用于lag-3/pd-l1双特异性抗体的施用的剂量方案
技术领域：
：1.本发明涉及用于结合程序性死亡-配体1(programmeddeath-ligand1，pd-l1)和淋巴细胞活化基因3(lymphocyte-activationgene3，lag-3)的抗体分子的施用的剂量方案(dosageregimes)及它们在人类患者癌症的治疗中的医学用途。本发明还提供用于预测人类患者对抗体进行响应的可能性的预后性阈值。
背景技术：
：：2.癌症是一种复杂的疾病，对于癌症而言仍然存在明显未满足的需求。近年来，宿主免疫系统与肿瘤之间的互作已经成为强烈非临床评定和临床评定的领域。肿瘤浸润淋巴细胞(tumourinfiltratinglymphocytes，tils)有能力控制肿瘤细胞生长，并且新出现临床证据表明tils增加的患者具有良好的预后。总体上，t细胞在对癌症的免疫防御中发挥主要作用并且t细胞活化的调节由t细胞、肿瘤细胞与肿瘤微环境之间刺激性和抑制性配体-受体相互作用的复杂互作介导，在该肿瘤微环境中肿瘤细胞充当免疫抑制的关键介体。3.对抵消肿瘤细胞的免疫抑制活性的免疫检查点抑制剂(checkpointinhibitor)的开发，代表了在临床肿瘤学实践中快速增长的治疗的途径，并且靶向pd-1/pd-l1(pd-1配体)的免疫检查点抑制剂已经展示了一些显著的抗肿瘤活性迹象。约20％的用单药疗法治疗的患者实现了具有深入而持久的响应的临床获益。但是，大部分患者似乎需要联用方案以克服对癌症免疫疗法的原发性、适应性和获得性耐药性，其中原发性耐药性已经划归为从未对该疗法响应并且因此进展的癌症，获得性耐药性已经划归为尽管最初对该疗法响应，但最终进展的癌症，并且适应性耐药性已经划归为对该疗法演变出耐药性机制的癌症，这种适应性耐药性可能临床上表现为原发性或获得性耐药性(sharma等人,2017)。对pd-1/pd-l1疗法耐药性的确立是复杂且多因素的，包括环境和遗传因素、个体疾病史以及先前疗法的效果(sharma等人,2017)。4.淋巴细胞活化基因3(lag-3)是对免疫检查点抑制剂的原发性耐药性和潜在的获得性耐药性的关键介体之一，并且在出现复发或对抗pd-1/pd-l1疗法难治的重度预治疗的晚期黑素瘤患者中的首个抗体联用研究显示了这个群体中克服pd-(l)1耐药性的早期证据。5.wo2017/220569a1(f-stardeltalimited)中描述了用于癌症的治疗的单特异性抗pd-1/pd-l1和抗lag-3抗体的联合施用的优越方法，所述文献公开了涵盖了用于pd-l1和lag-3二者的结合位点的双特异性抗体，包括抗体fs118。fs118是一种双特异性igg1(148,247da)单克隆抗体，fs118包含fc区内的lag-3抗原结合位点和用于pd-l1的fab结合位点，并且fs118以同等高的亲和力来靶向人pd-l1(hpd-l1)和人lag-3(hlag-3)、并且呈现出对lag-3和pd-l1介导的t细胞活化抑制作用的阻断。这个特征和经由lag-3和pd-l1的双重靶向来增强t细胞与肿瘤细胞之间的桥接(bridging)的能力以及使定位于肿瘤微环境内部的能力是fs118的独特属性，这些独特属性有望驱动fs118强力的抗肿瘤活性。6.具体地，淋巴结中的活化t细胞表达lag-3且抗lag-3/pd-l1双特异性抗体(如，lag-3withfs118,auniquebispecificantibody,inducescd8 t-cellactivationandmodulatesthetumourmicroenvironmenttopromoteantitumourimmuneresponses(用独特双特异性抗体fs118对pd-l1和lag-3的双重阻断来诱导cd8 t细胞活化并且调节肿瘤微环境以促进抗肿瘤免疫响应),cancerresearch,2018年7月,第78卷,第13期增刊；p2399alag-3/pd-l1mab2canovercomepd-l1-mediatedcompensatoryupregulationoflag-3inducedbysingle-agentcheckpointblockade(一种可以克服pd-l1介导的受单一药物检查点阻断作用诱导的lag-3代偿性上调的lag-3/pd-l1mab2)，faroudi等人,americanassociationforcancerresearch(aacr)annualmeeting2019,29march–03april2019,atlanta,georgia,usa(美国癌症研究协会(aacr)2019年3月29日–2019年4月3日年度会议，美国佐治亚州亚特兰大市))。11.然而，尽管与fs118替代物mlag-3/mpd-l1双特异性抗体有关的数据有力地指示了fs118分子本身将在人体中是治疗上有效，但所用的小鼠模型在预测人的具体治疗剂量方面具有缺陷。具体地说，替代物mlag-3/mpd-l1双特异性抗体具有人igg1主链，该人igg1主链将天然引起小鼠中强力免疫原性响应以及抗药物抗体(anti-drugantibodies，adas)的产生。因此，本领域普通技术人员将不会合理地期望，小鼠中所使用的有效剂量将在nhp中及最终在人体中是有效的。12.迄今尚未获得关于lag-3/pd-l1抗体(包括fs118)在人类患者或非人灵长类中特性(包括施用的剂量)的数据。技术实现要素：13.如以上发明背景部分中所解释，fs118是一种与lagg-3和pd-l1两者结合的双特异性抗体，并且与单特异性抗pd-l1抗体和抗lag-3抗体相比，fs118有望以独特方式介导其抗肿瘤作用。与单特异性双价抗体相比，考虑到fs118的双特异性、四价性质和结合的化学计量的结果差异以及在fs118作用机理方面的预期差异，fs118是否可以使用在人类中用于单特异性抗pd-l1抗体和抗lag3抗体的剂量水平和施用方案来给药是不明确的。14.经批准用于在人类患者中癌症治疗的抗pd-l1抗体，如阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗和阿特朱单抗分别以800mg(固定剂量(flatdose))或10mg/kg(每两周一次)、10mg/kg(每两周一次)和1200mg(每三周一次)(等同于标准100kg患者中约12mg/kg)的剂量给癌症患者施用。抗lag3单克隆抗体瑞拉利单抗(relatlimab)和抗pd1单克隆抗体纳武单抗(nivolumab)的联用目前正在i期临床试验中测试并且每四周施用一次。也已经在i期研究中也对单独瑞拉利单抗治疗进行了评估，在该研究中每2周给药一次抗体。15.当以相同剂量水平(1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg)并且根据相同剂量方案(dosageschedule)(3剂量，间隔3天)施用抗体时，在同基因小鼠肿瘤模型中与包含与mlag-3/mpd-l1双特异性抗体相同的mlag-3结合位点和mpd-l1结合位点的两种单特异性抗体分子相比，在小鼠实验中能够作为fs118的替代物的小鼠lag-3/pd-l1(mlag-3/mpd-l1；具有lala突变的fs18m-108-29/s1)双特异性抗体显示出更优或相似的抗肿瘤功效。然而，替代物mlag-3/mpd-l1双特异性抗体具有人igg1主链，该人igg1主链将在小鼠中天然引起强力免疫原性响应以及抗药物抗体(adas)的产生。因此，不可能预测在小鼠中所使用的有效剂量是否对在非人灵长类(nhps)中及最终在人体中有效。16.当在小鼠中(以1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg)评估mlag-3/mpd-l1双特异性抗体的pk时，本发明人出乎意料地发现，与包含与mlag-3/mpd-l1抗体相同的mpd-l1结合位点的单特异性抗体相比，mlag-3/mpd-l1双特异性抗体以更高的速率从血清清除。在与抗mpd-l1mab对照相比，mlag-3/mpd-l1双特异性抗体的非饱和清除率进一步显示出似乎是mpd-l1结合以及ch3结构域中容许残基的靶特异性变化组合的结果。(实施例1)17.通过将由发明人获得的小鼠pk数据与小鼠中的抗肿瘤功效数据合并，本发明人发现对于小鼠中的抗肿瘤功效，所需的小鼠替代物mab2的暴露量(cmax)≥6μg/ml并且出乎意料地在整个给药期间无需维持这个暴露量水平。然而，似乎确实出现了ada形成(实施例1)。18.在食蟹猴中，单剂量(4mg/kg)pk研究、药物非临床研究质量管理规范(non-goodlaboratorypractice，glp)剂量范围探索(doserangefinding，drf)研究(10mg/kg、50mg/kg和200mg/kg的每周一次静脉内(iv)剂量，持续4周(wks))和4周glp毒性研究中每周重复二次静脉内施用(60mg/kg和200mg/kg)发现fs118比单特异性抗hpd-l1mab清除得更快(实施例1)。19.发现在整个给药期间维持fs118血浆水平≥10μg/ml足以在食蟹猴中维持pd-l1捕获，并且依据推断足以维持pd-l1抑制作用和免疫药理学。这些研究还显示出fs118甚至在高剂量下也有良好耐受，并且指示了高剂量也将在人类中良好耐受。如在小鼠中那样，也观察到ada形成(实施例1)。20.从小鼠和食蟹猴pk研究获得的结果因此出乎意料地证明了尽管fs118和fs18m-108-29aa/s1的清除速率相对于各自的单特异性抗pd-l1抗体而言，各剂量之间观察到极低的抗体ctrough水平仍分别足以提供持久的抗肿瘤与药效动力学响应。然而，观察到在小鼠和食蟹猴中ada形成，这指示了就从观察到的结果外推至人类而言，这些动物模型的确具有局限性。21.随后设计并开始了fs118在患有晚期恶性肿瘤的患者(研究受试者)中的安全性、耐受性、药代动力学和活性的i期剂量递增和队列扩大(cohortexpansion)的首次人体内研究，该晚期恶性肿瘤在既往抗pd-1/pd-l1疗法中或之后已经进展。为了评估安全性，单个患者队列被施用800μg、2400μg、0.1mg/kg、0.3mg/kg和1.0mg/kg剂量的fs118。对于i期研究的剂量递增部分，患者被施用3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的fs118。全部剂量均每周施用一次(即每周一次)，并且因此比基于小鼠和食蟹猴单独的pk数据最初认为所需的频率更低(实施例1和2)。22.i期研究的起初来自24名受试者(增加至43名患者)的期中结果证实，最大观察到的浓度(cmax)与来自食蟹猴研究预测的cmax一致，但是，出乎意料地，fs118的清除率高于预测，auc(areaundertheconcentrationversustimecurve，浓度-时间曲线下面积)比预期低30％。这最初可能表明人体中将需要更高的fs118剂量。然而，尽管清除速率比最初预测更快，但观察到期限更长的药效动力学效果，指示了治疗功效(实施例2)。23.具体而言，以每周一次施用3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量的fs118显示出诱导可溶性lag-3(slag-3)水平中的持久升高，以及持久的lag-3受体占据。已经报道了slag-3通过自身与mhcii的结合来刺激抗原呈递细胞(如，巨噬细胞和树状细胞)、以活化t细胞响应及增强肿瘤特异性细胞毒素的t细胞，并且因而有望加强抗肿瘤免疫响应。另外，先前已经显示了slag3水平与小鼠中的肿瘤生长抑制相关，这指示了升高的slag3水平是治疗功效的指示。早期结果还表明了在fs118治疗之后spd-l1水平也升高(实施例2)。24.来自i期研究中招募的第一批24名受试者(增加至43名患者)的期中结果因此出乎意料地证明了：25.(i)以每周一次3mg/kg至20mg/kg的剂量向人类癌症患者施用fs118带来了持久的药效动力学响应，尽管从患者血清中fs118的清除速率比预测更快，但是该药效动力学响应有望与抗肿瘤功效相互关联并且26.(ii)人类患者中的药效动力学效果不需要整个给药间隔的fs118暴露。27.另外，正在进行的i期研究的初始结果已经提供了在治疗癌症中fs118的功效的早期直接证据(尽管这并非该研究的主要目标)。更具体而言，截至2019年5月，已经报告其至少1个“研究中”扫描的14名患者中5名显示出一些病情稳定。截至2019年8月，已经升至22名患者中有11名显示出一些病情稳定，截至2020至4月日，升至30名患者中有17名显示出一些病情稳定(实施例2)。28.分析了来自i期研究的数据以对未来试验的剂量选择进行指导(实施例6)。对i期最佳总体反应(bestoverallresponse)(bor/ibor)数据的贝叶斯分析进行估计，与每周一次3mg/kgfs118相比，如果接受每周一次10mg/kg或20mg/kgfs118，则患者表现为bor/ibor病情稳定的可能性更大。与接受每周一次10mg/kg或20mg/kgfs118的患者相比，接受每周一次3mg/kgfs118的患者还具有更高水平的抗药物抗体。因此从使潜在免疫原性和毒性最小化的角度看，优选fs118以10mg/kg至20mg/kg每周一次给药。对三聚体复合物形成的药代动力学/药效动力学进行建模和模拟进一步显示出，假定10％的生物分布系数，三聚体lag3:fs118:pd-l1复合物的浓度预期在以每周一次10mg/kgfs118的剂量下是最高的。假设较高的三聚体复合物形成转化成t细胞活化和肿瘤生长抑制。尽管接受每周一次低至3mg/kg剂量的患者已经显示出病情稳定(表8)，基于增强的功效并且对降低毒性和免疫原性的期望，优选每周一次施用10mg/kg至20mg/kg的fs118。特别优选该范围的下限(lowerend)的剂量(如，每周一次10mg/kg的fs118)，因为认为较低的剂量降低了t细胞过度刺激风险并且因此降低t细胞耗竭，因此升高持久治疗功效以及降低治疗费用的可能性。29.fs118抗体包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列。30.因此，在一个方面，本发明提供了一种用于在治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，31.其中该抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且32.其中该方法包括每周一次以至少3mg每千克患者体重的剂量向患者施用抗体分子。33.在另一个方面，本发明提供一种治疗人类患者中癌症的方法，其中该方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，34.其中该抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且35.其中该方法包括每周一次以至少3mg/kg每千克患者体重的剂量向患者施用抗体分子。36.在又一个方面，本发明提供抗体分子在制备用于治疗人类患者中癌症的药物中的用途，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，37.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且38.其中治疗包括每周一次以至少3mg每千克患者体重的剂量向患者施用抗体分子。39.可以以每千克患者体重至少4mg(mg/kg)、至少5mg/kg、至少6mg/kg、至少7mg/kg、至少8mg/kg、至少9mg/kg、至少10mg/kg、至少11mg/kg、至少12mg/kg、至少13mg/kg、至少14mg/kg、至少15mg/kg、至少16mg/kg、至少17mg/kg、至少18mg/kg、至少19mg/kg或至少20mg/kg的剂量向患者施用fs118。在一个优选的实施方式中，以至少10mg/kg的剂量向患者施用fs118。在替代的优选实施方式中，以至少20mg/kg的剂量向患者施用fs118。也考虑接受其他剂量，如以至少1mg/kg的剂量施用fs118。40.额外或替代地，可以以多达10mg/kg、多达11mg/kg、多达12mg/kg、多达13mg/kg、多达14mg/kg、多达15mg/kg、多达16mg/kg、多达17mg/kg、多达18mg/kg、多达19mg/kg或多达20mg/kg的剂量施用fs118。在一个优选的实施方式中，以多达10mg/kg的剂量施用fs118。在替代的优选实施方式中，以多达20mg/kg的剂量施用fs118。