活化素受体样激酶抑制剂的盐和晶体形式的制作方法

活化素受体样激酶抑制剂的盐和晶体形式
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求2019年8月13日提交的美国临时申请号62/885,977的优先权。前述申请的全部内容以引用的方式并入本文。


背景技术：

3.活化素受体样激酶-2(alk2)由活化素a受体形式i基因(acvr1)编码。alk2是骨形态发生蛋白(bmp)途径中的丝氨酸/苏氨酸激酶(shore等人，nature genetics 2006，38：525-27)。alk2抑制剂和alk2的突变形式具有治疗许多疾病的潜力，这些疾病包括进行性骨化性纤维结构不良(fibrodysplasia ossificans progressiva；fop)；异位骨化(ho)，例如由重大外科手术、外伤(诸如头部或爆炸伤)、长期固定或严重烧伤诱发的异位骨化；弥漫型内因性桥脑神经胶质瘤(dipg)，一种罕见的脑癌形式；和与慢性炎性、传染性或肿瘤性疾病有关的贫血。
4.美国专利号10,233,186(其全部教义以引用的方式并入本文)公开有效的、高选择性的alk2抑制剂和alk2的突变形式。美国专利号10,233,186中公开的一种抑制剂的结构在本文中称为“化合物(i)”，如下所示：
[0005][0006]
药学活性剂(诸如化合物(i))的成功开发通常需要鉴定具有能够在合成后立即进行分离和纯化的特性的固体形式，所述固体形式可大规模制造，并且可长期保存，而只有最少的水分吸收、分解或转化为其他固体形式，其适于配制并且在向受试者施用后可易于吸收(例如，溶于水和胃液)。


技术实现要素：

[0007]
现已发现，化合物(i)的游离碱在潮湿环境中是物理不稳定的，并且在暴露于水时倾向于胶粘。结果，发现当以生产规模制备时，化合物(i)难以分离。
[0008]
现还发现1.5:1琥珀酸盐(即倍半琥珀酸盐)、1:1盐酸盐(1:1盐酸盐)和1:1富马酸盐(1:1富马酸盐)可在明确定义的条件下结晶以提供非吸湿性晶形(参见实施例2-7)。这三
种盐在水中和在人工胃液中还具有良好的溶解性(参见表2)，具有高熔点起始并且适合大规模合成。1.5:1琥珀酸盐的另一优点在于它以单一多晶型物形式存在，并且在低于其熔点下不发生热转变，表明高度的晶形稳定性(参见实施例2.4)。名称“1:1”为酸(盐酸或富马酸)与化合物(i)之间的摩尔比；且名称“1.5:1”为酸(琥珀酸)与化合物(i)之间的摩尔比。由于琥珀酸上的两个羧酸基团和化合物(i)中的三个碱性氮原子，可能有多种化学计量。例如，化合物(i)同时形成1:1盐酸盐与2:1盐酸盐。化合物(i)的1:1盐酸盐在本文中称为“1:1化合物(i)hcl”；且1.5:1琥珀酸盐在本文中称为“1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐”。
[0009]
通过用十三种不同的酸进行盐筛选，鉴定出化合物(i)hcl、化合物(i)富马酸盐和化合物(i)倍半琥珀酸盐(参见实施例1)。自此盐筛选中，仅鉴定出八种晶形。结晶盐是用苯磺酸、苯甲酸、富马酸、hcl(1摩尔当量和2摩尔当量)、马来酸、水杨酸和琥珀酸形成。自这八种盐中，发现苯磺酸盐、马来酸盐和2:1hcl因为其结晶度低且在潮湿环境下不稳定(潮解)而不合适；发现苯甲酸盐由于水溶性不良和熔化时质量损失高而不合适；并且发现水杨酸盐由于水溶性不良、熔化时质量损失高和可能的多晶型而不合适。
[0010]
在一个方面中，本公开提供一种化合物(i)的琥珀酸盐，其中化合物(i)与琥珀酸之间的摩尔比为1:1.5。如上所述，此盐在本文中还称为“1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐”。
[0011]
在另一个方面中，本公开提供一种化合物(i)的hcl盐，其中化合物(i)与hcl酸之间的摩尔比为1:1。如上所述，此盐在本文中还称为“1:1化合物(i)hcl盐”。
[0012]
在又一个方面中，本公开提供一种化合物(i)的富马酸盐，其中化合物(i)与富马酸之间的摩尔比为1:1。此盐在本文中还称为“1:1化合物(i)富马酸盐”。
[0013]
在另一个方面中，本公开提供一种药物组合物，其包含1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐(或1:1化合物(i)hcl盐或1:1化合物(i)富马酸盐)和药学上可接受的载剂或稀释剂。
[0014]
本公开提供一种治疗或改善受试者中的进行性骨化性纤维结构不良的方法，其包括向有需要的受试者施用药学有效量的本文公开的盐或对应的药物组合物。
[0015]
本公开提供一种治疗或改善受试者中的弥漫型内因性桥脑神经胶质瘤的方法，其包括向有需要的受试者施用药学有效量的本文公开的盐或对应的药物组合物。
[0016]
本公开还提供一种抑制受试者中的异常alk2活性的方法，其包括向有需要的受试者施用药学有效量的本文公开的盐或对应的药物组合物。
[0017]
本公开还提供本公开的盐或其包含所述盐的药物组合物在上述本公开的任何方法中的用途。在一个实施方案中，提供用于本文所述的本公开的任何方法中的本公开的盐或其包含所述盐的药物组合物。在另一个实施方案中，提供本公开的盐或其包含所述盐的药物组合物在制造用于所述公开的任何方法的药剂中的用途。
附图说明
[0018]
图1示出1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐的x射线粉末衍射(xrpd)图。
[0019]
图2示出1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐的热重分析(tga)和差示扫描量热分析(dsc)热谱图。
[0020]
图3示出1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐的1h-核磁共振光谱(1h-nmr)。
[0021]
图4示出1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐的dvs等温线。
[0022]
图5示出在dvs测量之前(下部)和之后(上部)，1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐(形
式a)的xrpd图。
[0023]
图6示出1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐(形式a)的可变湿度xrpd图。自下而上，在40％rh、60％rh、90％rh、40％rh、0％rh和回到40％rh的可变湿度阶段原位采集的每个xrpd衍射图。
[0024]
图7示出1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐(形式a)的可变温度xrpd图。自下而上，在40℃、60℃、80℃、100℃、120℃、140℃、160℃和回到25℃的可变温度阶段原位采集的每个xrpd衍射图。
[0025]
图8示出1:1化合物(i)结晶hcl盐一水合物(形式a)的xrpd图。
[0026]
图9示出1:1化合物(i)结晶hcl盐一水合物(形式a)的tga和dsc热谱图。
[0027]
图10示出1:1化合物(i)结晶hcl盐一水合物(形式a)的1h-nmr。
[0028]
图11示出1:1化合物(i)结晶hcl盐一水合物(形式a)的dvs等温线。
[0029]
图12示出在dvs测量之前(下部)和之后(上部)，1:1化合物(i)结晶hcl盐一水合物(形式a)的xrpd图。用箭头指示在dvs后观察到的额外峰。
[0030]
图13示出1:1化合物(i)结晶hcl盐一水合物(形式a)的可变湿度xrpd图。自下而上，在周围条件下在40％rh、90％rh、0％rh和回到40％rh)的可变湿度阶段原位采集的每个xrpd衍射图。
[0031]
图14示出1:1化合物(i)结晶hcl盐一水合物(形式a)的可变温度xrpd图。自下而上，在周围条件下在50℃、100℃、160℃和回到25℃的可变温度阶段原位采集的每个xrpd衍射图。
[0032]
图15示出在初步筛选(下部)和放大(上部)期间观察到的无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式d)的xrpd图。
[0033]
图16示出无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式d)的tga和dsc热谱图。
[0034]
图17示出无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式d)的1h-nmr。
[0035]
图18示出在筛选(下部)、放大(湿)(中部)和干燥(上部)期间观察到的无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式g)的xrpd图。
[0036]
图19示出无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式g)的tga和dsc热谱图。
[0037]
图20示出无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式g)的1h-nmr。
[0038]
图21示出在初步筛选(下部)和放大(上部)期间观察到的无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式i)的xrpd图。
[0039]
图22示出无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式i)的tga和dsc热谱图。
[0040]
图23示出无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式i)的1h-nmr。
[0041]
图24示出化合物(i)的游离碱的dvs等温线。
[0042]
图25示出2:1化合物(i)结晶hcl盐(形式b)的xrpd图。
