一种杜仲鸡蛋及其生产方法与流程

1.本发明涉及一种杜仲鸡蛋及其生产方法，属于杜仲鸡蛋生产技术领域。


背景技术：

2.杜仲(eucommia ulmoides oliv.)为杜仲科(eucommiaceae)杜仲属(eucommia)植物，它是我国地质史上残留下来的孑遗植物，也是我国二级保护野生植物。杜仲早在《神农本草经》中被列为上品。《中华人民共和国药典》记载：杜仲可调血压、补肝肾、强筋骨、安胎，用于肝肾不足、腰膝酸痛、筋骨无力、头晕目眩、妊娠漏血、胎动不安。杜仲“全身是宝”，既是我国重要国家战略资源，又是我国特有的名贵药材，在生态保护、医疗保健、绿色养殖等行业具有重要地位。
3.杜仲传统以皮入药。近年来的研究证明：杜仲叶的化学成分与皮相似，并与皮具有相似的药理作用，即“叶皮同效”。目前，杜仲叶已经被收录到《中华人民共和国药典》和《饲料原料目录》，是最新公布的拟入药食同源物质。杜仲叶内含有粗蛋白、粗脂肪、维生素、氨基酸等各种营养物质，可用于喂养鸡、牛、羊、猪等，不仅能够满足动物生长发育所需大部分营养需求、提高畜禽的免疫能力、减少疾病的发生和抗生素的使用，还可使畜禽肉蛋品质大幅提升、安全优质。有必要研究杜仲叶在作为蛋鸡饲料添加剂中的应用。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种杜仲鸡蛋及其生产方法，本发明提供的杜仲鸡蛋营养丰富、安全优质，适合高血脂症等多人群食用，特别适合儿童食用。
5.本发明首先提供一种发酵杜仲叶粉的制备方法，包括如下步骤：
6.s1、杜仲叶粉碎得到杜仲叶粉，然后进行蒸制；
7.s2、将黑曲霉加入至步骤s1得到的所述杜仲叶粉中，混合均匀；然后再加入枯草芽孢杆菌和米曲霉的水溶液，得到混合物料；将所述混合物料进行好氧发酵；
8.s3、将粪肠球菌接入至所述好氧发酵后的物料中，继续发酵，所述发酵后的物料经干燥即得。
9.上述的制备方法中，步骤s1中，所述杜仲叶粉过40目筛；
10.所述蒸制的条件为：温度为60～80℃，时间为20～30min；
11.步骤s2中，所述黑曲霉的接种量为3％～8％；
12.所述枯草芽孢杆菌接种量为0.1～0.5％，优选0.3％，所述米曲霉接种量为0.1～0.5％，优选0.3％；
13.水的添加量为所述杜仲叶粉干重的40～50％。
14.上述的制备方法中，步骤s2中，所述好氧发酵的条件为：
15.温度为25～30℃，每天翻堆一次，控制发酵室相对湿度为70～80％，发酵5～7d；
16.步骤s3中，所述粪肠球菌的接种量为1～5％，优选1％；
17.所述发酵的条件为：温度为25～30℃，时间为24～36h；
18.所述干燥的条件为：在40～45℃的条件下干燥至物料水分达5％～10％。
19.上述方法制备的发酵杜仲叶粉也属于本发明的保护范围。
20.杜仲叶粉、所述发酵杜仲叶粉和杜仲叶提取物在作为蛋鸡饲料的添加剂中的应用也属于本发明的保护范围；
21.所述杜仲叶提取物按照下述方法制备得到：杜仲叶经水浸泡后进行回流提取，得到的提取液经浓缩后干制即得；
22.优先采用70～80℃的水浸泡，可重复多次回流提取，然后合并提取液；
23.所述杜仲叶粉过40目筛。
24.所述蛋鸡饲料中所述添加剂的添加量如下：
25.所述杜仲叶粉的量为蛋鸡日粮质量的1％～3.5％；
26.所述发酵杜仲叶粉的量为蛋鸡日粮质量的2
‰
～5
‰
；
27.所述杜仲叶提取物的量为蛋鸡日粮质量的1
‰
～2
‰
。
28.本发明进一步提供了一种蛋鸡饲料添加剂，为杜仲叶粉、所述发酵杜仲叶粉和/或杜仲叶提取物；所述杜仲叶粉、所述发酵杜仲叶粉与所述杜仲叶提取物的质量比为10～35：2～5：1，优选10：2：1。
29.本发明更进一步提供了一种蛋鸡饲料，包括蛋鸡日粮和添加剂，所述添加剂为杜仲叶粉、所述发酵杜仲叶粉和/或杜仲叶提取物；
30.所述添加剂的用量如下：
31.所述杜仲叶粉的量为所述蛋鸡日粮质量的1％～3.5％；
32.所述发酵杜仲叶粉的量为所述蛋鸡日粮质量的2
‰
～5
‰
；
33.所述杜仲叶提取物的量为所述蛋鸡日粮质量的1
‰
～2
‰
。
34.在所述蛋鸡饲料的基础上，本发明还提供了一种杜仲鸡蛋的生产方法，包括如下步骤：
