csf1r激酶抑制剂及其用途1.相关申请2.本技术要求2020年9月23日提交的中国专利申请202011007689.2号的优先权，通过引用的方式将该申请的全部内容整体并入本文，用于所有目的。
技术领域：
：3.本技术大体涉及医药领域，具体涉及csf1r激酶抑制剂及其在治疗csf1r激酶信号转导通路相关疾病或者改善肿瘤免疫抑制状态中的应用(作为csf1r激酶抑制剂药物)。
背景技术：
：：4.作为功能整体、不可分割的肿瘤微环境在肿瘤进程中发挥着重要作用。微环境中众多基质细胞，如肿瘤相关巨噬细胞(tams)、树突状细胞(dc)、调节性t细胞(treg)、成纤维细胞、杀伤性t细胞等，通过与肿瘤细胞互动促进肿瘤进程。5.其中，肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associatedmacrophages，tams)是重要的微环境基质细胞，在某些肿瘤组织中巨噬细胞的比重可高达50％，在脑胶质瘤中巨噬细胞占瘤重的30％以上。巨噬细胞是体内最重要的一类抗原提呈细胞，在肿瘤发展的各阶段都存在，称为肿瘤相关巨噬细胞(tams)。经典活化型巨噬细胞(m1型)广泛参与体内固有免疫和适应性免疫，起抗原递呈作用，对肿瘤具有明显的杀伤和抑制作用，而替代活化的巨噬细胞(m2型)起免疫抑制作用，在促进肿瘤生长、促进血管生成以及侵袭和转移中扮演重要角色。巨噬细胞集落刺激因子(csf1)是经典的促肿瘤细胞因子，它可招募巨噬细胞到肿瘤区域，并促进肿瘤细胞与巨噬细胞的相互作用，进而导致微环境中释放各种促肿瘤发展的生长因子(如vegf、基质金属蛋白酶等)，从而促进肿瘤的生长和转移。csf1发挥生物学效应是通过与它唯一的细胞表面受体csf1r结合。csf1与其受体csf1r结合后，引发信号级联反应，通过激活下游多条信号通路而发挥其功能。研究表明csf1和csf1r在多种恶性肿瘤中都有异常升高，与肿瘤的发生、发展和不良预后密切相关。因此，csf1r成为调控肿瘤微环境肿瘤相关巨噬细胞的关键靶点，csf1r小分子抑制剂的研发日益受到关注。6.目前已有多个csf1r小分子抑制剂处于临床研发阶段，进展较快的选择性csf1r抑制剂包括pexidartinib(也称为培西达替尼，plx3397)和blz945。plx3397于2019年8月获批用于腱鞘巨细胞瘤(tgct)的治疗。tgct是一种由csf1过度表达而引起的良性软组织肿瘤。plx3397作为csf1r抑制剂，可通过阻断csf1/csf1r信号通路使得肿瘤中tams数量减少，并使tams的重新极化，导致m2型tams的数量减少，证实csf1r是一个非常有潜力的肿瘤治疗靶点。然而该药物毒副作用较大，药物标签中附有黑框警告，提示该药物具有严重和潜在致命肝损伤风险。此外，上市药物pazopanib(帕唑帕尼)、imatinib(伊马替尼)、sunitinib(舒尼替尼)等也被报道具有csf1r抑制活性，但它们均为广谱抑制剂，尚无通过针对性靶向csf1r而确定的临床适应症。此外，也没有高选择性的csf1r抑制剂被批准用于肿瘤的治疗。可见，安全有效的靶向csf1r、用于高发性实体瘤的药物研发尚未取得成功。因此，有必要进一步研究以满足临床需求。7.以ctla-4抗体、抗pd-1/抗pd-l1抗体为代表的免疫检查点药物是过去十年癌症治疗中最重要的进展，这类免疫疗法能够修复抗肿瘤免疫力，从而逆转免疫逃逸，促进肿瘤细胞死亡，其适应症不断扩大，重塑了很多之前的标准治疗方法。但不可忽视的是，免疫系统可能被过度激活，而引起的免疫相关的不良事件也不断增加。据报道，高达60％接受抗ctla-4抗体伊匹单抗(yervoy)治疗的患者会发生免疫相关的不良事件，其中，10-30％属于严重(3-4级)免疫相关的不良事件，并且具有剂量依赖性；约10％接受抗pd-1抗体治疗的患者会发生≥3级的免疫相关的不良事件，包括疲劳、头痛、关节痛、皮疹、瘙痒、肺炎、腹泻和/或结肠炎、肝炎和内分泌疾病等；抗ctla-4抗体与抗pd-1抗体的联合用药增加免疫相关的不良事件的发生率和严重程度；部分接受抗pd-l1抗体bavencio(阿维鲁单抗)治疗的患者出现了输液相关反应，严重程度主要为1-3级。通常这些不良反应与剂量是相关的，降低剂量可以降低或减轻不良反应，但同时也往往造成抗肿瘤效果的降低。如何增强免疫检查点药物的抗肿瘤效果或者使其在低剂量条件下发挥抗肿瘤作用是亟待解决的技术问题。技术实现要素：8.中国专利201410062209.0号(cn104860885b，通过引用的方式将该专利的全部内容整体并入本文，用于所有目的)公开了通式(a)的化合物，特别是具有式(i)所示结构的化合物，[0009][0010]在cn104860885b中，这些化合物被报道为具有优异活性的vegfr抑制剂，能够抑制肿瘤细胞血管增生。本技术发明人以式(i)所示化合物作为代表进行了后续研发，并发现，这样的化合物同时还是csf1r激酶的强效抑制剂，能够抑制肿瘤相关巨噬细胞、激活cd8 t细胞，拮抗肿瘤免疫抑制性微环境，增强免疫检查点药物抗肿瘤药效，在多个人源或鼠源细胞皮下移植瘤模型和和脑原位移植瘤模型中体现了显著的药效。[0011]现有临床研究显示，csf1r选择性抑制剂虽然可以作用于tams发挥抗肿瘤作用，但是单药使用时难以强效遏制肿瘤生长，联合用药是提高该类抑制剂抗肿瘤效果的有效策略。同时，vegf/vegfr靶向药物存在药效难以持久的缺陷，其重要原因之一即是肿瘤微环境中tams产生vegf等促血管生成因子和酶以促进肿瘤新生血管生成，从而显著降低vegf/vegfr靶向药物的治疗作用。以此为基础，多项研究表明vegf/vegfr靶向药物和csf1r靶向药物联用，可以有效协同发挥抗肿瘤作用。由此不难看出，开发同时靶向vegfr和csf1r的选择性抑制剂无疑具有重要价值，不仅具有抑制肿瘤新生血管生成和抑制肿瘤微环境tams功能的双重作用，同时可有效避免微环境中tams引起的对vegfr靶向药物疗效的减弱。因此开发vegfr/csf1r双靶点抑制剂，有望为肿瘤治疗提供全新治疗策略。[0012]总体而言，本技术提供了通式(a)范围内的化合物或其药学上可接受的盐作为csf1r激酶抑制剂的多种用途，包括制药用途、疾病治疗方法、药物组合物及其应用等，具体内容在以下多个方面中描述。[0013]本技术的通式(a)的化合物为：[0014][0015]其中：[0016]r1位于萘环上5-8位上的任一位置，且为以下结构：[0017][0018]其中，r4选自氢、卤素、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基，[0019]位于萘环上1-4位上的任一位置；[0020]r3选自氢、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至5个杂原子的取代或未取代的5-10元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、卤代c1-c3烷基、卤代c1-c3烷氧基、羟基、氨基、硝基和卤素；[0021]r2位于萘环上1-8位上除了r1和之外的任一位置，为氢或卤素。[0022]在通式(a)的一些实施方案中，r3选自氢、c1-c3烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至3个杂原子的取代或未取代的5-6元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、氨基、硝基、f、cl和br；r2为氢、f、cl或br。[0023]在通式(a)的一些实施方案中，r4选自氢、f、cl、br、甲基和甲氧基。[0024]在一些实施方案中，通式(a)的化合物具体为如下通式(b)所示的化合物：[0025][0026]其中：[0027]位于萘环上1-4位上的任一位置；[0028]r3选自氢、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至5个杂原子的取代或未取代的5-10元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、卤代c1-c3烷基、卤代c1-c3烷氧基、羟基、氨基、硝基和卤素；[0029]r2位于萘环上1-8位上除了r1和之外的任一位置，为氢或卤素；[0030]z为c(r5)=ch、s或o；[0031]y为nh、nme、o、ch＝c(r6)或ch＝n；[0032]r5选自氢、卤素、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基；r6选自氢、吡唑基、c1-c3烷基取代的吡唑基和羟基c1-c3烷基取代的吡唑基。[0033]在通式(b)的一些实施方案中，r5选自氢、f、cl、br、甲基和甲氧基；r6选自氢、吡唑基、甲基取代的吡唑基和羟乙基取代的吡唑基。[0034]在一些实施方案中，通式(a)的化合物具体为如下通式(c)、(d)、(e)或(f)所示的化合物：[0035][0036]其中：[0037]位于萘环上的1位或2位；[0038]r3选自氢、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至5个杂原子的取代或未取代的5-10元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、卤代c1-c3烷基、卤代c1-c3烷氧基、羟基、氨基、硝基和卤素；[0039]r2位于萘环上1-8位上除了r1和之外的任一位置，为氢或卤素；[0040]r4选自氢、卤素、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基；[0041]v为s或o；[0042]w为n或c(r7)；[0043]r7选自氢、吡唑基、c1-c3烷基取代的吡唑基和羟基c1-c3烷基取代的吡唑基。[0044]在通式(c)、(d)、(e)或(f)的一些实施方案中，r4选自氢、f、cl、br、甲基和甲氧基；r7选自氢、吡唑基、甲基取代的吡唑基和羟乙基取代的吡唑基。[0045]在一个具体实施方案中，通式(a)化合物为如下式(i)所示的化合物(本技术中也称为“化合物i”，是本技术的代表化合物(leadingcompound))：[0046][0047]一个方面，本技术提供了所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐在制备治疗csf1r激酶信号转导通路相关疾病的药物(作为csf1r激酶抑制剂药物)中的用途。[0048]本技术所述的csf1r激酶信号转导通路相关疾病包括癌症或肿瘤、超常增生、免疫病症、炎症等。在一些实施方案中，所述疾病为癌症或肿瘤。在一些具体实施方案中，癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤或tams富集性肿瘤。在一些更具体的实施方案中，csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤包括csf1/csf1r依赖性白血病、腱鞘巨细胞瘤等；tams富集性肿瘤包括但不仅限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0049]另一方面，本技术提供所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐在制备调节免疫的药物中的用途。在一些实施方案中，调节免疫为增强免疫。在一些具体实施方案中，增强免疫为改善肿瘤免疫抑制状态。在一些更具体的实施方案中，改善肿瘤免疫抑制状态为抑制偏m2型巨噬细胞的存活、逆转巨噬细胞偏m2型极化表型以及巨噬细胞偏m2型极化表型对cd8 t细胞的抑制作用，和/或重塑肿瘤免疫微环境。[0050]另一方面，本技术还提供所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐在制备抑制偏m2型巨噬细胞增殖的药物中的用途。[0051]另一方面，本技术还提供上述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐在制备治疗或抑制对免疫检查点药物不敏感的肿瘤的药物中的用途。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。在一些实施方案中，所述肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0052]另一方面，本技术还提供所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐在制备增强免疫检查点药物抗肿瘤药效的药物中的用途。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。在一些实施方案中，所述肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0053]另一方面，本发明还提供所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐在制备和免疫检查点药物联合抗肿瘤的药物中的用途。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。在一些实施方案中，所述肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0054]进一步地，上述用途中，所述药物含有治疗有效量的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐，以及任选的，药学上可接受的赋形剂或载体。[0055]本技术药物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括但并不限于：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)和局部给药。相应地，本技术药物可制成临床上可接受的各种剂型，包括口服剂型、注射剂型、局部给药剂型或外用剂型等。[0056]本技术的药物在临床上可以单独使用，也可以与其他治疗组分联合使用。在一些实施方案中，所述其他治疗组分选自抗肿瘤药物或免疫调节剂。在一些实施方案中，本技术的药物可以与免疫检查点药物联合使用。在一些具体实施方案中，免疫检查点药物包括抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。为方便临床使用，本技术通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐可以与其它治疗组分联合制备复方药物或药物组合产品。在一些实施方案中，所述的其它治疗组分为抗肿瘤药物或免疫调节剂。在一些具体实施方案中，所述的其它治疗组分为免疫检查点药物。在一些更具体的实施方案中，免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。[0057]另一方面，本技术还提供所述药物的使用方法，包括将治疗有效量的本技术的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐施用于需要治疗的个体。所述个体可以为哺乳动物，例如人。[0058]另一方面，本技术提供了一种治疗csf1r激酶信号转导通路相关疾病的方法，包括将治疗有效量的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐施用于需要治疗的个体。所述个体可以为哺乳动物，例如人。本技术所述的csf1r激酶信号转导通路相关疾病包括癌症或肿瘤、超常增生、免疫病症、炎症等。在一些实施方案中，所述疾病为癌症或肿瘤。在一些具体实施方案中，癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤，或tams富集性肿瘤。在一些更具体的实施方案中，csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤包括csf1/csf1r依赖性白血病、腱鞘巨细胞瘤等；tams富集性肿瘤包括但不仅限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0059]另一方面，本技术还提供了一种调节免疫的方法，包括将治疗有效量的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐施用于有需要的个体。所述个体可以为哺乳动物，例如人。在一些实施方案中，调节免疫为增强免疫。在一些具体实施方案中，增强免疫为改善肿瘤免疫抑制状态。在一些更具体的实施方案中，改善肿瘤免疫抑制状态为抑制偏m2型巨噬细胞的存活、逆转巨噬细胞偏m2型极化表型以及巨噬细胞偏m2型极化表型对cd8 t细胞的抑制作用，和/或重塑肿瘤免疫微环境。[0060]另一方面，本技术还提供一种治疗或抑制对免疫检查点药物不敏感的肿瘤的方法，包括以下步骤：将治疗有效量的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐施用于需要治疗或抑制对免疫检查点药物不敏感的肿瘤的个体。所述个体可以为哺乳动物，例如人。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。在一些实施方案中，所述肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0061]另一方面，本技术还提供了一种增强免疫检查点药物抗肿瘤药效的方法，包括将治疗有效量的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐施用于正在接受或将要接受免疫检查点药物的肿瘤治疗的个体。所述个体可以为哺乳动物，例如人。在一些实施方案中，免疫检查点药物为pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。[0062]另一方面，本技术还提供一种治疗或抑制肿瘤的方法，包括以下步骤：将治疗有效量的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐以及免疫检查点药物联合施用于需要治疗或抑制肿瘤的个体。所述个体可以为哺乳动物，例如人。