用于治疗呼吸道合胞病毒的组合物及方法与流程

用于治疗呼吸道合胞病毒的组合物及方法


背景技术：

1.对用于呼吸道合胞病毒(rsv)的新型抗病毒治疗的需求意义重大且在医学领域尤其至关重要。rsv是若干类易感患者群体(包括两岁以下儿童、免疫受损的患者及老年人)中呼吸道感染的病原体。病毒感染从上呼吸道进展到下呼吸道，而这会导致气道炎症、细支气管炎、肺炎以及在极端情况下的呼吸衰竭。在美国的老年社区，发现四年多来rsv导致177,500人入院及14,000人死亡。rsv是婴儿常见的感染，几乎所有婴儿都会在生命的前24个月中被感染。据估计，rsv感染导致的严重疾病是全球大约320万人住院及约66,000名5岁以下儿童死亡的原因。
2.用于rsv的抗病毒治疗的开发已成为一项持续挑战。帕利珠单抗(palivizumab)是一种单克隆抗体，被批准用于预防性用途，但在降低住院率方面仅为60％有效。利巴韦林(ribavirin)被批准作为婴儿的吸入治疗选择，但疗效非常有限且对护理人员存在显著安全问题。rsv感染的患者的护理标准是支持性的，包括流体及氧气。需要用于治疗rsv的新的更有效疗法。


