一种刺五加多糖钙及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于药品制备领域，具体涉及一种刺五加多糖钙及其制备方法和应用，尤其涉及一种成本低、效果好的刺五加多糖钙及其制备方法和应用。


背景技术：

2.刺五加属五加科，与人参是同一科，主产地在东北山区，是东北地区特有的一种名贵中草药。其有效成份主要是紫丁香苷、刺五加苷e、黄酮类活性物质，具有益气健脾、补肾安神，对预防心、脑血管疾病，脾肾阳虚，体虚乏力，食欲不振，腰膝酸痛，失眠多梦有一定的疗效。
3.刺五加多糖为一种天然来源的免疫多糖，绿色、安全、无毒，同时具有免疫刺激活性，能诱导并增强机体的细胞免疫和体液免疫，作为一种免疫增强剂可提高机体的免疫反应。然而，目前刺五加多糖的使用过程当中存在有一些问题和不足。与其它植物多糖一样，刺五加多糖也存在机体内代谢过快和给药量大的问题；另外，还有部分的碱溶性多糖不容易被吸收；此外，针对刺五加制剂的开发只有刺五加黄酮脂质体、刺五加皂苷脂质体，但无刺五加多糖钙的研究；现有刺五加类保健功能效果不显著、制备方法及工艺复杂等不足。此外由于目前在制备刺五加注射液后的沉淀物直接废弃，也造成了污染和严重的浪费。
4.cn108323663a公开了一种刺五加多糖保健饮品及从五加参中提取刺五加多糖的方法，采用高压提取工艺提取五加参中的刺五加多糖，并采用聚酰胺树脂与大孔吸附树脂分离纯化工艺进一步纯化刺五加多糖；该发明刺五加多糖保健饮品中仅含有具有提高免疫力功能的多糖组分，有效活性成分含量高，杂质少，避免了传统中成药饮品中非有效成分潜在的致敏危险，以及复杂的药物成分给服用者肝肾带来的负担及损伤，制备出更具有针对性的高效低毒的保健饮品，通过保健饮品中各药物多糖的配伍使服用者的免疫力获得了更全面的增强。
5.cn105418785b公开了一种刺五加多糖的生产方法及其应用，具体方法为：原料经过预处理，用水提取，除杂后，通过聚酰胺树脂纯化吸附，合并下柱液以及水洗液浓缩后醇沉，冷冻干燥得到刺五加多糖。该发明得到多糖纯度高，操作简单，得率高，适用于工业化大生产，同时该多糖对结核性胸膜炎有较明显的治疗作用。
6.由于目前刺五加多糖的应用仍存在一些局限和问题。因此如何提供一种全新的刺五加多糖的应用方法，成为了亟待解决的问题。


技术实现要素：

7.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种刺五加多糖钙及其制备方法和应用，尤其提供一种成本低、效果好的刺五加多糖钙及其制备方法和应用。本发明提供的刺五加多糖钙具有益气健脾，补肾安神之功效，能够有效增强机体免疫力，改善骨质疏松，并且采用刺五加注射液工艺中分离得到的废弃沉淀物为原料，节约了成本和资源，减少了浪费和污染。
8.为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
9.第一方面，本发明提供了一种刺五加多糖钙的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
10.(1)将刺五加注射液工艺中分离得到的废弃沉淀物溶解，得到废弃沉淀物溶液，接着与蛋白沉淀剂混合，之后除去沉淀，将得到的上清液进行醇沉，之后将得到的沉淀干燥，得到刺五加多糖；
11.(2)将步骤(1)得到的刺五加多糖与钙盐混合溶解，调节ph反应，纯化得到所述刺五加多糖钙。
12.上述方法以刺五加注射液工艺中分离得到的废弃沉淀物为原料，既节约了成本和资源，又能减少浪费和污染。
13.所述废弃沉淀物可以示例性地由包括以下步骤的方法得到：
14.取刺五加药材粉碎称重，将称重后的刺五加料投入煎煮罐中。以纯化水为溶剂，加入投料量5-7倍纯化水，浸泡30min，煎煮微沸1h，放出药液至蒸发皿中，补加纯化水，连续提取4小时。将药液全部滤过转入石硫罐。待药液温度降至50℃以下，用20％石灰乳调节ph至10-12，充分搅拌后放置30min，复测ph值在10-12，用20％硫酸溶液缓慢加入药液中，调ph值至5-6，充分搅拌，复测ph值5-6时停止搅拌，并将药液转入沉淀罐中静置4h以上，抽取上清液转减压浓缩工序。将浓缩后的药液放入醇沉搅拌罐中，温度降至35-40℃，缓慢加入92-95％的乙醇水溶液，边加边搅拌，使药液含醇量达83-85％，充分搅拌密闭静置12h以上。采用板框过滤；中滤纸5层，过滤至澄明。澄清液用于刺五加注射液的制备，过滤的废弃沉淀物用于后续制备。
15.优选地，步骤(1)所述蛋白沉淀剂包括三氯乙酸、磺基水杨酸、乙醇或正丁醇中任意一种或至少两种的组合。
16.上述蛋白沉淀剂能够将废弃沉淀物中的蛋白除去，提高产品中刺五加多糖的纯度，进而提高产品刺五加多糖钙增强机体免疫力、改善骨质疏松的效果。