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。在一些实施方案中，所述肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0063]应当理解，本技术所述联合施用包括药物联用的任意合适的方式，包括但不限于将两种或多种药物活性成分配制为单一药物组合物进行给药，或者将两种或多种药物活性成分分别配制为单独的药物组合物，然后同时或依次给药。[0064]另一方面，本技术还提供所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐，其用作csf1r激酶抑制剂。[0065]另一方面，本技术还提供一种包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐的药物组合物，所述药物组合物用于治疗受试者的csf1r激酶信号转导通路相关疾病。本技术所述的csf1r激酶信号转导通路相关疾病包括癌症或肿瘤、超常增生、免疫病症、炎症等。在一些实施方案中，所述疾病为癌症或肿瘤。在一些具体实施方案中，癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤或tams富集性肿瘤。在一些更具体的实施方案中，csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤包括csf1/csf1r依赖性白血病、腱鞘巨细胞瘤等；tams富集性肿瘤包括但不仅限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0066]另一方面，本技术提供一种包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐的药物组合物，所述药物组合物用于调节免疫。在一些实施方案中，所述调节免疫为增强免疫。在一些具体实施方案中，所述增强免疫为改善肿瘤免疫抑制状态。在一些更具体的实施方案中，所述改善肿瘤免疫抑制状态为抑制偏m2型巨噬细胞的存活、逆转巨噬细胞偏m2型极化表型以及巨噬细胞偏m2型极化表型对cd8 t细胞的抑制作用，和/或重塑肿瘤免疫微环境。[0067]另一方面，本技术还提供一种包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐的药物组合物，所述药物组合物用于抑制偏m2型极化表型的巨噬细胞增殖。[0068]另一方面，本技术还提供一种包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐的药物组合物，所述药物组合物用于治疗或抑制对免疫检查点药物不敏感的肿瘤。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。在一些实施方案中，所述肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0069]另一方面，本技术还提供一种包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐的药物组合物，所述药物组合物用于增强免疫检查点药物抗肿瘤药效。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。在一些实施方案中，肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0070]另一方面，本技术还提供一种包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐的药物组合物，其与免疫检查点药物联合使用以在个体中治疗或抑制肿瘤。所述个体可以为哺乳动物，例如人。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物优选抗pd-1抗体、抗pd-l1抗体。在一些实施方案中，肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0071]另一方面，本技术还提供一种复方药物或药物组合产品，所述复方药物或药物组合产品包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐，和其它治疗组分，所述复方药物或药物组合产品用于治疗或抑制受试者的csf1r激酶信号转导通路相关疾病。[0072]本技术所述的csf1r激酶信号转导通路相关疾病包括癌症或肿瘤、超常增生、免疫病症、炎症等。在一些实施方案中，所述疾病为癌症或肿瘤。在一些具体实施方案中，癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤、或tams富集性肿瘤。在一些更具体的实施方案中，csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤包括csf1/csf1r依赖性白血病、腱鞘巨细胞瘤等；tams富集性肿瘤包括但不仅限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0073]在一些实施方案中，所述的其它治疗组分为抗肿瘤药物或免疫调节剂。在一些实施方案中，所述其他治疗组分为免疫检查点药物。在一些具体实施方案中，免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。[0074]应当理解，本技术中的药物组合产品不仅包括两种或多种药物活性成分配制为单一药物组合物的产品形式，还包括套装产品形式，例如两种或多种药物活性成分分别配制为单独的药物组合物，并且在产品中以物理上相分离的形式存在。[0075]作为非限制性实例，本技术提供了以下实施方案：[0076]1.以下通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗csf1r激酶信号转导通路相关疾病的药物和/或csf1r激酶抑制剂药物中的用途：[0077][0078]其中：[0079]r1位于萘环上5-8位上的任一位置，且为以下结构：[0080][0081]其中，r4选自氢、卤素、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基，[0082]位于萘环上1-4位上的任一位置；[0083]r3选自氢、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至5个杂原子的取代或未取代的5-10元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、卤代c1-c3烷基、卤代c1-c3烷氧基、羟基、氨基、硝基和卤素；[0084]r2位于萘环上1-8位上除了r1和之外的任一位置，为氢或卤素。[0085]2.如实施方案1所述用途，其中所述csf1r激酶信号转导通路相关疾病选自癌症或肿瘤、超常增生、免疫病症、炎症；优选地，所述csf1r激酶信号转导通路相关疾病为癌症或肿瘤；更优选地，所述癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤、或肿瘤相关巨噬细胞(tams)富集性肿瘤；进一步优选地，所述csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性白血病或腱鞘巨细胞瘤，和/或所述tams富集性肿瘤为脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0086]3.实施方案1定义的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐在制备调节免疫的药物中的用途；优选地，所述调节免疫为增强免疫；更优选地，所述增强免疫为改善肿瘤免疫抑制状态；进一步优选地，所述改善肿瘤免疫抑制状态为抑制偏m2型巨噬细胞的存活、逆转巨噬细胞偏m2型极化表型以及巨噬细胞偏m2型极化表型对cd8 t细胞的抑制作用，和/或重塑肿瘤免疫微环境。[0087]4.实施方案1定义的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐在制备抑制偏m2型巨噬细胞增殖的药物中的用途。[0088]5.实施方案1定义的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或抑制对免疫检查点药物不敏感的肿瘤的药物中的用途；优选地，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体，和/或所述肿瘤为脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0089]6.实施方案1定义的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐在制备增强免疫检查点药物抗肿瘤药效的药物中的用途；优选地，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体，和/或所述肿瘤为脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0090]7.实施方案1定义的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐在制备和免疫检查点药物联合抗肿瘤的药物中的用途；优选地，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体，和/或所述肿瘤为脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0091]8.如实施方案1-7中任一项所述用途，其中所述药物还包含其它治疗组分；优选地，所述其它治疗组分为抗肿瘤药物或免疫调节剂；更优选地，所述其它治疗组分为免疫检查点药物；进一步优选地，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。[0092]9.如实施方案1-8中任一项所述用途，其中所述药物制成临床上可接受的剂型；优选地，所述剂型为口服剂型、注射剂型、局部给药剂型或外用剂型。[0093]10.如实施方案1-9中任一项所述用途，其中所述药物含有治疗有效量的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐；优选地，单位剂量形式中的所述治疗有效量为0.01-2000mg，更优选1-500mg。[0094]11.一种复方药物或药物组合产品，所述复方药物或药物组合产品包含治疗有效量的实施方案1定义的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐，和其它治疗组分，所述复方药物或药物组合产品用于治疗受试者的csf1r激酶信号转导通路相关疾病；优选地，所述csf1r激酶信号转导通路相关疾病为癌症或肿瘤、超常增生、免疫病症、炎症；更优选地，所述csf1r激酶信号转导通路相关疾病为癌症或肿瘤。[0095]12.如实施方案11所述的复方药物或药物组合产品，其中所述癌症或肿瘤选自csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤或tams富集性肿瘤；优选地，所述csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性白血病或腱鞘巨细胞瘤，和/或tams富集性肿瘤为脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0096]13.如实施方案11或12所述的复方药物或药物组合产品，其中所述其它治疗组分选自抗肿瘤药物或免疫调节剂；优选地，所述其它治疗组分为免疫检查点药物；更优选地，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。[0097]14.如实施方案1-13中任一项所述的用途、复方药物或药物组合产品，在通式(a)中，r3选自氢、c1-c3烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至3个杂原子的取代或未取代的5-6元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、氨基、硝基、f、cl和br；[0098]r2为氢、f、cl或br。[0099]15.如实施方案1-14中任一项所述的用途、复方药物或药物组合产品，其中r4选自氢、f、cl、br、甲基和甲氧基。[0100]16.如实施方案1-13中任一项所述的用途、复方药物或药物组合产品，其中通式(a)的化合物为以下通式(b)所示的化合物：[0101][0102]其中：[0103]位于萘环上1-4位上的任一位置；[0104]r3选自氢、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至5个杂原子的取代或未取代的5-10元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、卤代c1-c3烷基、卤代c1-c3烷氧基、羟基、氨基、硝基和卤素；[0105]r2位于萘环上1-8位上除了r1和之外的任一位置，为氢或卤素；[0106]z为c(r5)＝ch、s或o；[0107]y为nh、nme、o、ch＝c(r6)或ch＝n；[0108]r5选自氢、卤素、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基；r6选自氢、吡唑基、c1-c3烷基取代的吡唑基和羟基c1-c3烷基取代的吡唑基。[0109]17.如实施方案16所述的用途、复方药物或药物组合产品，其中r5选自氢、f、cl、br、甲基和甲氧基；r6选自氢、吡唑基、甲基取代的吡唑基和羟乙基取代的吡唑基。[0110]18.如实施方案1-13中任一项所述的用途、复方药物或药物组合产品，其中通式(a)的化合物为以下通式(c)、(d)、(e)或(f)所示的化合物：[0111][0112]其中：[0113]位于萘环上的1位或2位；[0114]r3选自氢、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至5个杂原子的取代或未取代的5-10元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、卤代c1-c3烷基、卤代c1-c3烷氧基、羟基、氨基、硝基和卤素；[0115]r2位于萘环上1-8位上除了r1和之外的任一位置，为氢或卤素；[0116]r4选自氢、卤素、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基；[0117]v为s或o；[0118]w为n或c(r7)；[0119]r7选自氢、吡唑基、c1-c3烷基取代的吡唑基和羟基c1-c3烷基取代的吡唑基。[0120]19.如实施方案18所述的用途、复方药物或药物组合产品，其中r4选自氢、f、cl、br、甲基和甲氧基；r7选自氢、吡唑基、甲基取代的吡唑基和羟乙基取代的吡唑基。[0121]20.如实施方案1-13中任一项所述的用途、复方药物或药物组合产品，其中通式(a)化合物为如下式(i)所示的化合物：[0122][0123]本技术所述的治疗有效量是指药学上认为的有效给药剂量，即活性化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为0.01-2000mg，优选1-500mg，或者5～500mg，或者5～200mg。示例性的有效剂量例如1mg、2mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg。优选地，上述日给药剂量以通式(a)至(f)的化合物，特别是化合物i计。可以每日一次单剂量施用，可以每天分多次施用，也可以间隔使用。抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体的给药剂量根据具体的抗体种类以及癌症类型和发展阶段等情况而定，每次给药剂量可以是0.5mg/kg-30mg/kg，优选1-20mg/kg；例如，对于60kg体重的人而言，每次给药剂量通常可以为1mg-1800mg，例如50mg-1200mg，或者100mg-900mg，150mg-600mg或200mg-500mg；示例性的每次给药剂量例如60mg、100mg、120mg、150mg、180mg、210mg、240mg、270mg、300mg、330mg、360mg、400mg、500mg、600mg、900mg、1200mg等；间隔给药，给药频率例如每3-7天给药1次或者每1-6周给药1次，例如每3天给药1次，每5天给药1次，每1周给药1次，每10天给药1次，每2周给药1次，每3周给药1次，每4周给药1次；每6周给药1次等。具体剂量和给药频率应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师根据常规技能可以确定的。所述施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括但并不限于：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)和局部给药。[0124]在本技术的上下文中，所述的csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤是指csf1/csf1r高表达或高度活化的癌症或肿瘤。所述csf1/csf1r高表达或高度活化，是指本领域技术人员使用本领域的常规检测方法(包括但不限于酶联免疫、免疫组化、流式细胞术、westernblotting、组织芯片、基因检测等方法)检测癌症或肿瘤的组织和/或细胞中csf1/csf1r的表达水平或活化水平，其表达水平或活化水平为正常水平的130％以上，优选150％以上，优选175％以上，优选200％以上，优选250％以上，或优选300％以上。所述正常水平，可以是普通人群相应的组织和/或细胞中csf1/csf1r的表达水平或活化水平，也可以是同一患者的癌周组织和/或细胞中csf1/csf1r的表达水平或活化水平。