一种藻菌共培的培养基及其共培养方法

1.本发明涉及微藻培养技术领域，尤其涉及一种藻菌共培培养基及其共培养方法。


背景技术：

2.小球藻(chlorellasp.)和光合细菌(photosynthetic bacteria，简称psb)是水产养殖过程中常用的安全可靠的两类微生态制剂。psb能够快速分解水中的有机物，产生n、p等小分子无机盐；小球藻则消耗水体中的co2，快速吸收利用水中的n、p等营养物质，并且释放出氧气，为养殖生物所利用，因此psb和小球藻配合一起使用能更有效加快水体污染物的分解利用，同时又能给养殖生物提供氧气。基于小球藻和光合细菌藻菌共生系统的优势，两者共同培养优势互补，节省培养时间，减少培养设备投入，可有效安全地改善养殖水环境、减少病害发生、提高养殖水产动物品质。


技术实现要素：

3.有鉴于此，本发明提供了一种藻菌共培的培养基及其应用。该培养基适用于小球藻和光合细菌的生长，营养全面，可保证小球藻和光合细菌的正常生长需求，且成分简单易得、价格便宜、制备方法简单，适用于养殖户自主扩大培养小球藻和光合细菌时使用。
4.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
5.一种藻菌共培培养基，每升培养基包括如下成分：
[0006][0007]
一些具体实施例中，每升培养基包括以下组分：
[0008][0009][0010]
一些具体实施例中，每升培养基包括以下组分：
[0011][0012]
一些实施方案中，本发明所述培养基还包括如下组合之一：
[0013]
桔子粉和大叶榄仁叶粉的组合；
[0014]
或桔子提取物和大叶榄仁叶提取物的组合。
[0015]
本发明中，桔子优选为海南小桔子，桔子提取物为海南小桔子的提取物，进一步优选为海南小桔子的醇提物；大叶榄仁叶提取物优选为大叶榄仁叶的醇提物，以上醇提物可按照本领域常规的方法提取即可。
[0016]
一些具体实施方案中，所述桔子提取物和大叶榄仁叶提取物的制备方法为：
[0017]
将桔子和大叶榄仁叶，粉碎，过80～100目筛，取粉末，按料液质量比1:10加入无水乙醇，浸泡提取48小时，离心5～8min，取上清，得桔子提取物和大叶榄仁叶提取物。
[0018]
一些实施方案中，所述离心的转速5000～6000rpm。
[0019]
米酒可以是散装米酒也可以是瓶装或灌装米酒，可市售获得，也可按照本领域常用的方法制得。本发明中，米酒酿制所采用的米没有特殊限定，优选为糯米，米酒的度数优选为10～25vol％。一些具体实施例中，采用散装米酒，制备方法为：由糯米蒸煮冷却后加酒曲在罐子内酿制7～12天而成，最终压榨成浊酒，酒精度数为10～25vol％。
[0020]
一些实施方案中，每升培养基包括如下成分：
[0021][0022][0023]
或
[0024][0025]
其中，桔子粉为桔子晾干、粉碎后的粉末，桔子提取物优选为桔子醇提物，大叶榄仁叶粉为大叶榄仁叶，大叶榄仁叶提取物优选为醇提物。
[0026]
一些具体实施例中，每升培养基包括以下组分：
[0027][0028]
一些具体实施例中，每升培养基包括以下组分：
[0029][0030][0031]
本发明还提供了上述培养基在促进小球藻和光和细菌生长中的应用。
[0032]
其中，所述光合细菌包括沼泽红假单胞菌、深红红螺菌、荚膜红假单胞菌等常用光合细菌菌种中的至少一种。
[0033]
本发明还提供一种小球藻和光合细菌共培养的方法，将小球藻和光合细菌接种至本发明所述的藻菌共培培养基。
[0034]
所述小球藻的接种量为5％；所述光合细菌的接种量为5％。
[0035]
本发明的适用藻菌共培培养基包含适宜的碳源、氮源、微量元素和生长因子，营养全面，可保证小球藻和光合细菌的正常生长需求，且成分简单易得、价格便宜、制备方法简
单，适用于养殖户自主扩大培养小球藻和光合细菌时使用。
附图说明
[0036]
图1示小球藻与光合细菌流失细胞仪fsc-ssc图。
具体实施方式
[0037]
本发明提供了一种藻菌共培培养基及其共培养方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0038]
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
[0039]
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0040]
实施例1
[0041]
一种适用藻菌共培培养基，每升培养基包括以下组分：
[0042][0043][0044]
适用藻菌共培培养基的制备方法，包括以下步骤：
[0045]
取水煮沸，冷却至室温备用；
[0046]
取500ml水，依次称取微量元素水溶肥料、粗盐、氨基酸有机肥加入水中，搅拌溶解所有试剂，过滤溶液中的不溶固体；