41.因此，可以以1mg/kg至20mg/kg、3mg/kg至20mg/kg、或10mg/kg至20mg/kg的剂量施用fs118。替代地，可以以1mg/kg至10mg/kg、或3mg/kg至10mg/kg的剂量施用fs118。在一个优选的实施方式中，以3mg/kg至20mg/kg的剂量、更优选地以10mg/kg至20mg/kg的剂量施用fs118。42.在一个实施方式中，以3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、或20mg/kg的剂量向患者施用fs118。例如，可以以3mg/kg的剂量向患者施用fs118。在一个优选的实施方式中，以10mg/kg的剂量向患者施用fs118。在替代的优选实施方式中，以20mg/kg的剂量向患者施用fs118。43.fs118可以以如上文所述的基于患者体重(以千克(kg))计算的剂量向患者进行施用。接受10mg/kg的剂量和体重70kg的患者因此将接受700mg的fs118的剂量。替代地，fs118可以以固定剂量(flatdose)向患者进行施用，即不基于患者个体重量的剂量。可以基于患者群体的患者平均体重(如，70kg、75kg、80kg、85kg、90kg、95kg或100kg)来计算用于fs118的合适固定剂量。在一个优选的实施方式中，基于以70kg作为平均患者体重来计算fs118的固定剂量。在替代的优选实施方式中，基于以80kg作为平均患者体重来计算fs118的固定剂量。在又一个优选的实施方式中，基于以100kg作为平均患者体重来计算fs118的固定剂量。44.假定平均患者体重为100kg，本发明因此提供了：45.一种用于治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，46.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且47.其中该方法包括每周一次以至少300mg的剂量向患者施用抗体分子。48.一种治疗人类患者中癌症的方法，其中该方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，49.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且50.其中该方法包括每周一次以至少300mg的剂量向患者施用抗体分子。51.抗体分子在制备用于治疗人类患者中癌症的药物中的用途，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，52.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且53.其中该治疗包括每周一次以至少300mg的剂量向患者施用抗体分子。54.假定平均患者体重为100kg，可以替代地以至少400mg、至少500mg、至少600mg、至少700mg、至少800mg、至少900mg、至少1000mg、至少1100mg、至少1200mg、至少1300mg、至少1400mg、至少1500mg、至少1600mg、至少1700mg、至少1800mg、至少1900mg、或至少2000mg的剂量向患者施用fs118。例如，可以以至少300mg的剂量向患者施用fs118。在一个优选的实施方式中，以至少1000mg的剂量向患者施用fs118。在替代的优选实施方式中，以至少2000mg的剂量向患者施用fs118。也考虑接受其他剂量，如以至少100mg的剂量施用fs118。额外或替代地，假定平均患者体重为100kg，可以以多达1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、1700mg、1800mg、1900mg或2000mg的剂量施用fs118。在一个优选的实施方式中，以多达1000mg的剂量施用fs118。在替代的优选实施方式中，以多达2000mg的剂量施用fs118。55.因此，假定平均患者体重为100kg，可以以100mg至2000mg、300mg至2000mg或1000mg至2000mg的剂量施用fs118。替代地，可以以100mg至1000mg、或300mg至1000mg的剂量施用fs118。在一个优选的实施方式中，以300mg至2000mg的剂量、更优选地以剂量1000mg至2000mg的剂量施用fs118。56.例如，假定平均患者体重为100kg，可以以300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、1700mg、1800mg、1900mg、或2000mg的剂量向患者施用fs118。例如，可以以300mg的剂量向患者施用fs118。在一个优选的实施方式中，以1000mg的剂量向患者施用fs118。在替代的优选实施方式中，以2000mg的剂量向患者施用fs118。57.fs118的替代固定剂量和固定剂量范围可以使用患者群体的替代平均体重(如70kg、75kg、80kg、85kg、90kg、或95kg、尤其70kg或80kg)来计算，并且根据本发明向人类癌症患者施用。58.例如，假定平均患者体重为70kg，本发明提供了：59.一种用于治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，60.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且61.其中该方法包括每周一次以至少210mg的剂量向患者施用抗体分子。62.一种治疗人类患者中癌症的方法，其中该方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，63.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且64.其中该方法包括每周一次以至少210mg的剂量向患者施用抗体分子。65.抗体分子在制备用于治疗人类患者中癌症的药物中的用途，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，66.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且67.其中治疗包括每周一次以至少210mg的剂量向患者施用抗体分子。68.假定平均患者体重为70kg，可以替代地以至少280mg、至少350mg、至少420mg、至少490mg、至少560mg、至少630mg、至少700mg、至少770mg、至少840mg、至少910mg、至少980mg、至少1050mg、至少1120mg、至少1190mg、至少1260mg、至少1330mg或至少1400mg的剂量向患者施用fs118。例如，可以以至少210mg的剂量向患者施用fs118。在一个优选的实施方式中，以至少700mg的剂量向患者施用fs118。在替代的优选实施方式中，以至少1400mg的剂量向患者施用fs118。69.额外或替代地，假定平均患者体重为70kg，可以以多达700mg、770mg、840mg、910mg、980mg、1050mg、1120mg、1190mg、1260mg、1330mg或1400mg的剂量施用fs118。在一个优选的实施方式中，以多达700mg的剂量施用fs118。在替代的优选实施方式中，以多达1400mg的剂量施用fs118。还考虑接受其他剂量，如以至少70mg的剂量施用fs118。70.因此，假定平均患者体重为70kg，可以以70mg至1400mg、210mg至1400mg或700mg至1400mg的剂量施用fs118。替代地，可以以70mg至700mg、或210mg至700mg的剂量施用fs118。在一个优选的实施方式中，以210mg至1400mg的剂量、更优选地以700mg至1400mg的剂量施用fs118。71.例如，假定平均患者体重为70kg，可以以210mg、280mg、350mg、420mg、490mg、560mg、630mg、700mg、770mg、840mg、910mg、980mg、1050mg、1120mg、1190mg、1260mg、1330mg或1400mg的剂量向患者施用fs118。例如，可以以210mg的剂量向患者施用fs118。在一个优选的实施方式中，以700mg的剂量向患者施用fs118。在替代的优选实施方式中，以1400mg的剂量向患者施用fs118。72.作为进一步替代的，可以以足以在剂量之间实现至少0.1-10μg/ml的平均谷血浆浓度(meantroughplasmaconcentration)(ctrough)的剂量向患者施用fs118。在不希望受理论约束的情况下，这些ctrough水平与体外人原代细胞功能试验中fs118的ec50相互关联并且因此可以代表fs118的药理活性水平。73.至少10μg/ml的平均谷血浆浓度有望提供连续的pd-l1抑制作用。74.在向患者每周一次施用fs118的情况下，fs118的剂量可以在时间上间隔7天或8天。如本领域将领会的，剂量之间的时间可以变动至某种程度，以便每一剂量不是精确地按相同时间间隔。这往往将根据施用医生的决定来指导。因此，fs118的剂量可以在时间上按临床可接受的时间范围(如，约7天或8天)间隔。75.可以以三周治疗循环向患者施用fs118。76.优选地通过静脉内注射向患者施用fs118。77.根据本发明待治疗的癌症已经优选地经受除fs118之外的一种或多种免疫检查点抑制剂既往治疗。78.根据本发明待治疗的癌症(i)可以对用一种或多种免疫检查点抑制剂的治疗是难治的，(ii)可以在用一种或多种免疫检查点抑制剂的治疗期间或之后已经复发，或(iii)可以是对用一种或多种免疫检查点抑制剂的治疗有响应。在一个优选的实施方式中，根据本发明待治疗的癌症在用一种或多种免疫检查点抑制剂(除fs118之外)既往治疗期间或之后已经复发。免疫检查点抑制剂优选地是pd-1或pd-l1抑制剂，更优选地是抗pd-1或抗pd-l1抗体。用一种或多种免疫检查点抑制剂(除fs118之外)的既往治疗可以被单独施用、或者与一种或多种额外的疗法(例如一种或多种化疗剂)联用。79.本发明人已经出人意料地识别出更可能因fs118治疗而经历长期病情控制(即，持久病情控制)的癌症患者亚组。这个亚组中的患者是携带肿瘤的患者，该肿瘤对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法显示出部分响应，或在经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法时显示超过3个月的病情稳定。因此这些肿瘤被认为对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有“获得性耐药性表型(acquiredresistancephenotype)”。对抗pd-1或抗pd-l1疗法显示出完全响应的患者还有望落入这个亚组内。可以根据recist1.1标准(eisenhauer,2009)或irecist标准(seymour,2017)、优选地根据recist1.1标准来评估用抗癌疗法(如，抗pd-1或抗pd-l1疗法)治疗期间肿瘤是否显示完全响应、部分响应、病情稳定或病情进展。这种可能涉及获得患者肿瘤的扫描(例如mri扫描)和测量肿瘤病灶的尺寸/体积。为了限定本文中获得性耐药性的目的，假定在患者具有例如分类为显示病情稳定(或部分响应或完全响应)的第一扫描、接着是分类为显示病情进展的稍后扫描的情况下，该患者显示病情稳定(或部分响应或完全响应)的时间段直至获得显示病情进展的扫描为止。换句话说，获得性耐药性表型可以限定为以下肿瘤：(a)对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有完全响应或部分响应的最佳总体响应(bor)，或(b)具有作为最佳总体响应(bor)的病情稳定并且用抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗超过3个月。可以根据recist1.1标准(eisenhauer,2009)或irecist标准(seymour,2017)、优选地根据recist1.1标准来限定临床终点(如，bor)。80.相反地，在经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法时，显示出病情稳定3个月或更短时间的肿瘤(因此包括未显示病情稳定并且因此从治疗开始就显示病情进展的肿瘤)(换而言之，具有病情稳定的bor并且治疗3个月或更短时间的肿瘤，包括具有病情进展的bor的肿瘤)的患者没有经历病情控制持久性，并且因此这些肿瘤被认为对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有“原发性耐药性表型”。携带具有对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法获得性耐药性表型的肿瘤的患者可以称为对抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性。类似地，携带具有对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法原发性耐药性表型的肿瘤的患者可以称为对抗pd-1或抗pd-l1疗法具有原发性耐药性。既往抗pd-1或抗pd-l1疗法可以单独施用或与一种或多种额外的疗法(例如，一种或多种化疗剂和/或免疫治疗剂)联用。81.具体而言，完成18周或更长时间fs118治疗的全部患者均显示携带具有对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法获得性耐药性表型的肿瘤，例外是一名未知其bor的患者(图7和图8)。然而，对于该具有bor未知的后一名患者已知的是其保持用既往抗pd-1疗法超过一年并因此怀疑这位患者将具有被分类为具有获得性耐药性的bor。在i期研究中，存在携带具有对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法原发性耐药性表型的肿瘤的患者都没有接受fs118治疗超过17周(图7和图8)。在携带对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型的肿瘤的患者中观察到对fs118疗法出现增强型持久性响应的可能性升高，与施用的fs118剂量和肿瘤类型无关(图7至图9)。因此，肿瘤对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的耐药性状态是对fs118疗法出现持久响应概率的指示。具体而言，与具有对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法原发性耐药性表型的肿瘤相比，具有对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法获得性耐药性表型的肿瘤具有更高的对用fs118治疗进行响应的可能性，尤其对fs118疗法响应18周或更长时间、19周或更长时间、或20周或更长时间，但是优选地为18周或更长时间。对用fs118治疗的响应因此优选地指肿瘤对fs118治疗表现出病情稳定、部分响应或完全响应，例如持续18周或更长时间、19周或更长时间、或20周或更长时间，但优选地持续18周或更长时间。82.发明人的上述研究结果是特别有意义的，因为不推荐在病情进展后用pd-(l)1抗体对患者进行既往含pd-(l)1的治疗方案的再治疗，并且历史患者已经显示从这种疗法中获益寥寥(fujita等人,anticancerres.2019；fujita等人,thoraciccancer,2019；martini等人,j.immunotherapycancer,2017)。83.因此，在又一个方面，本发明提供了一种用于治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，该抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；84.其中患者的肿瘤已经被确定为相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，以及85.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。86.如本文提到，肿瘤可以是肿瘤病灶。87.