[0043]
图26示出在初步筛选(下部)和放大(上部)期间观察到的无水1:1化合物(i)结晶富马酸盐(形式a)的xrpd图。
[0044]
图27示出无水1:1化合物(i)结晶富马酸盐(形式a)的tga和dsc热谱图。
[0045]
图28示出无水1:1化合物(i)结晶富马酸盐(形式a)的1h-nmr。
[0046]
图29示出1:1化合物(i)结晶富马酸盐(形式c)的xrpd图。
[0047]
图30示出1:1化合物(i)结晶富马酸盐(形式d)的xrpd图。
具体实施方式
[0048]
本公开涉及化合物(i)的新颖琥珀酸盐(即1:1.5倍半琥珀酸盐)、化合物(i)的新颖盐酸盐(即1:1盐酸盐)和新颖富马酸盐(即1:1富马酸盐)以及上述每种的多晶型物。
[0049]“水合形式”是指呈游离碱或盐的化合物(i)的固体或晶形，其中水与游离碱化合物(i)或对应盐以化学计量比(例如，化合物(i):水的摩尔比为1:1或1:2)合并作为固体或晶体的组成部分。“非水合形式”是指水与化合物(i)的游离碱或化合物(i)的对应盐之间没有化学计量比的形式，并且水实质上不(例如，按卡尔
·
费歇尔分析计小于10重量％)以固体形式存在。本公开中所公开的新固体形式包括水合形式和非水合形式。
[0050]
如本文所用，“结晶”是指具有晶体结构的固体，其中各个分子具有高度均匀规则的三维构型。
[0051]
所公开的结晶化合物(i)盐可为单晶形的晶体或不同单晶形的晶体的混合物。单晶形意指化合物(i)为单一晶体或复数个晶体，其中每个晶体具有相同晶形。
[0052]
对于本文公开的化合物(i)的晶形，至少特别重量百分比的1.5:1化合物(i)盐呈单晶形。特别的重量百分比包括85重量％、86重量％、87重量％、88重量％、89重量％、90重量％、91重量％、92重量％、93重量％、94重量％、95重量％、96重量％、97重量％、98重量％、99重量％、99.5重量％、99.9％，或70重量％-75重量％、75重量％-80重量％、80重量％-85重量％、85重量％-90重量％、90重量％-95重量％、95重量％-100重量％、70重量％-80重量％、80重量％-90重量％、90重量％-100重量％的化合物(i)盐呈单晶形。应理解，这些值与范围之间的所有值和范围意欲由本公开所涵盖。
[0053]
当将结晶化合物(i)盐定义为指定百分比的化合物(i)盐的一种特定晶形时，其余部分是由非晶态形式和/或除指定的一种或多种特定形式以外的晶形构成。单晶形的实例包括1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐(形式a)、1:1化合物(i)hcl盐(形式a、形式d、形式g和形式i)和化合物(i)1:1富马酸盐(形式a、形式c和形式d)，其特征在于具有本文所讨论的一种或多种特性。
[0054]
化合物(i)具有手性中心。本文所公开的呈盐和多晶型的化合物(i)相对于其他立体异构体呈至少80重量％、90重量％、99重量％或99.9重量％纯的，即，立体异构体的重量与所有立体异构体的重量的比。
[0055]
本文所公开的结晶化合物(i)盐展示出强的、独特的xrpd图，其具有对应于以2θ计的角峰位置的尖锐峰和平坦基线，指示高度结晶的材料(例如，参见图1)。本技术中公开的xrpd图是自铜辐射源(cu kα1；)获得。
[0056]
1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐晶形的表征
[0057]
在一个实施方案中，1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐呈单晶形a，其特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的8.5
°
、15.4
°
和21.3
°±
0.2处包含峰。在另一个实施方案中，形式a的特征在于x射线粉末衍射图在选自以2θ计的4.3
°
、8.5
°
、14.0
°
、15.4
°
和21.3
°±
0.2处包含至少三个峰(或四个峰)。在另一个实施方案中，形式a的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.3
°
、8.5
°
、14.0
°
、15.4
°
和21.3
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式a的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.3
°
、6.7
°
、8.5
°
、12.8
°
、14.0
°
、15.4
°
、17.0
°
和21.3
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式a的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.3
°
、6.7
°
、8.5
°
、12.8
°
、14.0
°
、15.4
°
、15.7
°
、16.6
°
、17.0
°
、18.1
°
、19.4
°
、19.8
°
、20.1
°
、20.7
°
、
21.3
°
、22.3
°
、25.0
°
、29.1
°
和34.4
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式a的特征在于x射线粉末衍射图实质上类似于图1。
[0058]
在晶体学领域中众所周知，对于任何给定晶形，由于诸如温度变化、样品位移以及是否存在内标等因素，角峰位置可能会略有变化。在本公开中，角峰位置的变化以2θ计为
±
0.2。另外，由于用于xrpd分析的样品制备中的微晶尺寸和非随机微晶取向的差异，给定晶形的相对峰强度可能改变。在本领域中众所周知，此可变性将解释上述因素，而不会妨碍对晶形的明确鉴定。
[0059]
在另一个实施方案中，1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐形式a的特征在于差示扫描量热仪(dsc)的峰值相变温度为177
±
2℃。
[0060]
1:1化合物(i)盐酸盐晶形的表征
[0061]
在一个实施方案中，形式a的特征在于x射线粉末衍射图在选自以2θ计的12.9
°
、17.0
°
、19.0
°
、21.1
°
和22.8
°±
0.2处包含至少三个峰(或四个峰)。在另一个实施方案中，1:1化合物(i)盐酸盐为单晶形形式a，其特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的12.9
°
、17.0
°
、19.0
°
、21.1
°
和22.8
°±
0.2处包含峰。在另一个实施方案中，形式a的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的12.9
°
、13.8
°
、15.1
°
、17.0
°
、19.0
°
、19.6
°
、21.1
°
和22.8
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式a的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的5.7
°
、10.1
°
、12.6
°
、12.9
°
、13.8
°
、15.1
°
、17.0
°
、19.0
°
、19.6
°
、20.3
°
、21.1
°
、22.1
°
、22.8
°
、23.4
°
、24.0
°
、24.8
°
、25.5
°
、26.1
°
和28.6
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式a的特征在于x射线粉末衍射图实质上类似于图8。
[0062]
在另一个实施方案中，1:1化合物(i)盐酸盐形式a的特征在于差示扫描量热仪(dsc)的峰值相变温度为207
±
2℃。
[0063]
在一个实施方案中，1:1化合物(i)盐酸盐为单晶形形式d，其特征在于x射线粉末衍射图在选自以2θ计的10.8
°
、16.9
°
、18.8
°
、22.1
°
和24.7
°±
0.2处包含至少三个峰(或四个峰)。在另一个实施方案中，1:1化合物(i)盐酸盐为单晶形形式d，其特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的10.8
°
、16.9
°
、18.8
°
、22.1
°
和24.7
°±
0.2处包含峰。在另一个实施方案中，形式d的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的10.8
°
、13.3
°
、16.9
°
、18.8
°
、22.1
°
和24.7
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式d的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的10.8
°
、13.1
°
、13.3
°
、16.6
°
、16.9
°
、17.4
°
、18.8
°
、20.8
°
、22.1
°
和24.7
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式d的特征在于x射线粉末衍射图实质上类似于图15。
[0064]
在另一个实施方案中，1:1化合物(i)盐酸盐形式d的特征在于差示扫描量热仪(dsc)的峰值相变温度为207
±
2℃。
[0065]
在一个实施方案中，1:1化合物(i)盐酸盐为单晶形形式g，其特征在于x射线粉末衍射图在选自以2θ计的10.2
°
、12.8
°
、16.7
°
、17.4
°
、18.4
°
和22.5
°±
0.2处包含至少三个峰(或四个峰)。在另一个实施方案中，1:1化合物(i)盐酸盐为单晶形形式g，其特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的10.2
°
、12.8
°
、16.7
°