17.优选地，步骤(1)所述蛋白沉淀剂为三氯乙酸、磺基水杨酸和乙醇的组合。
18.上述特定蛋白沉淀剂的选择通过采用三氯乙酸、磺基水杨酸和乙醇三者复配，进一步提高了除去蛋白的效果，提高了产品刺五加多糖钙增强机体免疫力、改善骨质疏松的效果。
19.优选地，步骤(1)所述蛋白沉淀剂与废弃沉淀物溶液的质量比为2:(9-11)；
20.优选地，所述废弃沉淀物溶液的浓度为0.1-0.15g/ml。。
21.优选地，步骤(1)所述醇沉时加入的试剂为乙醇水溶液，所述乙醇水溶液的体积分数为90-95％；
22.优选地，步骤(1)所述上清液中乙醇的终浓度为70-75％。
23.优选地，步骤(1)所述醇沉的温度为0-6℃，时间为24-36h。
24.优选地，步骤(1)所述醇沉的次数为至少2次。
25.其中，蛋白沉淀剂与废弃沉淀物溶液的质量比可以是2:9、2:9.5、2:10、2:10.5或2:11等，废弃沉淀物溶液的浓度可以是0.1g/ml、0.11g/ml、0.12g/ml、0.13g/ml、0.14g/ml或0.15g/ml等，乙醇水溶液的体积分数可以是90％、91％、92％、93％、94％或95％等，上清液中乙醇的终浓度可以是70％、71％、72％、73％、74％或75％等，醇沉的温度可以是0℃、1
℃、2℃、3℃、4℃、5℃或6℃等，时间可以是24h、25h、26h、27h、28h、29h、30h、31h、32h、33h、34h、35h或36h等，醇沉的次数可以是2次、3次或4次等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
26.上述醇沉试剂及其参数能够有效将废弃沉淀物中的刺五加多糖提取出，提高了刺五加多糖的产量，提高了产品中刺五加多糖钙的含量，进而提高产品刺五加多糖钙增强机体免疫力、改善骨质疏松的效果。
27.优选地，步骤(2)所述钙盐包括氯化钙和/或氢氧化钙。
28.优选地，步骤(2)所述刺五加多糖与钙盐的质量比为5:(0.8-1.2)。
29.优选地，步骤(2)所述调节ph至ph为7-11。
30.优选地，步骤(2)所述反应的时间为0.5-2h。
31.其中，刺五加多糖与钙盐的质量比可以是5:0.8、5:0.9、5:1、5:1.1或5:1.2等，调节ph至ph可以是7、8、9、10或11等，反应的时间可以是0.5h、0.6h、0.7h、0.8h、0.9h、1h、1.1h、1.2h、1.3h、1.4h、1.5h、1.6h、1.7h、1.8h、1.9h或2h等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
32.第二方面，本发明提供了如上所述的刺五加多糖钙的制备方法制备得到的刺五加多糖钙。
33.第三方面，本发明还提供了如上所述的刺五加多糖钙在制备保健品或药品中的应用。
34.优选地，所述保健品、药品的剂型独立地包括口服液、片剂、胶囊剂或颗粒剂中任意一种。
35.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
36.本发明提供了一种刺五加多糖钙，通过以刺五加注射液工艺中分离得到的废弃沉淀物为原料，既节约了成本和资源，又能减少浪费和污染；采用蛋白沉淀剂能够将废弃沉淀物中的蛋白除去，提高产品中刺五加多糖的纯度，进而提高产品刺五加多糖钙增强机体免疫力、改善骨质疏松的效果；采用特定醇沉试剂及其参数能够有效将废弃沉淀物中的刺五加多糖提取出，提高了刺五加多糖的产量，提高了产品中刺五加多糖钙的含量，进而提高产品刺五加多糖钙增强机体免疫力、改善骨质疏松的效果。
具体实施方式
37.为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
38.以下示例中所用刺五加注射液工艺中分离得到的废弃沉淀物的制备方法如下：取刺五加药材粉碎称重，将称重后的刺五加料投入煎煮罐中。以纯化水为溶剂，加入投料量6倍纯化水，浸泡30min，煎煮微沸1h，放出药液至蒸发皿中，补加纯化水，连续提取4小时。将药液全部滤过转入石硫罐。待药液温度降至50℃以下，用质量分数20％石灰乳调节ph至11，充分搅拌后放置30min，复测ph值在10-12之间后，用质量分数20％硫酸溶液缓慢加入药液中，调ph值至5，充分搅拌，复测ph值在5-6之间时停止搅拌，并将药液转入沉淀罐中静置5h，抽取上清液转减压浓缩工序。将浓缩后的药液放入醇沉搅拌罐中，温度降至35-40℃之间，缓慢加入体积分数95％的乙醇水溶液，边加边搅拌，使药液含醇量达85％，充分搅拌密闭静
置13h。采用板框过滤；中滤纸5层，过滤至澄明。澄清液用于刺五加注射液的制备，过滤的废弃沉淀物用于后续制备。
