一种猕猴桃AM真菌菌根化砧木苗的培育方法

一种猕猴桃am真菌菌根化砧木苗的培育方法
技术领域
1.本发明属于植物栽培技术领域，具体说涉及一种利用猕猴桃菌根化，可以使猕猴桃根系健壮，促进猕猴桃生长，有效提高猕猴桃的品质和产量的猕猴桃am真菌菌根化砧木苗的培育方法。


背景技术：

2.猕猴桃为猕猴桃科(actinidiaceae)猕猴桃属(actinidia)落叶藤本植物，其栽培品种多，分布范围广，果实含有人体必需的17种氨基酸和多种人体必需矿质元素、纤维和维生素c，且有通便和缓解肠道疾病的作用，成为当前果树栽培优先选择的种类之一。
3.随着栽培面积的扩大，各地区间引种、苗木销售和土传病害对猕猴桃产量的影响逐年加重，目前，对于猕猴桃病虫害的防治和提高产量主要依赖于化学农药、杀菌剂和植物激素，然而，随之而来的农药残留超标、果实品质下降，以及土壤板结、地下水污染和各种害虫天敌的灭绝等一系列的生态环境问题使果树栽培面临新的困境。虽然近年来我国采取了多项措施控制农药残留超标问题，但是，近年来频发的生鲜果蔬农药残留事件使消费者对果蔬质量安全风险感到担忧。因此需要提供一种新型、安全、绿色、环保的猕猴桃栽培技术。
4.由于菌根是土壤中有益真菌与植物根系共生后形成的复合吸收器官，既具有植物根系的作用又具有某些真菌的功能，在长期的进化过程中菌根已成为植物存活的决定因素及其生活的自然供养体系。因此利用丛枝菌根真菌与果树根系共生，对于提高果树的营养吸收能力和抗逆性，具有较好的作用。
5.申请日为2009年10月30日，申请号为200910218716.8的中国发明专利公开了一种与根菌共生的芽砧嫁接培育板栗苗木的方法，包括下列步骤:1)接种板栗根菌，将芽砧嫁接培育的嫁接苗包括主要侧根在内的根尖截去0.5～2cm，然后在板栗根菌液中蘸根2～3s；2)容器苗培育，将接种了板栗根菌液的嫁接苗移植于装有培育基质的容器中，移植深度使嫁接接口露出培育基质，嫁接苗移植为容器苗后，当天喷洒板栗林下枯枝落叶的水煮液30～50ml；3)温棚培养，容器苗喷洒水煮液后6h之内移入密封的温棚中培育，保持棚内相对湿度在70～80％之间，温度不超过35℃；4)苗期管理，在温棚培养期间及时去除砧木萌芽和花芽。上述方法对培育板栗苗木较果较好，可以提高苗木成活率，使苗木健壮。
6.申请日为2012年07月10日，申请号为201210251884.9的中国发明专利公开了一种繁育菌根化苗木的方法，包括下列步骤:a、春季用混有高效amf的基质覆盖砧木新梢基部；b、在步骤a所述的基质上撒播三叶草种子；c、秋季将砧木苗分株，贮藏；d、翌年春季嫁接育苗。该方法借助苗木营养系砧木压条繁育方法，在新梢上覆盖清洁的木屑基质，可保持水分，且透气性好，基本不含土壤杂菌，不用消毒，经过腐熟后即可使用，根据具体苗木种类在育苗伊始就有针对性地接种各种高效amf，不但可提高苗木定植后的成活率，批量化生产优质菌根化苗木，而且可使苗木终生受益，操作简便，上述方法使用在苹果苗木上，效果较好。
7.但上述二种方法对于施行于猕猴桃的幼苗培育和苗木栽培，其方法不可行，还需要进一步改进。


技术实现要素：

8.本发明的目的在于克服传统方法在猕猴桃种植过程中产量低，农药残留高，果实品质下降以及现有技术繁育菌根化苗木的方法效果不好的技术问题中，提供一种利用猕猴桃am真菌菌根化，使猕猴桃根系健壮，促进猕猴桃生长，减少种植过程中化肥和农药的使用，有效提高猕猴桃的品质和产量的猕猴桃am真菌菌根化砧木苗的培育方法。
