治疗和抑制癫痫发作发展的方法与流程

本专利申请根据35U.S.C.§119(e)要求对2019年7月5日提交的美国临时专利申请序列号62/870,872的优先权，该申请通过引用的方式整体纳入本文。

技术领域

本公开涉及通过颅外施用梭菌衍生物治疗癫痫发作的方法和抑制局灶性癫痫发作发展为全身性癫痫发作的方法。

背景技术

癫痫发作通常与异常的阵发性脑电活动有关。癫痫发作的临床表现可包括由患者或观测器感知到的意识和运动、感觉、自主性或精神性事件的改变。通常，癫痫发作导致暂时性意识丧失、抽搐、肌张力改变、异常运动和/或神志恍惚。癫痫发作可具有许多原因，例如药物、高热、颅脑损伤、遗传病因学、传染病、代谢紊乱、中风和其他疾病。复发性无诱因癫痫发作定义了被称为癫痫的神经系统综合征。癫痫发作可以通过观察或通过记录脑电活动，如脑电图(EEG)来诊断。

基于患者或观察者感知的症状和/或伴随癫痫发作的脑电活动的模式将癫痫发作分为三类。广义地说，癫痫发作可分为局灶性的、全身性的和未分类的。

局灶性(也称为“部分”)癫痫发作是那些在初始症状学或EEG检查结果表明仅在一个大脑半球的一部分中发作的癫痫发作。值得注意的是，局灶性癫痫发作通常仅在一个半球的少量皮质中出现无症状的异常脑电活动。根据它们非常局限性的发作，局灶性癫痫发作扩散到半球内的相邻皮质区域，此时患者或观测器会感知到它们。

全身性癫痫发作是那些初始症状学或EEG检查结果表明超出两个大脑半球的最小受累的癫痫发作，并且可以细分为惊厥性癫痫发作和非惊厥性癫痫发作。

全身性癫痫发作的另一种亚分类是原发性全身性且从两个半球同时出现的癫痫发作，以及继发性全身性且在一个半球中局灶性出现然后扩散涉及另一个半球的癫痫发作。第三类，未分类的癫痫发作，包括由于数据不完整而难以分类的所有癫痫发作。

癫痫影响世界人口的1％。在患有经历局限性(局灶性或部分性)癫痫发作的癫痫个体中，意识可能会受到干扰，并且可能出现不同程度的记忆缺失，但是癫痫发作不会导致意识丧失。然而，局灶性癫痫发作可以发展为继发性全身性癫痫发作，在这种情况下，个体会丧失意识。临床上，全身性和双侧癫痫发作被认为是更危险的，因为它们有更大可能发生损伤和癫痫发作后并发症。在流行病学上，近一半的所有被诊断患有癫痫的成年人至少经历一次全身性或双侧癫痫发作，约25％的癫痫患者经常经历全身性或双侧癫痫发作。目前对癫痫和其他癫痫发作的治疗包括抗癫痫药(AED)。然而，标准护理药物疗法对于许多患者并不完全有效并且可导致不希望的副作用。

发明概述

一方面，提供了治疗与癫痫症相关的癫痫发作的方法。所述方法包括向患有癫痫症的受试者以治疗癫痫发作的有效量施用梭菌衍生物，所述梭菌衍生物在颅外施用于至少一个给药位点。

在一个实施方案中，提供了治疗癫痫的方法。所述方法包括向患有癫痫的受试者施用治疗有效量的梭菌衍生物，所述梭菌衍生物在颅外施用于至少一个给药位点。

在一个实施方案中，提供了一种治疗先兆癫痫发作(或癫痫先兆)症状的方法。所述方法包括向患有先兆癫痫发作(或癫痫先兆)症状的受试者施用治疗有效量的梭菌衍生物，所述梭菌衍生物在颅外施用于至少一个给药位点。

在一个实施方案中，梭菌衍生物通过注射途径施用，所述注射途径选自肌肉外注射、皮下注射、真皮下注射或皮内注射。

在一个实施方案中，通过注射到头皮来施用梭菌衍生物。

在一个实施方案中，将梭菌衍生物施用于头皮的颈区(cervical region)内的缝线。在一个实施方案中，梭菌衍生物施用于人字缝、顶乳缝、枕骨缝或其组合处或者附近。在一个替代性实施方案中，将梭菌衍生物施用于头皮的颈区内的肌肉。在另一个实施方案中，将梭菌衍生物施用于颈区内的颈神经。在另一个替代性实施方案中，将梭菌衍生物施用于颈区的三叉神经。

在另一个实施方案中，将梭菌衍生物施用于患者颅骨上的至少一条缝线。在一个实施方案中，将梭菌衍生物施用于颈神经。在另一个实施方案中，将梭菌衍生物施用于三叉神经。在另一个实施方案中，将梭菌衍生物施用于患者颅骨上的肌肉。

在另一个实施方案中，所述方法包括将梭菌衍生物施用到一个以上的给药位点。在示例性实施方案中，给药位点的数目在2-8之间。

在一个实施方案中，所述至少一个给药位点大致沿着人字缝。

在另一个实施方案中，所述至少一个给药位点大概在人字缝和矢状缝的连接处。

在另一个实施方案中，所述至少一个给药位点在颅骨的任一缝线附近和/或大致沿着所述缝线，所述缝线选自例如额缝、鳞缝、冠状缝、人字缝、枕乳缝、顶乳缝和矢状缝。

在一个实施方案中，所述至少一个给药位点在由颈神经支配的颅的后头域内。在一个具体的实施方案中，onabotulinumtoxinA通过注射施用于由颈神经支配的颅的后头域。

在一个实施方案中，所述至少一个给药位点是三叉神经或颈神经附近的任何结构或组织，包括例如筋膜、筋膜下、腱膜、神经外膜、或一般的结缔组织、肌肉、神经和缝线。

在其他实施方案中，施用的梭菌衍生物量为了给药至每个给药位点被均匀地分成几部分。在其他实施方案中，在每个给药位点施用梭菌衍生物的一部分量，其中在每个给药位点施用的部分是不相等的。

在其他实施方案中，梭菌衍生物是肉毒杆菌神经毒素。在一个实施方案中，肉毒杆菌神经毒素是A型肉毒杆菌毒素、B型肉毒杆菌毒素、C型肉毒杆菌毒素、D型肉毒杆菌毒素或E型肉毒杆菌毒素。

在一个实施方案中，肉毒杆菌毒素是A型肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，A型肉毒杆菌毒素选自onabotulinumtoxinA、incobotulinumtoxinA、abobutulinumtoxinA、daxibotulinumtoxinA、prabotulinumtoxinA及其组合。在一些实施方案中，施用的A型肉毒杆菌神经毒素的量在约1单位至3000单位之间。在一些实施方案中，施用的A型肉毒杆菌神经毒素的量在2单位至200单位之间。在其他一些实施方案中，施用的A型肉毒杆菌神经毒素的量在200单位至500单位之间。在其他实施方案中，施用的肉毒杆菌神经毒素的量大于500单位。