、17.4
°
、18.4
°
和22.5
°±
0.2处包含峰。在另一个实施方案中，形式g的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的10.2
°
、12.8
°
、16.7
°
、17.4
°
、18.4
°
、21.3
°
、22.0
°
、22.5
°
和24.3
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式g的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的10.2
°
、12.8
°
、14.9
°
、16.7
°
、17.4
°
、18.4
°
、20.5
°
、21.3
°
、22.0
°
、22.5
°
和24.3
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式d的特征在于x射线粉末衍
射图实质上类似于图18。
[0066]
在另一个实施方案中，1:1化合物(i)盐酸盐形式g的特征在于差示扫描量热仪(dsc)的峰值相变温度为175
±
4℃和197
±
4℃。
[0067]
在一个实施方案中，1:1化合物(i)盐酸盐为单晶形形式i，其特征在于x射线粉末衍射图在选自以2θ计的5.4
°
、8.2
°
、16.3
°
、16.5
°
、18.4
°
和21.5
°±
0.2处包含至少三个峰(或四个峰)。在另一个实施方案中，1:1化合物(i)盐酸盐为单晶形形式i，其特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的5.4
°
、8.2
°
、16.3
°
、16.5
°
、18.4
°
和21.5
°±
0.2处包含峰。在另一个实施方案中，形式i的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的5.4
°
、8.2
°
、13.1
°
、16.3
°
、16.5
°
、18.4
°
和21.5
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式i的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的5.4
°
、8.2
°
、10.2
°
、13.1
°
、16.3
°
、16.5
°
、17.1
°
、18.4
°
、21.5
°
和21.8
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式i的特征在于x射线粉末衍射图实质上类似于图21。
[0068]
在另一个实施方案中，1:1化合物(i)盐酸盐形式i的特征在于差示扫描量热仪(dsc)的峰值相变温度为187
±
4℃和200
±
4℃。
[0069]
2:1化合物(i)盐酸盐晶形的表征
[0070]
在一个实施方案中，2:1化合物(i)盐酸盐为单晶形形式b，其特征在于x射线粉末衍射图在选自以2θ计的10.6
°
、17.0
°
、18.3
°
、20.9
°
和21.1
°±
0.2处包含至少三个峰(或四个峰)。在一个实施方案中，2:1化合物(i)盐酸盐为单晶形形式b，其特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的10.6
°
、17.0
°
、18.3
°
、20.9
°
和21.1
°±
0.2处包含峰。在另一个实施方案中，2:1化合物(i)盐酸盐形式b的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的10.6
°
、12.7
°
、15.8
°
、17.0
°
、18.3
°
、18.9
°
、20.9
°
、21.1
°
和22.0
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，2:1化合物(i)盐酸盐形式b的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的7.8
°
、8.6
°
、10.6
°
、11.9
°
、12.7
°
、13.3
°
、15.4
°
、15.8
°
、16.5
°
、17.0
°
、18.3
°
、18.9
°
、19.7
°
、20.9
°
、21.1
°
、22.0
°
、22.6
°
、24.5
°
、26.7
°
、27.1
°
、28.9
°
和29.7
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，2:1化合物(i)盐酸盐形式b的特征在于x射线粉末衍射图实质上类似于图25。
[0071]
1:1化合物(i)富马酸盐晶形的表征
[0072]
在一个实施方案中，1:1化合物(i)富马酸盐为单晶形形式a，其特征在于x射线粉末衍射图在选自以2θ计的5.7
°
、15.3
°
、16.9
°
、22.4
°
和23.0
°±
0.2处包含至少三个峰(或四个峰)。在一个实施方案中，1:1化合物(i)富马酸盐为单晶形形式a，其特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的5.7
°
、15.3
°
、16.9
°
、22.4
°
和23.0
°±
0.2处包含峰。在另一个实施方案中，形式a的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的5.7
°
、7.5
°
、9.8
°
、10.3
°
、12.3
°
、15.3
°
、16.9
°
、17.5
°
、22.4
°
和23.0
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式a的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的5.7
°
、7.5
°
、9.8
°
、10.3
°
、11.2
°
、12.3
°
、14.8
°
、15.3
°
、16.2
°
、16.9
°
、17.2
°
、17.5
°
、18.3
°
、18.8
°
、19.9
°
、20.7
°
、21.5
°
、22.4
°
、23.0
°
、23.5
°
和25.8
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式a的特征在于x射线粉末衍射图实质上类似于图26。
[0073]
在另一个实施方案中，1:1化合物(i)富马酸盐形式a的特征在于差示扫描量热仪(dsc)的峰值相变温度为224
±
2℃。
[0074]
在一个实施方案中，1:1化合物(i)富马酸盐为单晶形形式c，其特征在于x射线粉末衍射图在选自以2θ计的6.3
°
、9.0
°
、13.5
°
、18.9
°
和22.5
°±
0.2处包含至少三个峰(或四个峰)。在一个实施方案中，1:1化合物(i)富马酸盐为单晶形形式c，其特征在于x射线粉末
衍射图在以2θ计的6.3
°
、9.0
°
、13.5
°
、18.9
°
和22.5
°±
0.2处包含峰。在另一个实施方案中，形式c的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.5
°
、6.3
°
、9.0
°
、13.5
°
、14.7
°
、18.9
°
、19.7
°
、21.0
°
、22.5
°
和23.6
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式c的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.5
°
、6.3
°
、7.4
°
、9.0
°
、13.5
°
、14.7
°
、16.2
°
、16.8
°
、17.4
°
、17.8
°
、18.4
°
、18.9
°
、19.7
°
、21.0
°
、22.5
°
、23.6
°
、25.5
°
、26.2
°
、27.5
°
和28.3
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式c的特征在于x射线粉末衍射图实质上类似于图29。
[0075]
在一个实施方案中，1:1化合物(i)富马酸盐为单晶形形式d，其特征在于x射线粉末衍射图在选自以2θ计的4.6
°
、11.0
°
、18.5
°
、20.5
°
和21.0
°±
0.2处包含至少三个峰(或四个峰)。在一个实施方案中，1:1化合物(i)富马酸盐为单晶形形式d，其特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.6
°
、11.0
°
、18.5
°
、20.5
°
和21.0
°±
0.2处包含峰。在另一个实施方案中，形式d的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.6
°
、11.0
°
、15.1
°
、18.5
°
、19.4
°
、20.5
°
、21.0
°
和25.0
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式d的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.6
°
、11.0
°
、12.0
°
、14.3
°
、15.1
°
、18.5
°
、19.4
°
、20.5
°
、21.0
°
、22.8
°
、23.6
°
和25.0
°±
0.2处包含峰。在又一个实施方案中，形式d的特征在于x射线粉末衍射图实质上类似于图30。
[0076]
在一个实施方案中，1:1化合物(i)富马酸盐为单晶形形式c，与形式d混合，其中形式c的特征在于x射线粉末衍射图在选自以2θ计的6.3
°
、9.0
°
、13.5
°
、18.9
°
和22.5
°±
0.2处包含至少三个峰(或四个峰)；且形式d的特征在于x射线粉末衍射图在选自以2θ计的4.6
°
、11.0
°
、18.5