9.为了解决上述技术问题，本发明提供了一种猕猴桃am真菌菌根化砧木苗的培育方法，所述培育方法包括以下步骤:步骤一:种子处理过程，选取优良成熟的猕猴桃果实，经过后熟软化后清洗晾干，选取成熟、优质的猕猴桃种子，置于赤霉素内浸泡10～14h，所述赤霉素的浓度为600～800ppm，之后用清水冲洗，把种子放置于上下均垫有滤纸的培养皿中进行催芽，每2～4d更换一次滤纸；步骤二:育苗基质处理过程，将育苗基质装入布袋，所述育苗基质包括泥炭、椰糠和珍珠岩，且泥炭、椰糠和珍珠岩的体积比为2～4:1～1.5:1～1.5，对育苗基质进行高压蒸汽灭菌，灭菌温度设置为110～130℃，灭菌时间设置为1～1.5h，灭菌后对育苗基质进行烘干或风干；步骤三:培养基质处理过程，将培养基质装入布袋，所述培养基质包括珍珠岩，对培养基质进行高压蒸汽灭菌，灭菌温度设置为110～130℃，灭菌时间设置为1～1.5h，灭菌后对培养基质进行烘干或风干；步骤四:幼苗培育过程，在洗净消毒并晾干的穴盘中装好经步骤二处理后的育苗基质，用水浇透，再取经步骤一处理后破壳露白的猕猴桃种子置于育苗基质内，在种子上面覆盖经步骤二处理后的育苗基质，将穴盘置于光照培养架上，每天光照时间设置为12～15h，湿度设置为50％～90％，温度设置为20～30℃，培育时间设置为25～35d，期间适量补水，使育苗基质表面保持湿润；步骤五:沸沙基质处理过程，将沸沙基质装入布袋，所述沸沙基质包括沸石和河沙，且沸石和河沙的体积比为1:0.8～1.5，对沸沙基质进行高压蒸汽灭菌，灭菌温度设置为110～130℃，灭菌时间设置为1～1.5h，灭菌完成后对沸沙基质进行烘干或风干；步骤六:扩繁宿主植物的催芽过程，将高粱种子用1％～2％的甲醛溶液浸泡4～8min，消毒后洗净，再在蒸馏水中浸泡3～5h，放置于上下垫有湿润滤纸的培养皿中进行催芽；将三叶草种子用0.5％～1％的甲醛溶液浸泡4～8min，消毒后洗净，再在蒸馏水中浸泡1～2h进行催芽；步骤七:菌种扩繁过程，将经步骤五处理后的沸沙基质装入花盆1/3～1/2高度处，再在花盆中加入菌剂，用消毒后的玻璃棒将表面3cm深的沸沙基质与菌剂搅拌混匀后，在上面覆盖7～8cm厚的沸沙基质，用水浇透，取步骤六中经催芽后的高粱幼苗和三叶草幼苗均匀播种于花盆内，在上面覆盖5～10mm厚的沸沙基质，少量浇水使表层湿润，将花盆置于光照培养架培养80～100d，期间正常浇水，每周多次共浇80～120ml霍格兰德营养液，80～100d后将花盆置于温度和湿度相对恒定的房间自然晾干后，剪掉植物地上部分，将根系剪碎与沸沙基质混匀后在2～5℃的环境下保存20～30d作为培养物，按每株植物接种5000～7000个孢子的含量称取培养物；步骤八:接种过程，取洗净消毒并晾干的花盆，把经过步骤三处理的培养基质放入
花盆中，占花盆的1/4至1/3，并洒水浇透，将步骤四中培育完成的猕猴桃幼苗从穴盘取出，用清水洗去原有的育苗基质，将猕猴桃幼苗放入花盆中，保持高度为种植高度，使茎位于花盆中央，将步骤七中所得的培养物及菌剂均匀洒落在猕猴桃幼苗的根系周围，使菌剂均匀粘在猕猴桃幼苗根系表面，部分落入下面培养基质上，在根系四周继续添加步骤三处理的培养基质，直至将根系覆盖，对培养基质补水；步骤九:幼苗培育过程，将经过步骤七接种后的猕猴桃幼苗，放到光照培养架上，光照强度设置为1800～2500lux，白天光照时间设置为12～16h，空气湿度设置为60％～85％，空气温度设置25～30℃，期间正常浇水，每周浇一次霍格兰德营养液，每盆每周浇80～120ml，培养6个月，再移植。
10.作为本发明的进一步改进措施，步骤七中所述的菌剂设置为根内根孢囊霉、摩西斗管囊霉、异形根孢囊霉、密色无梗囊霉或幼套近明球囊霉中的一种。
