不使用水凝胶生产诱导性多能干细胞的方法与流程

技术特征：
1.一种生产诱导性多能干细胞的方法，所述方法包括：培养体细胞；和在无水凝胶的3d细胞培养板中将培养的体细胞重编程为诱导性多能干细胞，其中，所述3d细胞培养板包括：孔板，所述孔板包括多个主孔和多个子孔，所述多个子孔形成在主孔的下部以注入细胞培养液并且包括在其底表面上的凹入部；和支持所述孔板的用于大容量和高速高内涵筛选(hcs)的连接件，并且用于高内涵筛选(hcs)的连接件包括配备有固定装置以与所述孔板的下端连接并且从所述孔板的下端分离的底座以及位于所述孔板的上部以连接到所述底座的盖，所述主孔具有形成为在预定位置逐渐变细的台阶，所述台阶相对于主孔的壁具有10
°
至60
°
的倾斜角(θ)。2.权利要求1所述的方法，其中，所述体细胞是成纤维细胞。3.权利要求1所述的方法，其中，所述水凝胶是基于胞外基质的水凝胶。4.权利要求3所述的方法，其中，所述基于胞外基质的水凝胶是基底胶。5.权利要求1所述的方法，在重编程步骤之后还包括：形成所述重编程的诱导性多能干细胞的球状体。6.权利要求1所述的方法，其中，所述子孔具有形成为朝向所述凹入部逐渐变细的倾斜表面，所述子孔的上端直径为3.0至4.5mm，所述凹入部的上端直径为0.45至1.5mm，所述子孔和所述凹入部之间的倾斜表面θ2为40
°
至50
°
，并且所述子孔的直径与所述凹入部的直径的长度比为1:0.1至1:0.5。7.权利要求1所述的方法，其中，所述主孔的个体体积为100至300μl，所述凹入部的个体体积为20至50μl，并且所述主孔与所述凹入部的个体体积比平均为1:0.1至1:0.5。8.权利要求1所述的方法，其中，所述主孔包括所述台阶和所述子孔之间的空间部，所述空间部的高度(a
h
)平均为2.0至3.0mm，所述子孔的高度(b
h
)平均为1.0到2.0mm，并且所述空间部与所述子孔的高度比(a
h
:b
h
)为1:0.3至1:1。9.权利要求1所述的方法，其中，所述体细胞以100至1000个细胞/孔接种在所述细胞培养板的所述子孔中。

技术总结
本发明提供一种不使用水凝胶生产诱导性多能干细胞的方法。多能干细胞的方法。多能干细胞的方法。


技术研发人员：郑锡 梁智勋 田艺瑟 罗奎唤
受保护的技术使用者：株式会社下一代生物
技术研发日：2020.06.25
技术公布日：2022/4/29