°
、20.5
°
和21.0
°±
0.2处包含至少三个峰(或四个峰)。
[0077]
在一个实施方案中，1:1化合物(i)富马酸盐为单晶形形式c，与形式d混合，其中形式c的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的6.3
°
、9.0
°
、13.5
°
、18.9
°
和22.5
°±
0.2处包含峰；且形式d的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.6
°
、11.0
°
、18.5
°
、20.5
°
和21.0
°±
0.2处包含峰。
[0078]
在一个实施方案中，1:1化合物(i)富马酸盐为单晶形形式c，与形式d混合，其中形式c的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.5
°
、6.3
°
、9.0
°
、13.5
°
、14.7
°
、18.9
°
、19.7
°
、21.0
°
、22.5
°
和23.6
°±
0.2处包含峰；且形式d的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.6
°
、11.0
°
、15.1
°
、18.5
°
、19.4
°
、20.5
°
、21.0
°
和25.0
°±
0.2处包含峰。
[0079]
在一个实施方案中，1:1化合物(i)富马酸盐为单晶形形式c，与形式d混合，其中形式c的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.5
°
、6.3
°
、7.4
°
、9.0
°
、13.5
°
、14.7
°
、16.2
°
、16.8
°
、17.4
°
、17.8
°
、18.4
°
、18.9
°
、19.7
°
、21.0
°
、22.5
°
、23.6
°
、25.5
°
、26.2
°
、27.5
°
和28.3
°±
0.2处包含峰；且形式d的特征在于x射线粉末衍射图在以2θ计的4.6
°
、11.0
°
、12.0
°
、14.3
°
、15.1
°
、18.5
°
、19.4
°
、20.5
°
、21.0
°
、22.8
°
、23.6
°
和25.0
°±
0.2处包含峰。
[0080]
药物组合物
[0081]
本公开的药物组合物包含本文所述的化合物(i)的盐或其晶形以及一种或多种药学上可接受的载剂或稀释剂。术语“药学上可接受的载剂”是指参与携带或运输任何主题组合物或其组分的药学上可接受的材料、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。每种载剂必须在与主题组合物和其组分相容且不伤害受试者的意义上为“可接受的”。可用作药学上可接受的载剂的材料的一些实例包括：(1)糖类，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，诸如羧
甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)黄芪粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；(9)油类，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇类，诸如丙二醇；(11)多元醇，诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯类，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液(ringer's solution)；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；和(21)药物制剂中采用的其他无毒相容性物质。
[0082]
本公开的组合物可口服、肠道外、通过吸入喷雾、局部、直肠、鼻、颊、阴道或通过植入型药盒施用。如本文所用的术语“肠道外”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病变内和颅内注射或输注技术。在一个实施方案中，本公开的组合物口服、腹膜内或静脉内施用。本公开的组合物的无菌可注射形式可为水性或油性悬浮液。这些悬浮液可根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂还可为于无毒肠道外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如呈于1,3-丁二醇中的溶液形式。可采用的可接受的媒介物和溶剂尤其为水、林格氏溶液和等张氯化钠溶液。另外，常规上将无菌、非挥发性油用作溶剂或悬浮介质。
[0083]
出于此目的，可采用任何温和不挥发性油，包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯。脂肪酸，诸如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备可注射剂，天然药学上可接受的油，诸如橄榄油或蓖麻油，特别是其聚氧乙烯化型式，还可用于制备可注射剂。这些油溶液或悬浮液还可含有长链醇稀释剂或分散剂，诸如羧甲基纤维素或类似的分散剂，其通常用于配制药学上可接受的剂型，包括乳液和悬浮液。出于配制目的，还可使用其他常用的表面活性剂，诸如tween、spans及其他乳化剂或生物利用度增强剂，其通常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型。
[0084]
本公开的药学上可接受的组合物可以任何口服可接受的剂型口服施用，包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在供口服使用的片剂的情况下，常用载剂包括乳糖和玉米淀粉。还通常添加诸如硬脂酸镁的润滑剂。对于以胶囊形式进行的口服施用，可用的稀释剂包括乳糖和干燥玉米淀粉。当水性悬浮液是供口服使用所需时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如果需要，还可添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
[0085]
替代地，本公开的药学上可接受的组合物可以供直肠施用的栓剂的形式施用。它们可通过将剂与合适的无刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下呈固体，但在直肠温度下呈液体，因此将在直肠中融化以释放药物。此类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
[0086]
本公开的药学上可接受的组合物还可局部施用，特别是当治疗靶标包括局部应用容易达到的区域或器官时，包括眼、皮肤或下肠道的疾病。针对这些区域或器官中的每个容易地制备合适的局部制剂。下肠道的局部应用可以直肠栓剂制剂(参见上文)或合适的灌肠制剂形式进行。还可使用局部经皮贴剂。
[0087]
对于局部应用，可将药学上可接受的组合物配制成含有悬浮或溶解于一种或多种载剂中的活性组分的合适软膏。用于本公开化合物的局部施用的载剂包括但不限于矿物油、液体石蜡、白石蜡、丙二醇、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯化合物、乳化蜡和水。替代地，可将药学上可接受的组合物配制成含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载剂中的活性组分的合适洗剂或霜剂。合适的载剂包括但不限于矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山
梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇和水。
[0088]
本公开的药学上可接受的组合物还可通过鼻气溶胶或吸入施用。此类组合物是根据药物配制领域中熟知的技术制备，并且可采用苯甲醇或其他合适的防腐剂、吸收促进剂(以提高生物利用度)、氟碳化合物和/或其他常规增溶剂或分散剂于盐水中制备成溶液。
[0089]
可与载剂组合以产生呈单一剂型的组合物的本公开化合物的量将根据所治疗的宿主、特定施用模式和施用单一剂型的人所判定的其他因素而变化。
[0090]
剂量
[0091]
本文所述的化合物(i)的盐或其晶形的毒性和治疗功效可通过细胞培养或实验动物中的标准药学工序来确定。ld
50
为50％群体致死的剂量。ed
50
为50％群体治疗有效的剂量。毒性与治疗效果之间的剂量比(ld
50
/ed
50
)为治疗指数。展示出大治疗指数的化合物(i)的盐或其晶形是优选的。尽管可使用展示出毒副作用的本文所述的化合物(i)的盐或其晶形，但应注意设计一种递送系统，所述系统将这类盐或晶形靶向受累组织部位，以便最小化对未受感染细胞的潜在损害，从而减少副作用。
[0092]
自细胞培养测定和动物研究获得的数据可用于配制供人使用的剂量范围。此类盐或晶形的剂量可在循环浓度范围内，包括几乎没有或没有毒性的ed
50
。剂量可在此范围内根据所采用的剂型和所利用的施用途径而变化。对于本文所述的化合物(i)的任何盐或其晶形，治疗有效剂量最初可由细胞培养测定估计。可在动物模型中配制剂量以达成循环血浆浓度范围，所述范围包括如细胞培养中所确定的ic
50
(即达成症状的一半最大抑制的测试化合物的浓度)。此类信息可用于更准确地确定对人有用的剂量。血浆中的水平可例如通过高效液相色谱法测量。
[0093]
还应了解用于任何特定受试者的具体剂量和治疗方案将取决于以下多种因素，包括但不限于所采用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄速率、药物组合和主治医师的判断以及所治疗特定疾病的严重程度。本公开的化合物(i)的盐或晶形在组合物中的量还将视组合物中的特定化合物而定。
[0094]
治疗方法