11.作为本发明的进一步改进措施，按每株植物接种5500～6500个孢子的含量计算，根内根孢囊霉孢子密度为每克土中130～150个，每盆分别接种36～50g含根内根孢囊霉的培养物，摩西斗管囊霉孢子密度为每克土中35～45个，每盆分别接种122～185g含摩西斗管囊霉的培养物，异形根孢囊霉孢子密度为每克土中30～40个，每盆分别接种137～216g含异形根孢囊霉的培养物，密色无梗囊霉孢子密度为每克土中95～105个，每盆分别接种52～68g含密色无梗囊霉的培养物，幼套近明球囊霉孢子密度为每克土中30～40个，每盆分别接种138～216g含幼套近明球囊霉的培养物。
12.作为本发明的进一步改进措施，步骤八中，将接种后的花盆放入托盘中，通过向托盘补水，使水从花盆底部向上输送，保持花盆内培养基质的湿润。
13.作为本发明的进一步改进措施，所述的霍格兰德营养液包括大量元素、微量元素和铁盐溶液，在每升霍格兰德营养液中大量元素包括:kh2po4:0.5～1.5ml，kno3:4～6ml、ca(no3)2:4～6ml和mgso4:1～3ml；微量元素包括:h3bo3、mncl2·
4h20、znso4·
7h2o、cuso4·
5h2o和h2moo4·
h2o，所述微量元素共计0.5～2ml；铁盐溶液包括:feso4·
7h2o、edta-2na和蒸馏水，所述铁盐溶液共计0.5～2ml。
14.作为本发明的进一步改进措施，霍格兰德营养液成分中各原料母液的浓度分别为:kh2po4:136g/l、kno3:101g/l、ca(no3)2:236g/l、mgso4:246.5g/l、h3bo3:2.86g/l、mncl2·
4h2o:1.81g/l、znso4·
7h2o:0.22g/l、cuso4·
5h2o:0.08g/l、h2moo4·
h2o:0.02g/l、feso4·
7h2o:2.78g/l、edta-2na:2.78g/l。
15.作为本发明的进一步改进措施，步骤七中，每周多次共浇90～110ml霍格兰德营养液。
16.作为本发明的进一步改进措施，步骤九中，每周浇一次霍格兰德营养液，每盆每周浇90～110ml。
17.作为本发明的进一步改进措施，步骤九中，光照强度设置为1900～2100lux，空气湿度设置为70％～80％。
18.与现有技术相比，本发明的有益效果在于:1、本发明提供了一种采用微生物菌肥以促进猕猴桃生长的培育方法，主要是利用根内根孢囊霉、摩西斗管囊霉、异形根孢囊霉、密色无梗囊霉或幼套近明球囊霉这五个菌种对猕猴桃根系进行接种，与根系共生增加了根系的营养摄取，使根系形态和生理发生变化，影响植物次生代谢，在种植过程中，可以促进
猕猴桃植株对土壤中各类矿质元素的吸收，减少了化肥和农药使用，减轻了环境污染，对猕猴桃的生长具有显著促进作用，提高猕猴桃的品质和产量。
19.2、本发明利用种子萌发的当年生苗，避免由于菌根化苗的时间过长，容易感染病原菌的风险，且本发明由种子处理、萌发、接种和生长的培育和管理方法可以缩短获得菌根化苗的时间。
20.3、菌根与根系共生，增加植物对于根部病害的抵抗作用，有利于减轻植物病害。
21.4、本发明在猕猴桃生长过程中使用单一的珍珠岩制作的培养基质，成本低，且营养元素用减磷的霍格兰营养液，可以较严格的控制养分，更有利于猕猴桃的生长。
附图说明
22.图1是本发明一种猕猴桃am真菌菌根化砧木苗的培育方法步骤。
具体实施方式
23.下面结合附图对本发明作进一步说明。
24.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
25.相反，本发明涵盖任何由权利要求定义的在本发明的精髓和范围上做的替代、修改、等效方法以及方案。进一步，为了使公众对本发明有更好的了解，在下文对本发明的细节描述中，详尽描述了一些特定的细节部分。对本领域技术人员来说没有这些细节部分的描述也可以完全理解本发明。
26.实施例1:一种猕猴桃am真菌菌根化砧木苗的培育方法，具体包括以下步骤:步骤一:种子处理过程，步骤二:育苗基质处理过程，步骤三:培养基质处理过程，步骤四:幼苗培育过程，步骤五:沸沙基质处理过程，步骤六:扩繁宿主植物的催芽过程，步骤七:菌种扩繁过程，步骤八:接种过程，步骤九:幼苗培育过程。