本发明还提供一种用于治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，所述抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；88.其中该方法包括确定患者的肿瘤是否相对于抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，其中89.具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤，并且90.用抗体治疗经确定对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型的肿瘤。91.还提供是一种治疗人类患者中癌症的方法，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，所述方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，所述抗体分子结合pd-l1和lag-3、并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列；92.其中已经确定患者的肿瘤相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，和93.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。94.进一步提供是一种治疗人类患者中癌症的方法，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，所述方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，所述抗体分子结合pd-l1和lag-3、并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列；95.其中该方法包括确定患者的肿瘤是否相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，并且96.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤，并且97.用抗体治疗经确定对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型的肿瘤。98.在进一步的实施方式中，本发明提供抗体分子在制备用于治疗人类患者中癌症的药物中的用途，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，所述抗体分子结合pd-l1和lag-3、并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，99.其中已经确定患者的肿瘤相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，和100.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。101.在又一进一步的实施方式中，本发明提供一种确定癌症患者是否能够对抗体分子治疗响应的方法，该癌症患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，抗体分子结合pd-l1和lag-3并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，102.该方法包括确定患者的肿瘤是否相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型或原发性耐药性表型，103.其中与具有原发性耐药性表型的肿瘤相比，具有获得性耐药性表型的肿瘤具有更高的对用抗体的治疗进行响应的可能性；和104.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤，105.并且具有原发性耐药性表型的肿瘤是经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时实现病情稳定3个月或更短时间的肿瘤，包括具有病情进展的最佳总体响应的肿瘤。106.响应的可能性优选地指以下可能性：肿瘤将对用fs118的治疗显示病情稳定、部分响应或完全响应，例如持续18周或更长时间、19周或更长时间、或20周或更长时间，但优选地持续18周或更长时间。107.本发明还提供一种预测癌症患者对抗体分子响应的可能性的方法，所述抗体分子结合pd-l1和lag-3、并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，108.其中如果已经确定患者的肿瘤相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，则预测该患者可能对抗体响应，109.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。110.在另一个实施方式中，本发明提供一种选择已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗的癌症患者来用于用抗体分子治疗的方法，该抗体分子结合pd-l1和lag-3、并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，111.该方法包括确定患者的肿瘤是否相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型或原发性耐药性表型，112.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤，并且113.具有原发性耐药性表型的肿瘤是经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时实现病情稳定3个月或更短时间的肿瘤，包括具有病情进展的最佳总体响应的肿瘤；并且114.选择携带经确定具有获得性耐药性表型的肿瘤的患者以用于用抗体的治疗。115.抗pd-1或抗pd-l1疗法可以指用抗pd-1或抗pd-l1抗体(除与pd-l1和lag-3二者结合的抗体(如fs118)之外)治疗，包括但不限于，用纳武单抗、派姆单抗(pembrolizumab)、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗或阿特朱单抗治疗。116.本发明人已经进一步显示出在具有获得性耐药性表型的肿瘤中用fs118治疗之前显示pd-l1阳性染色的肿瘤细胞的百分数与用fs118治疗所致的病情控制持久性正相关。在获得性耐药性群体中，用fs118治疗30周或更长时间的三名患者在基线处还具有显示对pd-l1阳性染色的肿瘤细胞的最高百分数。在对抗pd-1或抗pd-l1疗法具有原发性耐药性患者中未见这种相关性(图10)。这些结果显示，对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型的肿瘤(该肿瘤包含15％或更多、20％或更多、或25％或更多、但优选地15％或更多pd-l1阳性肿瘤细胞)更可能对用fs118的治疗进行响应。例如，对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型的肿瘤可以包含15％或更多、16％或更多、17％或更多、18％或更多、或19％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞。117.用于确定肿瘤样品中pd-l1阳性肿瘤细胞百分数的方法是本领域已知的，并且可以包含用抗pd-l1抗体对肿瘤样品染色并且检测抗体与肿瘤细胞的直接或间接结合。可以通过计数肿瘤细胞数(例如在5个高倍视野下)、并确定与抗体结合的所述肿瘤细胞的百分数来确定pd-l1阳性肿瘤细胞百分数。118.在又一个实施方式中，本发明因此提供一种用于治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列；119.其中患者的肿瘤已经确定为相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，并且已经确定肿瘤样品包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞，该肿瘤样品从用抗体治疗前的患者获得，120.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示出完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示出病情稳定超过3个月的肿瘤。121.本发明还提供一种用于治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，该抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列；并且122.其中该方法包括确定：123.(i)患者的肿瘤是否对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型；和124.(ii)从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品中是否包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞；并且125.用抗体治疗确定具有获得性耐药性表型且包含15％或更多pd-l1阳性肿瘤细胞的肿瘤；126.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示出病情稳定超过3个月的肿瘤。127.还提供是一种治疗人类患者中癌症的方法，所述人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，该方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3的抗体分子并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列；128.其中患者的肿瘤已经被确定为相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，并且已经确定从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞；129.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。130.进一步提供是一种治疗人类患者中癌症的方法，人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，该方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3、并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列；131.其中该方法包括确定：132.(i)患者的肿瘤是否相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型；和133.(ii)从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品是否包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞；并且134.用抗体治疗确定具有获得性耐药性表型且包含15％或更多pd-l1阳性肿瘤细胞的肿瘤；135.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。136.在又一个实施方案中，本发明提供抗体分子在制备用于治疗人类患者中癌症的药物中的用途，所述人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，该抗体分子结合pd-l1和lag-3并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，137.其中已经确定患者的肿瘤相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，并且已经确定从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞；138.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示出完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。139.在又一个实施方案中，本发明提供一种确定已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗的癌症患者是否能够对用抗体分子治疗响应的方法，该抗体分子结合pd-l1和lag-3并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，140.该方法包括确定：141.(i)患者的肿瘤是否相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型或原发性耐药性表型；和142.(ii)从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品是否包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞；143.其中与具有原发性耐药性表型的肿瘤、或包含小于15％的pd-l1阳性肿瘤细胞的具有获得性耐药性表型的肿瘤相比，包含至少15％的pd-l1阳性肿瘤细胞的具有获得性耐药性表型的肿瘤具有更高的对用抗体治疗进行响应的可能性；144.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤，并且145.其中具有原发性耐药性表型的肿瘤是经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时实现病情稳定3个月或更短时间的肿瘤，包括具有病情进展的最佳总体响应的肿瘤。该方法还可以进一步包括选择确定对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型且包含15％或更多pd-l1阳性肿瘤细胞的肿瘤用于治疗，或用抗体治疗确定对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型且包含15％或更多pd-l1阳性肿瘤细胞的肿瘤。146.本发明还提供一种预测癌症患者对抗体分子响应的可能性的方法，该抗体分子结合pd-l1和lag-3并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，147.其中如果已经确定患者的肿瘤相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，并且已经确定从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞，则预测该患者可能对抗体抗体响应，148.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。149.在另一个实施方式中，本发明提供一种选择已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗的患者来用于用抗体分子治疗的方法，该患者，所述抗体分子结合pd-l1和lag-3并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，150.该方法包括确定：151.(i)患者的肿瘤是否相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型或原发性耐药性表型；和152.(ii)从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品是否包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞；并且3mab；igg对照＝g1aa/4420。