一种分离检测倍他米松原料中相关杂质的方法与流程

1.本发明涉及药物分析技术领域，特别是涉及一种分离检测倍他米松原料中相关杂质的方法。


背景技术：

2.倍他米松是一种药品，倍他米松的糖代谢及抗炎作用较氢化可的松强，为氢化可的松的15倍，但钠潴留作用为氢化可的松的百倍以上，在原发性肾上腺皮质功能减退症中，可与糖皮质类固醇一起用于替代治疗。也适用于低肾素低醛固酮综合征和植物神经病变所致体位性低血压等。
3.二丙酸倍他米松可用于治疗皮肤炎症和瘙痒症，如神经性皮炎、接触性皮炎、脂溢性皮炎、湿疹、局限性瘙痒症、盘状红斑狼疮等。而倍他米松作为二丙酸倍他米松的起始物质，研究倍他米松含量分析方法，可有效减少检测过程中的误差以及时间成本等。
4.倍他米松现阶段已有ep10.0、usp42s2、jp17药典方法，其中对已知杂质及其他相关杂质的分离效果较好的倍他米松ep10.0有关物质分析方法，对杂质sm
1r
和杂质sm
1b
不能有效分离，且杂质sm
1d
和杂质sm
1q
不能达基线分离
5.而本发明在原基础方法上，提供了一种更加优化的分析方法。建立了hplc方法，杂质sm
1r
和杂质sm
1b
有效分离，且杂质sm
1d
和杂质sm
1q
的分离效果较倍他米松ep10.0有关物质分析方法更好。