35.采用蛋鸡日粮饲喂蛋鸡至70～75日龄，然后采用所述蛋鸡饲料进行饲喂，即能获得杜仲鸡蛋。
36.本发明提供的添加剂对鸡蛋内源代谢物有明显的影响。经本发明杜仲饲料饲喂得到的蛋鸡生产得到的杜仲鸡蛋与普通鸡蛋相比，b族维生素明显增加，含dha和epa的甘油磷脂均有所增加，尤其是蛋清中pc(22:6(4z,7z,10z,13z,16z,19z)/18:1(11z))、lysopc(22:6(4z,7z,10z,13z,16z,19z))和蛋黄中pc(22:6(4z,7z,10z,13z,16z,19z)/18:1(11z))、pc(20:5(5z,8z,11z,14z,17z)/p-18:1(11z))增加非常显著，杜仲鸡蛋蛋黄中7-酮胆固醇有所下降。杜仲鸡蛋中蛋白质、氨基酸总量、维生素a、硒、钙、锌、铁均显著增加，7种必需氨基酸的含量均有所增加，并且组氨酸含量显著增加。因此，杜仲鸡蛋营养丰富、安全优质，适合高血脂症等多人群食用，特别适合儿童食用。
附图说明
37.图1为杜仲蛋清总离子流图。
38.图2为普通蛋清总离子流图。
39.图3为杜仲蛋黄总离子流图。
40.图4为普通蛋黄总离子流图。
41.图5为蛋清的pca，其中，a表示杜仲蛋清，b表示普通蛋清。
42.图6为蛋黄的pca，其中，a表示杜仲蛋黄，b表示普通蛋黄。
43.图7为蛋清的opls-da，其中，a表示杜仲蛋清，b表示普通蛋清。
44.图8为蛋黄的opls-da，其中，a表示杜仲蛋黄，b表示普通蛋黄。
45.图9为杜仲鸡蛋与普通鸡蛋色泽比较。
具体实施方式
46.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
47.下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
48.实施例1、杜仲叶饲料制备
49.1、杜仲叶粉制备
50.杜仲叶干制：采摘新鲜杜仲叶，除去杂质，在日光温室内晾干。
51.粉碎：采用粉碎机将杜仲叶粉碎成40目的细粉。
52.2、发酵杜仲叶粉制备
53.原料准备：选取粉碎好的杜仲叶粉，备用。
54.蒸制：采用蒸汽法将杜仲叶粉进行蒸制。蒸汽温度约60℃，蒸制时间为25min。
55.接种：待杜仲叶粉冷却至38～40℃时进行接种。将黑曲霉(接种量为5％，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心)加入到杜仲叶粉中，混合均匀，然后将枯草芽孢杆菌(0.3％，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心)、米曲霉(0.3％，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心)加入到纯水中混匀，再与上述物料混匀，纯水添加量为物料干重的40％，然后将最终混合料送入发酵室。
56.好氧发酵：将混合好的物料转运到发酵室，发酵室温度控制在25～30℃，每天翻堆一次，控制发酵室相对湿度70～80％，发酵6d。
57.好氧发酵结束后，将发酵饲料打散，将粪肠球菌(1％，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心)接入物料中，然后装入单向阀发酵袋中进行发酵。发酵室温度控制在25～30℃，发酵时间32h。
58.干燥：将发酵好的物料转入干燥车间，控制干燥温度为40～45℃，待物料水分达8％。
59.3、杜仲叶提取物的制备
60.取杜仲叶原料，用70℃水浸泡，回流提取，重复3次，合并提取液，减压浓缩，浓缩液利用喷塔喷干，得到杜仲叶提取物。
61.实施例2、采用杜仲叶饲料作为添加剂饲喂蛋鸡
62.1)将杜仲叶粉、发酵杜仲叶粉和杜仲叶提取物与日粮(产蛋鸡配合饲料106a)混合后饲喂，饲养管理制度不变。
63.2)选用优质蛋鸡品种(农大七号)，鸡日龄70天开始饲喂，至蛋鸡淘汰为止。
64.其中，杜仲叶粉、发酵杜仲叶粉和杜仲叶提取物与日粮混合比例分别为2％、4
‰
、2
‰
。
65.实施例3、杜仲饲料饲喂效果
66.一、分析方法
67.1、代谢组分析
68.1)样品制备
