用于检测肺癌标志物的免泵SERS微流控芯片及其制备方法和使用方法

技术特征：
1.一种用于检测肺癌标志物的免泵sers微流控芯片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、构建荷瘤裸鼠模型，收集不同时期裸鼠血清样本；步骤二、利用种子生长法制备金钯纳米棒；步骤三、将步骤二制备得到的金钯纳米棒的表面分别标记拉曼信号分子4-mba和dtnb，接着分别修饰发卡dna结构hp
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和hp
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，形成两种sers探针；其中，4-mba为4-巯基苯甲酸，dtnb为5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)；步骤四、在磁珠表面分别修饰发卡dna结构hp
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和hp
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，形成两种捕获探针；步骤五、构建基于催化发卡自组装和磁珠聚集形成信号双放大的免泵微流控芯片。2.根据权利要求1所述用于检测肺癌标志物的免泵sers微流控芯片的制备方法，其特征在于，所述步骤一中构建荷瘤裸鼠模型，收集不同时期裸鼠血清样本的方法包括如下步骤：将裸鼠消毒后经皮下注射pc9细胞后，饲养至成瘤，成瘤后每5天测量瘤子大小并收集新鲜血清样本冰冻保存。3.根据权利要求1所述用于检测肺癌标志物的免泵sers微流控芯片的制备方法，其特征在于，所述步骤二中利用种子生长法制备金钯纳米棒的方法包括如下步骤：(1)取氯金酸加入十六烷基三甲基溴化铵中，之后注入冰浴中配置的硼氢化钠溶液，经剧烈搅拌后形成种子溶液a，静置保存备用；其中，十六烷基三甲基溴化铵与氯金酸及硼氢化钠的摩尔比为900-1000:2-3:5-7；(2)取氯金酸加入十六烷基三甲基溴化铵与油酸钠的混合溶液中，搅拌至溶液变为无色时加入硝酸银，继续搅拌后加入酸调节ph至5-6，之后依次加入抗坏血酸及所述种子溶液a，经静置反应、离心、清洗后得到金纳米棒；(3)将金纳米棒分散于水中，之后取金纳米棒分散液加入到十六烷基三甲基溴化铵溶液中，经超声、离心后，沉淀与十六烷基三甲基溴化铵溶液配置成种子溶液b；(4)取种子溶液b与氯化铜溶液及氯钯酸溶液混合静置反应后，加入抗坏血酸混合反应后，经乙醇和超纯水离心后，得到金钯纳米棒。4.根据权利要求1所述用于检测肺癌标志物的免泵sers微流控芯片的制备方法，其特征在于，所述步骤三中金钯纳米棒的表面标记拉曼信号分子4-mba的方法是将4-mba乙醇溶液加入到金钯纳米棒溶液中，经搅拌10-50min后得到pd-aunrs@4-mba溶液；金钯纳米棒的表面标记拉曼信号分子dtnb的方法是将dtnb的乙醇溶液加入到金钯纳米棒溶液中，经搅拌10-50min后得到pd-aunrs。5.根据权利要求4所述用于检测肺癌标志物的免泵sers微流控芯片的制备方法，其特征在于，所述步骤三中修饰发卡dna结构hp
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和hp
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形成两种sers探针的方法是将hp
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和hp
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分别用tcep缓冲液活化后，再分别与相应的pd-aunrs@4-mba溶液及pd-aunrs溶液混合10-18h，得到pd-aunrs@4-mba@hp
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溶液和pd-aunrs@dtnb@hp
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溶液，之后分别在pd-aunrs@4-mba@hp
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溶液和pd-aunrs@dtnb@hp
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溶液中加入牛血清白蛋白溶液，经孵育、离心、pbs缓冲液溶解的nacl溶液处理后，再将沉淀溶解在pbs缓冲溶液中，即得两种sers探针。6.根据权利要求5所述用于检测肺癌标志物的免泵sers微流控芯片的制备方法，其特征在于，所述步骤四中在磁珠表面分别修饰发卡dna结构hp
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和hp
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，形成两种捕获探针的
方法包括如下步骤：将磁珠依次经pbs溶液分散、活化、一次孵育、封闭磁珠表面位点、磁铁分离后，分离出的磁珠加入pbs溶液，然后分别与haxzp
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与hp
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混溶后，再分别经二次孵育后得到hp
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@mbs溶液和hp
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@mbs溶液。7.根据权利要求6所述用于检测肺癌标志物的免泵sers微流控芯片的制备方法，其特征在于，所述活化是采用edc和nhs活化磁珠表面的羧基，一次孵育是在室温下震荡孵育0.5h，二次孵育是在室温下震荡孵育2h，封闭磁珠表面位点是采用滴加10％bsa溶液对磁珠表面位点封闭。8.根据权利要求1所述用于检测肺癌标志物的免泵sers微流控芯片的制备方法，其特征在于，所述步骤五中构建基于催化发卡自组装和磁珠聚集形成信号双放大的免泵微流控芯片的方法包括如下步骤：(1)将制备的pdms基片打孔，之后与载玻片经超声清洗、烘干、等离子处理后，将pdms基片与载玻片进行贴合，以形成微流控芯片；(2)采用聚乙二醇对制备好的微流控芯片进行亲水性处理，以得到亲水性的微流控芯片。9.一种用于检测肺癌标志物的免泵sers微流控芯片，其特征在于，采用权利要求1至8任一项所述用于检测肺癌标志物的免泵sers微流控芯片的制备方法制得。10.一种权利要求9所述用于检测肺癌标志物的免泵sers微流控芯片的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：s1、将捕获探针hp
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@mbs和hp
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@mbs加入第一加样口，将稀释后的样品溶液滴在第二加样口，sers探针加入第三加样口，在磁铁的吸引下，带有磁珠的反应复合产物固定于收集室内；s2、将采集到的荷瘤裸鼠模型不同时期的血清点样到免泵sers微流控芯片上，37℃更稳反应后，进行sers检测。

技术总结
本发明提供了一种用于检测肺癌标志物的免泵SERS微流控芯片及其制备方法和使用方法，制备方法包括如下步骤：步骤一、构建荷瘤裸鼠模型，收集不同时期裸鼠血清样本；步骤二、利用种子生长法制备金钯纳米棒；步骤三、将步骤二制备得到的金钯纳米棒的表面分别标记拉曼信号分子4-MBA和DTNB，接着分别修饰发卡DNA结构HP


技术研发人员：曹小卫 李广 葛胜杰 顾月星
受保护的技术使用者：扬州大学
技术研发日：2021.12.30
技术公布日：2022/4/29