[0095]“受试者”为哺乳动物，优选为人，但还可为需要兽医治疗的动物，例如伴侣动物(例如狗、猫等)、农场动物(例如奶牛、绵羊、猪、马等)和实验室动物(例如大鼠、小鼠、豚鼠等)。
[0096]
用有效量的本公开的化合物对受试者的“治疗”方案可由单次施用组成，或替代地包括一系列应用。例如，1:1化合物(i)富马酸盐和1:1化合物(i)马来酸盐可每周至少施用一次。然而，在另一个实施方案中，对于给定治疗，化合物可自每周约一次至每天一次向受试者施用。治疗期的长度取决于以下多种因素，诸如疾病的严重程度、受试者的年龄、本公开化合物的浓度和活性或其组合。还应理解，用于治疗或预防的化合物的有效剂量可在特定治疗或预防方案过程中增加或减少。剂量的变化可通过本领域已知的标准诊断测定得到并且变得显而易知。在一些情况下，可能需要长期施用。
[0097]
alk2中的突变会导致所述激酶活性异常，并与各种疾病有关。本文公开的化合物(i)、其盐和晶形抑制突变alk2基因，例如导致具有氨基酸修饰的alk2酶的表达的突变alk2基因。在另一个方面中，本文公开的化合物(i)、其盐和晶形抑制野生型(wt)alk2蛋白和alk2蛋白的突变形式两者。出于本公开的目的，在国家生物信息中心(ncbi)网页(https://
www.ncbi.nlm.nih.gov/)上的acvr1活化素a受体1型[智人(人)]；entrez基因id(ncbi)：90下找到alk2的序列信息。还称为：fop；alk2；skr1；tsri；actri；acvr1a；acvrlk2；所述序列信息并入本文中。
[0098]
在一个实施方案中，本公开提供一种抑制受试者中的异常alk2活性的方法，所述方法包括以下步骤：向有需要的受试者施用药学有效量的本文所述的化合物(i)或盐、晶形或药物组合物。在一个实施方案中，异常alk2活性是由alk2基因中的突变引起，所述突变导致具有选自以下中的一者或多者的氨基酸修饰的alk2酶的表达：l196p、pf197-8l、r202i、r206h、q207e、r258s、r258g、r325a、g328a、g328v、g328w、g328e、g328r、g356d和r375p。在一个实施方案中，alk2酶具有氨基酸修饰r206h。
[0099]
由于对alk2的活性，本文所述的化合物(i)或盐、晶形或药物组合物因此可用于治疗患有与alk2活性异常有关的病症的受试者。在一个实施方案中，与异常alk2活性有关的病症为进行性骨化性纤维结构不良。fop诊断是基于大脚趾先天畸形(趾外翻)的存在和软组织中纤维结节的形成。结节可能会或可能不会转变为异位骨。这些软组织病变常首先出现在头部、颈部或背部。约97％的fop受试者具有相同的c.617g》a；acvr1(alk2)基因中的r206h突变。宾夕法尼亚大学(the university of pennsylvania)有一项基因测试(kaplan等人，pediatrics 2008，121(5)：e1295-e1300)。
[0100]
其他常见的先天性异常包括拇指畸形、股骨短而狭窄、胫骨骨软骨瘤和颈椎的融合小面关节。颈部的融合小面关节经常导致幼儿踩踏臀部而非爬行。fop常常被误诊(约80％；癌症或纤维瘤病)并且受试者经常接受不适当的诊断工序，诸如使疾病恶化并导致永久性残疾的活检。
[0101]
在一个实施方案中，本公开提供一种治疗或改善受试者中的进行性骨化性纤维结构不良的方法，其包括向有需要的受试者施用药学有效量的本文所述的化合物(i)或盐、晶形或药物组合物。
[0102]
在一个实施方案中，与异常alk2活性有关的病症为进行性骨化性纤维结构不良(fop)，并且所述受试者具有alk2基因中的突变，所述突变导致具有选自以下中的一者或多者的氨基酸修饰的alk2酶的表达：l196p、pf197-8l、r202i、r206h、q207e、r258s、r258g、r325a、g328a、g328w、g328e、g328r、g356d和r375p。在此实施方案的一个方面中，alk2酶具有氨基酸修饰r206h。
[0103]
本公开包括鉴定和/或诊断受试者的方法，这些受试者是用本文所述的化合物(i)或盐、晶形或药物组合物来治疗。在一个实施方案中，本公开提供一种检测受试者中与异常alk2活性有关的病症例如fob的方法，其中所述方法包括：a.自受试者例如人受试者获得样品例如血浆；和b.检测样品中是否存在如本文所述的alk2基因中的一个或多个突变。在另一个实施方案中，本公开提供一种诊断受试者中与异常alk2活性有关的病症的方法，所述方法包括：a.自受试者获得样品；b.使用本文所述的检测方法检测样品中是否存在如本文所述的alk2基因中的一个或多个突变；和c.当检测到一个或多个突变的存在时，诊断受试者患有所述病症。用于检测突变的方法包括但不限于基于杂交的方法、基于扩增的方法、微阵列分析、流式细胞术分析、dna测序、下一代测序(ngs)、引物延伸、pcr、原位杂交、斑点印迹和dna印迹。在一个实施方案中，本公开提供一种诊断和治疗受试者中的与异常alk2活性有关的病症的方法，所述方法包括：a.自受试者获得样品；b.检测样品中是否存在如本文所
述的alk2基因中的一个或多个突变；当检测到样品中的一个或多个突变时，诊断受试者患有所述病症；和向经诊断的受试者施用有效量的本文所述的化合物(i)、或盐、晶形或药物组合物。在一个实施方案中，本公开提供一种治疗受试者中的与异常alk2活性有关的病症的方法，所述方法包括a.确定是否、已确定是否或正在接收以下信息：受试者具有如本文所述的alk2基因中的一个或多个突变；b.受试者经鉴定为对本文所述的一种或多种化合物或药物组合物有反应；和c.向受试者施用有效量的化合物(i)、或盐、晶形或药物组合物。
[0104]
在一个实施方案中，与异常alk2活性有关的病症为脑肿瘤，例如，神经胶质瘤。在一个实施方案中，神经胶质瘤为弥漫型内因性桥脑神经胶质瘤(dipg)。在一个实施方案中，本公开提供一种治疗或改善受试者中的弥漫型内因性桥脑神经胶质瘤的方法，其包括向有需要的受试者施用药学有效量的本文所述的化合物(i)、或盐、晶形或药物组合物。
[0105]
在一个实施方案中，与异常alk2活性有关的病症为弥漫型内因性桥脑神经胶质瘤，并且受试者具有alk2基因中的突变，所述突变导致具有选自以下中的一者或多者的氨基酸修饰的alk2酶的表达：r206h、g328v、g328w、g328e和g356d。在此实施方案的一个方面中，alk2酶具有氨基酸修饰r206h。
[0106]
在一个实施方案中，与异常alk2活性有关的病症为与炎症、癌症或慢性疾病有关的贫血。
[0107]
在一个实施方案中，与异常alk2活性有关的病症为外伤或手术诱发的异位骨化。
[0108]
在一个实施方案中，本公开的化合物与可用于治疗有待治疗的疾病例如fop的第二治疗剂共同施用(作为组合剂型的一部分或作为在施用之前、依次、之后施用的单独剂型)。在这个实施方案的一个方面中，本公开的化合物与类固醇(例如，泼尼松)或其他抗过敏剂诸如奥马珠单抗共同施用。
[0109]
在一个实施方案中，将本公开的化合物与rar-γ激动剂或针对活化素的抗体共同施用以用于治疗有待治疗的疾病，例如fop。在一个实施方案中，有待共同施用的rar-γ激动剂为帕罗伐汀(palovarotene)。在一个实施方案中，有待共同施用的针对活化素的抗体为regn2477。
[0110]
在一个实施方案中，将本公开的化合物与可用于治疗fop的靶向肥大细胞的疗法共同施用。在一个实施方案中，本公开的化合物与肥大细胞抑制剂共同施用，所述肥大细胞抑制剂包括但不限于kit抑制剂。在一个实施方案中，有待共同施用的肥大细胞抑制剂选自色甘酸钠(cromolyn sodium)(或色甘酸钠(sodium cromoglicate))；维布妥昔单抗伊布替尼奥马珠单抗抗白三烯剂(例如，孟鲁司特或齐留通(或zyflo))；和kit抑制剂(例如，伊马替尼米哚妥林(pkc412a)、马赛替尼(或)、阿伐替尼(avapritinib)、dcc-2618、plx9486)。
[0111]
以下实施例旨在说明而非旨在以任何方式限制本公开的范围。
[0112]
实验
[0113]
缩写：
[0114][0115][0116]
[0117]
分析条件
[0118]
x射线粉末衍射(xrpd)
[0119]
粉末x射线衍射是使用配备有lynxeye检测器的rigaku miniflex 600或bruker d8 advance在反射模式(即bragg-brentano几何)下完成。在si归零晶片上制备样品。典型扫描为4至30度的2θ，在40kv和15ma下，步长为五分钟内0.05度。高分辨率扫描为4至40度的2θ，在40kv和15ma下，步长为30分钟内0.05度。下面列出xrpd的典型参数。
[0120][0121][0122]
热重分析和差示扫描量热法(tga&dsc)
[0123]
使用mettler toledo tga/dsc
3
同时对同一样品进行热重分析和差示扫描量热法。将所需量的样品直接在带有针孔的密封铝锅中称重。用于测量的典型样品质量为5-10mg。典型温度范围为30℃至300℃，加热速率为每分钟10℃(总时间为27分钟)。保护气体和吹扫气体为氮气(20-30ml/min和50-100ml/min)。下面列出dsc/tga的典型参数。
[0124][0125]
差示扫描量热法(dsc)
[0126]
将1-5mg材料称重至铝制dsc锅中，并用铝盖非气密密封。接着将样品锅装载至ta instruments q2000(配备有冷却器)中。在30℃下获得稳定的热流反应后，将样品和参考样品以10℃/min的速率加热至300℃并监控由此产生的热流反应。在分析之前，使用铟参考标准对仪器进行温度和热流校准。借助于ta universal analysis 2000软件进行样品分析，其中热事件的温度被引用为起始温度和峰值温度，根据制造商说明书所测量。方法气体：n2，在60.00ml/min下。
[0127]1h-核磁共振光谱(1h-nmr)
[0128]
质子nmr在bruker avance 300mhz光谱仪上完成。将固体溶于4ml小瓶中的0.75ml氘化溶剂中，并且转移至nmr管(wilmad5mm薄壁8”200mhz，506-pp-8)。典型测量通常为16次扫描。下面列出nmr的典型参数。
