代表血小板反应性的生物标记物在制备心血管药物中的应用的制作方法

1.本技术涉及药物领域，尤其涉及一种代表血小板反应性的生物标记物在制 备心血管药物中的应用。


背景技术：

2.随着生活水平的提高，冠心病等动脉血栓性疾病已成为威胁人民健康的头 号杀手。研究显示，血小板异常激活引起的血管内血栓形成是动脉血栓性疾病 心血管疾病的病理基础，故抑制血小板激活的抗血小板药成为预防与治疗这类 疾病的主要手段。心血管疾病发生的主要原因是血小板反应性增高，但血小板 反应性增加的原因尚不清楚。抗血小板药是防治心血管疾病的主要手段。但因 为心血管病病人血小板反应性增加的原因尚不清楚，所以无法选择具有针对性 的治疗方案和药物，无法进行精准化治疗，导致目前心血管疾病事件发生率增 加，死亡率高。
3.galectin-3是β一半乳糖苷酶结合凝集素家族的一种。与同类细胞间的黏附作 用有关。信号定位：胞质、胞核在病理学中的应用包括间变大细胞淋巴瘤( ) 与霍奇金淋巴瘤(-)的鉴别诊断和肾嫌色细胞癌。内源性凝集素galectin(半乳 糖凝集素)即β-半乳糖苷结合蛋白，是四类lectin(凝集素)中的一种，它广泛 存在于从线虫到人类各级动物中。它具有特殊的氨基酸序列，与含8β-乳糖苷残 基的糖结合物具有很高的亲和力，在细胞与细胞、细胞与基质之间起特异性粘 附作用，与肿瘤的转移、浸润、生长和粘附有关，参与细胞的增殖、分化和局 部免疫调节和凋亡等。
4.研究一种新的血小板反应性的生物标记物，有助于控制血小板反应性，开 发出相关药物，为患者带来福音。