b显示pk数据-单剂量静脉内施用10mg/kg的mlag-3/pd-l1(空心圆圈和三角形)和抗pd-l1mab(实心圆圈和三角形)。分别显示来自由圆圈和三角形所代表的两项不同研究的数据。166.图4显示了c57bl/6小鼠中皮下生长的mc38同基因肿瘤模型的肿瘤体积测量值，该c57bl/6小鼠用3剂量的g1aa/4420(igg对照，10mg/kg)和4个不同剂量(1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg)的抗小鼠lag-3/pd-l1mab2fs18m-108-29aa/s1治疗。用x-轴上的竖直黑色箭头指示各剂量。y-轴上显示平均肿瘤体积加或减均值的标准误(standarderrormean，sem)。使用单因素方差分析(anova)，在研究第17天比较同种型对照组(g1aa/4420)与lag-3/pd-l1mab2治疗组之间的肿瘤大小。使用杜基(tukey’s)多重比较试验确定组之间的显著性差异：***p≤0.001；****p≤0.0001。167.图5显示了二室群体pk模型(2-compartmentpopulationpkmodel)的结构，该模型描述从nhp非glp和glppk数据构建的fs118的系统性暴露量(给药后0-7天)。vp(其也可以称作v1)＝中央体积；vt(其也可以称作v2)＝外周体积；cld(其也可以称作cl2)＝交换系数；clp(其也可以称作cl1)＝fs118清除率；cp＝血浆室；ct＝组织室。168.图6显示了实施例2中i期研究的首次人体内(first-in-human，fih)研究设计。169.图7显示了相对于耐药性组和剂量(菱形＝1mg/kg；圆圈＝3mg/kg；三角形＝10mg/kg；正方形＝20mg/kg)，截至2020年3月25日已完成fs118治疗的周数。与如本文定义的对抗pd-1/pd-l1疗法具有原发性耐药性的患者相比，在如本文定义的对pd-1/pd-l1疗法具有获得性耐药性的患者之间观察到显著差异，其中无论施用的fs118剂量如何，具有获得性耐药性的患者对fs118治疗的平均持续时间均长于具有原发性耐药性的患者。170.图8显示了被划归为对抗pd-1/pd-l1疗法具有原发性耐药性或获得性耐药性(依据fs118剂量排序)的39名患者的游动图(swimmerplot)，所述患者截至2019年11月27日在接受fs118治疗时进行了可评估的肿瘤扫描。具有原发性耐药性的患者显示为灰色条，而具有获得性耐药性的患者显示为深灰色条。显示完成的fs118治疗的周数(pd＝病情进展；sd＝病情稳定)。完成超过18周fs118治疗的全部患者(全部条，其中一者携带具有获得性耐药性表型的肿瘤)均具有至少一个病情稳定的测量。171.图9显示了基于与图7中所示的数据相同的数据，但相对于耐药性组和肿瘤类型，截至2020年3月25日已经完成fs118治疗的周数。对fs118治疗响应的可能性与具有获得性耐药性表型的肿瘤有关，但似乎与临床适应症(肿瘤类型)无关。172.图10显示了相对于截至2019年12月12日已经完成fs118治疗的周数，fs118治疗之前显示pd-l1阳性染色的肿瘤活检样品中肿瘤细胞的百分数(pd-l1百分数肿瘤阳性评分[pd-l1％tps])。a：对pd-1/pd-l1疗法具有获得性耐药性的患者，高基线pd-l1％tps显示与fs118治疗时长正相关。在获得性耐药性组内部具有最高pd-l1％tps的三名患者用fs118治疗30周或更长时间，表明病情受fs118控制。b：对抗pd-1/pd-l1疗法具有原发性耐药性患者，未观察到pd-l1％tps与fs118治疗时长之间的相关性。[0173]图11显示了用fs118治疗时，与对抗pd-1/pd-l1疗法具有原发性耐药性的患者相比，对抗pd-1/pd-l1疗法具有获得性耐药性的患者显示较高量级的免疫细胞响应。将免疫细胞计数随时间的百分数变化(空心圆圈：cd3 t细胞；实心正方形：cd4 t细胞，实心三角形：cd8 t细胞，实心菱形：nk细胞)绘制为fs118治疗开始之前从基线变化的百分数。a：患者1004-0003是具有原发性耐药性的代表性患者特征。b：患者1002-0014是具有获得性耐药性的代表性患者。2019年11月26日获得显示的数据。具体实施方式[0174]抗lag-3/pd-l1双特异性抗体[0175]wo2017/220569a1中描述了适用于在本发明中使用的抗lag-3/pd-l1双特异性抗体(如本文所述的fs118)，所述文献的内容在本文中全文引入并适于所有目的。fs118抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列，以及seqidno:2中列出的轻链序列。[0176]癌症[0177]pd-1、其配体pd-l1和lag-3是免疫检查点蛋白的示例。结合且抑制这些蛋白质的分子(如，抗体)统称为免疫检查点抑制剂。已经显示了用抗pd-1/pd-l1抗体作为单药疗法治疗癌症患者导致t细胞上的lag-3表达上调，导致了对抗pd-l1/pd-1疗法的耐药性(图1)。用抗pd-1/pd-l1抗体和抗lag-3抗体联合治疗不能够阻止t细胞上的lag-3表达增加，尽管与单独pd-l1/pd-1疗法相比，表达的增加被减少(图1)。相反，已经显示用fs118(和小鼠替代物抗体fs18m-108-29aa/s1)的治疗导致了t细胞lag-3表达减少，以及slag-3水平增加(图1)。因此与抗pd-l1/pd-1和抗lag-3抗体相比，fs118具有不同的作用模式并且能够阻止和/或逆转lag-3介导的、对pd-l1/pd-1抑制剂的耐药性，如来自i期研究的早期结果所证明的，该早期结果显示在fs118治疗后的数名患者中的药效动力学响应以及病情稳定，该患者患有在进行抗pd-1/pd-l1疗法时或之后已经进展的局部晚期、不可切除或转移性实体瘤或血液恶性肿瘤。[0178]不受理论约束，图2中显示了fs118治疗对抗pd-1/pd-l1单药疗法难治的、已在抗pd-1/pd-l1单药疗法期间或之后复发的肿瘤以及对抗pd-1/pd-l1单药疗法有响应的肿瘤的预期影响。[0179]对用一种或多种免疫检查点抑制剂治疗难治的癌症优选地指对用一种或多种免疫检查点抑制剂(除lag-3/pd-l1双特异性抗体(如，fs118)之外)治疗难治的癌症。已经在用一种或多种免疫检查点抑制剂治疗期间或之后复发的癌症优选地指在用所述免疫检查点抑制剂治疗期间或之后已经对一种或多种免疫检查点抑制剂(除lag-3/pd-l1双特异性抗体(如，fs118)之外)具有获得性耐药性的癌症。[0180]具体地，图2显示在对抗pd-1/pd-l1单药疗法难治的或已经在抗pd-1/pd-l1单药疗法期间或之后复发并且表现出t细胞耗尽或免疫抑制的肿瘤中，fs118治疗有望通过逆转t细胞耗竭/免疫抑制的作用来增强免疫介导的抗癌作用，这是由于与t细胞表面表达的lag-3结合(否则其充当免疫细胞的抑制性信号)、减少lag-3的t细胞表面过度表达并促进可溶性lag-3(slag-3)释放的结果。fs118因此具有显著拓宽免疫检查点阻断的临床获益的潜力，因为fs118有挽救对“医护标准”免疫检查点抑制剂疗法具有原发性耐药性或适应性耐药性的患者的能力。[0181]在对pd-1/pd-l1单药疗法响应的肿瘤中，tils有望在其表面上表达lag-3且肿瘤是高pd-l1的。通过与所述lag-3和pd-l1结合，fs118有望比抗pd-1/pd-l1单药疗法更能增强这些患者中的t细胞活化，以及阻止对抗pd-l1治疗响应的lag-3的过度表达。因此，对pd-l1阻断的耐药性的发展有望被抑制。如本文中公开的fs118剂量因此有望适合于有效地治疗对pd-1/pd-l1单药疗法响应的癌症，本文已经显示使得数名患者中的药效动力学响应以及病情稳定，该患者患有在进行抗pd-1/pd-l1疗法时或之后已进展的肿瘤或血液恶性肿瘤的。[0182]显示对免疫检查点抑制剂治疗响应的癌症必须包含tils以介导所述效果。因此，对用除抗pd-1/pd-l1抑制剂之外的免疫检查点抑制剂治疗是难治的，或在所述治疗期间或之后已经复发的癌症预期包含无活性tils(即，耗竭或免疫抑制的)，而对用除抗pd-1/pd-l1抑制剂之外的免疫检查点抑制剂治疗响应的癌症有望包含活化的tils。作为结果，fs118将有望对表达pd-l1的癌症具有相似的效果，该癌症对用除抗pd-1/pd-l1抑制剂之外的免疫检查点抑制剂治疗是难治的，或在所述治疗期间或之后已经复发，或对用除抗pd-1/pd-l1抑制剂之外的免疫检查点抑制剂治疗响应，如对以上抗pd-1/pd-l1抑制剂治疗是难治的、或已经复发或对其响应的癌症所描述的那样。[0183]在一个优选的实施方式中，根据本发明的、待治疗的癌症因此已经经受一种或多种免疫检查点抑制剂(除lag-3/pd-l1双特异性抗体(如，fs118)之外)的既往治疗。[0184]根据本发明待的、待治疗的癌症因此可以、或已经确定对用一种或多种免疫检查点抑制剂(除lag-3/pd-l1双特异性抗体(如，fs118)之外)的治疗是难治的。替代地，根据本发明的、待治疗的癌症可以用一种或多种免疫检查点抑制剂(除lag-3/pd-l1双特异性抗体(如，fs118)之外)治疗期间或之后已经复发。作为进一步替代地，根据本发明的、待治疗的癌症可能是或已经确定对用一种或多种免疫检查点抑制剂的治疗有响应。在用一种或多种免疫检查点抑制剂治疗期间或之后的癌症的复发优选地指在用一种或多种免疫检查点抑制剂治疗期间或之后的癌症进展。癌症进展的检测完全处于本领域普通技术人员的能力范围内。[0185]免疫检查点抑制剂可以是pd-1、pdl-1、pd-l2、ctla-4、cd80、cd86、lag-3、b7-h3、vista、b7-h4、b7-h5、b7-h6、nkp30、nkg2a、半乳糖凝集素9、tim-3、hvem、btla、kir、cd47或sirpα抑制剂。免疫检查点抑制剂可以是能够抑制所讨论的免疫检查点分子的抗体。在一个优选的实施方式中，免疫检查点抑制剂是pd-1或pd-l1抑制剂，如抗pd1/pd-l1抗体。能够抑制免疫检查点分子的抗体是本领域已知的，并且包括用于抑制ctla-4的易普利姆玛(ipilimumab)；用于pd-1的纳武单抗、派姆单抗和西米普利单抗(cemiplimab)；以及，用于pd-l1的阿特朱单抗、阿维鲁单抗和德瓦鲁单抗。marin-acevedo等人,journalofhematology&oncology(2018)中综述了免疫检查点分子、其配体和抑制剂。[0186]根据本发明的、待治疗的癌症表达pd-l1。优选地，已经确定该癌症表达pd-l1。另外，根据本发明的、待治疗的癌症包含表达lag-3的免疫细胞，如tils。优选地，已经确定该癌症包含表达lag-3的免疫细胞。在一个优选的实施方式中，癌症可以是因由癌细胞表达pd-l1和免疫细胞表面上lag-3的表达而对用一种或多种免疫检查点抑制剂(除lag-3/pd-l1双特异性抗体(如fs118)之外)治疗耐药性的癌症。在具体的实施方式中，肿瘤微环境内部pd-l1在癌细胞表面上的表达和lag-3在免疫细胞表面上的表达相对于正常组织细胞和活化的免疫细胞可以分别是高的。[0187]本发明人已经出乎意料地显示了，对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型的肿瘤，以及尤其对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型且在用fs118治疗之前包含至少15％pd-l1阳性肿瘤细胞的肿瘤，响应用fs118治疗而显示持久响应、尤celllungcancer，sclc)和莫克细胞癌。[0194]在替代的优选实施方案中，癌症是选自以下构成的组的罕见癌症：甲状腺癌(优选地甲状腺未分化癌)、肉瘤(优选地软组织肉瘤)、多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme，gbm)、肉瘤(例如，软组织肉瘤，包括去分化脂肪肉瘤、未分化多形性肉瘤和平滑肌肉瘤)、卵巢癌(例如，卵巢高/低度浆液性或透明细胞组织学(ovarianhigh/low-gradeserousorclearcellhistology))、基底细胞癌、msi-h实体瘤、三阴性乳腺癌(triplenegativebreastcancer，tnbc)、宫颈癌、食管癌(例如，食管胃交界腺癌(gej)或食管鳞状细胞癌)、多发性骨髓瘤(multiplemyeloma，mm)、胰腺癌(如，胰脏腺癌)、脑膜瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌(如，msi-h子宫内膜癌)、胸腺癌、妊娠滋养细胞肿瘤、淋巴瘤(如，弥漫性大b细胞淋巴瘤(diffuselargeb-celllymphoma，dlbcl)或外周t细胞淋巴瘤)、腹膜转移癌、微卫星稳定(microsatellitestable，mss)结直肠癌和胃肠间质肿瘤(gastrointestinalstromaltumours，gist)(如不可切除性gist)。[0195]在一个优选的实施方案中，癌症是甲状腺癌，优选地甲状腺未分化癌。在替代的优选实施方案中，癌症是肉瘤，优选地软组织肉瘤。最近已经表明肉瘤肿瘤组织内部三级淋巴样结构(tertiaryiymphoidstructures，tls)的存在可以预测对免疫检查点阻断疗法的响应(petitprez等人,2020)。[0196]在另一个实施方式中，待治疗的癌症可以选自：头颈癌(如，scchn)、胃癌、食管癌、nsclc、间皮瘤、宫颈癌、甲状腺癌(如，甲状腺未分化癌)和肉瘤(如，软组织肉瘤)。[0197]在一个具体实施方式中，待治疗的癌症是头颈癌，优选为头颈部鳞状细胞癌(scchn)，更优选为口腔、口咽(oropharynx)、喉(larynx)或下咽部(hypopharynx)的鳞状细胞癌。癌症可以是复发的或转移性的。scchn患者的肿瘤微环境中t细胞上更高水平的lag-3和pd-1共表达已经与缺乏抗pd-1/pd-l1剂的响应性相关(hanna等人,2018)，并且阴性淋巴结状态的scchn患者中tils上的lag-3表达已经显示是较低存活率的预后标志(deng等人,2016)。同时靶向lag-3和pd-l1的双特异性抗体(如，fs118)的治疗可以如本文所描述的那样重振免疫响应。头颈癌(如，scchn)可能已经或可能尚未用单独或与另一种疗法(例如化疗药)联合施用的既往抗pd-1或抗pd-l1疗法(除，fs118之外)治疗且进展。患者可能对人乳头瘤病毒(hpv)呈阳性或阴性。在一个实施方式中，患者均对hpv呈阳性。在一个替代实施方式中，患者均对hpv呈阴性。[0198]在另一个实施方式中，待治疗的癌症是已知表达高水平lag-3的胃癌(morgado等人,2018)。胃癌可能已经或可能尚未用单独或与另一种疗法药(例如，化疗药)联合施用的既往抗pd-1或抗pd-l1疗法(除fs118之外)治疗且进展。在进一步的实施方式中，待治疗的癌症是nsclc、优选地是iv期鳞状和/或iii期的nsclc。nsclc可能尚未用单独或与另一种疗法(例如，化疗药)联合施用的既往抗pd-1或抗pd-l1疗法(除fs118之外)治疗且进展。在进一步的实施方式中，待治疗的癌症是sclc、优选地是扩散期的sclc。sclc可能尚未用单独或与另一种疗法(例如化疗药)联合施用的既往抗pd-1或抗pd-l1疗法(除fs118之外)治疗且进展。在又一进一步的实施方式中，待治疗的癌症是卵巢癌。卵巢癌可能是铂剂难治的和/或可以已经或可能尚未用先前用免疫疗法(例如，单独或与另一种疗法(例如化疗药)联合施用的既往抗pd-1或抗pd-l1疗法(除fs118之外))治疗。[0199]在本技术指出一个特定类型的癌症(如，乳腺癌)的情况下，这指的是相关组织(在乳腺组织的情况下)的恶性转变。源自不同组织(例如，卵巢组织)的恶性转变的癌症可以在体内另一个位置(如，乳腺)产生转移性病灶，但不因而是如本文所提到的乳腺癌，而是卵巢癌。[0200]根据本发明的、待治疗的癌症可以是原发性癌症。替代地，癌症可以是转移性癌症。[0201]施用途径[0202]优选地通过静脉内注射向患者施用fs118。例如，可以通过静脉内团注或静脉内输注(例如，使用连续输注泵)向患者施用fs118。对于多达2400μg的剂量而言，可以使用连续输注泵执行长达30分钟的静脉内输注，并且对于高于2400μg的剂量而言，执行长达60分钟的静脉内输注。这些施用类型被成功地用于i期研究中的fs118(实施例2)。