[0125]在本技术的上下文中，所述的tams富集性肿瘤是指肿瘤组织中tams浸润丰富的肿瘤，本领域技术人员使用本领域的常规检测方法(包括但不限于酶联免疫、免疫组化、流式细胞术、westernblotting、组织芯片、基因检测等方法)检测tams的表面标记物或进行tams计数，肿瘤组织中tams的表面标记物表达水平与癌周组织中相应表面标记物表达水平有差异，或者tams计数为癌周组织的130％以上，优选150％以上，优选175％以上，优选200％以上，优选250％以上，或优选300％以上，可以认定为tams浸润丰富，所述肿瘤可以被认定为tams富集性肿瘤。除了巨噬细胞的代表性标志物(例如f4/80)之外，tams的表面标记物包括但不仅限于一般性tams表面标记物、促瘤巨噬细胞的表面标记物、抑瘤巨噬细胞的表面标记物。所述一般性tams表面标记物包括但不仅限于cd14、cd11c、cd68和/或cd11b等，优选cd68和/或cd11b。所述促瘤巨噬细胞的表面标记物包括但不仅限于cd206、csf1r、csf1、cd115、pparg、arg1、cd163、cd301、dectin-1、pdl2、fizz1、cd204、pd-l1、arginase-i、ym1、mgl2、osteopontin、mmps或ccr2等，优选cd206。所述抑瘤巨噬细胞的表面标记物包括但不仅限于il1a、il1b、il6、nos2、tlr2、tlr4、cd80、cd86、mhc-ii、cd38、cd40、cd64、hla-dr(cd74)或cd169等，优选cd86和/或mhc-ii。所述表面标记物表达水平有差异是指，当所述表面标记物是一般性tams的表面标记物时，肿瘤组织中所述的表面标记物表达水平为癌周组织中相应表面标记物表达水平的130％以上，优选150％以上，优选200％以上；当所述表面标记物是促瘤巨噬细胞的表面标记物(例如cd206等)时，肿瘤组织中所述的表面标记物表达水平为癌周组织中相应表面标记物表达水平的130％以上，优选150％以上，优选200％以上；优选，当所述表面标记物还包括抑瘤巨噬细胞的表面标记物(例如cd86和/或mhc-ii等)时，肿瘤组织中所述的抑瘤巨噬细胞的表面标记物表达水平为癌周组织中相应表面标记物表达水平的80％以下，优选50％以下。[0126]在本技术描述肿瘤对免疫检查点药物不敏感的背景下，是指所述肿瘤在使用常规剂量的免疫检查点药物治疗时，肿瘤抑制率低于50％；优选在使用常规用量范围下限剂量的免疫检查点药物治疗时，肿瘤抑制率低于30％，优选低于20％，更优选低于10％。在本技术的一种实施方式中，所述肿瘤抑制率以肿瘤体积抑制率tgi(％)表示，计算公式为：tgi(％)＝100×{1-[(v最后治疗日-v第0日)/(v对照最后日-v对照第0日)]，其中v为肿瘤体积，计算公式为：v＝1/2×a×b2，其中a、b分别为肿瘤的长度与宽度。[0127]在本技术的上下文中，抗pd-1抗体包括但不限于，cd279、纳武利尤单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、特瑞普利单抗、信迪利单抗、卡瑞利珠单抗、替雷利珠单抗等。抗pd-l1抗体包括但不限于，cd274、度伐利尤单抗(durvalumab)、阿替利珠单抗(atezolizumab)等。[0128]本技术所述的数值或数值范围，可以在本领域可接受的范围内上下浮动，例如在所述数值或数值范围的基础上±10％，或者±9％，或者±8％，或者±7％，或者±6％，或者±5％，或者±4％，或者±3％，或者±2％，或者±1％。[0129]本技术所述的的“受试者”、“患者”、“个体”包括动物界的所有成员，包括但不限于，哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、猫、猴子、狗、马、猪等)和人。优选地，根据本发明的受试者是人。除非标明，术语“患者”、“受试者”或“个体”可以互换使用。[0130]在本技术的上下文中，所述的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐没有特别的限制，优选包括：盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、氢氟酸盐、氢溴酸盐、甲酸盐、乙酸盐、苦味酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、甲基磺酸盐、乙基磺酸盐、三氟甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐等。[0131]在本技术中，所述的烷基优选为脂肪族烷基，可以是直链烷基、支链烷基、螺环烷基、桥环烷基、烯烷基、炔烷基、环烷基、环烯基、环炔基、烷氧烷基、烷氧酰基烷基、环烷基烷基，非限制性地包括：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、烯丙基、炔丙基、环丁烯基、环己烯基；形如“c1-c8”的表述意在包括具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个碳原子的相应基团，例如，“c1-c8烷基”指具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个碳原子的烷基，“c2-c10烯基”指具有2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个碳原子的烯基。[0132]在本技术中，所述环烷基可以为饱和或者部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其中包括3至20个碳原子，优选包括3至12个碳原子，更优选环烷基包含3至10个碳原子。单环环烷基非限制实施例包含环丙基、环丁基、环戊烯基、环己基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。[0133]所述杂芳基指包含1至4个杂原子，5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子包括氧、硫和氮。杂芳基优选为是5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、n-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述的杂芳基可以稠合于芳基、杂环基或者环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。[0134]除非特别说明，本技术所描述的结构式意在包括所有的互变异构、光学异构和立体异构形式(如对映异构体、非对映异构体，几何异构体或构象异构体)：例如含有不对称中心的r、s构型，双键的(z)、(e)异构体和(z)、(e)的构象异构体。因此本技术的化合物的单个立体化学异构体、互变异构体或其对映异构体、非对映异构体或几何异构体或构象异构体或互变异构体的混合物都属于本发明的范围。[0135]术语“互变异构体”表示具有不同能量的结构同分异构体可以超过低能垒，从而互相转化。比如，质子互变异构体(即质子移变)包括通过质子迁移进行互变，如1h-吲唑与2h-吲唑、1h-苯并[d]咪唑与3h-苯并[d]咪唑，化合价互变异构体包括通过一些成键电子重组而进行互变。[0136]本技术提供的体内、体外研究显示(参见下文实施例的详细结果)：[0137](1)本技术化合物i在体外能显著抑制csf1r激酶活性。[0138](2)本技术所述化合物i能够显著抑制csf1刺激的小鼠来源巨噬细胞(bmdm)的体外增殖，并可剂量依赖性抑制csf1刺激的csf1r的磷酸化以及下游信号分子akt的活化，表明化合物i通过抑制csf1r有效抑制原代巨噬细胞的生长。[0139](3)本技术化合物i能够显著抑制脑胶质瘤细胞株u87mg裸小鼠移植瘤模型和结直肠癌细胞株ht-29裸小鼠皮下移植瘤模型的瘤组织内巨噬细胞标志物f4/80以及m2型巨噬细胞标志物cd206的表达，提示化合物i作为csf1r激酶抑制剂，通过抑制csf-1诱导的巨噬细胞的存活、逆转巨噬细胞偏m2极化表型，从而发挥抗肿瘤活性。[0140](4)体内药效实验结果表明，受试物化合物i10mg/kg组，每天口服给药两次，连续三周则能显著抑制人脑胶质瘤u87mg裸小鼠皮下移植瘤的生长，第21天所得t/c百分数为11.91％，而同样给药方式的阳性对照药axitinib40mg/kg，第21天所得t/c百分数为30.27％，即，在这个模型中化合物i抑制肿瘤生长的效果显著优于axitinib。受试物化合物i20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组，每天口服给药两次，连续三周则明显延缓了人结直肠癌ht-29裸小鼠皮下移植瘤的生长，且抑制效果随剂量增加而增加，第21天所得t/c百分数分别为17.38％、31.27％和42.70％，其中化合物i20mg/kg组小鼠所荷肿瘤在实验治疗三周期间生长几乎完全停滞，显著优于阳性对照药物axitinib40mg/kg组(第21天所得t/c百分数为48.88％)。[0141](5)针对小鼠星形胶质细胞瘤dbt免疫健全小鼠肿瘤模型，单用化合物i5mg/kg，对肿瘤没有显著抑制活性；抗pd-1抗体(10mg/kg)单用组对肿瘤生长有一定的抑制作用，但肿瘤仍然持续缓慢增长；在使用抗pd-1抗体的基础上联合化合物i以每天两次5mg/kg的剂量给药，肿瘤生长显著被抑制，肿瘤体积基本没有增长，实验终点时联用组与抗pd-1抗体单药组具有显著性差异。结果显示联用化合物i能够增强抗pd-1抗体在dbt肿瘤模型中的抑瘤作用。同时，流式分析结果显示联用组瘤组织中cd8 t细胞的数量与空白制剂组及抗pd-1抗体单药组相比，均有显著升高，提示化合物i可以逆转肿瘤抑制性免疫微环境。[0142](6)在u87mg脑原位移植瘤模型上，化合物i各实验治疗组小鼠生存期都有不同程度延长，其中，40mg/kg和20mg/kg组的中位生存期分别为58.5天和54.0天，均较阳性对照药axitinib40mg/kg组显著延长(41.0天)。[0143](7)临床实验初步疗效结果显示，化合物i对脑胶质瘤特别是高级别脑胶质瘤等实体瘤有较好疗效。[0144]以上研究结果表明，本技术所述的化合物i或其药学上可接受的盐可以通过重塑肿瘤微环境，改善肿瘤免疫抑制状态，发挥抗肿瘤治疗作用，并能增强免疫检查点药物的抗肿瘤功效，具有很好的临床应用前景。附图说明[0145]图1：化合物i及对照化合物plx3397对bmdm中csf1r磷酸化及其下游信号通路的影响。[0146]图2：u87mg裸小鼠移植瘤中化合物i对巨噬细胞的数量和极性的抑制作用：a：f4/80免疫组化定量统计分析图；b：cd206免疫组化定量统计分析图。[0147]图3：ht-29裸小鼠移植瘤中化合物i对巨噬细胞的数量和极性的抑制作用：a：f4/80免疫组化定量统计分析图；b：cd206免疫组化定量统计分析图。[0148]图4：化合物i对免疫检查点药物的增敏作用。a：化合物i和抗pd-1抗体联用对小鼠胶质瘤dbt皮下移植瘤的生长抑制作用；b：化合物i和抗pd-1抗体联用对肿瘤组织中cd8 t细胞的含量的影响。[0149]图5：化合物i对u87mg脑原位荷瘤小鼠的生存期的影响。具体实施方式[0150]下面结合具体实施例，进一步阐述本技术。应理解，这些实施例仅用于说明本技术而不用于限制本技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。[0151]实验材料来源或配制：[0152]化合物i：上海润石医药科技有限公司自制。[0153]阳性对照化合物、实验中所用试剂、原材料均为商业购买或自行配制。[0154]体外实验受试物(化合物i和阳性对照化合物)配制方法：称量后加dmso溶解成10-2mol/l，临用时稀释至所需浓度。[0155]体内实验受试物化合物i制剂按如下处方进行制备：[0156]原辅料用量化合物i60mg中链甘油三酸酯1ml聚氧乙烯40氢化蓖麻油1.5ml二乙二醇单乙基醚2.5ml油酸1ml乙醇：乙酸乙酯(1：1)作为潜溶剂15～20ml[0157]实施例1：化合物i对csf1r激酶活性的影响[0158]1.elisa方法[0159]酶反应底物poly(glu，tyr)4∶1用无钾离子的pbs(10mm磷酸钠缓冲液，150mmnacl，ph7.2-7.4)稀释成20μg/ml，包被酶标板，置37℃反应12-16小时，用t-pbs(含0.1％tween-20的无钾离子的pbs)洗板，烘干备用。每孔依次加入以反应缓冲液(50mmhepesph7.4，50mmmgcl2，0.5mmmncl2，0.2mmna3vo4，1mmdtt)稀释的atp溶液(终浓度为5μm)，待测试化合物或溶剂对照，以及重组csf1r激酶蛋白启动反应。37℃反应1小时，t-pbs洗板后，加入抗体py99稀释液，37℃摇床反应0.5小时，t-pbs洗板。加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗稀释液，37℃反应0.5小时，洗板后加入2mg/ml的opd显色液(用含有0.03％h2o2的0.1m柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(ph＝5.4)稀释)，25℃避光反应1-10分钟。最后加入2mh2so4终止反应，用可调波长式微孔板酶标仪读板，波长为490nm。抑制率计算：[0160][0161]ic50值采用酶标仪随机附带软件以四参数法回归求得。[0162]2.实验结果[0163]化合物i对于肿瘤相关巨噬细胞中重要靶标csf1r激酶活性具有明显的抑制作用，ic50为19.3 3.4nm，与上市药物pexidartinib(培西达替尼，plx3397)相当。提示其具有重塑肿瘤微环境、拮抗肿瘤的潜质。[0164]表1化合物i对csf1r激酶活性的抑制作用[0165][0166]实施例2：化合物i对原代巨噬细胞存活和胞内csf1r信号通路的影响[0167]1.实验方法[0168]1.1骨髓来源巨噬细胞(bmdm)的分离和培养[0169]将小鼠(balb/c)安乐死后置于75％酒精中浸泡3-5min；在超净台中用眼科镊和眼科剪取下胫骨和股骨；分别剪掉胫骨和股骨的两侧关节，用无菌简易缓冲器将骨髓细胞冲出；用70μm尼龙膜过滤骨髓细胞并离心去上清；加入红细胞裂解液，静置3-4min后加入无菌的简易缓冲器终止裂解；离心后弃上清，得到骨髓细胞沉淀。将其在1640培养基(加fbs及10ng/mlcsf1)中培养5-7天后即为巨噬细胞，采用流式细胞术鉴定。[0170]1.2细胞增殖抑制实验[0171]采用cck8细胞计数试剂盒检测。将csf1诱导5～7天的骨髓来源巨噬细胞接种至96孔培养板中培养过夜，加入不同浓度的化合物作用72h，并设定空白对照组。然后每孔加入10μlcck8试剂，置于培养箱中放置4～12h，用酶标仪读数，测定波长为450nm。采用以下公式计算化合物对细胞生长的抑制率：[0172]抑制率％＝(空白对照组od值-给药组od值)/空白对照组od值×100％[0173]ic50值采用四参数法计算，每个实验独立重复3次。[0174]1.3免疫印迹实验(westernblot)[0175]将csf1诱导5～7天的骨髓来源巨噬细胞离心弃掉原有培液，并加入无血清的培液2ml，饥饿6h后加入不同浓度的化合物i和阳性药plx3397作用2h，加入终浓度为50ng/ml的csf1因子刺激15min，弃去培液，用预冷pbs洗三次，加入1×sds凝胶加样缓冲液裂解细胞。细胞裂解物在沸水浴中加热15min后，于-20℃保存。[0176]取上述蛋白样品进行sds-page电泳，然后用半干电转移系统将蛋白转移至硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜置于封闭液(5％脱脂奶粉稀释于tbs-t)中室温封闭2h，然后将膜置于一抗中，4℃孵育过夜。用tbs-t洗涤三次，每次15min。将膜置于二抗稀释液中，室温孵育1-2h；同上洗膜3次后，用发色试剂发色，显影。[0177]2.实验结果[0178]2.1化合物i对bmdm的增殖抑制效应[0179]采用cck8试剂盒检测化合物i对bmdm细胞的体外增殖抑制活性，统计ic50结果如表2所示。化合物i能够显著抑制csf1刺激的bmdm细胞的增殖，其平均ic50为0.093±0.024μm，活性略弱于阳性药plx3397(0.030±0.009μm)。[0180]表2.化合物i对bmdm细胞的增殖抑制活性ic50(μm)[0181][0182]2.2化合物i对bmdm的靶点抑制活性检测[0183]采用免疫印迹实验方法检测化合物i对小鼠原代巨噬细胞中csf1r及信号通路的抑制作用。实验独立重复3次，并对所有实验结果进行定量。结果如图1所示(实验数据采用t检验分析统计，**表示与空白对照组比较p＜0.01，***表示与空白对照组比较p＜0.001)，csf1刺激可激活csf1r，表现为磷酸化csf1r(p-csf1r)表达上调及下游信号分子akt的活化(磷酸化akt(p-akt)水平升高)。给予化合物i处理后，可剂量依赖性地抑制csf1刺激的csf1r以及akt的磷酸化水平，在100nm浓度下对csf1r磷酸化的抑制率达到57.3％，对akt磷酸化抑制率达到64.4％。化合物i的抑制活性与阳性药plx3397相当。[0184]实施例3：化合物i对人脑胶质瘤u87mg裸小鼠移植瘤生长抑制作用[0185]1.实验动物：balb/c裸小鼠，雌性，鼠龄：3-4w，中国科学院上海药物研究所生产[0186]2.实验方法[0187]用人脑胶质瘤u87mg细胞株接种于裸小鼠右侧腋窝皮下，细胞接种量为5×106/只，形成移植瘤后再在裸小鼠体内传1代后使用。[0188]取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至平均体积约为90mm3左右后将动物随机分组。化合物i40mg/kg、20mg/kg和10mg/kg组，均每天口服给药两次，连续给药21天，空白制剂组给予等量空白制剂，每天口服给药两次，连续给药21天。阳性对照药物axitinib(阿西替尼)40mg/kg组每天口服给药两次，连续给药21天。溶剂组给等量注射用水。整个实验过程中，每周2次测量移植瘤直径，同时称量小鼠体重。