一种含硒化合物及其用途的制作方法

1.本发明属于生物医药领域，具体地涉及一种含硒化合物及其制备方法和用途。


背景技术：

2.恶性肿瘤已成为当今全球突出的公共卫生问题。世界卫生组织称，目前全球平均每8个死亡病例中就有1人死于癌症，比艾滋病、疟疾和结核病导致的死亡人数总和还要高。国际癌症研究中心(iarc)的数据表明，2002年全世界恶性肿瘤新发病例约为1090万例，死亡670万例。iarc提供的研究报告显示，到2020年全球每年新增癌症患者人数将达到1500万人。who统计表明，2012年全球癌症新增病例和死亡人数出现惊人的增长，中国更是高居榜首。国家癌症中心发布的最新一期“中国恶性肿瘤发病和死亡分析报告”显示，2014年全国新发恶性肿瘤病例约380.4万例，死亡病例229.6万例。中国分别约占全球恶性肿瘤新发病例与死亡病例的21.8％和27％，在184个国家和地区中，位居中等偏上水平。这意味着平均每分钟有7人被确诊为癌症，4人因癌症死亡。目前癌症治疗的方式主要有手术治疗、放射治疗、化学疗法、生物治疗等，其中，化学药物治疗仍是主要的治疗方式。
3.癌症作为活宿主生物中的异常组织块而发生，它从宿主中接收营养而不依赖于宿主地过度增殖，并且破坏宿主机体。人体器官由大量细胞构成。当人体的正常细胞变成异常细胞并且该异常细胞不加检查地分裂和增殖时，就发生癌症。尽管遗传因素与癌症的发病密切相关，但环境因素也对个体是否发生癌症产生重要影响。癌症在发达国家尤其普遍。有报道称，导致癌症的原因是对农药、杀虫剂等的使用增加(因此这类物质在食品中的残留量增加)，对包含添加剂(如食品防腐剂和着色剂)的加工食品的消费增加，对水、土壤和空气的污染的增加，现代生活的压力，活动的减少，油腻的饮食习惯所引起的肥胖，等等。近年来，还有人指出，当正常细胞的细胞信号系统发生故障，当癌症基因被激活，或当抑癌基因发生故障时，就引发癌症。
4.治疗癌症的方法有许多，例如，手术、放射治疗、化学治疗和免疫治疗，几种方法的联合应用能够增加存活率。癌症细胞在器官间转移是治疗癌症面临的一个问题，然而手术和放射疗法对于它的治疗是有限的。因此，主要采用化学治疗。化学疗法通常使用抗癌药物进行，许多化学治疗药物已被报道。这些抗肿瘤药物大致分为以下几类：以环磷酰胺为代表的抗肿瘤烷化剂；以5-氟尿嘧啶为代表的抗肿瘤抗代谢药；以盐酸阿霉素为代表的抗肿瘤抗生素；以长春新碱和紫杉醇为代表的源于植物的抗肿瘤药物；以顺铂为代表的抗肿瘤铂络合物；等等。
5.但是已知抗癌药物的毒性不仅作用于癌细胞，也作用于患者的正常细胞，造成副作用。因此，要开发有更高的癌细胞选择性和尽可能小的毒性的新抗癌药物。
6.已经知道，硒是机体生命活动不可缺少的一种微量元素。近年来，人们对硒化合物特别是有机硒化合物进行了研究，试图从中发现有抗癌或抗肿瘤活性的化合物。例如，ei-bayoumy等[k el-bayoumy，drugs future,1997，22(5):539～545]研究发现，苄基硒氰化物在dmba诱导的乳腺癌小鼠模型中表现出抗肿瘤作用。与亚硒酸钠相比，苄基硒氰化物的抗
癌活性更高，但其本身具有强烈的异味，且存在导致患者体重显著下降的副作用。
[0007]
目前在硒化合物中，依布硒啉(ebselen，2-苯基-1,2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)和乙烷硒啉(1,2-[二(1,2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)]乙烷是两个已经进入临床试验阶段的有机硒化合物。研究表明，依布硒啉的作用机制主要是通过抑制靶酶-硫氧环蛋白还原酶的活性，调节其下游信号传导通路及其抗肿瘤凋亡通路，实现药物的抗肿瘤作用，生物活性和低毒性则可能与其环状硒酰胺结构或苯并异硒唑酮含硒杂环有关(h j reich，等j.am.chem.soc.，1987，109(18):5549-5551)；乙烷硒啉是硫氧还蛋白还原酶抑制剂，乙烷硒啉分子中含有2个苯并异硒唑酮结构，收到了协同增效的效果，活性优于依布硒啉。