27.先选取本地优良野生中华猕猴桃成熟的果实，经过后熟软化后清洗晾干，取优质的种子放置于赤霉素内浸泡12h，赤霉素的浓度为650ppm，清水冲洗后，把种子放置于上下均垫有滤纸的培养皿中进行催芽，滤纸经蒸馏水湿润，每三天更换一次滤纸，以防止杂菌污染。
28.至少提前两周准备育苗基质，将泥炭、椰糠和珍珠岩按体积比为2.8:1.2:1.2混匀后，装入布袋，放入高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌温度设置为121℃，灭菌时间设置为1h，灭菌完成后将育苗基质放入鼓风干燥箱内烘干，烘干温度为40℃，或者是放置于消毒后的台面上进行风干；至少提前两周准备培养基质，将珍珠岩装入布袋，放入高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌温度设置为121℃，灭菌时间设置为1h，灭菌完成后将培养基质放入鼓风干燥箱内烘干，烘干温度为40℃，或者是放置于消毒后的台面上进行风干。通过灭菌可以避免育苗基质和培养基质中产生的有害物质对猕猴桃的生长产生影响，将育苗基质和培养基质烘干可以防止空气中的霉菌孢子在育苗基质和培养基质中大量繁殖。
29.在洗净消毒并晾干后的穴盘中装好经灭菌、烘干后的育苗基质，用水浇透，再取破壳露白的猕猴桃种子置于育苗基质内，并在猕猴桃种子上面覆盖5mm厚的育苗基质。将穴盘
置于光照培养架上，在白天光照14h，夜晚10h，空气湿度为60％，空气温度为26℃的环境下培养30天，在胚芽破土之前，适量补水使育苗基质表面保持湿润。
30.在此期间内准备好异形根孢囊霉菌种110g，利用高粱种子和三叶草种子对菌种进行扩繁。将高粱种子用1％甲醛溶液浸泡5min消毒后洗净，再在蒸馏水中浸泡4h，放置于上下垫有湿润滤纸的培养皿中进行催芽，将三叶草种子用0.5％甲醛溶液浸泡5min消毒后洗净，再在蒸馏水中浸泡1h进行催芽。
31.准备沸沙基质，将沸石和河沙按体积比为1:1混匀后，装入布袋，放入高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌温度设置为120℃，灭菌时间设置为1h，灭菌完成后将沸沙基质放入鼓风干燥箱内烘干，烘干温度为40℃，或者是放置于消毒后的台面上进行风干。
32.把灭菌、烘干后的沸沙基质装入花盆内，占花盆高度的2/3，再在花盆中加入异形根孢囊霉，用消毒后的玻璃棒将表面3cm深的沸沙基质与异形根孢囊霉搅拌混匀后，在上面覆盖7～8cm厚的沸沙基质，用水浇透，取100粒经催芽后的高粱幼苗和80粒经催芽后的三叶草幼苗，均匀播种于花盆内，再在高粱幼苗和三叶草幼苗上覆盖8mm厚的沸沙基质，少量浇水使表层湿润。将花盆置于光照培养架上培养，期间正常浇水，每周每盆多次共浇100ml减磷的霍格兰德营养液，3个月后将花盆置于温度湿度相对恒定的房间自然晾干后，剪掉植物地上部分，将根系剪碎，与沸沙基质混匀后在4℃的环境下保存30天，得到含有异形根孢囊霉的培养物。对花盆内的菌种进行测量可知，扩繁后根内异形根孢囊霉的孢子密度为每克土中40个，为促进猕猴桃生长，提高猕猴的产量，需要对每株猕猴桃分别接种约6000个孢子，因此，需要称量含有异形根孢囊霉的培养物150g。
33.另准备花盆一个，该花盆提前清洗干净，用0.5％次氯酸钠溶液浸泡消毒30min并晾干，在花盆底部垫上两层干净的白纸，将提前准备好的经灭菌、烘干后的培养基质装入花盆，占花盆体积的1/3，洒水浇透。将培育完成的猕猴桃幼苗从穴盘取出，用水洗去原有的育苗基质，并使根部湿润，便于菌剂附着。