技术实现要素：

5.本技术提供了一种代表血小板反应性的生物标记物在制备心血管药物中的 应用，以提供一种生物标记物，有助于血栓性药物通过生物标记物控制血小板 的反应性。
6.第一方面，本技术提供了一种代表血小板反应性的生物标记物在制备心血 管药物中的应用，所述应用中，生物标记物为galectin-3。
7.可选的，galectin-3位于血浆中(优选的，位于外周血中)。
8.可选的，galectin-3的浓度与血小板的聚集性在所述血浆中的关系为正相关。
9.可选的，所述正相关具体包括：
10.所述血浆中galectin-3含量水平与collagen诱导的血小板聚集性的正相关线 性方程关系为y＝2.264
×
x 32.25，y为血小板聚集性，单位为％；x为galectin-3 含量，单位为μg/l；相关系数|r|＝0.65。
11.可选的，所述正相关具体包括：所述血浆中galectin-3含量水平与thrombin 诱导的血小板聚集性的正相关线性方程关系为y＝1.878
×
x 33.65，y为血小板 聚集性，单位为％；x为galectin-3含量，单位为μg/l；相关系数|r|＝00.59。
12.心血管病患者血浆中，galectin-3的浓度为9.3
±
3.9ug/l，血小板的聚集性 为26％-83％(胶原collagen诱导)和24％-81％(凝血酶thrombin诱导)；在健 康人的血浆中，galectin-3的浓度为3.5
±
1.1ug/l，血小板的聚集性为23％-45％ (胶原collagen诱导)和27％-47％(凝血酶thrombin诱导)
13.可选的，所述应用包括血小板相关的抗血栓性药物中的应用。
14.可选的，所述应用包括动脉血栓性药物中的应用。
15.可选的，所述应用包括使用galectin-3抑制剂抑制所述生物标记物，以降低 血小板的聚集性。
16.本技术实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
17.本技术实施例提供的代表血小板反应性的生物标记物在心血管药物中的应 用，所述应用中，生物标记物为galectin-3，经实验证明，心血管病人血液 中galectin-3含量从正常水平升高后，与血小板反应性会在正常水平之外，呈递 增趋势，具有正相关的关系，可以很好地将生物标记物用于心血管药物的制备 中，通过生物标记物控制血小板的反应性，可以预防和治疗与血小板反应性相 关的疾病，具体包括预防血小板相关的动脉血栓性心血管事件发生的作用。
附图说明
18.此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本发明 的实施例，并与说明书一起用于解释本发明的原理。
19.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施 例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，对于本领 域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图 获得其他的附图。
20.图1为本技术实施例提供的心血管病人血浆galectin-3含量水平显著高于健 康人血浆galectin-3含量水平图；
21.图2为本技术实施例提供的collagen或thrombin诱导心血管病人受试者血小 板样品中血小板聚集率显著提高的效果图；
22.图3为本技术实施例提供的受试者血浆galectin-3含量水平与其血小板聚集 率成正相关线性关系；图4为本技术实施例提供的不同受试病人血浆中的galectin 3含量。
具体实施方式
23.为使本技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本技术 实施例中的附图，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然， 所描述的实施例是本技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本技术 中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所 有其他实施例，都属于本技术保护的范围。
24.第一方面，本技术提供了一种代表血小板反应性的生物标记物在制备心血 管药物中的应用，所述应用中，生物标记物为galectin-3。
25.在制备心血管药物，通过控制生物标记物在血浆中的浓度，达到治疗备心血管 的
3含量水平显著高于健康受试者血浆 galectin-3含量水平。其中，数据为平均值
±
标准误差表示。
41.实施例2.collagen或thrombin诱导的心血管病人受试者的血小板聚集率
42.本实施例中，心血管病人和健康人受试者血小板的制备：全血来自于签订 了知情同意书的志愿者，志愿者在取血前20天内未服用阿司匹林、氯吡格雷等 任何抗血小板药物。抗凝剂采用acd(85mmol l-1 sodium citrate,71.38mmoll-1 citric acid,and 27.78mmol l-1 glucose)。300g离心20分钟得到富血小板血 浆，取上清后900g进一步离心10分钟得到血小板。血小板用tyrode buffer重悬 (138mmol l-1
nacl,2.7mmol l-1
kcl,2mmol l-1
mgcl2,0.42mmol l-1
nah2po4, 5mmol l-1
glucose,10mmol l-1
hepes,0.2％bovine serum albumin,and 0.02unitml-1
apyrase,ph 7.4)，计数血小板，将血小板数目调整为2.5
×
108个血小板/ ml。
43.血小板聚集测定：血小板的聚集在血小板聚集仪(model 700,chrono-log, haverston,pa)，参数设定：搅拌速度900rpm，温度37℃，在加入不同浓度激 动剂collagen(0.8μg/ml)或thrombin(0.8u/ml)后，监测血小板聚集曲线5 分钟，以血小板最大聚集率作为最终血小板聚集率数据。collagen为胶原脯氨酸 羟化酶抑制剂，thrombin为凝血酶。
44.血小板聚集率结果如图2所示，collagen(0.8μg/m l)诱导心血管病人受 试者(n＝182)血小板样品的血小板聚集率(53.4
±
14.9％)显著高于健康人受 试者(n＝17)血小板样品的血小板聚集率(33.6
±
6.0％，p《0.01)；并且thrombin (0.8u/ml)诱导心血管病人受试者(n＝182)血小板样品的血小板聚集率(51.2
ꢀ±
13.6％)同样显著高于健康人受试者(n＝17)血小板样品的血小板聚集率(38.4
ꢀ±
5.0％，p《0.01)。collagen(0.8μg/ml)诱导心血管病人受试者血小板样品的 血小板聚集率显著高于健康人；thrombin(0.8u/ml)诱导心血管病人受试者血 小板样品的血小板聚集率也显著高于健康人。数据用平均值
±
标准误表示。证 明了心血管病人受试者血小板聚集率显著高于健康人。
45.实施例3.受试者血浆galectin-3含量水平与其血小板聚集率的相关性
46.在本实施例中，通过分析实施例1的心血管受试者(n＝182)血浆galectin-3 含量水平数据与实施例2的对应受试者(n＝182)血小板样品的血小板聚集率 数据(collagen or thrombin诱导)关系，进行线性回归分析，计算相关系数。
47.结果如图3所示，在一定范围内，受试者血浆galectin-3含量水平越高，其 对应的血小板聚集率越高。统计分析发现，受试者血浆galectin-3含量水平与 collagen诱导的血小板聚集存在正相关线性方程关系y＝2.264
×
x 32.25(p (two-tailed)《0.01)，相关系数|r|＝0.65，受试者血浆galectin-3含量水平与 血小板聚集率存在高度正相关性；受试者血浆galectin-3含量水平与thrombin 诱导的血小板聚集存在正相关线性方程关系y＝1.878
×
x 33.65(p(two-tailed) 《0.01)，相关系数|r|＝0.59，受试者血浆galectin-3含量水平与血小板聚集率存 在高度正相关性，证明随着受试者血浆galectin-3含量水平增高，血小板样品的 血小板聚集率越高，两者具有正相关性。受试者血浆galectin-3含量水平越高， 其血小板聚集率越高。血浆galectin-3含量水平可以预测血小板的聚集率。
48.实施例4.
49.根据临床诊断标准严重程度分为四类：稳定性冠心病人，不稳定性冠心病 人，非st段抬高急性心肌梗死病人和st段抬高急性心肌梗死病人。如图4所 示，我们发现：58名稳
定性冠心病人galectin 3含量为8.2
±
2.8μg/l，64 名不稳定性冠心病人galectin 3含量为8.8
±
3.5μg/l，32名非st段抬高急 性心肌梗死病人galectin 3含量为10.6
±
4.3μg/l，以及28名st段抬高急 性心肌梗死病人galectin 3含量为11.5
±
4.9μg/l，四种心血管疾病病人血浆 galectin 3均显著高于健康人受试者血浆galectin 3水平，且随着疾病严重程度 逐渐升高。
50.需要说明的是，在本文中，诸如“第一”和“第二”等之类的关系术语仅 仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者 暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包 括”、“包含”或者任何其他变体意在涵盖非排他性地包含，从而使得包括一 系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明 确列出的其他要素，或者还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要 素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个
……”
限定的要素，并不排 除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
51.以上所述仅是本发明的具体实施方式，使本领域技术人员能够理解或实现 本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说将是显而易见的， 本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其他 实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要 符合与本文所申请的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。