一种包含甜菜复合植物酵素的口服美白组合物及其用途的制作方法

1.本发明属于功能性食品技术领域，具体涉及一种包含甜菜复合植物酵素的口服美白组合物及其在制备美白产品中的用途。


背景技术：

2.黑色素是由动物黑色素细胞合成的生物色素，可以吸收紫外线从而保护皮肤免受紫外线的伤害。然而，长期暴露于紫外线以及生活压力增加、作息时间不规律或者使用劣质化妆品等因素均会导致人体黑色素细胞合成黑色素能力失调，造成各种色素沉积失常，比如晒斑、黄褐斑等等。色素失常不仅严重影响面容美观，也会对患者带来一定的精神压力和心理问题。
3.目前的皮肤增白产品的施用途径主要包括外用涂抹、口服和美白针，例如皮肤涂抹使用具有抑制黑色素小体转运作用的代表性成分烟酰胺，但是外用美白产品通常效果较差且起效较慢。美白针最为常用的是以曲酸、传明酸或熊果苷为活性成分，通过从根本上抑制黑色素的合成达到增白的目的。由于美白针美白的效果立竿见影，因而其一经面市即得到众多明星和爱美人士的追捧，但是美白针目前存在很大争议，有很多专业人士认为其存在非常大的安全性风险。可见，目前外用和注射美白产品使用的活性成分不尽如人意，其或多或少都存在安全性和有效性方面的缺陷。因此，开发新的安全、高效、食品级的口服美白产品具有重大的应用价值和商业价值。
4.植物酵素又称植物发酵液，是以新鲜蔬菜、水果、药食同源中药等植物为原料，经过榨汁或萃取等一系列工艺后，再添加酵母菌、乳酸菌等发酵菌株进行发酵所产生的含有丰富的糖类、有机酸、矿物质、维生素、酚类、萜类等营养成分以及一些重要的酶类生物活性物质的混合发酵液。植物酵素通常具有帮助人体改善胃肠功能，促进细胞营养吸收，激活细胞活力，中和体内过多自由基，提高人体免疫力的功效。但是，由于不同植物酵素选用的原料、酶、菌种以及具体制备工艺不同，导致植物酵素中所含的主要活性成分以及其功效也有很大差异。
5.甜菜(beta vulgaris l.)是藜科植物，原产于亚洲和欧洲，中国主要分布在新疆、黑龙江、内蒙古等地，具有很高的营养价值和药用价值，作为天然药物使用的报道可以追溯到罗马时代。在东欧、南美、澳大利亚，甜菜是一种很受欢迎的食物，在中国，甜菜是主要的糖料作物之一。多项研究表明，甜菜含有丰富的化学成分，包括甜菜红素、甜菜碱、矿物质、抗坏血酸、类胡萝卜素、酚酸和类黄酮等，具有抗炎、抗氧化、抗应激、抗焦虑、抗抑郁、抗癌、降压等药理活性。
6.枸杞为茄科植物宁夏枸杞lycium barbarum l.的干燥成熟果实，在我国主要分布在西北地区，枸杞是享誉国内外的保健食品之一，有丰富的营养和药用价值，也是我国最早的药食同源品种之一。枸杞中含有多糖、黄酮多酚、类胡萝卜素、生物碱等多种化学成分，其药理活性和应用也在不断拓展，如抗氧化、抗肿瘤、保肝、神经保护等。
7.覆盆子为蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子rubus chingiihu的干燥成熟果实，主
要分布于我国江西、安徽、江苏、浙江和福建，具有益肾固精缩尿、养肝明目等功效。其主要成分包括萜类、黄酮类、有机酸类和多糖等，现代药理学研究表明，覆盆子提取物具有抗氧化和降糖等多种活性，且覆盆子提取物对酪氨酸酶具有显著抑制作用。
8.透明质酸钠是人体内一种固有成分，其是一种葡聚糖醛酸，没有种属特异性，其广泛存在于胎盘、羊水、晶状体、关节软骨、皮肤真皮层等组织和器官中。此前，透明质酸钠在化妆品领域主要是以外用方式使用。2021年1月7日，国家卫生健康委官网发布“三新食品”公告，正式批准由华熙生物申报的透明质酸钠作为新食品原料的请求，准许在普通食品中添加使用，由此开启了“口服”透明质酸的时代。从华熙生物可食用透明质酸开始，很多护肤品牌均推出了相关口服透明质酸产品，例如，自然阳光公司于2021年10月推出水光pro透明质酸钠饮品，仁和药业也推出了仁和透明质酸钠草本酵素饮。