技术实现要素：

3.本公开涉及用于抑制病毒生长的缀合物、组合物及方法，及用于治疗病毒感染的方法。具体地说，此类缀合物含有缀合于fc单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的抑制呼吸道合胞病毒(rsv)融合蛋白(f蛋白)的部分的单体或二聚体(例如，普沙托韦(presatovir)、mdt 637、jnj 179或其类似物)。缀合物中的rsv f蛋白抑制剂(例如，普沙托韦、mdt 637、jnj 179或其类似物)靶向病毒粒子的表面上的rsv融合蛋白。所述缀合物中的fc单体或fc结构域结合于免疫细胞(例如，嗜中性粒细胞)上的fcγr(例如，fcrn、fcγri、fcγriia、fcγriic、fcγriiia及fcγriiib)以活化吞噬作用及效应子功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)，因此导致免疫细胞吞没及破坏病毒粒子且进一步增强所述缀合物的抗病毒活性。所述白蛋白或白蛋白结合肽可延长缀合物的半衰期，例如通过使白蛋白结合于再循环新生儿fc受体。所述组合物适用于抑制病毒生长的方法及治疗病毒感染(诸如由rsv a及rsv b引起的那些)的方法。
4.在第一方面中，本发明提供一种由式(d-i)、(m-i)、(1)或(2)中任一者描述的缀合物：
[0005][0006]
其中每个a1及每个a2独立地选自式(a-i)-(a-iii)中任一者：
[0007][0008]
q选自任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
3-c
20
环烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
5-c
20
芳基、任选取代的c
2-c
15
杂芳基及任选取代的c
1-c
20
烷氧基；
[0009]
r1、每个x1及y各自独立地选自-o-、-s-、-nr
5-、-ch＝n-、-c(c＝o)o-、-(c＝o)nh-、-(c＝o)-、-o(c＝o)nr
5-、-o(c＝s)nr
5-、-o(c＝o)o-、-o(c＝o)-、-nh(c＝o)o-、-nh(c＝o)-、-nh(c＝nh)-、-nh(c＝o)nr
5-、-nh(c＝nh)nr
5-、-nh(c＝s)nr
5-、-nh(c＝s)-、-och2(c＝o)nr
5-、-r5or6c(＝o)nh-、-r5nh(c＝o)-、-r5n-、-nh(so2)-、-nh(so2)nr
5-、-or
6-、-nhr
6-、-so
2-及
–
sr
6-；
[0010]
r2、每个r3、每个x2及u1各自独立地选自oh、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的c
1-c
20
烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
3-c
20
环烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
5-c
20
芳基、任选取代的c
2-c
15
杂芳基及任选取代的c
1-c
20
烷氧基；
[0011]
每个x3独立地选自任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基及任选取代的c
1-c
15
杂芳基；
[0012]
u2是环氮原子的取代基且选自任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基、任选取代的c
3-c
15
杂芳基及键；
[0013]
u3是环氮原子的取代基且选自h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
3-c
20
环烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
5-c
20
芳基、任选取代的c
2-c
15
杂芳基及任选取代的c
1-c
20
烷氧基、任选取代的c
1-c
20
烷氨基、任选取代的羧基、任选取代的氰基；
[0014]
ar选自任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基及任选取代的c
1-c
15
杂芳基；
[0015]
r5及r6各自独立地选自h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基及任选取代的c
2-c
15
杂芳基；
[0016]
b及g各自独立地为0、1、2或3；
[0017]
n为1或2；
[0018]
当n为1时，每个e包括fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)、白蛋白(例如，具有seq id no:96-98中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或fc结合肽；
[0019]
当n为2时，每个e包括fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列
结构中任一者)。
[0029]
在另一方面中，本发明提供一种由式(m-i)描述的缀合物：
[0030][0031]
其中每个e包括fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)；每个l-a1中的l是共价附接至e中铰链半胱氨酸的硫原子且附接至a1的接头；n为1或2(例如，当n为2时，两个fc结构域单体二聚以形成fc结构域)；t为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)；且连接于e的波浪线指示每个l-a1共价附接至e中铰链半胱氨酸的硫原子，或其药学上可接受的盐。当t大于1(例如，t为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个a1可独立地选自由式(a-i)-(a-iii)中任一者描述的结构。
[0032]
在另一方面中，本发明提供一种由式(m-i)描述的缀合物：
[0033][0034]
其中每个e包括fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)；每个l-a1中的l是共价附接至e中表面暴露赖氨酸的氮原子且附接至a1的接头；n为1或2(例如，当n为2时，两个fc结构域单体二聚以形成fc结构域)；t为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，连接于e的波浪线指示每个l-a1共价附接(例如，通过共价键或接头)至e中表面暴露赖氨酸的氮原子，或其药学上可接受的盐。当t大于1(例如，t为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个a1可独立地选自由式(a-i)-(a-iii)中任一者描述的结构。
[0035]
在另一方面中，本发明提供一种由式(1)描述的缀合物：
[0036][0037]
其中每个e包括fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)；每个a
1-l-a2中的l是共价附接至每个e中铰链半胱氨酸的硫原子且附接至a1及a2中每一者的接头；t为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、
17、18、19或20)，且连接于两个e的两条波浪线指示每个a
1-l-a2共价附接至两个e中两个铰链半胱氨酸的一对硫原子，或其药学上可接受的盐。当t大于1(例如，t为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个a
1-l-a2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的a
1-l-a2结构中任一者)。
[0038]
在另一方面中，本发明提供一种由式(2)描述的缀合物：
[0039][0040][0041]
其中每个e包括fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)；每个l-a1中的l是共价附接至e中铰链半胱氨酸的硫原子且附接至a1的接头；t为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接于两个硫原子的两条波浪线指示每个l-a1共价附接至两个e中两个铰链半胱氨酸的一对硫原子，或其药学上可接受的盐。当t大于1(例如，t为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个a1可独立地选自由式(a-i)-(a-iii)中任一者描述的结构。
[0042]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，每个e包括具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体。
[0043]
在一些实施方案中，所述硫原子对中的至少一者是对应于seq id no:10或seq id no:11的铰链半胱氨酸(即，seq id no:10或seq id no:11的cys10、cys13、cys16或cys18)(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于以下(例如，其硫原子)的硫原子：seq id no:10或seq id no:11中的cys10及cys13、seq id no:10或seq id no:11中的cys10及cys16、seq id no:10或seq id no:11中的cys30及cys18、seq id no:10或seq id no:11中的cys13及cys36、seq id no:10或seq id no:11中的cys13及cys38以及/或者seq id no:10或seq id no:11中的cys36及cys38。
[0044]
在一些实施方案中，当t为2时，所述硫原子对是seq id no:10或seq id no:11中的cys10及cys13或者seq id no:10或seq id no:11的cys36及cys38(例如，对应于其的硫原子)。
[0045]
在一些实施方案中，所述硫原子对包括来自各e的半胱氨酸的一个硫原子，即，l-a连同其所附接的硫原子形成两个fc结构域(例如，包括seq id no:10或seq id no:11的序列的两个fc结构域)之间的桥。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
[0046]
在一些实施方案中，当t为2时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当t为2时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当t为2时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
[0047]
在一些实施方案中，当t为2时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当t为2时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
[0048]
在一些实施方案中，当t为2时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
[0049]
在一些实施方案中，当t为3时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子；对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子；以及对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当t为3时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子；对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原
子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子；以及对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当t为3时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子；对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子；以及对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当t为3时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子；对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子；以及对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子。
[0050]
在一些实施方案中，当t为3时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys10(例如，其硫原子)的硫原子；对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys13(例如，其硫原子)的硫原子；对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys16(例如，其硫原子)的硫原子；以及对应于来自一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:10或seq id no:11的cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
[0051]
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
[0052][0053]
其中a、b、c及d各自独立地为0或1且其中当a、b、c或d为0时，两个硫原子形成二硫键。
[0054]
在一些实施方案中，a为1且b、c及d为0。在一些实施方案中，a及b为1且c及d为0。在一些实施方案中，a及c为1且b及d为0。在一些实施方案中，a及d为1且b及c为0。在一些实施方案中，a、b及c为1且d为0。在一些实施方案中，a、b及d为1且c为0。在一些实施方案中，a、c
及d为1且b为0。在一些实施方案中，b及c为1且a及d为0。在一些实施方案中，b及d为1且a及c为0。在一些实施方案中，b、c及d为1且a为0。在一些实施方案中，c及d为1且a及b为0。在一些实施方案中，a、b、c及d为1。
[0055]
在一些实施方案中，所述硫原子对中的至少一者是对应于seq id no:4或seq id no:33的铰链半胱氨酸(即，cys10及/或cys13)(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于seq id no:4或seq id no:33中的cys10及cys13(例如，其硫原子)的硫原子。
[0056]
在一些实施方案中，所述硫原子对包括来自各e的半胱氨酸的一个硫原子，即，l-a连同其所附接的硫原子形成两个fc结构域(例如，包括seq id no:4或seq id no:33的序列的两个fc结构域)之间的桥。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:4或seq id no:33的cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:4或seq id no:33的cys10(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:4或seq id no:33的cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:4或seq id no:33的cys13(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当t为2时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:4或seq id no:33的cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:4或seq id no:33的cys10(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个e的seq id no:4或seq id no:33的cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:4或seq id no:33的cys13(例如，其硫原子)的硫原子。
[0057]
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
[0058][0059]
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，两个硫原子形成二硫键。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
[0060]
在一些实施方案中，所述硫原子对中的至少一者是对应于seq id no:8的铰链半胱氨酸(即，cys10及/或cys13)(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于seq id no:8中的cys10及cys13(例如，其硫原子)的硫原子。
[0061]
在一些实施方案中，所述硫原子对包括来自各e的半胱氨酸的一个硫原子，即，l-a连同其所附接的硫原子形成两个fc结构域(例如，包括seq id no:8的序列的两个fc结构域)之间的桥。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:8的cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:8的cys10(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:8的
cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:8的cys13(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当t为2时，所述硫原子对是对应于来自一个e的seq id no:8的cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:8的cys10(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个e的seq id no:8的cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个e的seq id no:8的cys13(例如，其硫原子)的硫原子。
[0062]
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
[0063][0064]
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，两个硫原子形成二硫键。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
[0065]
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
[0066][0067]
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，两个硫原子形成二硫键。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
[0068]
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
[0069][0070]
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，两个硫原子形成二硫键。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
[0071]
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
[0072][0073]
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，所述硫原子为硫醇。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
[0074]
在先前三个方面的一些实施方案中，所述氮原子为表面暴露赖氨酸的氮，例如对应于seq id no:10或seq id no:11的lys35、lys63、lys77、lys79、lys106、lys123、lys129、lys181、lys203、lys228或lys236(例如，其氮原子)的氮原子。在一些实施方案中，所述氮原子是对应于seq id no:10或seq id no:11的lys65、lys79、lys108、lys230及/或lys238(例如，其氮原子)的氮原子。
[0075]
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
[0076][0077]
其中a、b、c、d及e各自独立地为0或1且其中当a、b、c、d或e为0时，两个氮原子为nh2。在一些实施方案中，a为1且b、c、d及e为0。在一些实施方案中，b为1且a、c、d及e为0。在一些实施方案中，c为1且a、b、d及e为0。在一些实施方案中，d为1且a、b、c及e为0。在一些实施方案中，e为1且a、b、c及d为0。在一些实施方案中，a及b为1且c、d及e为0。在一些实施方案中，a及c为1且b、d及e为0。在一些实施方案中，a及d为1且b、c及e为0。在一些实施方案中，a及e为1且b、c及d为0。在一些实施方案中，b及c为1且a、d及e为0。在一些实施方案中，b及d为1且a、c及e为0。在一些实施方案中，b及e为1且a、c及d为0。在一些实施方案中，c及d为1且a、b及e为0。在一些实施方案中，c及e为1且a、b及d为0。在一些实施方案中，d及e为1且a、b及c为0。在一些实施方案中，a、b及c为1且d及e为0。在一些实施方案中，a、b及d为1且c及e为0。在一些实施方案中，a、b及e为1且c及d为0。在一些实施方案中，a、c及d为1且b及e为0。在一些实施方案中，a、c及e为1且b及d为0。在一些实施方案中，a、d及e为1且b及c为0。在一些实施方案中，b、c及d为1且a及e为0。在一些实施方案中，b、d及e为1且a及c为0。在一些实施方案中，c、d及e为1且a及b为0。
[0078]
在本文所述的缀合物的一些实施方案中，所述缀合物形成包括fc结构域的均二聚体。在本文所述的缀合物中任一者的一些实施方案中，e与另一e均二聚以形成fc结构域。
[0079]
在另一方面中，本发明提供一种由式(d-i)描述的缀合物：
[0080][0081]
其中e包括白蛋白(例如，具有seq id no:96-98中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或fc结合肽；每个a
1-l-a2中的l是独立地共价附接至e中的表面暴露半胱氨酸的硫原子或表面暴露赖氨酸的氮原子且附接至a1及a2中每一者的接头；n为1；t为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接至e的波浪线指示每个a
1-l-a2独立地共价附接至e中的溶剂暴露半胱氨酸的硫原子或溶剂暴露赖氨酸的氮原子，或其药学上可接受的盐。当t大于1(例如，t为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个a
1-l-a2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的a
1-l-a2结构中任一者)。
[0082]
在另一方面中，本发明提供一种由式(m-i)描述的缀合物：
[0083][0084]
e包括白蛋白(例如，具有seq id no:96-98中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或fc结合肽；每个l-a1中的l是独立地共价附接至e中的表面暴露半胱氨酸的硫原子或表面暴露赖氨酸的氮原子且附接至a1的接头；n为1；t为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接至e的波浪线指示每个l-a1独立地共价附接至e中的溶剂暴露半胱氨酸的硫原子或溶剂暴露赖氨酸的氮原子，或其药学上可接受的盐。当t大于1(例如，t为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个a1可独立地选自由式(a-i)-(a-iii)中任一者描述的结构。
[0085]
在一些实施方案中，每个e包括具有seq id no:96-98中任一者的序列的白蛋白。
[0086]
在一些实施方案中，t为1且l-a共价附接至对应于seq id no:96的cys34的硫原子。
[0087]
在另一方面中，本发明提供一种表1的中间体(int)。这些中间体包括rsv f蛋白的一种或多种抑制剂(例如，普沙托韦、mdt 637、jnj 179或其类似物)及接头(例如，peg
2-peg
20
接头)且可用于合成本文所述的缀合物。表1的中间体可通过本领域技术人员已知的任何合适方法，包括本文所述或例示方法中任一者缀合于例如fc结构域或fc结构域单体、白蛋白、白蛋白结合肽或fc结合肽(例如，借助于接头)。在一些实施方案中，所述缀合物(例如，由式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者描述的缀合物)包括e，其中e为fc结构域单体或fc结构域(例如，fc结构域单体或fc结构域，每个fc结构域单体独立地具有seq id no:1-95中任一者的序列)。在优选实施方案中，e的一个或多个表面暴露赖氨酸残基的一个或多个氮原子或e中的一个或多个表面暴露半胱氨酸的一个或多个硫原子共价缀
合于接头(例如，peg
2-peg
20
接头)。缀合于e的接头可被官能化，以致其可反应以与本文所述的int中任一者(例如，表1的int)形成共价键。在优选实施方案中，e缀合于经叠氮基官能化的接头且int(例如，表1的int)经炔基官能化。e的接头-叠氮基及int的接头-炔缀合(例如，通过点击化学)形成本发明的缀合物，例如由式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者描述的缀合物。在其他实施方案中，e缀合于经炔基官能化的接头且int(例如，表1的int)经叠氮基官能化。e的接头-炔及int的接头-叠氮基缀合(例如，通过点击化学)形成本发明的缀合物，例如由式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者描述的缀合物。
[0088]
表1.中间体
[0089]
[0090]
[0091]
[0092]
[0093]
[0094]
[0095][0096]
在另一方面中，本发明提供一种表2的缀合物。如所示，表2的每个缀合物对应于式(m-i)或式(d-i)的缀合物。表2的缀合物包括通过表1的int与接头的共价反应形成的缀合物，所述接头转而缀合于e(例如，fc结构域单体、白蛋白、白蛋白结合肽或fc结合肽)。在一些实施方案中，int的反应性部分(例如，炔或叠氮基)与共价附接至e的接头(由l’表示)的对应反应性基团(例如，炔或叠氮基)反应，使得表1的int共价附接至e。如表2所示，l’对应于如(m-i)或(d-i)中定义的l的剩余部分(例如，l’是共价接合int及e的接头)。例如，l’可包括三唑(通过int与缀合于e的接头之间的点击化学反应形成)及接头(例如，peg
2-peg
20
接头)，所述接头转而缀合于e的氨基酸侧链。
[0097]
在表2的任何缀合物的一些实施方案中，n为1或2。当n为1时，每个e包括fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)、白蛋白(例如，具有seq id no:96-98中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或fc结合肽。当n为2时，每个e包括fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)，且fc结构域
单体二聚以形成fc结构域。
[0098]
在表2的任何缀合物的一些实施方案中，t为1至20的整数(例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。本公开还提供一种表2的缀合物中任一者的群体，其中t的平均值为1至20(例如，t的平均值为1至2、1至3、1至4、1至5、5至10、10至15或15至20)。在一些实施方案中，t的平均值为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
[0099]
表2的缀合物中的波浪线指示每个l
’‑
int共价附接至e中的氨基酸侧链(例如，e中表面暴露赖氨酸的氮原子或e中表面暴露半胱氨酸的硫原子)，或其药学上可接受的盐。
[0100]
表2：对应于表1的中间体的缀合物
[0101]
[0102]
[0103]
[0104]
[0105]
[0106]
[0107]
[0108]
[0109]
[0110]
[0111]
[0112]
[0113]
[0114][0115]
在另一方面中，本发明提供一种缀合物，其包括(i)第一部分a1；(ii)第二部分a2；(iii)fc结构域单体或fc结构域；及(iv)共价附接至a1及a2且附接至所述fc结构域单体或所述fc结构域的接头；其中每个a1及每个a2独立地选自由式(a-i)-(a-iii)中任一者描述的结构。
[0116]
在另一方面中，本发明提供一种缀合物，其包括(i)第一部分int；(ii)fc结构域单
体或fc结构域；及(iv)共价附接至int且附接至所述fc结构域单体或所述fc结构域的接头；其中每个int独立地选自表1的中间体中任一者。
[0117]
在另一方面中，本发明提供一种缀合物，其包括(i)第一部分a1；(ii)第二部分a2；(iii)白蛋白、白蛋白结合肽或fc结合肽；及(iv)共价附接至a1及a2且附接至所述fc结构域单体或所述fc结构域的接头；其中每个a1及每个a2独立地选自由式(a-i)-(a-iii)中任一者描述的结构。
[0118]
在另一方面中，本发明提供一种由式(d-i)描述的缀合物：
[0119][0120]
其中每个a1及每个a2独立地由式(a-i)-(a-iii)描述：
[0121]
每个e独立地包括fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)、白蛋白(例如，具有seq id no:96-98中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或fc结合肽；n为1或2；t为1至20的整数(例如，t为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)；且l是共价附接至e、a1及a2中每一者的接头，或其药学上可接受的盐。当t大于1(例如，t为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个a
1-l-a2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的a
1-l-a2结构中任一者)。
[0122]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii)描述：
[0123][0124]
或其药学上可接受的盐。
[0125]
在一些实施方案中，缀合物由式(d-ii-1)描述：
[0126][0127]
其中r7及r8各自独立地选自oh、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的c
1-c
20
烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
3-c
20
环烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
5-c
20
芳基、任选取代的c
2-c
15
杂芳基及任选取代的c
1-c
20
烷氧基；或其药学上可接受的盐。
[0128]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-2)描述：
[0129][0130]
或其药学上可接受的盐。
[0131]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-3)描述
[0132][0133]
或其药学上可接受的盐。
[0134]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-4)描述：
[0135][0136]
或其药学上可接受的盐。
[0137]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-5)描述：
[0138][0139]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0140]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-6)描述：
[0141][0142]
或其药学上可接受的盐。
[0143]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-7)描述：
[0144]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0145]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-8)描述：
[0146][0147]
或其药学上可接受的盐。
[0148]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-9)描述：
[0149][0150]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0151]
在一些实施方案中，缀合物由式(d-ii-10)描述：
[0152][0153]
或其药学上可接受的盐。
[0154]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-11)描述：
[0155][0156]
或其药学上可接受的盐。
[0157]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-12)描述：
[0158][0159]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0160]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-13)描述：
[0161][0162]
或其药学上可接受的盐。
[0163]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-14)描述：
[0164][0165]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0166]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-15)描述：
[0167][0168]
或其药学上可接受的盐。
[0169]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-16)描述：
[0170][0171][0172]
或其药学上可接受的盐。
[0173]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-ii-17)描述：
[0174][0175]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0176]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iii)描述：
[0177][0178]
或其药学上可接受的盐。
[0179]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iii-1)描述：
[0180][0181]
或其药学上可接受的盐。
[0182]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iii-2)描述：
[0183][0184]
或其药学上可接受的盐。
[0185]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iii-3)描述：
[0186][0187][0188]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0189]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv)描述：
[0190][0191]
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，u2是任选取代的c
1-c6烷基(例如，c1、
c2、c3、c4、c5或c6烷基)。
[0192]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-1)描述：
[0193][0194]
或其药学上可接受的盐。
[0195]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-2)描述：
[0196][0197]
或其药学上可接受的盐。
[0198]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-3)描述：
[0199][0200]
或其药学上可接受的盐。
[0201]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-4)描述：
[0202][0203]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的
盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0204]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-5)描述：
[0205][0206]
或其药学上可接受的盐。
[0207]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-6)描述：
[0208]
[0209]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0210]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-7)描述：
[0211][0212]
或其药学上可接受的盐。
[0213]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-8)描述：
[0214][0215]
[0216]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0217]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-9)描述：
[0218][0219]
或其药学上可接受的盐。
[0220]
在某些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-10)描述：
[0221][0222]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0223]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-11)描述：
[0224]
[0225]
或其药学上可接受的盐。
[0226]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-12)描述：
[0227][0228]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0229]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-13)描述：
[0230][0231]
或其药学上可接受的盐。
[0232]
在某些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-14)描述：
[0233][0234]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0235]
在某些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-15)描述：
[0236][0237]
或其药学上可接受的盐。
[0238]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-16)描述：
[0239][0240]
[0241]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0242]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-17)描述：
[0243][0244]
或其药学上可接受的盐。
[0245]
在某些实施方案中，所述缀合物由式(d-iv-18)描述：
[0246][0247]
其中l’是l的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0248]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，l或l’包括一个或多个任选取代的c
1-c
20
亚烷基、任选取代的c
1-c
20
亚杂烷基、任选取代的c
2-c
20
亚烯基、任选取代的c
2-c
20
亚杂烯基、任选取代的c
2-c
20
亚炔基、任选取代的c
2-c
20
亚杂炔基、任选取代的c
3-c
20
亚环烷基、任选取代的c
2-c
20
亚杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
亚环烯基、任选取代的c
4-c
20
亚杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
亚环炔基、任选取代的c
8-c
20
亚杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
亚芳基、任选取代的c
2-c
15
亚杂芳基、o、s、nri、p、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，其中ri为h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
1-c
20
杂烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
2-c
20
杂烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
2-c
20
杂炔基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
环烯基、任选取代的c
4-c
20
杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
环炔基、任选取代的c
8-c
20
杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
芳基或任选取代的c
2-c
15
杂芳基。
[0249]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，l或l’的骨架由以下组成：一个或多个任选取代的c
1-c
20
亚烷基、任选取代的c
1-c
20
亚杂烷基、任选取代的c
2-c
20
亚烯基、任选取代的c
2-c
20
亚杂烯基、任选取代的c
2-c
20
亚炔基、任选取代的c
2-c
20
亚杂炔基、任选取代的c
3-c
20
亚环烷基、任选取代的c
2-c
20
亚杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
亚环烯基、任选取代的c
4-c
20
亚
杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
亚环炔基、任选取代的c
8-c
20
亚杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
亚芳基、任选取代的c
2-c
15
亚杂芳基、o、s、nri、p、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，其中ri为h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
1-c
20
杂烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
2-c
20
杂烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
2-c
20
杂炔基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
环烯基、任选取代的c
4-c
20
杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
环炔基、任选取代的c
8-c
20
杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
芳基或任选取代的c
2-c
15
杂芳基。
[0250]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，l或l’经氧代取代。在一些实施方案中，l或l’的骨架包括不超过250个原子。在一些实施方案中，l或l’能够形成酰胺、氨基甲酸酯、磺酰基或脲连接。在一些实施方案中，
[0251]
l或l’为键。在一些实施方案中，l或l’为原子。
[0252]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，每个l由式(d-l-i)描述：
[0253][0254]
其中la由式g
a1-(z
a1
)
g1-(y
a1
)
h1-(z
a2
)
i1-(y
a2
)
j1-(z
a3
)
k1-(y
a3
)
l1-(z
a4
)
m1-(y
a4
)
n1-(z
a5
)o
1-g
a2
描述；lb由式g
b1-(z
b1
)
g2-(y
b1
)
h2-(z
b2
)
i2-(y
b2
)
j2-(z b3
)
k2-(y
b3
)
l2-(z
b4
)
m2-(y
b4
)
n2-(z
b5
)o
2-g
b2
描述；lc由式g
c1-(z
c1
)
g3-(y
c1
)
h3-(z
c2
)
i3-(y
c2
)
j3-(z
c3
)
k3-(y
c3
)
l3-(z
c4
)
m3-(y
c4
)
n3-(z
c5
)o
3-g
c2
描述；g
a1
是附接至qi的键；g
a2
是附接至a1的键；g
b1
是附接至qi的键；g
b2
是附接至a2的键；g
c1
是附接至qi的键；g
c2
是附接至e的键或能够与缀合于e的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪)；z
a1
、z
a2
、z
a3
、z
a4
、z
a5
、z
b1
、z
b2
、z
b3
、z
b4
、z
b5
、z
c1
、z
c2
、z
c3
、z
c4
及z
c5
中的每一者独立地为任选取代的c
1-c
20
亚烷基、任选取代的c
1-c
20
亚杂烷基、任选取代的c
2-c
20
亚烯基、任选取代的c
2-c
20
亚杂烯基、任选取代的c
2-c
20
亚炔基、任选取代的c
2-c
20
亚杂炔基、任选取代的c
3-c
20
亚环烷基、任选取代的c
2-c
20
亚杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
亚环烯基、任选取代的c
4-c
20
亚杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
亚环炔基、任选取代的c
8-c
20
亚杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
亚芳基或任选取代的c
2-c
15
亚杂芳基；y
a1
、y
a2
、y
a3
、y
a4
、y
b1
、y
b2
、y
b3
、y
b4
、y
c1
、y
c2
、y
c3
及y
c4
中的每一者独立地为o、s、nri、p、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；ri为h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
1-c
20
杂烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
2-c
20
杂烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
2-c
20
杂炔基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
环烯基、任选取代的c
4-c
20
杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
环炔基、任选取代的c
8-c
20
杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
芳基或任选取代的c
2-c
15
杂芳基；g1、h1、i1、j1、k1、l1、m1、n1、o1、g2、h2、i2、j2、k2、l2、m2、n2、o2、g3、h3、i3、j3、k3、l3、m3、n3及o3中的每一者独立地为0或1；q为氮原子、任选取代的c
1-c
20
亚烷基、任选取代的c
1-c
20
亚杂烷基、任选取代的c
2-c
20
亚烯基、任选取代的c
2-c
20
亚杂烯基、任选取代的c
2-c
20
亚炔基、任选取代的c
2-c
20
亚杂炔基、任选取代的c
3-c
20
亚环烷基、任选取代的c
2-c
20
亚杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
亚环烯基、任选取代的c
4-c
20
亚杂环烯基、
任选取代的c
8-c
20
亚环炔基、任选取代的c
8-c
20
亚杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
亚芳基或任选取代的c
2-c
15
亚杂芳基。
[0255]
在一些实施方案中，任选取代包括用聚乙二醇(peg)取代。peg具有重复单元结构(-ch2ch2o-)n，其中n为2至100的整数。聚乙二醇可选自peg2至peg
100
中任一者(例如，peg2、peg3、peg4、peg5、peg
5-peg
10
、peg
10-peg
20
、peg
20-peg
30
、peg
30-peg
40
、peg
50-peg
60
、peg
60-peg
70
、peg
70-peg
80
、peg
80-peg
90
、peg
90-peg
100
)。
[0256]
在一些实施方案中，lc可具有两个附接至fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的点(例如，两个g
c2
)。
[0257]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，l包括聚乙二醇(peg)接头。peg接头包括具有重复单元结构(-ch2ch2o-)n的接头，其中n为2至100的整数。聚乙二醇接头可共价接合rsv f蛋白抑制剂及e(例如，在式(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合第一rsv f蛋白抑制剂及第二rsv f蛋白抑制剂(例如，在式(d-i)-(d-iv)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合rsv f蛋白抑制剂二聚体及e(例如，在式(d-i)-(d-iv)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可选自peg2至peg
100
中任一者(例如，peg2、peg3、peg4、peg5、peg
5-peg
10
、peg
10-peg
20
、peg
20-peg
30
、peg
30-peg
40
、peg
50-peg
60
、peg
60-peg
70
、peg
70-peg
80
、peg
80-peg
90
、peg
90-peg
100
)。在一些实施方案中，lc包括peg接头，其中lc共价附接至qi及e中每一者。
[0258]
在一些实施方案中，l为
[0259]
[0260]
[0261]
[0262]
[0263]
[0264]
[0265]
[0266]
[0267][0268]
[0269]
其中z1及z2各自独立地为1至20的整数；且r9选自h、c1-c20烷基、c3-c20环烷基、c2-c20杂环烷基；c5-c15芳基及c2-c15杂芳基。
[0270]
在一些实施方案中，l为
[0271]
[0272]
[0273][0273]
其中r*为键或包括一个或多个任选取代的c
1-c
20
亚烷基、任选取代的c
1-c
20
亚杂烷基、任选取代的c
2-c
20
亚烯基、任选取代的c
2-c
20
亚杂烯基、任选取代的c
2-c
20
亚炔基、任选取代的c
2-c
20
亚杂炔基、任选取代的c
3-c
20
亚环烷基、任选取代的c
2-c
20
亚杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
亚环烯基、任选取代的c
4-c
20
亚杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
亚环炔基、任选取代的c
8-c
20
亚杂环炔基、任选取代的c5-c15亚芳基、任选取代的c
3-c
15
亚杂芳基、o、s、nri、p、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，且其中ri为h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
1-c
20
杂烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
2-c
20
杂烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
2-c
20
杂炔基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
环烯基、任选取代的c
4-c
20
杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
环炔基、任选取代的c
8-c
20
杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
芳基或任选取代的c
3-c
15
杂芳基。
[0274]
在另一方面中，本发明提供一种由式(m-i)描述的缀合物：
[0275][0276]
其中每个e独立地包括fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)、白蛋白(例如，具有seq id no:96-98中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或fc结合肽；n为1或2；t为1至20的整数(例如，t为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)；且l为共价附接至e及a1中每一者的接头，或其药学上可接受的盐。当t大于1(例如，t为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个a1可独立地选自由式(a-i)-(a-iii)中任一者描述的结构。
[0277]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii)描述：
[0278][0279]
或其药学上可接受的盐。
[0280]
在一些实施方案中，缀合物由式(m-ii-1)描述：
[0281][0282]
其中r7及r8各自独立地选自oh、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的c
1-c
20
烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
3-c
20
环烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
5-c
20
芳基、任选取代的c
2-c
15
杂芳基及任选取代的c
1-c
20
烷氧基；
[0283]
或其药学上可接受的盐。
[0284]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-2)描述：
[0285][0286]
或其药学上可接受的盐。
[0287]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-3)描述
[0288][0289]
或其药学上可接受的盐。
[0290]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-4)描述：
[0291][0292]
或其药学上可接受的盐。
[0293]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-5)描述：
[0294][0295]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0296]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-6)描述：
[0297][0298]
或其药学上可接受的盐。
[0299]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-7)描述：
[0300][0301]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0302]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-8)描述：
[0303][0304][0305]
或其药学上可接受的盐。
[0306]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-9)描述：
[0307][0308]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0309]
在一些实施方案中，缀合物由式(m-ii-10)描述：
[0310][0311]
或其药学上可接受的盐。
[0312]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-11)描述：
[0313][0314]
或其药学上可接受的盐。
[0315]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-12)描述：
[0316][0317]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0318]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-13)描述：
[0319][0320]
或其药学上可接受的盐。
[0321]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-14)描述：
[0322][0323][0324]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮
原子。
[0325]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-15)描述：
[0326][0327]
或其药学上可接受的盐。
[0328]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-16)描述：
[0329][0330]
或其药学上可接受的盐。
[0331]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-ii-17)描述：
[0332][0333]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0334]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iii)描述：
[0335][0336]
或其药学上可接受的盐。
[0337]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iii-1)描述：
[0338][0339][0340]
或其药学上可接受的盐。
[0341]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iii-2)描述：
[0342][0343]
或其药学上可接受的盐。
[0344]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iii-3)描述：
[0345][0346]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0347]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv)描述：
[0348][0349]
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，u2是任选取代的c
1-c6烷基(例如，c1、
c2、c3、c4、c5或c6烷基)，
[0350]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-1)描述：
[0351][0352]
或其药学上可接受的盐。
[0353]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-2)描述：
[0354][0355]
或其药学上可接受的盐。
[0356]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-3)描述：
[0357][0358]
或其药学上可接受的盐。
[0359]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-4)描述：
[0360][0361]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮
原子。
[0362]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-5)描述：
[0363][0364]
或其药学上可接受的盐。
[0365]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-6)描述：
[0366][0367]
[0368]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0369]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-7)描述：
[0370][0371]
或其药学上可接受的盐。
[0372]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-8)描述：
[0373][0374]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0375]
在某些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-9)描述：
[0376]
[0377]
或其药学上可接受的盐。
[0378]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-10)描述：
[0379][0380][0381]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0382]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-11)描述：
[0383][0384]
或其药学上可接受的盐。
[0385]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-12)描述：
[0386]
[0387]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0388]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-13)描述：
[0389][0390]
或其药学上可接受的盐。
[0391]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-14)描述：
[0392][0393]
[0394]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0395]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-15)描述：
[0396][0397]
或其药学上可接受的盐。
[0398]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-16)描述：
[0399][0400]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0401]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-17)描述：
[0402][0403]
或其药学上可接受的盐。
[0404]
在一些实施方案中，所述缀合物由式(m-iv-18)描述：
[0405][0406]
其中l’是l的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0407]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，l或l’包括一个或多个任选取代的c
1-c
20
亚烷基、任选取代的c
1-c
20
亚杂烷基、任选取代的c
2-c
20
亚烯基、任选取代的c
2-c
20
亚杂烯基、任选取代的c
2-c
20
亚炔基、任选取代的c
2-c
20
亚杂炔基、任选取代的c
3-c
20
亚环烷基、任选取代的c
2-c
20
亚杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
亚环烯基、任选取代的c
4-c
20
亚杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
亚环炔基、任选取代的c
8-c
20
亚杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
亚芳基、任选取代的c
3-c
15
亚杂芳基、o、s、nri、p、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，其中ri为h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
1-c
20
杂烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
2-c
20
杂烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
2-c
20
杂炔基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
环烯基、任选取代的c
4-c
20
杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
环炔基、任选取代的c
8-c
20
杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
芳基或任选取代的c
3-c
15
杂芳基。
[0408]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，l或l’的骨架由以下组成：一个或多个任选取代的c
1-c
20
亚烷基、任选取代的c
1-c
20
亚杂烷基、任选取代的c
2-c
20
亚烯基、任选取代
的c
2-c
20
亚杂烯基、任选取代的c
2-c
20
亚炔基、任选取代的c
2-c
20
亚杂炔基、任选取代的c
3-c
20
亚环烷基、任选取代的c
2-c
20
亚杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
亚环烯基、任选取代的c
4-c
20
亚杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
亚环炔基、任选取代的c
8-c
20
亚杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
亚芳基、任选取代的c
3-c
15
亚杂芳基、o、s、nri、p、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，其中ri为h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
1-c
20
杂烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
2-c
20
杂烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
2-c
20
杂炔基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
环烯基、任选取代的c
4-c
20
杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
环炔基、任选取代的c
8-c
20
杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
芳基或任选取代的c
3-c
15
杂芳基。
[0409]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，l或l’经氧代取代。在一些实施方案中，l或l’的骨架包括不超过250个原子。在一些实施方案中，l或l’能够形成酰胺、氨基甲酸酯、磺酰基或脲连接。在一些实施方案中，l或l’为键。在一些实施方案中，l或l’为原子。在一些实施方案中，l’为氮原子。
[0410]
在一些实施方案中，每个l由式(m-l-1)描述：
[0411]j1-(q1)
g-(t1)
h-(q2)
i-(t2)
j-(q3)
k-(t3)
l-(q4)
m-(t4)
n-(q5)
o-j2[0412]
其中：j1是附接至a1的键；j2是附接至e的键或能够与缀合于e的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪)；q1、q2、q3、q4及q5中的每一者独立地为任选取代的c
1-c
20
亚烷基、任选取代的c
1-c
20
亚杂烷基、任选取代的c
2-c
20
亚烯基、任选取代的c
2-c
20
亚杂烯基、任选取代的c
2-c
20
亚炔基、任选取代的c
2-c
20
亚杂炔基、任选取代的c
3-c
20
亚环烷基、任选取代的c
2-c
20
亚杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
亚环烯基、任选取代的c
4-c
20
亚杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
亚环炔基、任选取代的c
8-c
20
亚杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
亚芳基或任选取代的c
3-c
15
亚杂芳基；
[0413]
t1、t2、t3、t4中的每一者独立地为o、s、nri、p、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；ri为h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
1-c
20
杂烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
2-c
20
杂烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
2-c
20
杂炔基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
环烯基、任选取代的c
4-c
20
杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
环炔基、任选取代的c
8-c
20
杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
芳基或任选取代的c
3-c
15
杂芳基；且g、h、i、j、k、l、m、n及o中的每一者独立地为0或1；或其药学上可接受的盐。
[0414]
在一些实施方案中，任选取代包括用聚乙二醇(peg)取代。peg具有重复单元结构(-ch2ch2o-)n，其中n为2至100的整数。聚乙二醇可选自peg2至peg
100
中任一者(例如，peg2、peg3、peg4、peg5、peg
5-peg
10
、peg
10-peg
20
、peg
20-peg
30
、peg
30-peg
40
、peg
50-peg
60
、peg
60-peg
70
、peg
70-peg
80
、peg
80-peg
90
、peg
90-peg
100
)。
[0415]
在一些实施方案中，j2可具有两个附接至fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的点(例如，两个j2)。
[0416]
在一些实施方案中，l为
[0417][0418]
其中d为1至20的整数(例如，d为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
[0419]
在一些实施方案中，l为
[0420]
[0421]
[0422][0423]
其中每个y独立地选自(-o-)、(-s-)、(-r
8-)、(-o(c＝o)nr
8-)、(-o(c＝s)nr
8-)、(-o(c＝o)o-)、(-o(c＝o)-)、(-nh(c＝o)o-)、(-nh(c＝o)-)、(-nh(c＝nh)-)、(-nh(c＝o)nr
8-)、(-nh(c＝nh)nr
8-)、(-nh(c＝s)nr
8-)、(-nh(c＝s)-)、(-och2(c＝o)nr
8-)、(-nh(so2)-)、(-nh(so2)nr
8-)、(-or
9-)、(-nr
9-)、(-sr
9-)、(-r9nh(c＝o)-)、(-r9or9c(＝o)nh-)、(-ch2nh(c＝o)-)、(-ch2och2(c＝o)nh-)、(-(c＝nr8)nh-)、(-nh(so2)-)、(-(c＝o)nh-)、(-c(＝o)-)、(-c(nr8)-)或(-r9c(＝o)-)；
[0424]
每个r8独立地选自h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
1-c
20
亚烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基及任选取代的c
2-c
15
杂芳基；
[0425]
每个r9独立地选自任选取代的c
1-c
20
亚烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基及任选取代的c
2-c
15
杂芳基；且
[0426]
d、e、y1及x1中的每一者独立地为1至26的整数(例如，d为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26)。
[0427]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，l包括聚乙二醇(peg)接头。peg接头包括具有重复单元结构(-ch2ch2o-)n的接头，其中n为2至100的整数。聚乙二醇接头可共价接合rsv f蛋白抑制剂及e(例如，在式中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合第一rsv f蛋白抑制剂及第二rsv f蛋白抑制剂(例如，在式中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合rsv f蛋白抑制剂二聚体及e(例如，在式中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可选自peg2至peg
100
中任一者(例如，peg2、peg3、peg4、peg5、peg
5-peg
10
、peg
10-peg
20
、peg
20-peg
30
、peg
30-peg
40
、peg
50-peg
60
、peg
60-peg
70
、peg
70-peg
80
、peg
80-peg
90
、peg
90-peg
100
)。在一些实施方案中，lc包括peg接头，其中lc共价附接至qi及e中每一者。
[0428]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，l共价附接至e的表面暴露赖氨酸的氮原子或l共价附接至e的表面暴露半胱氨酸的硫原子。
[0429]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e为fc结构域单体。在一些实施方案中，n为2且每个e二聚以形成fc结构域。
[0430]
在一些实施方案中，n为2，每个e为fc结构域单体，每个e二聚以形成fc结构域，且所述缀合物由式(d-i-1)描述：
[0431][0432]
其中j为fc结构域；且t为1至20的整数(例如，t为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
[0433]
在一些实施方案中，n为2，每个e为fc结构域单体，每个e二聚以形成fc结构域，且所述缀合物由式(m-i-1)描述：
[0434][0435]
其中j为fc结构域；且t为1至20的整数(例如，t为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
[0436]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e具有seq id no:1-95中任一者的序列。
[0437]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e为白蛋白、白蛋白结合肽或fc结合肽。在其中e为白蛋白、白蛋白结合肽或fc结合肽的一些实施方案中，n为1。
[0438]
在一些实施方案中，n为1，e为白蛋白、白蛋白结合肽或fc结合肽且所述缀合物由式(d-i-2)描述：
[0439][0440]
其中e为白蛋白、白蛋白结合肽或fc结合肽；且t为1至20的整数，或其药学上可接受的盐。
[0441]
在一些实施方案中，n为1，e为白蛋白、白蛋白结合肽或fc结合肽且所述缀合物由式(m-i-2)描述：
[0442][0443]
其中e为白蛋白、白蛋白结合肽或fc结合肽；且t为1至20的整数，或其药学上可接受的盐。
[0444]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e为具有seq id no:96-98中任一者的序列的白蛋白。
[0445]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，t为1、2、3、4或5。
[0446]
在另一方面中，本发明提供一种具有本文所述的缀合物中任一者的结构的缀合物的群体(例如，具有式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的式的缀合物的群体)，其中t的平均值为1至20(例如，t的平均值为1至2、1至3、1至4、1至5、5至10、10至15或15至20)。在一些实施方案中，t的平均值为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
[0447]
在另一方面中，本发明提供一种药物组合物，其包括本文所述的缀合物中任一者(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)或其药学上可接受的盐，及药学上可接受的赋形剂。
[0448]
在另一方面中，本发明提供一种用于治疗具有病毒感染或据推测具有病毒感染的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的缀合物或组合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)中任一者。
[0449]
在另一方面中，本发明提供一种用于预防性治疗有需要的受试者的病毒感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的缀合物或组合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)中任一者。
[0450]
在一些实施方案中，所述病毒感染是由rsv引起。在一些实施方案中，所述病毒感染是rsv a或rsv b。
[0451]
在一些实施方案中，所述受试者是免疫受损的。
[0452]
在一些实施方案中，所述受试者已经诊断患有体液免疫缺陷、t细胞缺陷、中性粒细胞减少症、无脾或补体缺陷。
[0453]
在一些实施方案中，所述受试者正在经免疫抑制性疗法治疗或即将经免疫抑制性疗法治疗。
[0454]
在一些实施方案中，所述受试者已经诊断患有引起免疫抑制的疾病。在一些实施方案中，所述疾病为癌症或获得性免疫缺陷综合征。在一些实施方案中，所述癌症为白血病、淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
[0455]
在一些实施方案中，所述受试者已经受或即将经受造血干细胞移植。
[0456]
在一些实施方案中，所述受试者已经受或即将经受器官移植。
[0457]
在一些实施方案中，所述受试者小于60个月大。在一些实施方案中，所述受试者小于24个月大。在一些实施方案中，其中所述受试者是早产儿。
[0458]
在一些实施方案中，所述缀合物或组合物肌肉内、静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、经表面、肿瘤内、经腹膜、皮下、结膜下、囊内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、经口、经局部、通过吸入、通过注射或通过输注经施用。
[0459]
在一些实施方案中，所述受试者经第二治疗剂治疗。在一些实施方案中，所述第二治疗剂为抗病毒剂。在一些实施方案中，所述第二治疗剂为病毒疫苗。在一些实施方案中，所述病毒疫苗在所述受试者中引起针对rsv(例如，rsv a或rsv b)的免疫反应。
[0460]
在一些实施方案中，在式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者(例如，
式(1)、(2)、(d-i)、(d-ii)、(d-ii-1)、(d-ii-2)、(d-ii-3)、(d-ii-4)、(d-ii-5)、(d-ii-6)、(d-ii-7)、(d-ii-8)、(d-ii-9)、(d-ii-10)、(d-ii-11)、(d-ii-12)、(d-ii-13)、(d-ii-14)、(d-ii-15)、(d-ii-16)、(d-ii-17)、(d-iii)、(d-iii-1)、(d-iii-2)、(d-iii-3)、(d-iv)、(d-iv-1)、(d-iv-2)、(d-iv-3)、(d-iv-4)、(d-iv-5)、(d-iv-6)、(d-iv-7)、(d-iv-8)、(d-iv-9)、(d-iv-10)、(d-iv-11)、(d-iv-12)、(d-iv-13)、(d-iv-14)、(d-iv-15)、(d-iv-16)、(d-iv-17)、(d-iv-18)、(m-i)、(m-ii)、(m-ii-17)、(m-iii)、(m-iii-1)、(m-iii-2)、(m-iii-3)、(m-iv)、(m-iv-1)、(m-iv-2)、(m-iv-3)、(m-iv-4)、(m-iv-5)、(m-iv-6)、(m-iv-7)、(m-iv-8)、(m-iv-9)、(m-iv-10)、(m-iv-11)、(m-iv-12)、(m-iv-13)、(m-iv-14)、(m-iv-15)、(m-iv-16)、(m-iv-17)、(m-iv-18)中任一者)中，含fc结构域组合物可取代fc结构域且含fc结构域-单体组合物可取代fc结构域单体。在本文所述的式中任一者(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者)中，当n为1时，e为含fc结构域-单体组合物。在本文所述的式中任一者(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者)中，当n为2时，e为含fc结构域组合物。
[0461]
在某些实施方案中，所述含fc结构域组合物为抗体或抗体片段。抗体可包括任何形式的免疫球蛋白、重链抗体、轻链抗体、基于lrr的抗体或具有抗体样特性的其他蛋白骨架，以及本领域中已知的任何其他免疫结合部分，包括抗体片段(例如，fab、fab’、fab’2、f(ab’)2、fd、fv、feb、scfv或smip)。不同类别的抗体的亚单元结构及三维组态为本领域中已知的。抗体片段可包括如下结合部分，其包括源于抗体或与抗体具有显著同源性的部分，诸如抗体的抗原决定区。例示性抗体片段包括fab、fab’、fab’2、f(ab’)2、fd、fv、feb、scfv及smip。
[0462]
在特定实施方案中，所述抗体或抗体片段为人、小鼠、骆驼科动物(例如，美洲驼、羊驼或骆驼)、山羊、绵羊、兔、鸡、豚鼠、仓鼠、马或大鼠抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述抗体为igg、iga、igd、ige、igm或内体。在某些实施方案中，所述抗体片段包括scfv、sdab、dab、fab、fab’、fab’2、f(ab’)2、fd、fv、feb或smip。
[0463]
在一些实施方案中，所述含fc结构域组合物(例如，抗体或抗体片段)对一种或多种靶标(例如，抗原，诸如rsv相关抗原)赋予结合特异性。靶向rsv抗体是本领域已知的，例如，如以下中所述：gilman等人sci.immunol.1(6),(2006)，其通过引用以其整体并入本文。
[0464]
在一些实施方案中，由所述含fc结构域组合物(例如，抗体或抗体片段)结合的所述一种或多种靶标(例如，抗原)为病毒(例如，rsv)蛋白，诸如rsv f蛋白。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段识别病毒表面抗原。
[0465]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:1的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0466]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:2的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:2的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0467]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:3的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:3的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0468]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:4的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:4的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0469]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:5的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:5的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0470]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:6的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0471]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:7的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:7的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0472]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:8的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:8的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0473]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:9的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0474]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:10的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0475]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:11的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:11的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0476]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:12的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:12的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0477]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:13的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:13的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0478]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:14的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:14的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0479]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:15的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:15的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0480]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:16的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:16的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0481]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:17的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0482]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:18的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:18的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0483]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:19的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:19的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0484]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:20的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:20的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0485]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:21的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:21的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0486]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:22的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:22的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0487]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:23的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:23的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0488]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:24的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:24的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0489]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:25的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:25的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0490]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:26的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:26的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0491]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:27的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:27的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0492]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:28的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:28的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0493]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:29的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:29的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0494]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:30的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:30的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0495]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:31的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:31的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0496]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:32的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:32的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0497]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:33的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0498]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:34的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0499]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:35的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0500]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:36的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0501]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:37的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0502]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:38的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0503]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:39的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0504]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:40的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0505]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:41的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0506]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:42的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:42的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0507]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:43的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:43的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0508]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:44的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:45的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0509]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:46的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:46的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0510]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:47的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:47的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0511]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:48的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:48的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0512]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:49的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:49的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0513]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:50的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:50的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0514]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:51的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:51的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0515]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:52的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:52的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0516]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:53的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:53的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0517]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:54的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:54的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0518]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:55的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:55的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0519]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:56的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:56的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0520]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:57的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:57的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0521]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:58的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:58的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0522]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:59的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:59的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0523]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:60的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:60的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0524]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:61的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:61的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0525]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:62的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:62的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0526]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:63的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:63的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0527]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:64的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:64的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0528]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:65的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0529]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:66的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:66的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0530]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:67的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:67的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0531]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:68的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:68的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0532]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:69的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:69的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0533]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:70的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:70的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0534]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:71的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:71的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0535]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:72的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:72的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0536]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:73的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:73的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0537]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:74的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:74的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0538]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:75的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:75的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0539]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:76的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:76的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0540]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:77的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:77的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0541]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:78的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:78的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0542]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:79的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:79的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0543]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:80的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:80的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0544]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:81的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:81的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0545]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:82的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:82的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0546]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:83的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:83的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0547]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:84的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:84的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0548]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:85的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0549]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:86的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:86的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0550]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:87的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:87的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0551]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:88的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:88的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0552]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:89的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:89的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0553]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:90的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:90的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0554]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:91的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:91的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0555]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:92的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0556]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:93的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0557]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:94的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:94的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0558]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:95的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:95的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0559]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:96的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:96的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0560]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:97的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:97的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0561]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，e(例如，每个e)包括seq id no:98的氨基酸序列。在一些实施方案中，e包括与seq id no:98的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0562]