[0203]制剂[0204]为了治疗性用途，fs118抗体与载体一起配制，该载体为药学上可接受的且适合通过选定的施用途径(如静脉内施用)输送fs118抗体。合适的药学上可接受的载体是常规用于静脉内抗体分子的施用的那些载体，如稀释剂和辅料等。用于治疗性用途的药学上可接受的载体是制药领域熟知的，并且例如在雷明顿药物科学(remington'spharmaceuticalsciences),马克出版有限公司(mackpublishingco.)(a.r.gennaro编著1985)中描述的。[0205]联合治疗[0206]治疗如本文中公开的癌症的方法可以包括单独或与其他治疗联合的向患者施用fs118抗体。例如，取决于待治疗的癌症，fs118抗体可以同时、或依次、或作为与另一种治疗剂联合制剂施用。例如，fs118抗体可以与已知用于待治疗癌症的治疗剂联合施用。例如，fs118抗体可以与第二抗癌疗法(如化学疗法、抗肿瘤疫苗(也称作癌症疫苗)、放射治疗、免疫疗法、溶瘤病毒、嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)t细胞疗法或激素疗法)联合向患者进行施用。[0207]fs118抗体将有望在抗癌疗法(如化学疗法、抗肿瘤疫苗接种或放射疗法)中充当佐剂。不希望受理论约束，据认为，与用化学疗法、抗肿瘤疫苗、或放射疗法所实现的对肿瘤相关抗原的免疫响应相比，fs118抗体与化学疗法、抗肿瘤疫苗接种或放射疗法联合向患者进行施用将触发对肿瘤相关抗原更大的免疫响应。[0208]治疗患者中癌症的方法因此包括向患者与化疗剂、抗肿瘤疫苗、放射性核素、免疫治疗剂、溶瘤病毒、car-t细胞或用于激素疗法的试剂联合施用治疗有效量的fs118抗体。化疗剂、抗肿瘤疫苗、放射性核素、免疫治疗剂、溶瘤病毒、car-t细胞或用于激素疗法的试剂优选地为用于所讨论癌症的化疗剂、抗肿瘤疫苗、放射性核素、免疫治疗剂、溶瘤病毒、car-t细胞、或用于激素疗法的试剂，即已经显示在所讨论癌症的治疗中有效的化疗剂、抗肿瘤疫苗、放射性核素、免疫治疗剂、溶瘤病毒、car-t细胞或用于激素疗法的试剂。已经显示对所讨论癌症有效的合适化疗剂、抗肿瘤疫苗、放射性核素、免疫治疗剂、溶瘤病毒、car-t细胞、或用于激素疗法的试剂的选择完全在熟练从业人员的能力范围内。[0209]例如，在该方法包括向该患者与化疗药联合施用治疗有效量的fs118抗体的情况下，化疗剂可以选自由以下构成的组：紫杉烷、细胞毒性抗生素、酪氨酸激酶抑制剂、parp抑制剂、b_raf酶抑制剂、hdac抑制剂、mtor抑制剂、烷基化剂、铂类似物、核苷类似物、沙立度胺(thalidomide)衍生物、抗肿瘤化疗剂和其他。紫杉烷包括多西他赛、紫杉醇和白蛋白结合型紫杉醇(nab-paclitaxel)；细胞毒性抗生素包括放线菌素d、博来霉素、蒽环类、多柔比星和戊柔比星(valrubicin)；酪氨酸激酶抑制剂包括厄洛替尼、吉非替尼、奥希替尼(osimertinib)、阿法替尼、阿昔替尼、plx3397、伊马替尼、考比替尼(cobimitinib)、曲美替尼、仑伐替尼、卡博替尼(cabozantinib)、尼洛替尼(nlotinib)、索拉非尼、西地尼布(cediranib)、瑞戈菲尼(regorafrinib)、司曲替尼(sitravatinib)、帕唑哌尼(pazopinib)和地法替尼(defactinib)；parp抑制剂包含尼拉帕尼、奥拉帕尼(olaparib)、卢卡帕尼(rucaparib)和维利帕尼(veliparib)；b-raf酶抑制剂包括威罗菲尼和达拉菲尼；烷基化剂包括达卡巴嗪、环磷酰胺、替莫唑胺；铂类似物包括卡铂、顺铂和奥沙利铂；核苷类似物包括吉西他滨和阿扎胞苷(azacitidine)；抗肿瘤药包括氟达拉滨。hdac抑制剂包括恩替诺特、帕比司他和伏立诺他(varinostat)；mtor抑制剂包括依维莫司和西罗莫司(sirolimus)。适用于本发明中的其他化疗剂包括甲氨蝶呤、培美曲塞、卡培他滨、艾瑞布林(eribulin)、伊立替康、氟尿嘧啶和长春花碱。[0210]用于治疗癌症的疫苗策略已经在门诊实施并且在科学文献内部详细讨论(如rosenberg,s.2000developmentofcancervaccines)。这种主要涉及在有或没有粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor，gm-csf)的情况下，通过使用自体癌细胞或同种异体癌细胞作为疫苗方法，促进免疫系统对由自体癌细胞或同种异体癌细胞表达的多种细胞标志物响应的策略。gm-csf在抗原呈递过程中引起强力响应并且与所述策略一起采用特别有效。[0211]鉴于包括以下实验性示例的本公开，本发明的其他方面和实施方式将对本领域技术人员是显而易见的。[0212]本说明书中所提到的全部文件均通过引用的方式并入本文。[0213]在本文使用的情况下，“和/或”应理解为两种指定特征或组件的每一者的具体公开，同时公开或未公开另一者。例如“a和/或b”应理解为(i)a、(ii)b和(iii)a和b的每一者的具体公开，正如本文中单独提到每一者那样。[0214]除非上下文指出，否则对上述特征的描述和定义不限于本发明的任何具体方面或实施方式并且同等地适用于描述的全部方面和实施方式。[0215]除非上下另行规定，否则通过用术语“由……构成”或”基本上由……构成”替换术语“包含”，本发明的其他方面和实施方式提供上述方面和实施方式。[0216]现在将以举例方式并参考上文描述的附图，说明本发明的某些方面和实施方式。[0217]实施例[0218]实施例1：用于fs118的首次人体内(firstinhuman，fih)剂量论证和剂量递增策略[0219]fs118是同时靶向两种免疫检查点蛋白lag-3和pd-l1的双特异性抗体分子。fs118已经在许多重要方面方面显示出不同于单特异性免疫检查点抑制剂，如抗pd-l1抗体。这些差异需要详细分析以确定用于人类患者中fs118的i期研究的适宜剂量。具体地，在体外和体内研究中测试fs118，以确定用于i期人体研究的最佳起始剂量和剂量递增策略，所述i期人体研究研究设计为确定fs118在患有在既往含pd-1/pd-l1疗法中或之后已经进展的晚期恶性肿瘤患者中的安全性、耐受性、药代动力学和活性(参见下文实施例2)。[0220]1.1fs118和mlag-3/pd-l1：非临床研究概况h缓冲液中稀释至1:10并添加至板，该板随后被加载至gyrolabxp工作站上。通过荧光发射检测fs118。使用响应作为gyrolab评价(evaluator)软件中的加权因子(1/y2)的4参数对数曲线来回归标准曲线。验证试验的lloq为39.1ng/ml。[0229]1.2.2nhp中血浆抗fs118抗体(ada)的测量[0230]在nhp剂量范围探索(drf)研究和4周药物非临床研究质量管理规范(4周glp)毒性研究(分别参见实施例1.3.2.2和1.3.2.3)中使用标准电化学光桥接样式来测量对fs118有反应的抗体的存在。为了限制药物干扰，将生物素酰化的fs118和硫代靶向的fs118与酸解离的样品温育，并且将标记的ada复合物固定在链霉亲和素板上，之后进行洗涤和后续检测。对于多克隆兔阳性对照抗fs118抗体，试验灵敏度是75ng/ml，并且在96.5μg/mlfs118存在下可以检测到150ng/ml阳性对照。[0231]1.2.3血浆总可溶性pd-l1(spd-l1)的测量[0232]根据生产商的操作方案，使用人/食蟹猴b7-h1/pd-l1免疫分析法(r&dsystems#db7h10)，在nhpdrf研究和4周glp毒性研究(分别参见实施例1.3.2.2和1.3.2.3地)中定量施用fs118后的总spd-l1变化。在这个试验中，fs118干扰fc标记的pd-l1的检测，但是似乎不干扰对内源pd-l1的检测，并且因此该试验假定测量总pd-l1(即，游离pd-l1和fs118-pd-l1复合物)。这个试验的已验证lloq是25pg/ml。[0233]1.3动物中的药代动力学和药效动力学[0234]1.3.1小鼠[0235]1.3.1.1野生型(wt)小鼠和lag-3敲除(ko)小鼠中的fs118pk[0236]尽管fs118与mlag-3结合(与hlag-3相比亲和力较低)，但fs118不与mpd-l1结合并且对任一种靶标没有功能活性。fs118在c57/bl6wt小鼠中具有与同种型对照抗体类似的正常igg动力学(表1)。还向lag-3ko小鼠施用fs118，并且在这些动物中fs118显示正常的igg动力学(表1)。[0237]表1：野生型小鼠和lag-3ko小鼠中的fs118pk[0238][0239]auc(0-6)-在给药(单剂量)后0-6天的auc[0240]值是平均[95％ci]n＝每给药组多达3[0241]数据源：[f-starstudyreportfs118_pharm_015][0242]1.3.1.2野生型(wt)小鼠和lag-3敲除小鼠中的mlag-3/pd-l1mab2pk[0243]与fs118相反，野生型小鼠中小鼠替代物mab2(mlag-3/pd-l1)更快速地从血清中清除(表2)。在野生型小鼠中单次施用之后，将小鼠替代物mab2的pk特征与抗pd-l1mab(igg1构架(framework)相同，fabpd-l1结合部分相同)比较。尽管pd-l1结合表位相同，mab2构建体的清除率高于mab的清除率(图3b)。最初，这表明mlag-3靶向结合可能与小鼠替代物mab2的清除率有关，因为抗pd-l1mab不表现相同的清除率(图3b)。然而，在用lag-3ko小鼠后续研究中，小鼠替代物mab2继续显示先前观察到的清除率(表2)，起初表明这个过程最有可能由pd-l1结合mab2样式驱动的。然而，对其他mab2并未观察到这种现象，指示了mab2样式本身不是原因。因此，与抗mpd-l1mab相比，替代物mab2清除率可能是因pd-l1结合与ch3结构域中容许残基的靶向特异性变化的组合所致。[0244]还应当注意的是尽管与抗pd-l1mab相比，小鼠替代物mab2的清除率较高，但是两种构建体均在mc38同基因肿瘤模型中实现明显的抗肿瘤响应(图3a)，这证明观察到的清除率似乎与长期药效动力学效果无关并且不排除抗肿瘤功效。[0245]表2：野生型小鼠和lag-3ko小鼠中的mlag-3/pd-l1mab2pk[0246][0247]auc(0-6)-在给药(单剂量)后0-6天的auc[0248]值是平均[95％ci]n＝每给药组多达3[0249]数据源：[f-starstudyreportfs118_pharm_015][0250]1.3.1.3mc38肿瘤模型中的mlag-3/pd-l1mab2pk[0251]将1×106个mc38小鼠结肠癌细胞(美国国家癌症研究所(bethesda,md,usa))接种到10-11周龄和体重17.73-21.23g(平均19.49g)的各雌性c57/bl6小鼠(streetbarharbor,me,usa)动物右肩正下方的皮下间隙中。接种后八天(研究第0天)，使用配对分布法、基于肿瘤大小(平均肿瘤体积是约55.6mm3(2.1％的可变性))，将六十只接种动物随机分组至12个每组的六个组中，并且开始治疗。每个组的动物以固定容量200μl/动物接受用fs18m-108-29aa/s1(以0.40mg/动物、0.20mg/动物、0.06mg/动物或0.02mg/动物的剂量，等同于约20mg/kg、10mg/kg、3mg/kg和1mg/kg)或阴性对照抗体g1aa/4420(0.20mg/动物，等同于大约10mg/kg)的腹膜内(intrapertoneal，i.p.)治疗。每次施用三剂量(研究第0天、第3天和第6天)。将fs18m-108-29aa/s1在配制缓冲液中稀释并且将g1aa/4420在杜氏磷酸盐缓冲盐水中稀释。用相同的手持式测径器(fowlerultra-calv电子卡钳)获得全部肿瘤量值。在第一治疗日(研究第0天)测量全部动物的肿瘤大小(长度和宽度)并且随后每周测量二次(即每周两次)直至研究第53天为止。使用以下等式计算肿瘤体积：肿瘤体积(mm3)＝长度×宽度2×π/6。[0252]在第一次给药之前一小时并且随后在第一次给药之后71h、143h、148h、152h、168h、192h、240h和288h时通过末端心脏采血取得血清样品。在0h、71h和143h施用各剂量。将样品在-80℃储存并且在干冰上运输以用于分析。定量每剂量血清替代物mab2浓度：表3中显示ctrough水平和cmax水平及auc。谷浓度在第二次给药和上一次给药之前显著降低，表明ada响应。[0253]表3：mc38肿瘤模型中的mlag-3/pd-l1mab2pk[0254][0255]ctrough(1)-在紧接着第二次给药之前、剂量1之后的谷浓度值是平均[95％ci][0256]ctrough(2)-在紧接着最终给药之前、剂量2之后的谷浓度[0257]ctrough(1)-在最终给药72h之后、剂量3之后的谷浓度[0258]d3cmax-在上一次给药后观察到的浓度的最大值[0259]d3auc(0-3)-在第三次(即上一次)给药的之后0-3天的auc[0260]数据源：[f-starstudyreportfs118_pharm_012][0261]尽管给药期间存在暴露量明显下降，但是在全部受测剂量均观察到明显的肿瘤缩减，与g1aa/4420相比，使用混合模式分析(p≤0.05)，fs18m-108-29aa/s1在剂量3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg、跨整个研究时间观察到肿瘤生长率的显著抑制(图4)。使用单因素方差分析(anova)，在研究第17天特别比较同种型对照组(g1aa/4420)与fs18m-108-29aa/s1治疗组之间的肿瘤大小；使用杜基多重比较测试，发现与同种型对照组相比，全部剂量组(1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg)的肿瘤大小在fs18m-108-29aa/s1治疗后均显著地缩减(p《0.05)。kaplan-meier生存分析显示在剂量为3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg时，与mc38同基因模型中的同种型对照相比，fs18m-108-29aa/s1mab2引起了统计显著的生存获益。上一次给药后的观察到cmax和auc(0-3天)高度可变并且不可能从这项研究做出关于剂量比例关系的任何明确结论。[0262]总之，这些数据表明，抗肿瘤功效所需的小鼠替代物mab2的暴露量(cmax，上一次给药，3mg/kg)≥6μg/ml并且在整个给药阶段期间无需维持这个暴露量水平。在野生型小鼠中，小鼠替代物mab2单剂量10mg/kg之后的平均cmax是82.9μg/ml(表2)；假定剂量比例性，3mg/kg剂量等同于25μg/ml。归因于ada形成的可能影响，这种较高的cmax是在携带mc38肿瘤的小鼠中以3mg/kg剂量第一次给药之后实现。[0263]1.3.2非人灵长类[0264]在三个独立研究中表征fs118在nhp中的药代动力学-药效动力学行为：在(i)单剂量(4mg/kg)pk研究、(ii)非glpdrf研究(每周一次静脉内(iv)剂量10mg/kg、50mg/kg和200mg/kg，持续4周(wks))和(iii)一个4周glp毒性研究中每周二次静脉内施用(60mg/kg和200mg/kg)中静脉内施用fs118。[0265]nhp中、fs118的清除率高于预期的人igg样分子的清除率，并且在多达200mg/kg的剂量下、清除率未显示出常见的“靶向-介导”行为(即，在高暴露水平下、靶向-介导的清除饱和)。总之，在nhp研究中，在第一次给药后cmax在横跨4mg/kg-200mg/kg的剂量范围以近似剂量比例增加，并且在第一次给药后的一个剂量间隔下以及在稳定状态下、auc的略微过比例增加。在全部受测剂量水平的pk特征充分地由线性pk模型描述，这表明在给予每周二次多达200mg/kg的剂量时，清除过程不饱和。[0266]1.3.2.1fs118单剂量pk[0267]在该静脉内单剂量研究中，将4mg/kgfs118的清除率与单静脉内施用抗hpd-l1mab进行比较。注意，与fs118相比，这种抗hpd-l1mab具有相同的人igg1构架和不同的抗pd-l1fab结合部分(克隆s1)。抗hpd-l1mab在给药后第一个7天内显示常见的igg动力学，随后暴露量快速损耗，指示ada响应；相反地，fs118表现出明显更快的清除率。fs118和抗hpd-l1mab均与pd-l1结合，尽管未知结合表位的相似性。对其他mab2并未观察到这种现象，指示了mab2样式本身不是原因。