在一个实施方案中，肉毒杆菌毒素包括肉毒杆菌毒素复合物。在另一个实施方案中，肉毒杆菌毒素包括纯神经毒素。

在一个实施方案中，肉毒杆菌毒素是onabotulinumtoxinA，且以约2-200单位的量施用。在一个实施方案中，施用的量被均匀地分到约2-10个给药位点。

在其他实施方案中，癫痫发作选自局灶性癫痫发作、肌阵挛性癫痫发作和全身性强直-阵挛性癫痫发作。

在另一个实施方案中，癫痫发作与选自癫痫、青少年肌阵挛性癫痫、特发性全身性癫痫和Lennox-Gastaut综合征的癫痫症有关。

在其他实施方案中，癫痫发作是与Lennox-Gastaut综合征相关的全身性强直-阵挛性癫痫发作。

在一个实施方案中，施用梭菌衍生物的步骤是给予口服治疗、皮下、直肠或静脉注射投药法来治疗癫痫发作的辅助疗法。

在另一个实施方案中，施用梭菌衍生物的步骤是对迷走神经、或面神经、或丘脑、或大脑皮质进行电刺激来治疗癫痫发作的辅助疗法。在另一方面，提供了用于抑制局灶性癫痫发作发展为双侧癫痫发作的方法。所述方法包括向患有局灶性癫痫发作的受试者以治疗有效量颅外施用梭菌衍生物，以抑制异常脑电活动向附近脑区(brain area)的传播，从而预防局灶性癫痫发作的扩散和/或泛化。

在另一方面，提供了用于预防局灶性无症状性癫痫发作发展为局灶性症状性癫痫发作的方法。所述方法包括向患有局灶性癫痫发作的受试者以治疗有效量颅外施用梭菌衍生物，以抑制异常脑电活动向附近脑区的传播，从而预防局灶性无症状性癫痫发作发展为局灶性症状性癫痫发作。

在另一方面，提供了治疗与癫痫症相关的癫痫发作的方法，所述方法包括向患有癫痫发作的受试者以治疗癫痫发作的治疗有效量颅外施用梭菌衍生物。

在另一方面，提供了治疗患有癫痫的受试者癫痫发作的方法，所述包括向受试者颅外施用治疗癫痫发作的治疗有效量的梭菌衍生物。

在另一方面，控制局灶性癫痫发作的方法包括向受试者以控制局灶性癫痫发作的有效量至治疗有效量颅外施用梭菌衍生物。

在一个实施方案中，将梭菌衍生物施用于头皮。

在一些实施方案中，根据本公开内容的方法还包括向受试者施用癫痫发作的辅助疗法。在一些实施方案中，所述辅助疗法包括一种或多种抗癫痫药。

在另一方面，提供了治疗发作性头痛的方法，所述方法包括向受试者颅外施用治疗发作性头痛治疗有效量的梭菌衍生物。在一个实施方案中，在癫痫发作前(发作前)施用梭菌衍生物。在另一个实施方案中，在癫痫发作后(发作后)施用梭菌衍生物。

附图简述

提供以下附图以说明本发明方法的实施方案的各方面和特征。

图1A是在一个实施方案中实验动物的俯视示例图，显示了某些颅缝线和递送梭菌衍生物的给药位点；

图1B是皮质解剖构造的俯视示例图，显示了用于引发癫痫发作的印防己毒素给药位置和用于记录不同皮质区中的脑皮层电图的玻璃吸管电极(glass pipette electrodes)的位置；

图2A-2B是在局部施用印防己毒素于枕叶皮质以引发局灶性癫痫发作之前和之后的实验动物枕叶皮质(图2A)和顶叶皮质(图2B)的脑皮层电图描记线(trace)，印防己毒素施用的时间由图2A中的虚线标示；

图3A-3B是实验动物枕叶皮质(图3A)和顶叶皮质(图3B)的脑皮层电图描记线，所述动物在用印防己毒素诱导癫痫发作(在图3A中由虚线所标示的时间给药)之前预先用示例性梭菌衍生物(onabotulinumtoxinA)处理；

图4A-4B是人类颅骨(图4A)和大鼠颅骨(图4B)的示意图，显示了施用梭菌衍生物的颈区中不存在三叉神经；以及

图5A、5B和5C是人类颅骨的示意图，显示了各种缝线。

详述

定义

以下定义适用于本文：

本文使用的“约”或“大约”指在本领域普通技术人员确定的具体值的可接受误差范围内，其将部分取决于如何测量或确定该值(即，测量系统的限度)。例如，根据本领域的实践，“约”可以指在1个或多于1个标准偏差内。在本申请和权利要求中描述了具体值的情况下，除非另有说明，否则术语“约”指在具体值的可接受误差范围内。

“施用(administration)”或“给药(to administer)”指向受试者给予(即施用)药物组合物、或者替代地受试者接受药物组合物的步骤。

“缓解”指与病况或病症相关的癫痫发作的发生减少。因此，缓解包括一些减少、显著减少、接近完全减少和完全减少。

“生物活性”描述了药物对活质的有益或不利影响。当药物是复杂的化学混合物时，这种活性由物质的活性成分发挥，但可被其他成分改变。生物活性可通过体内LD50或ED50测定法或通过体外测定法评估为效力或毒性，例如，如U.S.20100203559和U.S.20100233802中所述的基于细胞的效力测定法。

“肉毒杆菌毒素”指由肉毒杆菌(Clostridium botulinum)产生的神经毒素，以及由非梭菌物种重组制备的肉毒杆菌毒素，其片段、变体或嵌合体。如本文所用的术语“肉毒杆菌毒素”包括血清型A肉毒杆菌毒素(BoNT/A)、血清型B肉毒杆菌毒素(BoNT/B)、血清型C肉毒杆菌毒素(BoNT/C)、血清型D肉毒杆菌毒素(BoNT/D)、血清型E肉毒杆菌毒素(BoNT/E)、血清型F肉毒杆菌毒素(BoNT/F)、血清型G肉毒杆菌毒素(BoNT/G)、血清型H肉毒杆菌毒素(BoNT/H)、血清型X肉毒杆菌毒素(BoNT/X)、血清型En肉毒杆菌毒素(BoNT/En)和嵌合体肉毒杆菌毒素和/或它们的亚型和其亚型的任何其他类型，或在每种情况下的任何前述的任何再工程化(re-engineered)蛋白质、类似物、衍生物、同系物、部分、亚部、变体或变形。如本文所用的“肉毒杆菌毒素”还包括“经修饰的肉毒杆菌毒素”。如本文所用的其他“肉毒杆菌毒素”还包括肉毒杆菌毒素复合物(例如，300、600和900kDa复合物)，以及不与复合(complex)蛋白结合的肉毒杆菌毒素的神经毒性组分(150kDa)。

“梭菌衍生物”指含有本文定义的梭菌毒素的任何部分的分子。如本文所用，术语“梭菌衍生物”包括天然或重组神经毒素，重组修饰毒素(recombinant modified toxins)，其片段、嵌合体和变体，靶向囊泡胞吐调节剂(TEM)或其组合。