在其中e包括fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)包括对应于m252y/s254t/t256e(yte)的三重突变。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定seq id no.的)特定氨基酸残基的氨基酸包括本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，seq id no:1-95中任一者可发生突变以包括yte突变。
[0563]
在其中e包括fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)包括对应于m428l/n434s(ls)的双重突变型。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定seq id no.的)特定氨基酸残基的氨基酸包括本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，seq id no:1-95中任一者可发生突变以包括ls突变。
[0564]
在其中e包括fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)包括对应于n434h的突变型。
[0565]
在其中e包括fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)包括对应于c220s的突变型。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定seq id no.的)特定氨基酸残基的氨基酸包括本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，seq id no:1-95中任一者可发生突变以包括c220s突变。
[0566]
如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定seq id no.的)特定氨基酸残基的氨基酸包括本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，seq id no:1-95中任一者可发生突变以包括n434h突变。
[0567]
在其中e包括fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述fc结构域单体(例如，具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体)是所述fc结构域单体的片段(例如，来自seq id no:1-95的至少25个(例如，20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50个或更多)、至少50个(例如，51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75个或更多)、至少75个(例如，75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100个或更多)连续氨基酸长的片段)。
[0568]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)，e的一个或多个表面暴露赖氨酸残基的一个或多个氮原子
或e中的一个或多个表面暴露半胱氨酸的一个或多个硫原子共价缀合于接头(例如，peg
2-peg
20
接头)。缀合于e的接头可被官能化，以致其可反应以与本文所述的任何a
1-l或任何a
2-l-a1的l形成共价键。在优选实施方案中，e缀合于经叠氮基官能化的接头且a
1-l或任何a
2-l-a1的l经炔基官能化。e的接头-叠氮基及a
1-l或a
2-l-a1的接头-炔缀合(例如，通过点击化学)形成本发明的缀合物，例如由式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者描述的缀合物。在其他实施方案中，e缀合于经炔基官能化的接头且a
1-l或任何a
2-l-a1的l经叠氮基官能化。e的接头-炔及a
1-l或任何a
2-l-a1的接头-叠氮基缀合(例如，通过点击化学)形成本发明的缀合物，例如由式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者描述的缀合物。
[0569]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的波浪线表示a
1-l或a
2-l-a1的l之间的共价键。
[0570]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的波浪线表示e的一个或多个氨基酸侧链(例如，e的一个或多个表面暴露赖氨酸残基的一个或多个氮原子或e中的一个或多个表面暴露半胱氨酸的一个或多个硫原子)已缀合于接头(例如，peg
2-peg
20
接头)，其中所述接头已经反应性部分官能化，以致所述反应性部分与本文所述的任何a
1-l或任何a
2-l-a1的l形成共价键(例如，通过经叠氮基官能化的接头与经炔官能化的接头之间的点击化学，如上文所述)。
[0571]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，每个a1及/或a2具有由(a-i)描述的结构：
[0572][0573]
在优选实施方案中，每个a1及/或a2具有由以下描述的结构：
[0574][0575]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，每个a1及/或a2具有由(a-ii)描述的结构：
[0576][0577]
在优选实施方案中，每个a1及/或a2具有由以下描述的结构：
[0578][0579]
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，每个a1及/或a2具有由(a-iii)描述的结构：
[0580][0581]
在优选实施方案中，每个a1及/或a2具有由以下描述的结构：
[0582][0583]
在一些实施方案中，u2是c
1-c6烷基。
[0584]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物1或其任何区域异构体，且药物:抗体比率(dar)(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、
3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0585]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物2或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0586]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物3或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0587]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物4或其任何区域异构体，且药物:抗体比率(dar)(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0588]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物5或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0589]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物6或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、
1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0590]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物7或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0591]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物8或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0592]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物9或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0593]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物11或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0594]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物11或其任何区域异构体，且dar(例如，t)
是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0595]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物12或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0596]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物13或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0597]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物14或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0598]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物15或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0599]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物16或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0600]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物17或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0601]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物18或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0602]
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物19或其任何区域异构体，且dar(例如，t)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，dar是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
[0603]
在一些实施方案中，本文所述的缀合物的群体具有1与2之间、2与4之间、4与6之间、6与8之间、8与10之间、1与10之间、1与20之间、1与5之间、3与7之间、5与10之间或10与20之间的dar(例如，t)。
[0604]
在一些实施方案中，fc结构域单体包括小于约300个氨基酸残基(例如，小于约300、小于约295、小于约290、小于约285、小于约280、小于约275、小于约270、小于约265、小于约260、小于约255、小于约250、小于约245、小于约240、小于约235、小于约230、小于约225或小于约220个氨基酸残基)。在一些实施方案中，fc结构域单体小于约40kda(例如，小于约
35kda、小于约30kda、小于约25kda)。
[0605]
在一些实施方案中，fc结构域单体包括至少200个氨基酸残基(例如，至少210、至少220、至少230、至少240、至少250、至少260、至少270、至少280、至少290或至少300个氨基酸残基)。在一些实施方案中，fc结构域单体为至少20kda(例如，至少25kda、至少30kda或至少35kda)。
[0606]
在一些实施方案中，fc结构域单体包括200至400个氨基酸残基(例如，200至250、250至300、300至350、350至400、200至300、250至350或300至400个氨基酸残基)。在一些实施方案中，fc结构域单体为20至40kda(例如，20至25kda、25至30kda、35至40kda、20至30kda、25至35kda或30至40kda)。
[0607]
在一些实施方案中，fc结构域单体包括与seq id no:1-95中任一者的序列具有至少90％(例如，至少95％、至少98％)同一性的氨基酸序列或其区域。在一些实施方案中，fc结构域单体包括seq id no:1-95中任一者的氨基酸序列或其区域。
[0608]
在一些实施方案中，fc结构域单体包括seq id no:1-95中任一者的区域，其中所述区域包括位置220、252、254及256。在一些实施方案中，所述区域包括至少40个氨基酸残基、至少50个氨基酸残基、至少60个氨基酸残基、至少70个氨基酸残基、至少80个氨基酸残基、至少90个氨基酸残基、至少100个氨基酸残基、至少110个氨基酸残基、至少120个氨基酸残基、至少130个氨基酸残基、至少140个氨基酸残基、至少150个氨基酸残基、至少160个氨基酸残基、至少170个氨基酸残基、至少180个氨基酸残基、至少190个氨基酸残基或至少200个氨基酸残基。
[0609]
定义
[0610]
为了促进理解本发明，下文定义多个术语。本文所定义的术语具有如本发明相关领域中的一般技术者通常所理解的含义。诸如“一(a)”、“一(an)”及“所述(the)”的术语不旨在仅指单一实体，而包括可用于说明的特定实例所属的一般类别。所述术语在本文中用于描述本发明的特定实施方案，但其使用不会限定本发明，除非如权利要求书中所概述。
[0611]“病毒感染”意指病毒(例如，rsv诸如rsv a或rsv b)在宿主生物体(例如，人受试者)中的致病性生长。病毒感染可为其中病毒群体的存在正在损害宿主身体的任何情形。因此，当受试者的身体中或身体上存在过量病毒群体时，或当病毒群体的存在正在损害所述受试者的细胞或其他组织时，所述受试者“正在经受”病毒感染。
[0612]
如本文所用，术语“fc结构域单体”是指如下多肽链，其包括至少一个铰链结构域及第二及第三抗体恒定结构域(ch2及ch3)或其功能片段(例如，能够(i)与另一fc结构域单体二聚以形成fc结构域，及(ii)结合于fc受体的片段。所述fc结构域单体可为任何免疫球蛋白抗体同种型，包括igg、ige、igm、iga或igd(例如，igg)。另外，所述fc结构域单体可为igg亚型(例如，igg1、igg2a、igg2b、igg3或igg4)(例如，igg1)。fc结构域单体不包括免疫球蛋白中能够充当抗原-识别区的任何部分，例如可变结构域或互补决定区(cdr)。如本文所述的缀合物中的fc结构域单体可含有相对于野生型fc结构域单体序列的一种或多种改变(例如，1-10、1-8、1-6、1-4种氨基酸取代、添加或缺失)，其改变fc结构域与fc受体之间的相互作用。合适改变的实例为本领域中已知的。在某些实施方案中，人fc结构域单体(例如，igg重链，诸如igg1)包括自asn208、glu216、asp221、lys222或cys226中任一者延伸至lys447处的重链羧基端的区。所述fc区的c端lys447可或可不存在，不影响所述fc区的结构
或稳定性。在表达多肽后，c端lys 447可被蛋白水解切割。在本文所述的任何fc结构域单体的一些实施方案中，c端lys 447任选存在或不存在。本公开特别考虑了不包括对应于lys 447的c端lys的seq id no:1-4、11、16、19、20、32-37、48-53及60-68中任一者。(例如，seq id no:60-77中任一者的)fc区的n端n(asn)可或可不存在，不影响所述fc区的结构或稳定性。在表达多肽后，n端asn可脱酰胺。在本文所述的任何fc结构域单体的一些实施方案中，n端asn任选存在或不存在。本公开特别考虑了不包括n端asn的seq id no:60-77中任一者。除非本文中另外规定，否则所述igg或fc结构域单体中氨基酸残基的编号是根据针对抗体的eu编号系统，所述系统也称为kabat eu指数，如例如kabat等人,sequences of proteins of immunological interest,第5版public health service,national institutes of health,bethesda,md,1991中所述。
[0613]
如本文所用，术语“fc结构域”是指两种fc结构域单体的二聚体，其能够结合fc受体。在野生型fc结构域中，两种fc结构域单体通过两个ch3抗体恒定结构域之间的相互作用二聚化，在一些实施方案中，两种二聚化fc结构域单体的铰链结构域之间形成一个或多个二硫键。
[0614]
术语“共价附接”是指缀合物中通过共价键彼此连接的两个部分，所述共价键形成于所述缀合物的所述两个部分中的两个原子之间。
[0615]
如本文所用，术语“fc结合肽”是指是指具有5至50个(例如，5至40个、5至30个、5至20个、5至15个、5至10个、10至50个、10至30个或10至20个)氨基酸残基的氨基酸序列的多肽，其对fc结构域(诸如本文所述的任何fc结构域)具有亲和力且具有结合所述fc结构域的功能。fc结合肽可具有不同起源，例如合成、人、小鼠或大鼠。本发明的fc结合肽包括已被工程改造以包括一个或多个(例如，两个、三个、四个或五个)溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的fc结合肽，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述fc结合肽将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。fc结合肽可仅包括天然存在的氨基酸残基，或可包括一个或多个非天然存在的氨基酸残基。在包括时，非天然存在的氨基酸残基(例如，非天然存在的氨基酸残基的侧链)可用作用于本发明化合物(例如，rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的附接点。本发明的fc结合肽可为线性或环状的。本发明的fc结合肽包括本领域技术人员已知的任何fc结合肽。
[0616]
如此处所用，术语“白蛋白”是指包括对应于天然存在的白蛋白(例如，人血清白蛋白)或其变体(诸如天然存在的白蛋白的经工程改造变体)的氨基酸序列的多肽。白蛋白的变体包括多态性、诸如结构域及子结构域的片段及融合蛋白(例如，具有诸如多肽接头的c端或n端融合的白蛋白)。优选地，白蛋白具有人血清白蛋白(hsa)的氨基酸序列或者其变体或片段，最优选地其功能变体或片段。本发明的白蛋白包括与seq id no:96-98中任一者具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的蛋白质。本发明的白蛋白包括已被工程改造以包括一个或多个(例如，两个、三个、四个或五个)溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的白蛋白，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述白蛋白将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。白蛋白可仅包括天然存在的氨基酸残基，或可包括一个或多个非天然存在的氨基酸残
基。在包括时，非天然存在的氨基酸残基(例如，非天然存在的氨基酸残基的侧链)可用作用于本发明化合物(例如，rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的附接点。
[0617]
如本文所用，术语“白蛋白结合肽”是指具有5至50个(例如，5至40个、5至30个、5至20个、5至15个、5至10个、10至50个、10至30个或10至20个)氨基酸残基的氨基酸序列的多肽，其对白蛋白(诸如本文所述的任何白蛋白)具有亲和力且具有结合所述白蛋白的功能。优选地，白蛋白结合肽结合于天然存在的血清白蛋白，最优选地人血清白蛋白。白蛋白结合肽可具有不同起源，例如合成、人、小鼠或大鼠。本发明的白蛋白结合肽包括已被工程改造以包括一个或多个(例如，两个、三个、四个或五个)溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的白蛋白结合肽，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述白蛋白结合肽将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。白蛋白结合肽可仅包括天然存在的氨基酸残基，或可包括一个或多个非天然存在的氨基酸残基。在包括时，非天然存在的氨基酸残基(例如，非天然存在的氨基酸残基的侧链)可用作用于本发明化合物(例如，rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的附接点。本发明的白蛋白结合肽可为线性或环状的。本发明的白蛋白结合肽包括本领域技术人员已知的任何白蛋白结合肽，其实例提供于本文中。进一步例示性白蛋白结合肽提供于美国专利申请号2005/0287153中，所述申请以引用的方式整体并入本文中。
[0618]
如本文所用，诸如表面暴露半胱氨酸或表面暴露赖氨酸的“表面暴露氨基酸”或“溶剂暴露氨基酸”是指如下氨基酸，其易接近围绕所述蛋白质的溶剂。表面暴露氨基酸可为天然存在的，或所述蛋白质的经工程改造变体(例如，取代或插入)。在一些实施方案中，表面暴露氨基酸是如下氨基酸，其在被取代时未实质上改变所述蛋白质的三维结构。
[0619]
如本文所用，术语“接头”、“l”及“l
’”
是指缀合物中的两种或更多种组分之间(例如，本文所述的缀合物中的两种rsv f蛋白抑制剂之间、本文所述的缀合物中的rsv f蛋白抑制剂与fc结构域或白蛋白之间及本文所述的缀合物中的两种rsv f蛋白抑制剂的二聚体与fc结构域或白蛋白之间)的共价连接。在一些实施方案中，本文所述的缀合物可含有具有三价结构的接头(例如，三价接头)。三价接头具有三个臂，其中每个臂共价连接至所述缀合物的组分(例如，缀合于第一rsv f蛋白抑制剂的第一臂、缀合于第二rsv f蛋白抑制剂的第二臂及缀合于fc结构域或白蛋白的第三臂)。
[0620]
可用作接头的分子包括至少两个官能团，所述官能团可为相同或不同的，例如两个羧酸基、两个氨基、两个磺酸基、羧酸基及马来酰亚胺基、羧酸基及炔基、羧酸基及氨基、羧酸基及磺酸基、氨基及马来酰亚胺基、氨基及炔基或氨基及磺酸基。第一官能团可与所述缀合物中的第一组分形成共价连接且第二官能团可与所述缀合物中的第二组分形成共价连接。在三价接头的一些实施方案中，接头的两个臂可含有两种二羧酸，其中第一羧酸可与所述缀合物中的第一rsv f蛋白抑制剂形成共价连接且第二羧酸可与所述缀合物中的第二rsv f蛋白抑制剂形成共价连接且所述接头的第三臂可与所述缀合物中的fc结构域或白蛋白形成共价连接。二羧酸的实例进一步描述于本文中。在一些实施方案中，含有一个或多个马来酰亚胺基的分子可用作接头，其中所述马来酰亚胺基可与所述缀合物中的组分(例如，fc结构域或白蛋白)的半胱氨酸形成碳-硫连接。在一些实施方案中，含有一个或多个炔基的分子可用作接头，其中所述炔基可与所述缀合物中的组分(例如，fc结构域或白蛋白)的c20
烯基、任选取代的c
2-c
20
杂烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
2-c
20
杂炔基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
4-c
20
环烯基、任选取代的c
4-c
20
杂环烯基、任选取代的c
8-c
20
环炔基、任选取代的c
8-c
20
杂环炔基、任选取代的c
5-c
15
芳基或任选取代的c
3-c
15
杂芳基)、p、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基。
[0623]
如本文所用，术语“烷基”、“烯基”及“炔基”包括直链及分支链单价取代基，以及其组合，当未被取代时仅含有c及h。当烷基包括至少一个碳-碳双键或碳-碳三键时，所述烷基可分别称作“烯基”或“炔基”。烷基、烯基或炔基的单价不包括所述烷基、烯基或炔基上的任选取代基。例如，若烷基、烯基或炔基附接于化合物，则所述烷基、烯基或炔基的单价是指其附接于所述化合物且不包括可存在于所述烷基、烯基或炔基上的任何额外取代基。在一些实施方案中，烷基或杂烷基可含有例如1-20、1-18、1-16、1-14、1-12、1-10、1-8、1-6、1-4或1-2个碳原子(例如，c
1-c
20
、c
1-c
18
、c
1-c
16
、c
1-c
14
、c
1-c
12
、c
1-c
10
、c
1-c8、c
1-c6、c
1-c4或c
1-c2)。在一些实施方案中，烯基、杂烯基、炔基或杂炔基可含有例如2-20、2-18、2-16、2-14、2-12、2-10、2-8、2-6或2-4个碳原子(例如，c
2-c
20
、c
2-c
18
、c
2-c
16
、c
2-c
14
、c
2-c
12
、c
2-c
10
、c
2-c8、c
2-c6或c
2-c4)。实例包括但不限于甲基、乙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、2-丙烯基及3-丁炔基。
[0624]
如本文所用，术语“环烷基”表示单价饱和或不饱和非芳族环状烷基。环烷基可具有例如三个至二十个碳(例如，c
3-c7、c
3-c8、c
3-c9、c
3-c
10
、c
3-c
11
、c
3-c
12
、c
3-c
14
、c
3-c
16
、c
3-c
18
或c
3-c
20
环烷基)。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基及环庚基。当环烷基包括至少一个碳-碳双键时，所述环烷基可称作“环烯基”。环烯基可具有例如四个至二十个碳(例如，c
4-c7、c
4-c8、c
4-c9、c
4-c
10
、c
4-c
11
、c
4-c
12
、c
4-c
14
、c
4-c
16
、c
4-c
18
或c
4-c
20
环烯基)。例示性环烯基包括但不限于环戊烯基、环己烯基及环庚烯基。当环烷基包括至少一个碳-碳三键时，所述环烷基可称作“环炔基”。环炔基可具有例如八个至二十个碳(例如，c
8-c9、c
8-c
10
、c
8-c
11
、c
8-c
12
、c
8-c
14
、c
8-c
16
、c
8-c
18
或c
8-c
20
环炔基)。术语“环烷基”也包括具有桥接多环结构的环状化合物，其中一个或多个碳桥接单环的两个不相邻成员，例如双环[2.2.1.]庚基及金刚烷。术语“环烷基”也包括二环、三环及四环稠环结构，例如十氢化萘及螺环化合物。“杂环烷基”、“杂环烯基”或“杂环炔基”是指具有一个或多个环(例如，1、2、3、4或更多个环)的环烷基、环烯基或环炔基，所述环具有一个或多个独立地选自例如n、o及s的杂原子。例示性杂环烷基包括吡咯烷、噻吩、四氢噻吩、四氢呋喃、哌啶、四氢吡喃、喹啉、异喹啉、噌啉、酞嗪、喹唑啉、喹喔啉、吲哚、苯并噻吩、苯并呋喃、异吲哚、苯并[c]噻吩、异苯并呋喃、苯并咪唑、苯并恶唑、苯并噻唑、1h-吲唑、1,2-苯并异恶唑、1,2-苯并异噻唑、2,1-苯并异噻唑、2,1-苯并异恶唑、嘌呤、吡咯里西啶、茚、芴、咔唑、二苯并呋喃、吖啶、吩嗪及吩恶嗪。
[0625]
如本文所用，术语“芳基”是指就电子分布而言在环系统中具有芳香性特征的任何单环或稠环二环或三环系统，例如苯基、萘基或菲。在一些实施方案中，环系统含有5-15个环成员原子或5-10个环成员原子。芳基可具有例如五个至十五个碳(例如，c
5-c6、c
5-c7、c
5-c8、c
5-c9、c
5-c
10
、c
5-c
11
、c
5-c
12
、c
5-c
13
、c
5-c
14
或c
5-c
15
芳基)。术语“杂芳基”还指代含有一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)选自o、s及n的杂原子的此类单环或稠合双环系统。杂芳基可具有例如二个至十五个环成员原子(例如，c
2-c3、c
2-c4、c
2-c5、c
2-c6、c
2-c7、c
2-c8、c
2-c9、c
2-c
10
、c
2-c
11
、c
2-c
12
、c
2-c
13
、c
2-c
14
或c
3-c
15
杂芳基)。杂原子的包括允许包括将被视为芳族的5-元环以及6-元环。因此，典型杂芳基系统包括例如吡啶基、嘧啶基、吲哚基、苯并咪唑
基、苯并三唑基、异喹啉基、喹啉基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、三唑基(例如，1,2,3-或1,2,4-三唑基)、恶唑基、异恶唑基、苯并恶唑基、苯并异恶唑基及咪唑基。因为互变异构体为可能的，故诸如邻苯二甲酰亚胺基的基团也被视为杂芳基。在一些实施方案中，芳基或杂芳基为任选含有1-2个氮原子的5或6元芳环系统。在一些实施方案中，芳基或杂芳基为任选取代的苯基、吡啶基、吲哚基、嘧啶基、哒嗪基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、吡唑基、咪唑基、异恶唑基、噻唑基或咪唑并吡啶基。在一些实施方案中，芳基为苯基。在一些实施方案中，芳基可任选被诸如芳基取代基(例如，联苯基)的取代基取代。
[0626]
术语“烷芳基”是指连接至亚烷基、亚烯基或亚炔基的芳基。一般而言，若化合物附接于烷芳基，则所述烷芳基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分附接于所述化合物。在一些实施方案中，烷芳基为c
6-c
35
烷芳基(例如，c
6-c
16
、c
6-c
14
、c
6-c
12
、c
6-c
10
、c
6-c9、c
6-c8、c7或c6烷芳基)，其中碳数目指示所述烷芳基的芳基部分及亚烷基、亚烯基或亚炔基部分中的碳的总数。烷芳基的实例包括但不限于(c
1-c8)亚烷基(c
6-c
12
)芳基、(c
2-c8)亚烯基(c
6-c
12
)芳基或(c
2-c8)亚炔基(c
6-c
12
)芳基。在一些实施方案中，烷芳基为苯甲基或苯乙基。在杂烷芳基中，一个或多个选自n、o及s的杂原子可存在于所述烷芳基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分中及/或可存在于所述烷芳基的芳基部分中。在任选取代的烷芳基中，取代基可存在于所述烷芳基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分上及/或可存在于所述烷芳基的芳基部分上。
[0627]
如本文所用，术语“氨基”表示
–
n(r
x
)2或
–n
(r
x
)3，其中r
x
各自独立地为h、烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、环烷基，或两个r
x
组合形成杂环烷基。在一些实施方案中，氨基为-nh2。
[0628]
如本文所用，术语“烷氨基”是指本文所述的氨基，其附接于亚烷基(例如，c1-c5亚烷基)、亚烯基(例如，c2-c5亚烯基)或亚炔基(例如，c2-c5亚烯基)。一般而言，若化合物附接于烷氨基，则所述烷氨基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分附接于所述化合物。烷氨基的氨基部分是指
–
n(r
x
)2或
–n
(r
x
)3，其中r
x
各自独立地为h、烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、环烷基，或两个r
x
组合形成杂环烷基。在一些实施方案中，烷氨基的氨基部分为-nh2。烷氨基的实例为c1-c5烷氨基，例如c2烷氨基(例如，ch2ch2nh2或ch2ch2n(ch3)2)。在杂烷氨基中，一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)选自n、o及s的杂原子可存在于所述杂烷氨基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分中。在一些实施方案中，烷氨基可任选被取代。在取代的烷氨基中，取代基可存在于所述烷氨基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分上及/或可存在于所述烷氨基的氨基部分上。
[0629]
如本文所用，术语“烷酰胺”是指如下酰胺基，其附接至亚烷基(例如，c1-c5亚烷基)、亚烯基(例如，c2-c5亚烯基)或亚炔基(例如，c2-c5亚烯基)。一般而言，若化合物附接于烷酰胺基，则所述烷酰胺的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分附接于所述化合物。烷酰胺的酰胺部分是指
–
c(o)-n(r
x
)2，其中r
x
各自独立地为h、烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、环烷基，或两个r
x
组合形成杂环烷基。在一些实施方案中，烷酰胺的酰胺部分为-c(o)nh2。烷酰胺基可为-(ch2)
2-c(o)nh2或-ch
2-c(o)nh2。在杂烷酰胺基中，一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)选自n、o及s的杂原子可存在于所述杂烷酰胺基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分中。在一些实施方案中，烷酰胺基可任选被取代。在取代的烷酰胺基中，取代基可存在于所述烷酰胺基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分上及/或可存在于所述烷酰胺基的酰胺部分上。
[0630]
如本文所用，术语“亚烷基”、“亚烯基”及“亚炔基”是指具有规定大小的二价基团。
在一些实施方案中，亚烷基可含有例如1-20、1-18、1-16、1-14、1-12、1-10、1-8、1-6、1-4或1-2个碳原子(例如，c1-c20、c1-c18、c1-c16、c1-c14、c1-c12、c1-c10、c1-c8、c1-c6、c1-c4或c1-c2)。在一些实施方案中，亚烯基或亚炔基可含有例如2-20、2-18、2-16、2-14、2-12、2-10、2-8、2-6或2-4个碳原子(例如，c2-c20、c2-c18、c2-c16、c2-c14、c2-c12、c2-c10、c2-c8、c2-c6或c2-c4)。亚烷基、亚烯基及/或亚炔基包括直链及分支链形式，以及其组合。亚烷基、亚烯基或亚炔基的二价不包括所述亚烷基、亚烯基或亚炔基上的任选取代基。例如，两种rsv f蛋白抑制剂可借助于包括亚烷基、亚烯基及/或亚炔基或其组合的接头彼此附接。所述接头中的亚烷基、亚烯基及/或亚炔基中每一者关于亚烷基、亚烯基及/或亚炔基的任一末端上的两个附接被视为二价。例如，若接头包括-(任选取代的亚烷基)-(任选取代的亚烯基)-(任选取代的亚烷基)-，则所述亚烯基关于其与所述接头的末端处的两个亚烷基的附接被视为二价。亚烯基上的任选取代基未包括于所述亚烯基的二价中。亚烷基、亚烯基或亚炔基(例如，接头中的亚烷基、亚烯基或亚炔基)的二价性质是指所述基团的两个末端且不包括可存在于亚烷基、亚烯基或亚炔基中的任选取代基。因为它们是二价的，所以它们可将缀合物的多个(例如，两个)部分(例如第一rsv f蛋白抑制剂及第二rsv f蛋白抑制剂)连接在一起。亚烷基、亚烯基及/或亚炔基可由典型地适用作如本文所陈述的烷基、烯基及炔基的取代基的基团取代。例如，c＝o是由氧代(＝o)取代的c1亚烷基。例如，-hcr-c≡c-可被视为任选取代的亚炔基且被视为二价基团，即使其具有任选取代基r。亚杂烷基、亚杂烯基及/或亚杂炔基是指包括一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)杂原子(例如，n、o及s)的亚烷基、亚烯基及/或亚炔基。例如，聚乙二醇(peg)聚合物或peg聚合物中的peg单元-(ch2)
2-o-被视为含有一个或多个氧原子的亚杂烷基。
[0631]
如本文所用，术语“亚环烷基”是指使化合物的两个部分连接在一起的二价环状基团。例如，亚环烷基内的一个碳可连接于化合物的一部分，而亚环烷基内的另一个碳可连接于化合物的另一部分。亚环烷基可包括饱和或不饱和非芳族环状基团。亚环烷基可在所述亚环烷基的环状部分中具有例如三个至二十个碳(例如，c3-c7、c3-c8、c3-c9、c3-c10、c3-c11、c3-c12、c3-c14、c3-c16、c3-c18或c3-c20亚环烷基)。当亚环烷基包括至少一个碳-碳双键时，所述亚环烷基可称作“亚环烯基”。亚环烯基可在所述亚环烯基的环状部分中具有例如四个至二十个碳(例如，c4-c7、c4-c8、c4-c9、c4-c10、c4-c11、c4-c12、c4-c14、c4-c16、c4-c18或c4-c20亚环烯基)。当亚环烷基包括至少一个碳-碳三键时，所述亚环烷基可称作“亚环炔基”。亚环炔基可在所述亚环炔基的环状部分中具有例如四个至二十个碳(例如，c4-c7、c4-c8、c4-c9、c4-c10、c4-c11、c4-c12、c4-c14、c4-c16、c4-c18或c8-c20亚环炔基)。亚环烷基可由典型地适用作如本文所陈述的烷基、烯基及炔基的取代基的基团取代。亚杂环烷基是指包括一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)杂原子(例如，n、o及s)的亚环烷基。亚环烷基的实例包括但不限于亚环丙基及亚环丁基。四氢呋喃可被视为亚杂环烷基。
[0632]
如本文所用，术语“亚芳基”是指使化合物的多个(例如，两个或三个)部分连接在一起的多价(例如，二价或三价)芳基。例如，亚芳基内的一个碳可连接至所述化合物的一部分，而所述亚芳基内的另一碳可连接至所述化合物的另一部分。亚芳基可在所述亚芳基的芳基部分中具有例如五个至十五个碳(例如，c5-c6、c5-c7、c5-c8、c5-c9、c5-c10、c5-c11、c5-c12、c5-c13、c5-c14或c5-c15亚芳基)。亚芳基可由典型地适用作如本文所陈述的烷基、烯基及炔基的取代基的基团取代。亚杂芳基是指包括一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4
个)杂原子(例如，n、o和s)的芳族基团。亚杂芳基可具有例如两个至十五个碳(例如，c2-c3、c2-c4、c2-c5、c2-c6、c2-c7、c2-c8、c2-c9、c2-c10、c2-c11、c2-c12、c2-c13、c2-c14或c2-c15亚杂芳基)。
[0633]
如本文所用，术语“任选取代”是指具有0、1或多个取代基，诸如0-25、0-20、0-10或0-5个取代基。取代基包括但不限于烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、酰基、杂芳基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂烷芳基、卤素、氧代、氰基、硝基、氨基、烷氨基、羟基、烷氧基、烷酰基、羰基、氨甲酰基、胍基(guanidinyl)、脲基、脒基(amidinyl)、上述基团或部分中任一者及上述基团或部分中任一者的杂形式。取代基包括但不限于f、cl、甲基、苯基、苯甲基、or、nr2、sr、sor、so2r、ocor、nrcor、nrconr2、nrcoor、oconr2、rco、coor、烷基-oocr、so3r、conr2、so2nr2、nrso2nr2、cn、cf3、ocf3、sir3及no2，其中r各自独立地为h、烷基、烯基、芳基、杂烷基、杂烯基或杂芳基，且其中同一或相邻原子上的两个任选取代基可接合以形成含有3
–
8个成员的稠合、任选取代的芳族或非芳族、饱和或不饱和环，或同一原子上的两个任选取代基可接合以形成含有3
–
8个成员的任选取代的芳族或非芳族、饱和或不饱和环。
[0634]
任选取代的基团或部分是指其中一个原子(例如，氢原子)任选被另一取代基置换的基团或部分(例如，上述基团或部分中任一者)。例如，任选取代的烷基可为任选取代的甲基，其中所述甲基的氢原子由例如oh置换。作为另一实例，杂烷基或其二价对应物亚杂烷基上的取代基可置换碳上的氢或诸如n的杂原子上的氢。例如，基团-r-nh-r-中的氢原子可被烷酰胺取代基取代，例如-r-n[(ch2c(o)n(ch3)2]-r。
[0635]
一般而言，任选取代基为非干扰取代基。“非干扰取代基”是指如下取代基，其保留本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)结合于rsv f蛋白或者抑制rsv的增殖的能力。因此，在一些实施方案中，所述取代基可改变所述活性的程度。然而，只要所述缀合物保留结合于rsv f蛋白或者抑制rsv增殖的能力，所述取代基就将归类为“非干扰”。例如，非干扰取代基将保留所述化合物基于病毒斑块减少测定中10μm或更低的ic50值提供抗病毒功效的能力。因此，基于斑块减少或rsv f蛋白抑制，所述取代基可改变抑制的程度。然而，只要本文的化合物诸如式(ai)、(a-ii)及(a-iii)化合物保留抑制rsv f蛋白的能力，所述取代基就将归类为“非干扰”。用于测定病毒斑块减少或任何化合物抑制rsv f蛋白的能力的多种分析在本领域中可获得且一些例示于下文实例中。
[0636]
术语“杂”在用于描述化学基团或部分时是指具有至少一个非碳或氢的杂原子，例如n、o及s。若上述基团或部分中任一者含有至少一个杂原子，则其可称为杂。例如，杂环烷基、杂环烯基或杂环炔基是指具有一个或多个独立地选自例如n、o及s的杂原子的环烷基、环烯基或环炔基。杂环烯基的实例为马来酰亚胺基。例如，杂芳基是指具有一个或多个独立地选自例如n、o及s的杂原子的芳族基团。一个或多个杂原子也可包括于置换如本文所述的基团或部分中的氢原子的取代基中。例如，在任选取代的杂芳基中，若所述杂芳基中的一个氢原子被取代基(例如，甲基)置换，则所述取代基也可含有一个或多个杂原子(例如，甲醇)。
[0637]
如本文所用，术语“酰基”是指具有以下结构的基团：其中rz为任选取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、烷芳基、烷氨基、杂烷基、杂烯基、杂炔
基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、杂芳基、杂烷芳基或杂烷氨基。
[0638]
如本文所用，术语“卤基”或“卤素”是指任何卤素原子，例如f、cl、br或i。若本文所述的基团或部分中任一者含有至少一个卤素原子，则其可称为“卤基部分”，诸如卤烷基。
[0639]
如本文所用，术语“羟基”表示-oh基团。
[0640]
如本文所用，术语“氧代”是指具有结构＝o的取代基，其中在原子与氧原子之间存在双键。
[0641]
如本文所用，术语“羰基”是指具有以下结构的基团：
[0642]
如本文所用，术语“硫羰基”是指具有以下结构的基团：
[0643]
如本文所用，术语“磷酸酯基”表示具有以下结构的基团：
[0644]
如本文所用，术语“磷酰基”表示具有以下结构的基团：结构的基团：
[0645]
如本文所用，术语“磺酰基”表示具有以下结构的基团：
[0646]
如本文所用，术语“亚氨基”表示具有以下结构的基团：其中r为任选取代基。
[0647]
如本文所用，术语“n-保护基”表示在合成程序期间旨在保护氨基以抵御非所需反应的那些基团。通常使用的n-保护基公开于greene,“protective groups in organic synthesis,”第5版(john wiley&sons,new york,2014)中，其以引用的方式并入本文中。n-保护基包括例如酰基、芳酰基及氨甲酰基，诸如甲酰基、乙酰基、丙酰基、特戊酰基、叔丁基乙酰基、2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、邻苯二甲酰基、邻硝基苯氧基乙酰基、α-氯丁酰基、苯甲酰基、羧基苯甲基(cbz)、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基，及手性助剂，诸如经保护或未经保护d、l或d,l-氨基酸残基，诸如丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸；含磺酰基的基团，诸如苯磺酰基及对甲苯磺酰基；氨基甲酸酯形成基团，诸如苯甲氧基羰基、对-氯苯甲氧基羰基、对-甲氧基苯甲氧基羰基、对硝基苯甲氧基羰基、2-硝基苯甲氧基羰基、对-溴苯甲氧基羰基、3,4-二甲氧基苯甲氧基羰基、3,5-二甲氧基苯甲氧基羰基、2,4-二甲氧基苯甲氧基羰基、4-甲氧基苯甲氧基羰基、2-硝基-4,5-二甲氧基苯甲氧基羰基、3,4,5-三甲氧基苯甲氧基羰基、1-(对-联苯基)-1-甲基乙氧基羰基、α,α-二甲基-3,5-二甲氧基苯甲氧基羰基、二苯甲基氧基羰基、叔丁基氧基羰基(boc)、二异丙基甲氧基羰基、异丙氧基羰基、乙氧基羰基、甲氧基羰基、烯丙氧基羰基、2,2,2,-三氯乙氧基羰基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、芴基-9-甲氧基羰基(fmoc)、环戊基氧基羰基、金刚烷基氧基羰基、环己基氧基羰基及苯基硫羰基；烷芳基，诸如苯甲基、三苯基甲基及苯甲氧基甲基；及甲硅烷基，诸如三甲基甲硅烷基。
[0648]
如本文所用，术语“氨基酸”意指天然存在的氨基酸及非天然存在的氨基酸。
[0649]
如本文所用，术语“天然存在的氨基酸”意指包括ala、arg、asn、asp、cys、gln、glu、gly、his、ile、leu、lys、met、phe、pro、ser、thr、trp、tyr及val的氨基酸。
[0650]
如本文所用，术语“非天然存在的氨基酸”意指非天然产生或发现于哺乳动物中的α氨基酸。非天然存在的氨基酸的实例包括d-氨基酸；具有附接于半胱氨酸的硫原子的乙酰基氨基甲基的氨基酸；聚乙二醇化氨基酸；式nh2(ch2)ncooh的ω氨基酸，其中n为2-6，中性非极性氨基酸，诸如肌氨酸、叔丁基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、n-甲基异亮氨酸及正亮氨酸；氧基蛋氨酸；苯基甘氨酸；瓜氨酸；蛋氨酸亚砜；磺基丙氨酸；鸟氨酸；二氨基丁酸；3-氨基丙氨酸；3-羟基-d-脯氨酸；2,4-二氨基丁酸；2-氨基戊酸；2-氨基辛酸、2-羧基哌嗪；哌嗪-2-甲酸、2-氨基-4苯基丁酸；3-(2-萘基)丙氨酸，及羟基脯氨酸。其他氨基酸为α-氨基丁酸、α-氨基-α-甲基丁酸盐、氨基环丙烷-羧酸酯、氨基异丁酸、氨基降冰片基-羧酸盐、l-环己基丙氨酸、环戊基丙氨酸、l-n-甲基亮氨酸、l-n-甲基蛋氨酸、l-n-甲基正缬氨酸、l-n-甲基苯基丙氨酸、l-n-甲基脯氨酸、l-n-甲基丝氨酸、l-n-甲基色氨酸、d-鸟氨酸、l-n-甲基乙基甘氨酸、l-正亮氨酸、α-甲基-氨基异丁酸盐、α-甲基环己基丙氨酸、d-α-甲基丙氨酸、d-α-甲基精氨酸、d-α-甲基天冬酰胺、d-α-甲基天冬氨酸盐、d-α-甲基半胱氨酸、d-α-甲基谷氨酰胺、d-α-甲基组氨酸、d-α-甲基异亮氨酸、d-α-甲基亮氨酸、d-α-甲基赖氨酸、d-α-甲基蛋氨酸、d-α-甲基鸟氨酸、d-α-甲基苯丙氨酸、d-α-甲基脯氨酸、d-α-甲基丝氨酸、d-n-甲基丝氨酸、d-α-甲基苏氨酸、d-α-甲基色氨酸、d-α-甲基酪氨酸、d-α-甲基缬氨酸、d-n-甲基丙氨酸、d-n-甲基精氨酸、d-n-甲基天冬酰胺、d-n-甲基天冬氨酸盐、d-n-甲基半胱氨酸、d-n-甲基谷氨酰胺、d-n-甲基谷氨酸盐、d-n-甲基组氨酸、d-n-甲基异亮氨酸、d-n-甲基亮氨酸、d-n-甲基赖氨酸、n-甲基环己基丙氨酸、d-n-甲基鸟氨酸、n-甲基甘氨酸、n-甲基氨基异丁酸盐、n-(1-甲基丙基)甘氨酸、n-(2-甲基丙基)甘氨酸、d-n-甲基色氨酸、d-n-甲基酪氨酸、d-n-甲基缬氨酸、γ-氨基丁酸、l-叔丁基甘氨酸、l-乙基甘氨酸、l-高苯丙氨酸、l-α-甲基精氨酸、l-α-甲基天冬氨酸盐、l-α-甲基半胱氨酸、l-α-甲基谷氨酰胺、l-α-甲基组氨酸、l-α-甲基异亮氨酸、l-α-甲基亮氨酸、l-α-甲基蛋氨酸、l-α-甲基正缬氨酸、l-α-甲基苯丙氨酸、l-α-甲基丝氨酸、l-α-甲基色氨酸、l-α-甲基缬氨酸、n-(n-(2,2-二苯基乙基)氨甲酰基甲基甘氨酸、1-羧基-1-(2,2-二苯基-乙基氨基)环丙烷、4-羟基脯氨酸、鸟氨酸、2-氨基苯甲酰基(邻氨基苯甲酰基)、d-环己基丙氨酸、4-苯基-苯丙氨酸、l-瓜氨酸、α-环己基甘氨酸、l-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸、l-噻唑烷-4-甲酸、l-高酪氨酸、l-2-呋喃基丙氨酸、l-组氨酸(3-甲基)、n-(3-胍基丙基)甘氨酸、o-甲基-l-酪氨酸、o-聚糖-丝氨酸、间-酪氨酸、正-酪氨酸、l-n,n
′
,n
″‑
三甲基赖氨酸、高赖氨酸、正赖氨酸、n-聚糖天冬酰胺、7-羟基-1,2,3,4-四氢-4-氟苯丙氨酸、4-甲基苯丙氨酸、双-(2-吡啶甲基)胺、五氟苯丙氨酸、吲哚啉-2-甲酸、2-氨基苯甲酸、3-氨基-2-萘甲酸、不对称二甲基精氨酸、l-四氢异喹啉-1-甲酸、d-四氢异喹啉-1-甲酸、1-氨基-环己烷乙酸、d/l-烯丙基甘氨酸、4-氨基苯甲酸、1-氨基-环丁烷甲酸、2或3或4-氨基环己烷甲酸、1-氨基-1-环戊烷甲酸、1-氨基茚满-1-甲酸、4-氨基-吡咯烷-2-甲酸、2-氨基萘满-2-甲酸、氮杂环丁烷-3-甲酸、4-苯甲基-吡咯烷-2-甲酸、叔丁基甘氨酸、b-(苯并噻唑基-2-基)-丙氨酸、b-环丙基丙氨酸、5,5-二甲基-1,3-噻唑烷-4-甲酸、(2r,4s)4-羟基哌啶-2-甲酸、(2s,4s)及(2s,4r)-4-(2-萘基甲氧基)-吡咯烷-2-甲酸、(2s,4s)及(2s,4r)4-苯氧基-吡咯烷-2-甲酸、(2r,5s)及(2s,5r)-5-苯基-吡咯烷-2-甲酸、(2s,
4s)-4-氨基-1-苯甲酰基-吡咯烷-2-甲酸、叔丁基丙氨酸、(2s,5r)-5-苯基-吡咯烷-2-甲酸、1-氨基甲基-环己烷-乙酸、3,5-双-(2-氨基)乙氧基-苯甲酸、3,5-二氨基-苯甲酸、2-甲基氨基-苯甲酸、n-甲基邻氨基苯甲酸、l-n-甲基丙氨酸、l-n-甲基精氨酸、l-n-甲基天冬酰胺、l-n-甲基天冬氨酸、l-n-甲基半胱氨酸、l-n-甲基谷氨酰胺、l-n-甲基谷氨酸、l-n-甲基组氨酸、l-n-甲基异亮氨酸、l-n-甲基赖氨酸、l-n-甲基正亮氨酸、l-n-甲基鸟氨酸、l-n-甲基苏氨酸、l-n-甲基酪氨酸、l-n-甲基缬氨酸、l-n-甲基-叔丁基甘氨酸、l-正缬氨酸、α-甲基-γ-氨基丁酸盐、4,4
′‑
二苯基丙氨酸、α-甲基环戊基丙氨酸、α-甲基-α-萘基丙氨酸、α-甲基青霉胺、n-(4-氨基丁基)甘氨酸、n-(2-氨基乙基)甘氨酸、n-(3-氨基丙基)甘氨酸、n-氨基-α-甲基丁酸盐、α-萘基丙氨酸、n-苯甲基甘氨酸、n-(2-氨甲酰基乙基)甘氨酸、n-(氨甲酰基甲基)甘氨酸、n-(2-羧基乙基)甘氨酸、n-(羧基甲基)甘氨酸、n-环丁基甘氨酸、n-环癸基甘氨酸、n-环庚基甘氨酸、n-环己基甘氨酸、n-环癸基甘氨酸、n-环十二烷基甘氨酸、n-环辛基甘氨酸、n-环丙基甘氨酸、n-环十一烷基甘氨酸、n-(2,2-二苯基乙基)甘氨酸、n-(3,3-二苯基丙基)甘氨酸、n-(3-胍基丙基)甘氨酸、n-(1-羟基乙基)甘氨酸、n-(羟基乙基))甘氨酸、n-(咪唑基乙基))甘氨酸、n-(3-吲哚基乙基)甘氨酸、n-甲基-γ-氨基丁酸盐、d-n-甲基蛋氨酸、n-甲基环戊基丙氨酸、d-n-甲基苯丙氨酸、d-n-甲基脯氨酸、d-n-甲基苏氨酸、n-(1-甲基乙基)甘氨酸、n-甲基-萘基丙氨酸、n-甲基青霉胺、n-(p-羟基苯基)甘氨酸、n-(硫甲基)甘氨酸、青霉胺、l-α-甲基丙氨酸、l-α-甲基天冬酰胺、l-α-甲基-叔丁基甘氨酸、l-甲基乙基甘氨酸、l-α-甲基谷氨酸盐、l-α-甲基高苯丙氨酸、n-(2-甲基硫乙基)甘氨酸、l-α-甲基赖氨酸、l-α-甲基正亮氨酸、l-α-甲基鸟氨酸、l-α-甲基脯氨酸、l-α-甲基苏氨酸、l-α-甲基酪氨酸、l-n-甲基-高苯丙氨酸、n-(n-(3,3-二苯基丙基)氨甲酰基甲基甘氨酸、l-焦谷氨酸、d-焦谷氨酸、o-甲基-l-丝氨酸、o-甲基-l-高丝氨酸、5-羟基赖氨酸、α-羧基谷氨酸盐、苯基甘氨酸、l-哌可酸(高脯氨酸)、l-高亮氨酸、l-赖氨酸(二甲基)、l-2-萘基丙氨酸、l-二甲基多巴或l-二甲氧基-苯丙氨酸、l-3-吡啶基丙氨酸、l-组氨酸(苯甲酰基氧基甲基)、n-环庚基甘氨酸、l-二苯丙氨酸、o-甲基-l-高酪氨酸、l-β-高赖氨酸、o-聚糖-苏氨酸、邻-酪氨酸、l-n,n
′‑
二甲基赖氨酸、l-高精氨酸、新色氨酸、3-苯并噻吩基丙氨酸、异喹啉-3-甲酸、二氨基丙酸、高半胱氨酸、3,4-二甲氧基苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、l-1,2,3,4-四氢去甲哈尔满-3-甲酸、金刚烷基丙氨酸、对称二甲基精氨酸、3-羧基硫代吗啉、d-1,2,3,4-四氢去甲哈尔满-3-甲酸、3-氨基苯甲酸、3-氨基-1-羧基甲基-吡啶-2-酮、1-氨基-1-环己烷甲酸、2-氨基环戊烷甲酸、1-氨基-1-环丙烷甲酸、2-氨基茚满-2-甲酸、4-氨基-四氢噻喃-4-甲酸、氮杂环丁烷-2-甲酸、b-(苯并噻唑-2-基)-丙氨酸、新戊基甘氨酸、2-羧基甲基哌啶、b-环丁基丙氨酸、烯丙基甘氨酸、二氨基丙酸、高-环己基丙氨酸、(2s,4r)-4-羟基哌啶-2-甲酸、八氢吲哚-2-甲酸、(2s,4r)及(2s,4r)-4-(2-萘基)、吡咯烷-2-甲酸、哌啶甲酸、(2s,4r)及(2s,4s)-4-(4-苯基苯甲基)吡咯烷-2-甲酸、(3s)-1-吡咯烷-3-甲酸、(2s,4s)-4-三苯甲基巯基-吡咯烷-2-甲酸、(2s,4s)-4-巯基脯氨酸、叔丁基甘氨酸、n,n-双(3-氨基丙基)甘氨酸、1-氨基-环己烷-1-甲酸、n-巯基乙基甘氨酸及硒代半胱氨酸。在一些实施方案中，氨基酸残基可为带电的或极性的。带电氨基酸包括丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸或谷氨酸，或其非天然存在的类似物。极性氨基酸包括谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、蛋氨酸或色氨酸，或其非天然存在的类似物。具体而言，预期在一些实施方案中，氨基酸中的末端氨基可为酰胺基或氨基甲酸酯基。
[0651]
如本文所用，术语“百分比(％)同一性”是指候选序列(例如，fc-igg或其片段)中的氨基酸残基的百分率，所述氨基酸残基在比对所述序列且必要时引入间隙以实现最大百分比同一性之后与参考序列的氨基酸残基相同(即，可在所述候选及参考序列中的一或两者中引入间隙以进行最佳比对且出于比较目的可忽略非同源序列)。用于达成测定百分比同一性的目的的比对可以在所属领域的技能内的多种方式实现，例如使用公开可得的计算机软件，诸如blast、align或megalign(dnastar)软件。本领域技术人员可确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较的序列的全长内实现最大比对所需的任何算法。在一些实施方案中，既定候选序列相对、与或针对既定参考序列的百分比氨基酸序列同一性(其或者可表述为具有或包括相对、与或针对既定参考序列的某一百分比氨基酸序列同一性的既定候选序列)计算如下：
[0652]
100
×
(a/b的分数)
[0653]
其中a是在候选序列与参考序列的比对中经评分为相同的氨基酸残基的数目，且其中b是参考序列中的氨基酸残基的总数。在其中候选序列的长度不等于参考序列的长度的一些实施方案中，候选序列与参考序列的百分比氨基酸序列同一性将不等于参考序列与候选序列的百分比氨基酸序列同一性。
[0654]
当如上文所述针对最大对应进行比对时，若两个聚核苷酸或多肽序列中的核苷酸或氨基酸的序列相同，则所述两个序列被称为“相同”。两个序列之间的比较典型地通过在比较窗中比较所述序列来执行以鉴别且比较具有序列相似性的局部区。如本文所用，“比较窗”是指至少约15个邻近位置、约20个邻近位置、约25个邻近位置或更多(例如，约30个至约75个邻近位置或约40个至约50个邻近位置)的区段，其中在序列及相同数目的邻近位置的参考序列经最佳比对之后，所述两个序列可进行比较。
[0655]
如本文所用，术语“治疗(treating)”或“以治疗(to treat)”是指受试者的病毒感染(例如病毒感染，诸如rsv感染)的治疗性治疗。在一些实施方案中，治疗性治疗可减慢病毒感染的进展、改良受试者的结果及/或消除所述感染。在一些实施方案中，受试者的病毒感染的治疗性治疗可缓解或改善与所述病毒感染相关的一种或多种症状或病状，削弱病毒程度，稳定(即，不恶化)病毒感染的状态，预防病毒感染的扩散，及/或延迟或减慢病毒感染的进展，如与所述治疗性治疗不存在下所述病毒感染的状态及/或病状相比。
[0656]
如本文所用，术语“t的平均值”是指缀合物群体内缀合于fc结构域或白蛋白的rsv f蛋白抑制剂单体或rsv f蛋白抑制剂二聚体的平均数。在一些实施方案中，在缀合物群体内，缀合于fc结构域单体的rsv f蛋白抑制剂单体或rsv f蛋白抑制剂二聚体的平均数可为1至20(例如，t的平均值为1至2、1至3、1至4、1至5、5至10、10至15或15至20)。在一些实施方案中，t的平均值为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
[0657]
如本文所用，术语“受试者”可为人或非人灵长类动物。
[0658]
如本文所用，术语“治疗有效量”是指有效诱导受试者的所需效应或治疗具有本文所述的病状或病症(例如病毒感染，诸如rsv感染)的受试者的量，例如药物剂量。本文中也应了解，“治疗有效量”可解释为给出所需治疗及/或预防效应的量，以一个或多个剂量或以任何剂量或途径服用，及/或单独或与其他治疗剂(例如，本文素数的抗病毒剂)组合服用。例如，在施用用于治疗病毒感染的本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)的情况下，缀合物的治疗有效量为例如如下量，如与不施
用所述缀合物时获得的反应相比，所述量足以预防、减慢或逆转病毒感染的进展。
[0659]
如本文所用，术语“药物组合物”是指含有至少一种活性成分(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)以及一种或多种赋形剂及稀释剂以使所述活性成分能够适用于施用方法的药用或药物调配物。本公开的药物组合物包括可与本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)相容的药学上可接受的组分。
[0660]
如本文所用，术语“药学上可接受的载剂”是指药物组合物中的赋形剂或稀释剂。例如，药学上可接受的载剂可为能够悬浮或溶解活性缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)的媒介物。药学上可接受的载剂必须可与所述调配物的其他成分相容且对接受者无害。在本公开中，药学上可接受的载剂必须对本文所述的缀合物提供足够的药物稳定性。载剂的性质随施用方式变化。例如，关于经口施用，固体载剂为优选的；关于静脉内施用，一般使用水溶液载剂(例如，wfi及/或缓冲溶液)。
[0661]
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”表示本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)的盐，其在合理医学判断的范围内适用于本文所述的方法而无不当毒性、刺激性及/或过敏性反应。药学上可接受的盐为本领域中熟知的。例如，药学上可接受的盐描述于以下中：pharmaceutical salts:properties,selection,and use(编辑p.h.stahl及c.g.wermuth),wiley-vch,2008中。所述盐可在本文所述的缀合物的最终分离及纯化期间当场制备，或通过使游离碱基与合适有机酸反应而单独制备。
[0662]
如本文所用，术语“约”指示
±
5％的偏差。例如，约10％是指9.5％至10.5％。
[0663]
以值的范围提供的任何值均包括上限及下限，及含于所述上限及下限内的任何值。
[0664]
本文所述的缀合物的其他特征及优势将由具体实施方式及权利要求书显而易见。
[0665]
如本文所用，术语“(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)”表示(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的式(例如，式(1)、(2)、(d-i)、(d-ii)、(d-ii-1)、(d-ii-2)、(d-ii-3)、(d-ii-4)、(d-ii-5)、(d-ii-6)、(d-ii-7)、(d-ii-8)、(d-ii-9)、(d-ii-10)、(d-ii-11)、(d-ii-12)、(d-ii-13)、(d-ii-14)、(d-ii-15)、(d-ii-16)、(d-ii-17)、(d-iii)、(d-iii-1)、(d-iii-2)、(d-iii-3)、(d-iv)、(d-iv-1)、(d-iv-2)、(d-iv-3)、(d-iv-4)、(d-iv-5)、(d-iv-6)、(d-iv-7)、(d-iv-8)、(d-iv-9)、(d-iv-10)、(d-iv-11)、(d-iv-12)、(d-iv-13)、(d-iv-14)、(d-iv-15)、(d-iv-16)、(d-iv-17)、(d-iv-18)、(m-i)、(m-ii)、(m-ii-17)、(m-iii)、(m-iii-1)、(m-iii-2)、(m-iii-3)、(m-iv)、(m-iv-1)、(m-iv-2)、(m-iv-3)、(m-iv-4)、(m-iv-5)、(m-iv-6)、(m-iv-7)、(m-iv-8)、(m-iv-9)、(m-iv-10)、(m-iv-11)、(m-iv-12)、(m-iv-13)、(m-iv-14)、(m-iv-15)、(m-iv-16)、(m-iv-17)、(m-iv-18)中任一者)。
附图说明
[0666]
图1是描绘例如借助于接头使rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体缀合于fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的例示性方法的图像。
[0667]
图2是描绘例如借助于接头使rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体缀合于fc结构域单
体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽，通过肟缀合于氨基酸残基(例如，表面暴露赖氨酸的氮原子)的方法的图像。
[0668]
图3是描绘例如借助于接头使rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体缀合于fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽，通过硫醚缀合于氨基酸残基(例如，表面暴露赖氨酸的氮原子)的方法的图像。
[0669]
图4是描绘例如借助于接头使rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体缀合于fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽，通过再桥接半胱氨酸缀合，例如再桥接半胱氨酸缀合于fc结构域单体或fc结构域中的两个铰链半胱氨酸的一对硫原子的方法的图像。
[0670]
图5显示由具有seq id no:1的序列的fc结构域单体形成的fc结构域的非还原及还原sds-page及示意图。
[0671]
图6显示由具有seq id no:3的序列的fc结构域单体形成的fc结构域的非还原及还原sds-page及示意图。
[0672]
图7显示由具有seq id no:5的序列的fc结构域单体形成的fc结构域的非还原及还原sds-page及示意图。
[0673]
图8显示由具有seq id no:7的序列的fc结构域单体形成的fc结构域的非还原及还原sds-page及示意图。
[0674]
图9显示由具有seq id no:9的序列的fc结构域单体形成的fc结构域的非还原及还原sds-page及示意图。
[0675]
图10显示由具有seq id no:12的序列的fc结构域单体形成的fc结构域的非还原及还原sds-page及示意图。
[0676]
图11显示由具有seq id no:14的序列的fc结构域单体形成的fc结构域的非还原及还原sds-page及示意图。
[0677]
图12是显示缀合物6与rsv f蛋白的结合与未缀合的fc分子阴性对照的结合相比的图表。
[0678]
图13是显示在由fc捕获测定的非人灵长类动物pk研究中的包括具有c220s突变的fc结构域的缀合物(seq id no:64)(2mpk iv)的血浆水平与包括具有c220s突变及yte三重突变的fc结构域的缀合物(seq id no:67)(2mpk iv)相比的图表。此研究如实施例56所述来执行。
[0679]
图14是显示在小鼠中的包括具有c220s突变的fc结构域的缀合物(seq id no:64)的血浆浓度水平与缀合物的上皮衬液(elf)水平相比的图表。此研究如实施例57所述来执行。
[0680]
图15是描绘rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体及fc结构域单体或fc结构域的例示性缀合物的图像。“t”代表药物:抗体比率(dar)，且描绘了多个单体或二聚体可缀合于每个fc结构域单体或fc结构域。
[0681]
图16是描绘rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体及fc结构域单体或fc结构域的例示性缀合物的图像。“t”代表药物:抗体比率(dar)，且描绘了多个单体或二聚体可缀合于每个fc结构域单体或fc结构域。
iii)的第二rsv f蛋白抑制剂)。所述第一及第二rsv f蛋白抑制剂借助于接头彼此连接。
[0691]
不受理论的束缚，在一些方面中，本文所述的缀合物通过缀合物中的rsv f蛋白抑制剂部分与病毒粒子的表面上的蛋白质之间的相互作用结合到病毒粒子的表面(例如，结合到rsv粒子表面上的病毒rsv f蛋白)。rsv f蛋白抑制剂破坏rsv f蛋白介导的与宿主细胞膜的融合，阻止病毒进入。一旦预融合rsv f蛋白被未知机制触发，引发剧烈的构象变化、重折叠并将rsv和宿主细胞膜结合在一起，膜融合过程就开始了。
[0692]
本发明缀合物包括缀合于fc结构域、fc单体或fc结合肽的rsv f蛋白抑制剂单体及二聚体。本文所述的缀合物中的fc结构域结合于免疫细胞上的fcγr(例如，fcrn、fcγri、fcγriia、fcγriic、fcγriiia及fcγriiib)。本文所述的缀合物中的fc结构域结合于免疫细胞上的fcγr会活化吞噬作用及效应子功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)，因此导致免疫细胞吞没及破坏病毒粒子且进一步增强所述缀合物的抗病毒活性。
[0693]
本发明缀合物包括缀合于白蛋白或白蛋白结合肽的rsv f蛋白抑制剂单体及二聚体。所述白蛋白或白蛋白结合肽可例如通过使白蛋白结合于再循环的新生儿fc受体而延长所述缀合物的半衰期。
[0694]
本文所提供的缀合物由式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者描述。在一些实施方案中，本文所述的缀合物包括缀合于fc结构域或白蛋白的一种或多种rsv f蛋白抑制剂单体。在一些实施方案中，本文所述的缀合物包括缀合于fc结构域或白蛋白的一种或多种rsv f蛋白抑制剂二聚体。在一些实施方案中，当n为2时，e(fc结构域单体)二聚以形成fc结构域。
[0695]
本文所述的缀合物可使用本领域中可获得的化学合成技术来合成。在无法获得用于缀合的官能团的情况下，分子可使用本领域中熟知的常规化学合成技术衍生化。在一些实施方案中，本文所述的缀合物含有一个或多个手性中心。所述缀合物包括经分离立体异构体形式中每一者，以及具有变化的手性纯度程度的立体异构体的混合物，包括外消旋混合物。其也涵盖可形成的多种非对映异构体、对映异构体及互变异构体。
[0696]
rsv f蛋白抑制剂
[0697]
本文所述的缀合物的组分为rsv f蛋白抑制剂部分。rsv f蛋白抑制剂破坏rsv f蛋白，这是一种包膜糖蛋白，可导致病毒体膜与靶细胞膜融合。病毒体膜中的功能性f蛋白三聚体处于亚稳态预融合形式。目前尚不清楚是什么原因导致f蛋白触发，但结果是主要重折叠成其融合后的形式。每个f1亚单元的n端是融合肽(fp)，它是一段插入靶膜的疏水残基。fp与靠近f1的c端的跨膜(tm)结构域互为镜像，且各自按此顺序连接到七肽重复(hr)：fp-hra-hrb-tm。在触发之后，前hra重折叠成长hra螺旋并三聚。当靶标与病毒膜彼此靠近时，rsvf蛋白在中心折叠，使hrb能够结合于hra三聚体中的凹槽，形成发夹6螺旋束(6hb)。rsv f蛋白抑制剂的实例包括普沙托韦、mdt 637、jnj 179。此外，普沙托韦、mdt 637、jnj 179的衍生物(诸如文献中发现的那些)具有rsv f蛋白抑制剂活性且可用作本文化合物的rsv f蛋白抑制剂部分(参见例如，cockerill等人j.med.chem.62(7):3206-3227,2018)。
[0698]
本文所述的缀合物分为两种类型：(1)缀合于fc结构域或白蛋白的一种或多种rsv f蛋白抑制剂二聚体及(2)缀合于fc结构域或白蛋白的一种或多种rsv f蛋白抑制剂单体。rsv f蛋白抑制剂二聚体借助于接头(诸如本文所述的接头)彼此连接。
[0699]
本发明的病毒rsv f蛋白抑制剂包括普沙托韦、mdt 637、jnj 179及其类似物，诸
如式(a-i)-(a-iii)的病毒rsv f蛋白抑制剂：
[0700][0701]
其中
[0702]
q选自任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
3-c
20
环烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
5-c
20
芳基、任选取代的c
2-c
15
杂芳基及任选取代的c
1-c
20
烷氧基；
[0703]
r1、每个x1及y各自独立地选自-o-、-s-、-nr
5-、-ch＝n-、-c(c＝o)o-、-(c＝o)nh-、-(c＝o)-、-o(c＝o)nr
5-、-o(c＝s)nr
5-、-o(c＝o)o-、-o(c＝o)-、-nh(c＝o)o-、-nh(c＝o)-、-nh(c＝nh)-、-nh(c＝o)nr
5-、-nh(c＝nh)nr
5-、-nh(c＝s)nr
5-、-nh(c＝s)-、-och2(c＝o)nr
5-、-r5or6c(＝o)nh-、-r5nh(c＝o)-、-r5n-、-nh(so2)-、-nh(so2)nr
5-、-or
6-、-nhr
6-、-so
2-及
–
sr
6-；
[0704]
r2、每个r3、每个x2及u1各自独立地选自oh、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的c
1-c
20
烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
3-c
20
环烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
5-c
20
芳基、任选取代的c
2-c
15
杂芳基及任选取代的c
1-c
20
烷氧基；
[0705]
每个x3独立地选自任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基及任选取代的c
1-c
15
杂芳基；
[0706]
u2是环氮原子的取代基且选自任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基、任选取代的c
3-c
15
杂芳基及键；
[0707]
u3是环氮原子的取代基且选自h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
烯基、任选取代的c
3-c
20
环烯基、任选取代的c
2-c
20
炔基、任选取代的c
5-c
20
芳基、任选取代的c
2-c
15
杂芳基及任选取代的c
1-c
20
烷氧基、任选取代的c
1-c
20
烷氨基、任选取代的羧基、任选取代的氰基；
[0708]
ar选自任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基及任选取代的c
1-c
15
杂芳基；
[0709]
r5及r6各自独立地选自h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基及任选取代的c
2-c
15
杂芳基。
[0710]
优选地，rsv f蛋白抑制剂选自普沙托韦(例如，在美国专利第8,486,938号中描述为化合物202)、mdt 637(例如，在美国专利第6,495,580号的实施例13中描述)、jnj 179(例如，描述为国际专利公开号wo 2014/060411的化合物179)：
[0711][0712]
连接于fc结构域或白蛋白的rsv f蛋白抑制剂二聚体的缀合物
[0713]
本文所述的缀合物包括共价连接于一种或多种rsv f蛋白抑制剂二聚体的fc结构域、fc单体、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。两种rsv f蛋白抑制剂的二聚体包括第一rsv f蛋白抑制剂(例如，式(a-i)-(a-iii)的第一病毒rsv f蛋白抑制剂)及第二rsv f蛋白抑制剂(例如，式(a-i)-(a-iii)的第二病毒rsv f蛋白抑制剂)。所述第一及第二rsv f蛋白抑制剂借助于接头(诸如本文所述的接头)彼此连接。在rsv f蛋白抑制剂二聚体的一些实施方案中，所述第一及第二rsv f蛋白抑制剂是相同的。在一些实施方案中，所述第一及第二rsv f蛋白抑制剂是不同的。
[0714]
在一些实施方案中，当t大于1(例如，t为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个a
1-l-a2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的a
1-l-a2结构中任一者)。在一些实施方案中，e可缀合于2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个不同a
1-l-a2部分。在一些实施方案中，e缀合于第一a
1-l-a2部分及第二a
1-l-a2部分。在一些实施方案中，第一a
1-l-a2部分及第二a
1-l-a2部分的a1及a2中每一者独立地选自式(a-i)-(a-iii)中任一者：
[0715][0716]
在一些实施方案中，第一a
1-l-a2部分特异性地缀合于e的赖氨酸残基(例如，e的表面暴露赖氨酸残基的氮原子)，且第二a
1-l-a2部分特异性地缀合于e的半胱氨酸残基(例如，e的表面暴露半胱氨酸残基的硫原子)。在一些实施方案中，第一a
1-l-a2部分特异性地缀合于e的半胱氨酸残基(例如，e的表面暴露半胱氨酸残基的硫原子)，且第二a
1-l-a2部分特异性地缀合于e的赖氨酸残基(例如，e的表面暴露赖氨酸残基的氮原子)。
[0717]
在一些实施方案中，本公开提供由以下各式描述的缀合物或其药学上可接受的盐：
[0718][0719][0720]
[0721]
[0722]
[0723]
[0724]
[0725]
[0726]
[0727]
[0728]
[0729]
[0730]
[0731]
[0732]
[0733]
[0734]
[0735]
[0736]
[0737]
[0738]
[0739][0740]
或其药学上可接受的盐。
[0741]
在本文所述的缀合物中，连接至e的波浪线指示一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、
7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)rsv f蛋白抑制剂二聚体可附接于fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，当n为1时，一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)rsv f蛋白抑制剂二聚体可附接于fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，当n为2时，一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)rsv f蛋白抑制剂二聚体可附接于fc结构域。本文所述的缀合物中的波浪线不应解释为一种或多种rsv f蛋白抑制剂二聚体与fc结构域或白蛋白中的原子之间的单键。在一些实施方案中，当t为1时，一种rsv f蛋白抑制剂二聚体可附接于fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。在一些实施方案中，当t为2时，两种rsv f蛋白抑制剂二聚体可附接于fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。
[0742]
如本文进一步描述，本文所述的缀合物中的接头(例如，l或l’)可为分支链结构。如本文进一步描述，本文所述的缀合物中的接头(例如，l或l’)可为多价结构，例如分别具有两个或三个臂的二价或三价结构。在一些实施方案中，当所述接头具有三个臂时，所述臂中的两者可附接于第一及第二rsv f蛋白抑制剂且第三臂可附接至fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。
[0743]
在如由以上各式表示的具有共价连接于一种或多种rsv f蛋白抑制剂二聚体的fc结构域的缀合物中，当n为2时，两种fc结构域单体(每个fc结构域单体由e表示)二聚以形成fc结构域。
[0744]
连接于fc结构域或白蛋白的rsv f蛋白抑制剂单体的缀合物
[0745]
在一些实施方案中，本文所述的缀合物包括共价连接于一种或多种rsv f蛋白抑制剂单体的fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。fc结构域单体或白蛋白与一种或多种rsv f蛋白抑制剂单体的缀合物可由将fc结构域或白蛋白通过接头(诸如本文所述的接头中任一者)连接到rsv f蛋白抑制剂单体中每一者来形成。
[0746]
在本文所述的具有共价连接于一种或多种rsv f蛋白抑制剂单体的fc结构域或白蛋白的缀合物中，连接至e的波浪线指示一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)rsv f蛋白抑制剂单体可附接至fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，当n为1时，一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)rsv f蛋白抑制剂单体可附接至fc结构域单体或白蛋白。在一些实施方案中，当n为2时，一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)rsv f蛋白抑制剂单体可附接至fc结构域。本文所述的缀合物中的波浪线不应解释为一种或多种rsv f蛋白抑制剂单体与fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子之间的单键。在一些实施方案中，当t为1时，一种rsv f蛋白抑制剂单体可附接至fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。在一些实施方案中，当t为2时，两种rsv f蛋白抑制剂单体可附接至fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。
[0747]
在一些实施方案中，当t大于1(例如，t为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个a
1-l可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的a
1-l结构中任一者)。在一些实施方案中，e可缀合于2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个不同a
1-l部分。在一些实施方案中，e缀合于第一a
1-l部分及第二a
1-l部分。在一些实施方案中，第一a
l-l部分
及第二a
l-l部分中每一者的a1独立地选自式(a-i)-(a-iii)中任一者：
[0748][0749]
在一些实施方案中，第一a
1-l部分特异性地缀合于e的赖氨酸残基(例如，e的表面暴露赖氨酸残基的氮原子)，且第二a
1-l部分特异性地缀合于e的半胱氨酸残基(例如，e的表面暴露半胱氨酸残基的硫原子)。在一些实施方案中，第一a
1-l部分特异性地缀合于e的半胱氨酸残基(例如，e的表面暴露半胱氨酸残基的硫原子)，且第二a
1-l部分特异性地缀合于e的赖氨酸残基(例如，e的表面暴露赖氨酸残基的氮原子)。
[0750]
如本文进一步描述，本文所述的具有共价连接于一种或多种rsv f蛋白抑制剂单体的fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物中的接头(例如，l或l’)可为具有两个臂的二价结构。二价接头中的一个臂可附接至rsv f蛋白抑制剂单体且另一臂可附接于fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。
[0751]
在一些实施方案中，本文所提供的含有共价连接于一种或多种rsv f蛋白抑制剂单体的fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物是由以下各式中任一者描述：
[0752][0753][0754]
[0755][0756]
[0757]
[0758]
[0759]
[0760]
[0761]
[0762]
[0763]
[0764]
[0765]
[0766]
[0767]
[0768]
[0769]
[0770]
[0771]
[0772]
[0773]
[0774]
[0775]
[0776][0777]
或其药学上可接受的盐。
[0778]
在如由以上各式表示的具有共价连接于一种或多种rsv f蛋白抑制剂单体的fc结构域的缀合物中，当n为2时，两种fc结构域单体(每个fc结构域单体由e表示)二聚以形成fc结构域。
[0779]
iii.fc结构域单体及fc结构域
[0780]
fc结构域单体包括铰链结构域、ch2抗体恒定结构域及ch3抗体恒定结构域。所述fc结构域单体可具有免疫球蛋白抗体同种型igg、ige、igm、iga或igd。所述fc结构域单体也可具有任何免疫球蛋白抗体同种型(例如，igg1、igg2a、igg2b、igg3或igg4)。所述fc结构域单体可具有任何免疫球蛋白抗体同种异型(例如，ighg1*01(即，g1m(za))、ighg1*07(即，g1m(zax))、ighg1*04(即，g1m(zav))、ighg1*03(g1m(f))、ighg1*08(即，g1m(fa))、ighg2*01、ighg2*06、ighg2*02、ighg3*01、ighg3*05、ighg3*10、ighg3*04、ighg3*09、ighg3*11、ighg3*12、ighg3*06、ighg3*07、ighg3*08、ighg3*13、ighg3*03、ighg3*14、ighg3*15、ighg3*16、ighg3*17、ighg3*18、ighg3*19、ighg2*04、ighg4*01、ighg4*03或ighg4*02)(如描述于例如vidarsson等人igg subclasses and allotypes:from structure to effector function.frontiers in immunology.5(520):1-17(2014)中)。所述fc结构域单体也可属任何物种，例如人、鼠科动物或小鼠。fc结构域单体的二聚体是可结合于fc受体的
fc结构域，所述fc受体是位于白细胞表面上的受体。
[0781]
在一些实施方案中，本文所述的缀合物中的fc结构域单体可相对于具有seq id no:1-95中任一者的序列的fc结构域单体含有一种或多种氨基酸取代、添加及/或缺失。在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中的fc结构域单体中的asn可由ala置换以便预防n连接的糖基化(参见例如seq id no:12-15，其中asn至ala取代用*标记)。在一些实施方案中，本文所述的缀合物中的fc结构域单体也可含有额外cys添加(参见例如seq id no:9、10及11，其中cys添加用*标记)。
[0782]
在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中的fc结构域单体包括附接至fc结构域单体的n端或c端的额外部分，例如白蛋白结合肽、纯化肽(例如，六组氨酸肽hhhhhh(seq id no:99))或信号序列(例如，il2信号序列myrmqllscialslalvtns(seq id no:100))。在一些实施方案中，所述缀合物中的fc结构域单体不含任何类型的抗体可变区，例如vh、v
l
、互补决定区(cdr)或高变区(hvr)。
[0783]
在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中的fc结构域单体可具有与下文所示的seq id no:1-95中任一者的序列具有至少95％同一性(例如，97％、99％或99.5％同一性)的序列。在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中的fc结构域单体可具有下文所示的seq id no:1-95中任一者的序列。
[0784]
seq id no:1：n端(粗体)具有il2信号序列的鼠科动物fc-igg2a
[0785][0786]
seq id no:2：成熟鼠科动物fc-igg2a
[0787]
prgptikpcppckcpapnllggpsvfifppkikdvlmislspivtcvvvdvseddpdvqiswfvnnvevhtaqtqthredynstlrvvsalpiqhqdwmsgkefkckvnnkdlpapiertiskpkgsvrapqvyvlpppeeemtkkqvtltcmvtdfmpediyvewtnngktelnykntepvldsdgsyfmysklrvekknwvernsyscsvvheglhnhhttksfsrtpgk
[0788]
seq id no:3：n端(粗体)具有il2信号序列且添加有n端mvrs氨基酸残基(加下划线)的人fc-igg1
[0789]
[0790]
seq id no:4：添加有n端mvrs氨基酸残基(加下划线)的成熟人fc-igg1
[0791]
mvrsdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0792]
seq id no:5：n端具有il2信号序列(粗体)且c端具有六组氨酸肽(斜体)的鼠科动物fc-igg2a
[0793][0794]
seq id no:6：c端具有六组氨酸肽(斜体)的成熟鼠科动物fc-igg2a
[0795][0796]
seq id no:7：n端具有il2信号序列(粗体)、添加有n端mvrs氨基酸残基(加下划线)且c端具有六组氨酸肽(斜体)的人fc-igg1
[0797][0798][0799]
seq id no:8：c端具有六组氨酸肽(斜体)且添加有n端mvrs氨基酸残基(加下划线)的成熟人fc-igg1
[0800][0801]
seq id no:9：n端具有il2信号序列(粗体)、添加有n端mvrs氨基酸残基(加下划线)、铰链区中具有两个额外半胱氨酸(*)且c端具有六组氨酸肽(斜体)的人fc-igg1
[0802][0803]
seq id no:10：添加有n端mvrs氨基酸残基(加下划线)、铰链区中具有两个额外半胱氨酸(*)且c端具有六组氨酸肽(斜体)的成熟人fc-igg1
[0804][0805][0806]
seq id no:11：添加有n端mvrs氨基酸残基(加下划线)且铰链区中具有两个额外半胱氨酸(*)的成熟人fc-igg1
[0807]
mvrsdkthtcppcppc*kc*papellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0808]
seq id no:12：n端具有il2信号序列(粗体)、具有asn至ala取代(*)且c端具有六组氨酸肽(斜体)的鼠科动物fc-igg2a
[0809][0810]
seq id no:13：具有asn至ala取代(*)且c端具有六组氨酸肽(斜体)的成熟鼠科动物fc-igg2a
[0811][0812][0813]
seq id no:14：n端具有il2信号序列(粗体)、添加有n端mvrs氨基酸残基(加下划线)、具有asn至ala取代(*)且c端具有六组氨酸肽(斜体)的人fc-igg1
[0814][0815]
seq id no:15：具有asn至ala取代(*)、添加有n端mvrs氨基酸残基(加下划线)且c端具有六组氨酸肽(斜体)的成熟人fc-igg1
[0816][0817]
seq id no:16：n端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)且添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)的人igg1 fc
[0818][0819][0820]
seq id no:17：n端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)、具有c端g4s接头(斜体)且具有c端c-myc标签(加下划线、斜体)的人igg1 fc
[0821][0822]
seq id no:18：添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)、具有c端g4s接头(斜体)且具有c端c-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人igg1 fc
[0823][0824]
seq id no:19：具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)且具有赖氨酸至丝氨酸修饰(*)以预防此位点处的赖氨酸缀合的人igg1 fc
[0825][0826][0827]
seq id no: 20：添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)且具有赖氨酸至丝氨
酸修饰(*)以预防此位点处的赖氨酸缀合的成熟人igg1 fc
[0828]
isamvrsdkthtcppcpapellggpsvflfppkps*dtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0829]
seq id no: 21：n端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)、具有赖氨酸至丝氨酸修饰(*)以预防此位点处的赖氨酸缀合、具有c端g4s接头(斜体)且具有c端c-myc标签(加下划线、斜体)的人igg1 fc
[0830][0831]
seq id no: 22：添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)、具有赖氨酸至丝氨酸修饰(*)以预防此位点处的赖氨酸缀合、具有c端g4s接头(斜体)且具有c端c-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人igg1 fc
[0832][0833]
seq id no:23：n端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)、具有asn至ala取代(*)、具有c端g4s接头(斜体)且具有c端c-myc标签(加下划线、斜体)的人igg1 fc
[0834]
[0835]
seq id no:24：添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)、具有asn至ala取代(*)、具有c端g4s接头(斜体)且具有c端c-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人igg1 fc
[0836][0837]
seq id no:25：n端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)、具有h310a(*)及h435a(*)突变以妨碍fcrn结合、具有c端g4s(斜体)且具有c端c-myc标签(加下划线、斜体)的人igg1 fc
[0838][0839]
seq id no:26：n端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)、具有h310a(*)及h435a(*)突变以妨碍fcrn结合、具有c端g4s(斜体)且具有c端c-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人igg1 fc
[0840][0841]
seq id no:27：n端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)、具有c端g4s接头(斜体)且具有c端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)c-myc标签(加下划线、斜体)的人igg1 fc
[0842]
[0843][0844]