反而，与抗hpd-l1mab相比，fs118的ch3结构域内容许残基的靶向变化和/或lag-3结合似乎是fs118清除率更高的原因。[0268]1.3.2.2fs118剂量范围探索(drf)研究[0269]在drf研究(每周一次静脉内(iv)给药10mg/kg、50mg/kg和200mg/kg，持续4周)中，分别如实施例1.2.1和1.2.2中所述那样执行血浆fs118和血浆ada的测量。fs118的暴露量(auc)在上一次给药后降低；这种降低在10mg/kg剂量组特别明显并且指示免疫响应，这由ada的存在证实的。归因于这种免疫响应，在drf研究中，对fs118的暴露量在整个给药间隔期间、在10mg/kg和50mg/kg剂量组中并不维持，在200mg/kg剂量组中的1/3动物中也不维持。这种现象对于向nhp施用人igg并不罕见，因为nhp模型中对人igg预期的免疫原性响应。[0270]1.3.2.3fs1184周glp毒性研究[0271]由于《50mg/kg/wk重复给药之后不大可能实现暴露量维持，故在4周glp毒性研究中fs118以60mg/kg和200mg/kg每周二次静脉内给药。尽管全部治疗的动物在4周glp毒性研究中均出现ada响应，与预测的临床暴露量相比，几乎不影响fs118暴露量并且维持足够的暴露余量。[0272]重复每周二次给药之后不存在fs118明显蓄积且性别不影响fs118的pk。[0273]1.3.2.4总可溶性pd-l1(spd-l1)[0274]在如实施例1.2.3所述的drf和4周glp毒性研究中测量总spd-l1的血浆水平。如果spd-l1-fs118复合物的清除率慢于spd-l1的清除率，导致血浆中spd-l1-fs118复合物的水平升高，则捕获spd-l1指示靶标接合。尽管膜结合型pd-l1是主要的靶标，系统性总spd-l1升高可以是靶标饱和的潜在生物标记物。[0275]以10mg/kg至200mg/kg范围的剂量施用fs118后、24小时内观察到血浆总spd-l1增长≥10倍。在drf研究中，全部三个剂量组中第一次给药之后、0-96h期间总spd-l1有相似的增长轨迹；仅200mg/kg剂量组在第一给药间隔范围内总spd-l1连续增长。在这项研究中，对第一次给药后超过7天的总spd-l1增长的任何进一步分析皆因存在对fs118的ada受损。在4周glp毒性研究中实现的更高暴露水平，平均总spd-l1捕获在研究存续期间继续增长，动物间可变性巨大，尤其对于200mg/kg剂量组。直到每周二次60mg/kg或200mg/kg治疗2-4周后才观察到平台期(指示最大靶向捕获)。鉴于高的可变性，不可能得出这项研究中实现了最大靶向捕获的结论。然而，正如预期的那样，当fs118浓度跌至低于10μg/ml时，康复动物中fs118暴露量的损失明确地与spd-l1捕获的损失相关。除了在研究第22天在60mg/kg剂量组的一些动物中fs118暴露量暂时降低之外，对于60mg/kg和200mg/kg剂量组二者、血浆fs118在整个给药期间均维持高于10μg/ml，从而指示在这个阶段也维持pd-l1抑制作用。[0276]应当注意的是，当摩尔基表述时，血浆spd-l1-fs118复合物(即，总spd-l1)仅占总fs118浓度的小部分。例如，每周二次重复施用200mg/kg之后平均fs118谷浓度是220μg/ml(1.5μm)；在相同时间点平均总spd-l1浓度是约5ng/ml(0.2nm)。因此，系统性fs118-pd-l1复合物不能是fs118清除率的原因。[0277]综上所述，全部剂量水平的fs118均观察到总spd-l1快速增长，全部剂量水平间的增长率相似。关于是否已经实现最大靶向捕获，不能得出明确结论。然而，靶向接合作用可能在10mg/kgfs118以上时饱和。在恢复期结束时，总spd-l1值返回基线。动物血浆中高于10μg/ml的fs118阈值与持久增长的总spd-l1水平相关。[0278]1.4fs118和mlag-3/pd-l1的清除率的研究[0279]总体上，可获得的pk数据表明，野生型小鼠和lag-3ko小鼠中mlag-3/pd-l1mab2的清除率主要是功能pd-l1与ch3结构域中容许残基的靶向特异性变化的组合以能够结合至lag-3的结果。nhp中观察到的fs118的清除率很可能由相同机理驱动，不过不能排除源于nhp和人中更高的lag-3结合亲和力(相比小鼠)的贡献。[0280]下面总结了可能有助于这种清除率的额外因素：[0281]·fs118对fcrn显示出预期的ph-敏感性结合特征并且这个特征不受与lag-3结合的影响。[0282]·用nhp和人体组织中fs118的组织交叉反应性研究未显示任何脱靶结合，这可以解释观察到的fs118的清除率。另外，fs118未显示与密切相关靶标的任何结合。[0283]·在37℃温育长达15天时，在血清中fs118维持功能活性，这指示分解代谢不大可能是原因。[0284]·与抗cd3抗体相比，fs118和小鼠替代物mab2分别与活化的人t细胞和小鼠t细胞温育，3小时的温育时间并不导致测试样品的内化作用。这些结果指示，尽管尚未评估由其他细胞上表达的靶标所致的靶向接合和内化作用，但是不由内化作用介导fs118的清除。[0285]总体上，这些数据指示，尽管在nhp中不能排除lag-3结合作出贡献的可能性，但是fs118和小鼠替代物mab2的非可饱和清除率为pd-l1靶向驱动型并且与mab2构建体中lag-3靶向的ch3修饰相关。归因于fs118对nhppd-l1&lag-3和人pd-l1&lag-3具有相似的结合特性，因此预测人体中清除率相似。[0286]1.5人体中预测的药代动力学-药效动力学行为[0287]1.5.1nhppk模型[0288]从nhp单剂量pk研究、drf研究和glp研究pk数据(给药后0-7；参见实施例1.3.2.1-1.3.2.3)构建了描述fs118系统性暴露量的二室群体pk模型。全部pk建模、拟合和模拟均使用adapt第5版(d’argenio等人,2009)执行。[0289]每只个体动物的pk进行二室模型的初始拟合，每只动物产生四个pk参数(cl1、cl2、v1和v2)。这样做为了评估全部动物的pk是否均可以汇总在一起并且作为群体pk模型的一部分使用。[0290]依据以下假设进行群体pk拟合：每只动物的pk参数从对数正态分布抽取，由某些群体平均向量和协方差矩阵表征。这大幅度减少未知数的数目，从各个pk案例中的4×(动物数目)＝112至14(四个群体均值和4×4协方差矩阵的10个不同协方差矩阵元素)，因而显著改善已知-未知比率。[0291]图5中显示了描述fs118线性动力学的nhp和人pk模型的总体结构。该模型充分描述nhp中观察到的数据(表4)并且预测后4周glp毒性研究中重复施用之后观察到的数据；换而言之，没有证据表明fs118清除率中存在明显可饱和组分。异速地缩放这个模型以预测fs118的人体pk，对于清除率和区室间交换系数使用0.75的指数(exponent)而对于体积使用1.0的指数(表4)。由于未观察到靶向-介导动力学，故靶向结合亲和力不并入该pk模型。鉴于这些假设，预测不同剂量方案的人体fs118暴露量。使用这些参数值，在1000名人类受试者中执行pk模拟，以在首次人体内(fih)临床试验之前评估人类群体中的pk范围。这些模拟进一步预测，20mg/kg以下剂量将在体内产生远低于最高无严重中毒剂量(hnstd；参见以下实施例1.5.2)的fs118暴露水平并且因此这些剂量未表现出安全顾虑。[0292]应当注意的是，nhp中观察到的fs118清除率高于常规在nhp中观察到的单特异性抗体的清除率，但不至于高到无法排除药理学效应。[0293]表4：fs118–pk模型参数[0294][0295]体重nhp2.88kg；人类70kg[0296]数据源：[f-starstudyreport022，表7和8][0297]1.5.2最高无严重中毒剂量(hnstd)[0298]fs118在nhp4周glp毒性研究中是良好耐受的(参见实施例1.3.2.3)并且确立hnstd为200mg/kg每周二次。在体外试验中，使用以人pbmc湿法涂敷的固定样式或使用人全血样式，均未观察到fs118相关的细胞因子升高。另外，未在nhp4周glp毒性研究中观察到fs118治疗相关的血清细胞因子组(il-2、il-6、il-8、il-10、ifn-γ和tnf-α)升高。[0299]对于晚期癌症患者的fih研究而言，ichs9指南(ichs9)推荐初始临床剂量为hnstd的1/6(表5)；然而，来自美国食品药品监督管理局(fda)的最新出版物建议，该剂量可能对免疫-肿瘤学药物不合适并且应当考虑与靶标占有率(targetoccupancy)和功能活性有关的额外因素(saber等人,2016)。[0300]将提议的800μg提升至20mg/kg(每周给药)的fih起始固定剂量(参见实施例1.5.3.1)至少比hnstd低10倍，远低于推荐的ichs9指南。[0301]表5：fda指南：s9非临床评估抗癌药物[0302][0303]*-ichs9(fda行业指南，2010年3月)[0304]1.5.3fih研究设计[0305]将首次人体内(fih)研究(实施例2)设计为开放标记的、多剂量、剂量递增和队列扩大研究。决定在诊断患有晚期肿瘤的成人患者中实施研究，以表征fs118的安全性、耐受性、药代动力学(pk)和活性。进一步决定将按加速滴定设计(其中将评估单名患者队列)招募初始患者，随后进行3 3增长剂量递增设计(图6)。该研究设计为系统地评估安全性和耐受性、及确认患有晚期肿瘤的患者中fs118的最大耐受剂量(mtd)和/或ii期推荐剂量(recommendedphase2dose，rp2d)。rp2d定义为具有可接受毒性的最大生物有效剂量。[0306]选定起始剂量与最高剂量之间的剂量增量以允许安全的剂量递增，并且该剂量增量由pk建模指导以捕获足够的fs118剂量-暴露量关系。决定使用测量游离fs118(lag-3捕获/pd-l1检测样式)的验证gyros试验来评估人体中的pk，并且确保pk数据在患者间剂量递增阶段结束时将可用的，以允许评估与预测的人pk相比的剂量-暴露量关系。还决定测量总血浆slag-3和spd-l1的增长作为靶标接合的潜在生物标记物，并且还决定评估从每3周治疗周期之后取得的样品中生成ada的潜力。[0307]1.5.3.1论证fih起始剂量和剂量递增策略[0308]为临床测试设定可接受的起始剂量时，重要的是考虑相似分子的潜在药理活性以及公开可用的临床经验(saber等人,2016)。基于全部可用数据，提出的fih起始剂量是静脉内800μg，并且提出患者内部加速剂量递增阶段，旨在安全地将fs118暴露量升高至预期有抗肿瘤功效的暴露量；最小化现在无效剂量方案的暴露量。fih研究还设计为研究在整个给药间隔期间维持靶标抑制的剂量方案的必要性。[0309]支持选定给药策略的要点如下：[0310]·来自用小鼠替代物mab2的小鼠同基因肿瘤模型中的暴露量数据表明，抗肿瘤功效不需要fs118的连续高暴露量，并且这与单特异性抗pd-l1mab形成鲜明反差。在这个肿瘤模型中，小鼠替代物mab2≥1mg/kg的剂量与抑制肿瘤进展相关，3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量具有统计显著性。图3a中显示每3天按10mg/kg施用(3剂量)抗pd-l1mab和小鼠替代物mab2的抗肿瘤功效，以及野生型非携瘤小鼠中两种分子单次给药之后的暴露量特征。尽管对抗pd-l1mab的暴露量在3天时段内维持高于100μg/ml，但对mlag-3/pd-l1的暴露量在相同的时间段跌至约10μg/ml。应当注意的是，在mc38模型中对小鼠替代物mab2的谷暴露量随时间推移而降低，可能与ada形成有关。在每3天3mg/kg小鼠替代物mab2时，第一次给药之后的估计cmax是25μg/ml并且上一次给药后的观察到的cmax是6μg/ml。[0311]·fs118在nhp4周glp毒性研究中是良好耐受的。在脑和其他组织中观察到混合的单核细胞浸润，与观察到的其他免疫检查点抑制剂类似。[0312]·体外试验中未观察到fs118相关细胞因子的增长并且nhp4周glp毒性研究中未观察到血清细胞因子水平升高。这与他免疫-肿瘤学生物治疗药一致，即，在与》90％靶标占有率相关的剂量与急性细胞因子释放综合征不相关的情况下，(herbst等人2014；heery等人2017)。[0313]·与fs118与hpd-l1的结合比较时，小鼠替代物mab2对mpd-l1的biacore结合亲和力已经显示出高约10倍。相反地，与fs118对hlag-3结合比较时，小鼠替代物mab2对mlag-3的biacore结合亲和力已经显示低约20倍。然而，当比较结合至过度表达相应靶蛋白的hek细胞的ec50值与功能性t细胞活化试验中的ec50值时，这些差异明显小得多。鉴于fs118和小鼠替代物mab2的清除率相似，在功能性pd-l1靶标结合的存在下，这些观察到的靶标结合亲和力差异不大可能影响人体中fs118pk的预测。[0314]·对免疫-肿瘤学药物的可用非临床和临床安全性数据的分析显示，基于20-80％靶标占有率和/或20-80％体外功能活性的fih剂量具有可接受的临床毒性。对于具有正常或沉默型adcc活性的抗体，高于靶标饱和的fih系统性暴露量也是可接受的(saber等人,2016)，并且应当注意的是fs118具有lala突变以降低adcc活性。在提出的800μg的起始剂量下cmax(0.26μg/ml)的系统性靶标占有率和体外功能活性(作为最大值的百分数)的估计值在35.8％与79.2％之间并且认为对fih剂量适宜。[0315]·在用次优活化(sub-optimalactivation)的人t细胞活化分析中，尽管观察到相当大的可变性，fs118刺激ifnγ产生，平均ec50为0.22μg/ml。[0316]·与对相同靶标的单特异性抗体相比，fs118显示出具有高清除率，并且机理似乎主要地由这种双特异性构建体中的pd-l1结合组分驱动，至少在小鼠中是这样。注意到fs118在野生型小鼠和lag-3ko小鼠中具有正常的igg动力学(不存在功能性pd-l1结合)，而替代物mab2在野生型小鼠和lag-3ko小鼠两者中均被迅速清除。在nhp中、剂量多达200mg/kg时清除过程未饱和，并且人体中的预测终末半衰期是3.7天(95％置信区间：0.35–10.4天)。[0317]·将nhp4周毒性研究中hnstd的稳定状态下cmax和auc(在一个7天剂量间隔下)与人体中按提议的剂量递增方案时各剂量的预测稳定状态暴露量进行比较，并且表6中显示所得的暴露量安全余量。提议的800μg的起始剂量(70kg受试者约11μg/kg)预期产生比nhp中hnstd低》15,000倍的暴露量，并且在患者内加速滴定阶段结束时，这种差异降低至》190倍。fih剂量的巨大安全余量允许fs118在人体中具有出人意料的正常igg动力学，且将继续研究的剂量递增部分之前证实fs118在人体中的pk行为。在临床中，20mg/kg/wk的剂量预期产生》10μg/ml的fs118ctrough浓度和比nhp中hnstd低10倍的暴露量(cmax和auc)。实现这个靶浓度的剂量和给药频率可以在加速剂量滴定阶段结束时来调整。[0318]表6：预测的暴露余量：fih研究[0319]预测暴露余量-人类vsnhp[0320][0321]在4wkglp毒理学研究中测试的高剂量下，预测的暴露余量，cmax和auc(稳态)与cmax和auc(0-7天，稳态)进行比较:200mg/kg/每周两次nhp(即，观察到的auc(0-tau)×2)[0322]·尽管来自nhp的证据表明血浆总spd-l1可能是靶标接合的良好生物标记物，但血浆总spd-l1未纳入pk模型中，并且将在fih研究中进行测量。小鼠同基因肿瘤模型还表明，可能不需要在贯穿每个治疗周期完全抑制pd-l1。在nhp中，≥10μg/ml的血浆fs118浓度与维持pd-l1捕获(并且通过推断，pd-l1抑制)相关，并且fih临床研究设计为探索有限时间段对pd-l1的最大抑制(cmax≥10μg/ml)和贯穿每个给药周期对pd-l1的持续抑制(ctrough≥10μg/ml)。[0323]总之，这些数据指示800μg是fs118临床测试的适当起始剂量。预测这个提议的起始剂量在1小时输注结束时产生最大浓度(cmax0.26μg/ml)，就靶标受体占有率和体外功能活性而言，这是可接受的。此外，这个cmax比与fs118mab2替代物分子的抗肿瘤功效相关的cmax低约10倍至100倍，并且比nhp中hnstd下fs118的cmax暴露量低》15,000倍；在给药间隔下auc维持相似的暴露余量(表6)。