9.但是，目前市场上尚无主要包含由甜菜根、枸杞和覆盆子为原料制成的甜菜复合植物酵素和透明质酸钠的组合物制成的口服美白产品。该组合配伍发酵的产品富含多酚、多糖、黄酮和氨基酸等多种活性成分，再添加食品级透明质酸钠，可以从抗氧化、清除羟自由基、抑制酪氨酸激酶等多种途径实现皮肤美白作用，同时对于皮肤抗衰老和保湿也有显著作用，是一款健康复合功效饮品。


技术实现要素：

10.为了解决现有技术中口服美白产品不足的问题，本发明人提供了一种以甜菜复合植物酵素为主要活性成分的美白组合物，该组合物通过以特定用量比例将主要活性成分甜菜复合植物酵素与辅助成分透明质酸钠组合，显著增强了甜菜复合植物酵素的皮肤美白作用，从而研制出一种安全、高效、食品级的口服美白产品。
11.具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本发明：
12.在第一个方面中，本发明提供了一种口服美白组合物，所述组合物包含甜菜复合植物酵素和透明质酸钠，所述甜菜复合植物酵素和所述透明质酸钠的重量比为(10-20)：(0.5-1)，其中所述甜菜复合植物酵素是用于皮肤美白作用的主要活性成分，所述透明质酸钠是用于皮肤美白作用的辅助成分，所述透明质酸钠增强所述甜菜复合植物酵素的皮肤美白作用，所述透明质酸钠的分子量分布组成为：小于10kda占比20％，10-100kda占比40％，100-300kda占比30％，300-1000kda占比10％。
13.作为可选的方式，在上述口服美白组合物中，所述甜菜复合植物酵素和所述透明质酸钠的重量比为20：1，所述甜菜复合植物酵素由甜菜根、枸杞和覆盆子制成，其中，所述甜菜根、枸杞和覆盆子的重量比为(50-100)：(4-20)：(2-10)。
14.优选地，所述甜菜根、枸杞和覆盆子的重量比为100：10：5。
15.作为可选的方式，在上述口服美白组合物中，所述甜菜复合植物酵素的制备方法包括以下步骤：
16.1)将甜菜根洗净送入果浆机打浆得果浆，加入0.1-0.3％的果胶酶，进行酶处理1-3小时，过滤去渣，得果汁；
17.2)将步骤1)得到的果汁，枸杞和覆盆子按一定比例破碎成混合粉粒，糖和抗坏血酸加入到溶剂中，制备成发酵培养基，灭菌；
18.3)接入发酵菌种发酵3-15天；
19.4)将所得的发酵液，经过滤去除残渣收集上清液，得到甜菜复合植物酵素。
20.作为可选的方式，在上述口服美白组合物中，
21.在步骤1)中，所述甜菜根为藜科beta vulgaris l.的根茎，所述酶处理的温度为50℃；
22.在步骤2)中，所述枸杞和所述覆盆子的重量比为2：1，所述溶剂为蒸馏水或乙醇，所述糖为蔗糖、麦芽糖、果糖或葡萄糖中的一种或多种，所述发酵培养基包含以重量百分比计的不小于70％的在步骤1)中由甜菜根制成的果汁，0.5-10％的糖，0.005-0.02％的抗坏血酸，2-10％的枸杞和覆盆子混合粉粒及余量的蒸馏水，所述灭菌温度为105℃，灭菌时间为20min；
23.在步骤3)中，所发酵菌种为红茶菌或酵母菌，所述发酵菌种的加入量占所述发酵培养基重量的5-20％，发酵温度为20-30℃。
24.作为可选的方式，在上述口服美白组合物中，在步骤2)中还包含对步骤1)得到的果汁进行处理的步骤，在处理过程中使用的所述溶剂为乙醇，乙醇溶液的体积浓度为80％，步骤1)得到的果汁与乙醇溶液的重量比为1：5-1：10，将步骤1)得到的果汁加入到乙醇溶液中，回流提取后利用旋转蒸发仪回收乙醇，再将经处理后得到的果汁提取物、枸杞和覆盆子按一定比例破碎成的混合粉粒、糖、抗坏血酸和蒸馏水混合。
25.或者，作为可选的方式，在上述口服美白组合物中，在步骤2)中还包含对步骤1)得到的果汁进行处理的步骤，在处理过程中使用的所述溶剂为蒸馏水，步骤1)得到的果汁与蒸馏水的重量比为1：10-1：20，超声波辅助提取30-120min后，再将经处理后得到的果汁提取物、枸杞和覆盆子按一定比例破碎成的混合粉粒、糖、抗坏血酸和蒸馏水混合。