[0008]
尽管发现了上述有机硒化合物，但现有的有机硒化合物仍存在抗肿瘤效力有待进一步提高、抗癌谱有限以及化合物结构类型有限等问题，远远不能满足人类对于肿瘤预防和治疗的日益增长的需求。因此，开发出更好效果的肿瘤预防和治疗药物，特别是有机硒化合物已成为迫切的需要。
[0009]
因此，现有技术仍迫切需要新的有良好效果的用于预防和/或治疗肿瘤的新化合物。


技术实现要素：

[0010]
本发明人经过大量实验研究，意外发现了一种含硒有机化合物，具有出乎意料的预防和/或治疗肿瘤的生物活性。所述化合物可有效用于多种癌症的预防和/或治疗。本发明的含硒有机化合物为(r)-1-(4-甲基亚磺酰基)丁基)-3-(4-(3-氧代苯并[d][1,2]硒氮杂-2(3h)-基)苄基)硫脲,包括其可药用盐，其具有下式i结构：
[0011]
在另一方面，本发明还提供了上述式i化合物的制备方法，反应流程示意如下：
所述方法包括以下步骤：(i)使式vi化合物通过boc酸酐保护反应得到式v化合物(ii)使式v化合物与2-碘代苯甲酰氯反应得到式iv化合物(iii)使式iv化合物与硒氰酸钾(ksecn)和1,10-菲罗啉反应得到化合物iii
(iv)使式iii化合物与三氟乙酸反应得到化合物ii和(v)使式ii化合物与1-异硫氰酸-4-甲基亚磺酰基丁烷反应得到化合物i
[0012]
在一个特别优选的实施方案中，采用以下方法制备式i化合物：
[0013]
在0℃下，将4-氨基苄胺溶于无水四氢呋喃中，慢慢滴加二碳酸二叔丁酯，加完后，升温到25℃搅拌，tlc显示反应完全，旋干，粗品通过过柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝50:1到5:1)，得到式v化合物。然后在0℃下，将式v化合物溶于二氯甲烷中，先加入三乙胺，再慢慢滴加2-碘代苯甲酰氯，加完后，继续搅拌至反应完全，加入水，分液，二氯甲烷萃取，有机相干燥，旋干，得到式iv化合物。之后，在室温下，将式iv化合物溶于dmf中，再依次加入碘化亚铜(cui)，碳酸铯(cs2co3)，硒氰酸钾(ksecn)和1,10-菲罗啉，加热到100℃搅拌，待反应液冷却至室温，加入水和乙酸乙酯，分液萃取，干燥，旋干，得到式iii化合物。将式iii化合物溶于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，继续室温搅拌至反应完全，旋干，粗品用三乙胺调成碱性(ph值为9左右)，得到式ii化合物，直接投下一步。将式ii化合物溶于二氯甲烷中，先加入三乙胺，再加入1-异硫氰酸-4-甲基亚磺酰基丁烷，加热到50℃搅拌至反应完全，待反应液冷却至室温，加入水和二氯甲烷，分液，萃取，干燥，旋干，通过制备tlc纯化(dcm/meoh＝7:1),得到式i化合物。其中，优选地，4-氨基苄胺和二碳酸二叔丁酯的比例为1:1～1:2，反应温度为0℃～25℃，反应时间为10～24小时；式v化合物与2-碘代苯甲酰氯的比例为1:1～1:2，2-碘代苯甲酰氯和三乙胺(tea)的比例为1：(1～2)，反应温度为0℃～25℃，反应时间为2～4小时；式iv化合物和1,10-菲罗啉的比例为1:0.1～1:0.2，1,10-菲罗啉和碘化亚铜的比例为1:1～1:1.1，1,10-菲罗啉和碳酸铯的比例为1:1～1:1.1，1,10-菲罗啉和硒氰酸钾的比例为1:1～1:1.1，反应温度为80℃～100℃，反应时间为0.5～2小时；式iii化合物与三氟乙酸的比例为1:2～1:4，反应温度为0℃～25℃，反应时间为0.5～1小时；式ii化合物与1-异硫氰酸-4-甲基亚磺酰基丁烷的比例为1:1～1:1.2，反应温度为0℃～25℃，反应时间为0.5～2小时；
[0014]