seq id no:28：添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)、具有c端g4s接头(斜体)且具有c端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)c-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人igg1 fc
[0845][0846]
seq id no:29：n端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有n端isamvrs氨基酸残基(加下划线)、具有asn至ala取代(*)、具有c端g4s接头(斜体)且具有c端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)c-myc标签(加下划线、斜体)的人igg1 fc
[0847][0848]
seq id no:30：添加有n端mvrs氨基酸残基(加下划线)、具有asn至ala取代(*)、具有c端g4s接头(斜体)且具有c端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)c-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人igg1 fc
[0849][0850][0851]
seq id no:31：n端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)、具有c端g4s接头(斜体)且具有c端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)c-myc标签(加
下划线)的人igg1 fc
[0852][0853]
seq id no:32：n端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的人igg1 fc
[0854][0855]
seq id no:33：具有yte三重突变(粗体及加下划线)且添加有n端mvrs氨基酸残基(加下划线)的成熟人igg1 fc
[0856][0857][0858]
seq id no:34：n端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、含有在成熟人igg1 fc的n端包括全铰链区的残基epkss(加下划线)、具有cys至ser取代(#)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的人igg1 fc
[0859]
[0860]
seq id no:35：n端具有鼠科动物igg信号序列(粗体)、自成熟人igg1 fc的n端移除epkssd铰链残基、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的人igg1 fc
[0861][0862]
seq id no:36：具有yte三重突变(粗体及加下划线)、自成熟人igg1 fc的n端移除epkssd铰链残基、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的成熟人igg1 fc
[0863][0864][0865]
seq id no:37：具有ls双重突变(粗体及加下划线)、自成熟人igg1 fc的n端移除epkssd铰链残基、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的成熟人igg1 fc
[0866][0867]
seq id no:38：n端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、具有yte三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)、具有c端g4s接头(斜体)且具有c端c-myc标签(加下划线)的成熟人igg1 fc
[0868][0869]
seq id no:39：成熟人fc igg1，其中x1为met或trp，x2为ser或thr，x3为thr或glu，x4为asp或glu，且x5为leu或met，x6为met或leu，且x7为asn或ser
[0870][0871]
seq id no:40：成熟人fc igg1，其中x4为asp或glu，且x5为leu或met
[0872][0873]
seq id no:41：具有yte三重突变(粗体及加下划线)的成熟人fc igg1，且其中x4为asp或glu，且x5为leu或met
[0874][0875]
seq id no:42：具有yte三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的成熟人fc igg1
[0876][0877]
seq id no:43：具有yte三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型g1m(f)(粗斜体)的成熟人fc igg1
[0878][0879]
seq id no:44：具有ls双重突变(粗体及加下划线)的成熟人fc igg1，且其中x4为asp或glu，且x5为leu或met
[0880][0881]
seq id no:45：具有ls双重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的成熟人fc igg1
[0882][0883][0884]
seq id no:46：具有ls双重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型g1m(f)(粗斜体)的成熟人fc igg1
[0885][0886]
seq id no:47：具有小鼠重链migg vh信号序列(粗体)、具有asp缺失([d])、具有cys至ser取代(#)的成熟人fc igg1，且其中x1为met或trp，x2为ser或thr，x3为thr或glu，x4为asp或glu，且x5为leu或met，x6为met或leu，且x7为asn或ser
[0887][0888]
seq id no:48：具有小鼠重链migg vh信号序列(粗体)、具有cys至ser取代(#)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的成熟人igg1 fc
[0889][0890]
seq id no:49：具有小鼠重链migg vh信号序列(粗体)、具有cys至ser取代(#)、具有同种异型g1m(f)(粗斜体)的成熟人igg1 fc
[0891][0892]
seq id no:50：具有小鼠重链migg vh信号序列(粗体)、具有cys至ser取代(#)、具有m428l、n434s突变(粗体/加下划线)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的成熟人igg1 fc
[0893][0894]
seq id no:51：具有小鼠重链migg vh信号序列(粗体)、具有cys至ser取代(#)、具有m428l、n434s突变(粗体/加下划线)、具有同种异型g1m(f)(粗斜体)的成熟人igg1 fc
[0895][0896]
seq id no:52：具有小鼠重链migg vh信号序列(粗体)、具有cys至ser取代(#)、具有yte三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的成熟人igg1 fc
[0897][0898]
seq id no:53：具有小鼠重链migg vh信号序列(粗体)、具有cys至ser取代(#)、具有yte三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型g1m(f)(粗斜体)的成熟人igg1 fc
[0899][0900][0901]
seq id no:54：具有小鼠重链migg vh信号序列(粗体)、添加有n端isamvrs氨基酸残基(斜体)、具有m428l、n434s突变(粗体/加下划线)、具有g4s接头(斜体)且具有c端c-myc-标签(加下划线)、具有同种异型g1m(f)(粗斜体)的成熟人igg1 fc
[0902][0903]
seq id no:55：具有小鼠重链migg vh信号序列(粗体)、添加有n端isamvrs氨基酸残基(斜体)、具有m428l、n434s突变(粗体/加下划线)、具有g4s接头(斜体)、具有c端c-myc-标签(加下划线)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的成熟人igg1 fc
[0904][0905]
seq id no:56：具有小鼠重链migg vh信号序列(粗体)、添加有n端isamvrs氨基酸残基(斜体)、具有yte三重突变(粗体/加下划线)、具有g4s接头(斜体)且具有c端c-myc-标签(加下划线)、具有同种异型g1m(f)(粗斜体)的成熟人igg1 fc
[0906][0907]
seq id no:57：具有小鼠重链migg vh信号序列(粗体)、添加有n端isamvrs氨基酸残基(斜体)、具有yte三重突变体(粗体/加下划线)、具有g4s接头(斜体)、具有c端c-myc-标签(加下划线)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的成熟人igg1 fc
[0908][0909]
seq id no:58：具有小鼠重链migg1信号序列(粗体)、具有cys至ser取代(#)、具有c端g4s(斜体)且具有c端iga肽(加下划线)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的成熟人igg1
[0910][0911]
seq id no:59：具有小鼠重链migg1信号序列(粗体)、具有cys至ser取代(#)、具有m428l、n434s突变(粗体/加下划线)、具有c端g4s(斜体)且具有c端iga肽(加下划线)、具有同种异型g1m(fa)(粗斜体)的成熟人igg1
[0912][0913]
seq id no:60：成熟人fc igg1，z1为cys或ser，且其中x1为met或trp，x2为ser或thr，x3为thr或glu，x4为asp或glu，且x5为leu或met，x6为met或leu，且x7为asn或ser
[0914][0915]
seq id no:61：成熟人fc igg1，cys至ser取代(#)，且其中x1为met或trp，x2为ser或thr，x3为thr或glu，x4为asp或glu，且x5为leu或met，x6为met或leu，且x7为asn或ser
[0916]
[0917]
seq id no:62：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)，x4为asp或glu，且x5为leu或met
[0918][0919]
seq id no:63：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、同种异型g1m(f)(粗斜体)
[0920][0921]
seq id no:64：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、同种异型g1m(fa)(粗斜体)
[0922][0923]
seq id no:65：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、m428l、n434s突变(粗体/加下划线)、同种异型g1m(fa)(粗斜体)
[0924][0925]
seq id no:66：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、m428l、n434s突变(粗体/加下划线)、同种异型g1m(f)(粗斜体)
[0926][0927]
seq id no:67：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、yte三重突变(粗体及加下划线)、同种异型g1m(fa)(粗斜体)
[0928][0929]
seq id no:68：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、yte三重突变(粗体及加下划线)、同种异型g1m(f)(粗斜体)
[0930][0931][0932]
seq id no:69：成熟人fc igg1，z1为cys或ser，且其中x1为met或trp，x2为ser或thr，x3为thr或glu，x4为asp或glu，且x5为leu或met，x6为met或leu，且x7为asn或ser
[0933][0934]
seq id no:70：成熟人fc igg1，cys至ser取代(#)，且其中x1为met或trp，x2为ser或thr，x3为thr或glu，x4为asp或glu，且x5为leu或met，x6为met或leu，且x7为asn或ser
[0935]
nvnhkpsntkvdkkvepkss(#)dkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlx1ix2rx3pevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrx4ex5tknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvx6healhx7hytqkslslspg
[0936]
seq id no:71：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)，x4为asp或glu，且x5为leu或met
[0937]
nvnhkpsntkvdkkvepkss(#)dkthtcppcpapellggpsv
[0938][0939]
seq id no:72：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、同种异型g1m(f)(粗斜体)
[0940][0941]
seq id no:73：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、同种异型g1m(fa)(粗斜体)
[0942][0943]
seq id no:74：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、m428l、n434s突变(粗体/加下划线)、同种异型g1m(fa)(粗斜体)
[0944]
[0945][0946]
seq id no:75：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、m428l、n434s突变(粗体/加下划线)、同种异型g1m(f)(粗斜体)
[0947][0948]
seq id no:76：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、yte三重突变(粗体及加下划线)、同种异型g1m(fa)(粗斜体)
[0949][0950]
seq id no:77：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、yte三重突变(粗体及加下划线)、同种异型g1m(f)(粗斜体)
[0951][0952][0953]
seq id no:78：成熟人fc igg1，z1为cys或ser，且其中x1为met或trp，x2为ser或thr，x3为thr或glu，x4为asp或glu，且x5为leu或met，x6为met或leu，且x7为asn或ser
[0954]
vnhkpsntkvdkkvepksz1dkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlx1ix2rx3pevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrx4ex5tknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvx6healhx7hytqkslslspgk
[0955]
seq id no:79：成熟人fc igg1，cys至ser取代(#)，且其中x1为met或trp，x2为ser或thr，x3为thr或glu，x4为asp或glu，且x5为leu或met，x6为met或leu，且x7为asn或ser
[0956]
vnhkpsntkvdkkvepkss(#)dkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlx1ix2rx3pevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrx4ex5tknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvx6healhx7hytqkslslspgk
[0957]
seq id no:80：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)，x4为asp或glu，且x5为leu或met
[0958]
vnhkpsntkvdkkvepkss(#)dkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrx4ex5tknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0959]
seq id no:81：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、同种异型g1m(f)(粗斜体)
[0960][0961]
seq id no:82：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、同种异型g1m(fa)(粗斜体)
[0962][0963]
seq id no:83：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、m428l、n434s突变(粗体/加下划线)、同种异型g1m(fa)(粗斜体)
[0964][0965]
seq id no:84：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、m428l、n434s突变(粗体/加下
划线)、同种异型g1m(f)(粗斜体)
[0966][0967]
seq id no:85：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、yte三重突变(粗体及加下划线)、同种异型g1m(fa)(粗斜体)
[0968][0969]
seq id no:86：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、yte三重突变(粗体及加下划线)、同种异型g1m(f)(粗斜体)
[0970][0971]
seq id no:87：成熟人fc igg1，z1为cys或ser，且其中x1为met或trp，x2为ser或thr，x3为thr或glu，x4为asp或glu，且x5为leu或met，x6为met或leu，且x7为asn或ser
[0972]
vnhkpsntkvdkkvepksz1dkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlx1ix2rx3pevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrx4ex5tknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvx6healhx7hytqkslslspg
[0973]
seq id no:88：成熟人fc igg1，cys至ser取代(#)，且其中x1为met或trp，x2为ser或thr，x3为thr或glu，x4为asp或glu，且x5为leu或met，x6为met或leu，且x7为asn或ser
[0974]
vnhkpsntkvdkkvepkss(#)dkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlx1ix2rx3pevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrx4ex5tknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdks
rwqqgnvfscsvx6healhx7hytqkslslspg
[0975]
seq id no:89：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)，x4为asp或glu，且x5为leu或met
[0976]
vnhkpsntkvdkkvepkss(#)dkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrx4ex5tknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg
[0977]
seq id no:90：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、同种异型g1m(f)(粗斜体)
[0978][0979][0980]
seq id no:91：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、同种异型g1m(fa)(粗斜体)
[0981][0982]
seq id no:92：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、m428l、n434s突变(粗体/加下划线)、同种异型g1m(fa)(粗斜体)
[0983][0984]
seq id no:93：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、m428l、n434s突变(粗体/加下划线)、同种异型g1m(f)(粗斜体)
[0985]
[0986][0987]
seq id no:94：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、yte三重突变(粗体及加下划线)、同种异型g1m(fa)(粗斜体)
[0988][0989]
seq id no:95：成熟人igg1 fc，cys至ser取代(#)、yte三重突变(粗体及加下划线)、同种异型g1m(f)(粗斜体)
[0990][0991]
如本文所定义，fc结构域包括通过ch3抗体恒定结构域之间的相互作用二聚化的两种fc结构域单体，以及在两种二聚化fc结构域单体的铰链结构域之间形成的一个或多个二硫键。fc结构域形成结合于fc受体，例如fc-γ受体(即，fcγ受体(fcγr))、fc-α受体(即，fcα受体(fcαr))、fc-ε受体(即，fcε受体(fcεr))及/或新生儿fc受体(fcrn)的最小结构。在一些实施方案中，本发明的fc结构域结合于fcγ受体(例如，fcrn、fcγri(cd64)、fcγriia(cd32)、fcγriib(cd32)、fcγriiia(cd16a)、fcγriiib(cd16b))及/或fcγriv及/或新生儿fc受体(fcrn)。
[0992]
在一些实施方案中，本发明的fc结构域单体或fc结构域为无糖基化fc结构域单体或fc结构域(例如，维持衔接于fc受体(例如，f crn)的fc结构域单体或fc结构域)。例如，所述fc结构域是维持衔接于fc受体的无糖基化igg1变体(例如，在糖基化基序的n297及/或t299处具有氨基酸取代的igg1)。例示性无糖基化fc结构域及用于制备无糖基化fc结构域的方法为本领域中已知的，例如，如描述于sazinsky s.l.等人,aglycosylated immunoglobulin g1 variants pr oductively engage activating fc receptors,pnas,2008,105(51):20167-20172中，所述文献以其整体并入本文中。
[0993]
在一些实施方案中，本发明的fc结构域或fc结构域单体经工程改造以增强与新生儿fc受体(fcrn)的结合。例如，所述fc结构域可包括对应于m252y/s254t/t256e(yte)的三
重突变(例如igg1，诸如具有yte突变的人或人化igg1，例如seq id no:33、seq id no:36、seq id no:38、seq id no:39、seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43、seq id no:52、seq id no:53、seq id no:56或seq id no:57)。所述fc结构域可包括对应于m428l/n434s(ls)的双重突变体(例如igg1，诸如具有ls突变的人或人化igg1，诸如seq id no:37、seq id no:39、seq id no:44、seq id no:45、seq id no:46、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:54、seq id no:55或seq id no:59)。所述fc结构域可包括对应于n434h的单一突变体(例如igg1，诸如具有n434h突变的人或人化igg1)。所述fc结构域可包括对应于c220s的单一突变体(例如igg1，诸如具有c220s突变的人或人化igg1，诸如seq id no:34、seq id no:47、seq id no:48、seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52、seq id no:53、seq id no:58、seq id no:59、seq id no:61、seq id no:62、seq id no:63、seq id no:64、seq id no:65、seq id no:66、seq id no:67或seq id no:68)。所述fc结构域可包括增强与fcrn的结合的上述突变中的一种或多种的组合。增强的与fcrn的结合可增加含fc结构域的缀合物的半衰期。例如，掺入一个或多个增加与fcrn的结合的氨基酸突变(例如，yte突变、ls突变或n434h突变)可相对于具有对应的没有增强fcrn结合的突变的fc结构域的缀合物将缀合物的半衰期增加5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％或更多。具有增强的与fcrn的结合的例示性fc结构域及用于制备具有增强的与fcrn的结合的fc结构域的方法为本领域中已知的，例如，如描述于maeda,a.等人,identification of human igg1 variant with enhanced fcrn binding and without increased binding to rheumatoid factor autoantibody,mabs,2017,9(5):844-853中，所述文献以其整体并入本文中。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定seq id no.的)特定氨基酸残基的氨基酸包括本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，seq id no:1-95中任一者可通过使所述氨基酸序列的“对应残基”突变而发生突变以包括yte突变、ls突变及/或n434h突变。
[0994]
如本文所用，应理解“对应于”特定seq id no.的特定半胱氨酸残基的硫原子包括本领域技术人员将理解与所述特定序列的特定半胱氨酸比对的任何半胱氨酸残基的硫原子。人igg1(uniprotkb:p01857；seq id no:121)、人igg2(uniprotkb:p01859；seq id no:122)、人igg3(uniprotkb:p01860；seq id no:123)及人igg4(uniprotkb:p01861；seq id no:124)的蛋白质序列比对提供如下(用clustal omega多对比对(multiple pairwise alignment)对齐)。所述比对指示彼此“对应”的半胱氨酸残基(例如，半胱氨酸残基的硫原子)(在盒中且由
·
符号指示)。本领域技术人员将能够容易地执行与本发明的任何igg变体的此种比对以确定半胱氨酸中对应于本文所述的特定seq id no.(例如，seq id no:1-95中任一者)的特定半胱氨酸的任何硫原子的硫原子。例如，本领域技术人员将能够容易地确定seq id no:10的cys10(fc结构域铰链区保守cppc基序的第一半胱氨酸)对应于例如igg1的cys109、igg2的cys106、igg3的cys156、seq id no:1的cys29、seq id no:2的cys9、seq id no:3的cys30、seq id no:10的cys10。
[0995]
在一些实施方案中，具有seq id no:39-95中任一者的序列的本发明的fc结构域或fc结构域单体可进一步包括n端额外氨基酸(xaa)x及/或c端额外氨基酸(xaa)z，其中xaa为任何氨基酸且x及z为大于或等于零的整数，一般地小于100，优选地小于10且更优选地为
0、1、2、3、4或5。在一些实施方案中，所述额外氨基酸与seq id no:94的一个或多个连续氨基酸具有至少70％(例如，70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性。例如，所述额外氨基酸可为c端对应于igg1(seq id no:121)的lys330的单一氨基酸。
[0996]
如本文所用，应理解“对应于”特定seq id no.的特定赖氨酸残基的氮原子包括本领域技术人员将理解与所述特定序列的特定赖氨酸比对的任何赖氨酸残基的氮原子。人igg1(uniprotkb:p01857；seq id no:121)、人igg2(uniprotkb:p01859；seq id no:122)、人igg3(uniprotkb:p01860；seq id no:123)及人igg4(uniprotkb:p01861；seq id no:124)的蛋白质序列比对提供如下(用clustal omega多对比对对齐)。所述比对指示彼此“对应”的赖氨酸残基(例如，赖氨酸残基的氮原子)(在盒中且由*符号指示)。本领域技术人员将能够容易地执行与本发明的任何igg变体的此种比对以确定赖氨酸中对应于本文所述的特定seq id no.(例如，seq id no:1-95中任一者)的特定赖氨酸的任何氮原子的氮原子。例如，本领域技术人员将能够容易地确定seq id no:10的lys35对应于例如igg1的lys129、igg2的lys126、igg3的lys176、seq id no:1的lys51、seq id no:2的lys31、seq id no:3的lys50、seq id no:10的lys30。
[0997]
igg1(seq id no:121)、igg2(seq id no:122)、igg3(seq id no:123)及igg4(seq id no:124)的蛋白质序列比对
[0998]
在一些实施方案中，fc结构域单体包括小于约300个氨基酸残基(例如，小于约300、小于约295、小于约290、小于约285、小于约280、小于约275、小于约270、小于约265、小于约260、小于约255、小于约250、小于约245、小于约240、小于约235、小于约230、小于约225或小于约220个氨基酸残基)。在一些实施方案中，fc结构域单体小于约40kda(例如，小于约35kda、小于约30kda、小于约25kda)。
[0999]
在一些实施方案中，fc结构域单体包括至少200个氨基酸残基(例如，至少210、至少220、至少230、至少240、至少250、至少260、至少270、至少280、至少290或至少300个氨基酸残基)。在一些实施方案中，fc结构域单体为至少20kda(例如，至少25kda、至少30kda或至
少35kda)。
[1000]
在一些实施方案中，fc结构域单体包括200至400个氨基酸残基(例如，200至250、250至300、300至350、350至400、200至300、250至350或300至400个氨基酸残基)。在一些实施方案中，fc结构域单体为20至40kda(例如，20至25kda、25至30kda、35至40kda、20至30kda、25至35kda或30至40kda)。
[1001]
在一些实施方案中，fc结构域单体包括与seq id no:1-95中任一者的序列具有至少90％(例如，至少95％、至少98％)同一性的氨基酸序列或其区域。在一些实施方案中，fc结构域单体包括seq id no:1-95中任一者的氨基酸序列或其区域。
[1002]
在一些实施方案中，fc结构域单体包括seq id no:1-95中任一者的区域，其中所述区域包括位置220、252、254及256。在一些实施方案中，所述区域包括至少40个氨基酸残基、至少50个氨基酸残基、至少60个氨基酸残基、至少70个氨基酸残基、至少80个氨基酸残基、至少90个氨基酸残基、至少100个氨基酸残基、至少110个氨基酸残基、至少120个氨基酸残基、至少130个氨基酸残基、至少140个氨基酸残基、至少150个氨基酸残基、至少160个氨基酸残基、至少170个氨基酸残基、至少180个氨基酸残基、至少190个氨基酸残基或至少200个氨基酸残基。
[1003]
免疫细胞的活化
[1004]
fc-γ受体(fcγr)结合免疫球蛋白g(igg)的fc部分且在免疫活化及调节中发挥重要作用。例如，免疫复合物(ic)中的igg fc结构域以高亲合力衔接fcγr，因此触发调节免疫细胞活化的信号传导级联。人fcγr家族含有数种活化受体(fcγri、fcγriia、fcγriic、fcγriiia及fcγriiib)及一种抑制受体(fcγriib)。fcγr信号传导通过细胞内结构域介导，所述细胞内结构域含有用于活化fcγr的免疫酪氨酸活化基序(itam)及用于抑制受体fcγriib的免疫酪氨酸抑制基序(itim)。在一些实施方案中，fc结构域与fcγr的结合使src家族激酶进行itam磷酸化；此活化syk家族激酶且诱导包括pi3k及ras路径的下游信号传导网路。
[1005]
在本文所述的缀合物中，缀合物中包括rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体的部分结合于且抑制病毒rsv f蛋白，导致抑制病毒复制，而所述缀合物的fc结构域部分结合于免疫细胞上的fcγr(例如，fcrn、fcγri、fcγriia、fcγriic、fcγriiia及fcγriiib)且活化吞噬作用及效应子功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)，因此导致免疫细胞吞没及破坏病毒粒子且进一步增强所述缀合物的抗病毒活性。可通过本文所述的缀合物活化的免疫细胞的实例包括但不限于巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜曙红细胞、嗜碱细胞、淋巴细胞、滤泡性树突状细胞、天然杀手细胞及肥大细胞。
[1006]
组织分布
[1007]
在进入体循环之后，治疗剂被分配到身体的组织。由于血液灌注、组织结合、区域ph值及细胞膜通透性的不同，分布通常不均匀。药物进入组织的速率取决于血液流向组织的速度、组织质量及血液与组织之间的分配特性。在血管丰富的区域，血液与组织之间的分布平衡(当进入及退出速率相同时)会更快地达到，除非跨细胞膜扩散是限速步骤。大小、形状、电荷、靶标结合、fcrn及靶标结合机制、施用途径以及配方都会影响组织分布。
[1008]
在一些情况下，可优化本文所述的缀合物以分布至肺组织。在一些情况下，缀合物在施用之后2小时内在上皮衬液中的分布浓度比率为血浆中缀合物浓度的至少30％。在某
些实施方案中，施用之后2小时内的浓度比率为至少45％。在某些实施方案中，施用之后2小时内的浓度比率为至少55％。特别地，施用之后2小时内的浓度比率为至少60％。如实施例33及图14所示，到注射后2小时，如在其余时间过程中通过auc所测量，具有用一种或多种小分子抗病毒抑制剂修饰的fc结构域(seq id no:64)的缀合物elf水平令人惊讶地为血浆暴露水平的约60％，表明缀合物几乎立即从血浆分配到肺中的elf。这表明含有fc的缀合物迅速分布到肺中，且相对于血浆中的水平在肺中保持高浓度。
[1009]
iv.白蛋白及白蛋白结合肽
[1010]
白蛋白
[1011]
本发明的白蛋白可为天然存在的白蛋白或其变体，诸如天然存在的白蛋白的经工程改造变体。变体包括多态性、诸如结构域及子结构域的片段及融合蛋白。白蛋白可包括自任何来源获得的白蛋白的序列。优选地，所述来源为哺乳动物，诸如人或牛。最优选地，所述白蛋白为人血清白蛋白(hsa)或其变体。人血清白蛋白包括具有天然存在于人中的氨基酸序列的任何白蛋白及其变体。白蛋白编码序列可通过本领域技术人员已知用于分离对应于人基因的cdna且对所述cdna进行测序的方法获得。本发明的白蛋白可包括seq id no:96或seq id no:97中提供的人血清白蛋白(hsa)的氨基酸序列，或者seq id no:98中提供的小鼠血清白蛋白(msa)的氨基酸序列，或者其变体或片段(优选其功能变体或片段)。片段或变体可或可不为功能性的，或可在某种程度上保持白蛋白的功能。例如，片段或变体可保持与白蛋白受体(诸如hsa或msa)结合的能力，达亲本白蛋白(例如，产生所述片段或变体的亲本白蛋白)的所述能力的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或105％。相对结合能力可通过本领域中已知的方法，诸如通过表面等离子体共振来测定。
[1012]
所述白蛋白可为白蛋白的天然存在的多态变体，诸如人血清白蛋白。一般而言，人血清白蛋白的变体或片段将具有人血清白蛋白或小鼠血清白蛋白的配体结合活性的至少5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％或70％，并且优选地80％、90％、95％、100％或105％或更高。
[1013]
所述白蛋白可包括牛血清白蛋白的氨基酸序列。牛血清白蛋白包括具有天然存在于牛中的氨基酸序列的任何白蛋白，例如，如通过swissprot寄存编号p02769所述，及如本文所定义的其变体。牛血清白蛋白也包括如本文所定义的全长牛血清白蛋白或其变体的片段。
[1014]
所述白蛋白可包括源自来自以下的血清白蛋白中的一者的白蛋白的序列：狗(例如，swissprot登录号p49822-1)、猪(例如，swisspr ot登录号p08835-1)、山羊(例如，sigma产品号a2514)a4164)、猫(例如，swissprot登记号p49064-1)、鸡(例如，swissprot登记号p19121-1)、卵清蛋白(例如，鸡卵清蛋白)(例如，swissprot登记号p01012-1)、火鸡卵清蛋白(例如，swissprot登录号o73860-1)、驴(例如，swisspr ot登录号q5xle4-1)、豚鼠(例如，swissprot登录号q6wdn9-1)、仓鼠(例如，如demarco等人international journal for parasitology 37(11):1201-1208(2007)中所描述)、马(例如，swissprot登录号p35747-1)、恒河猴(例如，swissprot登录号q28522-1)、小鼠(例如，swisspr ot登录号p07724-1)、鸽子(例如，如由khan等人int.j.biol.macro mol.30(3-4),171-8(2002)所定义)、兔(例如，swissprot登录号p49065-1)、大鼠(例如，swissprot登录号p02770-1)或绵羊(例如，swissprot登录号p14639-1)，且包括如本文定义的其变体及片段。
[1015]
本领域技术人员已知白蛋白的多种天然存在的突变体形式。天然存在的白蛋白突变体形式在例如peters等人all about albumin:biochemistry,genetics and medical applications,academic press,inc.,san diego,calif.,第170页-181页(1996)中描述。
[1016]
本发明的白蛋白包括天然存在的白蛋白的变体。变异型白蛋白是指具有至少一种氨基酸突变，诸如通过插入、缺失或取代产生的氨基酸突变(保守或非保守)的白蛋白，其限制条件在于所述改变产生尚未显著改变至少一种基础特性(例如，尚未改变超过5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％或40％)的白蛋白。可定义白蛋白的活性的例示性特性包括结合活性(例如，包括对胆红素或诸如长链脂肪酸的脂肪酸的结合特异性或亲和力)、容积渗透浓度或在特定ph范围内的行为。
[1017]
典型地，白蛋白变体将与天然存在的白蛋白(诸如seq id no:96-98中任一者的白蛋白)具有至少40％、至少50％、至少60％且优选地至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性。
[1018]
用于生产及纯化重组人白蛋白的方法为充分确立的(sleep等人biotechnology,8(1):42-6(1990))，且包括用于制药应用的重组人白蛋白的生产(bosse等人j clin pharmacol 45(1):57-67(2005))。hsa的三维结构已由x射线晶体学阐明(carter等人science.244(4909):1195-8(1998))；sugio等人protein eng.12(6):439-46(1999))。hsa多肽链具有35个半胱氨酸残基，所述残基形成17个二硫键；及在成熟蛋白质的位置34处的一个未配对(例如，游离)半胱氨酸。hsa的cys-34已被用于将分子缀合于白蛋白(leger等人bioorg med chem lett 14(17):4395-8(2004)；thibaudeau等人bioconjug chem16(4):1000-8(2005))，且为位点特异性缀合提供位点。
[1019]
seq id no:96(人血清白蛋白(hsa)，变体1)
[1020]
dahksevahrfkdlgeenfkalvliafaqylqqcpfedhvklvnevtefaktcvadesaencdkslhtlfgdklctvatlretygemadccakqepernecflqhkddnpnlprlvrpevdvmctafhdneetflkkylyeiarrhpyfyapellffakrykaafteccqaadkaacllpkldelrdegkassakqrlkcaslqkfgerafkawavarlsqrfpkaefaevsklvtdltkvhtecchgdllecaddradlakyicenqdsissklkeccekpllekshciaevendempadlpslaadfveskdvcknyaeakdvflgmflyeyarrhpdysvvlllrlaktyettlekccaaadphecyakvfdefkplveepqnlikqncelfeqlgeykfqnallvrytkkvpqvstptlvevsrnlgkvgskcckhpeakrmpcaedylsvvlnqlcvlhektpvsdrvtkccteslvnrrpcfsalevdetyvpkefnaetftfhadictlsekerqikkqtalvelvkhkpkatkeqlkavmddfaafvekcckaddketcfaeegkklvaasqaalgl
[1021]
seq id no:97(人血清白蛋白(hsa)，变体2)
[1022]
rgvfrrdahksevahrfkdlgeenfkalvliafaqylqqcpfedhvklvnevtefaktcvadesaencdkslhtlfgdklctvatlretygemadccakqepernecflqhkddnpnlprlvrpevdvmctafhdneetflkkylyeiarrhpyfyapellffakrykaafteccqaadkaacllpkldelrdegkassakqrlkcaslqkfgerafkawavarlsqrfpkaefaevsklvtdltkvhtecchgdllecaddradlakyicenqdsissklkeccekpllekshciaevendempadlpslaadfveskdvcknyaeakdvflgmflyeyarrhpdysvvlllrlaktyettlekccaaadphecyakvfdefkplveepqnlikqncelfeqlgeykfqnallvrytkkvpqvstptlvevsrnlgkvgskcckhpeakrmpcaedylsvvlnqlcvlhektpvsdrvtkccteslvnrrpcfsalevdetyvpkefnaetftfhadictlsekerqikkqtalvelvkhkpkatkeqlkavmddfaafvekcckaddketcfaeegkklvaasqaalgl
[1023]
seq id no:98(小鼠血清白蛋白(msa))
[1024]
rgvfrreahkseiahryndlgeqhfkglvliafsqylqkcsydehaklvqevtdfaktcvadesaancdkslhtlfgdklcaipnlrenygeladcctkqepernecflqhkddnpslppferpeaeamctsfkenpttfmghylhevarrhpyfyapellyyaeqyneiltqccaeadkescltpkldgvkekalvssvrqrmkcssmqkfgerafkawavarlsqtfpnadfaeitklatdltkvnkecchgdllecaddraelakymcenqatissklqtccdkpllkkahclsevehdtmpadlpaiaadfvedqevcknyaeakdvflgtflyeysrrhpdysvslllrlakkyeatlekccaeanppacygtvlaefqplveepknlvktncdlyeklgeygfqnailvrytqkapqvstptlveaarnlgrvgtkcctlpedqrlpcvedylsailnrvcllhektpvsehvtkccsgslverrpcfsaltvdetyvpkefkaetftfhsdictlpekekqikkqtalaelvkhkpkataeqlktvmddfaqfldtcckaadkdtcfstegpnlvtrckdala
[1025]
白蛋白的缀合
[1026]
本发明的白蛋白可缀合于(例如，借助于共价键)任何本发明化合物(例如，借助于rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体的接头部分)。所述白蛋白可通过本领域技术人员熟知用于产生小分子-蛋白缀合物的任何方法缀合于任何本发明化合物。此可包括共价缀合于溶剂暴露氨基酸，诸如溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸。例如，人血清白蛋白可通过共价连接于对应于seq id no:96的cys34或seq id no:97的cys40的硫原子而缀合于本发明化合物。
[1027]
本发明的白蛋白可借助于位于所述白蛋白的c端或n端的10个氨基酸残基内的氨基酸缀合于任何本发明化合物。白蛋白可包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20个或20个以上氨基酸的c端或n端多肽融合。所述c端或n端多肽融合可包括一个或多个溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基，所述残基可用于共价缀合本发明化合物(例如，缀合于rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)。
[1028]
本发明的白蛋白包括已被工程改造以包括一个或多个溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的任何白蛋白，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述白蛋白将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。
[1029]
用于产生包括一个或多个缀合胜任半胱氨酸残基的经工程改造白蛋白变体的例示性方法提供于美国专利申请号2017/0081389中，所述申请以引用的方式整体并入本文中。简单来说，优选白蛋白变体是包括单一、溶剂暴露、未配对(例如，游离)半胱氨酸残基，因此使得接头能够位点特异性缀合于所述半胱氨酸残基的那些变体。
[1030]
已被工程改造以使得能够化学缀合于溶剂暴露、未配对半胱氨酸残基的白蛋白包括以下白蛋白变体：
[1031]
(a)在对应于seq id no:96的l585、d1、a2、d562、a364、a504、e505、t79、e86、d129、d549、a581、d121、e82、s270、q397及a578中任一者的氨基酸残基处由半胱氨酸取代非半胱氨酸氨基酸残基的白蛋白；
[1032]
(b)在邻近对应于seq id no:96的l585、d1、a2、d562、a364、a504、e505、t79、e86、d129、d549、a581、d121、e82、s270、q397及a578中任一者的氨基酸残基的n端或c端侧的位置处具有半胱氨酸插入的白蛋白；
[1033]
(c)经工程改造以具有未配对半胱氨酸的白蛋白，其在对应于seq id no:96的c369、c361、c91、c177、c567、c316、c75、c169、c124或c558中任一者的残基处具有游离硫醇基团，且所述白蛋白可由或不由对应于seq id no:96的c360、c316、c75、c168、c558、c361、c91、c124、c169或c567的残基的缺失或取代而生成；以及/或者
[1034]
(d)添加半胱氨酸至白蛋白的n端或c端。
[1035]
在本发明的一些实施方案中，(a)、(b)、(c)及/或(d)的取代、缺失、添加或插入事件的净结果是所述多肽序列的缀合胜任半胱氨酸残基的数目相对于亲本白蛋白序列有所增加。在本发明的一些实施方案中，(a)、(b)、(c)及/或(d)的取代、缺失、添加或插入事件的净结果是所述多肽序列的缀合胜任半胱氨酸残基的数目为1，因此使得能够位点特异性缀合。
[1036]
优选白蛋白变体也包括具有单一溶剂暴露赖氨酸残基，因此使得接头能够位点特异性缀合于所述赖氨酸残基的白蛋白。所述变体可通过工程改造白蛋白，包括任何前述方法(例如，插入、缺失、取代或c端或n端融合)来产生。
[1037]
白蛋白结合肽
[1038]
生物活性化合物与白蛋白结合肽的缀合可改变所述生物活性化合物的药效，包括组织摄取、渗透及扩散的改变。在优选实施方案中，如与单独本发明化合物相比，白蛋白结合肽与所述化合物(例如，rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体，借助于接头)的缀合会增加所述化合物的功效或减少毒性。
[1039]
本发明的白蛋白结合肽包括具有5至50个(例如，5至40个、5至30个、5至20个、5至15个、5至10个、10至50个、10至30个或10至20个)氨基酸残基的氨基酸序列的任何多肽，其对白蛋白(诸如本文所述的任何白蛋白)具有亲和力且具有结合所述白蛋白的功能。优选地，白蛋白结合肽缀合于天然存在的血清白蛋白，最优选地人血清白蛋白。白蛋白结合肽可具有不同起源，例如合成、人、小鼠或大鼠。本发明的白蛋白结合肽包括已被工程改造以包括一个或多个(例如，两个、三个、四个或五个)溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的白蛋白结合肽，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述白蛋白结合肽将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。白蛋白结合肽可仅包括天然存在的氨基酸残基，或可包括一个或多个非天然存在的氨基酸残基。在包括时，非天然存在的氨基酸残基(例如，非天然存在的氨基酸残基的侧链)可用作用于本发明化合物(例如，rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的附接点。本发明的白蛋白结合肽可为线性或环状的。本发明的白蛋白结合肽包括本领域技术人员已知的任何白蛋白结合肽，其实例提供于本文中。
[1040]
白蛋白结合肽及包括白蛋白结合肽的缀合物优选地以如下亲和力结合白蛋白(例如，人血清白蛋白)，所述亲和力的特征在于小于约100μm，优选地小于约100nm，且最优选地不会实质上结合其他血浆蛋白质的解离常数kd。所述化合物的特定实例为线性或环状肽，其长度优选地在约10个与20个氨基酸残基之间，任选在n端或c端或所述两端处经修饰。
[1041]
白蛋白结合肽包括线性及环状肽，其包括以下通式，其中xaa为任何氨基酸：
[1042]
seq id no:101
[1043]
xaa-xaa-cys-xaa-xaa-xaa-xaa-xaa-cys-xaa-xaa-phe-cys-xaa-asp-trp-pro-xaa-xaa-xaa-ser-cys
[1044]
seq id no:102
[1045]
val-cys-tyr-xaa-xaa-xaa-ile-cys-phe
[1046]
seq id no:103
[1047]
cys-tyr-xaa-pro-gly-xaa-cys
[1048]
seq id no:104
[1049]
asp-xaa-cys-leu-pro-xaa-trp-gly-cys-leu-trp
[1050]
seq id no:105
[1051]
trp-cys-asp-xaa-xaa-leu-xaa-ala-xaa-asp-leu-cys
[1052]
seq id no:106
[1053]
asp-leu-val-xaa-leu-gly-leu-glu-cys-trp
[1054]
本发明的白蛋白结合肽进一步包括以下肽序列中任一者，其可为线性或环状的：
[1055][1056]
seq id no:101-120的白蛋白结合肽可进一步包括n端处的额外氨基酸(xaa)x及/或c端处的额外氨基酸(xaa)z，其中xaa为任何氨基酸且x及z为大于或等于零的整数，一般地小于100，优选地小于10且更优选地为0、1、2、3、4或5。
[1057]
进一步例示性白蛋白结合肽提供于美国专利申请号2005/0287153中，所述申请以引用的方式整体并入本文中。
[1058]
白蛋白结合肽的缀合
[1059]
本发明的白蛋白结合肽可缀合于(例如，借助于共价键)任何本发明化合物(例如，借助于rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体的接头部分)。所述白蛋白结合肽可通过本领域技术人员已知用于产生肽-小分子缀合物的任何方法缀合于任何本发明化合物。此可包括共价缀合于氨基酸残基(诸如半胱氨酸、赖氨酸或非天然氨基酸)的侧链基团。或者，共价缀合可出现于c端(例如，缀合于c端羧酸，或缀合于c端残基的侧链基团)或n端(例如，缀合于n端氨基，或缀合于n端氨基酸的侧链基团)。
[1060]
v.接头
[1061]
接头是指本文所述缀合物中的两种或更多种组分之间(例如，本文所述的缀合物中的两种rsv f蛋白抑制剂之间、本文所述的缀合物中的rsv f蛋白抑制剂与fc结构域或白蛋白之间及本文所述的缀合物中的两种rsv f蛋白抑制剂的二聚体与fc结构域或白蛋白之间)的连接。
[1062]
具有共价连接于rsv f蛋白抑制剂二聚体的fc结构域或白蛋白的缀合物中的接头
[1063]
在如本文所述的含有共价连接于一种或多种rsv f蛋白抑制剂二聚体的fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物中，所述缀合物中的接头(例如，l或l’)可为分支链结构。如本文进一步描述，本文所述的缀合物中的接头(例如，l或l’)可为多价结构，例如分别具有两个或三个臂的二价或三价结构。在一些实施方案中，当所述接头具有三个臂时，所述臂中的两者可附接至第一及第二rsv f蛋白抑制剂且第三臂可附接至fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，当所述接头具有两个臂时，一个臂可附接至fc结构域或白蛋白且另一臂可附接至两种rsv f蛋白抑制剂之一。在其他实施方案中，具有两个臂的接头可用于将两种rsv f蛋白抑制剂附接到含有共价连接于一种或多种rsv f蛋白抑制剂二聚体的fc结构域或白蛋白的缀合物上。
[1064]
在一些实施方案中，具有共价连接于一种或多种rsv f蛋白抑制剂二聚体的fc结构域或白蛋白的缀合物中的接头由式(d-l-i)描述：
[1065][1066]
其中la由式g
a1-(z
a1
)
g1-(y
a1
)
h1-(z
a2
)
i1-(y
a2
)
j1-(z
a3
)
k1-(y
a3
)
l1-(z
a4
)
m1-(y
a4
)
n1-(z
a5
)o
1-g
a2
描述；lb由式g
b1-(z
b1
)
g2-(y
b1
)
h2-(z
b2
)
i2-(y
b2
)
j2-(z
b3
)
k2-(y
b3
)
l2-(z
b4
)
m2-(y
b4
)
n2-(z
b5
)o
2-g
b2
描述；lc由式g
c1-(z
c1
)
g3-(y
c1
)
h3-(z
c2
)
i3-(y
c2
)
j3-(z
c3
)
k3-(y
c3
)
l3-(z
c4
)
m3-(y
c4
)
n3-(z
c5
)o
3-g
c2
描述；g
a1
是附接至式(d-l-i)中的qi的键；g
a2
是附接至第一rsv f蛋白抑制剂(例如，a1)的键；g
b1
是附接至式(d-l-i)中的qi的键；g
b2
是附接至第二rsv f蛋白抑制剂(例如，a2)的键；g
c1
是附接至式(d-l-i)中的qi的键；g
c2
是附接至fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的键或能够与缀合于e的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪)；z
a1
、z
a2
、z
a3
、z
a4
、z
a5
、z
b1
、z
b2
、z
b3
、z
b4
、z
b5
、z
c1
、z
c2
、z
c3
、z
c4
及z
c5
中每一者独立地为任选取代的c1-c20亚烷基、任选取代的c1-c20亚杂烷基、任选取代的c2-c20亚烯基、任选取代的c2-c20亚杂烯基、任选取代的c2-c20亚炔基、任选取代的c2-c20亚杂炔基、任选取代的c3-c20亚环烷基、任选取代的c
2-c
20
亚杂环烷基、任选取代的c4-c20亚环烯基、任选取代的c4-c20亚杂环烯基、任选取代的c8-c20亚环炔基、任选取代的c8-c20亚杂环炔基、任选取代的c5-c15亚芳基或任选取代的c2-c15亚杂芳基；y
a1
、y
a2
、y
a3
、y
a4
、y
b1
、y
b2
、y
b3
、y
b4
、y
c1
、y
c2
、y
c3
及y
c4
中每一者独立地为o、s、nri、p、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；ri为h、任选取代的c1-c20烷基、任选取代的c1-c20杂烷基、任选取代的c2-c20烯基、任选取代的c2-c20杂烯基、任选取代的c2-c20炔基、任选取代的c2-c20杂炔基、任选取代的c3-c20环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c4-c20环烯基、任选取代的c4-c20杂环烯基、任选取代的c8-c20环炔基、任选取代的c8-c20杂环炔基、任选取代
的c5-c15芳基或任选取代的c2-c15杂芳基；g1、h1、i1、j1、k1、l1、m1、n1、o1、g2、h2、i2、j2、k2、l2、m2、n2、o2、g3、h3、i3、j3、k3、l3、m3、n3及o3中的每一者独立地为0或1；q为氮原子、任选取代的c1-c20亚烷基、任选取代的c1-c20亚杂烷基、任选取代的c2-c20亚烯基、任选取代的c2-c20亚杂烯基、任选取代的c2-c20亚炔基、任选取代的c2-c20亚杂炔基、任选取代的c3-c20亚环烷基、任选取代的c
2-c
20
亚杂环烷基、任选取代的c4-c20亚环烯基、任选取代的c4-c20亚杂环烯基、任选取代的c8-c20亚环炔基、任选取代的c8-c20亚杂环炔基、任选取代的c5-c15亚芳基或任选取代的c2-c15亚杂芳基。
[1067]
在一些实施方案中，任选取代包括用peg取代。peg具有重复单元结构(-ch2ch2o-)n，其中n为2至100的整数。聚乙二醇可选自peg2至peg
100
中任一者(例如，peg2、peg3、peg4、peg5、peg
5-peg
10
、peg
10-peg
20
、peg
20-peg
30
、peg
30-peg
40
、peg
50-peg
60
、peg
60-peg
70
、peg
70-peg
80
、peg
80-peg
90
、peg
90-peg
100
)。
[1068]
在一些实施方案中，lc可具有两个附接至fc结构域的点(例如，两个g
c2
)。
[1069]
在一些实施方案中，l包括聚乙二醇(peg)接头。peg接头包括具有重复单元结构(-ch2ch2o-)n的接头，其中n为2至100的整数。聚乙二醇接头可共价接合rsv f蛋白抑制剂及e(例如，在式(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合第一rsv f蛋白抑制剂及第二rsv f蛋白抑制剂(例如，在式(d-i)-(d-iv)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合rsv f蛋白抑制剂二聚体及e(例如，在式(d-i)-(d-iv)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可选自peg2至peg
100
中任一者(例如，peg2、peg3、peg4、peg5、peg
5-peg
10
、peg
10-peg
20
、peg
20-peg
30
、peg
30-peg
40
、peg
50-peg
60
、peg
60-peg
70
、peg
70-peg
80
、peg
80-peg
90
、peg
90-peg
100
)。在一些实施方案中，lc包括peg接头，其中lc共价附接至qi及e中每一者。
[1070]
可用于本文所述的缀合物的式(d-l-i)接头包括但不限于
[1071]
[1072]
[1073]
[1074]
[1075]
[1076]
[1077]
[1078]
[1079]
[1080][1081]
其中z1及z2各自独立地为1至20的整数；且r9选自h、c1-c20烷基、c3-c20环烷基、c
2-c
20
杂环烷基；c5-c15芳基及c2-c15杂芳基。
[1082]
式(d-l-i)接头也可包括以下中任一者：
[1083]
[1084]
[1085][1086]
具有共价连接于rsv f蛋白抑制剂单体的fc结构域或白蛋白的缀合物中的接头
[1087]
在如本文所述的含有共价连接于一种或多种rsv f蛋白抑制剂单体的fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物中，所述缀合物中的接头(例如，l或l’)可为具有两个臂的二价结构。二价接头中的一个臂可附接至rsv f蛋白抑制剂单体且另一臂可附接至fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，本文所述的缀合物中的一种或多种rsv f蛋白抑制剂单体可各自独立地连接于fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。
[1088]
在一些实施方案中，接头由式(m-l-i)描述：
[1089]j1-(q1)
g-(t1)
h-(q2)
i-(t2)
j-(q3)
k-(t3)
l-(q4)
m-(t4)
n-(q5)
o-j2[1090]
其中j1是附接至rsv f蛋白抑制剂的键；j2是附接至fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的键或能够与缀合于fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四氮烯)；q1、q2、q3、q4及q5中每一者独立地为任选取代的c1-c20亚烷基、任选取代的c1-c20亚杂烷基、任选取代的c2-c20亚烯基、任选取代的c2-c20亚杂烯基、任选取代的c2-c20亚炔基、任选取代的c2-c20亚杂炔基、任选取代的c3-c20亚环烷基、任选取代的c
2-c
20
亚杂环烷基、任选取代的c4-c20亚环烯基、任选取代的c4-c20亚杂环烯基、任选取代的c8-c20亚环炔基、任选取代的c8-c20亚杂环炔基、任选取代的c5-c15亚芳基或任选取代的c2-c15亚杂芳基；t1、t2、t3、t4中的每一者独立地为o、s、nri、p、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；ri为h、任选取代的c1-c20烷基、任选取代的c1-c20杂烷基、任选取代的c2-c20烯基、任选取代的c2-c20杂烯基、任选取代的c2-c20炔基、任选取代的c2-c20杂炔基、任选取代的c3-c20环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c4-c20环烯基、任选取代的c4-c20杂环烯基、任选取代的c8-c20环炔基、任选取代的c8-c20杂环炔基、任选取代的c5-c15芳基或任选取代的c2-c15杂芳基；且g、h、i、j、k、l、m、n及o各自独立地为0或1。
[1091]
在一些实施方案中，任选取代包括用聚乙二醇(peg)取代。peg具有重复单元结构(-ch2ch2o-)n，其中n为2至100的整数。聚乙二醇可选自peg2至peg
100
中任一者(例如，peg2、peg3、peg4、peg5、peg
5-peg
10
、peg
10-peg
20
、peg
20-peg
30
、peg
30-peg
40
、peg
50-peg
60
、peg
60-peg
70
、peg
70-peg
80
、peg
80-peg
90
、peg
90-peg
100
)。
[1092]
在一些实施方案中，j2可具有两个附接至fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的点(例如，两个j2)。
[1093]
可用于本文所述的缀合物的式(m-l-i)接头包括但不限于
[1094][1094][1095]
其中d为1至20的整数(例如，d为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
[1096]
可用于本文所述的缀合物的式(m-l-i)接头包括但不限于
[1097]
[1098][1099]
其中每个y独立地选自-o-、-s-、-r
8-、(-o(c＝o)nr
8-)、(-o(c＝s)nr
8-)、(-o(c＝o)o-)、(-o(c＝o)-)、(-nh(c＝o)o-)、(-nh(c＝o)-)、(-nh(c＝nh)-)、(-nh(c＝o)nr
8-)、(-nh(c＝nh)nr
8-)、(-nh(c＝s)nr
8-)、(-nh(c＝s)-)、(-och2(c＝o)nr
8-)、(-nh(so2)-)、(-nh(so2)nr
8-)、(-or
9-)、(-nr
9-)、(-sr
9-)、(-r9nh(c＝o)-)、(-r9or9c(＝o)nh-)、(-ch2nh(c＝o)-)、(-ch2och2(c＝o)nh-)、(-(c＝nr8)nh-)、(-nh(so2)-)、(-(c＝o)nh-)、(-c(＝o)-)、(-c(nr8)-)或(-r9c(＝o)-)；
[1100]
每个r8独立地选自h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
1-c
20
亚烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基及任选取代的c
2-c
15
杂
芳基；
[1101]
每个r9独立地选自任选取代的c
1-c
20
亚烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基及任选取代的c
2-c
15
杂芳基；且
[1102]
d、e、y1及x1中的每一者独立地为1至26的整数(例如，d为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26)。
[1103]
连接基团
[1104]
在一些实施方案中，接头提供此处所述的缀合物中的rsv f蛋白抑制剂与fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽之间或者本文所述的缀合物中的两种rsv f蛋白抑制剂之间的空间、刚性及/或柔性。在一些实施方案中，接头可为键，例如共价键，例如酰胺键、二硫键、c-o键、c-n键、n-n键、c-s键或由化学反应(例如，化学缀合)产生的任何种类的键。在一些实施方案中，接头(如式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者所示的l或l’)包括不超过250个原子(例如，1-2、1-4、1-6、1-8、1-10、1-12、1-14、1-16、1-18、1-20、1-25、1-30、1-35、1-40、1-45、1-50、1-55、1-60、1-65、1-70、1-75、1-80、1-85、1-90、1-95、1-100、1-110、1-120、1-130、1-140、1-150、1-160、1-170、1-180、1-190、1-200、1-210、1-220、1-230、1-240或1-250个原子；250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个原子)。在一些实施方案中，接头(l或l)包括不超过250个非氢原子(例如，1-2、1-4、1-6、1-8、1-10、1-12、1-14、1-16、1-18、1-20、1-25、1-30、1-35、1-40、1-45、1-50、1-55、1-60、1-65、1-70、1-75、1-80、1-85、1-90、1-95、1-100、1-110、1-120、1-130、1-140、1-150、1-160、1-170、1-180、1-190、1-200、1-210、1-220、1-230、1-240或1-250个非氢原子；250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个非氢原子)。在一些实施方案中，接头(l或l)的骨架包括不超过250个原子(例如，1-2、1-4、1-6、1-8、1-10、1-12、1-14、1-16、1-18、1-20、1-25、1-30、1-35、1-40、1-45、1-50、1-55、1-60、1-65、1-70、1-75、1-80、1-85、1-90、1-95、1-100、1-110、1-120、1-130、1-140、1-150、1-160、1-170、1-180、1-190、1-200、1-210、1-220、1-230、1-240或1-250个原子；250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个原子)。接头的“骨架”是指接头中的原子，其合起来形成自缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分的最短路径。接头的骨架中的原子直接地参与连接所述缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分。例如，附接于接头的骨架中的碳的氢原子未被视为直接地参与连接所述缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分。
[1105]
可用于制备接头(l或l’)的分子包括至少两个官能团，例如两个羧酸基。在三价接头的一些实施方案中，接头的两个臂可含有两种二羧酸，其中第一羧酸可与所述缀合物中的第一rsv f蛋白抑制剂形成共价连接且第二羧酸可与所述缀合物中的第二rsv f蛋白抑制剂形成共价连接且所述接头的第三臂可与所述缀合物中的fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽形成共价连接(例如，c-o键)。在二价接头的一些实施方案中，所述二价接头可含有两种羧酸，其中第一羧酸可与所述缀合物中的一种组分(例如，rsv f蛋白抑制剂)形成共价连接且第二羧酸可与所述缀合物中的另一组分(例如，fc结构域单
体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽)形成共价连接(例如，c-s键或c-n键)。
[1106]
在一些实施方案中，二羧酸分子可用作接头(例如，二羧酸接头)。例如，在含有共价连接于一种或多种rsv f蛋白抑制剂二聚体的fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物中，二羧酸分子中的第一羧酸可与第一rsv f蛋白抑制剂的羟基或氨基形成共价连接且第二羧酸可与第二rsv f蛋白抑制剂的羟基或氨基形成共价连接。
[1107]
可用于形成接头的二羧酸分子的实例包括但不限于：
[1108]
[1109]
及
[1110]
其中n为1至20的整数(例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
[1111]
可用于形成接头的二羧酸分子的其他实例包括但不限于：
[1112]
[1113]
及
[1114]
在一些实施方案中，二羧酸分子(诸如本文所述者)可进一步官能化以含有一个或多个额外官能团。二羧酸可进一步官能化，例如以提供与fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的附接点(例如，借助于接头，诸如peg接头)。
[1115]
在一些实施方案中，当所述rsv f蛋白抑制剂附接至fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽时，连接基团可包括有包括由1至25个原子间隔的羧酸部分及氨基部分的部分。所述连接基团的实例包括但不限于：
[1116]
[1117][1118]
其中n为1至20的整数(例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
[1119]
在一些实施方案中，可包含包括羧酸部分及氨基部分的部分的连接基团(诸如本文所述者)可进一步官能化以含有一个或多个额外官能团。所述连接基团可进一步官能化，例如以提供与fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的附接点(例如，借助于接头，诸如peg接头)。
[1120]
在一些实施方案中，当所述rsv f蛋白抑制剂附接至fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽时，连接基团可包括有包括由1至25个原子间隔的两个或氨基部分(例如，二氨基部分)的部分。所述连接基团的实例包括但不限于：
[1121]
[1122][1123]
其中n为1至20的整数(例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
[1124]
在一些实施方案中，可包括二氨基部分的连接基团(诸如本文所述者)可进一步官能化以含有一个或多个额外官能团。所述二氨基连接基团可进一步官能化，例如以提供与fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的附接点(例如，借助于接头，诸如peg接头)。
[1125]
在一些实施方案中，含有叠氮基的分子可用于形成接头，其中所述叠氮基可与炔进行环加成以形成1,2,3-三唑连接。在一些实施方案中，含有炔基的分子可用于形成接头，其中所述炔基可与叠氮化物进行环加成以形成1,2,3-三唑连接。在一些实施方案中，含有马来酰亚胺基的分子可用于形成接头，其中所述马来酰亚胺基可与半胱氨酸反应以形成c-s连接。在一些实施方案中，含有一个或多个卤烷基的分子可用于形成接头，其中所述卤烷基可与rsv f蛋白抑制剂形成共价连接，例如c-n及c-o连接。
[1126]
在一些实施方案中，接头(l或l’)可包括源于例如合成聚合物(例如，聚乙二醇(peg)聚合物)的合成基团。在一些实施方案中，接头可包括一个或多个氨基酸残基。在一些实施方案中，接头可为氨基酸序列(例如，1-25个氨基酸、1-10个氨基酸、1-9个氨基酸、1-8个氨基酸、1-7个氨基酸、1-6个氨基酸、1-5个氨基酸、1-4个氨基酸、1-3个氨基酸、1-2个氨基酸或1个氨基酸的序列)。在一些实施方案中，接头(l或l’)可包括一个或多个任选取代的c1-c20亚烷基、任选取代的c1-c20亚杂烷基(例如，peg单元)、任选取代的c2-c20亚烯基(例
如，c2亚烯基)、任选取代的c2-c20亚杂烯基、任选取代的c2-c20亚炔基、任选取代的c2-c20亚杂炔基、任选取代的c3-c20亚环烷基(例如，亚环丙烷、亚环丁烷)、任选取代的c
2-c
20
亚杂环烷基、任选取代的c4-c20亚环烯基、任选取代的c4-c20亚杂环烯基、任选取代的c8-c20亚环炔基、任选取代的c8-c20亚杂环炔基、任选取代的c5-c15亚芳基(例如，c6亚芳基)、任选取代的c2-c15亚杂芳基(例如，咪唑、吡啶)、o、s、nri(ri为h、任选取代的c1-c20烷基、任选取代的c1-c20杂烷基、任选取代的c2-c20烯基、任选取代的c2-c20杂烯基、任选取代的c2-c20炔基、任选取代的c2-c20杂炔基、任选取代的c3-c20环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c4-c20环烯基、任选取代的c4-c20杂环烯基、任选取代的c8-c20环炔基、任选取代的c8-c20杂环炔基、任选取代的c5-c15芳基或任选取代的c2-c15杂芳基)、p、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基。
[1127]
缀合化学
[1128]
rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体(例如，在式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物中)可例如借助于接头，通过本领域技术人员已知的任何标准缀合化学缀合于fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。特定地涵盖以下缀合化学，例如关于使peg接头(例如，官能化peg接头)缀合于fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。
[1129]
使用接头使缀合物中的两种或更多种组分共价缀合可使用熟知有机化学合成技术及方法来实现。两种组分上的互补官能团可彼此反应以形成共价键。互补反应性官能团的实例包括但不限于例如马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪。与多肽(例如，fc结构域单体、fc结构域、fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽)的位点特异性缀合可使用本领域中已知的技术来实现。用于使小分子位点特异性缀合于fc结构域的例示性技术提供于agarwall.p.,等人bioconjugate chem.26:176-192(2015)中。
[1130]
能够与氨基反应的官能团的其他实例包括例如烷基化剂及酰化剂。代表性烷基化剂包括：(i)α-卤基乙酰基，例如xch2co-(其中x＝br、cl或i)；(ii)n-马来酰亚胺基，其可经由michael类型反应或经由通过与环羰基加成进行酰化而与氨基反应；(iii)芳基卤化物，例如硝基卤基芳族基团；(iv)烷基卤化物；(v)能够与氨基形成席夫氏碱(schiff’s base)的醛或酮；(vi)可与氨基、巯基或酚式羟基反应的环氧化物，例如表氯醇及双环氧乙烷；(vii)含氯s-三嗪，其可对诸如氨基、巯基及羟基的亲核试剂具反应性；(viii)氮丙啶，其可通过开环对诸如氨基的亲核试剂具反应性；(ix)方酸二乙酯；及(x)α-卤基烷基醚。
[1131]
氨基反应性酰化基团的实例包括例如(i)异氰酸酯及异硫氰酸酯；(ii)磺酰氯；(iii)酰基卤；(iv)活性酯，例如硝基苯酯或n-羟基丁二酰亚胺酯；(v)酸酐，例如混合、对称或n-羧基酐；(vi)酰基叠氮化物；及(vii)亚氨酸酯。醛及酮可与胺反应以形成席夫氏碱，席夫氏碱可通过还原胺化稳定化。
[1132]
应理解，某些官能团可在反应之前转化为其他官能团，例如以赋予额外反应性或选择性。适用于此目的的实例包括使用诸如二羧酸酐的试剂使胺转化为羧基；使用诸如n-乙酰基高半胱氨酸硫内酯、s-乙酰基巯基丁二酸酐、2-亚氨基硫杂环戊烷或含硫醇的丁二酰亚胺基衍生物的试剂使胺转化为硫醇；使用诸如α-卤基乙酸酯的试剂使硫醇转化为羧基；使用诸如乙烯亚胺或2-溴乙胺的试剂使硫醇转化为胺；使用诸如碳化二亚胺的试剂、随
后二胺使羧基转化为胺；及使用诸如甲苯磺酰氯的试剂、随后用硫代乙酸酯进行酯基转移且用乙酸钠水解为硫醇而使醇转化为硫醇。
[1133]
在一些实施方案中，本发明的接头(例如l或l’，诸如d-l-i的lc)缀合(例如，通过本文所述的任何方法)于e(例如，fc结构域或白蛋白)。在本发明的优选实施方案中，所述接头借助于以下进行缀合：(a)硫脲连接(即，-nh(c＝s)nh-)于e的赖氨酸；(b)氨基甲酸酯连接(即，-nh(c＝o)-o)于e的赖氨酸；(c)在赖氨酸与e之间通过还原胺化实现的胺连接(即，-nhch2)；(d)酰胺(即，-nh-(c＝o)ch2)于e的赖氨酸；(e)接头的马来酰亚胺至e的半胱氨酸之间的半胱氨酸-马来酰亚胺缀合；(f)在接头与e的碳水化合物(例如，fc结构域单体或fc结构域的糖基)之间通过还原胺化实现的胺连接(即，-nhch2)；(g)再桥接半胱氨酸缀合，其中所述接头缀合于e的两个半胱氨酸；(h)在接头与e的碳水化合物(例如，fc结构域单体或fc结构域的糖基)之间的肟连接；(i)在接头与e的氨基酸残基之间的肟连接；(j)在接头与e之间的叠氮基连接；(k)接头与e的直接酰化；或(l)在接头与e之间的硫醚连接。
[1134]
在一些实施方案中，接头缀合于e，其中所述连接包括结构-nh(c＝nh)x-，其中x为o、hn或键。在一些实施方案中，接头缀合于e，其中在接头的剩余部分与e之间的连接包括结构-nh(c＝o)nh-。
[1135]
在一些实施方案中，接头缀合于e，其中连接包括结构-r9or9c(＝o)nh-，其中r9为h、任选取代的c
1-c
20
烷基、任选取代的c
3-c
20
环烷基、任选取代的c
2-c
20
杂环烷基、任选取代的c
5-c
15
芳基或任选取代的c
2-c
15
杂芳基。在一些实施方案中，接头缀合于e，其中在接头的剩余部分与e之间的连接包括结构
–
ch2och2c(＝o)nh-。
[1136]
例示性连接策略(例如，用于使rsv f蛋白抑制剂单体或二聚体连接于e的方法，诸如借助于接头)进一步描绘于图1至4、15及16中。
[1137]
在一些实施方案中，接头(例如活性酯，例如硝基苯酯或n-羟基丁二酰亚胺酯或其衍生物(例如，官能化peg接头(例如，叠氮基-peg
2-peg
40-nhs酯)缀合于e，其中t(例如，dar)在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在这些情况下，e-(peg
2-peg
40
)-叠氮化物可经由点击缀合与具有末端炔接头(例如l或l’，诸如d-l-i的lc)的int反应。在点击缀合期间，铜催化的叠氮化物(例如，fc-(peg
2-peg
40
)-叠氮化物)与炔(例如，具有末端炔接头(例如l或l’，诸如d-l-i的lc的int)的反应形成5元杂原子环。在一些实施方案中，缀合于e的接头为末端炔且缀合于具有末端叠氮化物的int。e-(peg
2-peg
40
)-叠氮化物的制备的例示性制备描述于实施例2、3及12中。本领域技术人员应容易了解来自点击化学缀合的最终产物。
[1138]
例示性连接策略(例如，用于使神经氨酸酶抑制剂的单体或二聚体连接于e的方法，诸如借助于接头)进一步描绘于图1至4、15及16中。
[1139]
vi.组合疗法
[1140]
抗病毒剂
[1141]
在一些实施方案中，一种或多种抗病毒剂可与本文所述的缀合物(例如，式(1)、
(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)组合施用(例如，实质上同时施用(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)或在不同时间独立地施用)。
[1142]
在一些实施方案中，所述抗病毒剂是用于治疗rsv的抗病毒剂。例如，所述抗病毒剂可为病毒复制抑制剂、rsv f蛋白抑制剂、聚合酶抑制剂或融合蛋白抑制剂。所述抗病毒剂可靶向病毒或宿主受试者。用于与本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)组合使用来治疗rsv的抗病毒剂可选自普沙托韦、mdt 637、jnj 179。此外，普沙托韦、mdt 637、jnj179的衍生物(诸如文献中发现的那些)具有rsv f蛋白抑制剂活性且可与本文化合物组合用作rsv f蛋白抑制剂(参见例如，cockerill等人j.med.chem.62(7):3206-3227,2018)。
[1143]
抗病毒疫苗
[1144]
在一些实施方案中，本文所述的缀合物中任一者(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)与抗病毒疫苗(例如，在受试者中针对病毒引起免疫反应的组合物)组合施用。所述抗病毒疫苗可与所述缀合物实质上同时施用(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)，或可在所述缀合物之前或之后(例如，在1天、2天、5天、1周、2周、3周、1个月、2个月、6个月或12个月或更久时期内)经施用。
[1145]
在一些实施方案中，病毒疫苗包括在受试者中针对rsv a或rsv b引起免疫反应的免疫原。在一些实施方案中，疫苗作为鼻喷雾剂施用。
[1146]
vii.方法
[1147]
本文所述的方法包括例如进行保护以抵御或治疗受试者的病毒感染(例如，rsv感染)的方法及预防、稳定化或抑制病毒粒子的生长的方法。治疗受试者的病毒感染(例如，rsv感染)的方法包括向所述受试者施用本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)或其药物组合物。在一些实施方案中，病毒感染是由呼吸道合胞病毒(例如，rsv a或rsv b)引起的。在一些实施方案中，所述病毒感染是由抗性病毒株引起。预防、稳定化或抑制病毒粒子的生长或预防病毒的复制及扩散的方法包括使所述病毒或易经受病毒生长的位点与本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)或其药物组合物接触。
[1148]
此外，本文所述的方法也包括通过向受试者施用本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)来进行保护以抵御或治疗受试者的病毒感染的方法。在一些实施方案中，所述方法进一步包括向所述受试者施用抗病毒剂或抗病毒疫苗。
[1149]
本文所述的方法也包括通过向受试者施用(1)本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)及(2)抗病毒剂或抗病毒疫苗来进行保护以抵御或治疗所述受试者的病毒感染的方法。本文所述的方法也包括通过使病毒或易经受病毒生长的位点与(1)本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)及(2)抗病毒剂或抗病毒疫苗接触来预防、稳定化或抑制病毒粒子的生长或预防病毒的复制或扩散的方法。
[1150]
在一些实施方案中，首先施用本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)，随后单独施用抗病毒剂或抗病毒疫苗。在一些实施方案中，首先施用抗病毒剂或抗病毒疫苗，随后单独施用本文所述的缀合物。在一些实施方案
中，实质上同时施用本文所述的缀合物及抗病毒剂或抗病毒疫苗(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)。在一些实施方案中，首先施用本文所述的缀合物或抗病毒剂或抗病毒疫苗，随后实质上同时施用本文所述的缀合物及抗病毒剂或抗病毒疫苗(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)。在一些实施方案中，首先实质上同时施用本文所述的缀合物及抗病毒剂或抗病毒疫苗(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)，随后单独施用本文所述的缀合物或抗病毒剂或抗病毒疫苗。在一些实施方案中，当本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)及抗病毒剂或抗病毒疫苗合起来(例如，在同一或独立药物组合物中实质上同时，或在同一治疗方案中独立地)经施用时，所述缀合物及所述抗病毒剂或抗病毒疫苗中每一者对病毒复制的抑制可大于(例如，在较低浓度下出现)当在治疗方案中单独使用每一者时所述缀合物及所述抗病毒剂或抗病毒疫苗中每一者对病毒复制的抑制。
[1151]
viii.药物组合物及制剂
[1152]
本文所述的缀合物可被调配于用于本文所述的方法的药物组合物中。在一些实施方案中，本文所述的缀合物可单独被调配于药物组合物中。在一些实施方案中，本文所述的缀合物可与抗病毒剂或抗病毒疫苗组合被调配于药物组合物中。在一些实施方案中，所述药物组合物包括本文所述的缀合物(例如，由式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者描述的缀合物)及药学上可接受的载剂及赋形剂。
[1153]
所述药物组合物中可接受的载剂及赋形剂在所用的剂量及浓度下对接受者无毒。可接受的载剂及赋形剂可包括缓冲液，诸如磷酸盐、柠檬酸盐、hepes及tae；抗氧化剂，诸如抗坏血酸及蛋氨酸；防腐剂，诸如氯化六烃季铵、十八烷基二甲基苯甲基氯化铵、间苯二酚及苯扎氯铵；蛋白质，诸如人血清白蛋白、明胶、右旋糖苷及免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸残基，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、组氨酸及赖氨酸；及碳水化合物，诸如葡萄糖、甘露糖、蔗糖及山梨糖醇。
[1154]
其他赋形剂的实例包括但不限于抗粘剂、粘合剂、包衣、压缩助剂、崩解剂、染料、润肤剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣、调味剂、芳香剂、助流剂(流动增强剂)、润滑剂、吸附剂、悬浮或分散剂或甜味剂。例示性赋形剂包括但不限于：丁基化羟基甲苯(bht)、碳酸钙、磷酸钙(一氢)、硬脂酸钙、交联羧甲纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、交联聚维酮、半胱氨酸、乙基纤维素、明胶、羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露糖醇、蛋氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚维酮、预胶凝淀粉、对羟基苯甲酸丙酯、视黄醇棕榈酸酯、虫胶、二氧化硅、羧基甲基纤维素钠、柠檬酸钠、乙醇酸淀粉钠、山梨糖醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化钛、维他命a、维他命e、维他命c及木糖醇。
[1155]
本文中的缀合物可具有可离子化基团以便能够呈药学上可接受的盐形式制备。这些盐可为涉及无机或有机酸的酸加成盐，或所述盐在本文中的缀合物的酸性形式的情况下可由无机或有机碱制备。所述缀合物经常地呈药学上可接受的盐形式经制备或使用，所述药学上可接受的盐呈药学上可接受的酸或碱的加成产物形式经制备。合适的药学上可接受的酸及碱为本领域中熟知的，诸如用于形成酸加成盐的盐酸、硫酸、氢溴酸、乙酸、乳酸、柠檬酸或酒石酸，及用于形成碱式盐的氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化铵、咖啡因、多种胺等。用于制备适当盐的方法为本领域中充分确立的。
[1156]
代表性酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐及戊酸盐。代表性碱金属或碱土金属盐包括但不限于钠、锂、钾、钙及镁；以及无毒铵、季铵及胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺及乙胺。
[1157]
视施用途径及剂量而定，用于本文所述的方法中的本文中的缀合物或其药物组合物将被调配成合适药物组合物以允许容易递送。缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)或其药物组合物可被调配以肌肉内、静脉内(例如，呈无菌溶液形式且在适用于静脉内使用的溶剂系统中)、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、经表面、肿瘤内、经腹膜、皮下、结膜下、囊内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、经口(例如，片剂、胶囊、囊片、囊形片或糖浆)、经表面(例如，呈乳膏、凝胶、洗剂或软膏形式)、经局部、通过吸入、通过注射或通过输注(例如，连续输注、直接地浸泡靶标细胞的局部灌注、导管、灌洗、呈乳膏或脂质组合物形式)经施用。视施用途径而定，本文中的缀合物或其药物组合物可呈例如片剂、胶囊、丸剂、散剂、颗粒剂、悬浮液、乳液、溶液、凝胶(包括水凝胶)、糊剂、软膏、乳膏、膏药、灌药、渗透递送器件、栓剂、灌肠剂、可注射剂、植入物、喷雾剂、适用于离子导入递送的制剂或气雾剂的形式。所述组合物可根据常规药物规范进行调配。
[1158]
本文所述的缀合物可以本领域中已知的多种方式进行调配。关于用作人及动物受试者的治疗，本文所述的缀合物可被调配为药物或兽医学组合物。视待治疗的受试者(例如，人)、施用方式及所需治疗类型(例如，预防或疗法)而定，本文所述的缀合物以与这些参数一致的方式进行调配。所述技术的概述发现于remington:the science and practice of pharmacy,第22版,lippincott williams&wilkins(2012)；及encyclopedia of pharmaceutical technology,第4版,j.swarbrick及j.c.boylan,marcel dekker,new york(2013)中，所述文献各自以引用的方式并入本文中。
[1159]
调配物可以适用于全身性施用或表面或局部施用的方式经制备。全身性调配物包括经设计用于注射(例如，肌肉内、静脉内或皮下注射)的那些调配物，或可被制备用于经皮、经粘膜或经口施用。所述调配物一般将包括稀释剂以及在一些情况下佐剂、缓冲液及防腐剂。所述缀合物也可呈脂质体组合物形式或呈微乳液形式经施用。全身性施用也可包括相对非浸入性方法，诸如使用栓剂、经皮贴片、经粘膜递送及鼻内施用。经口施用也适用于本文中的缀合物。合适形式包括糖浆、胶囊及片剂，如本领域中应理解。
[1160]
所述药物组合物可呈可注射调配物形式非经肠施用。用于注射的药物组合物可使用无菌溶液或任何药学上可接受的液体作为媒介物进行调配。调配物可被制备为适用于在注射之前溶解或悬浮于液体中的固体形式或经制备为乳液。药学上可接受的媒介物包括但不限于无菌水、生理食盐水及细胞培养基(例如，杜氏改良伊格尔培养基(dmem)、α改良伊格
尔培养基(α-mem)、f-12培养基)。所述可注射组合物也可含有一定量的无毒辅助物质，诸如湿润或乳化剂、ph缓冲剂，诸如乙酸钠及山梨醇酐单月桂酸酯。调配方法为本领域中已知的，参见例如pharmaceutical preformulation and formulation,第2版,m.gibson,taylor&francis group,crc press(2009)。
[1161]
所述药物组合物可呈经口调配物形式经制备。用于经口使用的调配物包括含有活性成分与无毒药学上可接受的赋形剂的混合物的片剂。这些赋形剂可为例如惰性稀释剂或填充剂(例如，蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露糖醇、微晶纤维素、包括马铃薯淀粉在内的淀粉、碳酸钙、氯化钠、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠)；造粒及崩解剂(例如，包括微晶纤维素在内的纤维素衍生物、包括马铃薯淀粉在内的淀粉、交联羧甲纤维素钠、海藻酸盐或海藻酸)；粘合剂(例如，蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、阿拉伯胶、海藻酸、海藻酸钠、明胶、淀粉、预胶凝淀粉、微晶纤维素、硅酸镁铝、羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；及润滑剂、助流剂及抗粘剂(例如，硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸、二氧化硅、氢化植物油或滑石)。用于经口使用的调配物也可呈可咀嚼片剂形式，或呈硬明胶胶囊形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如，马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或呈软明胶胶囊形式，其中活性成分与水或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。散剂、颗粒剂及圆球粒可使用上文关于片剂及胶囊所提及的成分以常规方式使用例如混合器、流化床装置或喷雾干燥设备经制备。
[1162]
用于经口调配物的其他药学上可接受的赋形剂包括但不限于着色剂、调味剂、增塑剂、保湿剂及缓冲剂。用于经口使用的调配物也可呈可咀嚼片剂形式，或呈硬明胶胶囊形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如，马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或呈软明胶胶囊形式，其中活性成分与水或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。散剂、颗粒剂及圆球粒可使用上文关于片剂及胶囊所提及的成分以常规方式使用例如混合器、流化床装置或喷雾干燥设备经制备。
[1163]
本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)或其药物组合物的溶解或扩散控制释放可通过所述缀合物的片剂、胶囊、圆球粒或颗粒剂调配物的适当涂布，或通过将所述缀合物掺入至适当基质中来实现。控制释放包衣可包括上文所提及的涂布物质及/或例如虫胶、蜂蜡、葡萄糖蜡、蓖麻蜡、巴西棕榈蜡、硬脂醇、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、硬脂酸棕榈酸甘油酯、乙基纤维素、丙烯酸系树脂、dl-聚乳酸、乙酸丁酸纤维素、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、2-羟基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯水凝胶、1,3丁二醇、乙二醇甲基丙烯酸酯及/或聚乙二醇中的一者或多者。在控制释放基质调配物中，基质材料也可包括例如氢化甲基纤维素、巴西棕榈蜡及硬脂醇、卡伯波934、硅酮、三硬脂酸甘油酯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯及/或卤代碳氟化合物。
[1164]
所述药物组合物可如所需呈单位剂型形成。包括于所述药物组合物中的活性组分(例如，本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物))的量使得提供在指定范围内的合适剂量(例如，在0.01-100mg/kg体重范围内的剂量)。
[1165]
ix.施用途径及剂量
[1166]
在本文所述的任何方法中，本文中的缀合物可通过用于治疗或提供保护以抵御病
毒感染(例如，rsv感染)，或用于预防、稳定化或抑制病毒(例如，rsv病毒)的增殖或扩散的任何适当途径经施用。本文所述的缀合物可用药学上可接受的稀释剂、载剂或赋形剂施用至人、家养宠物、家畜或其他动物。在一些实施方案中，施用包括经肌肉内、静脉内(例如，呈无菌溶液形式且在适用于静脉内使用的溶剂系统中)、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、经表面、肿瘤内、经腹膜、皮下、结膜下、囊内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、经口(例如，片剂、胶囊、囊片、囊形片或糖浆)、经表面(例如，呈乳膏、凝胶、洗剂或软膏形式)、经局部、通过吸入、通过注射或通过输注(例如，连续输注、直接地浸泡靶标细胞的局部灌注、导管、灌洗、呈乳膏或脂质组合物形式)施用本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)或组合物中任一者。在一些实施方案中，若除了本文所述的缀合物以外也施用抗病毒剂，则所述抗病毒剂或其药物组合物也可以本文所述的施用途径中任一者经施用。
[1167]
本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)或其药物组合物的剂量取决于如下因素，包括施用途径、待治疗的疾病(例如，病毒感染的程度及/或病状)及物理特征，例如受试者的年龄、重量、一般健康状况。典型地，含于单一剂量内的所述缀合物或其药物组合物的量可为有效地预防、延迟或治疗病毒感染而不诱导显著毒性的量。药物组合物可包括介于0.01至500mg/kg范围内(例如，0.01、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg/kg)且在一更特定实施方案中介于约0.1至约30mg/kg范围内且在一更特定实施方案中介于约1至约30mg/kg范围内的剂量的本文所述的缀合物。在一些实施方案中，当本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)及抗病毒剂或抗病毒疫苗组合(例如，在同一或独立药物组合物中实质上同时，或在同一治疗方案中独立地)经施用时，本文所述的缀合物的所需剂量可低于若所述缀合物单独用于治疗方案中时所述缀合物的所需剂量。
[1168]
本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(d-i)-(d-iv)或(m-i)-(m-iv)中任一者的缀合物)或其药物组合物可例如每天、每周、每个月、每半年、每年一或多次(例如，1至10次或更多次；1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次)，或如医学上必要时经施用至有需要的受试者。剂量可以单一或多剂量方案经提供。施用之间的时间安排可在医学病状改良时减少，或在患者的健康状况下降时增加。施用的剂量及频率可由医师根据诸如感染程度及受试者的不同参数的常规因素来调适。
[1169]
实施例
[1170]
提出以下实施例以便向一般技术者提供可如何使用、制备及评估本文所述的组合物及方法的描述，且旨在仅例示本发明而不旨在限制被本发明者视为其发明的发明的范围。
[1171]
实施例1.制备fc构建体
[1172]
构成蛋白构建体的氨基酸(seq id no:1、3、5、7、9、12及14)的逆翻译通过固相合成来合成。寡核苷酸模板经克隆至pcdna3.1(life technologies,carlsbad,ca,usa)中的克隆位点bamhi及xhoi(new england biolabs,ipswich,ma,usa)处且包括源于人介白素-2或人白蛋白的信号序列。所述pcdna3.1质粒被转化至top10大肠杆菌细胞(lifetech)中。扩增dna，萃取，并使用hipure plasmid filter maxiprep试剂盒(lifetech)
纯化。所述质粒dna使用expifectamine
tm 293转染试剂盒(lifetech)根据制造商的方案被递送至hek-293细胞中。细胞经离心，过滤，且使用mabselect sure resin(ge healthcare,chicago,il,usa)纯化上清液。经纯化分子使用4-12％bis tris sds page凝胶通过将1-2μg每种分子装载至所述凝胶中且使用instant blue染色进行染色而经分析。每种凝胶包括具有经指示分子量标准的分子量梯。经还原及非还原泳道由“r”及“nr”表示。图5-11显示由分别具有seq id no:1、3、5、7、9、12及14的序列的fc结构域单体形成的fc结构域的非还原及还原sds-page。
[1173]
实施例2.用于合成叠氮基fc的一般程序
[1174]
制备dmf/pbs中的peg4-叠氮基nhs酯溶液(0.050m)：91.85mg peg4-叠氮基nhs酯在0℃下溶解于0.500ml dmf中且在0℃下通过添加pbs 1x缓冲液经稀释至4.635ml。使用此溶液，通过调节此peg4-叠氮基nhs酯pbs溶液的当量数来制备具有多种dar值的其他peg4-叠氮基fc。
[1175]
制备peg4-叠氮基fc：0.050m peg4-叠氮基nhs酯pbs缓冲溶液(1.803ml，90.13μmol，9.5当量)经添加到h-igg1 fc(seq id no:4)溶液(552.2mg在33.75ml的ph 7.4 pbs中，mw约58,200da，9.487μmol)中且混合物在环境温度下轻柔地经振荡持续2小时。所述溶液通过使用六个离心浓缩机(30,000mwco，15ml)经浓缩至约1.5ml的体积。粗混合物1:10稀释于pbs ph 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计三次。经浓缩fc-peg4-叠氮化物用ph 7.4 pbs 1x缓冲液稀释至33.75ml且准备用于点击缀合。经纯化材料使用nanodrop
tm uv可见光光谱仪(使用基于h-igg1(seq id no:4)的氨基酸序列计算的消光系数)来量化。产率是在纯化之后定量的。
[1176]
制备dmf/pbs中的0.05m叠氮基-乙酸nhs酯溶液：50.01mg的2-叠氮基乙酸nhs酯在0℃下溶解在dmf(2.445ml)中，且在0℃下用pbs(4.946ml)缓冲液稀释。使用此溶液，通过调节此叠氮基乙酸酯nhs酯溶液的当量数来制备具有多种dar值的其他叠氮基fc。
[1177]
制备叠氮基乙酸酯fc：0.05m叠氮基乙酸酯nhs酯pbs缓冲溶液(4.723ml，236.1μmol，12.6当量)经添加到h-igg1 fc溶液(552.2mg在47.92ml的ph 7.4 pbs中，mw约53360da，18.74μmol)中，接着混合物在环境温度下经振荡旋转持续2小时。所述溶液通过使用六个离心浓缩机(30,000mwco，15ml)经浓缩至约1.5ml的体积。粗混合物1:10稀释于pbs ph 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计三次。经浓缩叠氮基乙酸酯fc用ph 7.4 pbs缓冲液稀释至47.92ml。此材料使用nanodrop
tm uv可见光光谱仪使用基于h-igg1(seq id no:4)的氨基酸序列计算的消光系数来量化。产率是在纯化之后定量的。
[1178]
实施例3.合成重组小鼠血清白蛋白(msa)-peg4-叠氮化物
[1179]
peg4-叠氮基nhs酯(98％，81.7μmol，4.5当量，32.4mg在0.3ml的dmf中且用ph 7.4 pbs 1x缓冲溶液稀释至1.63ml)经添加到重组小鼠血清白蛋白(seq id no:71)溶液(1200mg在75.0ml的ph7.4 pbs中，mw约66,000da，18.2μmol)中且混合物在环境温度下轻柔地经振荡持续12小时。所述溶液使用离心浓缩机(30,000mwco)经浓缩至约1.5ml的体积。粗混合物1:10稀释于pbs ph 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计三次。用此洗涤程序移除小分子试剂。经浓缩msa-peg4-叠氮化物用ph 7.4 pbs 1x缓冲液稀释至75.0ml且准备用于点击缀合。经纯化材料使用nanodrop
tm uv可见光光谱仪(使用基于h-igg1的氨基酸序列计算的消光系数)来量化。产率是在纯化之后定量的。通过maldi测定，dar＝3.5。dar值
可通过类似于h-igg1 fc(实施例2)改变peg4-叠氮基nhs酯的当量数经调节。
[1180]
实施例4.合成int-1
[1181][1182]
步骤a.
[1183][1184]
向吡唑并嘧啶中间体(3.32g，10mmol，描述于pct公开wo2011163518a1)在无水thf(10ml)中的溶液中添加在二恶烷(10ml)中的4n hcl溶液。反应物变成凝胶状。反应物在室温下经搅拌持续1天，接着通过旋转蒸发经浓缩。残余物溶解在meoh(20ml)中且在45℃下经加热持续30分钟以驱动反应完成。混合物接着再次经浓缩且在高真空下进一步经干燥。粗产物无需进一步纯化继续用于后续步骤。产量2.7g，定量产率。通过lcms发现的离子：[m h]