26.在第二个方面中，本发明提供了上述第一个方面所述的口服美白组合物在制备皮肤增白产品中的用途。
27.另外地，本发明还提供了上述第一个方面所述的口服美白组合物在制备抑制黑色素合成的产品中的用途。
28.另外地，本发明还提供了上述第一个方面所述的口服美白组合物在制备改善皮肤色素沉着的产品中的用途。
29.作为可选的方式，在上述用途中，所述皮肤色素沉着为无规律皮肤色素沉着。
30.优选地，所述无规律皮肤色素沉着是老年斑、雀斑、黑斑、黄褐斑、晒斑或蝴蝶斑中的一种或多种。
31.作为可选的方式，在上述用途中，所述产品由上述第一个方面所述的口服美白组合物以及功能性食品领域可接受的辅料制成。
32.作为可选的方式，在上述用途中，所述产品为口服液或口服粉剂。
33.应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一赘述。
34.本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：
35.(1)本发明通过以特定用量比例将主要活性成分甜菜复合植物酵素与辅助成分透明质酸钠组合，显著增强了甜菜复合植物酵素的皮肤美白作用，从而研制出一种安全、高效、食品级的口服美白产品。
36.(2)实验结果表明，包含甜菜复合植物酵素和透明质酸钠的本发明组合物能够有效清除自由基并且对黑色素的合成具有显著的抑制作用，效果显著优于市场上的同类产品以及甜菜复合植物酵素单独使用。
具体实施方式
37.本发明在对甜菜复合植物酵素的美白作用的深入研究中，通过大量筛选，意外地发现了能够显著提供甜菜复合植物酵素皮肤增白作用的方法，研制出一种安全、高效、食品级的包含甜菜复合植物酵素的口服美白产品。
38.如本文所用，“辅助成分”通常指不具有或几乎不具有目标活性，但是能够增强主要活性成分目标活性的物质。本发明的目标活性主要是皮肤增白作用。
39.制备本发明所述甜菜复合植物酵素的主要植物原料具有以下功效：
40.如本文所用，“甜菜根”还可以叫作红甜菜。“甜菜根”色泽鲜艳、肉质脆嫩且营养丰富。其中富含丰富的钾、磷及容易消化吸收的糖，可促进肠胃道的蠕动；具有天然红色维生素及铁质，有补血的功效；具有的维生素c可将肠内三价铁还原成二价铁而促进铁的吸收；还具有调养视力、老花眼的功效，能够防止维生素a引起的各类眼病。还富含粗蛋白、可溶性糖、粗脂肪、膳食纤维、维生素c、烟酸等，含有钾、钠、磷、镁、铁、钙，锌、锰、铜等矿物质。
41.如本文所用，“枸杞”一直被用作重要的中药材和食品补充剂。枸杞富含各种维生素、氨基酸、多糖和生物活性物质，具有非常好的保健功能。枸杞可以预防慢性疾病，如高胆固醇血症、糖尿病、干眼、慢性肝病、糖尿病和肾脏疾病等，还具有提高免疫力，预防衰老，增加新陈代谢，抗氧化等保健功能。
[0042]“覆盆子”是中国药典收录的大宗中药材，可药食两用。覆盆子具有显著的抗肿瘤、抗氧化、降血糖血脂、抗炎、抗血栓和抗衰老等多种作用。覆盆子在临床上常用于遗尿尿频、遗精滑精、阳痿早泄等疾病的治疗，被称为金玉之品。
[0043]
下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明的范围。
[0044]
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
[0045]
下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
[0046]
制备实施例：
[0047]
1.甜菜复合植物酵素的制备
[0048]
制备例1：
[0049]