69.将蛋清和蛋黄分别冻干后，称取20mg样品，加入1000μl提取液(甲醇：乙腈：水＝2：2：1(v/v)，含同位素标记内标混合物)；超声提取，离心后取上清于进样瓶中上机检测。
70.2)uplc-ms分析方法
71.使用vanquish(thermo fisher scientific)超高效液相色谱仪，通过waters acquity uplc beh amide(2.1mm
×
100mm,1.7μm)液相色谱柱对目标化合物进行色谱分离。液相色谱a相为水相，含25mmol/l乙酸铵和25mmol/l氨水，b相为乙腈。样品盘温度：4℃，进样体积：3μl。
72.thermo q exactive hfx质谱仪。详细参数如下：sheath gas flow rate:30arb,aux gas flow rate:25arb,capillary temperature:350℃,full ms resolution:60000,ms/ms resolution:7500,collision energy:10/30/60in nce mode,spray voltage:3.6kv(positive)。
73.2、蛋白质、氨基酸、维生素a及元素定量分析
74.蛋白质采用gb5009.5-2010方法进行分析，采用氨基酸分析仪按gb/t5009.124-2003方法对氨基酸含量进行分析，维生素a采用gb/t5009.82-2003方法进行分析，采用原子吸收分光光度计对多种元素进行定量分析。
75.二、分析结果
76.蛋清和蛋黄的总离子流图如图1-4。
77.在饲料中添加杜仲后，鸡蛋内源代谢物产生明显的变化。杜仲鸡蛋的蛋清、蛋黄与普通鸡蛋的蛋清、蛋黄中的代谢物存在较大差异，如图5-8。
78.1、杜仲蛋清与普通蛋清内源代谢物的比较
79.经分析，从蛋清中共检测到317种代谢物，如表1所示。
80.表1杜仲鸡蛋与普通鸡蛋蛋清中的代谢物比较
81.82.83.84.85.86.87.[0088][0089]
(1)磷脂含量发生显著变化
[0090]
由表1可以看出，与普通蛋清相比，杜仲蛋清中共有29种磷脂上升，包括pc(15种)、pe(2种)lysopc(10种)，lysope(2种)。其中差异倍数大于2的主要有pc(18:2(9z,12z)/15:0)、pc(20:4(8z,11z,14z,17z)/15:0)、lysopc(16:1(9z))、lysopc(18:3(6z,9z,12z))、lysopc(20:1(11z))、lysopc(22:6(4z,7z,10z,13z,16z,19z))、lysope(18:1(9z)/0:0)等。
[0091]
pc：磷脂酰胆碱(phosphatidyl choline)又称卵磷脂(lecithin)；pe：磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine)又称脑磷脂(cephain)；lysopc：溶血磷脂；lysope：溶血磷脂酰乙醇胺。
[0092]
磷脂是含有磷脂根的类脂化合物，对活化细胞、荷尔蒙的均衡分泌、增强人体的免疫力和再生力等都能发挥重要作用。另外，磷脂还具有促进脂肪代谢、防止脂肪肝、降低血清胆固醇、改善血液循环、预防心血管疾病的作用。
[0093]
(2)维生素含量的变化
[0094]
由表1可以看出，与普通蛋清相比，杜仲蛋清中的烟酰胺(维生素b3)、核黄素(维生素b2)、泛酸(维生素b5)和泛醇(维生素原b5)显著增加。
[0095]
2、杜仲蛋黄与普通蛋黄内源代谢物的比较
[0096]
经分析，从蛋黄中检测到334种代谢物，如表2所示。
[0097]
表2杜仲鸡蛋和普通鸡蛋蛋黄中的代谢物比较
[0098]
[0099]
[0100]
[0101]
[0102]
[0103]
[0104]
[0105]
[0106][0107]
(1)磷脂发生显著变化
[0108]
由表2可以看出，与普通蛋黄相比，杜仲蛋黄中共有59种磷脂含量上升，包括pc(38种)、pe(7种)、lysopc(7种)、lysope(7种)。其中差异倍数大于2的主要有pc(18:1(9z)/18:0)、pc(20:4(8z,11z,14z,17z)/20:3(8z,11z,14z))、pc(20:5(5z,8z,11z,14z,17z)/p-18:1(11z))、pc(20:5(5z,8z,11z,14z,17z)/p-18:1(11z))、pc(24:1(15z)/14:1(9z))等。