＝233。
[1185]
步骤b.
[1186][1187]
向5-氯-2-甲烷磺酰胺基苯甲酸(499.4mg，2mmol)及hatu(798.4mg，2.1mmol)在无水dmf(4ml)中的溶液中添加dipea(520mg，4mmol)及步骤-a产物(537.6mg，2mmol)。反应混合物经搅拌持续30分钟，接着滴入水(50ml)中。白色产物经过滤，用水洗涤，且在高真空下进一步经干燥。粗产物无需进一步纯化继续用于后续步骤。产量738.7mg，82.8％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝464.0。
[1188]
步骤c.
[1189][1190]
向步骤-b产物(104.6mg，0.226mmol)在无水dmf(1ml)中的溶液中添加dipea(65mg，0.5mmol)及bop试剂(104.9mg，0.238mmol)。所得混合物在70℃下经加热持续10分钟，接着添加3-boc-氨基甲基氮杂环丁烷(63mg，0.27mmol)。反应在70℃下继续1小时。产物通过rplc(25％至75％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量124.8mg，87.3％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝6332.2。
[1191]
步骤d.
[1192][1193]
向dcm(1.5ml)中的步骤-c产物添加tfa(0.5ml)。混合物经搅拌持续40分钟，接着经浓缩且通过rplc(5％至60％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量113.2mg，89.3％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝532.2。
[1194]
步骤e.
[1195][1196]
向步骤-d产物(111.3mg，0.173mmol)在无水thf(1ml)中的溶液中添加炔丙基-peg4-溴化物(62mg，0.21mmol)及碳酸钠(20mg，0.19mmol)。所得混合物在50℃下经加热过夜。所得混合物接着通过hplc(5％至60％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量23.3mg，15.7％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝746.2。
[1197]
实施例5.合成int-2
[1198][1199]
步骤a.
[1200][1201]
向起始材料(231.5mg，0.5mmol，在实施例4，int-1中描述)在无水dmf(1ml)中的溶液中添加dipea(129.2mg，1mmol)及bop试剂(243.3mg，0.55mmol)。所得混合物在70℃下经加热持续10分钟，接着添加(3r,4s)-(4-羟基-吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(132mg，0.65mmol)。反应在70℃下继续1小时。反应物通过rplc(25％至65％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量207.8mg，64.2％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝648.2。
[1202]
步骤b.
[1203][1204]
经火焰干燥的反应烧瓶用氮气吹扫且馈入步骤-a产物(50mg，0.0772mmol)及无水dmf(1ml)。溶液在冰水浴中经冷却之后，用氢化钠(60％悬浮液在油中，12.5mg，0.31mmol)处理，随后用炔丙基-peg4-溴化物(45.6mg，0.154mmol)处理。移除冰水浴且反应物经搅拌持续3小时。所得混合物接着通过rplc(5％至80％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量14.2mg的次要所需产物，21.4％(通过lcms发现的离子：[m h]