提出了患者内部剂量递增方案、以快速和安全地实现对fs118的治疗相关的暴露量，在维持安全性的情况下，使患者对亚治疗剂量的暴露量最小化。在患者内剂量递增期结束时，预期平均cmax是25μg/ml，这是在mc38肿瘤模型中与小鼠替代物mab2的抗肿瘤功效相关的暴露量范围内并且高于与nhp中维持spd-l1捕获相关的fs118暴露量(10μg/ml)。[0324]虽然非临床肿瘤功效数据表明，不需要持续抑制pd-l1，但还决定探索在fih研究期间贯穿给药间隔期维持pd-l1捕获的fs118剂量，并且≥10mg/kg/wk的fs118剂量预期产生≥10μg/ml的平均ctrough浓度。[0325]1.6总结和结论[0326]来自用小鼠替代物mab2(mlag-3/pd-l1)的小鼠同基因肿瘤模型中的暴露量数据表面，抗肿瘤功效不需要fs118的连续高暴露量，与单特异性抗pd-l1mab形成对比。在这个肿瘤模型中，小鼠替代物mab2≥1mg/kg的剂量与抑制肿瘤进展相关，3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量具有统计显著性。[0327]在功能性pd-l1结合存在下，fs118和小鼠替代物mab2两者的清除率高于标准单特异性igg样分子观察到的清除率。虽然暴露量伴随剂量递增存在略微超比例的增长，但在nhp中这个清除过程在每周二次多达200mg/kg的剂量时似乎未饱和并且由线性pk模型充分描述。也就是说，fs118未显示可饱和的靶标-介导的动力学行为，如有时靶向膜受体的igg样分子所观察到的那样。然而，这个清除过程似乎取决于mab2构建体的功能性pd-l1结合，因为在野生型小鼠和lag-3ko小鼠中观察到fs118的正常igg动力学(在小鼠中fs118缺少显著的pd-l1结合)。[0328]在nhp4周glp毒性研究中，fs118已经显示良好耐受，提供用于临床测试的足够暴露余量的剂量。预测提议的800μg的fih起始剂量在1小时输注结束时产生0.26μg/ml的最大浓度(cmax)，该浓度比与小鼠替代物mab2分子的抗肿瘤功效相关的cmax低约10倍，并且比nhp中hnstd下fs118的cmax暴露量低》15,000倍。在给药间隔下auc维持相似的暴露余量。[0329]血浆总spd-l1已经显示是nhp中pd-l1靶向接合的有用的生物标记物。在nhp中，≥10μg/ml的血浆fs118浓度与维持pd-l1捕获(并且通过推断，pd-l1抑制)相关，并且fih临床研究设计为探索有限时间段对pd-l1的最大抑制(fs118cmax≥10μg/ml)和贯穿每个给药周期对pd-l1的持续抑制(fs118ctrough≥10μg/ml)。剂量递增策略设计为患者内加速剂量滴定阶段(按1mg/kg/wkfs118)结束时实现约10μg/ml的cmax并且随后探索在给药间隔内维持fs118≥10μg/ml的更高暴露量水平。10mg/kg/wk和20mg/kg/wk的剂量被预测在整个剂量间隔期间实现》10μg/ml的fs118平均血浆浓度。[0330]实施例2：lag-3/pd-l1双特异性抗体fs118在既往含pd-1/pd-l1的疗法之时或之后出现进展的晚期恶性肿瘤患者中安全性、耐受性、药代动力学和活性的i期、开放标记的、剂量递增和队列扩大首次人体内研究[0331]2.1研究设计与参数[0332]在诊断患有晚期肿瘤的成人患者中进行研究，以表征fs118的安全性、耐受性、药代动力学(pk)和活性。用加速滴定设计(在此期间评估单名患者队列)，随后用3 3增长剂量递增设计开始该i期、多中心、开放标记的、多剂量、首次人体内研究。该研究设计为系统地评估安全性和耐受性、及确认患有晚期肿瘤的患者中fs118的最大耐受剂量(mtd)和/或ii期推荐剂量(rp2d)。rp2d定义为具有可接受毒性的最大生物有效剂量。还评估药代动力学、药效动力学、免疫原性和响应。[0333]在签署知情同意书之后，全部患者均在开始治疗前28天内经历筛选以确定合格性。患者在3周治疗周期中、每周静脉内(iv)给药，直至icpd(即，免疫确认的病情进展)(或根据用于具有淋巴瘤患者的lugano分类的病情进展)、不可接受的毒性、由患者取消同意、研究者中止患者、申办方决定终止研究或治疗、开始替代性抗癌疗法或死亡。患者在最后一次fs118给药后约28天(±7天)接受或将接受治疗结束(end-of-treatment，eot)访视，并在最后一次fs118给药后约90天(±7天)进行90天随访。对于全部患者，详实记录icpd(或根据用于具有淋巴瘤患者的lugano分类的病情进展)后，每3个月评估或将评估总生存期(overallsurvival，os)以评估存活率和研究后施用的癌症疗法。[0334]在第1周期期间，对前5名作为单患者队列顺序登记，观察患者的剂量限制性毒性(dlt)。由于每个队列中未观察到没有明确归因于患者的潜在疾病、其他医学疾病或伴随药物治疗或操作的dlt或≥2级不良事件，在下一个更高剂量的队列中对新患者进行给药并且在dlt阶段观察新患者。在没有明确归因于患者的潜在疾病、其他医学疾病或伴随药物治疗或操作的dlt或≥2级不良事件的情况下、在队列5中完成第1周期之后，从队列6起以3 3设计继续剂量递增方案。如果患者耐受其初始剂量，在没有明确归因于患者的潜在性疾病、其他医学疾病或伴随药物治疗或操作的dlt或≥2级不良事件的证据的情况下患者在下一个更高剂量的队列中已经完成dlt阶段，并且安全评审委员(src)已经宣布该剂量安全，则患者内剂量递增在单名患者队列中进行。[0335]如果在任何单名患者队列中，患者在dlt阶段期间出现没有明确归因于患者的潜在疾病、其他医学疾病或伴随药物治疗或操作的≥2级不良事件，额外的2名患者将在该剂量水平入选并且使用3 3设计规则以评估，但这种情况并未发生。全部后续的队列依照3 3设计入选。如果dlt出现，队列本应扩充至6名患者，但是未观察到dlt。[0336]根据国家癌症研究所(nci)不良事件通用术语标准(ctcae)第4.03版评估毒性。[0337]主要目的[0338]这项研究的主要目标是：[0339]1.评估fs118的安全性并且确定fs118的mtd和/或rp2d，以及[0340]2.确定fs118的pk参数。[0341]次要目的[0342]这项研究的次要目的是：[0343]1.根据实体瘤疗效评估标准(responseevaluationcriteriainsolidtumours,recist)1.1或lugano分类法(如适用)，以及irecist(用于基于免疫的疗法的改良recist1.1)评估fs118抗癌活性的初步证据；以及[0344]2.表征fs118的免疫原性(抗药物抗体[adas])。[0345]探索性目的[0346]这项研究的探索性目的是表征药效动力学特征并且将潜在的初级药理学与暴露量相关联。[0347]患者群体和患者数量[0348]截至2019年5月，24名患者入选，截至2019年8月增加至40名患者并且截至2020年4月增加至43名患者。患者在美国跨4个研究中心入选。患有晚期肿瘤的患者年龄≥18岁。[0349]治疗施用[0350]将fs118作为缓慢团注、以静脉内方式向第一队进行施用并且在3周治疗周期中每周通过连续输注泵以静脉内方式向后续队进行施用，直至icpd(或根据用于具有淋巴瘤的患者的lugano分类出现病情进展)、不可接受的毒性、由患者取消同意、研究者中止患者、申办方决定终止研究或治疗、开始替代性抗癌疗法或死亡。[0351]治疗和研究持续时间[0352]如果患者完成16个周期的fs118治疗(或12个月)，或如果患者出现了确认的病情进展，则认定他们已经完成治疗。在全部入选本研究的患者已经有机会完成16个用fs118治疗周期并且在在最后一次研究药物施用后追踪90天之后，将执行主要终点的最终分析并编纂单个最终临床研究报告。研究完成的估计时间期限是36个月。[0353]合格性标准[0354]每名入选的患者须符合全部以下进一步的要求以符合入选本研究的资格：[0355]1.对于剂量递增而言：患有在抗程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)疗法或抗程序性死亡-配体1(pd-l1)疗法中或之后的情况下进展的组织学确认、局部晚期、不可切除的或转移性实体瘤或血液恶性肿瘤的患者，该患者没有可用的有效标准疗法或标准疗法已经对其失效；[0356]2.对于剂量扩大而言：在抗pd-1或pd-l1疗法中或之后的情况下患有进展的组织学确认、局部晚期、不可切除的或转移性宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌、头颈部鳞状细胞癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、三阴性乳腺癌或非霍奇金或霍奇金淋巴瘤的患者，该患者没有可用的有效标准疗法或标准疗法已经失效；[0357]3.既往含pd-1或pd-l1的方案的最短治疗持续时间是12周(或等同于2次响应评估)；[0358]4.可测量病情(定义为中枢神经系统[cns]外部至少1个可测量病灶)，如由研究者使用recist1.1或lugano分类法(如适用)所确定的；[0359]5.美国东部肿瘤协作组体能状态(easterncooperativeoncologygroup,ecog)≤1[0360]6.估计的预期寿命为至少3个月；[0361]7.患者同意进行肿瘤的治疗前和治疗中活检且研究者没有判定活检为高风险。对于单名患者队列的患者，可用的基线肿瘤样品包括新获得的肿瘤活检样品和/或来自初始诊断的归档组织样品(《6月龄)(如果可用)；[0362]8.如果存在受孕风险，男性和女性患者的高效的避孕措施(即，失败率小于每年1％的方法)。在首次研究治疗施用之前28天、研究治疗期间及停止研究治疗之后至少60天必须使用高效的避孕措施。若女性患者在本人或其伴侣参与这项研究之时已经怀孕或疑似怀孕，将立即告知治疗医生和申办方(或委派人员)；以及[0363]9.愿意且能够提供书面知情同意书[0364]筛查时满足以下标准之任一者的患者不符合进入研究的资格：[0365]1.在第一次研究药物给药的28天或5个半衰期(以较短者为准)以内接受系统性抗癌化学疗法、接受用多于1种并非医护标准的免疫检查点抑制剂(例外是获批适应症作为某种联用)的既往治疗、或接受用淋巴细胞活化基因3(lag-3)抑制剂或多特异性免疫检查点抑制剂分子的既往治疗；[0366]2.患者在先前2年内具有需要治疗的活动性自身免疫疾病及患者具有的任何自身免疫疾病史的记录史。注意：这包括具有以下病史的患者：炎症性肠病、溃疡性结肠炎和克罗恩(crohn)病、类风湿性关节炎、系统性性进展性硬化(硬皮病)、系统性红斑狼疮、自身免疫性血管炎(例如，韦格纳(wegener)肉芽肿)、视为有自身免疫起源的cns或运动神经病(例如，格林-巴利(guillainbarré)综合征、重症肌无力、多发性硬化症)和中度或重度银屑病。然而，在研究医学监查员的批准下允许具有以下疾病的患者入选：稳定响应至少6个月且没有可能与皮质类固醇类联合治疗免疫相关性不良事件禁忌的类风湿性关节炎或银屑病、白斑症、斯耶格伦综合征、间质性膀胱炎、格夫雷斯氏(grave’s)病或桥本氏(hashimoto’s)病，或激素替代时稳定的甲状腺功能减退症；[0367]3.非受控的并发疾病史，包括但不限于：[0368]ο用标准疗法治疗的非受控的高血压的纪录史(未稳定化至150/90mmhg或更低)，或[0369]ο非受控的糖尿病的纪录史。注意：可能考虑在胰岛素稳定替代疗法下控制良好糖尿病至少6个月且没有可能与皮质类固醇类联合治疗免疫相关性不良事件禁忌的患者；[0370]4.已知的感染：[0371]ο人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒(hbv)(即，乙型肝炎表面抗原)或丙型肝炎病毒(hcv)(即，可检出的hcv核糖核酸[rna])。注意：可能考虑具有既往已治疗hbv感染史的抗原阴性患者或具有既往已治疗hbv感染史的hcvrna不可检出患者；或[0372]ο活动性感染(包括病毒滴度为阳性的无症状感染和研究者判断病症可能随研究治疗加重或病症将会损害/禁止患者参与研究)；[0373]5.未控制的cns转移灶、原发性cns肿瘤或具有以cns转移灶作为唯一可测量病情的实体瘤。有活动性疾病但cns疾病稳定的患者可以入选；[0374]6.用既往含pd-1/pd-l1的治疗时活动性间质性肺病或肺炎、脑炎、癫痫发作、重度免疫相关性不良事件(即，肺炎、肝炎、结肠炎、垂体炎、胰腺炎、心肌炎、cns或眼炎)的既往史或前述病症、其他免疫刺激性抗癌药既往治疗时重度或危及生命的皮肤不良反应史；[0375]7.使用免疫抑制剂、需要免疫抑制的既往器官移植、对单克隆抗体或其辅料有超敏反应或不耐受，或与既往疗法有关的》1级ncictcaev4.03的持续毒性，例外如下：[0376]ο全部等级脱发均可接受；[0377]ο替代疗法时的内分泌功能障碍是可接受的(包括接受激素替代疗法时稳定的垂体炎)；[0378]ο非系统性类固醇；允许局部用、眼内、鼻内、关节内或吸入性类固醇；[0379]ο允许在肾上腺功能减退患者以等于或低于10mg/天泼尼松当量的系统性类固醇替代治疗；并且[0380]ο应与医学监查员和/或申办方讨论入选以等于或低于10mg/天泼尼松当量的系统性类固醇治疗作为其姑息治疗或症状性病情控制的一部分的患者；[0381]8.明显的心脏异常，包括以下病史：长qtc综合征和/或起搏器、脑血管意外/卒中(入选前《6个月)、心肌梗死(入选前《6个月)、不稳定型心绞痛、充血性心力衰竭(纽约心脏学会分类法≥ii类)或用药物尚未控制至少6个月的有临床意义和有症状的心律失常；[0382]9.用以下标准筛选实验室值(使用ncictcae4.03版)：[0383]ο血红蛋白《9.0g/dl(5.7μmol/l)；[0384]ο中性粒细胞绝对计数(anc)《1.0×109/l；[0385]ο血小板《100×109/l；[0386]ο血清肌酐》1.5×正常值上限(uln)；[0387]ο总胆红素》1.5×uln；或天冬氨酸氨基转移酶(ast)和丙氨酸氨基转移酶(alt)》2.5×uln(如果肝转移，≥5×uln)；或[0388]10.根据研究者判断，不耐受研究用产品或其辅料，或将严重损害和/或禁止患者参与研究的任何病症。[0389]评估和分析的主要标准[0390]这项研究的主要终点是：[0391]·不良事件的发生率、严重程度和持续时间；和[0392]·pk参数，包括最大观察浓度(cmax)、至cmax的时间(tmax)、观察血清谷浓度(ctrough)、终末清除半衰期(t1/2)、1个给药间隔内的浓度-时间曲线下面积(auc)[auc(tau)]、给药间隔内的平均浓度[auc(tau)/τ]、系统清除率(cl)、稳定状态分布体积(vss)和从第一次给药至稳定状态的蓄积率。[0393]这项研究的次要终点是：[0394]·如依据recist1.1或lugano分类法(如适用)和irecist所评估的响应。这些响应已经用来确定病情控制率(dcr)、客观响应率(orr)、响应持续时间(dor)和无进展存活率(pfs)/ipfs。还将评估总体生率；以及[0395]·fs118免疫原性的发生率，包括ada检测和分析。[0396]这项研究的探索性终点包括：[0397]·依据外周血单核细胞流式细胞术，cd3 、cd4 和cd8 t细胞群体中pd-l1和lag-3受体占有率的百分数；[0398]·可溶性pd-l1和lag-3定量。[0399]统计注意事项[0400]对全部入选患者、患者分配情况被制表。使用用于安全分析集的描述性统计量来总结人口统计数据和基线数据(即，年龄、性别、人种、族裔、高度和体重)和疾病史和特征。[0401]已经使用功效分析集(efficacyanalysisset)执行了功效分析。已经使用根据recist1.1标准或lugano分类法(如适用)和根据irecist标准的肿瘤响应数据。对于orr和dcr，已经/将提供点估计值和95％精确置信区间。响应情况未知或遗失的患者将作为无响应者对待(即计算百分数时，他们将会纳入分母)。[0402]已经根据recist1.1标准或lugano分类法(如适用)和根据irecist标准确定最佳总体响应。[0403]时间-至-事件变量，包括治愈持续时间、dor、pfs、ipfs和os已经/将使用kaplan-meier法进行描述性概述。对时间-至-事件变量的审查方法将在统计分析计划中进行描述。将生成时间-至-事件变量的kaplan-meier曲线。