肿瘤体积(tumorvolume，tv)的计算公式为：tv＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示肿瘤的长和宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relativetumorvolume，rtv)，计算公式为：rtv＝vt/v0。其中v0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为：相对肿瘤增殖率t/c(％)，计算公式如下：t/c(％)＝(trtv/crtv)×100％，trtv：治疗组rtv；crtv：溶剂组rtv。[0189]3.实验结果[0190]结果如表3所示。空白制剂组，每天两次灌胃给予与化合物i配方完全相同的制剂(仅不含化合物i)，连续给药21天，对人脑胶质瘤u87mg裸小鼠皮下移植瘤的生长无明显影响，第21天所得t/c百分数为79.86％。[0191]受试物化合物i40mg/kg、20mg/kg和10mg/kg组，每天口服给药两次，连续三周则能显著抑制人脑胶质瘤u87mg裸小鼠皮下移植瘤的生长，第21天所得t/c百分数分别为9.77％、8.14％和11.91％。[0192]阳性对照药物axitinib40mg/kg组采用同样的给药方案，每天口服给药两次，连续给药21天后对人脑胶质瘤u87mg裸小鼠皮下移植瘤的生长均有显著抑制作用，第21天所得t/c百分数为30.27％。在这个模型中化合物i10mg/kg抑制肿瘤生长的效果即优于axitinib40mg/kg。[0193]实验中，各组小鼠均状态良好。[0194]表3.化合物i对人脑胶质瘤u87mg裸小鼠移植瘤的实验治疗作用[0195][0196][0197]实验数据采用t检验分析统计，*p＜0.01，**p＜0.001[0198]实施例4：化合物i对人结直肠癌ht-29裸小鼠移植瘤生长抑制作用[0199]1.实验动物：balb/c裸小鼠，雌性，鼠龄：6w，上海灵畅生物科技有限公司购入[0200]2.实验方法[0201]用人结直肠癌ht-29细胞株接种于裸小鼠右侧腋窝皮下，细胞接种量为5×106/只，形成移植瘤后再在裸小鼠体内传1代后使用。[0202]取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至平均体积约为120mm3左右后将动物随机分组。化合物i20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组，均每天口服给药两次，连续给药21天，空白制剂组给予等量空白制剂，每天口服给药两次，连续给药21天。阳性对照药物axitinib40mg/kg组每天口服给药两次，连续给药21天。溶剂组给等量注射用水。整个实验过程中，每周2次测量移植瘤直径，同时称量小鼠体重。肿瘤体积(tumorvolume，tv)的计算公式为：tv＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示肿瘤的长和宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relativetumorvolume，rtv)，计算公式为：rtv＝vt/v0。其中v0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为：相对肿瘤增殖率t/c(％)，计算公式如下：t/c(％)＝(trtv/crtv)×100％，trtv：治疗组rtv；crtv：溶剂组rtv。[0203]3、实验结果[0204]实验结果如表4所示。空白制剂组，每天灌胃两次给予空白制剂，连续给药21天，对人结直肠癌ht-29裸小鼠皮下移植瘤的生长无影响，第21天所得t/c百分数为87.68％。[0205]受试物化合物i20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组，在相同实验治疗方案下则明显延缓了肿瘤的生长，且抑制效果随剂量增加而增加，第21天所得t/c百分数分别为17.38％、31.27％和42.70％。其中化合物i20mg/kg组小鼠所荷肿瘤在实验治疗三周期间生长几乎完全停滞。[0206]阳性对照药物axitinib40mg/kg组，每天口服给药两次，连续给药21天，对人结直肠癌ht-29裸小鼠皮下移植瘤的生长有部分抑制作用，第21天所得t/c百分数为48.88％，与化合物i5mg/kg组相当。[0207][0208]实施例5：化合物i对人胶质母细胞瘤细胞株u87mg裸小鼠移植瘤模型和人结直肠癌ht-29裸小鼠皮下移植瘤模型中巨噬细胞相关指标(f4/80，cd206)的影响[0209]1.实验方法[0210]分别取体内实验结束后的u87mg和ht-29裸小鼠皮下移植瘤组织，4％多聚甲醛固定，制作石蜡切片。[0211]采用多重快速评分法(multiplicativequickscoremethod，mqs)来评估不同蛋白的表达。这一评估方法既考虑到染色强度，也考虑到细胞染色范围，估计了阳性细胞的比例并给出从1到6的范围分数(1＝1％-4％；2＝5％-19％；3＝20％-39％；4＝40％-59％；5＝60％-79％；6＝80％-100％)。阳性染色细胞的平均强度为强度评分0～3分(0＝无染色；1＝弱；2＝中度染色；3＝强染色)。然后用范围分数乘以强度分数计算总得分a(最小值为0，最大值为18)。[0212]在对u87mg瘤组织内巨噬细胞标志物f4/80以及m2型巨噬细胞标志物cd206变化分析时，对所有切片进行定量统计(溶剂：n＝6，空白制剂：n＝6，化合物i10mg/kg：n＝6，化合物i20mg/kg：n＝6，化合物i40mg/kg：n＝6，axitinib：n＝4)，实验数据采用t检验分析显著性差异，*表示与空白制剂组比较p＜0.05，**表示与空白制剂组比较p＜0.01，***表示与空白制剂组比较p＜0.001。[0213]在对ht-29瘤组织内巨噬细胞标志物f4/80以及m2型巨噬细胞标志物cd206变化进行分析时，对所有切片进行定量统计(溶剂：n＝12，空白制剂：n＝6，化合物i5mg/kg：n＝6，化合物i10mg/kg：n＝6，化合物i20mg/kg：n＝6，axitinib：n＝6)。实验数据采用t检验分析显著性差异，*表示与空白制剂组比较p＜0.05，**表示与空白制剂组比较p＜0.01，***表示与空白制剂组比较p＜0.001[0214]2、实验结果[0215]2.1u87mg瘤组织内巨噬细胞标志物f4/80以及m2型巨噬细胞标志物cd206变化[0216]与空白制剂组相比，化合物i40mg/kg剂量组能明显降低巨噬细胞的f4/80的表达，提示瘤组织中巨噬细胞数量减少(图2中a图)。同时，化合物i能剂量依赖性的显著抑制m2型巨噬细胞标志物cd206的表达(图2中b图)，在10mg/kg剂量组即能明显抑制，其抑制率为34.48％，40mg/kg剂量组抑制率达到70.69％。而axitinib(40mg/kg)对各巨噬细胞相关标志物的表达没有显著影响，与其不抑制csf1r激酶活性因此不影响巨噬细胞功能相一致。以上结果提示化合物i作为csf1r激酶抑制剂，通过抑制csf-1诱导的巨噬细胞的存活、逆转巨噬细胞偏m2极化表型，从而发挥抗肿瘤活性。[0217]2.2ht-29瘤组织内巨噬细胞标志物f4/80以及m2型巨噬细胞标志物cd206变化[0218]在ht-29裸小鼠移植瘤模型中，化合物i剂量依赖性抑制f4/80和cd206的表达，在20mg/kg剂量下抑制活性与空白制剂组相比具有极显著差异，阳性药axitinib对f4/80和cd206的表达没有抑制活性，结果如图3中的a图和b图所示。[0219]实施例6：化合物i增敏免疫检查点药物抗肿瘤药效[0220]1.实验方法[0221]在无菌条件下，将小鼠星形胶质细胞瘤dbt细胞悬液注射于balb/c小鼠右侧腋窝皮下。balb/c小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至平均体积约为100-200mm3左右后将动物随机分组。化合物i(5mg/kg，单用或与抗pd-1抗体联用)每天口服给药两次，连续给药28天；抗pd-1抗体(10mg/kg，单用或与化合物i联用)(bioxcell公司，invivomab抗小鼠pd-1(cd279)(货号：be0146))每三天腹腔注射给药一次，连续给药28天。整个实验过程中，每周2次测量移植瘤直径，同时称量小鼠体重。肿瘤体积(tumorvolume，tv)的计算公式为：tv＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示肿瘤的长和宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relativetumorvolume，rtv)，计算公式为：rtv＝vt/v0。其中v0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，vt为每一次测量时的肿瘤体积。[0222]实验结束时，首先将取下的新鲜肿瘤剪碎，用2.5ml配制好的酶溶液重悬肿瘤组织团块，并37℃摇床进行瘤组织的消化，反应30～60分钟后用70μm滤网过滤得到细胞悬液。使用红细胞裂解液处理10分钟，300g离心5分钟，用pbs重悬并计数。接下来进行流式抗体染色：将所需细胞用pbs洗两遍，然后使用100μl的pbs重悬并加入0.5μl荧光抗体fvs510，4℃避光染色30分钟，之后用1ml流式上机缓冲液(#130-091-221-1，美天旎公司产品)洗两遍，4℃300g离心5分钟。配制封闭抗体稀释液(使用上述缓冲液按每200μl加入1μl的鼠抗cd16/32)，每个样品加入200μl的抗体稀释液封闭30分钟，每个样品加入1μl的cd45和cd8抗体，4℃孵育30分钟，此步设置单染管，之后同样用1ml的流式上机缓冲液洗涤两次，每次4℃300g离心5分钟。最后加入300μl的流式上机缓冲液重悬，在fortessa流式细胞仪上(bd公司)进行流式分析。[0223]所有剂量组n＝9，实验数据采用t检验分析显著性差异，ns表示与空白制剂组相比无显著性差异，*表示与空白制剂组比较p＜0.05，**表示与空白制剂组比较p＜0.01。[0224]2.实验结果[0225]化合物i在5mg/kg单用剂量下对dbt肿瘤的体内生长没有显著抑制活性；抗pd-1抗体(10mg/kg)单用组对肿瘤生长有一定的抑制作用，但肿瘤仍然持续缓慢增长。在使用抗pd-1抗体的基础上联合化合物i以每天两次5mg/kg的剂量给药，肿瘤生长显著被抑制，肿瘤体积基本没有增长。实验终点时联用组的移植瘤体积为抗pd-1抗体单药组的19.89％。结果显示联用化合物i能够增强抗pd-1抗体在dbt肿瘤模型中的抑瘤作用。同时，流式分析结果显示联用组瘤组织中cd8 t细胞的数量与空白制剂组及抗pd-1抗体单药组相比，均有显著升高，提示化合物i可以逆转肿瘤抑制性免疫微环境。具体结果见图4中的a图和b图。[0226]实施例7：化合物i对脑原位接种人胶质瘤u87mg小鼠生存期的影响[0227]1、实验动物[0228]balb/ca裸小鼠，雄性，7-8周龄，购自上海吉辉实验动物饲养有限公司。[0229]2、实验方法[0230]裸小鼠腹腔注射50mg/kg舒泰50麻醉后，将裸小鼠置于脑立体定位仪中俯卧位固定头颅，于内眦连线与头部矢状中线交汇处纵向切口，分离暴露颅骨，于前囟水平右侧2mm，向前0.5mm处颅骨钻孔。将u87mg细胞以5×105/只接种于裸小鼠大脑右侧尾状核位置。切口用无菌医用缝合线缝合，动物保温至苏醒。接种后第7天随机分组(接种日为第0天)，第8天开始给予不同化合物治疗。化合物i40mg/kg或20mg/kg组，每天口服给药两次，连续给药至小鼠自然死亡。阳性对照药物axitinib40mg/kg组，每天口服给药两次，连续给药至小鼠自然死亡；溶剂组(vehicle)给等量注射用水；空白制剂组给予等量空白制剂。整个实验过程中，每周2次称量小鼠体重。实验过程中，记录小鼠死亡情况，计算生存率。实验数据采用log-rank分析，p≤0.05为显著差异。[0231]3、实验结果[0232]实验结果如表5和图5所示。各实验组于接种第8天开始实验性治疗。溶剂组于第27天开始有小鼠死亡，至第48天该组小鼠全部死亡，中位生存期为46天。空白制剂组(blanksolvent)于第31天开始出现死亡，至第52天该组最后一只小鼠死亡，中位生存期为41天，与溶剂组相比无显著性差异。[0233]阳性对照药物axitinib40mg/kg组在实验治疗过程中荷瘤小鼠陆续出现死亡，第28天该组第一只动物出现死亡，至第48天该组所有小鼠均死亡，该组中位生存期为41天，与溶剂组相比无显著性差异。[0234]与化合物i在u87mg裸小鼠皮下移植瘤模型上展示的抗肿瘤效果相似，在u87mg脑原位移植瘤模型上，化合物i各实验治疗组小鼠生存期都有不同程度延长。化合物i40mg/kg实验治疗组小鼠于第43天才开始陆续出现死亡，至第75天该组最后一只小鼠死亡，中位生存期为58.5天，较溶剂组、空白制剂组和axitinib组均有显著延长。化合物i20mg/kg组同样能延长模型小鼠生存时间，中位生存期为54天。[0235]表5.化合物i实验治疗对裸小鼠原位接种人脑胶质瘤u87mg后中位生存期的影响[0236][0237]注：ils：生命延长率＝(给药组mst/溶剂组mst-1)×100％[0238]实施例8：化合物i的临床试验[0239]进行用化合物i治疗复发或晚期实体瘤患者的1期临床实验。一些患者具有脑胶质瘤(包括胶质肉瘤)、脑转移瘤、肾癌、结直肠癌、甲状腺癌、肺癌、胃癌、腱鞘巨细胞瘤等复发或晚期实体瘤，标准治疗下仍发生疾病进展、不耐受标准治疗或缺乏有效标准治疗。[0240]化合物i的起始剂量为5mgqd，可逐步升高至：15mgqd、30mgqd、60mgqd、100mgqd、150mgqd、200mgqd；剂量扩展阶段3个队列：队列1：复发高级别脑胶质瘤，队列2：脑转移瘤，队列3：其它有效肿瘤，每个队列1-2个剂量组。用药时程：3周为一个周期，给药出现任何终点事件。[0241]截至2021年9月10日，5mg、15mg和30mg入组3例受试者均未发生dlt，进入延长给药期治疗；对3例受试者进行初步疗效评估，其中2例sd，1例pr，均继续给药中，详见表6：[0242]表6化合物i临床初步疗效[0243][0244]典型病例：[0245]某患者，男，38岁，2020年01月16日诊断为胶质母细胞瘤iv级，进行右颞枕开颅肿瘤切除术，术后共进行了30次放疗，总剂量为60gy。2020年04月30日开始进行替莫唑胺 阿帕替尼治疗共12个疗程到2021年6月进展，2021年07月27日签署知情同意书参加化合物i临床试验，靶病灶：靶病灶1spd为516.60，靶病灶2spd为310.50，spd共827.10。2021年07月30日首次单次给药，剂量为30mg。2021年08月02日开始第一周期多次给药，2021年08月22日第一治疗周期结束，疗效评估为pr(靶病灶1spd为381.42，靶病灶2spd为0，spd共381.42)，无dlt发生，2021年08月27日进入第二周期治疗。[0246]本技术使用的英文缩略词的全称及中文名如下：[0247]csf1r：colony-stimulatingfactor1receptor，集落刺激因子1受体[0248]csf-1：colony-stimulatingfactor1，集落刺激因子1[0249]tams：tumor-associatedmacrophages，肿瘤相关巨噬细胞[0250]treg：regulatorytcells，调节性t细胞[0251]dc：dendriticcells，树突状细胞[0252]tgct：tenosynovialgiantcelltumor，腱鞘巨细胞瘤[0253]vegf：vascularendothelialgrowthfactor，血管内皮生长因子[0254]vegfr：vascularendothelialgrowthfactorreceptor，血管内皮生长因子受体[0255]dbt：小鼠脑星型胶质瘤[0256]akt：proteinkinaseb，pkb，蛋白激酶b[0257]dmso：dimethylsulfoxide，二甲基亚砜[0258]elisa：enzymelinkedimmunosorbentassay，酶联免疫吸附剂测定[0259]poly(glu，tyr)4∶1：多聚谷氨酸-酪氨酸肽段(4：1)[0260]hepes：4-羟乙基哌嗪乙磺酸[0261]dtt：dl-dithiothreitol，二硫苏糖醇[0262]atp：adenosinetriphosphate，三磷酸腺苷[0263]py99：抗磷酸化酪氨酸单抗[0264]opd：o-phenylenediamine，邻苯二胺[0265]od：opticaldensity，光密度[0266]balb/c：一种免疫缺陷小鼠亚系[0267]fbs：fetalbovineserum，胎牛血清[0268]sds：sodiumdodecylsulfate，十二烷基磺酸钠[0269]sds-page：sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳[0270]tbs-t：三乙醇胺缓冲盐水溶液(含有0.05％吐温-20)[0271]pbmc：peripheralbloodmononuclearcell，外周血单核细胞[0272]bmdm：bonemarrow-derivedmacrophages，骨髓来源巨噬细胞[0273]pd-1：programmedcelldeathprotein1，程序性死亡受体1[0274]pd-l1：programmedcelldeath1ligand1，程序性死亡配体1[0275]fmo：fluorescenceminusone，荧光扣除对照[0276]log-rank：对数秩[0277]pbs：phosphatebuffersaline，磷酸盐缓冲液[0278]fvs510：fixableviabilitystain510，一种鉴定细胞死活的染料[0279]qd：quaquedie，每日一次[0280]gy：戈瑞，吸收剂量单位，一戈瑞表示每公斤物质吸收了一焦耳的辐射能量。[0281]pr：partialresponse，部分缓解[0282]sd：stabledisease，疾病稳定[0283]spd：thesumoftheperpendiculardiameters，肿瘤最大长径与之垂直的最长径之和。当前第1页12当前第1页12