1)将100kg甜菜根(藜科beta vulgaris l.的根茎)洗净送入果浆机打浆得果浆，加入0.2％的果胶酶，50℃进行酶处理2小时，过滤去渣，得果汁；
[0050]
2)将步骤1)得到的果汁，10kg枸杞和5kg覆盆子破碎成混合粉粒，麦芽糖和抗坏血酸加入到蒸馏水中，制备成发酵培养基，在步骤2)中还包含对步骤1)得到的果汁进行处理的步骤，在处理过程中使用的所述溶剂为乙醇，乙醇溶液的体积浓度为80％，步骤1)得到的果汁与乙醇溶液的重量比为1：10，将步骤1)得到的果汁加入到乙醇溶液中，回流提取后利
用旋转蒸发仪回收乙醇，再将经处理后得到的果汁提取物、枸杞和覆盆子破碎成的混合粉粒、麦芽糖、抗坏血酸和蒸馏水混合，所述发酵培养基包含以重量百分比计80％的甜菜根果汁提取物，8％的麦芽糖，0.01％的抗坏血酸，10％的枸杞和覆盆子混合粉粒及余量的蒸馏水，灭菌，所述灭菌温度为105℃，灭菌时间为20min；
[0051]
3)接入发酵菌种发酵10天，所发酵菌种为红茶菌，所述发酵菌种的加入量占所述发酵培养基重量的10％，发酵温度为25℃；
[0052]
4)将所得的发酵液，经过滤去除残渣收集上清液，得到甜菜复合植物酵素。
[0053]
制备例2：
[0054]
1)将100kg甜菜根(藜科beta vulgaris l.的根茎)洗净送入果浆机打浆得果浆，加入0.2％的果胶酶，50℃进行酶处理2小时，过滤去渣，得果汁；
[0055]
2)将步骤1)得到的果汁，10kg枸杞和5kg覆盆子破碎成混合粉粒，麦芽糖和抗坏血酸加入到蒸馏水中，制备成发酵培养基，在步骤2)中还包含对步骤1)得到的果汁进行处理的步骤，在处理过程中使用的所述溶剂为蒸馏水，步骤1)得到的果汁与蒸馏水的重量比为1：10，超声波辅助提取30-120min后，再将经处理后得到的果汁提取物、枸杞和覆盆子破碎成的混合粉粒、麦芽糖、抗坏血酸和蒸馏水混合，所述发酵培养基包含以重量百分比计80％的甜菜根果汁提取物，8％的麦芽糖，0.01％的抗坏血酸，10％的枸杞和覆盆子混合粉粒及余量的蒸馏水，灭菌，所述灭菌温度为105℃，灭菌时间为20min；
[0056]
3)接入发酵菌种发酵10天，所发酵菌种为酵母菌，所述发酵菌种的加入量占所述发酵培养基重量的10％，发酵温度为25℃；
[0057]
4)将所得的发酵液，经过滤去除残渣收集上清液，得到甜菜复合植物酵素。
[0058]
比较制备例1：
[0059]
1)将100kg甜菜根(藜科beta vulgaris l.的根茎)洗净送入果浆机打浆得果浆，加入0.2％的果胶酶，50℃进行酶处理2小时，过滤去渣，得果汁；
[0060]
2)将步骤1)得到的果汁，麦芽糖和抗坏血酸加入到蒸馏水中，制备成发酵培养基，在步骤2)中还包含对步骤1)得到的果汁进行处理的步骤，在处理过程中使用的所述溶剂为乙醇，乙醇溶液的体积浓度为80％，步骤1)得到的果汁与乙醇溶液的重量比为1：10，将步骤1)得到的果汁加入到乙醇溶液中，回流提取后利用旋转蒸发仪回收乙醇，再将经处理后得到的果汁提取物、麦芽糖、抗坏血酸和蒸馏水混合，所述发酵培养基包含以重量百分比计80％的甜菜根果汁提取物，8％的麦芽糖，0.01％的抗坏血酸及余量的蒸馏水，灭菌，所述灭菌温度为105℃，灭菌时间为20min；
[0061]
3)接入发酵菌种发酵10天，所发酵菌种为红茶菌，所述发酵菌种的加入量占所述发酵培养基重量的10％，发酵温度为25℃；
[0062]
4)将所得的发酵液，经过滤去除残渣收集上清液，得到比较植物酵素。
[0063]
比较制备例2：
[0064]
1)将10kg枸杞和5kg覆盆子破碎成混合粉粒，麦芽糖和抗坏血酸加入到蒸馏水中，制备成发酵培养基，所述发酵培养基包含以重量百分比计8％的麦芽糖，0.01％的抗坏血酸，10％的枸杞和覆盆子混合粉粒及余量的蒸馏水，灭菌，所述灭菌温度为105℃，灭菌时间为20min；