＝862.2)及23.4mg的主要副产物，38.5％(通过lcms发现的离子：[m h]

＝788.2)。
[1205]
步骤c.
[1206][1207]
步骤-b中的次要产物(14.2mg，0.0165mmol)溶解在tfa(0.5ml)中，且溶液经搅拌持续20分钟。所得混合物接着通过hplc(5％至50％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量11.9mg，82.3％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝762.2。
[1208]
实施例6.合成int-3
[1209][1210]
来自实施例5的步骤-b的主要产物(int-2)(23.4mg，0.0297mmol)溶解在meoh(2ml)中，且溶液用水(0.5ml)中的30％naoh及1ml的水处理。所得混合物在70℃下经加热持续3小时。所得混合物接着经冷却至室温且用二恶烷(0.2ml)中的4n hcl溶液酸化。通过旋转蒸发浓缩之后，反应混合物通过制备型hplc(5％至50％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量12.9mg，49.6％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝762.2。
[1211]
实施例7.合成int-4
[1212][1213]
步骤a.
[1214][1215]
向起始材料(231.5mg，0.5mmol，在实施例4，int-1中描述)在无水dmf(1ml)中的溶液中添加dipea(129.2mg，1mmol)及bop试剂(243.3mg，0.55mmol)。所得混合物在70℃下经加热持续10分钟，接着添加(3r,4s)-(4-羟基-吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(132mg，0.65mmol)。反应在70℃下继续1小时。反应物直接地通过rplc(50g，25％至65％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量264.4mg，81.7％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝648.2。
[1216]
步骤b.
[1217][1218]
向步骤-a产物(104mg，0.162mmol)在无水dmf(1ml)中的溶液中添加炔丙基-peg4-溴化物(95.6mg，0.324mmol)及碳酸钾(44.8mg，0.324mmol)。所得混合物在100℃下经加热持续5小时。所得混合物接着通过制备型hplc(5％至60％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量48.9mg，35.1％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝862.2。
[1219]
步骤c.
[1220][1221]
步骤-b产物(48.9mg，0.0568mmol)溶解在tfa(0.5ml)中，且溶液在室温下经搅拌持续20分钟。所得混合物经浓缩且通过制备型hplc(5％至50％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量28.5mg，57.3％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝762.2。
[1222]
实施例8.合成int-5
[1223][1224]
步骤a.
[1225][1226]
向六甘醇(5.6g，20mmol)在无水甲苯(60ml)中的溶液中添加thf中的叔丁醇钾(1.0m，22ml，22mmol)及4-氯丁醛缩二乙醇(3.6g，20mmol)。混合物在氮气气氛下在95℃-100℃下经搅拌过夜。冷却至室温之后，混合物经浓缩且通过柱色谱法在硅胶上用0％至30％乙酸乙酯及甲醇洗脱经纯化。产量6.1g，77％。通过lcms发现的离子：m h＝398.3。
[1227]
步骤b.
[1228][1229]
在冰水浴下向来自先前步骤的产物(0.8g，2.0mmol)在无水dmf中的溶液中添加氢化钠(200mg，60％在油中，5mmol)及炔丙基溴(80重量％在甲苯中，0.45ml，4mmol)。反应物在氮气气氛下在室温下经搅拌持续4小时，接着混合物经浓缩且通过柱色谱法在硅胶上用0％至20％乙酸乙酯及甲醇洗脱经纯化。产量0.7g，80％。通过lcms发现的离子：m h＝437.3。
[1230]
步骤c.
[1231][1232]
向来自先前步骤的产物(0.7g，1.6mmol)在10ml丙酮中的溶液中添加hcl溶液(3.0m，3.0ml，9.0mmol)。反应进程通过lcms监测，且反应在4小时之后完成，且反应溶液经浓缩至干燥且无需进一步纯化即用于下一步骤。此步骤的产率为定量的。通过lcms发现的离子：m/2 h＝391.3。
[1233]
步骤d.
[1234][1235]
向来自先前步骤的产物(0.4g，1mmol)及普沙托韦(0.53g，1mmol)在dcm(10ml)中的溶液中添加乙酸(0.12g，2mmol)。所得溶液在室温下经搅拌持续1小时，接着在剧烈搅拌下用三乙酰氧基硼氢化钠(0.42g，2mmol)处理。此混合物经搅拌过夜，接着经浓缩且通过反相液体色谱法(rplc)使用以5％至80％乙腈及水洗脱的isco液体色谱仪用0.1％tfa作为修饰剂经纯化。产物的产量700mg，77.5％。通过lcms发现的离子：m/2 h＝906.4。
[1236]
实施例9.合成缀合物4
[1237]
制备点击试剂溶液：pbs缓冲溶液中的0.0050m cuso4：10.0mg cuso4溶解在12.53ml pbs中，接着采用6.00ml此cuso4溶液且添加bttaa(51.7mg，cas#1334179-85-9)及抗坏血酸钠(297.2mg)以得到点击试剂溶液(0.0050m cuso4、0.020m bttaa及0.25m抗坏血酸钠)。此点击试剂溶液用于所有缀合。
[1238]
叠氮基官能化fc(50.0mg，3.056ml，0.859μmol，用peg4-叠氮化物官能化的seq id no:18)的溶液经添加到含有炔衍生小分子(4.62mg，5.67μmol，int-6，fc上的每个叠氮基2当量)的15ml离心管中。在轻柔地振荡以溶解所有固体之后，所述混合物用点击试剂溶液(1.37ml的l-抗坏血酸钠，0.25m，344μmol，硫酸铜(ii)0.0050m，6.87μmol，及bttaa 0.020m，27.5μmol)处理。所得混合物在环境温度下轻柔地经旋转持续6小时。其相继通过在蛋白a柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见一般缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的maldi tof分析给出62021da的平均质量(dar＝3.9)。产量8.59mg，17％产率。
[1239]
实施例10.合成缀合物
[1240]
剩余缀合物的制备类似于实施例9缀合物4进行。基于dar值调整tm的当量(fc上每个叠氮基2当量)，且相应地使用点击试剂溶液。dar值、分子量及产率在表3中列出。
[1241]
表3：缀合物及特性
[1242]
[1243][1244]
实施例11.rsv细胞病变效应(cpe)测定中预缀合中间体(int)及缀合物的活性
[1245]
抗rsv化合物及缀合物的活性是按照本领域中标准方案使用基于细胞的体外测定来确定。简而言之，从10μm开始，每种测试制品(ta)的十个四倍连续稀释液一式两份制备，且用感染复数(moi)为0.01的rsv(呼吸道合胞病毒株a2)孵育持续一小时。rsv-ta混合物接着经添加到接种在96孔板中的hep-2细胞中且孵育持续一小时。在孵育后第四天，细胞用结晶紫染色且读取光密度以供使用xlfit剂量反应模型计算每个ta的50％有效浓度(ec
50
)。
[1246]
在cpe测定的同时，还确定了若干种测试制品的固有细胞毒性。简而言之，从10μm开始，每种ta的十个四倍连续稀释液一式三份制备以供在96孔培养板中的hep-2细胞接种。在处理四天后使用celltiter-glo试剂盒测定细胞活力。使用xlfit剂量反应模型计算50％细胞毒性浓度(cc
50
)。
[1247]
所述测定的结果总结在表4中。将测试制品与两种基准化合物利巴韦林及普沙托韦进行了比较。重要的是，所有测试制品均具有比fda批准的药物利巴韦林更优的ec
50
值。两
种化合物int-7及int-8明显比小组的其余化合物更有效，且接近普沙托韦的活性。同样重要的是，缀合物2本身在4倍tm内保留活性。最后，化合物int-7及int-9的细胞毒性(cc
50
)相对于它们的ec
50
值大于180倍。
[1248]
表4：rsv cpe测定
[1249][1250]
实施例12.rsv f蛋白结合测定
[1251]
nunc maxisorp平底96孔板(12-565-136,fisher scientific)在轨道微孔板振荡器上(bt908,bt labsystems)以500rpm在室温下用以1μg/ml在seracare kpl包被溶液(50-674-4,fisher scientific)中的重组rsv f蛋白(11049-v08b,sino biological)包被持续1小时(100μl，0.1μg/孔)。板用洗涤缓冲液(pbs 0.05％tween 20)洗涤(5x300μl)且在振荡下在室温下用洗涤缓冲液中的5％脱脂奶粉(9999s,cell signaling technology)封闭持续1小时。移除封闭剂，且孔在室温下在振荡下用以2μm开始的样品稀释剂(2.5％脱脂奶在pbs中，0.025％tween 20)中的rvc的3倍连续稀释液孵育持续2小时。5x300μl洗涤之后，板在室温下在振荡下用在样品稀释剂中按1:1,000稀释的hrp缀合的驴抗人igg fc f(ab’)2(709-036-098,jackson immunoresearch)二抗孵育持续1小时。接着洗涤(8x300μl)板且在室温下用tmb底物(bd555214,fisher scientific)显色3-5分钟。用1n h2so4终止反应，且使用enspire多模式读板器(perkinelmer)在450nm处读取吸光度。使用结合曲线的非线性回归分析(sigmoidal,4pl)以graphpad prism版本8计算半数最大有效浓度(ec
50
)。在每次结合测定中，未缀合的fc分子作为阴性对照运行。结果在图12及表5中提供。
[1252]
表5.rsv f蛋白结合ec
50
(nm)
[1253][1254][1255]
实施例13.用于合成叠氮基fc的一般程序
[1256]
制备dmf/pbs中的peg4-叠氮基nhs酯溶液(0.050m)：16.75mg的peg4-叠氮基nhs酯在0℃下溶解于0.100ml dmf中且在0℃下通过添加pbs 1x缓冲液经稀释至0.837ml。使用此溶液，通过调节此peg4-叠氮基nhs酯pbs溶液的当量数来制备具有多种dar值的其他peg4-叠氮基fc。
[1257]
预处理h-lgg1 fc，seq id no:48(107.2mg在8.800ml的ph 7.4pbs中，mw约57891da，1.852μmol)：所述fc溶液经转移至四个离心浓缩机(30,000mwco，15ml)中且用pbs x1缓冲液稀释至15ml且经浓缩至约1.5ml的体积。残余物1:10稀释于pbs ph 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计四次，随后稀释至8.80ml。
[1258]
制备peg4-叠氮基fc：0.050m peg4-叠氮基nhs酯pbs缓冲溶液(0.593ml，29.6μ
mol，16当量)经添加到以上的h-igg1 fc(seq id no:48)的溶液中且混合物在环境温度下经振荡旋转持续2小时。所述溶液通过使用四个离心浓缩机(30,000mwco，15ml)经浓缩至约1.5ml的体积。粗混合物1:10稀释于pbs ph 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计三次。经浓缩fc-peg4-叠氮化物用ph 7.4 pbs缓冲液稀释至8.80ml且准备用于点击缀合。经纯化材料使用nanodrop
tm uv可见光光谱仪(使用基于h-igg1的氨基酸序列计算的消光系数)来量化。产率是在纯化之后定量的。
[1259]
实施例14.合成缀合物6
[1260]
叠氮基官能化fc(75mg，7.5ml，1.406umol，实施例13；用peg4-叠氮化物官能化的seq id no:35)的溶液经添加到含有炔官能化小分子(12.2mg，13.49umol，描述在实施例8，int-5中)的40ml离心管中。轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，该溶液经添加到l-抗坏血酸钠盐(22.2mg，112.4umol)、硫酸铜(ii)(4.3mg，27.0umol)及thpta(46.9mg，108.0umol)在pbs 7.4缓冲液(15.5ml，1x)中的溶液中。所得溶液轻柔地经旋转过夜。其相继通过在蛋白a柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的maldi tof分析给出60,658da的平均质量(dar＝6.1)。产量15.0mg，25％产率。
[1261]
实施例15.合成int-8
[1262][1263]
普沙托韦(100mg，0.212mmol)、炔丙基-peg8-溴化物(169mg，0.318mmol)及n,n-二异丙基乙胺(74ul，0.424mmol)的搅拌溶液经加热至70℃持续12小时。添加额外的炔丙基-peg8-溴化物(169mg，0.318mmol)及n,n-二异丙基乙胺(148ul，0.848mmol)且在50℃下继续加热持续24小时。通过真空技术移除所有挥发物。残余物通过hplc(0至90％甲醇及水)经纯化。产量109mg，50％。通过lcms发现的离子：[(m h)]