34.将猕猴桃幼苗放入装有培养基质的花盆中，用手保持幼苗为种植高度，使茎位于花盆中央，将称量好的含有异形根孢囊霉的培养物放在纸上，纸经过对折，使培养物在根系上方不同方向均匀流出，洒落在猕猴桃幼苗的根系周围，使菌剂均匀粘在猕猴桃幼苗根系表面，一部分落入培养基质上，并在根系四周继续添加培养基质，直至将根系覆盖。将接种好菌种的花盆放在托盘内，通过向托盘补水，保持花盆内培养基质的湿润，可以避免由于珍珠岩吸水性较差将菌剂冲入花盆底部。再将花盆放在光照培养架上，将幼苗置于光照强度为2000lux，白天光照14h，夜晚10h，空气湿度85％，空气温度28℃的环境下进行培养，期间浇水保持干湿交替，每周每盆浇100ml减磷的霍格兰德营养液，培育6个月后，再移植。
35.在本实施例中，霍格兰德营养液包括大量元素、微量元素和铁盐溶液，在每升霍格兰德营养液中大量元素包括：kh2po4：0.9ml，kno3：4.8ml、ca(no3)2：5.1ml和mgso4：2.3ml；微量元素包括：h3bo3、mncl2·
4h20、znso4·
7h2o、cuso4·
5h2o和h2moo4·
h2o，微量元素共计1ml；铁盐溶液包括：feso4·
7h2o、edta-2na和蒸馏水，铁盐溶液共计1ml。而霍格兰德营养液成分中各原料母液的浓度分别为：kh2po4：136g/l、kno3：101g/l、ca(no3)2：236g/l、mgso4：246.5g/l、h3bo3：2.86g/l、mncl2·
4h2o：1.81g/l、znso4·
7h2o：0.22g/l、cuso4·
5h2o：0.08g/l、h2moo4·
h2o：0.02g/l、feso4·
7h2o：2.78g/l、edta-2na：2.78g/l。
36.在中华猕猴桃生长后对其各项生长指标进行测定，将中华猕猴桃匍匐茎拉直长度
测定为株高，基部茎与土壤接触的地方的直径用游标卡尺测定为茎。将叶片、茎干和根系分开，根系洗净后用吸水纸吸干水分，分别称取鲜重，然后分别装入信封烘干至恒重。接种了异形根孢囊霉培育出的中华猕猴桃的各项生长指标如表1所示。类别实施例1对照组差异显著性株高/cm50.37
±
39.1522.18
±
8.780.026茎径/mm8.89
±
0.829.77
±
2.040.327叶鲜重/g47.18
±
3.5937.93
±
11.140.068茎鲜重/g11.85
±
4.036.53
±
0.91《0.001根鲜重/g46.88
±
8.0643.83
±
12.290.591叶干重/g12.72
±
1.2610.49
±
2.620.069茎干重/g3.99
±
1.022.18
±
0.25《0.001根干重/g10.40
±
1.578.54
±
2.240.089总干重/g27.11
±
2.4921.20
±
4.190.063总鲜重/g105.92
±
10.5588.29
±
20.010.006表1中华猕猴桃接种异形根孢囊霉后的各项生长指标
37.从表格中的数据可以看出，异形根孢囊霉对中华猕猴桃生长的株高、叶鲜重、茎鲜重、根鲜重、叶干重、茎秆重和根干重都具有促进作用。
38.将新鲜根系从不同方向共剪取根系约30cm，装入包埋盒，让入10％koh溶液，90℃水浴30min，洗净后用2％hcl酸化4min，然后在台盼蓝染液中90℃水浴30min后，放入乳酸溶液脱色10min后，把根剪成5mm放在载玻片上做成装片，在显微镜200倍用十字交叉法观察菌丝、丛枝和泡囊，通过计算可知，接种了异形根孢囊霉培育出的中华猕猴桃的菌丝侵染率为70％，丛枝侵染率为25.5％，泡囊侵染率为65％，总侵染率为78％。