[0129][0130]
动态蒸气吸附(dvs)
[0131]
使用dvs intrinsic 1进行动态蒸气吸附(dvs)。将样品装载至样品锅中，并从微量天平上悬挂下来。用于dvs测量的典型样品质量为25mg。通过蒸馏水鼓泡的氮气提供所需的相对湿度。样品在每个水平下至少保持5分钟，并且仅在两次测量之间(间隔：60秒)或经过240分钟后的重量变化《0.002％，才升至下一湿度水平。典型测量包括以下步骤：
[0132]
1-在50％rh下平衡
[0133]
2-50％至2％(50％、40％、30％、20％、10％和2％)
[0134]
a.在每一湿度下至少保持5分钟且最多保持60分钟。通过标准为变化小于0.002％
[0135]
3-2％至95％(2％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％)
[0136]
a.在每一湿度下至少保持5分钟且最多保持60分钟。通过标准为变化小于0.002％
[0137]
4-95％至2％(95％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、2％)
[0138]
a.在每一湿度下至少保持5分钟且最多保持60分钟。通过标准为变化小于0.002％
[0139]
5-2％至50％(2％、10％、20％、30％、40％、50％)
[0140]
a.在每一湿度下至少保持5分钟且最多保持60分钟。通过标准为变化小于0.002％
[0141]
高效液相色谱法(hplc)
[0142]
agilent 1220 infinity lc：使用agilent 1220 infinity lc进行高效液相色谱法(hplc)。流速范围为0.2-5.0ml/min，操作压力范围为0-600巴，温度范围高于环境温度5℃至60℃，且波长范围为190-600nm。
[0143][0144]
卡尔费歇尔滴定
[0145]
使用mettler toledo c20s coulometric kf滴定仪进行用于水测定的卡尔费歇尔滴定，所述滴定仪配备有带隔膜的电流发生器单元和双铂针电极。阳极室和阴极室均使用aquastar
tm combicoulomat无熔试剂。将约0.03-0.10g的样品在阳极室中溶解并滴定，直至溶液电位降至100mv以下。在样品分析之前，使用hywtnal 1重量％水标准液进行验证。
[0146]
显微镜检查
[0147]
使用配备有2.5倍、10倍、20倍和40倍物镜和偏光镜的zeiss axioscope a1进行光学显微镜检查。图像通过内置的axiocam 105数位相机捕获，并使用zeiss提供的zen 2(蓝色版)软件进行处理。
[0148]
实施例1:组合盐筛选
[0149]
1.1盐筛选
[0150]
根据marvin sketch软件预测，化合物(i)的游离碱具有多个pka。所述化合物具有三个碱性氮，其理论pka值为8.95、3.57和2.86。理论对数p为2.98。
[0151]
使用13种不同的反荷离子进行盐筛选。所有反荷离子均以1.1当量测试。还使用2.2当量的反荷离子测试hcl，并使用0.5当量的反荷离子测试硫酸。表1提供反荷离子的列表。
[0152]
在无水etoh(20重量％，密度0.8547g/ml)中制备化合物(i)的储备溶液。还于etoh中制备所有反荷离子的储备溶液。固体反荷离子的反荷离子储备溶液经制备为0.02g/ml且液体反荷离子经制备为10体积％。
[0153]
在室温下，在2ml小瓶中进行成盐。将25mg化合物(i)(145.6μl储备溶液)和1.1当量的反荷离子添加至每个小瓶中。在硫酸的情况下，添加0.55当量和1.1当量的反荷离子。在hcl的情况下，添加1.1当量和2.2当量的反荷离子。使溶剂在30℃下蒸发，同时搅拌过夜，接着在50℃下在真空下彻底干燥4小时。
[0154]
将约25体积的溶剂(0.625ml)添加至每个小瓶中以进行筛选。所选的三种溶剂为etoh、etoac和ipa:水(9:1体积比)。一旦添加溶剂，则将混合物(或溶液)加热至45℃，保持
1.5小时，冷却至室温并搅拌过夜。当形成浆料时，将固体过滤以进行xrpd分析。
[0155]
xrpd分析是以三个阶段进行。对所有样品(观察到固体时)进行湿饼的xrpd。接着将独特的固体留在xrpd板上，并在50℃下于真空下干燥至少3小时。接着进行独特的干燥固体的xrpd。随后将固体暴露于》90％相对湿度下1天，并对所得固体进行xrpd处理。通过将饱和硫酸钾烧杯置于密封容器中的水中来制造潮湿环境。将所有xrpd图与反荷离子xrpd图和已知的自由分子图进行比较。
[0156]
如果在前三种筛选溶剂(etoh、etoac、ipa:水)下未形成固体，则打开盖子并在搅拌下在30℃下蒸发溶剂。通过将固体置于50℃下于真空中3-4小时使其蒸发至干，并添加第二轮溶剂(ipoac、mbk、mtbe)。如果在第二轮溶剂下未形成固体，则将溶剂再次蒸发至干并添加dee。
[0157]
表1-用于初始盐筛选的反荷离子和相关pka值。
[0158]
id反荷离子pka(最低)用于筛选的当量1乙酸4.751.12苯磺酸-2.81.13苯甲酸4.191.14柠檬酸3.081.15富马酸3.031.16盐酸-71.1、2.27苹果酸3.41.18马来酸1.91.19磷酸2.151.110水杨酸2.971.111硫酸-30.55、1.112琥珀酸4.21.113酒石酸2.891.1
[0159]
当用苯磺酸(bsa)、苯甲酸、富马酸、hcl(1当量和2当量)、马来酸、水杨酸和琥珀酸进行筛选时，观察到结晶固体。用bsa、苯甲酸、hcl(2当量)、水杨酸和琥珀酸时观察到一种独特的xrpd图。用hcl(1当量)和富马酸时观察到多种图。用马来酸时观察到两种图，并且两者均在湿度暴露下潮解。在结晶固体中，通过用苯甲酸、富马酸、hcl(1当量)、水杨酸和琥珀酸筛选得到的固体在湿度暴露下不会潮解。
[0160]
根据熔点、结晶度、在干燥和湿度暴露下的稳定性、水溶性、多晶型现象和反荷离子的可接受性对结晶盐进行表征并评价其活力。
[0161]
鉴于可接受的理化特性，选择一盐酸盐、琥珀酸盐和富马酸盐进行进一步开发。游离碱还包含在进一步的表征中以进行比较。
[0162]
由于水溶性不良和熔化时质量损失高，因此未选择苯甲酸盐。由于水溶性不良、熔化时质量损失高和可能的多晶型，因此未选择水杨酸盐。由于结晶度低和在潮湿环境中的不稳定性(潮解)，因此未选择苯磺酸盐、马来酸盐和双盐酸盐。
[0163]
游离碱样品在dsc中显示在116.19℃下的熔化起始。tga热谱图显示在熔化之前0.16重量％的逐渐质量损失，并且在熔化时0.05重量％的逐步质量损失。固体通过显微镜
检查为细粉。游离碱的卡尔费歇尔滴定显示0.37重量％的水。
[0164]
游离碱在许多有机溶剂体系中均展示出高溶解度(》200mg/ml，在室温下，在所测试的大多数有机溶剂中)、在模拟流体中的高溶解度(0.08mg/ml水，约17mg/ml空腹状态模拟胃液，约7mg/ml空腹状态模拟肠液)、可接受的熔化温度(起始116℃)和低残留溶剂(通过热重分析得出《0.20重量％)。游离碱的缺点在于其具有多晶型(在有限的筛选期间观察到4种图)，并且在潮湿环境(》90％相对湿度)中物理不稳定，并在4天内变成粘胶，然后在水中形成胶。实验室规模的结果还表明，在生产规模上，游离碱将难以分离成结晶固体。
[0165]
一盐酸盐展示出高熔点(起始203℃)，为水合物(通道水合物)，并且通过x射线粉末衍射具有高结晶度。其在水和模拟流体中具有高溶解度(》30mg/ml水和空腹状态模拟胃液，约7mg/ml空腹状态模拟肠液)。一盐酸盐的缺点包括对加入的当量敏感(在低至1.3摩尔当量的hcl下形成双盐酸盐)和对干燥敏感。
[0166]
琥珀酸盐在筛选期间仅显示一种图、在干燥和湿度暴露时稳定、比一盐酸盐和游离碱吸湿性低、在水和模拟流体中展示出高溶解度(》22m/ml，在所有流体中)、高熔点(起始173℃)和熔化时通过热重分析得到的可接受的质量损失(0.27重量％)。
[0167]
富马酸盐在水和模拟流体中展示出高溶解度(》15m/ml，在所有流体中)，且假设的水合物(称为形式b)在干燥和湿度暴露时是稳定的。形式a(无水)展示出高熔点(起始221℃)。
[0168]
下表2中给出游离碱和所选盐的理化特性的概述。
[0169]
表2-游离碱和所选盐的理化特性
[0170][0171]
1.2游离碱的湿度暴露
[0172]
使游离碱的晶形暴露于高湿度(》90％rh)过夜。通过将饱和硫酸钾的烧杯置于密封容器中的水中来制造潮湿环境。
[0173]
过夜湿度暴露后，固体保持为相同的晶形，但失去一些结晶度。xrpd分析后，将相同样品放回潮湿环境中。一周后，注意到样品已在xrpd板上潮解。在相同条件下开始第二个实验。固体颜色变深，变粘。样品的xrpd在第6天采集。峰强度较低，并且观察到基线中的变化，表明非晶态含量增加。
[0174]
实施例2：1.5:1化合物(i)倍半琥珀酸盐的晶形(形式a)的制备和表征
[0175]
2.1制备
[0176]
方法a：
[0177]
将呈游离碱的化合物(i)称入4ml小瓶中，并添加1.1当量的琥珀酸。接着在室温下添加etoh(15体积)。固体溶解并保留在溶液中。将浆液加热至45℃，并在搅拌的同时保持两小时，接着自然冷却至室温。固体仍保留在溶液中，因此将溶液用从筛选中获得的琥珀酸盐样品接种。保留种子并迅速形成白色浆液。将浆液在室温下搅拌过夜。在过滤之前，浆液为中等稠度的米色/灰白色浆液。将浆液过滤并用2体积etoh洗涤两次，接着在50℃下在真空中干燥过夜。通过hplc得到的纯度为99.79面积％。所获得的固体通过xrpd(参见图1和表3)、tga-dsc(图2)、1h-nmr(图3)和单晶x射线晶体学进一步表征。
[0178]
通过tga得知的初始质量损失为0.19重量％，然后在熔化后为0.30重量％，参见图2。dsc热谱图显示熔化起始时为172.9℃，然后样品在200℃以上时分解。
[0179]
表3.化合物(i)倍半琥珀酸盐(形式a)的xrpd
[0180][0181][0182]