＝922.2。
[1264]
实施例16.合成缀合物3a
[1265]
叠氮基官能化fc(100mg，10ml，1.790umol，实施例13；用peg4-叠氮化物官能化的seq id no:35)的溶液经添加到含有炔官能化小分子(11.7mg，11.24umol，描述在实施例15，int-8中)的40ml离心管中。轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，该溶液用l-抗坏血酸钠盐(37.1mg，187.4umol)、硫酸铜(ii)(4.0mg，25.0umol)及bttaa(38.73mg，89.95umol)在pbs 7.4缓冲液(15.0ml)中的溶液处理。所得混合物轻柔地经旋转过夜。其相继通过在蛋白a柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的maldi tof分析给出58,395da的平均质量(dar＝4.1)。产量25.5mg，51％产率。
[1266]
实施例17.合成缀合物3b
[1267]
叠氮基官能化fc(75mg，7.5ml，1.406umol，实施例13；用peg4-叠氮化物官能化的seq id no:35)的溶液经添加到含有炔官能化小分子(17.5mg，16.87umol，描述在实施例15，int-8中)的40ml离心管中。轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，该溶液经添加到l-抗坏血酸钠盐(27.8mg，140.6umol)、硫酸铜(ii)(5.4mg，33.7umol)及thpta(58.6mg，134.9umol)在pbs 7.4缓冲液(15.5ml，1x)中的溶液中。所得溶液轻柔地经旋转过夜。其相继通过在蛋白a柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物
的maldi tof分析给出62,279da的平均质量(dar＝7.4)。产量30.6mg，41％产率。
[1268]
实施例18.合成缀合物5
[1269]
叠氮基官能化fc(75mg，7.5ml，1.406umol，实施例2；用peg4-叠氮基乙酸酯官能化的seq id no:35)的溶液经添加到含有炔官能化小分子(17.5mg，16.87umol，描述在实施例15，int-8中)的40ml离心管中。轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，该溶液经添加到l-抗坏血酸钠盐(27.8mg，140.6umol)、硫酸铜(ii)(5.4mg，33.7umol)及thpta(58.6mg，134.9umol)在pbs 7.4缓冲液(15.5ml，1x)中的溶液中。所得溶液轻柔地经旋转过夜。其相继通过在蛋白a柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的maldi tof分析给出58,660da的平均质量(dar＝5.2)。产量29.7mg，40％产率。
[1270]
实施例19.合成int-10
[1271][1272]
步骤a.
[1273][1274]
cbz-哌嗪(3.5g，15.9mmol)、3-溴-1-丙醇(2.7g，19.1mmol)及三乙胺(1.9g，19.1mmol)在室温下在dmf(15ml)中经搅拌持续12小时。通过旋转蒸发仪移除一半溶剂。添加di水且混合物用乙酸乙酯(3x30ml)萃取。经合并的有机萃取物用盐水洗涤且经硫酸钠干燥。移除溶剂且残余物通过硅胶色谱法(0％至80％乙酸乙酯及己烷)经纯化，提供呈浓稠澄清油状物的产物。产率87％。lc/ms[m h] ＝279.2。
[1275]
步骤b.
[1276][1277]
来自步骤a的中间体(4g，14.4mmol)、对甲苯磺酰氯(3.6g，18.7mmol)及三乙胺(2.6g，25.9mmol)在室温下在dcm(50ml)中经搅拌持续12小时。添加di水且混合物用dcm(3x30ml)萃取。经合并的有机萃取物用盐水洗涤且经硫酸钠干燥。移除溶剂且残余物通过硅胶色谱法(0％至10％甲醇在dcm中)经纯化，提供呈白色固体状的产物。产率67％。lc/ms
[m h] ＝433.2。
[1278]
步骤c.
[1279][1280]
来自步骤b的中间体(0.35g，0.81mmol)、普沙托韦tfa盐(0.26g，0.41mmol)及三乙胺(0.16g，1.6mmol)在室温下在dmf(3ml)中经搅拌80℃持续45分钟。通过lc/ms观察到的产物，[m h] ＝792.2。混合物经冷却至室温且添加boc酸酐(57mg，0.81mmol)。混合物在室温下经搅拌持续1小时，接着移除溶剂，且残余物通过反相isco色谱法(20％至95％乙腈在di水中，0.1％tfa，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈淡粉色固体状的产物。产率81％。lc/ms[m h] ＝892.2。
[1281]
步骤d.
[1282][1283]
来自步骤c的中间体(0.21g，0.21mmol)在5％pd/c(50mg)的存在下在1个大气压的氢气下在甲醇中经搅拌持续30分钟。混合物通过硅藻土过滤，经浓缩且在高真空下经干燥。产率＝99％。lc/ms[m h] ＝758.2。
[1284]
步骤e.
[1285][1286]
来自此实施例的步骤d的中间体溶解在dmf(2ml)中，与炔丙基-peg4-溴化物(91mg，0.28mmol)及n,n-二异丙基乙胺(71mg，0.55mmol)混合，接着在80℃下经搅拌持续3小时。混合物经冷却且直接地通过反相isco色谱法(20％至95％乙腈在di水中，0.1％tfa，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈淡粉色固体状的产物。lc/ms[m h] ＝972.2。
[1287]
此boc保护的中间体在室温下在tfa(3ml)中经搅拌持续30分钟。通过旋转蒸发移除溶剂且中间体通过反相hplc色谱法isco acq半制备型(20％-95％乙腈在di水中，0.1％tfa，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈淡粉色固体状的产物。产率41％。lc/ms[m h] ＝872.2。
[1288]
实施例20.合成int-23
[1289][1290]
氯甲酸苄酯经滴加到磺基丙氨酸及三乙胺在acn/饱和碳酸氢钠水溶液(1/1)中的冷却至0℃的搅拌混合物中。反应物在0℃下经搅拌持续40分钟且在旋转蒸发仪上移除大部分溶剂。粗材料通过反相iscohplc色谱法(5％至80％acn在di水中，0.1％tfa，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈澄清粘性油状物的粗产物。产率58％。通过lc/ms发现的离子，[m-h]-＝302.2。
[1291]
步骤b.
[1292][1293]
hatu(156mg，0.41mmol)经添加到此实施例的步骤a中描述的中间体(125mg，0.41mmol)、实施例19的步骤d中描述的中间体int-10(240mg，0.32mmol)及三乙胺(127mg，1.27mmol)在dmf(4ml)中的搅拌混合物中。反应物在室温下经搅拌持续4小时。在旋转蒸发仪上减半溶剂且残余物通过反相色谱法使用isco(5％-80％acn在di水中，0.1％tfa，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈油状物的产物，lc/ms([m/2)＝h] ＝522.2。
[1294]
此中间体在5％pd/c(30mg)的存在下在1个大气压的氢气下在甲醇(15ml)中经搅拌持续2小时。混合物通过硅藻土过滤且经浓缩以提供呈粘性油状物的产物。产率43％，2个步骤。通过lc/ms发现的离子，[m h] ＝909.2。
[1295]
步骤c.
[1296][1297]
hatu(92mg，0.24mmol)经添加到此实施例的步骤b中描述的中间体中(170mg，0.19mmol)、炔丙基-peg4-羧酸(63mg，0.24mmol)及三乙胺(94mg，0.93mmol)在dmf(3ml)中的搅拌混合物中。反应物在环境温度下经搅拌持续4小时。在旋转蒸发仪上减半溶剂且残余物通过反相色谱法iscohplc(10％至90％乙腈在di水中，0.1％tfa，30分钟梯度)经纯化。通过lc/ms发现的离子，[(m/2) h] ＝576.2。
[1298]
boc保护的中间体在dcm/tfa(5ml)的1/1混合物中经搅拌持续45分钟。通过旋转蒸发仪移除溶剂且残余物通过在isco accq半制备型上的反相hplc(5％至75％can在di水中，0.1％tfa，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈灰白色固体状的产物。产率48％，2个步骤。通过lc/ms发现的离子，[(m/2) h] ＝526.2。
[1299]
实施例21.合成int-24
[1300][1301]
步骤a.
[1302][1303]
cbz-哌嗪(4g，18.2mmol)、n-溴-丁醇(4.2g，27.2mmol)及三乙胺(3.7g，36.3mmol)在60℃下在dmf(15ml)中经搅拌持续12小时。通过旋转蒸发仪移除一半溶剂。添加di水且用乙酸乙酯(3x，30ml)萃取混合物。经合并的有机萃取物用盐水洗涤且经硫酸钠干燥。移除溶剂且残余物通过硅胶色谱法(0％至5％甲醇在dcm中)经纯化，提供呈浓稠澄清油状物的产物。产率77％。lc/ms[m h] ＝293.2。
[1304]
步骤b.
[1305][1306]
乙二酰氯在氮气的气氛下经添加到冷却至-78℃(干冰/丙酮浴)的dcm(15ml)中。dmso(801mg，10.26mmol在5m的dcm中)在5分钟的时段内通过注射器经滴加到乙二酰氯溶液中。混合物在-78℃下经搅拌持续10分钟，在此时间点，此实施例的步骤a中描述的中间体醇(1.5g，5.13mmol，在5ml dcm中)在5分钟的时段内通过注射器滴加。所述混合物在-78℃下经搅拌持续30分钟。三乙胺(2.6g，25.7mmol，在10ml dcm中)在10分钟时段内通过注射器滴加。反应物在-78℃下额外经搅拌持续10分钟，且接着在1小时的时段内逐渐升温至环境温度。混合物用di水稀释且萃取到dcm(3x30ml)中。经合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且浓缩以提供呈粘性油状物的产物，其无需进一步纯化即用于后续操作。产率91％。lc/ms[m h] ＝291.2。
[1307]
步骤c.
[1308][1309]
来自此实施例的步骤b的中间体(327mg，0.75mmol)、普沙托韦tfa盐(400mg，0.75mmol)、三乙胺(151mg，1.5mmol)及三乙酰氧基硼氢化钠(397mg，1.88mmol)在室温下在甲醇(25ml)中经搅拌持续1小时。添加冰乙酸(约1ml)且通过旋转蒸发仪移除溶剂。残余物通过isco反相色谱法(5％至95％acn在di水中，0.1％tfa)经纯化。通过旋转蒸发仪移除溶剂。通过lc/ms发现的离子，[m h] ＝806.4。
[1310]
此中间体溶解在甲醇(20ml)、三乙胺(81mg，0.81mmol)及boc酸酐(328mg，0.81mmol)中，接着在室温下经搅拌持续1小时。移除溶剂，且接着所得残余物通过反相色谱法isco(20％至95％乙腈在di水中，0.1％tfa，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈白色固体状的所需产物。产量490mg，产率72％，2个步骤。通过lc/ms发现的离子，[m h] ＝906.4。
[1311]
步骤d.
[1312][1313]
来自此实施例的步骤c的中间体(490mg，0.54mmol)在5％pd/c(90mg)的存在下在1个大气压的氢气下在甲醇中经搅拌持续30分钟。混合物通过硅藻土过滤，经浓缩且在高真空下经干燥。粗物质产量391mg，94％。通过lc/ms发现的离子，[m h] ＝772.2。
[1314]
步骤e.
[1315][1316]
来自步骤d的中间体(282mg，0.37mmol)溶解在dmf(2ml)中，接着用炔丙基-peg4-溴化物(140mg，0.47mmol)及n,n-二异丙基乙胺(188mg，1.5mmol)处理，且在80℃下经搅拌持续3小时。混合物经冷却且直接地通过反相isco色谱法(10％至95％乙腈在di水中，0.1％tfa，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩。通过lc/ms发现的离子，[(m/2) h] ＝493.8。
[1317]
boc保护的中间体在室温下在tfa(3ml)中经搅拌持续30分钟。通过旋转蒸发仪移除溶剂且中间体通过反相hplc色谱法isco accq半制备型(20％-95％乙腈在di水中，0.1％tfa，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈灰白色固体状的所需产物。产量137mg，产率42％，2个步骤。通过lc/ms发现的离子，[m h] ＝886.4。
[1318]
实施例22.合成int-25
[1319][1320]
步骤a.
[1321][1322]
向fmoc-n-(叔丁氧羰基甲基)-甘氨酸(336mg，0.818mmol)、炔丙基-peg8-胺(333mg，0.818mmol)及dipea(356ul，2.045mmol)在dmf(2.0ml)及dcm(2.0ml)中的0℃搅拌溶液中添加hatu(317mg，0.834mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌直至通过lcms确定反应完成。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过rp-c18柱使用以0％至100％水及甲醇
洗脱的isco液体色谱法经纯化。通过旋转蒸发来蒸发含有所需产物的洗脱份，提供720mg的含有所需产物的材料，但纯度不高(通过lcms发现的主要观察离子：[(m h)]

＝801.2)。此材料吸收在dmf(10ml)中的5％哌啶中。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过rp-c18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的isco液体色谱法经纯化。产量0.392g，83％。通过lcms发现的离子：[(m h)]

＝579.2。
[1323]
步骤b.
[1324][1325]
向来自步骤a的产物(250mg，0.432mmol)、5,5-二甲氧基戊酸(77mg，0.475mmol)及dipea(226ul，1.296mmol)在dmf(3.0ml)及dcm(0.5ml)中的0℃搅拌溶液中添加hatu(168mg，0.440mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌过夜。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过rp-c18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的isco液体色谱法经纯化。产量0.294g，94％。通过lcms发现的离子：[(m h)-meoh]

＝692.1。
[1326]
步骤c.
[1327][1328]
来自步骤b的产物(294mg，0.407mmol)溶解在乙酸(3.0ml)及水(1.5ml)中，且经搅拌直至通过分析型hplc观察到完全转化为所需的醛。蒸发所有挥发物。该醛无需进一步纯化即用于下一步骤。产量0.275g，定量。通过lcms发现的离子：[(m h)]

＝677.2。
[1329]
向醛(64mg，0.094mmol)及普沙托韦(50mg，0.094mmol)在1,2-二氯乙烷(3.0ml)中的搅拌溶液中添加三乙酰氧基硼氢化钠(30mg，0.141mmol)。12小时之后的lc-ms分析显示所需产物的正确质量，([(m 2h)/2] ＝596.8)。通过旋转蒸发移除所有挥发物。获得的残余物吸收在tfa(2.0ml)中，且继续搅拌直至通过hplc观察到叔丁酯的完全脱保护。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过rp-c18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的isco液体色谱法经纯化。产量115mg，86％。通过lcms发现的离子：[(m 2h)/2] ＝568.8。
[1330]
实施例23.合成缀合物7
[1331]
叠氮基官能化fc(100mg，10ml，1.874umol，实施例13；用peg4-叠氮化物官能化的seq id no:35)的溶液经添加到含有炔官能化小分子(28.1mg，22.49umol，描述在实施例22，int-25中)的40ml离心管中。轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，该溶液经添加到l-抗坏
血酸钠盐(37.1mg，187.4umol)、硫酸铜(ii)(7.2mg，45.0umol)及thpta(78.2mg，179.9umol)在pbs 7.4缓冲液(20.62ml，1x)中的溶液中。所得溶液轻柔地经旋转过夜。其相继通过在蛋白a柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的maldi tof分析给出61,201da的平均质量(dar＝5.5)。产量39.2mg，31％产率。
[1332]
实施例24.合成缀合物8
[1333]
叠氮基官能化fc(100mg，10ml，1.874umol，实施例2；用peg4-叠氮基乙酸酯官能化的seq id no:35)的溶液经添加到含有炔官能化小分子(28.1mg，22.49umol，描述在实施例22，int-25中)的40ml离心管中。轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，该溶液经添加到l-抗坏血酸钠盐(37.1mg，187.4umol)、硫酸铜(ii)(7.2mg，45.0umol)及thpta(78.2mg，179.9umol)在pbs 7.4缓冲液(20.62ml，1x)中的溶液中。所得溶液轻柔地经旋转过夜。其相继通过在蛋白a柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的maldi tof分析给出58,289da的平均质量(dar＝3.9)。产量44.1mg，44％产率。
[1334]
实施例25.合成int-26
[1335][1336]
步骤a.
[1337][1338]
向fmoc-n-(叔丁氧羰基甲基)-甘氨酸(672mg，1.636mmol)、炔丙基-peg8-胺(667mg，1.636mmol)及dipea(712ul，4.090mmol)在dmf(4.0ml)及dcm(4.0ml)中的0℃搅拌溶液中添加hatu(634mg，1.668mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌直至通过lcms确定完
成。通过旋转蒸发移除所有挥发物。所得残余物通过rp-c18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的isco液体色谱法经纯化。通过真空技术蒸发含有所需产物的洗脱份，提供1.44g的含有所需产物的材料，但纯度不高(通过lcms发现的主要观察离子：[(m h)]

＝801.2)。
[1339]
此材料溶解在tfa(5.0ml)中。2小时之后的lcms分析显示叔丁酯完全转化为对应的酸[(m h)]

＝745.2。通过旋转蒸发来蒸发所有挥发物且残余物吸收在dmf(5.0ml)及dcm(5.0ml)中。此溶液经冷却至0℃，其中添加甲基-peg12-胺(1.007g，1.799mmol)、dipea(2.507ml，14.39mmol)及hatu(698mg，1.835mmol)。通过lcms确定反应完成之后，通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过rp-c18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的isco液体色谱法经纯化。产量0.915g，39％。通过lcms发现的离子：[(m 2h)/2]

＝643.8。
[1340]
步骤b.
[1341][1342]
来自步骤a的产物(915mg，0.711mmol)溶解在dmf(5ml)中的5％哌啶中。10分钟之后，通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过rp-c18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的isco液体色谱法经纯化。产量649mg，86％。通过lcms发现的离子：[(m 2h)/2] ＝532.8。
[1343]
步骤c.
[1344][1345]
向来自步骤b的产物(325mg，0.305mmol)、5,5-二甲氧基戊酸(54mg，0.336mmol)及
dipea(160ul，0.916mmol)在dmf(2.0ml)及dcm(2.0ml)中的0℃搅拌溶液中添加hatu(118mg，0.311mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌过夜。通过旋转蒸发移除所有挥发物。所得残余物通过rp-c18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的isco液体色谱法经纯化。产量305mg，83％。通过lcms发现的离子：[((m 2h)
–
meoh)/2]

＝588.8。
[1346]
步骤d.
[1347][1348]
来自此实施例的步骤c的产物(300mg，0.248mmol)溶解在乙酸(4.0ml)及水(2.0ml)中，且经搅拌直至通过分析型hplc观察到完全转化为所需产物。通过旋转蒸发来蒸发所有挥发物。此物质无需进一步纯化即用于下一步骤。产量290mg，定量。
[1349]
步骤e.
[1350][1351]
向来自步骤d的产物(109mg，0.094mmol)及普沙托韦(50mg，0.094mmol)在1,2-二氯乙烷(3.0ml)中的搅拌溶液中添加三乙酰氧基硼氢化钠(30mg，0.141mmol)，同时搅拌过夜。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过rp-c18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的isco液体色谱法经纯化。产量115mg，73％。通过lcms发现的离子：[(m 2h)/2] ＝839.4。
[1352]
实施例26.合成int-27
[1353][1354]
步骤a.
[1355][1356]
向peg-普沙托韦(200mg，0.221mmol，描述在实施例8，int-5中)及dipea(162ul，0.926mmol)在二氯甲烷(3.0ml)中的搅拌溶液中添加二碳酸二叔丁酯(72mg，0.331mmol)。继续搅拌直至通过hplc确定反应完成，同时允许气体逸出通过起泡器。通过旋转蒸发来蒸发所有挥发物。此物质无需进一步纯化即用于下一步骤。产量224mg，定量。通过lcms发现的离子：[((m 2h) na)/2]

＝514.9；[((m 2h)
–
boc)/2]

＝453.7。
[1357]
步骤b.
[1358][1359]
向fmoc-n-(叔丁氧羰基甲基)-甘氨酸(2.00g，4.861mmol)、2-叠氮基乙胺盐酸盐(626mg，5.104mmol)及dipea(3.387ml，19.44mmol)在dmf(10ml)及dcm(10ml)中的0℃搅拌溶液中添加hatu(1.885g，4.958mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌直至通过lcms确定完成。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过硅胶柱使用以二氯甲烷中的0％至25％甲醇洗脱的isco液体色谱法经纯化。产量2.260g，97％产率。通过lcms发现的离子：通过lcms发现的离子：[(m h)
–
tbu]

＝424.2。
[1360]
步骤c.
[1361][1362]
来自步骤b的产物(2.260g，4.713mmol)吸收在tfa(10ml)中，且经搅拌直至通过hplc观察到完全转化为产物。通过旋转蒸发移除所有挥发物。所得残余物通过硅胶柱使用以二氯甲烷中的0％至20％甲醇洗脱的isco液体色谱法使用1％乙酸作为修饰剂经纯化。产量990mg，45％产率。通过lcms发现的离子：通过lcms发现的离子：[(m h) na]

＝446.2。，[(m h)]

＝424.2。
[1363]
步骤d.
[1364][1365]
向来自步骤c的产物(990mg，2.338mmol)、甲基-peg4-胺(1.335g，2.385mmol)及dipea(1.018ml，5.845mmol)在dmf(5.0ml)及dcm(5.0ml)中的0℃搅拌溶液中添加hatu(907mg，2.385mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌直至通过hplc显示完成。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过硅胶柱使用以二氯甲烷中的0％至15％甲醇洗脱的isco液体色谱法经纯化。产量1.704g，76％产率。通过lcms发现的离子：通过lcms发现的离子：[(m h)]

＝965.2；[(m 2h)/2]

＝483.2。
[1366]
步骤e.
[1367][1368]
向来自步骤a的产物(222mg，0.221mmol)、来自步骤d的产物(213mg，0.221mmol)、tbta(12mg，0.022mmol)及硫酸铜(4mg，0.023mmol)在乙醇(4.0ml)及水(2.0ml)中的搅拌溶液中添加抗坏血酸钠(22mg，0.110mmol)。通过lcms确认形成了所需产物，[((m 2h) na)/2] ＝996.9,[(m 2h)/2] ＝986.0,[((m 3h) na)/3] ＝665.2,[(m 3h)/3] ＝657.8。完成之后，添加铜清除剂siliamets taacona(200mg，负载量0.45mmol/g)且继续搅拌过夜。混合物在乙醇的帮助下经过滤且得到所得溶液(约30ml)。通过旋转蒸发浓缩滤液且残余物吸收在dmf(7.0ml)中的5％哌啶中。反应完成之后，通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过rp-c18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的isco液体色谱法经纯化。产量112mg，29％。通过lcms发现的离子：[((m 2h) na)/2] ＝885.8,[(m 2h)/2] ＝874.8,[(m 3h)/3] ＝583.8。
[1369]
步骤f.
[1370][1371]
向来自步骤e的产物(112mg，0.064mmol)、炔丙基-peg4-酸(17mg，0.064mmol)及dipea(33ul，0.192mmol)在dmf(3.0ml)及dcm(0.5ml)中的0℃搅拌溶液中添加hatu(25mg，0.065mmol)。反应物的温度升至环境温度且继续搅拌直至通过hplc显示完成。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过rp-c18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的isco液体色谱法经纯化。产量98mg，77％。通过lcms发现的离子：[(m 2h)/2] ＝996.4,[((m 3h) 2na)/3] ＝679.2,[((m 3h) na)/3] ＝671.8,[(m 3h)/3] ＝664.6。
[1372]
步骤g.
[1373][1374]
向来自步骤f的产物(98mg，0.049mmol)在二氯甲烷(4.0ml)中的0℃搅拌溶液中添加tfa(2.0ml)。继续搅拌直至通过hplc观察到起始材料完全转化为产物。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过rp-c18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的isco液体色谱法使用0.1％tfa作为修饰剂经纯化。产量100mg，定量。通过lcms发现的离子：[((m 2h) na)/2] ＝957.0,[(m 2h)/2] ＝946.4,[(m 3h)/3] ＝631.0。
[1375]
实施例27.合成缀合物9
[1376]
l-抗坏血酸钠盐(4.685ml，100mm在水中)的水溶液经添加到含有以下溶液的50ml离心管中：peg4-叠氮基官能化fc(100mg，10ml的ph 7.4 pbs缓冲液，1.874umol，实施例13；用peg4-叠氮化物官能化的seq id no:35)、炔官能化小分子(75.2mg，37.48umol，描述在实施例26，int-27中)、2-氨基胍盐酸盐(4.685ml，100mm在水中)、thpta(0.937ml，50mm在水中)及硫酸铜(ii)(0.468ml，20mm在水中)在ph 8.5 epps缓冲液(40ml，10mm)中的溶液。所得混合物轻柔地经旋转过夜。所得混合物接着相继通过在蛋白a柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的maldi tof分析给出69,887da的平均质量(dar＝7.6)。产量75.2mg，75％产率。
[1377]
实施例28.合成int-28
[1378][1379]
类似于实施例8，int-5制备标题化合物，其中在序列的步骤a中用peg12二醇取代六甘醇。通过lcms发现的离子：[m/2] 1＝563.8。
[1380]
实施例29.合成int-29
[1381][1382]
步骤a.
[1383][1384]
向胺tfa盐(0.25g，0.28mmol，描述在实施例19，int-10中)及炔丙基-peg-8-溴化物(0.21g，0.43mmol)在无水dmf(2.8ml)中的溶液中添加diea(0.20ml，1.13mmol)。所述溶液在90℃下经加热持续16小时。冷却至室温之后，反应混合物直接地经装载到柱上且通过反相液体色谱法(isco，10％至80％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量0.21g，产率48.8％，呈tfa盐的形式。通过lcms发现的离子：[m 18 h] ＝574.8。
[1385]
步骤b.
[1386][1387]
先前步骤中的boc-胺产物(0.21g，0.28mmol)在ch2cl2(3ml)中的溶液经添加到tfa(3ml)中。所得溶液经搅拌持续3小时接着经浓缩。残余物通过反相液体色谱法(accq，5％至50％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量0.051g，产率22.7％，呈tfa盐的形式。通过lcms发现的离子：[(m 2h)/2] ＝524.8。
[1388]
实施例30.合成5-氯-2-(氯甲基)-1-[3-(甲烷磺酰基)丙基]-1h-苯并咪唑
[1389][1390]
步骤a.
[1391][1392]
5-氯-2-氟硝基苯(0.918g，5.23mmol)在dmf(10ml)中的溶液用3-甲烷磺酰基-丙基-氯化铵(1.000g，5.757mmol)及粉状碳酸钾(2.17g，15.70mmol)处理，接着在70℃油浴中加热。12小时之后，lcms显示完全转化。橙色反应物经过滤以移除碳酸钾及其他不溶性物质，通过旋转蒸发经浓缩，且无需进一步纯化即用于下一步骤。
[1393]
步骤b.
[1394][1395]
来自先前步骤的粗产物溶解在乙酸(10ml)中，用70℃油浴加热，且以若干份用锌粉(1.711g，26.17mmol)处理，同时快速搅拌。10分钟之后橙色变为无色，且lcms表明反应完成。过滤反应混合物，得到绿色溶液，其无需进一步纯化立即用于下一步骤。
[1396]
步骤c.
[1397][1398]
仍溶解在乙酸中的来自先前步骤b的粗产物用2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(4.85g，31.40mmol)处理，且在50℃油浴中加热。1小时之后的lcms显示完全转化为所需产物。通过
旋转蒸发移除所有挥发物。剩余油状物通过快速色谱法(0％至10％甲醇/dcm)经纯化。三个步骤的产量1.32g，产率78.5％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝321.0。
[1399]
实施例31.合成6-氯-2-(氯甲基)-3-[3-(甲烷磺酰基)丙基]-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶
[1400][1401]
类似于实施例30的化合物制备标题化合物，其中使用5-氯-2-氟-3-硝基吡啶代替5-氯-2-氟硝基苯。
[1402]
实施例32.合成5-氯-2-(氯甲基)-1-[2-(甲烷磺酰基)乙基]-1h-苯并咪唑
[1403][1404]
类似于实施例30的化合物制备标题化合物，其中使用2-(甲烷磺酰基)乙-1-胺-氯化氢代替3-甲烷磺酰基-丙基-氯化铵。
[1405]
实施例33.合成6-氯-2-(氯甲基)-3-[2-(甲烷磺酰基)乙基]-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶
[1406][1407]
类似于实施例32的化合物制备标题化合物，其中使用5-氯-2-氟-3-硝基吡啶代替5-氯-2-氟硝基苯。
[1408]
实施例34.合成1-丁基-5-氯-2-(氯甲基)-1h-苯并咪唑
[1409][1410]
类似于实施例30的化合物制备标题化合物，其中使用1-丁胺代替3-甲烷磺酰基-丙基-氯化铵。
[1411]
实施例35.合成3-丁基-6-氯-2-(氯甲基)-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶
[1412][1413]
类似于实施例34的化合物制备标题化合物，其中使用5-氯-2-氟-3-硝基吡啶代替5-氯-2-氟硝基苯。
[1414]
实施例36.合成5-氯-2-(氯甲基)-1-(4,7,10,13,16-pentaoxaicos-1-炔-20-基)-1h-苯并咪唑
[1415][1416]
步骤a.
[1417][1418]
炔丙基-peg4-醇(2.00g，8.61mmol)及1,4-二溴丁烷(5.57g，25.83mmol)溶解在dmso(20ml)中的搅拌溶液在室温下用粉状koh(0.966g，17.22mmol)处理。反应物开始变热且转为深黄色。搅拌持续1小时之后，lcms显示醇完全消耗。反应物经过滤，用乙酸乙酯稀释，且用水萃取三次。水洗液用乙酸乙酯萃取三次。经合并的乙酸乙酯萃取物经硫酸钠干燥，浓缩，且通过rplc(10％至100％acn/水)经纯化。产量1.10g，34.9％。
[1419]
步骤b.
[1420][1421]
向来自先前步骤a的产物(1.100g，3.00mmol)及邻苯二甲酰亚胺(0.881g，6.00mmol)在dmf(7ml)中的搅拌溶液中添加粉状碳酸钾(1.66g，11.98mmol)。混合物在70℃油浴中经搅拌持续1小时，此时lcms显示起始溴化物完全消失。反应混合物经过滤、浓缩且通过rplc(10％至100％acn/水)经纯化。产量1.28g，96.6％产率。通过lcms发现的离子：[m h]

