南美白对虾用抗亚硝氮胁迫中草药饲料添加剂及其制备方法

1.本发明属于南美白对虾养殖技术领域，尤其涉及一种南美白对虾用抗亚硝氮胁迫中草药饲料添加剂及其制备方法。


背景技术：

2.南美白对虾(litopenaeus vannamei)，因其优良的环境适应性和耐受性使其在虾类人工养殖中脱颖而出，也是是世界养殖产量最高的三大优良品种之一。中国曾于20世纪80年代末引进南美白对虾，并于90年代初期人工繁殖成功，引种至今现在国内广泛养殖，已成为中国虾类养殖的主要对象。
3.南美白对虾养殖过程中，随着养殖时间的延长，池底会沉淀大量未能及时捕捞的对虾排泄物和剩余残饵。由于养殖水体流动性差，故池底多为缺氧状态，经过水体中厌氧菌的发酵和分解作用，底部水体中氨、亚硝酸盐含量往往会超过对虾耐受值，加之南美白对虾喜伏底的生活习性，会引起其环境应激，从而严重影响南美白对虾的免疫能力。对虾的免疫系统简单，对应激反应敏感，应激下免疫力大幅度降低，水体中病原菌和环境因素外加对虾自带的病原微生物则会趁虚而入，一旦处理不当，就会对养殖户造成难以估量的损失。防病永远大于治病，因此，尽可能减少应激现象为对虾养殖业的重中之重。


