分别将各实施例中制备出的青稞麸皮多肽配制成母液（60 mg/ml），经过梯度稀释成50、40、30、10 mg/ml；（4）显色反应：将1 ml dpph乙醇溶液（0.25mm）与1 ml无水乙醇混合均匀，25 ℃避光反应30 min，在517 nm处测定其吸光值，以无水乙醇做空白，吸光值记为a；将1 ml dpph乙醇溶液（0.25mm）与1 ml样品溶液混合均匀，25 ℃避光反应30 min，在517 nm处测定其吸光值，以无水乙醇做空白，吸光值记为b；将1 ml无水乙醇与1 ml样品溶液混合均匀，25 ℃避光反应30 min，在517 nm处测定其吸光值，以无水乙醇做空白，吸光值记为c；并以vc为对照组。
37.（5）dpph自由基清除率（%）计算方法：dpph自由基清除率（%）=[a-(b-c)]/a
×
100%不同实施例中青稞麸皮多肽对dpph自由基清除率测定情况如图1所示。
[0038]
从图1可以看出，实施例1-3制备的青稞麸皮多肽对dpph自由基的清除能力较强，但实施例1-3制备的青稞麸皮多肽的清除能力在同等浓度条件下要弱于维生素c。在抗氧化试验所测定的范围内，实施例1-3制备的青稞麸皮多肽和维生素c对dpph自由基清除率均随着自身浓度的增大而提高，且维生素c的浓度在0.1 mg/ml时对dpph自由基清除率达到最大100%，实施例1-3制备的青稞麸皮多肽均在浓度高于50 mg/ml时对dpph自由基清除率达到最大100%。
[0039]
二、不同实施例中青稞麸皮多肽fe
3
还原能力（frap）测定。
[0040]
以维生素c作为阳性对照品，测定各实施例中青稞麸皮多肽fe
3
还原能力（frap）情况。
[0041]
主要试剂与仪器：铁氰化钾、磷酸氢二钠、nah2po42h2o、三氯乙酸和fecl36h2o均购于国药集团化学试剂有限公司。
[0042]
实验步骤：（1）铁氰化钾溶液（3mm）的配制：精确称取98.772 mg铁氰化钾于容量瓶中，使用超纯水定容至100 ml；（2）磷酸盐缓冲溶液（50mm，ph6.6）的配制：精确称取0.2662 g na2hpo4和0.4875 g nah2po42h2o于容量瓶中，使用超纯水定容至100 ml；（3）10%三氯乙酸：精确称取10 g三氯乙酸于容量瓶中，使用超纯水定容至100 ml；（4）fecl36h2o溶液（6.1mm）：精确称取164.87 mg fecl36h2o于容量瓶中，使用超纯水定容至100 ml；（5）阳性对照品溶液的制备：将维生素c配制成母液（0.24 mg/ml），经过梯度稀释成0.12、0.10、0.08、0.06、0.04、0.02 mg/ml。
[0043]
（6）样品溶液的制备：分别将各实施例中制备出的青稞麸皮多肽配制成母液（40 mg/ml），经过梯度稀释成20、10、5、2.5、1.25 mg/ml。
[0044]
（7）显色反应：将1 ml样品溶液与1 ml铁氰化钾溶液、1 ml磷酸盐缓冲溶液混合均匀，在50 ℃反应20 min后加入1 ml的10%三氯乙酸溶液，离心10 min，取出2.5 ml上清液与0.5 ml fecl36h2o溶液和2.5 ml纯水混合均匀，反应10 min，在700 nm处测定反应液的吸光值，以vc为对照组，吸光值越高，代表还原能力越强。
[0045]
不同实施例中青稞麸皮多肽fe
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还原能力（frap）情况如图2所示。
[0046]
从图2可以看出，在实验浓度范围内，实施例1-3制备的青稞麸皮多肽对铁离子还原能力较强，但实施例1-3制备的青稞麸皮多肽的铁离子还原能力在同等浓度条件下要远远弱于维生素c；当青稞麸皮多肽的质量浓度高于14 mg/ml时，实施例1-3的吸光度值均超过0.50。以上数据表明实施例1-3制备的青稞麸皮多肽均具有良好的抗氧化能力。
[0047]
基于上述数据分析结果，本发明实施例中所制得的青稞麸皮多肽可以作为一种潜在的功能性原料应用于功能性食品或保健品中。
[0048]
综上所述，上述实施例仅是对本发明的优选方式进行举例说明，并不包括所有的发明实施范围。本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种更动与润饰，因此本发明的保护范围以权利要求界定的范围为准。