方法b：
[0183]
使用化合物(i)游离碱和1.6当量琥珀酸，在几种不同溶剂条件下进行成盐。将约30mg游离碱称入2ml小瓶中，并添加10体积溶剂。在除mtbe之外的所有溶剂中，游离碱在室温下溶解。接着将琥珀酸作为etoh中的储备溶液添加，使每种溶剂组合物为约40体积％etoh。将溶液/浆液在室温下搅拌直至观察到沉淀，接着收集固体用于xrpd分析。表4中给出自成盐实验获得的固体的概述。
[0184]
表4-自成盐实验获得的固体的概述
[0185][0186]
方法c：非晶态浆液
[0187]
将约30mg化合物(i)倍半琥珀酸盐在2ml小瓶中熔化，以产生非晶态玻璃状固体。在室温下，将溶剂(450μl)与搅拌棒一起添加至各小瓶中。在所有情况下，玻璃状固体皆粘于小瓶底部，因此使用刮刀疏松固体并确保正确混合。在许多情况下，疏松固体后立即形成浅棕色浆液。观察到沉淀后，对浆液进行采样以用于xrpd分析。最早采样时间点是在添加溶剂后约30分钟。表5概述非晶态浆液实验的结果和观察结果。
[0188]
表5-自非晶态浆液实验获得的固体的xrpd图的概述
[0189][0190]
方法d：非晶态蒸气扩散
[0191]
将约10mg非晶态化合物(i)倍半琥珀酸盐置于4ml小瓶中。接着将各4ml小瓶置于含有3ml溶剂的20ml小瓶中并密封。在对固体采样以用于xrpd之前，将小瓶在室温下保持一个周末。大多数固体的外观自浅米色玻璃(由非晶态泡沫分解)变为白色/灰白色粉末。暴露于潮湿气氛(水作为溶剂)的非晶态固体变为黄色糊状物。表6概述自非晶态蒸气扩散实验
获得的固体。
[0192]
表6-自非晶态蒸气扩散实验获得的固体的概述
[0193]
溶剂xrpd图观察结果etoh形式a白色/灰白色粉末丙酮形式a白色/灰白色粉末etoac形式a白色/灰白色粉末，略微粘于小瓶底部1,4-二噁烷形式a白色/灰白色粉末-湿质地甲苯形式a白色/灰白色粉末-粘于小瓶底部dmso形式a白色/灰白色粉末-湿质地mibk形式a白色/灰白色大块-粘于小瓶上水形式a黄色糊状物(湿)
[0194]
在对化合物(i)倍半琥珀酸盐的多晶型筛选中，使用多于10种结晶或成盐方法(包括利用非晶态固体的实验)生成固体。在化合物(i)倍半琥珀酸盐的多晶型筛选中仅观察到晶形a和非晶态固体。
[0195]
将非晶态固体(化合物(i)倍半琥珀酸盐)样品加热至140℃，然后冷却至室温。所得固体通过xrpd得知为晶形a。
[0196]
使非晶态固体(化合物(i)倍半琥珀酸盐)暴露于75％rh/40℃持续一周。固体的外观自浅米黄色固体变为硬黄色玻璃。固体的xrpd显示为晶形a。
[0197]
发现形式a在173℃的熔化起始下为结晶的，在干燥和湿度暴露下稳定，并在水和模拟流体中展示出高溶解度(》22mg/ml，在所有流体中。
[0198]
方法e：
[0199]
将在美国专利号10,233,186中公开的中间物6-(5-(4-乙氧基-1-异丙基哌啶-4-基)吡啶-2-基)-4-(哌嗪-1-基)吡咯并[1,2-b]哒嗪(3.5kg，7.8mol)溶于含有(r)-四氢呋喃-3-基1h-咪唑-1-甲酸酯(1.2当量)的乙酸异丙酯(ipac，2.75体积)中。将混合物加热并搅动直至完全转化。当反应用氨水(2体积)淬灭时，添加另外的ipac(4体积)。相分离，水洗涤并蒸馏，得到化合物(i)的干燥ipac溶液(约3.5kg，3体积)。在40-60℃下加热的同时，添加在乙醇中的琥珀酸(1.45当量，10体积)。将混合物加热至75-85℃，持续30分钟。冷却至70-75℃之后，将溶液用化合物(i)倍半琥珀酸盐接种，并经8小时冷却至10℃。通过过滤分离悬浮液，并用乙醇(2
×
3体积)洗涤，得到化合物(i)倍半琥珀酸盐形式a。
[0200]
2.2湿度暴露
[0201]
将实施例2.1中获得的倍半琥珀酸盐在40℃下暴露于75％相对湿度持续一周。将样品置于用覆盖的4ml小瓶中，接着置于含有3-4ml饱和nacl水溶液的20ml小瓶中。将20ml小瓶密封并保持在40℃下。一周后收集固体用于xrpd分析。在潮湿条件下一周后，形式a通过xrpd确定为物理稳定的。
[0202]
2.3 dvs
[0203]
dvs显示在25℃下2-95％相对湿度之间，质量变化为0.59-0.60重量％(图4)。相对湿度超过80％时发生0.34-0.35重量％的质量变化。dvs测量后的xrpd保持为形式a(图5)。
[0204]
dvs还是针对化合物(i)的游离碱完成(图24)，在25℃下，在2％与95％的相对湿度
之间，其展示0.88-0.92重量％的可逆质量变化。其中，相对湿度超过70％时发生0.46-0.53重量％的质量变化。
[0205]
2.4 vt-xrpd和vh-xrpd
[0206]
使用xrpd对化合物(i)倍半琥珀酸盐形式a进行的可变湿度实验显示，在湿度下未观察到晶体结构的变化(参见图6)。
[0207]
使用xrpd对化合物(i)倍半琥珀酸盐形式a进行的可变温度实验显示，在低于160℃(即熔点)下，未观察到结晶结构的变化(参见图7)。
[0208]
实施例3：1:1化合物(i)结晶hcl盐一水合物的制备和表征
[0209]
3.1制备
[0210]
方法a：
[0211]
首先将25-35mg化合物(i)游离碱称入2ml小瓶中。接着将溶剂添加至小瓶中(25体积或5体积)，然后添加ipa中的0.9摩尔当量、1.1摩尔当量、1.5摩尔当量、2.2摩尔当量和3.5摩尔当量的hcl储备溶液。
[0212]
初始，添加ipa:水(9:1体积)以得到总共25体积(包括hcl储备溶液的体积)。最初所有都形成溶液。1.1当量实验显示沉淀过夜，但所有其他沉淀仍保留在溶液中。这可能是由溶剂组成差异所致，因此将剩余溶液(0.9当量、1.5当量、2.2当量和3.5当量)在50℃下于大气压下蒸发至干，接着在50℃下于主动真空中蒸发约3小时。1.1当量的另一实验是以类似方式通过以下步骤制备：添加5体积的ipa和适量hcl储备溶液，然后在50℃下在弱真空中蒸发至干，随后在50℃下在主动真空中蒸发至干持续约3小时。
[0213]
向蒸发的固体中，添加25体积的etoac，并在室温下搅拌过夜。在所有情况下都形成浆液。浆液颜色自白色浆液(0.9当量)变至鲜艳/深黄色浆液(1.5当量及以上)。
[0214]
接着将浆液过滤并回收固体以进行xrpd分析。用0.9当量和1.1当量形成的盐通过xrpd显示为形式a(一盐酸盐)(图8)。使用1.3当量和1.5当量得到形式a(一盐酸盐)与形式b(双盐酸盐)的混合物。使用2.2当量和3.5当量得到形式b(双盐酸盐)。
[0215]
通过tga-dsc(图9)、1h nmr(图10)和单晶x射线晶体学(表7)进一步表征化合物(i)结晶hcl盐形式a。样品在dsc中显示在202.86℃下的熔化起始(图9)。tga热谱图显示熔化前2.81重量％的质量损失(与dsc中极宽的吸热有关)和熔化时0.44重量％的逐步质量损失。hcl盐的卡尔费歇尔滴定显示3.17重量％水，此支持所获得的结晶hcl盐为一水合物。hcl盐的一水合物中的理论水含量为3.0重量％。
[0216]
表7-1:1化合物(i)结晶hcl盐一水合物(形式a)的xrpd图的峰列表
[0217]
2θ(度)d间距(埃)相对强度(％)5.6915.53810.148.721512.637.001112.916.854213.796.421615.145.851617.025.2110018.984.6733
19.594.532120.324.371421.124.202822.174.011422.763.903523.353.811723.983.713624.803.591125.473.491726.123.41528.583.126
[0218]
方法b：
[0219]
将化合物(i)的游离碱(4.3kg)溶于乙酸异丙酯(5.5体积)和异丙醇(2.5体积)中。将混合物加热至回流并经0.75小时馈入hcl(16.5％-w/w在水中，0.95当量)。回流1小时后，将溶液在2小时内冷却至20-25℃，并保持0.5小时。通过过滤分离结晶产物，并用ipac、ipa和水混合物洗涤，得到1:1化合物(i)结晶hcl盐一水合物形式a。
[0220]
3.2湿度暴露
[0221]
将hcl盐一水合物形式a置于40℃/75％相对湿度下持续一周。将约10mg样品置于用覆盖的4ml小瓶中。接着将小瓶置于含有饱和氯化钠水溶液的20ml密封小瓶中。一周湿度暴露后，xrpd中观察到一些较小的峰位移。在一些长期浆液的xrpd图中还观察到峰移动，表明hcl盐一水合物形式a为通道水合物，并且峰位移可能是由于水含量的变化所致。
[0222]
在实验室里，自一周湿度暴露(75％rh和40℃)采样之日为低湿度(《25％rh)。
[0223]
在密封小瓶中(环境条件)放置14天后，再次对固体采样。通过xrpd得知，固体为1:1化合物(i)结晶hcl盐一水合物(形式a)。
[0224]
3.3 hcl盐一水合物形式a的dvs
[0225]
对hcl盐一水合物形式a进行dvs(图11)。在25℃下，2％与95％相对湿度之间，其展示1.30-1.43重量％的质量变化。其中，在低于20％相对湿度时发生0.99-1.11重量％的质量变化。
[0226]
在dvs测量后分析样品的xrpd(图12)。xrpd中存在hcl盐一水合物形式a的所有峰，但观察到额外的峰。
[0227]
3.4 vt-xrpd和vh-xrpd
[0228]
使用xrpd对hcl盐一水合物形式a进行的可变湿度实验示于图13中。在0％rh下观察到的小位移朝向约10
°
和13
°
(2θ)的峰中的较高角度(即较低d间距)，这与失水后的晶体结构收缩一致，因此与通道水合物一致。
[0229]
使用xrpd进行的可变温度实验示于图14中。这证实在衍射图中在100℃或更高温度下观察到的变化基本上是归因于热膨胀以及由于去除了水分子而引起的晶胞收缩。结晶结构似乎不像在结合水/结晶水存在时那样塌陷和/或重排，这再次与通道水合物一致。
[0230]
3.5暴露于干燥条件和再加湿
[0231]
将自实施例3.1获得的1:1化合物(i)结晶hcl盐一水合物暴露于各种干燥条件，接着通过xrpd分析。
[0232]