[0065]
2)接入发酵菌种发酵10天，所发酵菌种为红茶菌，所述发酵菌种的加入量占所述
发酵培养基重量的10％，发酵温度为25℃；
[0066]
3)将所得的发酵液，经过滤去除残渣收集上清液，得到比较复合植物酵素。
[0067]
比较制备例3：
[0068]
1)将100kg甜菜根(藜科beta vulgaris l.的根茎)洗净送入果浆机打浆得果浆，加入0.2％的纤维素酶，50℃进行酶处理2小时，过滤去渣，得果汁；
[0069]
2)将步骤1)得到的果汁，10kg枸杞和5kg覆盆子破碎成混合粉粒，麦芽糖和抗坏血酸加入到蒸馏水中，制备成发酵培养基，在步骤2)中还包含对步骤1)得到的果汁进行处理的步骤，在处理过程中使用的所述溶剂为乙醇，乙醇溶液的体积浓度为80％，步骤1)得到的果汁与乙醇溶液的重量比为1：10，将步骤1)得到的果汁加入到乙醇溶液中，回流提取后利用旋转蒸发仪回收乙醇，再将经处理后得到的果汁提取物、枸杞和覆盆子破碎成的混合粉粒、麦芽糖、抗坏血酸和蒸馏水混合，所述发酵培养基包含以重量百分比计80％的甜菜根果汁提取物，8％的麦芽糖，0.01％的抗坏血酸，10％的枸杞和覆盆子混合粉粒及余量的蒸馏水，灭菌，所述灭菌温度为105℃，灭菌时间为20min；
[0070]
3)接入发酵菌种发酵10天，所发酵菌种为红茶菌，所述发酵菌种的加入量占所述发酵培养基重量的10％，发酵温度为25℃；
[0071]
4)将所得的发酵液，经过滤去除残渣收集上清液，得到甜菜复合植物酵素。
[0072]
比较制备例4：
[0073]
1)将100kg甜菜根(藜科beta vulgaris l.的根茎)洗净送入果浆机打浆得果浆，加入0.2％的果胶酶，50℃进行酶处理2小时，过滤去渣，得果汁；
[0074]
2)将步骤1)得到的果汁，10kg枸杞和5kg覆盆子破碎成混合粉粒，麦芽糖和抗坏血酸加入到蒸馏水中，制备成发酵培养基，在步骤2)中还包含对步骤1)得到的果汁进行处理的步骤，在处理过程中使用的所述溶剂为乙醇，乙醇溶液的体积浓度为80％，步骤1)得到的果汁与乙醇溶液的重量比为1：10，将步骤1)得到的果汁加入到乙醇溶液中，回流提取后利用旋转蒸发仪回收乙醇，再将经处理后得到的果汁提取物、枸杞和覆盆子破碎成的混合粉粒、麦芽糖、抗坏血酸和蒸馏水混合，所述发酵培养基包含以重量百分比计80％的甜菜根果汁提取物，8％的麦芽糖，0.01％的抗坏血酸，10％的枸杞和覆盆子混合粉粒及余量的蒸馏水，灭菌，所述灭菌温度为105℃，灭菌时间为20min；
[0075]
3)接入发酵菌种发酵10天，所发酵菌种为枯草芽孢杆菌，所述发酵菌种的加入量占所述发酵培养基重量的10％，发酵温度为25℃；
[0076]
4)将所得的发酵液，经过滤去除残渣收集上清液，得到甜菜复合植物酵素。
[0077]
2.本发明口服美白组合物的制备
[0078]
实施例1：
[0079]
一种口服美白组合物，其包含甜菜复合植物酵素和透明质酸钠，所述甜菜复合植物酵素和所述透明质酸钠的重量比为20：1，所述透明质酸钠的分子量分布组成为：小于10kda占比20％，10-100kda占比40％，100-300kda占比30％，300-1000kda占比10％，所述甜菜复合植物酵素是采用制备例1中所述方法制备得到的。
[0080]
实施例2：
[0081]
一种口服美白组合物，其包含甜菜复合植物酵素和透明质酸钠，所述甜菜复合植物酵素和所述透明质酸钠的重量比为20：1，所述透明质酸钠的分子量分布组成为：小于
10kda占比20％，10-100kda占比40％，100-300kda占比30％，300-1000kda占比10％，所述甜菜复合植物酵素是采用制备例2中所述方法制备得到的。
[0082]
比较实施例1：
[0083]