“梭菌毒素”指由梭菌毒素菌株产生的任何毒素，其可执行整体细胞机制，由此梭菌毒素使细胞中毒并包括梭菌毒素与低亲和力或高亲和力梭菌毒素受体的结合、毒素/受体复合物的内化、梭菌毒素轻链到细胞质中的易位和梭菌毒素底物的酶促修饰。梭菌毒素的非限制性实例包括肉毒杆菌毒素，如BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C1、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、BoNT/H、BoNT/X、BoNT/En、嵌合体肉毒杆菌毒素、破伤风毒素(TeNT)、Baratii毒素(BaNT)和丁酸菌毒素(Butyricum toxin)(BuNT)。BoNT/C2细胞毒素和BoNT/C3细胞毒素，不是神经毒素，被排除在术语“梭菌毒素”之外。本文公开的梭菌毒素包括但不限于，天然存在的梭菌毒素变体，例如梭菌毒素同种型(isform)和梭菌毒素亚型；非天然存在的梭菌毒素变体，例如保守梭菌毒素变体、非保守梭菌毒素变体、梭菌毒素嵌合体变体及其活性梭菌毒素片段，或其任意组合。本文公开的梭菌毒素还包括梭菌毒素复合物以及不与非毒素相关蛋白(NAP)结合的梭菌毒素的神经毒性组分。如本文所用，术语“梭菌毒素复合物”指包含梭菌毒素的神经毒性组分和非毒素相关蛋白(NAP)的复合物，例如肉毒杆菌毒素复合物、破伤风毒素复合物、Baratii毒素复合物和丁酸菌毒素复合物。梭菌毒素复合物的非限制性实例包括由肉毒杆菌产生的那些，例如900-kDa BoNT/A复合物、500-kDa BoNT/A复合物、300-kDa BoNT/A复合物、500-kDa BoNT/B复合物、500-kDa BoNT/C1复合物、500-kDa BoNT/D复合物、300-kDa BoNT/D复合物、300-kDa BoNT/E复合物和300-kDa BoNT/F复合物。

“梭菌毒素活性成分”指包含对受试者或患者给药时或给药后发挥作用的梭菌毒素的任何部分的分子。如本文所用，术语“梭菌毒素活性成分”包括梭菌毒素复合物，其包含大概150-kDa梭菌毒素和统称为非毒素相关蛋白(NAP)的其他蛋白质、单独的大概150-kDa梭菌毒素或经修饰的梭菌毒素，例如重新靶向的梭菌毒素。

应用于生物活性成分的“有效量”指通常足以在受试者中实现期望的改变的成分的量。例如，当期望的效果是缓解癫痫发作或抑制癫痫发作进展时，成分的有效量是使癫痫发作频率或局灶性癫痫发作发展为全身性癫痫发作的可能性至少显著减少并且不产生显著毒性的量。梭菌衍生物的有效量可以用效力或毒性单位(例如LD50或ED50)或质量单位(例如ng或mg)测量。

“颅外施用”指向颅以外的部位给药。在一些实施方案中，颅外施用是指对患者颅骨上的任何缝线、或缝线的组合给药。

“局部施用”指在动物体上或动物体内的位点处或其附近给予药剂，在该位点处需要药物的生物效应，如通过例如肌内或皮内或真皮下注射或外部给药(topical administration)。局部给药不包括全身性给药途径，例如静脉给药或口服给药。外部给药是将药剂施用于患者皮肤的一类局部给药。

“经修饰的肉毒杆菌毒素”指与天然肉毒杆菌毒素相比，其氨基酸中的至少一个已被缺失、修饰或置换的肉毒杆菌毒素。另外，经修饰的肉毒杆菌毒素可以是重组制备的神经毒素、或重组制备的神经毒素的衍生物或片段。经修饰的肉毒杆菌毒素保留天然肉毒杆菌毒素的至少一种生物活性，如结合肉毒杆菌毒素受体的能力、或抑制神经递质从神经元释放的能力。经修饰的肉毒杆菌毒素的一个实例是具有来自一种肉毒杆菌毒素血清型(如血清型A)的轻链和来自不同肉毒杆菌毒素血清型(如血清型B)的重链的肉毒杆菌毒素。经修饰的肉毒杆菌毒素的另一个实例是与神经递质(如P物质)偶联的肉毒杆菌毒素。

“突变”指天然存在的蛋白质或核酸序列的结构修饰。例如，在核酸突变的情况下，突变可以是DNA序列中一个或多个核苷酸的缺失、增加或置换。在蛋白质序列突变的情况下，突变可以是蛋白质序列中一个或多个氨基酸的缺失、增加或置换。例如，组成蛋白质序列的一个具体氨基酸可以置换另一个氨基酸，例如，选自以下的氨基酸：丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、酪氨酸或任何其他天然或非天然存在的氨基酸或化学修饰的氨基酸。蛋白质序列的突变可以是当DNA序列转录以及翻译所得mRNA时DNA序列突变的结果，产生突变的蛋白质序列。蛋白质序列的突变也可以通过将含有所需突变的肽序列与所需蛋白质序列融合而产生。

“患者”指接受医学或兽医护理的人类或非人类受试者。因此，如本文公开的组合物可用于治疗任何动物，例如哺乳动物等。

“在外周施用”或“外周施用”指真皮下、皮内、透皮、皮下给药或肌内给药。

“药物组合物”指包含有效药物成分，例如梭菌毒素(如肉毒杆菌毒素)和至少一种附加成分(例如稳定剂或赋形剂等)的组合物。因此，药物组合物是适用于向受试者(例如人类患者)诊断性或治疗性给药的制剂。药物组合物可以是，例如，呈冻干或真空干燥状态、冻干或真空干燥的药物组合物重构后形成的溶液、或为不需要重构的溶液或固体。

“TEM”，靶向胞吐作用调节剂(Targeted Exocytosis Modulators)的缩写，是将轻链的催化活性引导至特定类型的神经元细胞或未受肉毒杆菌毒素影响的靶细胞的重新靶向内肽酶，其扩大了在几种人类疾病中抑制胞吐作用的有益临床效果。

“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”指暂时或永久地缓解(或消除)至少一种症状。更具体地，如本文所用的癫痫发作、癫痫症或其症状的“治疗”包括以下中的一种或多种：减少(或预防)癫痫发作、其全部病症或症状的频率或减少癫痫发作、其全部病症或症状的持续时间，改善癫痫发作、其全部病症或症状的严重性，治疗癫痫发作、其全部病症或症状，治愈癫痫发作、其全部病症或症状，实现癫痫发作或其症状的次数或严重度的减少，改善经历癫痫发作的患者的生活质量。

“变体”指梭菌神经毒素，例如野生型肉毒杆菌毒素血清型A、B、C、D、E、F、G、H、X、或嵌合体肉毒杆菌毒素，其相对于野生型肉毒杆菌毒素而言已经通过至少一个氨基酸的置换、修饰、增加或缺失而被修饰，其被靶细胞识别，被靶细胞内化并在靶细胞中催化切割SNARE(SNAP(可溶性NSF附着蛋白)受体)蛋白。变体神经毒素组分的实例可包括具有一个或多个氨基酸置换、修饰、缺失和/或增加的肉毒杆菌毒素的变体轻链。该变体轻链可具有相同或更好的防止胞吐作用的能力，例如释放神经递质囊泡。另外，与母体化学实体相比，变体的生物效应可能降低。例如，去除了氨基酸序列的A型肉毒杆菌毒素的变体轻链可能比亲本(或天然的)A型肉杆菌毒毒素轻链具有更短的生物持久性。

如本文所用的术语“改善癫痫症”或“改善癫痫发作”指降低癫痫发作和/或相关症状的频率，和/或降低癫痫发作(癫痫发作状态的稳定，使其不从例如局灶性发展为全身性)和/或相关症状的严重度，和/或在受试者中维持基本上无癫痫发作的状态，和/或改善与疾病或病症相关的不期望的癫痫发作，或任何上述的组合。