本发明的制备方法简单、产率较高，而且能容易地制得式i化合物。
[0015]
在本发明的另一个方面，提供了包含本发明式i化合物或其可药用盐和任选的可
药用赋形剂和/或载体的药物组合物。在本发明的药物组合物中，除了本发明的式i化合物或其可药用盐外，还可以另外包含其他药物活性成分。本发明的药物组合物可以通过常规技术制备，例如在remington：the science and practice of pharmacy,第19版，1995中所描述的方法，其通过引用并入本文。所述组合物可以以常规形式出现，例如胶囊、片剂、气雾剂、溶液剂、混悬剂或局部施用形式。
[0016]
本发明的式i化合物可以以其可药用盐的形式存在。所述可药用盐意指式i化合物与无机酸或有机酸形成的盐。所述无机酸或有机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸；乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、苹果酸、扁桃酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈酸、马来酸、羟基马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水杨酸、甲磺酸、苯磺酸或甲苯磺酸。
[0017]
本文使用的术语“患者”是指通过本发明的方法进行治疗的有机体。这类有机体优选包括但不限于哺乳动物(例如鼠类、猿/猴、马、牛、猪、犬、猫等)且最优选是指人类。
[0018]
本文使用的术语“治疗”包本文使用的术语“有效量”意指将会引起例如研究人员或临床医师所寻求的组织、系统、动物或人的生物学或医学响应的药物或药剂(即本发明化合物)的量。此外，术语“治疗有效量”意指这样的量：与未接受上述量的相应受试者相比，所述量导致改善的治疗、治愈、预防或减轻疾病、病症或副作用，或降低在疾病或病症的进展速度。有效量可以一个或多个给药、施用或剂量给予且不意欲被特定的制剂或给药途径限制。该术语还包括在其范围内的增强正常生理机能的有效量。
[0019]
本文使用的术语“药物组合物”是指活性剂与惰性或活性的载体的组合，使得所述组合物尤其适用于体内或离体诊断或治疗。碱的实例包括但不限于碱金属(例如钠)氢氧化物、碱土金属(例如镁)氢氧化物、氨等。对于治疗用途，本发明化合物的盐对于治疗用途，本发明化合物的盐预期为是药用的。然而，非药用的酸和碱的盐也可用于例如药用化合物的制备或纯化中。
[0020]
术语“药用”在本文中用于指如下那些化合物、物质、组合物和/或剂型：在合理医学判断的范围内，其适于与人类和动物的组织接触使用而无过高毒性、刺激性、过敏反应和/或其它问题或并发症，并与合理的益处/风险比相称。
[0021]
本文使用的短语“药用载体”意指药用物质、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、制造助剂(例如润滑剂、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌或硬脂酸)或溶剂包囊物质，其涉及将主题化合物从一个器官或身体的部分携带或运送至另一个器官或身体的部分。每种载体在与制剂的其它成分相容和对患者无害的意义上必须是“可接受的”。
[0022]
术语“药物组合物”意指包含本发明化合物与至少一种其它药用载体的组合物。“药用载体”是指本领域中通常接受用于将生物活性剂递送至动物(具体为哺乳动物)的介质，包括(即)佐剂、赋形剂或媒介物，诸如稀释剂、防腐剂、填充剂、流动调控剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、增甜剂、矫味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂，这取决于给药模式和剂型的性质。
[0023]