技术领域：
：3.本技术大体涉及医药领域，具体涉及csf1r激酶抑制剂及其在治疗csf1r激酶信号转导通路相关疾病或者改善肿瘤免疫抑制状态中的应用(作为csf1r激酶抑制剂药物)。
背景技术：
：：4.作为功能整体、不可分割的肿瘤微环境在肿瘤进程中发挥着重要作用。微环境中众多基质细胞，如肿瘤相关巨噬细胞(tams)、树突状细胞(dc)、调节性t细胞(treg)、成纤维细胞、杀伤性t细胞等，通过与肿瘤细胞互动促进肿瘤进程。5.其中，肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associatedmacrophages，tams)是重要的微环境基质细胞，在某些肿瘤组织中巨噬细胞的比重可高达50％，在脑胶质瘤中巨噬细胞占瘤重的30％以上。巨噬细胞是体内最重要的一类抗原提呈细胞，在肿瘤发展的各阶段都存在，称为肿瘤相关巨噬细胞(tams)。经典活化型巨噬细胞(m1型)广泛参与体内固有免疫和适应性免疫，起抗原递呈作用，对肿瘤具有明显的杀伤和抑制作用，而替代活化的巨噬细胞(m2型)起免疫抑制作用，在促进肿瘤生长、促进血管生成以及侵袭和转移中扮演重要角色。巨噬细胞集落刺激因子(csf1)是经典的促肿瘤细胞因子，它可招募巨噬细胞到肿瘤区域，并促进肿瘤细胞与巨噬细胞的相互作用，进而导致微环境中释放各种促肿瘤发展的生长因子(如vegf、基质金属蛋白酶等)，从而促进肿瘤的生长和转移。csf1发挥生物学效应是通过与它唯一的细胞表面受体csf1r结合。csf1与其受体csf1r结合后，引发信号级联反应，通过激活下游多条信号通路而发挥其功能。研究表明csf1和csf1r在多种恶性肿瘤中都有异常升高，与肿瘤的发生、发展和不良预后密切相关。因此，csf1r成为调控肿瘤微环境肿瘤相关巨噬细胞的关键靶点，csf1r小分子抑制剂的研发日益受到关注。6.目前已有多个csf1r小分子抑制剂处于临床研发阶段，进展较快的选择性csf1r抑制剂包括pexidartinib(也称为培西达替尼，plx3397)和blz945。plx3397于2019年8月获批用于腱鞘巨细胞瘤(tgct)的治疗。tgct是一种由csf1过度表达而引起的良性软组织肿瘤。plx3397作为csf1r抑制剂，可通过阻断csf1/csf1r信号通路使得肿瘤中tams数量减少，并使tams的重新极化，导致m2型tams的数量减少，证实csf1r是一个非常有潜力的肿瘤治疗靶点。然而该药物毒副作用较大，药物标签中附有黑框警告，提示该药物具有严重和潜在致命肝损伤风险。此外，上市药物pazopanib(帕唑帕尼)、imatinib(伊马替尼)、sunitinib(舒尼替尼)等也被报道具有csf1r抑制活性，但它们均为广谱抑制剂，尚无通过针对性靶向csf1r而确定的临床适应症。此外，也没有高选择性的csf1r抑制剂被批准用于肿瘤的治疗。可见，安全有效的靶向csf1r、用于高发性实体瘤的药物研发尚未取得成功。因此，有必要进一步研究以满足临床需求。7.以ctla-4抗体、抗pd-1/抗pd-l1抗体为代表的免疫检查点药物是过去十年癌症治疗中最重要的进展，这类免疫疗法能够修复抗肿瘤免疫力，从而逆转免疫逃逸，促进肿瘤细胞死亡，其适应症不断扩大，重塑了很多之前的标准治疗方法。但不可忽视的是，免疫系统可能被过度激活，而引起的免疫相关的不良事件也不断增加。据报道，高达60％接受抗ctla-4抗体伊匹单抗(yervoy)治疗的患者会发生免疫相关的不良事件，其中，10-30％属于严重(3-4级)免疫相关的不良事件，并且具有剂量依赖性；约10％接受抗pd-1抗体治疗的患者会发生≥3级的免疫相关的不良事件，包括疲劳、头痛、关节痛、皮疹、瘙痒、肺炎、腹泻和/或结肠炎、肝炎和内分泌疾病等；抗ctla-4抗体与抗pd-1抗体的联合用药增加免疫相关的不良事件的发生率和严重程度；部分接受抗pd-l1抗体bavencio(阿维鲁单抗)治疗的患者出现了输液相关反应，严重程度主要为1-3级。通常这些不良反应与剂量是相关的，降低剂量可以降低或减轻不良反应，但同时也往往造成抗肿瘤效果的降低。如何增强免疫检查点药物的抗肿瘤效果或者使其在低剂量条件下发挥抗肿瘤作用是亟待解决的技术问题。技术实现要素：8.中国专利201410062209.0号(cn104860885b，通过引用的方式将该专利的全部内容整体并入本文，用于所有目的)公开了通式(a)的化合物，特别是具有式(i)所示结构的化合物，[0009][0010]在cn104860885b中，这些化合物被报道为具有优异活性的vegfr抑制剂，能够抑制肿瘤细胞血管增生。本技术发明人以式(i)所示化合物作为代表进行了后续研发，并发现，这样的化合物同时还是csf1r激酶的强效抑制剂，能够抑制肿瘤相关巨噬细胞、激活cd8 t细胞，拮抗肿瘤免疫抑制性微环境，增强免疫检查点药物抗肿瘤药效，在多个人源或鼠源细胞皮下移植瘤模型和和脑原位移植瘤模型中体现了显著的药效。[0011]现有临床研究显示，csf1r选择性抑制剂虽然可以作用于tams发挥抗肿瘤作用，但是单药使用时难以强效遏制肿瘤生长，联合用药是提高该类抑制剂抗肿瘤效果的有效策略。同时，vegf/vegfr靶向药物存在药效难以持久的缺陷，其重要原因之一即是肿瘤微环境中tams产生vegf等促血管生成因子和酶以促进肿瘤新生血管生成，从而显著降低vegf/vegfr靶向药物的治疗作用。以此为基础，多项研究表明vegf/vegfr靶向药物和csf1r靶向药物联用，可以有效协同发挥抗肿瘤作用。由此不难看出，开发同时靶向vegfr和csf1r的选择性抑制剂无疑具有重要价值，不仅具有抑制肿瘤新生血管生成和抑制肿瘤微环境tams功能的双重作用，同时可有效避免微环境中tams引起的对vegfr靶向药物疗效的减弱。因此开发vegfr/csf1r双靶点抑制剂，有望为肿瘤治疗提供全新治疗策略。[0012]总体而言，本技术提供了通式(a)范围内的化合物或其药学上可接受的盐作为csf1r激酶抑制剂的多种用途，包括制药用途、疾病治疗方法、药物组合物及其应用等，具体内容在以下多个方面中描述。[0013]本技术的通式(a)的化合物为：[0014][0015]其中：[0016]r1位于萘环上5-8位上的任一位置，且为以下结构：[0017][0018]其中，r4选自氢、卤素、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基，[0019]位于萘环上1-4位上的任一位置；[0020]r3选自氢、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至5个杂原子的取代或未取代的5-10元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、卤代c1-c3烷基、卤代c1-c3烷氧基、羟基、氨基、硝基和卤素；[0021]r2位于萘环上1-8位上除了r1和之外的任一位置，为氢或卤素。[0022]在通式(a)的一些实施方案中，r3选自氢、c1-c3烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至3个杂原子的取代或未取代的5-6元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、氨基、硝基、f、cl和br；r2为氢、f、cl或br。[0023]在通式(a)的一些实施方案中，r4选自氢、f、cl、br、甲基和甲氧基。[0024]在一些实施方案中，通式(a)的化合物具体为如下通式(b)所示的化合物：[0025][0026]其中：[0027]位于萘环上1-4位上的任一位置；[0028]r3选自氢、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至5个杂原子的取代或未取代的5-10元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、卤代c1-c3烷基、卤代c1-c3烷氧基、羟基、氨基、硝基和卤素；[0029]r2位于萘环上1-8位上除了r1和之外的任一位置，为氢或卤素；[0030]z为c(r5)=ch、s或o；[0031]y为nh、nme、o、ch＝c(r6)或ch＝n；[0032]r5选自氢、卤素、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基；r6选自氢、吡唑基、c1-c3烷基取代的吡唑基和羟基c1-c3烷基取代的吡唑基。[0033]在通式(b)的一些实施方案中，r5选自氢、f、cl、br、甲基和甲氧基；r6选自氢、吡唑基、甲基取代的吡唑基和羟乙基取代的吡唑基。[0034]在一些实施方案中，通式(a)的化合物具体为如下通式(c)、(d)、(e)或(f)所示的化合物：[0035][0036]其中：[0037]位于萘环上的1位或2位；[0038]r3选自氢、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至5个杂原子的取代或未取代的5-10元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、卤代c1-c3烷基、卤代c1-c3烷氧基、羟基、氨基、硝基和卤素；[0039]r2位于萘环上1-8位上除了r1和之外的任一位置，为氢或卤素；[0040]r4选自氢、卤素、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基；[0041]v为s或o；[0042]w为n或c(r7)；[0043]r7选自氢、吡唑基、c1-c3烷基取代的吡唑基和羟基c1-c3烷基取代的吡唑基。[0044]在通式(c)、(d)、(e)或(f)的一些实施方案中，r4选自氢、f、cl、br、甲基和甲氧基；r7选自氢、吡唑基、甲基取代的吡唑基和羟乙基取代的吡唑基。[0045]在一个具体实施方案中，通式(a)化合物为如下式(i)所示的化合物(本技术中也称为“化合物i”，是本技术的代表化合物(leadingcompound))：[0046][0047]一个方面，本技术提供了所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐在制备治疗csf1r激酶信号转导通路相关疾病的药物(作为csf1r激酶抑制剂药物)中的用途。[0048]本技术所述的csf1r激酶信号转导通路相关疾病包括癌症或肿瘤、超常增生、免疫病症、炎症等。在一些实施方案中，所述疾病为癌症或肿瘤。在一些具体实施方案中，癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤或tams富集性肿瘤。在一些更具体的实施方案中，csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤包括csf1/csf1r依赖性白血病、腱鞘巨细胞瘤等；tams富集性肿瘤包括但不仅限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0049]另一方面，本技术提供所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐在制备调节免疫的药物中的用途。在一些实施方案中，调节免疫为增强免疫。在一些具体实施方案中，增强免疫为改善肿瘤免疫抑制状态。在一些更具体的实施方案中，改善肿瘤免疫抑制状态为抑制偏m2型巨噬细胞的存活、逆转巨噬细胞偏m2型极化表型以及巨噬细胞偏m2型极化表型对cd8 t细胞的抑制作用，和/或重塑肿瘤免疫微环境。[0050]另一方面，本技术还提供所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐在制备抑制偏m2型巨噬细胞增殖的药物中的用途。[0051]另一方面，本技术还提供上述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐在制备治疗或抑制对免疫检查点药物不敏感的肿瘤的药物中的用途。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。在一些实施方案中，所述肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0052]另一方面，本技术还提供所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐在制备增强免疫检查点药物抗肿瘤药效的药物中的用途。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。在一些实施方案中，所述肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0053]另一方面，本发明还提供所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐在制备和免疫检查点药物联合抗肿瘤的药物中的用途。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。在一些实施方案中，所述肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0054]进一步地，上述用途中，所述药物含有治疗有效量的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐，以及任选的，药学上可接受的赋形剂或载体。[0055]本技术药物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括但并不限于：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)和局部给药。相应地，本技术药物可制成临床上可接受的各种剂型，包括口服剂型、注射剂型、局部给药剂型或外用剂型等。[0056]本技术的药物在临床上可以单独使用，也可以与其他治疗组分联合使用。在一些实施方案中，所述其他治疗组分选自抗肿瘤药物或免疫调节剂。在一些实施方案中，本技术的药物可以与免疫检查点药物联合使用。在一些具体实施方案中，免疫检查点药物包括抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。为方便临床使用，本技术通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐可以与其它治疗组分联合制备复方药物或药物组合产品。在一些实施方案中，所述的其它治疗组分为抗肿瘤药物或免疫调节剂。在一些具体实施方案中，所述的其它治疗组分为免疫检查点药物。在一些更具体的实施方案中，免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。[0057]另一方面，本技术还提供所述药物的使用方法，包括将治疗有效量的本技术的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐施用于需要治疗的个体。所述个体可以为哺乳动物，例如人。[0058]另一方面，本技术提供了一种治疗csf1r激酶信号转导通路相关疾病的方法，包括将治疗有效量的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐施用于需要治疗的个体。所述个体可以为哺乳动物，例如人。本技术所述的csf1r激酶信号转导通路相关疾病包括癌症或肿瘤、超常增生、免疫病症、炎症等。在一些实施方案中，所述疾病为癌症或肿瘤。在一些具体实施方案中，癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤，或tams富集性肿瘤。在一些更具体的实施方案中，csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤包括csf1/csf1r依赖性白血病、腱鞘巨细胞瘤等；tams富集性肿瘤包括但不仅限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0059]另一方面，本技术还提供了一种调节免疫的方法，包括将治疗有效量的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐施用于有需要的个体。所述个体可以为哺乳动物，例如人。在一些实施方案中，调节免疫为增强免疫。在一些具体实施方案中，增强免疫为改善肿瘤免疫抑制状态。在一些更具体的实施方案中，改善肿瘤免疫抑制状态为抑制偏m2型巨噬细胞的存活、逆转巨噬细胞偏m2型极化表型以及巨噬细胞偏m2型极化表型对cd8 t细胞的抑制作用，和/或重塑肿瘤免疫微环境。[0060]另一方面，本技术还提供一种治疗或抑制对免疫检查点药物不敏感的肿瘤的方法，包括以下步骤：将治疗有效量的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐施用于需要治疗或抑制对免疫检查点药物不敏感的肿瘤的个体。所述个体可以为哺乳动物，例如人。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。在一些实施方案中，所述肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0061]另一方面，本技术还提供了一种增强免疫检查点药物抗肿瘤药效的方法，包括将治疗有效量的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐施用于正在接受或将要接受免疫检查点药物的肿瘤治疗的个体。所述个体可以为哺乳动物，例如人。在一些实施方案中，免疫检查点药物为pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。[0062]另一方面，本技术还提供一种治疗或抑制肿瘤的方法，包括以下步骤：将治疗有效量的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐以及免疫检查点药物联合施用于需要治疗或抑制肿瘤的个体。所述个体可以为哺乳动物，例如人。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。