技术实现要素：

6.本发明的目的之一是提供一种分离倍他米松原料中相关杂质的方法，该方法可以有效分离倍他米松原料中11中相关杂质。
7.为了实现上述目的，本发明提供的方案为：
8.分离倍他米松原料中相关杂质的方法，采用色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用流动相a、流动相b和流动相c进行梯度洗脱，将所述相关杂质进行分离；所述流动相a为水，流动相b为乙腈，流动相c为甲醇；所述相关杂质为sm1a、sm1b、sm1c sm1d、sm1e、sm1g、sm1k、sm1l、sm1q、sm1r、5，5-二甲基海因中的一种或多种，具体结构式如下：
[0009][0010]
进一步，所述色谱柱柱温为28～32℃；
[0011]
具体的，所述色谱柱柱温为30℃；
[0012]
进一步，所述色谱柱规格为4.6mm
×
250mm，5μm；
[0013]
进一步，所述色谱柱型号为shim-pack vp-ods；
[0014]
进一步，所述方法进样量为10～30μl；
[0015]
具体的，所述方法进样量为10μl；
[0016]
进一步，所述梯度洗脱程序为：
[0017][0018]
进一步，所述流动相流速为0.9～1.1ml/min；
[0019]
具体的，所述流动相流速为1.0ml/min。
[0020]
本发明目的之二是提供一种检测倍他米松原料中相关杂质的方法，该方法可以准确判别倍他米松原料中是否含有所述相关杂质。
[0021]
为了实现上述目的，本发明的技术方案为：
[0022]
检测倍他米松原料中相关杂质的方法，利用目的一中所述的方法将所述倍他米松原料中相关杂质进行分离，通入检测器进行检测，将检测器波长设定为245～265nm，将供试品色谱图与已知对照品色谱图进行对比，判定倍他米松原料中是否含有所述相关杂质；
[0023]
进一步，所述检测器波长设定为254nm。
[0024]
本发明目的之三是提供一种测定倍他米松原料中相关杂质的方法，该方法可以准确测定倍他米松原料中相关杂质的含量。
[0025]
为了实现上述目的，本发明的技术方案为：
[0026]
测定倍他米松原料中相关杂质的方法，其特征在于，所述方法具体包含以下步骤：
[0027]
1)配制供试品溶液、对照品溶液：取供试样品溶于稀释剂中，得供试品溶液；取所述相关杂质对照品溶于稀释剂中得对照品溶液；
[0028]
2)分离：利用目的一中所述的方法，将倍他米松原料中相关杂质进行分离；
[0029]
3)检测：利用目的二中所述的方法，检测他米松原料中是否存在所述相关杂质；
[0030]
4)测定：根据检测得到的色谱图，按外标法以峰面积计算供试品溶液中所述相关杂质的含量；
[0031]
具体的，所述稀释剂为体积比1:1的甲醇和乙腈。
[0032]
本发明的有益效果在于：
[0033]
(1)本发明通过选择合适的色谱柱，调整流动相的比例、柱温、流速，设置梯度洗脱，利用高效液相色谱法建立稳定可靠的实验方法检测倍他米松原料中相关杂质的方法。
[0034]
(2)本发明方法采用高效耐用的色谱方法，可在37分钟内将倍他米松ep10.0有关物质分析方法不能有效分离的杂质sm1r、sm1b、sm1d、sm1q与供试品主峰及供试品中可能存在的其他杂质很好分离，提供了现有技术未能解决的倍他米松中杂质sm1r、sm1b、sm1d、sm1q分离测定问题；分析方法灵敏度高；专属性强；重现性好；操作简单可行。
附图说明
[0035]
图1为ep10.0方法测定倍他米松供试品溶液的hplc图；
[0036]
图2为本发明测定倍他米松供试品溶液的hplc图；
[0037]
图3为本发明实施例3测限溶液的hplc图；
[0038]
图4为本发明实施例4供试品混合溶液色谱条件耐用性2的hplc图；
[0039]
图5为本发明实施例4供试品混合溶液色谱条件耐用性3的hplc图；
[0040]
图6为本发明实施例4供试品混合溶液色谱条件耐用性4的hplc图；
[0041]
图7为本发明实施例4供试品混合溶液色谱条件耐用性5的hplc图；
[0042]
图8为本发明实施例4供试品混合溶液色谱条件耐用性6的hplc图；
[0043]
图9为本发明实施例4供试品混合溶液色谱条件耐用性7的hplc图；
[0044]
图10为本发明实施例4供试品混合溶液色谱条件耐用性8的hplc图；
[0045]
图11为本发明实施例4供试品混合溶液色谱条件耐用性9的hplc图。
具体实施方式
[0046]
所举实施例是为了更好地对本发明进行说明，但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
[0047]
实施例1
[0048]
溶液配制：
[0049]
取本品适量，精密称定，置量瓶中，用稀释剂[甲醇-乙腈(50:50)]稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。
[0050]
取各杂质sm1a、sm1b、sm1c sm1d、sm1e、sm1g、sm1k、sm1l、sm1q、sm1r、5，5-二甲基海因适量，加稀释剂溶解并稀释制成每1ml中约含1μg/ml的混合溶液，作为对照品溶液。
[0051]
方法：
[0052]
高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(shim-pack vp-ods 4.6mm
×
250mm，5μm或效能相当的色谱柱)；以水为流动相a，以乙腈为流动相b，以甲醇为流动相c，进行线性梯度洗脱(见表1)，检测波长为254nm；流速为每分钟1.0ml；柱温为30℃。精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算，供试品溶液中杂质含量。
[0053]
表1梯度洗脱程序
[0054][0055]
倍他米松现阶段已有ep10.0、usp42s2、jp17药典方法，其中对已知杂质及其他相关杂质的分离效果较好的倍他米松ep10.0有关物质分析方法，对杂质sm1r和杂质sm
1b
不能有效分离，且杂质sm1d和杂质sm1q不能达基线分离(见附图1、表2)。通过筛选色谱柱和色谱条件，建立了hplc方法，杂质sm1r和杂质sm1b有效分离，且杂质sm1d和杂质sm1q的分离效果较倍他米松ep10.0有关物质分析方法更好(见附图2、表3)。
[0056]
表2 ep10.0测定倍他米松积分结果
[0057][0058]
表3发明方法测定倍他米松供试品溶液积分结果
[0059][0060]
实施例2
[0061]
专属性：
[0062]
倍他米松中可能存在的杂质：sm
1a
、sm
1c
、sm
1e
、sm
1g
、sm
1k
、sm
1l
、sm
1b
、sm
1d
、sm
1q
、sm
1r
、5,5-二甲基海因共计11个杂质，我们对杂质sm
1b
、sm
1d
、sm
1q
、sm
1r
进行研究，考察这4个杂质与其余7个杂质间的分离情况。
[0063]
分别取空白溶液、杂质定位溶液、其他杂质混合溶液、供试品溶液、混合溶液各10μl，依法进样，记录色谱图(见附图2)，测定结果见表4。
[0064]
表4专属性试验测定结果
[0065][0066]
结论：空白溶液不干扰杂质sm
1r
、sm
1b
、sm
1d
和sm
1q
的检测；供试品不干扰上述杂质的检测；供试品中可能存在的其他杂质与上述杂质间的分离度及上述各杂质间分离度均大于
1.5，方法专属性符合要求。
[0067]
实施例3
[0068]
检测限：
[0069]
取检测限溶液连续进样3次，计算主峰峰高与噪声的比值(信噪比)。试验结果见附图3、表5、6。
[0070]
表5检测限溶液积分结果
[0071][0072]
表6检测限测定结果
[0073][0074]
结论：杂质sm
1r
检测限浓度为0.032μg/ml，以样品中存在浓度表示为0.0032％，信噪比均值为4.1；杂质sm
1b
检测限浓度为0.033μg/ml，以样品中存在浓度表示为0.0033％，信噪比均值为7.3；杂质sm
1d
检测限浓度为0.032μg/ml，以样品中存在浓度表示为0.0032％，信噪比均值为6.0；杂质sm
1q
检测限浓度为0.030μg/ml，以样品中存在浓度表示为0.0030％，信噪比均值为5.7。
[0075]
实施例4
[0076]
色谱条件耐用性：
[0077]
取杂质供试品混合溶液，分别使用正常流动相，预定测试的不同流动相比例、柱温、柱流速以及同型号不同批次色谱柱进行测试，待仪器系统稳定后分别测试，记录各峰间的分离度，试验结果见表7-15，附图2、4-11。
[0078]
表7供试品混合溶液色谱条件耐用性2积分结果
[0079][0080]
表8供试品混合溶液色谱条件耐用性3积分结果
[0081][0082][0083]
表9供试品混合溶液色谱条件耐用性4积分结果
[0084][0085]
表10供试品混合溶液色谱条件耐用性5积分结果
[0086][0087]
表11供试品混合溶液色谱条件耐用性6积分结果
[0088][0089][0090]
表12供试品混合溶液色谱条件耐用性7积分结果
[0091][0092]
表13供试品混合溶液色谱条件耐用性8积分结果
[0093][0094]
表14供试品混合溶液色谱条件耐用性9积分结果
[0095][0096][0097]
表15色谱条件耐用性测定结果
[0098][0099]
结论：色谱条件有微小波动时(流速
±
0.1ml/min、柱温
±
2℃、乙腈起始比例
±
2％、甲醇起始比例
±
1％、同型号不同批号色谱柱)，各杂质峰面积归一化含量基本一致，杂质sm
1r
、sm
1b
、sm
1d
、sm
1q
与供试品主峰及供试品中可能存在的其他杂质间分离度均大于1.5，
色谱条件耐用性符合要求。
[0100]
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。