39.实施例2:一种猕猴桃am真菌菌根化砧木苗的培育方法，选取美味猕猴桃成熟的果实，经过后熟软化后清洗晾干，取优质的种子放置于赤霉素内浸泡10h，赤霉素的浓度为700ppm，清水冲洗后，把种子放置于上下均垫有滤纸的培养皿中进行催芽，滤纸经蒸馏水湿润，每三天更换一次滤纸，以防止杂菌污染。
40.至少提前两周准备育苗基质，将泥炭、椰糠和珍珠岩按体积比为3.3:1.3:1.3混匀后，装入布袋，放入高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌温度设置为115℃，灭菌时间设置为1.2h，灭菌完成后将育苗基质放入鼓风干燥箱内烘干，烘干温度为40℃，或者是放置于消毒后的台面上进行风干；至少提前两周准备培养基质，将珍珠岩装入布袋，放入高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌温度设置为115℃，灭菌时间设置为1.2h，灭菌完成后将培养基质放入鼓风干燥箱内烘干，烘干温度为40℃，或者是放置于消毒后的台面上进行风干。通过灭菌可以避免育苗基质和培养基质中产生的有害物质对猕猴桃的生长产生影响，将育苗基质和培养基质烘干可以防止空气中的霉菌孢子在育苗基质和培养基质中大量繁殖。
41.在洗净消毒并晾干后的穴盘中装好经灭菌、烘干后的育苗基质，用水浇透，再取破壳露白的猕猴桃种子置于育苗基质内，在猕猴桃种子上面覆盖5mm厚的育苗基质。将穴盘置于光照培养架上，在白天光照12h，夜晚12h，空气湿度为65％，空气温度为28℃的环境下培养30天，在胚芽破土之前，适量补水使育苗基质表面保持湿润。
42.在此期间内准备好密色无梗囊霉菌种90g，利用高粱种子和三叶草种子对菌种进
行扩繁。将高粱种子用1.5％甲醛溶液浸泡5min消毒后洗净，再在蒸馏水中浸泡4h，放置于上下垫有湿润滤纸的培养皿中进行催芽，将三叶草种子用0.8％甲醛溶液浸泡5min消毒后洗净，再在蒸馏水中浸泡1h进行催芽。
43.准备沸沙基质，将沸石和河沙按体积比为1:1混匀后，装入布袋，放入高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，灭菌温度设置为115℃，灭菌时间设置为1.2h，灭菌完成后将沸沙基质放入鼓风干燥箱内烘干，烘干温度为40℃，或者是放置于消毒后的台面上进行风干。
44.把灭菌、烘干后的沸沙基质装入花盆内，占花盆高度的2/3，再在花盆中加入密色无梗囊霉，用消毒后的玻璃棒将表面3cm深的沸沙基质与异形根孢囊霉搅拌混匀后，在上面覆盖8cm厚的沸沙基质，用水浇透，取110粒经催芽后的高粱幼苗和90粒经催芽后的三叶草幼苗，均匀播种于花盆内，再在高粱幼苗和三叶草幼苗上覆盖10mm厚的沸沙基质，少量浇水使表层湿润。将花盆置于光照培养架上培养，期间正常浇水，每周每盆多次共浇105ml减磷的霍格兰德营养液，3个月后将花盆置于温度湿度相对恒定的房间自然晾干后，剪掉植物地上部分，将根系剪碎，与沸沙基质混匀后在4℃的环境下保存30天，得到含有密色无梗囊霉的培养物。对花盆内的菌种进行测量可知，扩繁后密色无梗囊霉的孢子密度为每克土中100个，为促进猕猴桃生长，提高猕猴的产量，需要对每株猕猴桃分别接种约6000个孢子，因此，需要称量含有密色无梗囊霉的培养物60g。
45.另准备花盆一个，该花盆提前清洗干净后用0.5％次氯酸钠浸泡消毒35min并晾干，在花盆底部垫上两层干净的白纸，将提前准备好的经灭菌、烘干后的培养基质装入花盆，占花盆体积的1/3，洒水浇透。将培育完成的猕猴桃幼苗从穴盘取出，用水淋洗去除原有的育苗基质，并使根部湿润，便于菌剂附着。