在一些实施方案中，所述肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0063]应当理解，本技术所述联合施用包括药物联用的任意合适的方式，包括但不限于将两种或多种药物活性成分配制为单一药物组合物进行给药，或者将两种或多种药物活性成分分别配制为单独的药物组合物，然后同时或依次给药。[0064]另一方面，本技术还提供所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐，其用作csf1r激酶抑制剂。[0065]另一方面，本技术还提供一种包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐的药物组合物，所述药物组合物用于治疗受试者的csf1r激酶信号转导通路相关疾病。本技术所述的csf1r激酶信号转导通路相关疾病包括癌症或肿瘤、超常增生、免疫病症、炎症等。在一些实施方案中，所述疾病为癌症或肿瘤。在一些具体实施方案中，癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤或tams富集性肿瘤。在一些更具体的实施方案中，csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤包括csf1/csf1r依赖性白血病、腱鞘巨细胞瘤等；tams富集性肿瘤包括但不仅限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0066]另一方面，本技术提供一种包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐的药物组合物，所述药物组合物用于调节免疫。在一些实施方案中，所述调节免疫为增强免疫。在一些具体实施方案中，所述增强免疫为改善肿瘤免疫抑制状态。在一些更具体的实施方案中，所述改善肿瘤免疫抑制状态为抑制偏m2型巨噬细胞的存活、逆转巨噬细胞偏m2型极化表型以及巨噬细胞偏m2型极化表型对cd8 t细胞的抑制作用，和/或重塑肿瘤免疫微环境。[0067]另一方面，本技术还提供一种包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐的药物组合物，所述药物组合物用于抑制偏m2型极化表型的巨噬细胞增殖。[0068]另一方面，本技术还提供一种包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐的药物组合物，所述药物组合物用于治疗或抑制对免疫检查点药物不敏感的肿瘤。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。在一些实施方案中，所述肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0069]另一方面，本技术还提供一种包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐的药物组合物，所述药物组合物用于增强免疫检查点药物抗肿瘤药效。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。在一些实施方案中，肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0070]另一方面，本技术还提供一种包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐的药物组合物，其与免疫检查点药物联合使用以在个体中治疗或抑制肿瘤。所述个体可以为哺乳动物，例如人。在一些实施方案中，所述免疫检查点药物优选抗pd-1抗体、抗pd-l1抗体。在一些实施方案中，肿瘤包括但不限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0071]另一方面，本技术还提供一种复方药物或药物组合产品，所述复方药物或药物组合产品包含治疗有效量的所述通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐，和其它治疗组分，所述复方药物或药物组合产品用于治疗或抑制受试者的csf1r激酶信号转导通路相关疾病。[0072]本技术所述的csf1r激酶信号转导通路相关疾病包括癌症或肿瘤、超常增生、免疫病症、炎症等。在一些实施方案中，所述疾病为癌症或肿瘤。在一些具体实施方案中，癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤、或tams富集性肿瘤。在一些更具体的实施方案中，csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤包括csf1/csf1r依赖性白血病、腱鞘巨细胞瘤等；tams富集性肿瘤包括但不仅限于脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0073]在一些实施方案中，所述的其它治疗组分为抗肿瘤药物或免疫调节剂。在一些实施方案中，所述其他治疗组分为免疫检查点药物。在一些具体实施方案中，免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体等。[0074]应当理解，本技术中的药物组合产品不仅包括两种或多种药物活性成分配制为单一药物组合物的产品形式，还包括套装产品形式，例如两种或多种药物活性成分分别配制为单独的药物组合物，并且在产品中以物理上相分离的形式存在。[0075]作为非限制性实例，本技术提供了以下实施方案：[0076]1.以下通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗csf1r激酶信号转导通路相关疾病的药物和/或csf1r激酶抑制剂药物中的用途：[0077][0078]其中：[0079]r1位于萘环上5-8位上的任一位置，且为以下结构：[0080][0081]其中，r4选自氢、卤素、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基，[0082]位于萘环上1-4位上的任一位置；[0083]r3选自氢、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至5个杂原子的取代或未取代的5-10元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、卤代c1-c3烷基、卤代c1-c3烷氧基、羟基、氨基、硝基和卤素；[0084]r2位于萘环上1-8位上除了r1和之外的任一位置，为氢或卤素。[0085]2.如实施方案1所述用途，其中所述csf1r激酶信号转导通路相关疾病选自癌症或肿瘤、超常增生、免疫病症、炎症；优选地，所述csf1r激酶信号转导通路相关疾病为癌症或肿瘤；更优选地，所述癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤、或肿瘤相关巨噬细胞(tams)富集性肿瘤；进一步优选地，所述csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性白血病或腱鞘巨细胞瘤，和/或所述tams富集性肿瘤为脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0086]3.实施方案1定义的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐在制备调节免疫的药物中的用途；优选地，所述调节免疫为增强免疫；更优选地，所述增强免疫为改善肿瘤免疫抑制状态；进一步优选地，所述改善肿瘤免疫抑制状态为抑制偏m2型巨噬细胞的存活、逆转巨噬细胞偏m2型极化表型以及巨噬细胞偏m2型极化表型对cd8 t细胞的抑制作用，和/或重塑肿瘤免疫微环境。[0087]4.实施方案1定义的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐在制备抑制偏m2型巨噬细胞增殖的药物中的用途。[0088]5.实施方案1定义的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或抑制对免疫检查点药物不敏感的肿瘤的药物中的用途；优选地，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体，和/或所述肿瘤为脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0089]6.实施方案1定义的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐在制备增强免疫检查点药物抗肿瘤药效的药物中的用途；优选地，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体，和/或所述肿瘤为脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0090]7.实施方案1定义的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐在制备和免疫检查点药物联合抗肿瘤的药物中的用途；优选地，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体，和/或所述肿瘤为脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0091]8.如实施方案1-7中任一项所述用途，其中所述药物还包含其它治疗组分；优选地，所述其它治疗组分为抗肿瘤药物或免疫调节剂；更优选地，所述其它治疗组分为免疫检查点药物；进一步优选地，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。[0092]9.如实施方案1-8中任一项所述用途，其中所述药物制成临床上可接受的剂型；优选地，所述剂型为口服剂型、注射剂型、局部给药剂型或外用剂型。[0093]10.如实施方案1-9中任一项所述用途，其中所述药物含有治疗有效量的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐；优选地，单位剂量形式中的所述治疗有效量为0.01-2000mg，更优选1-500mg。[0094]11.一种复方药物或药物组合产品，所述复方药物或药物组合产品包含治疗有效量的实施方案1定义的通式(a)的化合物或其药学上可接受的盐，和其它治疗组分，所述复方药物或药物组合产品用于治疗受试者的csf1r激酶信号转导通路相关疾病；优选地，所述csf1r激酶信号转导通路相关疾病为癌症或肿瘤、超常增生、免疫病症、炎症；更优选地，所述csf1r激酶信号转导通路相关疾病为癌症或肿瘤。[0095]12.如实施方案11所述的复方药物或药物组合产品，其中所述癌症或肿瘤选自csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤或tams富集性肿瘤；优选地，所述csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤为csf1/csf1r依赖性白血病或腱鞘巨细胞瘤，和/或tams富集性肿瘤为脑胶质瘤、脑转移瘤或结直肠癌。[0096]13.如实施方案11或12所述的复方药物或药物组合产品，其中所述其它治疗组分选自抗肿瘤药物或免疫调节剂；优选地，所述其它治疗组分为免疫检查点药物；更优选地，所述免疫检查点药物为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体。[0097]14.如实施方案1-13中任一项所述的用途、复方药物或药物组合产品，在通式(a)中，r3选自氢、c1-c3烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至3个杂原子的取代或未取代的5-6元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、氨基、硝基、f、cl和br；[0098]r2为氢、f、cl或br。[0099]15.如实施方案1-14中任一项所述的用途、复方药物或药物组合产品，其中r4选自氢、f、cl、br、甲基和甲氧基。[0100]16.如实施方案1-13中任一项所述的用途、复方药物或药物组合产品，其中通式(a)的化合物为以下通式(b)所示的化合物：[0101][0102]其中：[0103]位于萘环上1-4位上的任一位置；[0104]r3选自氢、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至5个杂原子的取代或未取代的5-10元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、卤代c1-c3烷基、卤代c1-c3烷氧基、羟基、氨基、硝基和卤素；[0105]r2位于萘环上1-8位上除了r1和之外的任一位置，为氢或卤素；[0106]z为c(r5)＝ch、s或o；[0107]y为nh、nme、o、ch＝c(r6)或ch＝n；[0108]r5选自氢、卤素、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基；r6选自氢、吡唑基、c1-c3烷基取代的吡唑基和羟基c1-c3烷基取代的吡唑基。[0109]17.如实施方案16所述的用途、复方药物或药物组合产品，其中r5选自氢、f、cl、br、甲基和甲氧基；r6选自氢、吡唑基、甲基取代的吡唑基和羟乙基取代的吡唑基。[0110]18.如实施方案1-13中任一项所述的用途、复方药物或药物组合产品，其中通式(a)的化合物为以下通式(c)、(d)、(e)或(f)所示的化合物：[0111][0112]其中：[0113]位于萘环上的1位或2位；[0114]r3选自氢、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、取代或未取代的苯基和含有选自n、o和s中的1至5个杂原子的取代或未取代的5-10元杂芳基；在取代的情况下，所述取代基为1-3个取代基，所述的取代基各自独立地选自c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、卤代c1-c3烷基、卤代c1-c3烷氧基、羟基、氨基、硝基和卤素；[0115]r2位于萘环上1-8位上除了r1和之外的任一位置，为氢或卤素；[0116]r4选自氢、卤素、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基；[0117]v为s或o；[0118]w为n或c(r7)；[0119]r7选自氢、吡唑基、c1-c3烷基取代的吡唑基和羟基c1-c3烷基取代的吡唑基。[0120]19.如实施方案18所述的用途、复方药物或药物组合产品，其中r4选自氢、f、cl、br、甲基和甲氧基；r7选自氢、吡唑基、甲基取代的吡唑基和羟乙基取代的吡唑基。[0121]20.如实施方案1-13中任一项所述的用途、复方药物或药物组合产品，其中通式(a)化合物为如下式(i)所示的化合物：[0122][0123]本技术所述的治疗有效量是指药学上认为的有效给药剂量，即活性化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为0.01-2000mg，优选1-500mg，或者5～500mg，或者5～200mg。示例性的有效剂量例如1mg、2mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg。优选地，上述日给药剂量以通式(a)至(f)的化合物，特别是化合物i计。可以每日一次单剂量施用，可以每天分多次施用，也可以间隔使用。抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体的给药剂量根据具体的抗体种类以及癌症类型和发展阶段等情况而定，每次给药剂量可以是0.5mg/kg-30mg/kg，优选1-20mg/kg；例如，对于60kg体重的人而言，每次给药剂量通常可以为1mg-1800mg，例如50mg-1200mg，或者100mg-900mg，150mg-600mg或200mg-500mg；示例性的每次给药剂量例如60mg、100mg、120mg、150mg、180mg、210mg、240mg、270mg、300mg、330mg、360mg、400mg、500mg、600mg、900mg、1200mg等；间隔给药，给药频率例如每3-7天给药1次或者每1-6周给药1次，例如每3天给药1次，每5天给药1次，每1周给药1次，每10天给药1次，每2周给药1次，每3周给药1次，每4周给药1次；每6周给药1次等。具体剂量和给药频率应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师根据常规技能可以确定的。所述施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括但并不限于：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)和局部给药。[0124]在本技术的上下文中，所述的csf1/csf1r依赖性癌症或肿瘤是指csf1/csf1r高表达或高度活化的癌症或肿瘤。所述csf1/csf1r高表达或高度活化，是指本领域技术人员使用本领域的常规检测方法(包括但不限于酶联免疫、免疫组化、流式细胞术、westernblotting、组织芯片、基因检测等方法)检测癌症或肿瘤的组织和/或细胞中csf1/csf1r的表达水平或活化水平，其表达水平或活化水平为正常水平的130％以上，优选150％以上，优选175％以上，优选200％以上，优选250％以上，或优选300％以上。所述正常水平，可以是普通人群相应的组织和/或细胞中csf1/csf1r的表达水平或活化水平，也可以是同一患者的癌周组织和/或细胞中csf1/csf1r的表达水平或活化水平。