条件为：(1)在含有50℃的p2o5的小瓶中室温，(2)在真空中60℃，和(3)在dsc中加热至140℃。
[0233]
在所有三种情况下，均观察到新的xrpd图，其经鉴定为1:1化合物(i)hcl盐的无水形式。实验室中的相对湿度足以使工作台上的样品再水化。dvs直至相对湿度低于20％时才显示出明显的质量损失。
[0234]
在第7天，对暴露于50℃的p2o5的hcl盐采样以进行xrpd。采样后立即进行的xrpd显示形式d。将样品留在工作台上(22-23℃，28％rh)持续2.25小时，且通过xrpd分析。固体已转化为形式a。相同样品在工作台上放置过夜后通过xrpd进行分析，并通过xrpd确定保留为形式a。xrpd图示于图12中。
[0235]
实施例4：无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式d)的制备和表征
[0236]
4.1制备
[0237]
无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式d)通过在含有50℃的五氧化二磷的密封小瓶中对形式a(一水合物)进行长时间干燥来制备。具体而言，将100mg自实施例4.1获得的形式a(一水合物)置于干燥环境中4天。在采样前，将含有样品的4ml开口小瓶在含有50℃的p2o5的20ml密封小瓶中放置两天。xrpd将其鉴定为新晶形(形式d)(图15)。
[0238]
观察到，在暴露于环境条件(22℃，35％rh)下2.25小时后，形式d转化为形式a。因此，形式d的表征在最少暴露于环境条件下进行。
[0239]
形式d样品的dsc热谱图显示在202.4℃下发生吸热(图16)。形式d样品的tga显示1.10重量％的总质量损失(图16)。形式a(一水合物)还显示在脱水后的dsc吸热，在202-203℃下发生。
[0240]
卡尔费歇尔滴定表明，形式d样品的水含量为0.72重量％。形式d样品在显微镜下展示立方形态。形态与起始材料(形式a)没有显著差异。通过hplc，形式d样品的纯度为98.82面积％。
[0241]
湿度暴露(》90％rh过夜和74％rh/40℃一周)后，形式d转化为形式a(一水合物)。
[0242]
化合物(i)结晶hcl盐形式d通过1h nmr进一步表征(图17)。
[0243]
表8-无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式d)的xrpd图的峰列表。
[0244]
2θ(度)d间距(埃)相对强度(％)9.369.4489.799.02510.818.182913.056.782513.256.683013.896.371014.326.18515.245.81815.685.65516.625.3327
16.875.256317.355.112718.024.92118.834.716219.884.46120.844.262521.644.101822.184.0010023.693.75924.653.613126.043.421527.813.2112
[0245]
实施例5：无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式g)的制备和表征
[0246]
5.1制备
[0247]
在自ipa溶液以及自etoac和mtbe中的非晶态浆液快速冷却的同时，观察到形式g(低结晶度)。通过在ipa中快速冷却来扩大形式g的规模。在20ml小瓶中称量约200mg的原样hcl盐，并在50℃下搅拌的同时添加60体积的ipa。固体溶解，并将溶液转移至冰水(0℃)烧杯中。将溶液在0℃下用形式g样品接种。保留种子，但未形成浓稠浆液。将样品转移至-20℃的冰箱中，经周末，固体沉淀。
[0248]
所得浆液显得蓬松。过滤极其缓慢，且固体有些粘稠。由于过滤不良，所收集的固体相当湿。将收集的固体在50℃下于真空中干燥过夜。自规模扩大获得的固体的结晶度低于筛选期间观察到的那些(图18)。
[0249]
形式g的dsc热谱图显示两个吸热峰，分别在163.1℃和189.6℃下发生，然后分解(图19)。tga热谱图显示，在第一次吸热事件之前，初始逐渐质量损失为2.62重量％，然后在吸热事件发生期间质量损失较小(0.35重量％和0.07重量％)。独立dsc与耦合的dsc-tga数据充分吻合，并且在80-130℃之间显示出宽吸热。将形式g样品在dsc中加热至高于宽吸热，然后冷却至室温。在xrpd中未观察到变化。
[0250]
卡尔费歇尔滴定显示样品的水含量为2.79重量％。
[0251]
形式g样品的显微镜检查显示有大块固体和一些不规则/细颗粒。通过hplc，形式g样品的纯度为98.89面积％。
[0252]
形式g样品在高湿度环境(》90％rh)中部分转化为形式a过夜。一周湿度暴露(75％rh/40℃)之后，形式g是稳定的(通过xrpd)。
[0253]
表9-无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式g)的xrpd模式的峰列表。
[0254]
2θ(度)d间距(埃)相对强度(％)10.198.673812.846.897314.885.951415.505.711016.655.32100
17.355.113918.434.811719.374.58420.004.44120.514.331921.254.182622.024.032322.493.954724.253.672525.253.52526.043.42428.223.167
[0255]
实施例6：无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式i)的制备和表征
[0256]
6.1制备
[0257]
在无水溶剂体系(mtbe:ipa和环己烷:ipa)中进行成盐实验时观察到形式i。形式i通过在环己烷:ipa中进行成盐来扩大规模。首先在4ml小瓶中称量约200mg化合物(i)的游离碱，并添加15体积环己烷以形成浆液。经30分钟以0.55m的ipa溶液形式添加1.1摩尔当量的hcl。将hcl溶液以三个等分试样逐滴分配。在第一等分试样之后，形成黄色浆液，然后呈胶凝状态。添加最后两个等分试样后仍保持胶凝状态。接着将小瓶加热至45℃，保持1小时，并用形式i样品接种。接种后，将样品自然冷却至室温。接种后，观察到白色固体，并且在冷却至室温后，样品基本上为白色浆液，小瓶壁上带有一些黄色胶状物。将浆液过滤并用两体积的环己烷洗涤两次。
[0258]
形式i样品的dsc热谱图显示在180.5℃时发生吸热，然后在198℃时发生小吸热(图22)。tga热谱图显示熔化前2.34重量％的逐渐质量损失和熔化时0.26重量％的质量损失。
[0259]
独立dsc与耦合的dsc-tga数据充分吻合，并且还显示90-120℃之间的吸热。将形式i样品在dsc中加热至150℃，接着冷却至室温以进行xrpd分析。在xrpd图中没有观察到变化。所有峰均移至稍高的2θ，这可能是由于样品位移所致。
[0260]
卡尔费歇尔滴定显示，形式i样品的水含量为2.64重量％。
[0261]
显微镜检查显示细粉(针状物)和结块。通过hplc，形式i的纯度为99.51面积％。
[0262]
无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式i)的x射线粉末衍射(xrpd)图示于图21中。
[0263]
形式i样品在高湿度环境(》90％rh)中部分转化为形式a过夜。
[0264]
表10-无水1:1化合物(i)结晶hcl盐(形式i)的xrpd图的峰列表。
[0265][0266][0267]
实施例7：无水1:1化合物(i)结晶富马酸盐(形式a)的制备和表征
[0268]
7.1制备
[0269]
通过将化合物(i)的游离碱称入4ml小瓶中并添加1.1当量的富马酸来扩大富马酸盐形式a的规模。接着在室温下添加etoac(15体积)。固体大部分溶解(浆液变得极稀)，接着固体沉淀形成浓稠白色浆液。添加另外5体积的etoac以改善混合。将浆液加热至45℃，并在搅拌的同时保持两小时，然后自然冷却至室温。将浆液在室温下搅拌过夜。在过滤之前，浆液为浓稠白色浆液。将浆液过滤并用2体积的etoac洗涤两次，接着在50℃下在真空中干燥过夜。所获得的固体通过xrpd(参见图26和表11)、tga-dsc(图27)、1h-nmr(图28)进一步表征。
[0270]
表11-无水1:1化合物(i)结晶富马酸盐(形式a)的xrpd图的峰列表
[0271][0272][0273]
实施例8：无水1:1化合物(i)结晶富马酸盐(形式c)的制备和表征
[0274]
8.1制备
[0275]
在4ml小瓶中，将化合物(i)的游离碱添加至1.1当量的富马酸中。接着在室温下添加ipac(15体积)。固体大部分溶解(浆液变得极稀)，接着固体沉淀为灰白色浆液。将浆液加热至45℃，并在搅拌的同时保持两小时，然后自然冷却至室温。将浆液在室温下搅拌过夜。在过滤之前，浆液为浓稠白色浆液。将浆液过滤并用2体积的ipac洗涤两次，接着在50℃下于真空中干燥过夜。将所获得的固体进一步在etoh和etoac中制成浆液，并通过xrpd表征(参见图29和表12)。
[0276]
表12-无水1:1化合物(i)结晶富马酸盐(形式c)的xrpd图的峰列表
[0277][0278][0279]
实施例9：无水1:1化合物(i)结晶富马酸盐(形式d)的制备和表征
[0280]
9.1制备
[0281]
在4ml小瓶中，将化合物(i)的游离碱添加至1.1当量的富马酸中。接着在室温下添加ipac(15体积)。固体大部分溶解(浆液变得极稀)，接着固体沉淀为灰白色浆液。将浆液加热至45℃，并在搅拌的同时保持两小时，然后自然冷却至室温。将浆液在室温下搅拌过夜。在过滤之前，浆液为浓稠白色浆液。将浆液过滤并用2体积的ipac洗涤两次，接着在50℃下于真空中干燥过夜。将所获得的固体进一步在ipa:水(95:5体积)的混合物中制成浆液，并通过xrpd表征(参见图30和表13)。
[0282]
表13-无水1:1化合物(i)结晶富马酸盐(形式d)的xrpd图的峰列表
[0283]