46.将猕猴桃幼苗放入装有培养基质的花盆中，用手保持幼苗为种植高度，使茎位于花盆中央，将称量好的含有密色无梗囊霉的培养物放在纸上，纸卷成圆筒状，使培养物在根系上方不同方向均匀流出，洒落在猕猴桃幼苗的根系周围，使菌剂均匀粘在猕猴桃幼苗根系表面，一部分落入培养基质上，并在根系四周继续添加培养基质，直至将根系覆盖。将接种好菌种的花盆放在托盘内，通过向托盘补水，保持花盆内培养基质的湿润，可以避免由于珍珠岩吸水性较差将菌剂冲入花盆底部。再将花盆放在光照培养架上，将幼苗置于光照强度为2200lux，白天光照12h，夜晚12h，空气湿度80％，空气温度26℃的环境下进行培养，期间浇水保持干湿交替，每周每盆浇110ml减磷的霍格兰德营养液，培育6个月后，再移植。
47.在本实施例中，霍格兰德营养液的原料、成分以及各原料的母液浓度同实施例1。
48.利用上述方法培育的美味猕猴桃，对其生长后各指标进行测定，测定方式同实施例1，接种了密色无梗囊霉菌种培育出的美味猕猴桃的各项生长指标如表2所示。类别实施例2对照组差异显著性株高/cm30.81
±
6.6723.38
±
10.350.103茎径/mm9.77
±
1.228.36
±
1.470.05叶鲜重/g48.11
±
5.9234.74
±
10.370.006茎鲜重/g10.69
±
1.807.32
±
3.110.017根鲜重/g52.31
±
5.9341.18
±
5.150.001叶干重/g14.63
±
1.8810.03
±
2.790.001茎干重/g3.88
±
0.682.65
±
1.070.014
根干重/g11.31
±
1.378.77
±
1.230.001总干重/g29.82
±
2.5921.46
±
3.94《0.001总鲜重/g111.11
±
8.8583.24
±
13.86《0.001表2美味猕猴桃接种密色无梗囊霉后的各项生长指标
49.从表格中的数据可以看出，密色无梗囊霉对美味猕猴桃生长的株高、茎径、叶鲜重、茎鲜重、根鲜重、叶干重、茎秆重和根干重都具有促进作用。
50.通过计算可知，接种了密色无梗囊霉培育出的美味猕猴桃的菌丝侵染率为7％，丛枝侵染率为2.5％，泡囊侵染率为7％，总侵染率为12.5％。
51.实施例3：具体方法同实施例1，选取的品种为本地优良野生中华猕猴桃，菌剂设置为根内根孢囊霉，其培养物中孢子密度分别为每克土中141个，需要对每株野生中华猕猴桃分别接种约6000个孢子，因此，需要称量含有根内根孢囊霉的培养物43g。利用上述方法培育的野生中华猕猴桃，对其生长后各指标进行测定，测定方式同实施例1，接种了根内根孢囊霉培育出的中华猕猴桃的各项生长指标如表3所示。类别实施例3对照组差异显著性株高/cm35.42
±
17.2122.18
±
8.780.033茎径/mm8.99
±
1.189.77
±
2.040.318叶鲜重/g42.66
±
6.5037.93
±
11.140.272茎鲜重/g9.33
±
3.576.53
±
0.910.017根鲜重/g47.27
±
12.6943.83
±
12.290.539叶干重/g11.90
±
1.7210.49
±
2.620.176茎干重/g3.22
±
1.292.18
±
0.250.013根干重/g9.66
±
2.218.54
±
2.240.267总干重/g24.78
±
2.6921.20
±
4.190.211总鲜重/g99.26
±
18.0388.29
±
20.010.038表3中华猕猴桃接种根内根孢囊霉后的各项生长指标
52.从表格中的数据可以看出，根内根孢囊霉对中华猕猴桃生长的株高、叶鲜重、茎鲜重、根鲜重、叶干重、茎秆重和根干重都具有促进作用。
53.通过计算可知，接种了根内根孢囊霉培育出的中华猕猴桃的菌丝侵染率为36.5％，丛枝侵染率为0.5％，泡囊侵染率为10％，总侵染率为39％。