[0125]在本技术的上下文中，所述的tams富集性肿瘤是指肿瘤组织中tams浸润丰富的肿瘤，本领域技术人员使用本领域的常规检测方法(包括但不限于酶联免疫、免疫组化、流式细胞术、westernblotting、组织芯片、基因检测等方法)检测tams的表面标记物或进行tams计数，肿瘤组织中tams的表面标记物表达水平与癌周组织中相应表面标记物表达水平有差异，或者tams计数为癌周组织的130％以上，优选150％以上，优选175％以上，优选200％以上，优选250％以上，或优选300％以上，可以认定为tams浸润丰富，所述肿瘤可以被认定为tams富集性肿瘤。除了巨噬细胞的代表性标志物(例如f4/80)之外，tams的表面标记物包括但不仅限于一般性tams表面标记物、促瘤巨噬细胞的表面标记物、抑瘤巨噬细胞的表面标记物。所述一般性tams表面标记物包括但不仅限于cd14、cd11c、cd68和/或cd11b等，优选cd68和/或cd11b。所述促瘤巨噬细胞的表面标记物包括但不仅限于cd206、csf1r、csf1、cd115、pparg、arg1、cd163、cd301、dectin-1、pdl2、fizz1、cd204、pd-l1、arginase-i、ym1、mgl2、osteopontin、mmps或ccr2等，优选cd206。所述抑瘤巨噬细胞的表面标记物包括但不仅限于il1a、il1b、il6、nos2、tlr2、tlr4、cd80、cd86、mhc-ii、cd38、cd40、cd64、hla-dr(cd74)或cd169等，优选cd86和/或mhc-ii。所述表面标记物表达水平有差异是指，当所述表面标记物是一般性tams的表面标记物时，肿瘤组织中所述的表面标记物表达水平为癌周组织中相应表面标记物表达水平的130％以上，优选150％以上，优选200％以上；当所述表面标记物是促瘤巨噬细胞的表面标记物(例如cd206等)时，肿瘤组织中所述的表面标记物表达水平为癌周组织中相应表面标记物表达水平的130％以上，优选150％以上，优选200％以上；优选，当所述表面标记物还包括抑瘤巨噬细胞的表面标记物(例如cd86和/或mhc-ii等)时，肿瘤组织中所述的抑瘤巨噬细胞的表面标记物表达水平为癌周组织中相应表面标记物表达水平的80％以下，优选50％以下。[0126]在本技术描述肿瘤对免疫检查点药物不敏感的背景下，是指所述肿瘤在使用常规剂量的免疫检查点药物治疗时，肿瘤抑制率低于50％；优选在使用常规用量范围下限剂量的免疫检查点药物治疗时，肿瘤抑制率低于30％，优选低于20％，更优选低于10％。在本技术的一种实施方式中，所述肿瘤抑制率以肿瘤体积抑制率tgi(％)表示，计算公式为：tgi(％)＝100×{1-[(v最后治疗日-v第0日)/(v对照最后日-v对照第0日)]，其中v为肿瘤体积，计算公式为：v＝1/2×a×b2，其中a、b分别为肿瘤的长度与宽度。[0127]在本技术的上下文中，抗pd-1抗体包括但不限于，cd279、纳武利尤单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、特瑞普利单抗、信迪利单抗、卡瑞利珠单抗、替雷利珠单抗等。抗pd-l1抗体包括但不限于，cd274、度伐利尤单抗(durvalumab)、阿替利珠单抗(atezolizumab)等。[0128]本技术所述的数值或数值范围，可以在本领域可接受的范围内上下浮动，例如在所述数值或数值范围的基础上±10％，或者±9％，或者±8％，或者±7％，或者±6％，或者±5％，或者±4％，或者±3％，或者±2％，或者±1％。[0129]本技术所述的的“受试者”、“患者”、“个体”包括动物界的所有成员，包括但不限于，哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、猫、猴子、狗、马、猪等)和人。优选地，根据本发明的受试者是人。除非标明，术语“患者”、“受试者”或“个体”可以互换使用。[0130]在本技术的上下文中，所述的通式(a)至(f)的化合物或其药学上可接受的盐，特别是化合物i或其药学上可接受的盐没有特别的限制，优选包括：盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、氢氟酸盐、氢溴酸盐、甲酸盐、乙酸盐、苦味酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、甲基磺酸盐、乙基磺酸盐、三氟甲基磺酸盐、对甲苯磺酸盐等。[0131]在本技术中，所述的烷基优选为脂肪族烷基，可以是直链烷基、支链烷基、螺环烷基、桥环烷基、烯烷基、炔烷基、环烷基、环烯基、环炔基、烷氧烷基、烷氧酰基烷基、环烷基烷基，非限制性地包括：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、烯丙基、炔丙基、环丁烯基、环己烯基；形如“c1-c8”的表述意在包括具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个碳原子的相应基团，例如，“c1-c8烷基”指具有1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个碳原子的烷基，“c2-c10烯基”指具有2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个碳原子的烯基。[0132]在本技术中，所述环烷基可以为饱和或者部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其中包括3至20个碳原子，优选包括3至12个碳原子，更优选环烷基包含3至10个碳原子。单环环烷基非限制实施例包含环丙基、环丁基、环戊烯基、环己基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。[0133]所述杂芳基指包含1至4个杂原子，5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子包括氧、硫和氮。杂芳基优选为是5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、n-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述的杂芳基可以稠合于芳基、杂环基或者环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。[0134]除非特别说明，本技术所描述的结构式意在包括所有的互变异构、光学异构和立体异构形式(如对映异构体、非对映异构体，几何异构体或构象异构体)：例如含有不对称中心的r、s构型，双键的(z)、(e)异构体和(z)、(e)的构象异构体。因此本技术的化合物的单个立体化学异构体、互变异构体或其对映异构体、非对映异构体或几何异构体或构象异构体或互变异构体的混合物都属于本发明的范围。[0135]术语“互变异构体”表示具有不同能量的结构同分异构体可以超过低能垒，从而互相转化。比如，质子互变异构体(即质子移变)包括通过质子迁移进行互变，如1h-吲唑与2h-吲唑、1h-苯并[d]咪唑与3h-苯并[d]咪唑，化合价互变异构体包括通过一些成键电子重组而进行互变。[0136]本技术提供的体内、体外研究显示(参见下文实施例的详细结果)：[0137](1)本技术化合物i在体外能显著抑制csf1r激酶活性。[0138](2)本技术所述化合物i能够显著抑制csf1刺激的小鼠来源巨噬细胞(bmdm)的体外增殖，并可剂量依赖性抑制csf1刺激的csf1r的磷酸化以及下游信号分子akt的活化，表明化合物i通过抑制csf1r有效抑制原代巨噬细胞的生长。[0139](3)本技术化合物i能够显著抑制脑胶质瘤细胞株u87mg裸小鼠移植瘤模型和结直肠癌细胞株ht-29裸小鼠皮下移植瘤模型的瘤组织内巨噬细胞标志物f4/80以及m2型巨噬细胞标志物cd206的表达，提示化合物i作为csf1r激酶抑制剂，通过抑制csf-1诱导的巨噬细胞的存活、逆转巨噬细胞偏m2极化表型，从而发挥抗肿瘤活性。[0140](4)体内药效实验结果表明，受试物化合物i10mg/kg组，每天口服给药两次，连续三周则能显著抑制人脑胶质瘤u87mg裸小鼠皮下移植瘤的生长，第21天所得t/c百分数为11.91％，而同样给药方式的阳性对照药axitinib40mg/kg，第21天所得t/c百分数为30.27％，即，在这个模型中化合物i抑制肿瘤生长的效果显著优于axitinib。受试物化合物i20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组，每天口服给药两次，连续三周则明显延缓了人结直肠癌ht-29裸小鼠皮下移植瘤的生长，且抑制效果随剂量增加而增加，第21天所得t/c百分数分别为17.38％、31.27％和42.70％，其中化合物i20mg/kg组小鼠所荷肿瘤在实验治疗三周期间生长几乎完全停滞，显著优于阳性对照药物axitinib40mg/kg组(第21天所得t/c百分数为48.88％)。[0141](5)针对小鼠星形胶质细胞瘤dbt免疫健全小鼠肿瘤模型，单用化合物i5mg/kg，对肿瘤没有显著抑制活性；抗pd-1抗体(10mg/kg)单用组对肿瘤生长有一定的抑制作用，但肿瘤仍然持续缓慢增长；在使用抗pd-1抗体的基础上联合化合物i以每天两次5mg/kg的剂量给药，肿瘤生长显著被抑制，肿瘤体积基本没有增长，实验终点时联用组与抗pd-1抗体单药组具有显著性差异。结果显示联用化合物i能够增强抗pd-1抗体在dbt肿瘤模型中的抑瘤作用。同时，流式分析结果显示联用组瘤组织中cd8 t细胞的数量与空白制剂组及抗pd-1抗体单药组相比，均有显著升高，提示化合物i可以逆转肿瘤抑制性免疫微环境。[0142](6)在u87mg脑原位移植瘤模型上，化合物i各实验治疗组小鼠生存期都有不同程度延长，其中，40mg/kg和20mg/kg组的中位生存期分别为58.5天和54.0天，均较阳性对照药axitinib40mg/kg组显著延长(41.0天)。[0143](7)临床实验初步疗效结果显示，化合物i对脑胶质瘤特别是高级别脑胶质瘤等实体瘤有较好疗效。[0144]以上研究结果表明，本技术所述的化合物i或其药学上可接受的盐可以通过重塑肿瘤微环境，改善肿瘤免疫抑制状态，发挥抗肿瘤治疗作用，并能增强免疫检查点药物的抗肿瘤功效，具有很好的临床应用前景。附图说明[0145]图1：化合物i及对照化合物plx3397对bmdm中csf1r磷酸化及其下游信号通路的影响。[0146]图2：u87mg裸小鼠移植瘤中化合物i对巨噬细胞的数量和极性的抑制作用：a：f4/80免疫组化定量统计分析图；b：cd206免疫组化定量统计分析图。[0147]图3：ht-29裸小鼠移植瘤中化合物i对巨噬细胞的数量和极性的抑制作用：a：f4/80免疫组化定量统计分析图；b：cd206免疫组化定量统计分析图。[0148]图4：化合物i对免疫检查点药物的增敏作用。a：化合物i和抗pd-1抗体联用对小鼠胶质瘤dbt皮下移植瘤的生长抑制作用；b：化合物i和抗pd-1抗体联用对肿瘤组织中cd8 t细胞的含量的影响。[0149]图5：化合物i对u87mg脑原位荷瘤小鼠的生存期的影响。具体实施方式[0150]下面结合具体实施例，进一步阐述本技术。应理解，这些实施例仅用于说明本技术而不用于限制本技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。[0151]实验材料来源或配制：[0152]化合物i：上海润石医药科技有限公司自制。[0153]阳性对照化合物、实验中所用试剂、原材料均为商业购买或自行配制。[0154]体外实验受试物(化合物i和阳性对照化合物)配制方法：称量后加dmso溶解成10-2mol/l，临用时稀释至所需浓度。[0155]体内实验受试物化合物i制剂按如下处方进行制备：[0156]原辅料用量化合物i60mg中链甘油三酸酯1ml聚氧乙烯40氢化蓖麻油1.5ml二乙二醇单乙基醚2.5ml油酸1ml乙醇：乙酸乙酯(1：1)作为潜溶剂15～20ml[0157]实施例1：化合物i对csf1r激酶活性的影响[0158]1.elisa方法[0159]酶反应底物poly(glu，tyr)4∶1用无钾离子的pbs(10mm磷酸钠缓冲液，150mmnacl，ph7.2-7.4)稀释成20μg/ml，包被酶标板，置37℃反应12-16小时，用t-pbs(含0.1％tween-20的无钾离子的pbs)洗板，烘干备用。每孔依次加入以反应缓冲液(50mmhepesph7.4，50mmmgcl2，0.5mmmncl2，0.2mmna3vo4，1mmdtt)稀释的atp溶液(终浓度为5μm)，待测试化合物或溶剂对照，以及重组csf1r激酶蛋白启动反应。37℃反应1小时，t-pbs洗板后，加入抗体py99稀释液，37℃摇床反应0.5小时，t-pbs洗板。加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗稀释液，37℃反应0.5小时，洗板后加入2mg/ml的opd显色液(用含有0.03％h2o2的0.1m柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(ph＝5.4)稀释)，25℃避光反应1-10分钟。最后加入2mh2so4终止反应，用可调波长式微孔板酶标仪读板，波长为490nm。抑制率计算：[0160][0161]ic50值采用酶标仪随机附带软件以四参数法回归求得。[0162]2.实验结果[0163]化合物i对于肿瘤相关巨噬细胞中重要靶标csf1r激酶活性具有明显的抑制作用，ic50为19.3 3.4nm，与上市药物pexidartinib(培西达替尼，plx3397)相当。提示其具有重塑肿瘤微环境、拮抗肿瘤的潜质。[0164]表1化合物i对csf1r激酶活性的抑制作用[0165][0166]实施例2：化合物i对原代巨噬细胞存活和胞内csf1r信号通路的影响[0167]1.实验方法[0168]1.1骨髓来源巨噬细胞(bmdm)的分离和培养[0169]将小鼠(balb/c)安乐死后置于75％酒精中浸泡3-5min；在超净台中用眼科镊和眼科剪取下胫骨和股骨；分别剪掉胫骨和股骨的两侧关节，用无菌简易缓冲器将骨髓细胞冲出；用70μm尼龙膜过滤骨髓细胞并离心去上清；加入红细胞裂解液，静置3-4min后加入无菌的简易缓冲器终止裂解；离心后弃上清，得到骨髓细胞沉淀。将其在1640培养基(加fbs及10ng/mlcsf1)中培养5-7天后即为巨噬细胞，采用流式细胞术鉴定。[0170]1.2细胞增殖抑制实验[0171]采用cck8细胞计数试剂盒检测。将csf1诱导5～7天的骨髓来源巨噬细胞接种至96孔培养板中培养过夜，加入不同浓度的化合物作用72h，并设定空白对照组。然后每孔加入10μlcck8试剂，置于培养箱中放置4～12h，用酶标仪读数，测定波长为450nm。采用以下公式计算化合物对细胞生长的抑制率：[0172]抑制率％＝(空白对照组od值-给药组od值)/空白对照组od值×100％[0173]ic50值采用四参数法计算，每个实验独立重复3次。[0174]1.3免疫印迹实验(westernblot)[0175]将csf1诱导5～7天的骨髓来源巨噬细胞离心弃掉原有培液，并加入无血清的培液2ml，饥饿6h后加入不同浓度的化合物i和阳性药plx3397作用2h，加入终浓度为50ng/ml的csf1因子刺激15min，弃去培液，用预冷pbs洗三次，加入1×sds凝胶加样缓冲液裂解细胞。细胞裂解物在沸水浴中加热15min后，于-20℃保存。[0176]取上述蛋白样品进行sds-page电泳，然后用半干电转移系统将蛋白转移至硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜置于封闭液(5％脱脂奶粉稀释于tbs-t)中室温封闭2h，然后将膜置于一抗中，4℃孵育过夜。用tbs-t洗涤三次，每次15min。将膜置于二抗稀释液中，室温孵育1-2h；同上洗膜3次后，用发色试剂发色，显影。[0177]2.实验结果[0178]2.1化合物i对bmdm的增殖抑制效应[0179]采用cck8试剂盒检测化合物i对bmdm细胞的体外增殖抑制活性，统计ic50结果如表2所示。化合物i能够显著抑制csf1刺激的bmdm细胞的增殖，其平均ic50为0.093±0.024μm，活性略弱于阳性药plx3397(0.030±0.009μm)。[0180]表2.化合物i对bmdm细胞的增殖抑制活性ic50(μm)[0181][0182]2.2化合物i对bmdm的靶点抑制活性检测[0183]采用免疫印迹实验方法检测化合物i对小鼠原代巨噬细胞中csf1r及信号通路的抑制作用。实验独立重复3次，并对所有实验结果进行定量。结果如图1所示(实验数据采用t检验分析统计，**表示与空白对照组比较p＜0.01，***表示与空白对照组比较p＜0.001)，csf1刺激可激活csf1r，表现为磷酸化csf1r(p-csf1r)表达上调及下游信号分子akt的活化(磷酸化akt(p-akt)水平升高)。给予化合物i处理后，可剂量依赖性地抑制csf1刺激的csf1r以及akt的磷酸化水平，在100nm浓度下对csf1r磷酸化的抑制率达到57.3％，对akt磷酸化抑制率达到64.4％。化合物i的抑制活性与阳性药plx3397相当。[0184]实施例3：化合物i对人脑胶质瘤u87mg裸小鼠移植瘤生长抑制作用[0185]1.实验动物：balb/c裸小鼠，雌性，鼠龄：3-4w，中国科学院上海药物研究所生产[0186]2.实验方法[0187]用人脑胶质瘤u87mg细胞株接种于裸小鼠右侧腋窝皮下，细胞接种量为5×106/只，形成移植瘤后再在裸小鼠体内传1代后使用。[0188]取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至平均体积约为90mm3左右后将动物随机分组。化合物i40mg/kg、20mg/kg和10mg/kg组，均每天口服给药两次，连续给药21天，空白制剂组给予等量空白制剂，每天口服给药两次，连续给药21天。阳性对照药物axitinib(阿西替尼)40mg/kg组每天口服给药两次，连续给药21天。溶剂组给等量注射用水。整个实验过程中，每周2次测量移植瘤直径，同时称量小鼠体重。肿瘤体积(tumorvolume，tv)的计算公式为：tv＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示肿瘤的长和宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relativetumorvolume，rtv)，计算公式为：rtv＝vt/v0。