“癫痫发作”指任何非慢性或慢性癫痫发作，包括由癫痫、癫痫症、听原性癫痫症、癫痫综合征和相关病况引起的癫痫发作。由发热、钠或葡萄糖血液浓度异常、药物滥用、某些药物、高血压、苯丙酮尿症和尿毒症引起的癫痫发作、以及诸如由脑肿瘤和/或脑损伤引起的那些急性癫痫症，其可能转而变成慢性癫痫症。术语“癫痫症”或“癫痫”指以复发性癫痫发作为特征的慢性神经综合征。

术语“癫痫”指那些涉及慢性复发性癫痫发作的病况，其可被视为癫痫症。术语“癫痫发作”应理解为包括任何癫痫发作状态，无论是癫痫症的一部分，还是作为另一种综合征或相关病况的结果。癫痫发作类型的非限制性实例是局灶性癫痫发作(也称为简单部分性癫痫发作、复杂部分性癫痫发作、部分性癫痫发作伴继发全身性癫痫发作、部分性基本癫痫发作、复杂部分性癫痫发作或精神运动性癫痫发作)、全身性癫痫发作(惊厥性和非惊厥性，例如失神性癫痫发作、非典型失神性癫痫发作、肌阵挛性癫痫发作、阵挛性癫痫发作、强直性癫痫发作、强直-阵挛性癫痫发作、无张力性癫痫发作(起立不能(astatic))、继发性全身性癫痫发作和其他慢性未分类的癫痫发作。

如本文所用，术语“部分性癫痫发作”指影响脑的有限区域的癫痫发作。相反，“全身性癫痫发作”是影响整个脑的癫痫发作。部分性癫痫发作的症状包括但不限于，异常肌收缩、神志恍惚、强迫性眼运动、异常感觉(例如麻木和麻刺感)、幻觉、腹痛、恶心、异常出汗、快速心率、视力改变、情绪改变和意识丧失。部分性癫痫发作基于观察到的症状、脑电图(EEG)数据分析或其他因素通常分为“简单”或“复杂”。

如本文所用，术语“复杂部分性癫痫发作”指引起部分或全部意识丧失的部分性癫痫发作。复杂部分性癫痫发作可以发生在脑的任何区域。复杂部分性癫痫发作经常发生在脑的两个颞叶中的一个。典型的复杂部分性癫痫发作持续一到两分钟，并且之前会有预示即将癫痫发作的“先兆”(即一种示警感觉，如恶心)。

如本文所用，术语“先兆”、“先兆癫痫发作症状”或“癫痫先兆症状”指由患者感知的任何示警感觉，该感觉预示即将发生的癫痫发作或癫痫，其可能包括，例如，恶心，视觉改变，听觉改变，嗅觉改变，对奇怪光线的感知，眼睛流泪，令人不快的气味(幻觉)或味道(幻味)，联觉，头部先兆，混乱的思维或体验，突然的焦虑感、恐惧感或眩晕感，麻木或麻刺感以及幻觉等。

如本文所用，术语“简单部分性癫痫发作”指不引起意识丧失的部分性癫痫发作。典型的简单部分性癫痫发作持续60秒或更短。

如本文所用，术语“边缘性癫痫发作”指起源于脑边缘结构之一的癫痫发作。边缘系统有助于调节身体的无意识运动和激素活动。边缘结构包括但不限于丘脑、下丘脑、扣带回、杏仁核、海马和基底神经节。

如本文所用，术语“化学诱导的癫痫发作”指由受试者因暴露于化学物质引起的受试者癫痫发作。

如本文所用，术语“治疗有效量”指足以实现期望治疗效果的量。

如本文所用，术语“在...附近”指在规定参考位置的约1.5cm处或约1.5cm以内，更优选在约1.0cm处或约1.0cm以内并且最优选在约0.5cm处或约0.5cm以内，例如，当根据本公开内容施用肉毒杆菌毒素时，在患者的至少一条缝线附近内施用，即在距离参考缝线约1.5cm处或约1.5cm以内，更优选在约1.0cm处或约1.0cm以内，或最优选在0.5cm处或0.5cm以内。

通过保留可根据范围或以任何类似方式要求保护的限制(proviso out)或排除任何此类群组的任何单独的一部分(包括群组内的任何子范围或子范围的组合)的权利，可出于任何原因要求保护小于本公开内容的全部量度。此外，通过保留限制或排除任何单独的取代基、其类似物、其化合物、其配体、其结构或其基团、或所要求保护的群组的任何一部分的权利，可出于任何原因要求保护小于本公开内容的全部量度。

在整个本公开内容中，引用了各种专利、专利申请和出版物。这些专利、专利申请和出版物的全部公开内容都通过引用的方式整体纳入本公开内容，以便更全面地描述截至本公开的日期本领域技术人员已知的现有技术。如果所引用的专利、专利申请和出版物与本公开内容之间有任何不一致的情况，则以本公开内容为准。

为方便起见，在说明书、实施例和权利要求中使用的某些术语集中在此。除非另外定义，否则本公开内容中使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

使用方法

在一个方面，提供了用于治疗与癫痫症相关的癫痫发作和用于抑制局灶性癫痫发作发展为全身性癫痫发作的方法，用于治疗先兆癫痫发作(或癫痫先兆)症状的方法，或用于治疗发作性头痛的方法。所述方法包括向受试者颅外施用治疗有效量的梭菌衍生物或梭菌毒素。进行了一项研究，该研究表明在动物中颅外施用梭菌衍生物治疗的癫痫发作通过抑制局灶性癫痫发作发展为全身性癫痫发作，并在实施例1中进行了描述。在该研究中，第一组动物在化学诱导癫痫发作之前用梭菌衍生物处理。在诱导化学性癫痫发作之前，第二组动物用盐水处理，第三组动物不接受预处理(prior treatment)。

关于在化学诱导癫痫发作之前用梭菌衍生物处理的动物，图1A是动物颅骨的俯视图的示意图，其带有剖面图(cut away)以显示某些颅缝线的位置。矢状缝10是两个顶骨12、14之间的结缔组织接缝。人字缝16是颅骨后部的结缔组织接缝，其连接顶骨和枕骨18。冠状缝20是分离额骨22和顶骨12和14的结缔组织接缝。在实施例1描述的研究中，在人字缝上或沿着人字缝施用梭菌衍生物。将梭菌衍生物剂量等分为几部分，在本研究中分为五部分，并且一部分通过注射施用至沿着人字缝的5个给药位点。5个给药位点在图1A中用点标识，如为代表的点24。在癫痫发作前用梭菌衍生物处理的试验组中的动物在用印防己毒素诱导化学性癫痫发作前接受梭菌衍生物剂量7-12天。除每只动物在给药位点接受盐水而不是梭菌衍生物外，对盐水试验组中的动物进行类似的处理。