一种口服美白组合物，其包含甜菜复合植物酵素和透明质酸钠，所述甜菜复合植物酵素和所述透明质酸钠的重量比为20：1，所述透明质酸钠的分子量分布组成为：小于10kda占比20％，10-100kda占比40％，100-300kda占比30％，300-1000kda占比10％，所述甜菜复合植物酵素是采用比较制备例1中所述方法制备得到的。
[0084]
比较实施例2：
[0085]
一种口服美白组合物，其包含甜菜复合植物酵素和透明质酸钠，所述甜菜复合植物酵素和所述透明质酸钠的重量比为20：1，所述透明质酸钠的分子量分布组成为：小于10kda占比20％，10-100kda占比40％，100-300kda占比30％，300-1000kda占比10％，所述甜菜复合植物酵素是采用比较制备例2中所述方法制备得到的。
[0086]
比较实施例3：
[0087]
一种口服美白组合物，其包含甜菜复合植物酵素和透明质酸钠，所述甜菜复合植物酵素和所述透明质酸钠的重量比为20：1，所述透明质酸钠的分子量分布组成为：小于10kda占比20％，10-100kda占比40％，100-300kda占比30％，300-1000kda占比10％，所述甜菜复合植物酵素是采用比较制备例3中所述方法制备得到的。
[0088]
比较实施例4：
[0089]
一种口服美白组合物，其包含甜菜复合植物酵素和透明质酸钠，所述甜菜复合植物酵素和所述透明质酸钠的重量比为20：1，所述透明质酸钠的分子量分布组成为：小于10kda占比20％，10-100kda占比40％，100-300kda占比30％，300-1000kda占比10％，所述甜菜复合植物酵素是采用比较制备例4中所述方法制备得到的。
[0090]
比较实施例5：
[0091]
一种口服美白组合物，其仅包含甜菜复合植物酵素，其在所述美白组合物中的用量与实施例1相同，所述甜菜复合植物酵素是采用制备例1中所述方法制备得到的。
[0092]
比较实施例6：
[0093]
一种口服美白组合物，其仅包含透明质酸钠，其在所述美白组合物中的用量与实施例1相同，所述透明质酸钠的分子量分布组成为：小于10kda占比20％，10-100kda占比40％，100-300kda占比30％，300-1000kda占比10％。效果实施例：
[0094]
1.本发明口服美白组合物的超氧化物歧化酶(sod)含量测定
[0095]
1.1.实验材料
[0096]
实施例1-2以及比较实施例1-6中制备得到的口服美白组合物。
[0097]
1.2.实验方法
[0098]
参考王光亚主编的《保健食品功效成分检测方法》检测实施例1-2以及比较实施例1-6中制备得到的口服美白组合物中sod的含量。
[0099]
1.3.实验结果
[0100]
实验结果如表1中所示。
[0101]
表1：本发明口服美白组合物中的sod含量(平均值
±
sd)
[0102]
组别sod含量(u/g)
实施例126031
±
1605实施例225948
±
1547比较实施例116614
±
1106比较实施例26709
±
819比较实施例310331
±
1267比较实施例48641
±
1082比较实施例524944
±
1516比较实施例61042
±
191
[0103]
从表1中测得的结果可以看出，实施例1-2所示的本发明口服美白组合物具有较高sod含量，因此可知本发明口服美白组合物具有较强的抗氧化作用。
[0104]
从上述实验结果可以看出，本发明口服美白组合物的抗氧化作用主要来自于甜菜复合植物酵素组分，其中仅含透明质酸钠的比较实施例6的sod含量仅为1042
±
191u/g，仅含甜菜复合植物酵素的比较实施例5的sod含量(24944
±
1516u/g)与实施例1和实施例2差别不大。
[0105]