[0109]
(2)维生素含量显著增加
[0110]
由表2可以看出，与普通蛋黄相比，杜仲蛋黄中硫胺素(维生素b1)、核黄素(维生素b2)、烟酰胺(维生素b3)、泛酸(维生素b5)生物素和(维生素b7)明显增加。
[0111]
3、杜仲鸡蛋与普通鸡蛋中几种重要成分相对含量的比较
[0112]
杜仲鸡蛋的蛋清、蛋黄中几种重要成分与普通鸡蛋的比较结果如表3和表4。研究结果发现，杜仲鸡蛋与普通鸡蛋相比，b族维生素明显增加。
[0113]
dha(docosahexaenoic acid)是二十二碳六烯酸，俗称脑黄金，是一种对人体非常重要的不饱和脂肪酸，是神经系统细胞生长及维持的一种主要成分，是大脑和视网膜的重要构成成分。epa(eicosapentaenoic acid)是二十碳五烯酸，有助于生长发育和降低胆固醇和甘油三酯，促进体内饱和脂肪酸的代谢。
[0114]
从表3和表4可以看出，含dha和epa的甘油磷脂均有所增加，尤其是蛋清中pc(22:6(4z,7z,10z,13z,16z,19z)/18:1(11z))、lysopc(22:6(4z,7z,10z,13z,16z,19z))和蛋黄中pc(22:6(4z,7z,10z,13z,16z,19z)/18:1(11z))、pc(20:5(5z,8z,11z,14z,17z)/p-18:1(11z))增加非常显著。
[0115]
表3杜仲鸡蛋和普通鸡蛋蛋清中几种重要成分含量比较
[0116][0117]
表4杜仲鸡蛋和普通鸡蛋蛋黄中几种重要成分含量比较
[0118][0119]
从表5中可以看出，杜仲蛋黄中7-酮胆固醇下降了9.09％(7-酮胆固醇是胆固醇和氧自由基反应的最常见产物，是冠状动脉疾病患者的血液和动脉斑块以及各种其他疾病组织和细胞中浓度最高的氧甾醇。与胆固醇不同，7-酮胆固醇对细胞具有持续的毒性，其在人类或其他复杂生物体中的生理功能尚不清楚)。
[0120]
4、杜仲鸡蛋和普通鸡蛋蛋白质、氨基酸和维生素a及元素含量的比较
[0121]
杜仲鸡蛋和普通鸡蛋蛋白质、氨基酸和维生素a及元素含量如表5所示。
[0122]
表5杜仲鸡蛋和普通鸡蛋蛋白质、氨基酸和维生素a及元素含量的比较
[0123]
[0124][0125]
从表5中可以看出，杜仲鸡蛋与普通鸡蛋相比蛋白质增加13.47％、氨基酸增加36.4％、维生素a增加12.15％、硒增加58.47％、钙增加62.92％、锌增加7.14％、铁增加10.80％。在所检测的氨基酸中，杜仲鸡蛋中7种必需氨基酸的含量均有所增加。此外，杜仲鸡蛋中组氨酸含量比普通鸡蛋增加了61.11％。由于儿童不能合成组氨酸，必需从食物中摄取，因此，杜仲鸡蛋特别适合儿童食用。
[0126]
杜仲鸡蛋和普通鸡蛋中均未检出铅、汞和镉，表明该产品安全可靠。
[0127]
5、杜仲鸡蛋与普通鸡蛋色泽和口感的比较
[0128]
比较发现，与普通鸡蛋相比，杜仲鸡蛋蛋清清亮透明，蛋黄更加鲜黄，如图9所示。
[0129]
经20人试食后，均认为杜仲鸡蛋比普通鸡蛋口感更细腻、顺滑。
[0130]
由上述实验结果可以看出，杜仲叶对鸡蛋内源代谢物有明显的影响。杜仲鸡蛋与
普通鸡蛋相比，b族维生素明显增加，含dha和epa的甘油磷脂均有所增加，尤其是蛋清中pc(22:6(4z,7z,10z,13z,16z,19z)/18:1(11z))、lysopc(22:6(4z,7z,10z,13z,16z,19z))和蛋黄中pc(22:6(4z,7z,10z,13z,16z,19z)/18:1(11z))、pc(20:5(5z,8z,11z,14z,17z)/p-18:1(11z))增加非常显著，杜仲鸡蛋蛋黄中7-酮胆固醇有所下降。杜仲鸡蛋中蛋白质、氨基酸总量、维生素a、硒、钙、锌、铁均显著增加，7种必需氨基酸的含量均有所增加，并且组氨酸含量显著增加。因此，杜仲鸡蛋营养丰富、安全优质，适合高血脂症等多人群食用，特别适合儿童食用。