为了诱导癫痫发作，在图1B中由数字标识符30所标识的位置处局部施用印防己毒素。将用于记录局部场电位和脑皮层电图的电极32、34置于所有测试动物的顶叶皮质和枕叶皮质中。脑皮层电图描记线示于图2-3中。在图2A中，显示了盐水处理的动物组的枕叶皮质作为时间(以分钟计)函数的描记线。来自盐水处理的动物的顶叶皮质的描记线显示在图2B中。在时间零点之后立即施用印防己毒素，施用时间由图2A中的虚线指示。在将印防己毒素给药到枕叶皮质后几分钟，在枕叶皮质中诱导了局灶性癫痫发作(图2A)，其然后发展到顶叶皮质(图2B)。图2A-2B中的描记线显示，在未经处理的动物中，用印防己毒素诱导癫痫发作引发局灶性癫痫发作，该局灶性癫痫发作会发展为全身性癫痫发作。

图3A显示了在用印防己毒素诱导癫痫发作之前用梭菌毒素处理的组中的动物的枕叶皮质的描记线。在时间零点之后立即施用印防己毒素，施用时间由图3A中的虚线指示。在将印防己毒素给药到枕叶皮质后几分钟，在枕叶皮质中诱导了局灶性癫痫发作(图3A)。然而，如图3B所示，局灶性癫痫发作没有发展为全身性癫痫发作。这些观察结果表明施用梭菌衍生物抑制或基本上预防局灶性癫痫发作发展为全身性癫痫发作。

在上述研究和实施例1中，沿人字缝颅外施用梭菌衍生物。图4A-4B是人类颅骨(图4A)和大鼠颅骨(图4B)的图，显示施用梭菌衍生物的颈区中不存在三叉神经。因此，在一个实施方案中，施用梭菌衍生物和/或每个给药位点不包括三叉神经。通过注射至不包含任何肌肉的头皮进行颅外施用。头皮是分层结构，最外层是皮肤(具有皮脂腺和毛囊)，接着是结缔组织、颅顶腱膜、松弛细隙结缔组织和颅骨膜。在一个实施方案中，梭菌衍生物通过注射至头皮的所有层中来施用，并且在其他实施方案中，其被施用到头皮的一层、两层、三层、四层和/或五层中。

在一个实施方案中，梭菌衍生物施用于包括头皮和/或颈区的多个给药位点。例如，梭菌衍生物可以施用于枕肌中的多个给药位点和颈部脊椎旁肌和/或头皮中的多个给药位点。在更具体的实例中，梭菌衍生物施用于枕肌中的约1-10、1-8、1-6、2-6、2-5或2-4个位点，和/或颈部脊椎旁肌中的2-6、2-4个位点，和/或头皮中的1-8、1-6、2-6、3-5个位点，其可以包括在缝或缝连接处或沿着缝或缝连接处。给药可以通过注射，例如，肌内注射、皮内注射和/或皮下注射。在一些实施方案中，理想地，给药将梭菌衍生物递送至颈神经。在一个实施方案中，至少一个给药位点是到由颈神经支配的颅骨的后头域。

在一个实施方案中，至少一个给药位点在颅骨的任一缝线附近和/或大致沿着所述缝线，如图5A、5B和5C举例说明。图5A是人类颅骨11的前透视图，图5B是人类颅骨11的后视图。图5C还显示了一些不太常见的已经在人类颅骨上被确定的缝线。构成颅骨的骨板包括额骨13、顶骨15、颞骨17、蝶骨19和枕骨21。这些骨板相接的边缘通过颅缝结合在一起。例如，冠状缝23(在图5C中也称为冠的(coronalis))在额骨13和顶骨15的连接处。鳞缝25(在图5C中也称为鳞部(squamosa))在顶骨15和颞骨17之间的连接处。人字缝26(在图5C中也称为人字形(lambdoidea))在顶骨15和枕骨21之间的连接处。矢状缝28(图5C中未示出)在两个顶骨之间的连接处，以及额鼻缝31在额骨13和鼻骨33之间的连接处。

因此，考虑了一种用于治疗癫痫发作和/或用于抑制或预防癫痫发作的发展和/或抑制或预防从癫痫发作病灶继发性扩散的方法。所述方法包括向有需要的受试者施用梭菌衍生物。在一个实施方案中，梭菌衍生物在颅外施用。在一些实施方案中，将它颅外施用至头皮。在一些实施方案中，将它施用于颅骨中的至少一条缝线。在其他实施方案中，将它施用于颅骨中的三叉神经。在其他实施方案中，将它施用于颅骨中的肌肉。

在一些实施方案中，将它施用于颈区中的至少一条缝线。在其他实施方案中，将它施用于颈区中的三叉神经。在其他实施方案中，将它施用于颈区中的肌肉。

在其他实施方案中，梭菌衍生物通过肌肉外注射、皮下注射、真皮下注射或皮内注射施用。梭菌衍生物可以施用于一个位点或多于一个位点或多个位点。在一个实施方案中，梭菌衍生物施用于约2-15个位点、约2-12个位点、约2-10个位点、约2-8个位点、约2-6个位点、约2-5个位点、约3-6个位点、约3-5个位点，或施用于3、4、5、6、7、8、9或10个位点。在一个实施方案中，所述位点是注射位点。

如上所述，梭菌衍生物在颅外施用。考虑施用于颅缝上或临近其的一个或多个部位，如人字缝、矢状缝、冠状缝、鳞缝。梭菌衍生物可以施用于缝和/或缝的连接处，如人字缝和矢状缝的连接处，或冠状缝和矢状缝的连接处。在一个实施方案中，梭菌衍生物施用于颅骨的后头域。在所述后头域中，可以给药至由颈神经支配的区域。

在一些实施方案中，梭菌衍生物给药偏向于癫痫发作的原发区域(primary region)。在另一个实施方案中，梭菌衍生物施用在癫痫发作的原发区域的对侧。

在一些实施方案中，梭菌衍生物是A型肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，梭菌衍生物选自onabotulinumtoxinA、abobotulinumtoxinA、incobotulinumtoxinA、daxibotulinumtoxinA、prabotulinumtoxinA及其组合。在一个实施方案中，A型肉毒杆菌毒素可以以约5-50个单位分至2-6个位点施用于矢状缝；以约10-60单位分至2-8个位点施用于冠状缝；以约10-100单位分至2-20个位点施用于颞肌和/或鳞缝；以约10-60单位分为2-10个位点施用于枕骨和/或人字缝；以及以约1-20个单位分至1个位点或2-4个位点施用于颈部脊椎旁的至少一处，以约1-30个单位分至2-6个位点施用于皱眉肌，以及以约1-10个单位分至1-4个位点施用于降眉间肌。在一个实施方案中，治疗范例进一步包括将A型肉毒杆菌毒素以约5个单位的剂量在1个位点施用于人字-矢状连接处。

其他实例包括将A型肉毒杆菌毒素以约15单位分至3个位点施用于矢状缝；以约50单位分至5个位点施用于冠状缝；以约30单位分至6个位点施用于鳞缝；以约30单位分至6个位点施用于人字缝；和/或以约1单位分至1个位点施用于人字-矢状连接处。