＝434.0。
[1422]
步骤c.
[1423][1424]
来自先前步骤b的产物(1.10g，2.54mmol)溶解在乙醇(3ml)中的溶液用40％甲胺水溶液(3ml)处理且在70℃油浴中经加热持续1小时，此时lcms显示起始材料完全消耗。反
应物通过旋转蒸发经浓缩，接着在高真空下储存过夜，且无需进一步纯化即在下一步骤中用作n-甲基-邻苯二甲酰亚胺及所需产物的混合物。
[1425]
步骤d.
[1426][1427]
来自先前步骤c的粗产物(2.538mmol)溶解在dmf(5ml)中，用diea(1.81ml，4eq)及5-氯-2-氟硝基苯(0.535g，3.046mmol)处理，且在50℃油浴中经加热。搅拌过夜之后，lcms显示氨基-peg起始材料完全消耗。粗混合物经浓缩且通过rplc(10％至100％acn/水)经纯化。两个步骤的产量0.62g，产率52％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝459.0。
[1428]
步骤e.
[1429][1430]
来自先前步骤d的产物(0.620g，1.35mmol)溶解在乙酸(4ml)中，在50℃油浴中经加热，且在15分钟内用锌粉(1.77g，27.02mmol)逐份处理。20分钟之后，反应物颜色从橙色变为无色，且lcms显示起始材料完全消耗。反应混合物经过滤以移除锌粉且在下一步骤中用作乙酸中的溶液。
[1431]
步骤f.
[1432][1433]
来自先前步骤e的粗产物(1.35mmol)在50℃油浴中经加热，且用2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(1.25g，8.10mmol)处理。1小时之后的lcms显示起始材料完全消耗。反应物通过旋转蒸发经浓缩，接着通过快速色谱法(0％至10％meoh/dcm)经纯化。两个步骤的产量0.45g，产率68.3％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝486.8。
[1434]
实施例37.2'-氧代-1',2'-二氢螺[哌啶-4,3'-吡咯并[2,3-c]吡啶]-1-羧酸叔丁酯
[1435][1436]
步骤a.
[1437][1438]
t3p(41.6ml，69.9mmol，50％wt.在乙酸乙酯中)在10分钟内经滴加到2-氨基-2-溴-吡啶(11g，63.6mmol)、n-boc-哌嗪羧酸(16g，69.9mmol)及dipea(16.4g，127.2mmol)在乙酸乙酯(75ml)中的冷却至0℃的搅拌混合物中。移除冰浴且反应物经搅拌持续24小时。反应混合物用水稀释，经萃取到乙酸乙酯(3x，25ml)中。经合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，且在旋转蒸发仪上经浓缩。粗产物通过在isco combi flash上的硅胶色谱法(15％至100％乙酸乙酯在己烷中，25分钟)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈淡橙黄色油状物的中间体。产率61％。lc/ms[m h] ＝384.2。
[1439]
步骤b.
[1440][1441]
对甲氧基苄氯(11.6g，74.2mmol)经添加到来自此实施例的步骤a的中间体(19.1g，49.4mmol)及碳酸铯(24.1g，74.1mmol)在dmf(30ml)中的混合物中。反应物在室温下经搅拌持续12小时，此时反应物用水稀释且萃取到乙酸乙酯(3x，30ml)中。经合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，且在旋转蒸发仪上经浓缩。粗产物通过在isco combi flash上的硅胶色谱法(10％至100％乙酸乙酯在己烷中，25分钟)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈淡橙黄色油状物的中间体。产率68％。lc/ms[m na]

＝526.0。
[1442]
步骤c.
[1443][1444]
描述在此实施例中的中间体b.(17.0g，33.7mmol)、乙酸钯(ii)(0.76g，3.4mmol)、三环己基膦(1.9g，6.7mmol)的混合物溶解在密封管中的二恶烷(40ml)中。轻柔地鼓入氮气通过混合物持续10分钟，在此时间点，添加叔丁醇钠(4.9g，50.5mmol)且再次鼓入氮气通过反应混合物持续10分钟。管经密封且在120℃下经加热持续16小时。混合物经冷却且在旋转蒸发仪上经浓缩。深色粘性产物混合物通过在isco combi flash上的硅胶色谱法(0％至10％甲醇在dcm中，25分钟)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈淡黄色油状物的中间体。产率84％。lc/ms[m h] ＝424.2。
[1445]
步骤d.
[1446][1447]
来自此实施例的步骤c的中间体(3g，7.1mmol)及苯甲醚(3.8g，35.4mmol)在70℃下在10％三氟甲磺酸在tfa(25ml)中的溶液中经搅拌持续12小时(lc/ms[m h]

＝204.2)。混合物经冷却且在旋转蒸发仪上经浓缩且与甲苯共沸(3x)。深色粘性产物混合物吸收在乙腈(50ml)中且经冷却至0℃。ph通过滴加dipea经调整至8并且添加boc酸酐(1.5g，7.1mmol)且反应物经搅拌持续40分钟。通过旋转蒸发仪移除溶剂，且粗产物混合物通过rp hplc(isco combi flash，10％-95％乙腈在di水中，0.1％tfa，40分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈白色固体状的产物。产率69％。lc/ms[m h] ＝304.2。
[1448]
实施例38.合成2'-氧代-1',2'-二氢螺[哌啶-4,3'-吡咯并[2,3-c]吡啶]-1-羧酸丙-2-基酯
[1449][1450]
步骤a.
[1451][1452]
来自实施例36的产物的步骤c.的中间体(0.75g，1.8mmol)及苯甲醚(0.96g，8.9mmol)在70℃下在10％三氟甲磺酸在tfa(10ml)中的溶液中经搅拌持续12小时(lc/ms[m h]

＝204.2)。混合物经冷却且在旋转蒸发仪上经浓缩且与甲苯共沸(3x)。深色粘性产物混合物吸收在乙腈(20ml)中且经冷却至0℃。ph通过滴加dipea经调整至8且氯甲酸异丙酯(0.25g，2mmol)经添加且反应物经搅拌持续40分钟。通过旋转蒸发仪移除溶剂，且粗产物混合物通过rp hplc(isco combi flash，10％-95％乙腈在di水中，0.1％tfa，40分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈白色固体状的产物。产率69％。lc/ms[m h] ＝290.2。
[1453]
实施例39.合成5-氯-2-(氯甲基)-1-(3,6,9,12-四氧杂十五烷(pentadec)-14-炔-1-基)-1h-苯并咪唑
[1454][1455]
步骤a.
[1456][1457]
炔丙基peg-4胺(395mg，1.71mmol)经添加到2-氟-5-氯-硝基苯(200mg，1.39mmol)及三乙胺(230mg，2.28mmol)在乙醇(10ml)中的混合物中，且反应物在90℃下经搅拌持续12小时，在此时间点，起始材料已完全转化为产物。混合物经浓缩且通过硅胶色谱法(isco combi flash，0％-100％乙酸乙酯在己烷中，25分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈澄清油状物的产物，(lc/ms[m h]

＝387.2)。硝基中间体吸收在冰乙酸(10ml)中并且添加锌(50mg，0.78mmol)且混合物经搅拌持续1小时。反应混合物经过滤且在旋转蒸发仪上经浓缩。产物无需进一步纯化即用于后续操作。产率63％，2个步骤。lc/ms[m h] ＝357.2。
[1458]
步骤b.
[1459][1460]
2-氯甲基-1,1,1-三甲氧基乙烷(550mg，3.56mmol)经添加到在冰乙酸(5ml)中的描述在此实施例的步骤a中的二胺中间体(254mg，0.71mmol)中且反应物在70℃下经搅拌持续2小时。混合物在旋转蒸发仪上经浓缩且通过硅胶色谱法(isco combi flash，0％-8％甲醇在dcm中，25分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈棕色油状物的产物。产率69％。lc/ms[m h] ＝414.9。
[1461]
实施例40.合成3-{2-[4-(3,6,9,12-四氧杂十五烷-14-炔-1-基)哌嗪-1-基]乙氧基}丙酸
[1462][1463]
步骤a.
[1464][1465]
cbz-哌嗪(1.697g，7.703mmol)、3-(2-溴乙氧基)丙酸叔丁酯(1.95g，7.703mmol)及diea(2.68ml，15.41mmol)溶解在乙腈(20ml)中的溶液在75℃油浴中经加热过夜。粗混合物通过旋转蒸发经浓缩，用tfa制成微酸性，且通过rplc(5％-100％acn/水，0.1％tfa)经纯化。单tfa盐的产量为3.71g，产率为95％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝393.2。
[1466]
步骤b.
[1467][1468]
来自先前步骤a的溶液产物(3.71g，7.33mmol)及5％pd/c(1.5g)溶解在甲醇(30ml)中，且用氢气真空吹扫且在来自气球的氢气下经搅拌持续1小时。通过硅藻土过滤反应物。滤液通过旋转蒸发经浓缩，且接着无需进一步纯化即用于下一步骤。通过lcms发现的离子：[m h]

＝259.2。
[1469]
步骤c.
[1470][1471]
来自先前步骤b的产物(2.73g，7.33mmol)及炔丙基-peg4-甲磺酸酯(2.50g，8.06mmol)溶解在乙腈(20ml)中，接着用diea (3.831ml，22.0mmol)处理，且在75℃油浴中经加热持续24小时。粗反应物通过旋转蒸发经浓缩，用tfa制成微酸性，且通过rplc(10％-100％acn/水，在0.1％tfa下)经纯化。产量3.24g，63.1％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝473.3。
[1472]
步骤d.
[1473][1474]
来自先前步骤c的产物(3.24g，4.62mmol)用tfa(15ml)处理且经搅拌持续1小时。反应物通过旋转蒸发去除挥发物，随后在高真空下储存持续12小时。粗产物无需进一步纯化即使用。通过lcms发现的离子：[m h]

＝417.2。
[1475]
实施例41.合成1-[4-(丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸
[1476][1477]
步骤a.
[1478][1479]
溴-peg4-叔丁酯(1.00g，2.60mmol)、炔丙基哌嗪8tfa盐(3.20g，3.89mmol)的溶液用粉状碳酸钾(3.59g，25.9mmol)处理，接着在75℃油浴中经加热持续12小时。反应物经过滤，浓缩成油状物，且用tfa制成微酸性，接着通过rplc(0％至100％acn/水，在0.1％tfa下)经纯化。双tfa盐，产量0.911g，产率53.5％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝429.3。
[1480]
步骤b.
[1481][1482]
来自先前步骤a的产物(0.911g，1.39mmol)溶解在二恶烷中的4m hcl中且经搅拌持续1小时。反应物通过旋转蒸发经浓缩，且在高真空下储存过夜。9hcl盐的粗产量为0.92g，粗产率为98％。
[1483]
实施例42.合成int-39
[1484][1485]
步骤a.
[1486][1487]
向四甘醇(3.8g，20mmol)在无水dmf中的溶液中缓慢添加氢化钠(0.48g，12mmol，60％在矿物油中)。溶液在冰浴上经搅拌持续10分钟，且接着添加2-(4-溴丁基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.8g，10mmol)。反应溶液在室温下经搅拌持续16小时，用叔丁醇(1ml)淬灭且经浓缩。残余物溶解在dcm(50ml)中且溶液用水(3x，10ml)、盐水(10ml)洗涤，接着经硫酸钠干燥，过滤且浓缩。粗产物通过在isco combi flash上的硅胶色谱法(15％至100％乙酸乙酯
在己烷中)经纯化。产量1.32g，35％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝396.0。
[1488]
步骤b.
[1489][1490]
向来自步骤a的产物(1g，2.5mmol)在dcm(25ml)中的溶液中添加三乙胺(0.7ml，5mmol)，随后添加甲烷磺酰氯(0.3ml，3.75mmol)。反应溶液经搅拌持续2小时，且接着用aq hcl(1n，2x，5ml)、水(10ml)、盐水洗涤，且经浓缩以得到粗产物。产量1.12g，95％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝474.8。
[1491]
步骤c.
[1492][1493]
来自步骤b的产物(1.12g，2.3mmol)、1-(丙-2-炔-1-基)哌嗪(2.6g，2.5mmol)及三乙胺(2.7ml，20mmol)在无水dmf中的混合物在90℃下经加热持续3小时。溶液经冷却、浓缩且通过rplc(5％至50％乙腈/水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。两个步骤的产量617mg，产率51％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝502.3。
[1494]
步骤d.
[1495][1496]
来自步骤c的产物(450mg，0.9mmol)溶解在浓nh4oh(5ml的40％水溶液)中，且溶液在50℃下经加热过夜。溶液经冷却，浓缩且残余物溶解在水中，用dcm洗涤，经浓缩且冻干以得到粗产物，其无需进一步纯化即使用。通过lcms发现的离子：[m h]

＝372.2。
[1497]
步骤e.
[1498][1499]
来自步骤d的产物、5-氯-2-氟硝基苯(210mg，1.2mmol)及k2co3(496mg，3.6mmol)在无水乙腈中的混合物在70℃下经加热持续2小时。溶液经冷却、过滤、浓缩且通过rplc(5％至40％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。两个步骤的产量160mg，产率34％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝527.2。
[1500]
步骤f.
[1501][1502]
来自步骤e的产物(160mg，0.212mmol)在乙酸(5ml)中的溶液在70℃下加热，且添加锌(70mg，1.06mmol)。溶液在70℃下经搅拌持续10分钟，通过lcms得出此时反应完成。粗混合物经过滤，且无需进一步纯化即用于下一步骤。lc/ms[m h] ＝497.3。
[1503]
步骤g.
[1504][1505]
向来自步骤f的产物在乙酸(5ml)中的溶液中添加2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(197mg，1.28mmol)。反应物在70℃下经搅拌持续1小时。溶液经冷却、浓缩且通过rplc(5％至50％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量38mg，32％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝555.2。
[1506]
步骤h.
[1507][1508]
向来自实施例37的产物(28mg，0.094mmol)在无水乙腈中的溶液中添加cs2co3(65.2mg，0.2mmol)，随后添加步骤-g产物(38mg，0.047mmol)。反应溶液在80℃下经搅拌持续20分钟，冷却，浓缩且通过rplc(5％至50％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量25mg，64％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝822.2。
[1509]
实施例43.合成int-29
[1510][1511]
步骤a.
[1512][1513]
在室温下向来自实施例19的胺tfa盐int-10(247.4mg，0.284mmol)及炔丙基-peg8-溴化物(206.7mg，0.425mmol)在无水dmf(2.8ml)中的溶液中添加diea(0.20ml，1.13mmol)。所得混合物在90℃下经加热持续16小时。所得混合物接着经冷却至室温且通过rplc(isco，10％至80％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量208.2mg，48.8％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝574.8。
[1514]
步骤b.
[1515][1516]
来自先前步骤的产物(208.2mg，0.176mmol)在室温下在tfa(3ml)及二氯甲烷(3ml)中经搅拌。反应完成之后，混合物在减压下浓缩。残余物通过rplc(accq，5％至50％乙腈及水，使用0.1％tfa作为修饰剂)经纯化。产量51.0mg，产率22.7％，呈tfa盐的形式。通过lcms发现的离子：[(m 2h)/2]

＝524.8。
[1517]
实施例44.合成int-43
[1518][1519]
步骤a.
[1520][1521]
炔丙基-peg4-硫醇(1.0g，4.0mmol)经添加到n-boc-氨基-丙基溴化物(1.1g，4.4mmol)及碳酸铯(1.1g，4.4mmol)，在回流乙腈(10ml)中经搅拌持续4小时。混合物经过滤且浓缩以提供中间体(lcms[m na]

＝428.2)。粗中间体溶解在甲醇(25ml)中且添加oxone(7.4g，12.1mmol)，且反应物在50℃下经搅拌持续3小时。混合物经过滤且在旋转蒸发仪上经浓缩。砜中间体通过rp hplc(isco combi flash，5％-95％乙腈在di水中，0.1％tfa，40分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈澄清油状物的中间体(lcms[m na]

＝460.2)。boc保护的中间体在环境温度下在二恶烷(25ml)中的4n hcl中经搅拌持续30分钟。在旋转蒸发仪上移除溶剂，残余物与甲苯(3x，10ml)共沸，且在高真空下经干燥以提供呈黄色油状物的产物。产率69％，3个步骤。lc/ms[m h] ＝338.2。
[1522]
步骤b.
[1523][1524]
来自此实施例的步骤a.的中间体(625mg，1.85mmol)经添加到2-氟-5-氯-硝基苯(295mg，1.68mmol)及dipea(434mg，3.3mmol)在乙醇(10ml)中的混合物中，且反应物在90℃下经搅拌持续12小时，在此时间点，起始材料已完全转化为产物。混合物经浓缩且通过硅胶色谱法(isco combi flash，0％-100％乙酸乙酯在己烷中，25分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈澄清油状物的产物，(lc/ms[m h]

＝493.2)。硝基中间体吸收在冰乙酸(20ml)中并且添加锌(150mg，2.30mmol)，且混合物在50℃下经搅拌持续1小时。反应混合物经过滤且在旋转蒸发仪上经浓缩。产物无需进一步纯化即用于后续操作。产率63％，2个步骤。lc/ms[m h] ＝463.2。
[1525]
步骤c.
[1526][1527]
2-氯甲基-1,1,1-三甲氧基乙烷(1.08g，7.02mmol)经添加到溶解在冰乙酸(15ml)中的描述在此实施例的步骤-b中的二胺中间体(650mg，1.40mmol)中且反应物在70℃下经搅拌持续2小时。混合物在旋转蒸发仪上经浓缩且通过硅胶色谱法(isco combi flash，0％至4％甲醇/dcm，25分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈棕色油状物的产物。产率71％。lc/ms[m h] ＝521.2。
[1528]
步骤d.
[1529][1530]
实施例37的产物(149mg，0.49mmol)、来自此实施例的步骤-c的中间体(307mg，0.59mmol)及碳酸铯(192mg，0.59mmol)在环境温度下在dmf(2ml)中一起经搅拌持续12小时。反应混合物直接施加到rp hplc(accq半制备型，5％至95％乙腈/水，无修饰剂，35分钟梯度)。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈黄色吸湿固体状的产物。产率51％。lc/ms[m h] ＝788.4。
[1531]
实施例45.合成int-36
[1532][1533]
实施例38的产物(66mg，0.23mmol)、来自实施例44(合成int-43)的步骤c.的中间体(120mg，0.23mmol)及碳酸铯(75mg，0.23mmol)在环境温度下在dmf(2ml)中一起经搅拌持续12小时。反应混合物直接施加到rp hplc(accq半制备型，5％-95％乙腈在di水中，无修饰剂，35分钟梯度)。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈黄色吸湿固体状的产物。产率39％。lc/ms[m h] ＝773.8。
[1534]
实施例46.合成int-41
[1535][1536]
向2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-羧酸叔丁酯(31mg，
0.10mmol，如实施例37中描述制备)在ch3cn(10ml)中的溶液中添加cs2co3(100mg，0.30mmol)。溶液经搅拌持续20分钟。向溶液中添加1-{2-[5-氯-2-(氯甲基)苯并咪唑基]乙氧基}-2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙烷(42mg，0.10mmol，如实施例39中描述制备)且溶液经搅拌持续16小时。移除过量ch3cn，且粗材料通过反相hplc(0％-100％ch3cn/h2o，使用0.1％tfa)经纯化。产量34mg，50.0％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝682.2。
[1537]
实施例47.合成int-42
[1538][1539]
类似于实施例46(int-41)由2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-羧酸叔丁酯及1-{4-[5-氯-2-(氯甲基)苯并咪唑基]丁氧基}-2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙烷(如实施例36中描述制备)来制备标题化合物。通过lcms发现的离子：[m h]

＝754.2。
[1540]
实施例48.合成int-44
[1541][1542]
步骤a.
[1543][1544]
向2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-羧酸叔丁酯(52mg，0.17mmol，如实施例37中描述制备)在ch3cn(10ml)中的溶液中添加cs2co3(140mg，0.43mmol)。溶液经搅拌持续20分钟。向溶液中添加1-({3-[5-氯-2-(氯甲基)苯并咪唑基]丙基}磺酰基)-2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙烷(90mg，0.17mmol，如实施例44中描述制备，int-43)且溶液经搅拌持续16小时。移除过量ch3cn，且粗混合物经吸附到上且通过快速色谱法(0％-50％meoh及乙酸乙酯)经纯化。产量56mg，41％。通过lcms发现的离子：[m h]

＝788.6。
[1545]
步骤b.
[1546][1547]
二恶烷(6ml)中的4n hcl经添加到1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]-2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-羧酸叔丁酯(28mg，0.04mmol)中且溶液经搅拌持续3小时。移除过量溶剂，且粗材料无需进一步纯化即用于下一步骤。lcms：[m h] ＝688.2。
[1548]
步骤c.
[1549][1550]
向dmf(5ml)中的粗1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮(25mg，0.040mmol，假定产率100％)中添加boc-thr-oh(10mg，0.05mmol)，随后添
加h
ü
nigs碱(2滴)。接着添加edci(15mg，0.08mmol)及hobt(15mg，0.08mmol)且溶液经搅拌持续16小时。移除过量溶剂，且粗材料通过反相hplc(0％-100％ch3cn/h2o，使用0.1％tfa)经纯化。产量28mg，79％。通过lcms发现的离子：[m h] ＝889.1。
[1551]
实施例49.合成int-45
[1552][1553]
类似于实施例48(int-44)由粗1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及boc-gly-oh来制备标题化合物。通过lcms发现的离子：[m h]

＝845.2。
[1554]
实施例50.合成int-37
[1555][1556]
二恶烷(6ml)中的4n hcl经添加到n-(1-((1r)-1-羟乙基)(1s)-2-{1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]-2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-基}-2-氧代乙基)(叔丁氧基)甲酰胺(15mg，0.020mmol，描述在实施例48中，int-43)且溶液经搅拌持续1小时。移除过量溶剂以提供纯产物。产量14mg，定量。通过lcms发现的离子：[m h] ＝789.2。
[1557]
实施例51.合成int-38
[1558]
[1559]
类似于实施例52(int-37)由粗(叔丁氧基)-n-(2-{1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]-2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-基}-2-氧代乙基)甲酰胺(描述在实施例49中，int-45)来制备标题化合物。通过lcms发现的离子：[m h] ＝745.2。
[1560]
实施例52.合成缀合物19
[1561]
标题缀合物根据一般缀合程序使用具有叠氮基官能化fc(seq id no:63)(dar 6.0)的实施例47中描述的炔衍生小分子int-42来制备。产量21.0mg，18.0％。maldi-tof＝61283。
[1562]
实施例53.用于量化rsv中和化合物的微中和测定
[1563]
hep-2细胞(atcc#ccl-23)以5e4/孔/200μl接种在96孔组织培养处理的板(fisher cat#08-772-17)中的补充有10％热灭活(hi)胎牛血清(hi-fbs；fisher cat#10-082-147)、1x青霉素-链霉素(p/s，100μg/ml；fisher cat#mt30002c)及1x l-谷氨酰胺(l-gln，2mm；fisher cat#25030-164)的dmem(fisher cat#11965118)中且在37℃及5％co2下孵育过夜。具有2％hi-fbs、1x p/s、2mm l-gln的dmem中的化合物的重复10倍连续稀释液以60μl/孔经制备在96孔组织培养板中。rsv long毒株(retrovirox,san diego)、rsv a2毒株(virapur,san diego)、rsv b1毒株(retrovirox,san diego)或rsv毒株ch18537(retrovirox,san diego)稀释于具有2％hi-fbs、1x p/s、2mm l-gln的dmem中且以60μl/孔添加到60μl化合物中，感染复数(moi)为0.002(long，a2)、0.003(b1)或0.004(ch18537)。每个板上包括仅病毒(无药物)及仅细胞(无病毒，无药物)对照。化合物-病毒混合物在37℃及5％co2下孵育持续1小时。1小时之后，通过抽吸从hep-2细胞中移除培养基，且以100μl/孔用1x pbs ph 7.4(fisher cat#mt21040cm)洗涤孔一次。化合物-病毒混合物(100μl/孔)经添加到细胞中且在37℃及5％co2下孵育持续1小时，然后以100μl/孔添加具有2％hi-fbs、1x p/s、2mm l-gln的dmem(200μl终体积)且在37℃及5％co2下孵育。在感染之后第6天，抽吸出上清液且细胞在4℃下以100μl/孔用1x pbs中的冰冷80％丙酮固定持续20分钟。抽吸出丙酮且板在室温下经风干持续20分钟。板以200μl/孔用1x pbs、0.05％tween-20(pbst)洗涤3次，且在轨道板振荡器上振荡(500rpm)下以200μl/孔用pbst中的5％脱脂奶粉(fisher cat#50-195-952)封闭持续1小时。弃去封闭溶液，且细胞在振荡下以100μl/孔用以1:2,000稀释于稀释剂(以1:1稀释于1x pbs ph 7.4中的封闭溶液)中的小鼠抗f蛋白抗体(milliporesigma cat#mab8599)孵育持续2小时。板以300μl/孔用pbst洗涤5次，且在振荡下以100μl/孔用以1:1,000稀释于稀释剂中的hrp缀合的山羊抗小鼠igg抗体(southernbiotech cat#1030-05)孵育持续1小时。板以300μl/孔用pbst洗涤5次，且以100μl/孔用tmb底物(fisher cat#bdb555214)孵育持续约5分钟。反应以100μl/孔用1n h2so4终止。吸光度用enspire多模式读板器(perkinelmer)在450nm处读取。从所有a450值中减去仅细胞对照的平均a450，且计算每种化合物浓度相对于仅病毒对照的病毒中和百分比。半数最大有效浓度(ec
50
)用graphpad prism版本8使用％中和对比log
10
浓度的非线性回归分析来计算。
[1564]
测定感染之后第6天的50％细胞毒性浓度(cc
50
)，用于与微中和测定平行进行的测定。简而言之，通过抽吸移除培养基，且细胞在室温下以60μl/孔用结晶紫溶液(0.1％结晶紫，20％甲醇，3％多聚甲醛)固定/染色持续1小时。移除染色剂且孔以100μl/孔用1x pbs ph 7.4洗涤3次。板在室温下经风干持续2小时，且吸光度用enspire多模式读板器
(perkinelmer)在570nm处读取。细胞活力降低50％所需的化合物浓度(μm)(cc
50
)用graphpad prism版本8使用非线性回归分析来计算。
[1565]
在微中和测定中，int-33(jnj179衍生物)比基准化合物普沙托韦(gs-5806)及vp-14637更有效，但不比母体化合物jnj179更有效(表6)。缀合物19是迄今为止最有效的缀合物(ec
50 1.5
–
2.3nm)。
[1566]
表6.moi＝0.002(long，a2)、0.003(b1)或0.004(ch18537)时的rsv微中和ec
50
。
[1567]
[1568][1569]
nr，不运行。
[1570]
实施例54.rsv斑块减少测定
[1571]
根据以下方案执行rsv斑块减少测定。第1天，hep-2细胞以5x10e5个细胞/孔/500ul接种在24孔板中。第2天，细胞处于100％汇合度下之后，细胞以每孔大约30个斑块的病毒稀释度在dmem 2％fbs感染缓冲液中感染且用化合物处理。抽吸出培养基且细胞用每孔90ul的病毒稀释液感染。接着，细胞用10ul的10x化合物处理，使化合物的终浓度在1nm-10um之间。细胞在室温下孵育持续2小时，每15分钟摇动一次。2小时之后，移除接种物/化合物混合物。450ul的覆盖培养基(1份avicel 2.5％；1份dmem 2％fbs)经添加到孔中，且细胞用50ul的10x化合物处理，使化合物的终浓度为1nm-10um。细胞在37℃下孵育持续6天。
[1572]
对于染色及量化：感染的细胞板用100％甲醇固定持续10至30分钟。板用5％奶/pbs洗涤三次，1ml/孔。以1:1000稀释于5％奶/pbs中的一抗山羊抗rsv多克隆抗体(chemicon cat#ab1128)经置于每个孔上。板经置于振荡器中且在室温下孵育持续1小时，
之后板用5％奶/pbs洗涤三次。过氧化物酶缀合二抗immunopure兔抗山羊抗体igg(h l)(thermoscientific,cat#31402)以1:1000稀释于5％奶/pbs中且经添加到板上，之后板在室温下经置于振荡器上持续1小时。接着板用1x pbs洗涤三次，之后true blue底物(kpl)以0.3ml/孔(对于12孔板)在室温下经添加持续10分钟。板用去离子水冲洗3次，经风干且计数斑块数。
[1573]
斑块减少测定的结果提供在表7中。
[1574]
表7.rsv斑块减少测定
[1575][1576]
实施例55.合成包括具有c220s/yte四重突变的fc结构域的缀合物
[1577]
制备点击试剂溶液：pbs缓冲溶液中的0.0050m cuso4：10.0mg cuso4溶解在12.53ml pbs中，接着采用5.00ml此cuso4溶液且添加43.1mg bttaa(cas#1334179-85-9)及247.5mg抗坏血酸钠以得到点击试剂溶液(0.0050m cuso4、0.020m bttaa及0.25m抗坏血酸钠)。
[1578]
向具有c220s突变及yte突变的叠氮基官能化fc(65.5mg，10.0ml，1.13μmol，叠氮基dar约5.9，seq id no:67)在15ml离心管中的溶液中添加炔衍生小分子(根据fc的每个叠氮基3.0当量)。在轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，混合物用点击试剂溶液(1.80ml)处理。所得混合物在环境温度下轻柔地经旋转持续12小时。其相继通过在蛋白a柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见一般缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的maldi tof分析给出66,420da的平均质量(dar＝5.8)。产量57mg，具有98％纯度。
[1579]
实施例56.iv施用包括具有c220s/yte四重突变的fc结构域的缀合物后的30天比较非人灵长类动物pk研究
[1580]
如实施例55中描述合成包括具有c220s突变及yte突变的fc结构域的缀合物(seq id no:67)。执行非人灵长类动物pk研究以比较c220s/yte fc缀合物(seq id no:67)与包括单独具有c220s突变的fc结构域的缀合物(seq id no:64)的iv施用。
[1581]
由bts research(san diego,ca)使用体重介于3.5-8.5kg范围内的5-9岁雄性及雌性食蟹猕猴执行非人类灵长类动物(nhp)pk研究。nhp经iv注射2mg/kg的测试制品(0.4ml/kg的剂量体积)。动物经圈养于标准iacuc批准的圈养条件下。在适当时间，对动物进行非末端放血(通过股静脉或头静脉)，其中血液经收集于k2edta管中以预防凝血。所收集的血液经离心(2,000x g，持续10分钟)且抽出血浆以随时间分析测试制品浓度。c220s/yte fc缀合物及c220s缀合物在每个时间点的血浆浓度通过夹心elisa测量。简单来说，测试制品经捕获于fc包被的板上且接着使用hrp缀合的抗人igg-fc抗体进行检测。在graphpad prism中使用c220s/yte fc缀合物或c220s缀合物标准曲线的4pl非线性回归计算蛋白质浓度。更详细的方法描述提供于上文。对应的曲线显示在图13中。与c220s fc缀合物的约10天相比，c220s/yte fc缀合物表现出约45天的显著改进的终末半衰期。c220s/yte fc缀合物的auc是c220s缀合物的auc的2倍大(表8)。
[1582][1583]
实施例57.比较包括fc结构域的缀合物的血浆及上皮衬液(elf)浓度的14天小鼠pk研究。
[1584]
在研究开始之前，让来自查尔斯河实验室(charles river laboratories)的雌性balb/c小鼠适应5天。每笼圈养3-6只动物，自由进食及饮水。所有程序均按照neosome iacuc政策及指南执行。小鼠经皮下(sc)注射20mg/kg的具有用一种或多种小分子抗病毒抑制剂修饰的fc结构域的缀合物(seq id no:64)(10ml/kg剂量体积)。在选定的时间点，通过吸入co2对3只小鼠实施安乐死。血液通过心脏穿刺经收集到k2edta管中用于血浆保留。血液收集之后，通过暴露气管、插入23g管连接物且用无菌1x pbs ph 7.4执行2x0.5ml冲洗来执行支气管肺泡灌洗(bal)。记录且保留回收的流体体积。bal程序完成之后，移除肺，称重且储存在-80℃下。倾倒出血浆及bal液(balf)的等分试样，之后在-80℃下储存样品，用于尿素量化测定。经收集的balf在室温下以12,000rpm离心持续5分钟以沉淀肺泡巨噬细胞，沉淀及上清液两者均储存在-80℃下直至发货给赞助商。如上所述通过间接elisa测量缀合物在每个时间点的血浆浓度。简而言之，在涂有神经氨酸酶(na)的板上捕获缀合物分子，且接着使用hrp缀合的抗人igg fcγ特异性f(ab')2进行检测。对如上所述收获的balf执行相同的elisa。缀合物血浆浓度在graphpad prism中使用缀合物标准曲线的4pl非线性回归来计算。elf体积及elf中的缀合物浓度使用尿素作为稀释标记物进行测定，如前所述(rennard等人，1986 j appl physiol 60:532-538)。图14中显示了比较缀合物与elf水平的曲线。到注射之后2小时，缀合物上皮衬液(elf)水平在剩余的时间过程中为血浆暴露水平(auc)的约60％，这表明缀合物45在肺中几乎立即从血浆分配到elf(图14，表9)。
[1585]
表9.在2周内小鼠中缀合物血浆及elf水平。
[1586]