39.实施例1
40.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法如下：
41.选用刺五加注射液工艺中分离得到的废弃沉淀物，加水搅拌至溶解，得到废弃沉淀物溶液，接着向所得溶液中加入三氯乙酸、磺基水杨酸、乙醇混合溶液(废弃沉淀物溶液(0.125g/ml)、三氯乙酸、磺基水杨酸、乙醇质量比为100:5:5:10)，边加边搅拌，出现沉淀，沉淀除去溶液中的蛋白，离心，弃沉淀，得上清液。向上清液中加入体积分数92％的乙醇溶液，至上清液酒精度为72％，4℃冷藏保存30h，重复两次，之后抽滤，得到沉淀物，干燥，即得刺五加多糖；
42.之后将刺五加多糖用水溶解，并加入氯化钙(刺五加多糖与氯化钙质量比为5:1)混合，之后加入氢氧化钠调节ph至9，反应1.2h，纯化、过滤干燥，即为刺五加多糖钙。
43.实施例2
44.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法如下：
45.选用刺五加注射液工艺中分离得到的废弃沉淀物，加水搅拌至溶解，得到废弃沉淀物溶液，接着向所得溶液中加入三氯乙酸(废弃沉淀物溶液(0.1g/ml)、三氯乙酸质量比为20:3)，边加边搅拌，出现沉淀，沉淀除去溶液中的蛋白，离心，弃沉淀，得上清液。向上清液中加入体积分数90％的乙醇溶液，至上清液酒精度为70％，0℃冷藏保存24h，重复两次，之后抽滤，得到沉淀物，干燥，即得刺五加多糖；
46.之后将刺五加多糖用水溶解，并加入氢氧化钙(刺五加多糖与氢氧化钙质量比为5:0.8)混合，之后加入氢氧化钠调节ph至7，反应2h，纯化、过滤干燥，即为刺五加多糖钙。
47.实施例3
48.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法如下：
49.选用刺五加注射液工艺中分离得到的废弃沉淀物，加水搅拌至溶解，得到废弃沉淀物溶液，接着向所得溶液中加入乙醇(废弃沉淀物溶液(0.15g/ml)、乙醇质量比为4:1)，边加边搅拌，出现沉淀，沉淀除去溶液中的蛋白，离心，弃沉淀，得上清液。向上清液中加入体积分数95％的乙醇溶液，至上清液酒精度为75％，6℃冷藏保存36h，重复三次，之后抽滤，得到沉淀物，干燥，即得刺五加多糖；
50.之后将刺五加多糖用水溶解，并加入氯化钙(刺五加多糖与氯化钙质量比为5:1.2)混合，之后加入氢氧化钠调节ph至11，反应0.5h，纯化、过滤干燥，即为刺五加多糖钙。
51.实施例4
52.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法中除不包含三氯乙酸、减少部分按比例分配给乙醇和磺基水杨酸外，其余与实施例1一致。
53.实施例5
54.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法中除不包含乙醇、减少部分按比例分配给三氯乙酸和磺基水杨酸外，其余与实施例1一致。
55.实施例6
56.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法中除不包含磺基水杨酸、减少部分按比例分配给乙醇和三氯乙酸外，其余与实施例1一致。
57.实施例7
58.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法中除不包含三氯乙酸和磺基水杨酸、减少部分分配给乙醇外，其余与实施例1一致。
59.实施例8
60.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法中除不包含乙醇和磺基水杨酸、减少部分分配给三氯乙酸外，其余与实施例1一致。
61.实施例9
62.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法中除不包含乙醇和三氯乙酸、减少部分按比例分配给磺基水杨酸外，其余与实施例1一致。
63.实施例10
64.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法中除将乙醇替换为等量的正丁醇外，其余与实施例1一致。
65.实施例11
66.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法中除上清液酒精度为70％外，其余与实施例1一致。
67.实施例12
68.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法中除上清液酒精度为75％外，其余与实施例1一致。
69.实施例13