在一个实施方案中，待治疗的受试者经历的癫痫发作与病症或病况相关。非限制性实例包括癫痫、青少年肌阵挛性癫痫、特发性全身性癫痫和Lennox-Gastaut综合征。在另一个实施方案中，待治疗的受试者经历的癫痫发作与癫痫综合征相关，包括癫痫或以癫痫发作为特征的其他病症。癫痫综合征和与癫痫发作相关的其他病症的非限制性实例包括良性家族性新生儿癫痫发作(benign familial neonatal seizures)、早期肌阵挛性脑病(early myoclonic encephalopathy)、大田原综合征(Ohtahara syndrome)、婴儿游走性部分性癫痫(migrating partial seizures of infancy)、韦斯特综合征、婴儿期良性肌阵挛性癫痫(benign myoclonic epilepsy in infancy)、良性家族性婴儿癫痫发作(benign familial infantile seizures)、良性婴儿癫痫发作(非家族性)、德拉韦综合征、半惊厥-偏瘫综合征、伴有中央颞区棘波的儿童期良性癫痫(benign childhood epilepsy with centrotemporal spikes)、早发型儿童良性枕叶癫痫(Panayiotopoulos型)、晚发型儿童良性枕叶癫痫(Gastaut型)、肌阵挛失神癫痫、癫痫伴肌阵挛-起立不能癫痫发作(epilepsy with myoclonic-astatic seizures)、Lennox-Gastaut综合征、兰道-克勒夫纳综合征(LKS)、慢波睡眠中持续棘慢复合波癫痫(除LKS外)、儿童失神癫痫、进行性肌阵挛癫痫(progressive myoclonus epilepsies)、特发性全身性癫痫伴可变表型、青少年失神癫痫、青少年肌阵挛性癫痫、仅有全身性强直-阵挛发作性癫痫(epilepsy with generalized tonic-clonic seizures only)、反射性癫痫、特发性光敏性枕叶癫痫(idiopathic photosensitive occipital lobe epilepsy)、惊吓性癫痫(startle epilepsy)、常染色体显性遗传夜间发作性额叶癫痫、家族性颞叶癫痫、全身性癫痫伴热性惊厥附加症、家族性局灶性癫痫伴可变灶(familial focal epilepsy with variable foci)、症状性局灶性癫痫(symptomatic focal epilepsies)、边缘叶癫痫(limbic epilepsies)、伴海马硬化的颞叶内侧癫痫(mesial temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis)、根据特定病因确定的颞叶内侧癫痫(Mesial temporal lobe epilepsy defined by specific etiologies)。

本文方法的用途也适用于在经历与癫痫无关的癫痫发作的患者中治疗癫痫发作和/或抑制癫痫发作的发展。不需要癫痫诊断的癫痫发作的病况包括例如良性新生儿癫痫发作(benign neonatal seizures)、热性癫痫发作、反射性癫痫发作(reflex seizures)、酒精戒断性癫痫发作(alcohol-withdrawal seizures)、药物或其他化学物质诱导的癫痫发作、外伤后即刻或早期性癫痫发作(immediate and early post-traumatic seizures)、单次发作或单次簇性癫痫发作(single seizures or isolated clusters of seizures)、极少的重复性癫痫发作(rarely repeated seizures)(寡癫痫(oligoepilepsy))。在一个实施方案中，待治疗的癫痫发作是部分性癫痫发作(partial onset seizure)、肌阵挛癫痫发作或原发性全身性强直-阵挛性癫痫发作。在另一个实施方案中，癫痫发作是与Lennox-Gastaut综合征相关的全身性强直-阵挛性癫痫发作。

本文描述的方法可以是本领域熟知的给予以停止或预防癫痫发作的口服、皮下、直肠或静脉内投药法的辅助疗法。

梭菌衍生物

在一个实施方案中，梭菌衍生物是肉毒杆菌神经毒素(BoNT)，例如，BoNT/A、BoNT/B等。这些毒素通过阻断神经分泌物质如神经递质的释放而作用于神经系统。BoNT的作用是通过其与细胞表面的受体分子结合而启动的，然后毒素—受体复合物经历胞吞作用。一旦进入细胞，BoNT就切割负责神经递质对接的胞吐特异性蛋白，并从细胞中释放出来，称为SNARE蛋白(可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体)。由此产生的瞬时化学去神经术(transient chemodenervation)已经在医学上用于阻断神经肌肉接头处的运动神经传递，从而导致多种治疗应用。

在一些实施方案中，梭菌衍生物包括天然的重组梭菌毒素、重组的经修饰的毒素、其片段、TEM或其组合。在一些实施方案中，梭菌衍生物是肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，肉毒杆菌毒素可以是A型、B型、C1型、D型、E型、F型、或G型、H型、X型肉毒杆菌毒素，嵌合体肉毒杆菌毒素或其任意组合。肉毒杆菌神经毒素可以是重组制备的肉毒杆菌神经毒素，例如由大肠杆菌产生的肉毒杆菌毒素。在替代性实施方案中，梭菌衍生物是TEM。

在一些实施方案中，肉毒杆菌神经毒素可以是经修饰的神经毒素，即与天然毒素相比其至少一个氨基酸缺失、修饰或置换的肉毒杆菌神经毒素，或所述经修饰的肉毒杆菌神经毒素可以是重组产生的肉毒杆菌神经毒素或其衍生物或其片段。在某些实施方案中，经修饰的毒素对目的神经元或非神经元细胞具有改变的细胞靶向能力。这种改变的能力通过用对存在于非肉毒杆菌毒素靶细胞中的非肉毒杆菌毒素受体显示出选择性结合活性的靶向结构域替换肉毒杆菌毒素天然存在的靶向结构域来实现。这种对靶向结构域的修饰导致经修饰的毒素能够选择性地结合存在于非肉毒杆菌毒素靶细胞(重新靶向的)上的非肉毒杆菌毒素受体(靶受体)。对非肉毒杆菌毒素靶细胞具有靶向活性的经修饰的肉毒杆菌毒素可与存在于非肉毒杆菌毒素靶细胞上的受体结合，转移到细胞质中，并对靶细胞的SNARE复合物发挥其蛋白水解作用。本质上，通过选择合适的靶向结构域，将包含酶结构域的肉毒杆菌毒素轻链在细胞内递送至任何所需细胞。

根据本发明的方法使用的梭菌衍生物如肉毒杆菌毒素可以以冻干、真空干燥形式储存在真空压力下的容器中或作为稳定液体储存。在冻干之前，可将肉毒杆菌毒素与药学上可接受的赋形剂、稳定剂和/或载体(如白蛋白等)组合。在含有白蛋白的实施方案中，白蛋白可以是例如人血清白蛋白等。冻干材料可以用合适的液体例如盐水、水等重构，以形成待施用于患者的含有肉毒杆菌毒素的溶液或组合物。

在一些实施方案中，梭菌衍生物在包含封装梭菌衍生物的聚合物基质的控释系统中提供，其中梭菌衍生物的部分量以受控方式在延长的时间段内从聚合物基质中释放。控释神经毒素系统已经公开于例如美国专利号6,585,993；6,585,993；6,306,423和6,312,708中，其中的每一个均通过引用的方式整体纳入本文。

在替代性实施方案中，梭菌衍生物以适合局部给药的软膏、凝胶、乳膏或乳剂提供。

根据本发明的方法施用的梭菌衍生物(例如肉毒杆菌毒素)的治疗有效量可以根据毒素的效力和所治疗的疼痛的特定特征而变化，包括其严重程度和其他各种患者变量，该变量包括身材、体重、年龄和对治疗的反应性。毒素的效力表示为小鼠LD50值的倍数，毒素的一个单位(U)被定义为杀死一组18至20只雌性瑞士-韦伯斯特小鼠(Swiss-Webster mice)(每只重约20克)中的50％的毒素的对应量。梭菌衍生物的效力也可以用质量单位表示。以质量单位表示的有效量可以基于预期效果来确定。例如，有效量可以基于缓解癫痫发作或抑制癫痫发作从局灶性癫痫发作发展到全身性癫痫发作，并且不产生显著毒性所需的梭菌衍生物的量来确定。