典型的组合物包含本发明的式i化合物或其盐和可药用赋形剂或载体。例如，活性化合物通常与载体混合，或者被载体稀释，或者被密封在可以为安瓿、胶囊、小药囊(sachet)、纸或其它容器形式的载体内。当将活性化合物与载体混合时，或者当载体充当稀
释剂时，所述载体可以为充当活性化合物的载体、赋形剂或介质的固体、半固体或液体材料。所述活性化合物可以吸附在颗粒状固体载体上(例如容纳在小药囊中)。合适的载体的一些实例为水、盐溶液、醇、聚乙二醇、聚羟基乙氧基化蓖麻油、花生油、橄榄油、明胶、乳糖、白土、蔗糖、糊精、碳酸镁、糖、环糊精、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸或纤维素的低级烷基醚、硅酸、脂肪酸、脂肪酸胺、脂肪酸甘油单酯和甘油二酯、季戊四醇脂肪酸酯、聚氧乙烯、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。类似地，所述载体或稀释剂可以包括任何本领域已知的持续释放材料，例如单独的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯或者其与蜡的混合物。
[0024]
所述制剂可以与不与所述活性化合物发生有害反应的辅助剂混合。这些添加剂可以包括润湿剂、乳化剂和助悬剂、影响渗透压的盐、缓冲剂和/或着色物质、防腐剂、甜味剂或调味剂。如果需要，还可以对所述组合物进行灭菌。
[0025]
施用途径可以是将本发明式i化合物有效地转运到适当的或期望的作用部位的任何途径，例如口服、经鼻、肺部、口含、皮下、皮内、透皮或肠胃外途径，例如直肠、贮库(depot)、皮下、静脉内、尿道内、肌内、鼻内、眼用溶液或软膏剂的途径，口服途径是优选的。
[0026]
如果使用固体载体用于口服施用，则该制剂可以是压片的，以粉剂或小丸形式置于硬明胶胶囊中，或者其可以是糖锭(troche)或锭剂的形式。如果使用液体载体，则所述制剂可以是糖浆剂、乳剂、软明胶胶囊或无菌可注射液体的形式，例如水性或非水性液体混悬剂或溶液剂。
[0027]
可注射的剂型通常包括水性混悬剂或油性混悬剂，其可以使用合适的分散剂或润湿剂和助悬剂来制备。可注射的形式可以是在溶液相中或者是用溶剂或稀释剂制备的混悬剂的形式。可接受的溶剂或载体包括无菌水、林格溶液或等渗盐水溶液。或者，可以应用无菌油作为溶剂或助悬剂。优选地，所述油或脂肪酸是不挥发性的，包括天然油或合成油、脂肪酸、甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯。
[0028]
对于注射而言，所述制剂还可以是适于用上述的合适溶液重构的粉末。这些的实例包括但不限于冷冻干燥的、旋转干燥的或喷雾干燥的粉末，无定形粉末、颗粒、沉淀物或微粒。对于注射剂而言，所述制剂可以任选地包含稳定剂、ph调节剂、表面活性剂、生物利用度调节剂和这些试剂的组合。可以将所述化合物配制为用于通过注射进行胃肠外施用，例如通过推注或连续输注。用于注射的单位剂型可以在安瓿中或多剂量容器中。
[0029]
可以将本发明的制剂设计成在通过本领域熟知的方法施用至患者后能提供活性成分的快速、持续或延迟释放。因此，还可以将所述制剂配制成用于控释释放或缓慢释放。
[0030]
本发明的化合物可用于治疗、预防或缓解包括肿瘤和癌症在内的疾病、病症或症状。术语“癌症”，如本文所用，指一种不能控制的细胞的异常生长，并且在某种条件下能够转移(传播)。这种类型的癌症包括但不限于，实体肿瘤(如膀胱、肠、脑、胸、子宫、心脏、肾、肺、淋巴组织(淋巴瘤)、卵巢、胰腺或其它内分泌器官(如甲状腺)、前列腺、皮肤(黑色素瘤)或血液瘤(如非白血性白血病)。
[0031]
优选地，本发明的化合物用于结肠癌、直肠癌、结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、宫颈癌、肝癌和肺癌；特别优选地，本发明的化合物用于结肠癌或结直肠癌。