70.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法中除上清液酒精度为65％外，其余与实施例1一致。
71.实施例14
72.本实施例提供了一种刺五加多糖钙，制备方法中除上清液酒精度为80％外，其余与实施例1一致。
73.效果验证：
74.检测并计算实施例1-14提供的刺五加多糖钙的产率和钙的含量，结果如下：
75.组别产率(％)钙含量(％)组别产率(％)钙含量(％)实施例155.314.48实施例843.210.35实施例243.39.2实施例938.97.26实施例336.36.64实施例1034.86.2实施例446.511.63实施例1149.813.56实施例544.811.24实施例1249.412.73实施例637.87.05实施例1340.78.24实施例735.76.92实施例1441.98.91
76.以上结果表明本发明提供的方法得到的刺五加多糖钙产率高、钙含量高，进而反映所得产品刺五加多糖钙纯度高；比较实施例1和实施例4-10可以发现，本发明通过选择乙醇、三氯乙酸和磺基水杨酸三者复配，相比其他蛋白沉淀剂进一步提高了从废弃沉淀物中去除蛋白的效果，提高了产品的产率和钙含量；比较实施例1和实施例11-14可以发现，本发明通过控制醇沉时醇的浓度，能够进一步将除去蛋白后的废弃沉淀物中的刺五加多糖提取
出，提高了产品的产量和钙含量。
77.免疫功能验证：
78.选择昆明种小鼠170只，体重20-22g，随机分为17组，每组10只，雌雄对半，分别注射实施例1-14提供的刺五加多糖钙水溶液(100mg/kg)、环磷酰胺(100mg/kg)、实施例1提供的刺五加多糖钙和环磷酰胺混合水溶液(注射量各为100mg/kg，试验组)、等量生理盐水(空白对照)，每日腹腔注射1次，连续给药5天。于末次给药24小时后，用颈椎脱臼法处死小鼠，称重。分别取脾脏和淋巴组织部分组织，精密称重后制成细胞悬浮液，显微镜下计数换算成各脏器细胞总数，并计算平均值，结果如下：
[0079][0080]
以上数据表明，本发明提供的刺五加多糖钙能够有效促进脾脏和淋巴组织细胞的增多，提高机体的免疫力；比较实施例1和实施例4-10可以发现，本发明通过选择乙醇、三氯乙酸和磺基水杨酸三者复配，相比其他蛋白沉淀剂进一步提高了从废弃沉淀物中去除蛋白的效果，提高了产品的纯度和产率，进而提高了对机体免疫力提升的能力；比较实施例1和实施例11-14可以发现，本发明通过控制醇沉时醇的浓度，能够进一步将除去蛋白后的废弃沉淀物中的刺五加多糖提取出，提高了产品的产量和纯度，进而提高了对机体免疫力提升的能力；比较实施例1、环磷酰胺组、空白对照组和试验组可以发现，环磷酰胺能够有效抑制小鼠的免疫能力，而当环磷酰胺与本发明提供的刺五加多糖钙混用时，能够提高小鼠的免疫能力至与正常情况相当的水平，充分说明本发明制备方法提供的刺五加多糖钙能够有效提高机体的免疫力。
[0081]
改善骨密度功能性验证：
[0082]
选取体重相当wister大鼠160只，使用维甲酸70mg/kg灌胃，每日一次，连续喂养4周，建立大鼠骨质疏松模型，将大鼠随机分为16组，每组10只，雌雄对半，对每组小鼠分别采用实施例1-14、生理盐水和市售钙片进行灌胃(每次150mg)，每天一次，每周称重一次，连续喂养12周，末次给药后24h，腹腔注射质量分数4％戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉大鼠，经x线处死大鼠，剖取大鼠股骨，在骨密度仪上测定骨密度及切片染色观察，结果如下：
[0083][0084]
以上结果表明本发明提供的刺五加多糖钙能够有效改善骨质疏松的症状；比较实施例1和实施例4-10可以发现，本发明通过选择乙醇、三氯乙酸和磺基水杨酸三者复配，相比其他蛋白沉淀剂进一步提高了从废弃沉淀物中去除蛋白的效果，提高了产品的纯度和产率，进而提高了单位产品的含钙量，提高了对骨质疏松的治疗效果；比较实施例1和实施例11-14可以发现，本发明通过控制醇沉时醇的浓度，能够进一步将除去蛋白后的废弃沉淀物中的刺五加多糖提取出，提高了产品的产量和纯度，进而提高了单位产品的含钙量，提高了对骨质疏松的治疗效果。
[0085]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的刺五加多糖钙及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
[0086]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0087]
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。