肉毒杆菌毒素的治疗有效量可根据特定肉毒杆菌毒素的效力而变化，因为市售的肉毒杆菌毒素制剂不具有等同的效力单位。据报道，1个单位的(onabotulinumtoxinA)(一种可从Allergan公司获得的A型肉毒杆菌毒素)的效力单位大概等于3至5个单位的(abobotulinumtoxinA)(也是可从Ipsen Pharmaceuticals获得的A型肉毒杆菌毒素)。(在美国以外被称为)，一种可从Elan(目前为USWorldmeds)获得的B型肉毒杆菌毒素，据报道，其效力单位相对于低得多。在一些实施方案中，肉毒杆菌神经毒素可以是不含复合蛋白的纯毒素，如(incobulinumtoxinA)。因此，施用的毒素量和其施用频率将由负责治疗的医生决定，并且将与特定毒素制剂产生的安全性问题和效果相称。在实施方案中，梭菌衍生物选自onabotulinumtoxinA、incobulinumtoxinA、abotulinumtoxinA、daxibotulinumtoxinA、prabotulinumtoxinA和rimabotulinumtoxinB。

在需要一个以上给药位点的情况下，待施用的梭菌衍生物的剂量可以被均匀地分成几部分用于给药至每个给药位点。也考虑将待施用的剂量分成不相等的几部分用于给药至每个给药位点。

在一个实施方案中，梭菌衍生物的治疗效果持续约1个月至5年、或约1个月至1年、或约1个月至6个月、或约1个月至5个月、约1个月至4个月、约1个月至3个月、约1个月至2个月。在一些实施方案中，可以根据需要连续或间歇地提供治疗。

在一个实施方案中，梭菌衍生物存在于组合物中，所述组合物为稳定的液体或固体药物组合物。示例性组合物包含梭菌衍生物、二糖、表面活性剂和抗氧化剂。所述组合物可包含药理学上可接受的赋形剂。如本文所用，“药理学上可接受的赋形剂”与“药理学赋形剂”或“赋形剂”同义，并且是指当施用于哺乳动物时基本上没有长期或永久有害作用的任何赋形剂，并且包括如稳定剂、填充剂、冷冻保护剂、冻干保护剂(lyo-protectant)、添加剂、赋形剂、载体、稀释剂或助剂等化合物。赋形剂通常与活性成分混合或允许稀释或包裹活性成分，并且可以是固体、半固体或液体试剂。还设想包含梭菌衍生物的药物组合物可包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，所述赋形剂有助于将活性成分加工成药学上可接受的组合物。在任何药理学上可接受的赋形剂不与梭菌衍生物不相容的限度内，就考虑将其用于药学上可接受的组合物中。药理学上可接受的赋形剂的非限制性实例可见于例如《Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems》(Howard C.Ansel等人编，Lippincott Williams&Wilkins出版社，第7版，1999年)；《Remington:The Science and Practice of Pharmacy》(Alfonso R.Gennaro编，Lippincott,Williams&Wilkins出版社，2000年第20版)；Goodman&Gilman的《The Pharmacological Basis of Therapeutics》(Joel G.Hardman等人编，McGraw-Hill Professional出版社，2001年第10版)；以及《Handbook of Pharmaceutical Excipients》(Raymond C.Rowe等人，APhA出版社，2003年第4版)中发现，每个的全部内容通过引用的方式纳入本文。

药物组合物的组成成分可包含在单一组合物(即，除任何所需的重构流体(reconstitution fluid)外，所有组成成分都存在于药物组合物的初始混合时)中或作为双组分系统，例如用重构媒介物重构的真空干燥组合物，所述重构媒介物可例如含有药物组合物的初始混合中不存在的成分。双组分系统可提供几种益处，包括允许掺入与双组分系统的第一组合物不充分相容用于长期货架储存的成分。例如，重构媒介物可以包括防腐剂，其在使用期间(例如一周的冷藏贮存)提供足够的保护以防止微生物生长，但在两年的冷冻贮存期间不存在，在此期间它可能分解毒素。可能无法与肉毒杆菌毒素或其他成分长期相容的其他成分可以以这种方式掺入；即在使用的近似时间掺入第二媒介物中(例如重构媒介物中)。药物组合物还可以包含防腐剂，如苯甲醇、苯甲酸、苯酚、对羟基苯甲酸酯类和山梨酸。药物组合物可以包含，例如，赋形剂，如表面活性剂；分散剂；惰性稀释剂；造粒和崩解剂；粘合剂；润滑剂；防腐剂；生理学上可降解的组合物，如明胶；水性赋形剂和溶剂；油性赋形剂和溶剂；助悬剂；分散剂或润湿剂；乳化剂；缓和剂；缓冲剂；盐；增稠剂；填料；抗氧化剂；稳定剂；以及药学上可接受的聚合材料或疏水材料和本领域已知的并描述于例如Genaro编著,1985，Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.中的其他活性成分，通过引用的方式将其纳入本文。

在实施方案中，肉毒杆菌毒素可以选自A、B、C、D、E、F、G、H、X型肉毒杆菌毒素和嵌合体毒素。在一些实施方案中，肉毒杆菌毒素是A型肉毒杆菌毒素。肉毒杆菌毒素可以根据治疗范例施用，以递送至患者的总量为约1单位至约3000单位、或约2单位至约2000单位、或约5单位至约1000单位、或约10单位至约500单位、或约15单位至约250单位、或约20单位至约150单位、或25单位至约100单位、或约30单位至约75单位、或约35单位至约50单位。在一些实施方案中，可以以约0.001ng至约1000ng，优选约0.001ng至约500ng，优选约0.01ng至约250ng，优选约0.1ng至约150ng，优选约1ng至约100ng，优选约1ng至约10ng的剂量施用梭菌衍生物。例如，可以以约1ng、2ng、3ng、4ng、5ng、6ng、7ng、8ng、9ng或10ng的剂量施用onabotulinumtoxinA。在一些实施方案中，症状的缓解可以持续约1个月至约5年。

在一个实施方案中，梭菌衍生物以处于无菌、真空干燥状态用于重构的组合物形式施用，该组合物包含约100单位A型肉毒杆菌神经毒素复合物、0.5mg人血清白蛋白和0.9mg氯化钠。在其他实施方案中，梭菌衍生物以不含动物蛋白的组合物形式施用。在一些实施方案中，梭菌衍生物以包含表面活性剂和糖的不含动物蛋白的组合物形式施用。在一些实施方案中，梭菌衍生物以包含A型肉毒杆菌毒素、泊洛沙姆和海藻糖或蔗糖的不含动物蛋白的组合物形式施用。在一个实施方案中，梭菌衍生物以处于无菌、真空干燥状态用于重构的组合物形式施用，该组合物包含A型肉毒杆菌神经毒素复合物、8％海藻糖、4％泊洛沙姆188和0.2％甲硫氨酸。