[0032]
本发明的式i化合物在宽的剂量范围都是有效的。例如，在成年人的治疗中，可以使用每天约0.01至约5000mg、优选约0.1至约2000mg、更优选约0.2至约2000mg的剂量。典型
的剂量为每天约0.1mg至约1000mg。在选择患者治疗方案时，其可常常须从较高的剂量开始，并且当病症得到控制时减少剂量。精确的剂量将取决于施用方式、期望的治疗、施用的形式、待治疗的对象和待治疗对象的体重以及主管医师的偏好和经验。
[0033]
通常，将本发明式i化合物分配在单位剂型中，其每单位剂量包含约0.05mg至约1000mg活性成分和可药用载体。
[0034]
通常，适于口服、经鼻、肺部或透皮施用的剂型包括约100μg至约1250mg、优选约150μg至约500mg、更优选约1.5mg到约250mg的与可药用载体或稀释剂混合的所述式i化合物。
[0035]
剂型可以是每日一次、或每日一次以上例如每日两次或每日三次施用。或者，剂型可以少于每日一次的频率施用，例如每隔一天或每周，如果开处方的医师认为合适的话。
[0036]
本发明的药物组合物可以片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、锭剂、液体或胶状物形式。供口服的片剂和胶囊可以适于单位剂量用药的形式，并且可以含常规的赋形剂，这些例子有：结合剂如糖浆、阿拉伯树胶、凝胶、山梨醇、黄著胶、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)；填料如乳糖、糖类、玉米粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；片剂润滑剂如硬脂酸镁、二氧化硅、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂如马铃薯淀粉；可接受的润滑剂如月桂基硫酸钠。片剂可按照已知的常规制药实践中的方法进行包衣。口服液体制剂可以使水状或油状悬浮液、溶液、乳剂、糖浆或酊剂，也可制成一种干物质，在使用之前再用水或其它合适的载体重新调制。这些液体制剂可含有常规的添加剂，例如悬浮剂(如：山梨醇、糖浆、甲基纤维素、葡萄糖浆、明胶、经氢化的食用油脂)。乳化剂(如孵磷脂，山梨醇单油酸盐或阿拉伯树胶)，非水相载体(包括食用油如杏仁油、精馏的椰子油、油脂如甘油、丙二醇或乙醇),防腐剂(如甲基或丙基对羟基苯甲酸或山梨酸)，如果需要也可含有常规的风味剂或着色剂。
[0037]
剂量可随用药方法和剂型，以及年龄、体重，病人的状态和敏感性不同而变化。在口服用药的情况下，有效的日剂量范围，例如，可从20mg至1g。单剂量单位含式i化合物或其可药用盐的量为20mg至200mg，可方便地用来符合日剂量的需要。使用的剂量和剂量单位可超出上述范围。
[0038]
本发明药物组合物中活性物质的百分比是可变的，因为必须使药物调剂制成一定合适比例的剂量，以获得理想的疗效。总之，本发明的药物制剂经口服或注射给药可以按每70kg体重每天0.1至15毫克式i化合物。以下的实施例是为了说明本发明某些方面的目的，在任何方面都不应被认为是限制本发明的范围。
具体实施方式
[0040]
实施例
[0041]
合成制备例
[0042]
制备实施例1：式v化合物的合成
[0043]
0℃下，在三孔烧瓶中，将4-氨基苄胺(2.0克)溶于20毫四氢呋喃，缓慢滴加二碳酸二叔丁酯(4.3克)，加完后，升温到25℃搅拌，tlc显示反应完全，旋干，粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝50:1)，得到化物v(2.0克)，产率55％。
[0044]
核磁共振1h nmr(400mhz,cdcl3)δ:7.89(d,2h,j＝7.8hz,arh),7.27(d,2h,j＝7.8hz,arh),4.9(s,2h,-ch2).