技术实现要素：

4.本发明要解决的技术问题是提供一种纯天然、易制备、低毒性、低成本的南美白对虾用抗亚硝氮胁迫中草药饲料添加剂及其制备方法。
5.为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
6.南美白对虾用抗亚硝氮胁迫中草药饲料添加剂，由天门冬、绞股蓝、甘草制成。
7.天门冬为天门冬饮片的醇提物浓缩液。
8.上述中草药饲料添加剂由天门冬饮片的醇提物浓缩液3～8份、绞股蓝粉末2～6份、甘草粉末1～3份制成。
9.上述南美白对虾用抗亚硝氮胁迫中草药饲料添加剂的制备方法，将天门冬饮片的醇提物浓缩液、绞股蓝粉末、甘草粉末按比例混合，加入适量食品级乙醇溶液溶解，搅拌成药泥；将药泥投入制粒机混匀，而后烘箱恒温烘干、粉碎、过筛，即得。
10.使用的食品级乙醇溶液浓度为80％，烘干温度为75度，过筛为80目。
11.上述天门冬饮片的醇提物浓缩液按以下制备：将天门冬饮片投入隔水加热锅内，加入乙醇溶液，再加入naoh溶液调整ph，浸泡，使用naoh溶液调整ph；然后，隔水提取，纱布过滤，过滤物再提取一次，重复两次，合并三次提取液，减压加热浓缩，留存备用。
12.乙醇溶液的浓度为15～35％，加入量为天门冬饮片质量的9～15倍。
13.naoh溶液的浓度为1mol/l；调整ph至9～13。
14.浸泡0.5～2.5小时；隔水提取的温度为65～95℃，时间为1.5～4.5h；浓缩至密度1.12-1.24g/ml。
15.中草药饲料添加剂的使用方法，其特征在于：拌料饲喂，按每公斤饲料2-8克添加，连用35天。
16.针对南美白对虾养殖中氨、亚硝酸盐等引起其应激反应致免疫力下降的问题，发明人研制了一种南美白对虾用抗亚硝氮胁迫中草药饲料添加剂，由天门冬、绞股蓝、甘草制成。据此，还建立了相应制备方法，即在碱性环境下用乙醇提取天门冬饮片，将提取液减压浓缩备用，随后逐渐加入一定量的绞股蓝粉末、甘草粉末、食品级乙醇搅匀，烘干、粉碎，过8筛，即得。其中，碱性环境下用醇液作为水相提取，有助于多糖浸出，提高产品有效成分的含量，更好保持中草药的药性，也降低提取工艺的成本；较低温度加热提取天门冬饮片可以减少多糖高温分解；省略了浓缩药液醇沉过夜和冷冻干燥的过程，降低了制备要求，节约了生产成本。因此，本发明制备方法流程简易、原材料纯绿色天然，保证质量品质的真实性和可靠性的同时，也极大保留了中草药制剂低残留和低耐药性的特点，做到制作环节无添加有毒化学制剂，降低了产品毒性和制作要求。研究表明，所得中草药饲料添加剂具有纯天然、易制备、低毒性、低成本、有效成分含量高等特点，并有调节对虾免疫力、抗亚硝氮应激和促生长的作用，有效提高南美白对虾的抗应激能力和生长指标，其副作用较小且可有效避免病原产生的耐药性，是一种天然绿色的饲料添加剂。
具体实施方式
17.一、南美白对虾用抗亚硝氮胁迫中草药饲料添加剂的制备
18.实施例1
19.配方：天门冬饮片的醇提物浓缩液3份、绞股蓝粉末2份、甘草粉末1份。
20.制法：将天门冬饮片的醇提物浓缩液、绞股蓝粉末、甘草粉末按比例混合，加入适量浓度为80％食品级乙醇溶液溶解，搅拌成药泥；将药泥投入制粒机混匀，而后烘箱恒温75度烘干、中草药粉碎器粉碎、过筛80目，装袋(1kg/袋)，阴凉处密封保存。
21.其中，天门冬饮片的醇提物浓缩液按以下制备：将天门冬饮片投入隔水加热锅内，加入天门冬饮片质量9倍的浓度15％的乙醇溶液，再加入1mol/l naoh溶液调整ph至9，浸泡0.5小时后，使用1mol/l naoh溶液调整ph至9；然后，65℃隔水提取1.5h，纱布过滤，过滤物再提取一次，重复两次，合并三次提取液，减压加热浓缩至密度1.12-1.24g/ml(生药浓度1g/ml)，留存备用。
22.实施例2
23.配方：天门冬饮片的醇提物浓缩液5份、绞股蓝粉末4份、甘草粉末2份。
24.制法：同实施例1
25.其中，天门冬饮片的醇提物浓缩液按以下制备：将天门冬饮片投入隔水加热锅内，加入天门冬饮片质量12倍的浓度25％的乙醇溶液，再加入1mol/l naoh溶液调整ph至11，浸泡1.5小时后，使用1mol/l naoh溶液调整ph至11；然后，80℃隔水提取3h，纱布过滤，过滤物再提取一次，重复两次，合并三次提取液，减压加热浓缩至密度1.18g/ml(生药浓度1g/ml)，留存备用。
26.实施例3