其中v0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为：相对肿瘤增殖率t/c(％)，计算公式如下：t/c(％)＝(trtv/crtv)×100％，trtv：治疗组rtv；crtv：溶剂组rtv。[0189]3.实验结果[0190]结果如表3所示。空白制剂组，每天两次灌胃给予与化合物i配方完全相同的制剂(仅不含化合物i)，连续给药21天，对人脑胶质瘤u87mg裸小鼠皮下移植瘤的生长无明显影响，第21天所得t/c百分数为79.86％。[0191]受试物化合物i40mg/kg、20mg/kg和10mg/kg组，每天口服给药两次，连续三周则能显著抑制人脑胶质瘤u87mg裸小鼠皮下移植瘤的生长，第21天所得t/c百分数分别为9.77％、8.14％和11.91％。[0192]阳性对照药物axitinib40mg/kg组采用同样的给药方案，每天口服给药两次，连续给药21天后对人脑胶质瘤u87mg裸小鼠皮下移植瘤的生长均有显著抑制作用，第21天所得t/c百分数为30.27％。在这个模型中化合物i10mg/kg抑制肿瘤生长的效果即优于axitinib40mg/kg。[0193]实验中，各组小鼠均状态良好。[0194]表3.化合物i对人脑胶质瘤u87mg裸小鼠移植瘤的实验治疗作用[0195][0196][0197]实验数据采用t检验分析统计，*p＜0.01，**p＜0.001[0198]实施例4：化合物i对人结直肠癌ht-29裸小鼠移植瘤生长抑制作用[0199]1.实验动物：balb/c裸小鼠，雌性，鼠龄：6w，上海灵畅生物科技有限公司购入[0200]2.实验方法[0201]用人结直肠癌ht-29细胞株接种于裸小鼠右侧腋窝皮下，细胞接种量为5×106/只，形成移植瘤后再在裸小鼠体内传1代后使用。[0202]取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至平均体积约为120mm3左右后将动物随机分组。化合物i20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组，均每天口服给药两次，连续给药21天，空白制剂组给予等量空白制剂，每天口服给药两次，连续给药21天。阳性对照药物axitinib40mg/kg组每天口服给药两次，连续给药21天。溶剂组给等量注射用水。整个实验过程中，每周2次测量移植瘤直径，同时称量小鼠体重。肿瘤体积(tumorvolume，tv)的计算公式为：tv＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示肿瘤的长和宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relativetumorvolume，rtv)，计算公式为：rtv＝vt/v0。其中v0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为：相对肿瘤增殖率t/c(％)，计算公式如下：t/c(％)＝(trtv/crtv)×100％，trtv：治疗组rtv；crtv：溶剂组rtv。[0203]3、实验结果[0204]实验结果如表4所示。空白制剂组，每天灌胃两次给予空白制剂，连续给药21天，对人结直肠癌ht-29裸小鼠皮下移植瘤的生长无影响，第21天所得t/c百分数为87.68％。[0205]受试物化合物i20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组，在相同实验治疗方案下则明显延缓了肿瘤的生长，且抑制效果随剂量增加而增加，第21天所得t/c百分数分别为17.38％、31.27％和42.70％。其中化合物i20mg/kg组小鼠所荷肿瘤在实验治疗三周期间生长几乎完全停滞。[0206]阳性对照药物axitinib40mg/kg组，每天口服给药两次，连续给药21天，对人结直肠癌ht-29裸小鼠皮下移植瘤的生长有部分抑制作用，第21天所得t/c百分数为48.88％，与化合物i5mg/kg组相当。[0207][0208]实施例5：化合物i对人胶质母细胞瘤细胞株u87mg裸小鼠移植瘤模型和人结直肠癌ht-29裸小鼠皮下移植瘤模型中巨噬细胞相关指标(f4/80，cd206)的影响[0209]1.实验方法[0210]分别取体内实验结束后的u87mg和ht-29裸小鼠皮下移植瘤组织，4％多聚甲醛固定，制作石蜡切片。[0211]采用多重快速评分法(multiplicativequickscoremethod，mqs)来评估不同蛋白的表达。这一评估方法既考虑到染色强度，也考虑到细胞染色范围，估计了阳性细胞的比例并给出从1到6的范围分数(1＝1％-4％；2＝5％-19％；3＝20％-39％；4＝40％-59％；5＝60％-79％；6＝80％-100％)。阳性染色细胞的平均强度为强度评分0～3分(0＝无染色；1＝弱；2＝中度染色；3＝强染色)。然后用范围分数乘以强度分数计算总得分a(最小值为0，最大值为18)。[0212]在对u87mg瘤组织内巨噬细胞标志物f4/80以及m2型巨噬细胞标志物cd206变化分析时，对所有切片进行定量统计(溶剂：n＝6，空白制剂：n＝6，化合物i10mg/kg：n＝6，化合物i20mg/kg：n＝6，化合物i40mg/kg：n＝6，axitinib：n＝4)，实验数据采用t检验分析显著性差异，*表示与空白制剂组比较p＜0.05，**表示与空白制剂组比较p＜0.01，***表示与空白制剂组比较p＜0.001。[0213]在对ht-29瘤组织内巨噬细胞标志物f4/80以及m2型巨噬细胞标志物cd206变化进行分析时，对所有切片进行定量统计(溶剂：n＝12，空白制剂：n＝6，化合物i5mg/kg：n＝6，化合物i10mg/kg：n＝6，化合物i20mg/kg：n＝6，axitinib：n＝6)。实验数据采用t检验分析显著性差异，*表示与空白制剂组比较p＜0.05，**表示与空白制剂组比较p＜0.01，***表示与空白制剂组比较p＜0.001[0214]2、实验结果[0215]2.1u87mg瘤组织内巨噬细胞标志物f4/80以及m2型巨噬细胞标志物cd206变化[0216]与空白制剂组相比，化合物i40mg/kg剂量组能明显降低巨噬细胞的f4/80的表达，提示瘤组织中巨噬细胞数量减少(图2中a图)。同时，化合物i能剂量依赖性的显著抑制m2型巨噬细胞标志物cd206的表达(图2中b图)，在10mg/kg剂量组即能明显抑制，其抑制率为34.48％，40mg/kg剂量组抑制率达到70.69％。而axitinib(40mg/kg)对各巨噬细胞相关标志物的表达没有显著影响，与其不抑制csf1r激酶活性因此不影响巨噬细胞功能相一致。以上结果提示化合物i作为csf1r激酶抑制剂，通过抑制csf-1诱导的巨噬细胞的存活、逆转巨噬细胞偏m2极化表型，从而发挥抗肿瘤活性。[0217]2.2ht-29瘤组织内巨噬细胞标志物f4/80以及m2型巨噬细胞标志物cd206变化[0218]在ht-29裸小鼠移植瘤模型中，化合物i剂量依赖性抑制f4/80和cd206的表达，在20mg/kg剂量下抑制活性与空白制剂组相比具有极显著差异，阳性药axitinib对f4/80和cd206的表达没有抑制活性，结果如图3中的a图和b图所示。[0219]实施例6：化合物i增敏免疫检查点药物抗肿瘤药效[0220]1.实验方法[0221]在无菌条件下，将小鼠星形胶质细胞瘤dbt细胞悬液注射于balb/c小鼠右侧腋窝皮下。balb/c小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至平均体积约为100-200mm3左右后将动物随机分组。化合物i(5mg/kg，单用或与抗pd-1抗体联用)每天口服给药两次，连续给药28天；抗pd-1抗体(10mg/kg，单用或与化合物i联用)(bioxcell公司，invivomab抗小鼠pd-1(cd279)(货号：be0146))每三天腹腔注射给药一次，连续给药28天。整个实验过程中，每周2次测量移植瘤直径，同时称量小鼠体重。肿瘤体积(tumorvolume，tv)的计算公式为：tv＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示肿瘤的长和宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relativetumorvolume，rtv)，计算公式为：rtv＝vt/v0。其中v0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，vt为每一次测量时的肿瘤体积。[0222]实验结束时，首先将取下的新鲜肿瘤剪碎，用2.5ml配制好的酶溶液重悬肿瘤组织团块，并37℃摇床进行瘤组织的消化，反应30～60分钟后用70μm滤网过滤得到细胞悬液。使用红细胞裂解液处理10分钟，300g离心5分钟，用pbs重悬并计数。接下来进行流式抗体染色：将所需细胞用pbs洗两遍，然后使用100μl的pbs重悬并加入0.5μl荧光抗体fvs510，4℃避光染色30分钟，之后用1ml流式上机缓冲液(#130-091-221-1，美天旎公司产品)洗两遍，4℃300g离心5分钟。配制封闭抗体稀释液(使用上述缓冲液按每200μl加入1μl的鼠抗cd16/32)，每个样品加入200μl的抗体稀释液封闭30分钟，每个样品加入1μl的cd45和cd8抗体，4℃孵育30分钟，此步设置单染管，之后同样用1ml的流式上机缓冲液洗涤两次，每次4℃300g离心5分钟。最后加入300μl的流式上机缓冲液重悬，在fortessa流式细胞仪上(bd公司)进行流式分析。[0223]所有剂量组n＝9，实验数据采用t检验分析显著性差异，ns表示与空白制剂组相比无显著性差异，*表示与空白制剂组比较p＜0.05，**表示与空白制剂组比较p＜0.01。[0224]2.实验结果[0225]化合物i在5mg/kg单用剂量下对dbt肿瘤的体内生长没有显著抑制活性；抗pd-1抗体(10mg/kg)单用组对肿瘤生长有一定的抑制作用，但肿瘤仍然持续缓慢增长。在使用抗pd-1抗体的基础上联合化合物i以每天两次5mg/kg的剂量给药，肿瘤生长显著被抑制，肿瘤体积基本没有增长。实验终点时联用组的移植瘤体积为抗pd-1抗体单药组的19.89％。结果显示联用化合物i能够增强抗pd-1抗体在dbt肿瘤模型中的抑瘤作用。同时，流式分析结果显示联用组瘤组织中cd8 t细胞的数量与空白制剂组及抗pd-1抗体单药组相比，均有显著升高，提示化合物i可以逆转肿瘤抑制性免疫微环境。具体结果见图4中的a图和b图。[0226]实施例7：化合物i对脑原位接种人胶质瘤u87mg小鼠生存期的影响[0227]1、实验动物[0228]balb/ca裸小鼠，雄性，7-8周龄，购自上海吉辉实验动物饲养有限公司。[0229]2、实验方法[0230]裸小鼠腹腔注射50mg/kg舒泰50麻醉后，将裸小鼠置于脑立体定位仪中俯卧位固定头颅，于内眦连线与头部矢状中线交汇处纵向切口，分离暴露颅骨，于前囟水平右侧2mm，向前0.5mm处颅骨钻孔。将u87mg细胞以5×105/只接种于裸小鼠大脑右侧尾状核位置。切口用无菌医用缝合线缝合，动物保温至苏醒。接种后第7天随机分组(接种日为第0天)，第8天开始给予不同化合物治疗。化合物i40mg/kg或20mg/kg组，每天口服给药两次，连续给药至小鼠自然死亡。阳性对照药物axitinib40mg/kg组，每天口服给药两次，连续给药至小鼠自然死亡；溶剂组(vehicle)给等量注射用水；空白制剂组给予等量空白制剂。整个实验过程中，每周2次称量小鼠体重。实验过程中，记录小鼠死亡情况，计算生存率。实验数据采用log-rank分析，p≤0.05为显著差异。[0231]3、实验结果[0232]实验结果如表5和图5所示。各实验组于接种第8天开始实验性治疗。溶剂组于第27天开始有小鼠死亡，至第48天该组小鼠全部死亡，中位生存期为46天。空白制剂组(blanksolvent)于第31天开始出现死亡，至第52天该组最后一只小鼠死亡，中位生存期为41天，与溶剂组相比无显著性差异。[0233]阳性对照药物axitinib40mg/kg组在实验治疗过程中荷瘤小鼠陆续出现死亡，第28天该组第一只动物出现死亡，至第48天该组所有小鼠均死亡，该组中位生存期为41天，与溶剂组相比无显著性差异。[0234]与化合物i在u87mg裸小鼠皮下移植瘤模型上展示的抗肿瘤效果相似，在u87mg脑原位移植瘤模型上，化合物i各实验治疗组小鼠生存期都有不同程度延长。化合物i40mg/kg实验治疗组小鼠于第43天才开始陆续出现死亡，至第75天该组最后一只小鼠死亡，中位生存期为58.5天，较溶剂组、空白制剂组和axitinib组均有显著延长。化合物i20mg/kg组同样能延长模型小鼠生存时间，中位生存期为54天。[0235]表5.化合物i实验治疗对裸小鼠原位接种人脑胶质瘤u87mg后中位生存期的影响[0236][0237]注：ils：生命延长率＝(给药组mst/溶剂组mst-1)×100％[0238]实施例8：化合物i的临床试验[0239]进行用化合物i治疗复发或晚期实体瘤患者的1期临床实验。一些患者具有脑胶质瘤(包括胶质肉瘤)、脑转移瘤、肾癌、结直肠癌、甲状腺癌、肺癌、胃癌、腱鞘巨细胞瘤等复发或晚期实体瘤，标准治疗下仍发生疾病进展、不耐受标准治疗或缺乏有效标准治疗。[0240]化合物i的起始剂量为5mgqd，可逐步升高至：15mgqd、30mgqd、60mgqd、100mgqd、150mgqd、200mgqd；剂量扩展阶段3个队列：队列1：复发高级别脑胶质瘤，队列2：脑转移瘤，队列3：其它有效肿瘤，每个队列1-2个剂量组。用药时程：3周为一个周期，给药出现任何终点事件。[0241]截至2021年9月10日，5mg、15mg和30mg入组3例受试者均未发生dlt，进入延长给药期治疗；对3例受试者进行初步疗效评估，其中2例sd，1例pr，均继续给药中，详见表6：[0242]表6化合物i临床初步疗效[0243][0244]典型病例：[0245]某患者，男，38岁，2020年01月16日诊断为胶质母细胞瘤iv级，进行右颞枕开颅肿瘤切除术，术后共进行了30次放疗，总剂量为60gy。2020年04月30日开始进行替莫唑胺 阿帕替尼治疗共12个疗程到2021年6月进展，2021年07月27日签署知情同意书参加化合物i临床试验，靶病灶：靶病灶1spd为516.60，靶病灶2spd为310.50，spd共827.10。2021年07月30日首次单次给药，剂量为30mg。2021年08月02日开始第一周期多次给药，2021年08月22日第一治疗周期结束，疗效评估为pr(靶病灶1spd为381.42，靶病灶2spd为0，spd共381.42)，无dlt发生，2021年08月27日进入第二周期治疗。[0246]本技术使用的英文缩略词的全称及中文名如下：[0247]csf1r：colony-stimulatingfactor1receptor，集落刺激因子1受体[0248]csf-1：colony-stimulatingfactor1，集落刺激因子1[0249]tams：tumor-associatedmacrophages，肿瘤相关巨噬细胞[0250]treg：regulatorytcells，调节性t细胞[0251]dc：dendriticcells，树突状细胞[0252]tgct：tenosynovialgiantcelltumor，腱鞘巨细胞瘤[0253]vegf：vascularendothelialgrowthfactor，血管内皮生长因子[0254]vegfr：vascularendothelialgrowthfactorreceptor，血管内皮生长因子受体[0255]dbt：小鼠脑星型胶质瘤[0256]akt：proteinkinaseb，pkb，蛋白激酶b[0257]dmso：dimethylsulfoxide，二甲基亚砜[0258]elisa：enzymelinkedimmunosorbentassay，酶联免疫吸附剂测定[0259]poly(glu，tyr)4∶1：多聚谷氨酸-酪氨酸肽段(4：1)[0260]hepes：4-羟乙基哌嗪乙磺酸[0261]dtt：dl-dithiothreitol，二硫苏糖醇[0262]atp：adenosinetriphosphate，三磷酸腺苷[0263]py99：抗磷酸化酪氨酸单抗[0264]opd：o-phenylenediamine，邻苯二胺[0265]od：opticaldensity，光密度[0266]balb/c：一种免疫缺陷小鼠亚系[0267]fbs：fetalbovineserum，胎牛血清[0268]sds：sodiumdodecylsulfate，十二烷基磺酸钠[0269]sds-page：sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳[0270]tbs-t：三乙醇胺缓冲盐水溶液(含有0.05％吐温-20)[0271]pbmc：peripheralbloodmononuclearcell，外周血单核细胞[0272]bmdm：bonemarrow-derivedmacrophages，骨髓来源巨噬细胞[0273]pd-1：programmedcelldeathprotein1，程序性死亡受体1[0274]pd-l1：programmedcelldeath1ligand1，程序性死亡配体1[0275]fmo：fluorescenceminusone，荧光扣除对照[0276]log-rank：对数秩[0277]pbs：phosphatebuffersaline，磷酸盐缓冲液[0278]fvs510：fixableviabilitystain510，一种鉴定细胞死活的染料[0279]qd：quaquedie，每日一次[0280]gy：戈瑞，吸收剂量单位，一戈瑞表示每公斤物质吸收了一焦耳的辐射能量。[0281]pr：partialresponse，部分缓解[0282]sd：stabledisease，疾病稳定[0283]spd：thesumoftheperpendiculardiameters，肿瘤最大长径与之垂直的最长径之和。当前第1页12当前第1页12
再多了解一些
本文用于企业家、创业者技术爱好者查询，结果仅供参考。