[0045]
hrms[esi]:计算值(m 1)

,222.1368；实测值:222.1373.
[0046]
制备实施例2：式iv化合物的合成
[0047]
在0℃下，将式v化合物(2克)溶于40毫升二氯甲烷中，依次加入三乙胺(1.36克)，再慢慢滴加2-碘代苯甲酰氯(1.36克)，继续搅拌半小时后，升温到25℃搅拌半小时，tlc显示反应完全，加入40毫升水，分液，水相用二氯甲烷萃取两次(20毫升
×
2)，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，粗品通过柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝4:1)，得到白色固体iv(2.8克)，产率69％。
[0048]
核磁共振1h nmr(400mhz,dmso)δ:7.89(d,1h,arh),7.68(s,1h,arh),7.58-7.60(m,2h,arh),7.49-7.51(m,2h,arh),7.39-7.43(m,1h,arh),7.27(d,2h,arh),7.11-7.15(m,1h,arh),4.9(s,1h,-nh),4.28(s,2h,-ch2),1.45(s,9h,-3ch3).
[0049]
hrms[esi]:计算值(m 1)

,452.0675；实测值:452.0643.
[0050]
制备实施例3：式iii化合物的合成
[0051]
室温下，将式iv化合物(1.9克)溶于18毫升dmf中，再依次加入碘化亚铜(799毫克)，碳酸铯(3.43克)，硒氰酸钾(726毫克)和1,10-菲罗啉(757毫克)，加热到100℃搅拌半小时，tlc显示反应完全，待反应液冷却至室温，加入40毫升水和20毫升乙酸乙酯，分液，有机相用乙酸乙酯萃取2次(20毫升
×
2)，合并的有机相通过饱和食盐水洗涤两次(30毫升
×
2)，无水硫酸钠干燥，旋干，粗品通过柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝4:1)，得到黄色固体iii(830毫克)，产率49％。
[0052]
核磁共振1h nmr(400mhz,dmso)δ:7.89(d,1h,arh),7.68(s,1h,arh),7.58-7.60(m,2h,arh),7.49-7.51(m,2h,arh),7.39-7.43(m,1h,arh),7.27(d,2h,arh),7.11-7.15(m,1h,arh),4.9(s,1h,-nh),4.28(s,2h,-ch2),1.45(s,9h,-3ch3).
[0053]
hrms[esi]:计算值(m 1)

,404.0717；实测值:404.0744.
[0054]
制备实施例4：式ii化合物的合成
[0055]
室温下，将式iii化合物(430毫克)溶于5毫升二氯甲烷中，加入1毫升三氟乙酸，加完后，继续室温搅拌1小时，tlc显示反应完全，旋干，粗品用三乙胺调成碱性(ph值为9左右)，不用进一步纯化，得到式ii化合物，直接用于下一步反应。
[0056]
核磁共振1h nmr(400mhz,dmso)δ:8.07(d,1h,arh),7.88(d,2h,arh),7.65-7.67(m,1h,arh),7.47-7.49(m,2h,arh),7.35-7.37(m,2h,arh),1.62(s,2h,-ch2).
[0057]
hrms[esi]:计算值(m 1)

,304.0193；实测值:304.0163.
[0058]
制备实施例5：式i化合物的合成
[0059]
将式ii化合物溶于10毫升二氯甲烷中，依次加入三乙胺(161毫克)，1-异硫氰酸-4-甲基亚磺酰基丁烷(189毫克)，加热到50℃搅拌2小时，tlc显示反应完全，待反应液冷却至室温，加入20毫升水，10毫升二氯甲烷，分液，水相用二氯甲烷萃取2次(15毫升
×
2)，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，粗品通过制备tlc纯化(dcm/meoh＝7:1),得到淡黄色固体i(200毫克)，产率45％。
[0060]
核磁共振1h nmr(400mhz,dmso)δ:8.08(d,1h,arh),7.89(d,2h,arh),7.68-7.69(m,1h,arh),7.47-7.49(m,2h,arh),7.35-7.37(m,2h,arh),4.68(s,2h,-ch2),3.45(s,2h,-ch2),2.65-2.76(m,2h,-ch2),1.62(s,2h,-ch2),1.45(s,3h,-ch3).