27.配方：天门冬饮片的醇提物浓缩液8份、绞股蓝粉末6份、甘草粉末3份。
28.制法：同实施例1
29.其中，天门冬饮片的醇提物浓缩液按以下制备：将天门冬饮片投入隔水加热锅内，加入天门冬饮片质量15倍的浓度35％的乙醇溶液，再加入1mol/l naoh溶液调整ph至13，浸泡2.5小时后，使用1mol/l naoh溶液调整ph至13；然后，95℃隔水提取4.5h，纱布过滤，过滤物再提取一次，重复两次，合并三次提取液，减压加热浓缩至密度1.24g/ml(生药浓度1g/ml)，留存备用。
30.二、南美白对虾用抗亚硝氮胁迫中草药饲料添加剂抗氨氮、亚硝氮应激的研究
31.方法：选取1400尾南美白对虾虾随机分为7组，每组2个平行，每个平行100尾，每组共200尾。设置1个空白对照组、1个应激对照组和5个试验剂量组，将实施例1所得添加剂以混饲形式连续给药35天后，进行生长指标、脏器指数、免疫指标的测定。具体分组处理如表1所示。(生长指标：初始体长、终末体长、初始体重、终末体重、增长率、增重率；脏器指数：肝体比；免疫指标：酚氧化物酶(po)、酸性磷酸酶(acp)、碱性磷酸酶(akp)、总抗氧化能力(t-aoc))
32.表1本发明中草药饲料添加剂对南美白对虾亚硝氮胁迫试验分组及处理
[0033][0034]
35天喂养试验结束后，从每个剂量组中随机抽取80尾南美白对虾，均分入2个84.5cm
×
57.5cm
×
46.5cm的透明收纳箱中，收纳箱中注水60l，每箱分别按照46mg/l浓度的添加氯化铵溶液和20mg/l浓度的添加亚硝酸钠溶液用于氨氮应激和亚硝氮应激试验，进行为期72h的氨氮应激和亚硝氮应激试验，试验期间，各组饲料照常饲喂。
[0035]
研究结果具体数据见表2至表5。
[0036]
表2本发明中草药饲料添加剂喂养35天对生长指标的影响(m
±
sd)
[0037][0038]
注：同一列字母肩标的相同者表示差异不显著(p》0.05)，字母肩标不同者为差异显著(p《0.05)。
[0039]
表3本发明中草药饲料添加剂喂养35天对免疫指标的影响(m
±
sd)
[0040][0041]
注：同一列字母肩标的相同者表示差异不显著(p》0.05)，字母肩标不同者为差异显著(p《0.05)。
[0042]
表4本发明中草药饲料添加剂喂养35天后72小时急性氨氮胁迫对免疫指标的影响(m
±
sd)
[0043][0044]
注：同一列字母肩标的相同者表示差异不显著(p》0.05)，字母肩标不同者为差异显著(p《0.05)。
[0045]
表5本发明中草药饲料添加剂喂养35天后72小时急性亚硝氮胁迫对免疫指标的影响(m
±
sd)
[0046][0047]
注：同一列字母肩标的相同者表示差异不显著(p》0.05)，字母肩标不同者为差异显著(p《0.05)。
[0048]
从上述结果可知：生长指标显示，不同剂量组均能不同程度的促进南美白对虾的增长和增重，4g/kg、6g/kg提升效果与空白组相比明显(p＜0.05)；拌料饲喂35天后，除4g剂量组t-aoc含量降低但与空白组相比无明显差异外，其余各剂量组各项免疫指标均上升。其中，4g/kg、6g/kg、8g/kg剂量组po、akp指标显著上升(p＜0.05)，2g/kg、4g/kg、6g/kg剂量组acp指标有明显上升(p＜0.05)，6g/kg、8g/kg剂量组t-aoc指标升高明显(p＜0.05)；急性氨氮胁迫72h后，2g/kg剂量组akp指标与胁迫模型组有显著提升(p＜0.05)，2g/kg、6g/kg剂量组t-aoc指标与胁迫组有明显升高(p＜0.05)，acp、po指标无显著差异(p＞0.05)；急性亚硝氮胁迫72h后，1g/kg剂量组po与胁迫模型组相比有明显提升(p＜0.05)，6g/kg剂量组acp指标显著上升(p＜0.05)，4g/kg、6g/kg剂量组akp指标升高效果显著(p＜0.05)，t-aoc指标无显著差异(p＞0.05)。
[0049]
根据试验结果，南美白对虾用抗亚硝氮胁迫中草药饲料添加剂用于南美白对虾的临床推荐用法用量为：拌料饲喂，每公斤饲料6克，连用35天。
[0050]
综上，本产品对南美白对虾的非特异性免疫力和抗应激能力提升效果明显，且一定程度上还可以促进对虾生长增重，如能推广使用，可有效减少生长条件骤变或者运输因素所导致的环境胁迫问题，减少其死亡率，提高存活率，增加渔民出货量。