此外，从上述实验结果还可以看出，甜菜复合植物酵素中的甜菜根、枸杞和覆盆子之间在抗氧化作用方面具有协同增效作用，将甜菜根与枸杞和覆盆子组合制成的复合植物酵素(见实施例1和实施例2)的抗氧化作用显著高于甜菜根植物酵素(见比较实施例1)或枸杞和覆盆子的复合植物酵素(比较实施例2)。
[0106]
并且，从上述实验结果还可以看出，甜菜复合植物酵素制备过程中使用的酶和发酵菌的种类对于复合植物酵素的抗氧化活性也具有较大影响(见比较实施例3和比较实施例4)。
[0107]
2.本发明口服美白组合物抑制色素合成的动物研究
[0108]
2.1.主要实验药品和动物
[0109]
实施例1-2以及比较实施例5-6所述口服美白组合物，由江西熙帝生物科技有限公司提供。仁和透明质酸钠草本酵素饮是市售产品，购自仁和药业股份有限公司。balb/c小鼠，购自广东省医学实验动物中心。
[0110]
2.实验动物分组和实验方法
[0111]
将检疫合格的实验小鼠，随机分为6组，每组10只：第1组为溶剂对照组，第2组为实施例1组，第3组为实施例2组，第4组为比较实施例5组，第5组为比较实施例6组，第6组为阳性对照组。
[0112]
其中，第2组至第5组均为在给药前使用蒸馏水稀释实施例1-2以及比较实施例5-6中所述的口服美白组合物，制备上述口服美白组合物以重量百分比计占10％的溶液。第1组至第5组小鼠均每天灌胃给药一次，每次0.5ml/小鼠，第1组给予蒸馏水，第2组至第5组给予上述制备得到的美白组合物口服液。第6组小鼠每天灌胃给予一次仁和透明质酸钠草本酵素饮，每次0.5ml/小鼠。共给予4周。
[0113]
4周后，麻醉小鼠，用剃毛器剔除腹部被毛，取皮肤组织3
×
3cm，10倍匀浆后，取500μl混合物，离心后去除上层液体。将小球状的表皮均质物置于尿素溶液中，搅拌30min，用针将球体分离，再把混合物置于温控搅拌器中常温下剧烈搅拌30min，离心10min，将上层液体转移，制成500μl液体，下层液体带非碱溶性黑素成分分析。上层液体与氯仿混合均匀、离
心，取150μl上层液体至微滴定盘中，在340nm处测定其光学密度。将下层的非碱溶性球状物导入氢氧化钠中，用针将球体分离，按前述方法用氯仿对混合物分离，离心。取150μl至微滴定盘中，在340nm处测定其光学密度。将人造黑素制成溶液，制作光学密度标准曲线，估算样品中碱溶性(褐黑素)和非碱溶性(优黑素)物质中的黑素含量，测得的数据按照皮肤组织重量进行换算，总黑素含量是二者的加和。
[0114]
3.实验结果
[0115]
实验结果如下表2中所示。
[0116]
表2：各组小鼠皮肤中总黑色素的含量(平均值
±
sd，μg/g)
[0117][0118]
注释：*p《0.05，**p《0.01，与溶剂对照组比较，
#
p《0.05，与阳性对照组比较。
[0119]
从表2中测得的结果可以看出，实施例1-2组、比较实施例5-6组以及阳性对照组与溶剂对照组相比均能够显著降低实验小鼠皮肤的总黑色素含量，其中实施例1和实施例2组实验动物总黑色素含量的降低效果最为显著(
**
p《0.01)。并且，实施例1和实施例2组实验动物总黑色素含量的降低情况显著优于阳性对照市售的仁和透明质酸钠草本酵素饮(
#
p《0.05)。
[0120]
此外，从表2中测得的实验结果还可以看出，仅含透明质酸钠的比较实施例6组小鼠皮肤中总黑色素的含量与溶剂对照组相比降低不明显，但是在本发明口服美白组合物中将透明质酸钠与甜菜植物复合酵素联用后，前者能够显著增加后者对小鼠皮肤中总黑色素含量的降低作用(见实施例1和实施例2对比比较实施例5和比较实施例6)。
[0121]
综上所述，实验结果表明，包含甜菜复合植物酵素和透明质酸钠的本发明组合物能够有效清除自由基并且对黑色素的合成具有显著的抑制作用，效果显著优于市场上的同类产品以及甜菜酵素单独使用。
[0122]
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。