[0061]
hrms[esi]:计算值(m 1)

,481.0475；实测值:481.0486
药理活性实验例1:式i化合物对于肿瘤细胞存活率的影响
[0062]
取对数期的细胞每孔3
×
104接种于96孔板上，每孔加入200μl的dmem培养基，12h后，弃上清液，然后在复孔中加入制备实施例5制备的化合物i，按空白组和加药组(浓度分别为0、2.5、5、10、20、30和50μm)，培养24h后，弃上清液。加入含有mtt的溶液50μl培养4h，mtt的溶液由mtt(噻唑蓝)溶解在磷酸缓冲液(pbs，ph＝7.3)中制成，mtt浓度为0.5mg/ml，再向各孔分别加入100μl二甲基亚砜(dmso)，振荡1h，于酶标仪上570nm处测od(光密度)值。将各株肿瘤细胞系的梯度加药剂量与其对应的增殖抑制率进行拟合计算，得到非线性回归方程，ic
50
值指肿瘤细胞系增殖抑制率为50％时的加药剂量。其中，增殖抑制率％＝(空白组od值-给药组od值)/空白组od值。结果显示，加药后，肿瘤细胞活性明显下降。本实验分别对人结肠癌癌细胞hct116、sw480、ht29进行细胞毒活性的检测，5-氟尿嘧啶为阳性对照药，具体的结果如表1所示表1
[0063]
实验结果显示，本发明的化合物i对不同的肿瘤细胞具有明显的细胞毒活性，尤其对sw480细胞株和ht29细胞株具有良好的细胞毒活性，且明显优于对照药物5-氟尿嘧啶，能够起到很好的肿瘤细胞抑制作用。
[0064]
实验例2:醌还原酶诱导实验
[0065]
nad(p)h苯醌氧化还原酶(nqo1)能将醌类(例如甲萘醌)还原为氢醌，从而预防由醌类介导的氧化性损伤。作为还原性酶，醌还原酶与化学预防及抗癌活性有关。因此，常把诱导醌还原酶作为细胞化学预防的一种策略。
[0066]
取对数期的小鼠肝癌细胞(hepa1c1c7，购置于atcc)，按每孔3
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104接种于96孔板上，每孔加入200μl的dmem培养基，12h后，弃上清液，然后在复孔中加入制备实施例5制备的化合物i,按对照组和加药组培养24h后，弃上清液。加入4
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溴黄酮(0.106mg)，为阳性对照加药组；加入二甲基亚砜(0.106mg)，为阴性对照组；空白组为不加药的200μl的dmem培养基。培养24h后，弃上清液。分别向化合物i加药组、阳性对照加药组、阴性对照组和空白组中加入洋地黄皂苷使细胞裂解，再加入含有mtt的溶液200μl培养5min，mtt的溶液由mtt(噻唑蓝)溶解在磷酸缓冲液(pbs,ph＝7.3)中形成，mtt浓度为0.5mg/ml，于酶标仪上550nm处测ir值。诱导倍数:ir＝[(加药组od值-空白组od值)/(阴性对照组od值-空白组od值)]/(1-增殖抑制率％)；其中，增殖抑制率％＝(空白组od值-加药组od值)/空白组od值。具体结果如表2所示。表2
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溴黄酮为阳性对照
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结果显示，实施例5制备的化合物i的诱导倍数(ir)值为3.22，明显优于对照药物4
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溴黄酮(ir值2.24)，显示本发明的化合物i能够有效诱导醌还原酶的表达，因此可以认为在肿瘤发生的起始阶段具有癌症预防作用。