梭菌衍生物如A型肉毒杆菌毒素的施用步骤可以包括利用针头穿过头皮的一层或多层，并在患者的颅缝线附近且沿着患者的颅缝线插入，然后沿着缝线逐渐抽出针头同时沿着缝线递送毒素。在一些实施方案中，利用一个以上的注射位点沿缝线施用肉毒杆菌毒素，例如A或B型肉毒杆菌毒素。施用可以基本上沿着缝线的长度进行，例如在参照的缝线处或距参照的缝线最高达约1.5cm处，更优选在参照的缝线处或距参照的缝线最高达约1.0cm处，最优选在参照的缝线处或距参照的缝线最高达约0.5cm处，并用作根据本公开内容的肉毒杆菌毒素给药的指南。在一个实施方案中，提供了装有针头并填充有包含梭菌毒素的组合物的注射器，并且将针头沿皮肤表面下的缝线插入以施用毒素。

实施例

以下非限制性实施例为本领域普通技术人员提供了在本方法的实施方案范围内的具体优选方法，并不旨在限制其范围。

实施例1

用梭菌毒素治疗抑制癫痫发作发展

将试验动物(大鼠)随机分成三组进行治疗。第一组动物未接受治疗。第二组用梭菌毒素onabotulinumtoxinA进行治疗，其进入由枕大神经和枕小神经支配的头皮区域。在诱导癫痫发作前7-12天，将5单位剂量的onabotulinumtoxinA施用于5个给药位点，在每个位点给予1单位。第三组动物在注射onabotulinumtoxinA的相同区域接受盐水注射，也是在诱导癫痫发作前7-12天。

使用能够记录从0至3000Hz的局部场电位和脑皮层电图的玻璃吸管电极来识别由局部施用印防己毒素—一种选择性GABA阻断剂诱导的癫痫样发作之前和期间的皮质活动。电极的放置如图1B所示。

图2A-2B和3A-3B中显示了第二和第三组动物(分别为梭菌毒素处理的和盐水处理的)的枕叶皮质和顶叶皮质的脑皮层电图描记线，是在将印防己毒素局部应用于枕叶皮质以引发局灶性癫痫发作之前和之后。该研究提供了通过颅外注射onabotulinumtoxinA到头皮中受枕大神经和枕小神经(两者分别源自C2和C3背根神经节)支配的区域来预防癫痫发作从局灶性到全身性的发展和进展的证据。

实施例2

用梭菌毒素治疗外伤后癫痫

一名42岁的女性是在迎面机动车辆碰撞中不受约束的乘客。她头部受伤，导致颅骨骨折、双额硬脑膜下血肿、左额皮质挫伤(left frontal cortical contusion)和左额前脑膜内出血(let frontal intraprenchymal hemorrhage)。在三周的重症监护之后，她被转到内科病房，并从那里转到康复机构。虽然她没有癫痫症，但她处于可在下一只耳朵发生创伤后癫痫发作的风险中(可能性为～20％)。

患者不想服用任何口服药物。她在事故发生后没有任何癫痫发作。然而，在事故发生后9个月，她出现了表达性失语发作，其在60秒内发展为她的右臂和右腿的强直/阵挛性(TC)发作，然后在30秒后泛化为双侧TC癫痫发作并伴有意识丧失。在一次没有自发消退的这种癫痫发作之后，她被接收入急诊科进行静脉内(IV)抗癫痫药物给药。恢复后，她在表达语言方面有困难。在连续监测中，EEG显示在与表达性失语相关的左额叶上的阵发性局灶性棘波减慢。她开始服用口服药物，药物必须定期更换，因为它们要么不耐受，要么不能提供足够的癫痫发作缓解。她的最佳癫痫发作控制发生在拉莫三嗪上，尽管剂量是优化的，但她仍有表达性失语发作，其发展至右侧TC痉挛并泛化，但持续时间短暂。这些大概每月发生。

用onabotulinumtoxinA对她进行如下治疗。在额肌的4个位点中的每一个注射5个单位，在额鼻缝附近注射1次10个单位，在冠状缝(筋膜下)附近分散注射(分布在缝的全长上)7次5个单位，在左侧颞肌注射6次5个单位，其中2次注射在耳朵上方和前方的鳞缝附近，1次注射在后方的鳞缝附近。沿矢状缝分布有3次5个单位筋膜下注射。她有持续约10秒的表达性失语发作，但是没有向右侧发展并且没有泛化。她停用了拉莫三嗪。她每3-5个月继续治疗，每月会出现短暂的表达性失语发作。

实施例3

用梭菌毒素治疗减少癫痫发作的发生

一名成年女性每周有几次癫痫发作，其特征在于突然出现意识错乱伴有语言理解困难约20秒，然后出现意识丧失和惊厥持续1分钟。诊断结果(EEG和MRI)显示，癫痫发作开始区位于左侧颞顶区，与皮质感受性语言区重叠。因此，该患者的癫痫发作病灶位于癫痫手术无法接近的区域。尽管试验了多种抗癫痫药物，包括左乙拉西坦、奥卡西平和拉莫三嗪，但癫痫发作仍然持续。因此，该患者患有是耐药性的且无法手术的癫痫。

对患者的左侧颞顶区进行单侧治疗，总剂量为40单位的其中15个单位在人字缝附近的3个位点施用。在顶乳缝附近的2个位点施用了10个单位，并且在枕骨缝附近的3个位点施用了15个单位。在治疗的一个星期内，患者没有任何癫痫发作。在接下来的三个月里，患者只有三次癫痫发作。在第四个月期间，她经历了三次癫痫发作，并回来接受进一步治疗。她每三个月以同样的治疗模式进行复治，并且在治疗期间保持无癫痫发作。

实施例4

用梭菌毒素治疗缓解全身性癫痫发作

一名患有孤独症和发育延迟的4岁男孩经常出现短暂的强直性癫痫发作。他的MRI正常，他的EEG显示频繁的慢棘波和波，符合Lennox-Gastaut综合征。尽管对多种抗癫痫药物和生酮饮食进行了试验，但癫痫发作仍在持续。

用每个给药位点5个单位onabotulinumtoxinA对该患者进行双侧治疗，方法如下：每个颞肌注射3次，每个枕肌注射2次，沿每侧的顶乳缝注射2次，向每侧由颈神经支配的颈部脊椎旁肌内注射2次，共注射18次，共90个单位。在接下来的3个月中，患者经历的癫痫发作频率下降了50％。在3个月的结尾，使用同样的方案对患者进行复治，增加的位点如下：沿冠状缝注射4次，沿矢状缝注射3次，沿每侧后方的鳞缝注射1次，沿每侧人字缝注射2次。增加的治疗提供了额外的13次注射，增加了65个单位。治疗总计155个单位。该患者每3个月进行这种范例治疗，并且没有癫痫发作。

实施例5

用梭菌毒素治疗减少与脑肿瘤相关的局灶性癫痫发作

一名患有多形性胶质母细胞瘤(其起源于右半球，但通过胼胝体向左侧扩散)的35岁男性患有左半球和右半球独立出现的局灶性癫痫发作。尽管试验了多种抗癫痫药物，但癫痫发作仍然存在。然而，基于EEG，该结果在右侧更突出。

用onabotulinumtoxinA治疗该患者，每次注射10U，如下：沿冠状缝注射4次(每侧2次)，沿矢状缝注射3次，沿右侧人字缝注射3次。施用的总量为100U。有趣的是，EEG棘波活动在双侧被显著抑制，尽管他的EEG持续异常，但他没有临床癫痫发作活动。

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