[0047]
加米酒，补充余量水，搅拌均匀，即制得适用藻菌共培培养基。
[0048]
实施例2
[0049]
一种适用藻菌共培培养基，每升培养基包括以下组分：
[0050][0051]
制备方法与实施例1相同。
[0052]
实施例3
[0053]
一种适用藻菌共培培养基，每升培养基包括以下组分：
[0054][0055]
所述桔子粉和大叶榄仁叶粉为海南小桔子和大叶榄仁叶过80～100目筛的粉状药材。
[0056]
适用藻菌共培培养基的制备方法，包括以下步骤：
[0057]
取水煮沸，冷却至室温备用；
[0058]
取500ml水，依次称取微量元素水溶肥料、粗盐、氨基酸有机肥、桔子粉、大叶榄仁叶粉加入水中，搅拌溶解所有试剂，浸泡2h，过滤溶液中的不溶固体；
[0059]
加米酒，补充余量水，搅拌均匀，即制得适用藻菌共培培养基。
[0060]
实施例4
[0061]
一种适用藻菌共培培养基，每升培养基包括以下组分：
[0062][0063]
适用藻菌共培培养基的制备方法与实施例3相同。
[0064]
实施例5
[0065]
与实施例4的区别是：添加海南小桔子提取物和大叶榄仁叶提取物，其他组分用量相同，其中，提取物的制备方法如下：
[0066]
将海南小桔子和大叶榄仁叶晒干，取配方量的海南小桔子和大叶榄仁叶，粉碎，过80～100目筛，取粉末，按料液质量比1:10加入无水乙醇溶液，浸泡48小时，以转速5000～6000rpm离心5～8min，取上清，得海南小桔子和大叶榄仁叶提取物。
[0067]
适用藻菌共培培养基的制备方法，包括以下步骤：
[0068]
(1)取水煮沸，冷却至室温备用；
[0069]
(2)取500ml水，依次称取微量元素水溶肥料、粗盐、氨基酸有机肥加入水中，搅拌溶解所有试剂；
[0070]
(3)加米酒、海南小桔子提取物、大叶榄仁叶提取物补充余量水，搅拌均匀，即制得
适用藻菌共培培养基。
[0071]
对比例1
[0072]
一种常用的小球藻培养基(水生6号)，每升培养基包括以下组分：
[0073][0074][0075]
培养基的制备方法，包括以下步骤：
[0076]
取水煮沸，冷却至室温备用；
[0077]
取500ml水，将上述培养基组分依次称量好并加到水中搅拌溶解；
[0078]
加入余量水，混匀，即制得所需培养基；
[0079]
对比例2
[0080]
一种常用的光合细菌培养基，每升培养基包括以下组分：
[0081][0082]
培养基的制备方法与对比例1相同。
[0083]
对比例3
[0084]
每升培养基包括以下组分：
[0085]
[0086]
培养基的制备方法与实施例3相同。
[0087]
对比例4
[0088]
每升培养基包括以下组分：
[0089][0090]
培养基的制备方法与实施例3相同。
[0091]
试验例1：
[0092]
将上述实施例和对比例的培养基进行藻菌共培的培养效果比较。
[0093]
按比例配制上述培养基100l，装于120l白色塑料圆桶中，每种培养基设置三个平行。分别接种5％已活化的小球藻和光合细菌菌种，试验所用的小球藻为发明人从海南水环境中筛选纯化的小球藻(chlorella sp.)，光合细菌菌种为发明人从海南对虾养殖池塘中筛选得到的沼泽红假单胞菌(rhodopseudomonas palustris)。接种后圆桶盖上透明塑料膜，于室外自然条件下进行培养，每天早中晚搅拌三次，于刚接种以及培养的第二天和第四天分别取样，用流式细胞仪测定藻菌共培系统中藻和菌的数量。结果见表1。
[0094]
表1不同培养基对藻菌共培系统生长的影响
[0095][0096]
选择深红红螺菌(rhodospirillum rubrum)代替藻菌共培系统中的沼泽红假单胞菌，试验方法同上，结果见表2。
[0097]
表2不同培养基对藻菌共培系统生长的影响
[0098]
[0099][0100]
结果显示，对比例1～2的培养基不利于光合细菌和小球藻同时生长，其中，对比例1培养基不利于光合细菌生长，利用对比例2的培养基进行培养时，小球藻生长速度最慢，不利于小球藻的生长。对比例3与实施例4相比缺少一项米酒，其他成分一样，结果证明缺少重要组分米酒的对比例3不利于小球藻和光合细菌生长；对比例4与实施例4相比缺少一项氨基酸有机肥，其他成分一样，结果证明缺少重要组分氨基酸有机肥的对比例4同样不利于小球藻和光合细菌生长。
[0101]
实施例3-4的培养基中添加了海南小桔子和大叶榄仁，小球藻和光合细菌的细胞数量均明显高于对比例1-4，实施例5添加海南小桔子提取物和大叶榄仁提取物后小球藻和光合细菌的数量最高，更有利于藻菌共培体系的生长。
[0102]
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。