一种调控丝状真菌次级代谢产物的质粒及其应用

1.本公开涉及生物技术领域，具体地，涉及一种调控丝状真菌次级代谢产物的质粒及其应用。


背景技术：

2.次级代谢产物是指微生物生长到一定阶段才产生的化学结构较为复杂、对该微生物无明显生理功能，或并非是微生物生长和繁殖所必需的物质，如抗生素、毒素、激素、色素等。不同种类的微生物所产生的次级代谢产物不相同，它们可能积累在细胞内，也可能排到外环境中。
[0003]“丝状真菌”是丝状，无光合作用，异养型真核微生物，菌丝较为发达，不产生大型肉质子实体结构，菌丝是丝状或管状结构，由坚硬的含几丁质的细胞壁包被，一般无色透明宽度多为3-10μm，是细菌宽度的几倍到几十倍，菌丝内细胞含有大量真核生物的细胞器。菌丝内细胞质组分趋向于朝生长点的位置集中，菌丝较老的部分有大量液泡，并可能与较幼嫩的区域以横隔分开，菌丝有分叉，分枝的菌丝相互交错而成的群体为菌丝体。霉菌的菌丝分为有隔膜菌丝和无隔膜菌丝两种类型。
[0004]
丝状真菌所生产的次级代谢产物具有重要的应用价值，例如抗氧化、抗肿瘤和免疫抑制等；但是如何提高丝状真菌所生产的次级代谢产物的产量，是亟待解决的问题。


技术实现要素：

[0005]
本公开提供了一种调控丝状真菌次级代谢产物的质粒及其应用，该质粒适用于多种丝状真菌，所研究的丝状真菌可直接进行质粒的转化，能够有效提高转化效率，减短转化周期，并且对丝状真菌无基因损伤。
[0006]
为了实现上述目的，本公开第一方面提供一种调控丝状真菌次级代谢产物的质粒，其特征在于，所述质粒的核苷酸序列为seq id no.1。
[0007]
本公开第二方面提供了本公开第一方面所述的质粒在调控丝状真菌次级代谢产物中的应用。
[0008]
本公开第三方面提供了一种通过调控丝状真菌次级代谢产物的方法，其特征在于，用本公开第一方面所述的质粒转化丝状真菌。
[0009]
本公开第四方面提供了一种增加曲霉属真菌的二苯醚类化合物产量的方法，其特征在于，用本公开第一方面所述的质粒转化曲霉属真菌，所述曲霉属真菌是保藏号为cctcc no：m 2015238的海洋来源曲霉属真菌z5。
[0010]
通过上述技术方案，本公开提供的一种调控丝状真菌次级代谢产物的质粒可以有效提高丝状真菌次级代谢的代谢产物，减短转化周期，提高转化效率，具有普适性。
[0011]
本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
[0012]
生物材料保藏信息
[0013]
曲霉属真菌，分类命名为aspergillus sp.z5，保藏于中国典型培养物保藏中心，
5-甲基苯酚(3-(3-hydroxy-5-methylphenoxy)-5-methylphenol)，结构式如式(1)所示：
[0026][0027]
下面通过实施例来进一步说明本公开，但是本公开并不因此而受到任何限制。
[0028]
实施例1：
[0029]
质粒用于海洋来源曲霉属真菌z5二苯醚类化合物产量的提高。
[0030]
构建seq id no.1所示的质粒，转化海洋来源曲霉属真菌z5(保藏编号为cctcc no：m 2015238)，获得改造菌株oe::anlaea
11.14
和oe::anlaea
11.19
，不含构巢曲霉laea的质粒转化z5菌株构建阴性对照菌株nc10.5；为验证构巢曲霉laea(anlaea)与宿主菌株z5的laea(az5laea)具有同样的调控作用，同时构建了表达az5laea的表达质粒转化菌株z5，获得改造菌株oe::az5laea
9.8
和oe::az5laea
9.10
。经生长表型(图1)、扫描电镜检测(图2)和代谢谱(图3)比较分析，在宿主z5中表达构巢曲霉laea和其自身的laea，与阴性对照菌株nc10.5比较具有同样的效应，具体包括：1)laea过表达菌株的菌落直径减小，菌体干重降低，产孢量下降(图1)；2)扫描电镜检测分析发现，laea过表达菌株的孢子数量少，菌丝更为褶皱，孢子上突起增多(图2)；3)经过发酵培养及代谢产物的检测，发现laea过表达菌株均能提高菌株z5的二苯醚(diorcinol)产量(图3)。
[0031]
以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。
[0032]
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。
[0033]
此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。


技术特征：
1.一种调控丝状真菌次级代谢产物的质粒，其特征在于，所述质粒的核苷酸序列为seq id no.1。2.权利要求1所述的质粒在调控丝状真菌次级代谢产物中的应用。3.一种调控丝状真菌次级代谢产物的方法，其特征在于，用权利要求1所述的质粒转化丝状真菌。4.根据权利要求3所述的应用，其中，所述丝状真菌包括曲霉属真菌。5.根据权利要求3所述的应用，其中，所述丝状真菌包括青霉属真菌。6.根据权利要求3所述的应用，其中，所述次级代谢产物为二苯醚类化合物。7.一种增加曲霉属真菌的二苯醚类化合物产量的方法，其特征在于，用权利要求1所述的质粒转化曲霉属真菌，所述曲霉属真菌是保藏号为cctcc no：m 2015238的海洋来源曲霉属真菌z5。8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述二苯醚类化合物为3-(3-羟基-5-甲基苯氧基)-5-甲基苯酚。

技术总结
本公开涉及一种调控丝状真菌次级代谢产物的质粒，其特征在于，所述质粒的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；所述质粒适用于多种丝状真菌，所研究的丝状真菌可直接进行质粒的转化，能够有效提高转化效率，减短转化周期，并且对丝状真菌无基因损伤。真菌无基因损伤。真菌无基因损伤。


技术研发人员：王品美 徐金钟 郑道琼
受保护的技术使用者：浙江大学
技术研发日：2020.10.29
技术公布日：2022/5/5