54.实施例4：具体方法同实施例1，选取的品种为本地优良野生中华猕猴桃，菌剂设置为摩西斗管囊霉，其培养物中孢子密度分别为每克土中40个，需要对每株野生中华猕猴桃分别接种约6000个孢子，因此，需要称量含有摩西斗管囊霉的培养物150g。利用上述方法培育的野生中华猕猴桃，对其生长后各指标进行测定，测定方式同实施例1，接种了摩西斗管囊霉培育出的中华猕猴桃的各项生长指标如表4所示。类别实施例4对照组差异显著性株高/cm22.66
±
6.8922.18
±
8.780.904茎径/mm8.99
±
1.609.77
±
2.040.396叶鲜重/g47.29
±
8.0437.93
±
11.140.07茎鲜重/g8.13
±
2.766.53
±
0.910.079
根鲜重/g50.81
±
8.2743.83
±
12.290.201叶干重/g12.47
±
3.0210.49
±
2.620.15茎干重/g2.90
±
1.022.18
±
0.250.029根干重/g11.40
±
2.058.54
±
2.240.013总干重/g26.77
±
3.4921.20
±
4.190.044总鲜重/g106.23
±
11.0488.29
±
20.010.009表4中华猕猴桃接种摩西斗管囊霉后的各项生长指标
55.从表格中的数据可以看出，摩西斗管囊霉对中华猕猴桃生长的株高、叶鲜重、茎鲜重、根鲜重、叶干重、茎秆重和根干重都具有促进作用。
56.通过计算可知，接种了摩西斗管囊霉培育出的中华猕猴桃的菌丝侵染率为44％，丛枝侵染率为1％，泡囊侵染率为6％，总侵染率为43％。
57.实施例5：具体方法同实施例2，选取的品种为美味猕猴桃，菌剂设置为幼套近明球囊霉，其培养物中孢子密度分别为每克土中34个需要对每株美味猕猴桃分别接种约6000个孢子，因此，需要称量含有幼套近明球囊霉的培养物176g。利用上述方法培育的美味猕猴桃，对其生长后各指标进行测定，测定方式同实施例1，接种了幼套近明球囊霉培育出的美味猕猴桃的各项生长指标如表5所示。类别实施例5对照组差异显著性株高/cm41.53
±
16.0623.38
±
10.350.016茎径/mm8.70
±
1.728.36
±
1.470.683叶鲜重/g52.09
±
9.7034.74
±
10.370.004茎鲜重/g10.60
±
1.847.32
±
3.110.027根鲜重/g49.27
±
10.7841.18
±
5.150.066叶干重/g15.21
±
3.4210.03
±
2.790.005茎干重/g3.86
±
0.852.65
±
1.070.028根干重/g11.37
±
3.458.77
±
1.230.053总干重/g30.44
±
6.3121.46
±
3.940.002总鲜重/g111.96
±
16.4583.24
±
13.860.004表5美味猕猴桃接种幼套近明球囊霉后的各项生长指标
58.从表格中的数据可以看出，幼套近明球囊霉对美味猕猴桃生长的株高、茎径、叶鲜重、茎鲜重、根鲜重、叶干重、茎秆重和根干重都具有促进作用。
59.通过计算可知，接种了幼套近明球囊霉培育出的美味猕猴桃的菌丝侵染率为21％，丛枝侵染率为5％，泡囊侵染率为8％，总侵染率为22％。
60.通过对比上述5个实施例中猕猴桃各项生长指标，可得出接种上述五种菌种的猕猴桃生长状况明显优于对照组中不接种菌种的猕猴桃，因此本方法能促进猕猴桃对水分和各种矿物质的吸收，从而可以提高肥料利用率，促进植物生长。
61.上面结合说明书附图对本发明实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，对于本领域普通技术人员来说，还可以在不脱离本发明的前提下作若干变型和改进，这些也应视为属于本发明的保护范围。