[0404]pk分析集已经用于概述全部pk数据。已经以图形方式展示了血清浓度对时间曲线，以及(在必要时)每名患者和按计量队列在剂量间隔范围内的非参数性参量cmax、tmax、ctrough和auc的表格概述。若适宜，使用从浓度和时间曲线的终末阶段无限外推并且允许导出血清t1/2、cl和vss，已经计算出总auc。[0405]药效动力学分析集已经用于药效动力学分析。[0406]研究期间已经概述了fs118ada阳性的患者比例以及中和性(neutralizing)fs118ada阳性的患者比例。已经进行fs118ada滴度和pk的相关性分析。[0407]安全性特征已经以不良事件(包括dlt和严重不良事件)、体检结果(包括ecog体能状态)、生命体征量值、标准临床实验室量值和心电图记录为基础。[0408]样本量论证[0409]截至2019年5月，24名患者入选，截至2019年8月增加至40名患者并且截至2020年4月增加至43名患者。加速滴定部分由最少5名患者构成，并且该研究的3 3增长剂量递增部分由每剂量水平3至6名患者构成。可以出于安全原因(多达3名患者)、为了富集pk和/或药效动力学(多达10名患者)和为了进一步表征rp2d水平处或之前的临床疗效(多达24名患者)而扩大了队列。依据实用的注意事项已经确定该研究的样本量。尚未进行正式统计评估。[0410]2.2期中结果(2019年5月)[0411]2.2.1期中临床数据[0412]截至2019年5月，已经完成加速滴定设计(800μg、2400μg、0.1mg/kg、0.3mg/kg和1.0mg/kg的剂量)的单名患者队列。在i期研究的3 3增长剂量递增设计部分中，已经完成3mg/kg剂量水平给药并且正在进行10mg/kg和20mg/kg剂量水平给药。已经扩大两个队列(3位受试者为1mg/kg；10位受试者为3mg/kg)。[0413]截至2019年5月入选i期研究的24名患者当中，8名患者正进行有效治疗。16名患者停止治疗，4名患者归因于icpd，2名患者归因于recist1.1病情进展，和10名患者归因于其他注意事项：tbc/临床pd/pi决定。[0414]该研究的i期期间直至2019年5月观察到的治疗期间发生的不良事件当中，20％事件评定为与fs118有关，均为轻度至中度。观察到的10例严重不良事件当中，无一与fs118有关。在测试的任一剂量均未观察到dlt。这证明多达20mg/kg的剂量良好耐受并且fs118的安全性特性与其他免疫检查点阻断剂一致。[0415]用fs118治疗的持续时间持续了平均9.2周＝3个周期(0-24周)。对于14名受试者，报告至少1个“研究中”的扫描。这14名患者当中，5名出现病情稳定并且9名出现病情进展。尽管确定功效不是i期研究的主要目标，但患者在fs118治疗上花费的平均时间和研究中扫描显示了14名患者中5人疾病稳定的事实，证明了fs118能够稳定病情，并且因此fs118具有抑制人类患者中肿瘤生长的潜力。在评估这个数据时，应当谨记，入选i期研究的患者均患晚期恶性肿瘤并且可能已经受损过甚，以至于不能够从fs118治疗获益。受损较轻的癌症患者的治疗，如可能在ii期研究中研究那样，可能显示甚至更高的fs118功效。[0416]2.2.2期中药代动力学/药效动力学数据[0417]对跨首次7个队列(800μg、2400μg、0.1mg/kg/q1wk、0.3mg/kg/q1wk、1mg/kg/q1wk、3mg/kg/q1wk、10mg/kg/q1wk的剂量)的20名患者进行药代动力学/药效动力学分析，测量pk和药效动力学(血液中lag-3或pd-l1受体的fs118接合[可溶性或t细胞表达的])。仅对一名来自20mg/kg/q1wk剂量队列患者进行pk分析。[0418]2.2.2.1pk分析[0419]对于pk分析，使用验证配体结合试验测量血清fs118水平，该试验用生物素酰化lag-3捕获和alexa647-标记pd-l1检测的gyros平台。简而言之，将血清样品在rexxiphn中稀释至最低要求稀释度(mrd)1:10并添加至板，随后将板连同bioaffy1000cd(s)一起装载至gyrolabxp工作站上。通过荧光发射检测fs118。使用响应作为gyrolab评价应用程序中的加权因子(1/y2)的5参数对数曲线回归标准曲线。验证试验的lloq为100ng/ml。[0420]结果显示，横跨7个队列(800μg、2400μg、0.1mg/kg/q1wk、0.3mg/kg/q1wk、1mg/kg/q1wk、3mg/kg/q1wk、10mg/kg/q1wk的剂量)，随着剂量增长，暴露量呈剂量线性增长(cmax、auc)。cmax与来自非人灵长类的比例近似，但清除率高于预测(auc比预测低30％)。暴露量(cmax)存在线性增长并且每周给药剂量达3mg/kg时无fs118的蓄积。在3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg队列中一些受试者具有可测量的ctroughfs118浓度。对于剂量《1mg/kg的全部患者而言，给药后7天(在下一次输注之前)的血清fs118浓度低于100ng/ml(lloq)。[0421]2.2.2.2可溶性lag-3[0422]在饱和量的fs118存在下，使用验证酶联免疫测定(elisa)定量血清总slag-3。简而言之，用涂敷抗lag-3单克隆抗体的板捕获血清样品中的slag-3(非竞争性结合)。体外添加fs118以饱和slag-3的结合。用针对与slag-3受体接合的fs118fcab结构域的、生物素酰化的抗独特型抗体检出捕获的slag-3:fs118复合物，随后添加链霉亲和素缀合的hrp和生色原。验证试验的lloq为0.675ng/ml。[0423]分析1mg/kg/q1wk、3mg/kg/q1wk和10mg/kg/q1wk剂量水平下的可溶性lag-3(slag-3)，显示第1周期和第2周期的第一次给药后总slag-3升高大约10倍，在给药后2-3天cmax到达最高值。[0424]slag-3水平升高证实受体的fs118接合。在1mg/kg剂量水平，总slag-3浓度在下一次给药(第1周期第8天；c1d8)之前返回基线值。在3mg/kg/q1wk和10mg/kg/q1wk队列，存在下一次给药之前总slag-3积累(谷浓度)的一些证据。3mg/kg和10mg/kg剂量下总可溶性lag-3增长的程度和持续时间建议用fs118捕获可溶性lag-3几乎已经饱和。[0425]2.2.2.3可溶性pd-l1[0426]在饱和量的fs118存在下，使用meso-scalediscovery免疫试验定量血浆总可溶性pd-l1(spd-l1)。该试验的lloq为0.458ng/ml。结果显示每次给药之后总可溶性pd-l1(spd-l1)暂时升高的早期证据，不过这个结果在全部患者之间不一致并且许多患者具有低于试验定量水平的基线浓度。[0427]2.2.2.4pd-l1和lag-3受体占有率[0428]在全血t细胞和单核细胞中测量pd-l1和lag-3受体占有率。简而言之，该方法包括在cyto-管中收集全血，储存在4℃直至处理(每次试验100μl)。首先，在室温用5μl人bdfc阻断溶液阻断非特异性结合10分钟。随后将样品用三组(游离受体、总受体和fmo/同种型)抗体混合物(50μl)之一染色并且在室温温育30分钟，随后在室温用900μlbdfacs裂解溶液裂解红细胞并固定10分钟。随后用2％fbs洗涤样品两次，之后在细胞计(lsrfortessa)上采集。使用以下公式计算受体占有率(假设：pd-l1或lag-3靶标表达水平在研究时间范围内保持不变)：[0429][0430]c-来自同种型游离靶标(竞争性)mab的中位荧光强度(mdfi)[0431]d-来自游离靶标(竞争性)mab的mdfi[0432]c0，d0：来自药物施用前样品的mdfi值[0433]ct，dt：给定时间点处从药物施用后样品的mdfi[0434]总体上，与pd-l1表达比较时，lag-3的表达低40倍至130倍并且估计的受体占有率可变性相当高(cv一般》50％)。在第一次给药之后3小时，3mg/kg和10mg/kg剂量队列的平均pd-l1受体占有率分别是49％和54％，并且pd-l1受体占有率和血清fs118浓度之间不存在明显关系。类似地，在第一次给药之后3小时，3mg/kg和10mg/kg剂量队列的平均lag-3受体占有率分别是23％和32％，并且lag-3受体占有率和血清fs118浓度之间不存在明显关系。紧邻第二次给药之前，与给药后3小时时间点比较时，pd-l1和lag-3受体占有率较低。[0435]对于pk值低于定量水平或十分低的3mg/kg/q1wk、10mg/kg/q1wk和20mg/kg/q1wk队列，在ctrough水平的一些患者的血液中总slag-3和spd-l1和lag-3t细胞受体占有率的累积提供了ctrough水平时药效动力学反应持久的证据，因此出乎意料地显示，人类患者中的药效动力学效果无需整个给药间隔期间fs118暴露。[0436]以上结果表明，与具有小鼠替代物抗lag3/pd-l1抗体的小鼠中观察到的结果相反，人体中fs118的清除率主要为lag-3介导，更具体地为膜lag-3介导，因为发现与fs118复合的slag-3的清除率低于fs118的清除率。[0437]2.2.3结论[0438]截至2019年5月从i期研究可获得的期中结果证明，fs118是良好耐受的并且最大观察浓度(cmax)与预测自食蟹猴研究的cmax一致，但是fs118的清除率出乎意料地高于预测。这最初建议，人体中可能需要更高剂量的fs118，不过尽管清除率更快，在较低测试剂量观察到持久药效动力学反应，这指示治疗功效。[0439]具体而言，获得的结果显示，在每周施用的剂量为3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg时，fs118能够诱导可溶性lag-3(slag-3)水平持久升高，以及持久的lag-3受体占有率。slag3水平已经显示与小鼠中的治疗功效相关。这些期中结果还建议在fs118治疗之后spd-l1水平升高。[0440]2.3期中数据(2019年8月)[0441]2.3.1期中临床数据(2019年8月)[0442]截至2019年8月，另外16名患者已经入选i期研究。因此，总计40名患者已经入选。这40名患者当中，16人正积极进行治疗。剩余的24名患者停止治疗：11名患者归因于icpd，3名患者归因于非相关的不良事件，8名患者归因于医生决定或病情进展的临床体征，并且2名患者归因于其他注意事项。[0443]每周一次的fs118给药是良好耐受的，多达20mg/kg，并且在第1周期或后续周期中未观察到剂量限制毒性(dlt)。在62.5％患者中观察到研究相关性治疗期间发生的不良事件(teae)。这些事件均认定不是治疗期间发生的严重不良事件(te-seaes)；基于升高的氨基转移酶水平，认定2例是3级teae。这后2例由该试验的安全委员会评审，该委员会认定升高的水平并没有明显的临床影响并且将升高的水平划归为非限制性毒性。未观察到teae与fs118治疗之间明显的剂量关系。未观察到与fs118相关的死亡或te-sae。[0444]在接受3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg的队列的32名受试者中22人具有可评估的肿瘤扫描。这22名患者当中，基于最佳总体响应(bor和ibor)，11人出现某种病情稳定并且11出现病情进展。这代表34.4％的病情控制率(dcr)。[0445]例如，表7(下文)中的全部患者在正在进行的试验期间表现出一些病情稳定并且保持参与研究至少10周。[0446]表7：表现出某种病情稳定并且保持参与研究至少10周的患者[0447][0448][0449]*nsclc-非小细胞肺癌；h&n–头颈癌；crc–结直肠癌[0450]**研究截至2019年8月正在进行[0451]具体而言，受试者1004-0001(患有nsclc)出现病情稳定(recist1.1最佳响应)并且显示28.13％的最佳肿瘤减小(以直径总和计(sod)的从基线变化)，这是在fs118给药后第8周和第16周观察到的，在第24周略微减少至25％肿瘤减小。因此，基于这名具体患者的靶标病灶的测量，这名具体患者出现近乎部分响应。[0452]这些结果因此表明，fs118能够使病情稳定，谨记患者群体包括多个不同类型的癌症，全部患者均患晚期恶性肿瘤，在进入试验之前已经出现多种替代治疗方案失败并且一些患者可能已经过度受损，以至于不能够从fs118治疗获益。[0453]2.3.2期中药代动力学/药效动力学数据[0454]截至2019年8月，已经对跨8个队列(800μg、2400μg、0.1、0.3、1、3、10和20mg/kg/q1wk剂量)的多达29名患者执行药代动力学/药效动力学的分析。如实施例2.2.2中所描述的，测量了游离fs118血清浓度与可溶性lag-3浓度。另外，测量了血液中增殖性(ki67 )和总效应子记忆性或中央记忆性cd4 和cd8 t细胞的频率，计数了免疫细胞亚类以及对fs118第一次给药之前和之后肿瘤组织中的lag-3和pd-l1表达定量。[0455]2.3.2.1pk分析[0456]根据2019年5月结果(参见实施例2.2.2.1)，对另外9名患者(包括20mg/kg每周给药(q1w)队列中的患者)中的游离fs118血清浓度水平进行定量。使用实施例2.2.2.1中所述的验证配体结合性试验，定量了游离fs118血清浓度水平。[0457]对第1治疗周期和第2治疗周期(每个周期3周)开始之后第一周内游离fs118血清pk特征的分析显示，横跨接受800μg、2400μg、0.1mg/kgq1w、0.3mg/kgq1w、1mg/kgq1w、3mg/kgq1w或10mg/kgq1w的患者队列，暴露量(cmax、auc)呈剂量线性增长。继续进行接受20mg/kg的患者的样品的pk分析。cmax和auc的估计值在每个患者队列内部的第1周期与第2周期的pk特征之间是类似的，这指示低的抗药物抗体(ada)响应、低的ada-介导的fs118加速清除或fs118不存在。[0458]如2019年5月结果中所见的，cmax与来自非人灵长类的比例近似，但清除率高于预测(auc比预测低30％)。来自1室建模、依据可获得的i期研究数据拟合的游离fs118终末清除半衰期(t1/2)估计是19.6小时。[0459]在给药开始(在第1周期和第2周期中)之后一周和在下一次给药fs118之前，对于接受≤1mg/kg的患者，血清中游离fs118的ctrough水平低于试验的定量下限(lloq)，这表明在《1mg/kgq1w剂量方案时，血液中缺少游离fs118积累。在给药后第7天，3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg队列中一些受试者具有约0.1至10μg/ml范围内的可定量的游离fs118ctrough水平。[0460]2.3.2.2可溶性lag-3[0461]根据2019年5月结果(参见实施例2.2.2.2)，对另外9名患者(包括20mg/kg每周给药(q1w)队列中的患者)中的血清总可溶性lag-3(slag-3)水平进行定量。使用实施例2.2.2.2中所述的验证elisa，定量了血清总可溶性lag-3(slag-3)水平。[0462]与2019年5月期中结果一致，分析显示血清总slag-3的剂量依赖性升高。更具体而言，接受1mg/kg/q1wk、3mg/kg/q1wk、10mg/kg/q1wk或20mg/kg/q1wk剂量水平的患者显示在第1周期和第2周期的第一次给药后总slag-3升高大约10至150倍增加，在大约给药后2-3天观察到达到最大浓度的时间(tmax)。在1mg/kg剂量水平，总slag-3浓度在下一次给药(c1d8)之前返回基线值。在3mg/kg/q1wk、10mg/kg/q1wk和20mg/kg/q1wk队列，存在下一次给药之前总slag-3积累(谷浓度)的某种证据；这进一步得到佐证，即，与第1周期相比，在第2周期中观察更高水平的slag-3。进一步开展2019年5月分析，10mg/kg和20mg/kg剂量时总可溶性lag-3升高的程度和持续时间特别表明，在这些计量水平下用fs118捕获的可溶性lag-3几乎已经实现饱和。然而，对于20mg/kg患者队列，需要额外的患者以确认这个明显的观察结果。[0463]使用这种数据，一室建模估计slag-3:fs118复合物的终末清除半衰期(t1/2)为15.8天。游离slag-3的估计终末t1/2是1.6小时。观察到fs118pk和slag-3数据的群体分析和个体分析、与药代动力学/药效动力学建模的数据高度相关。这证实不存在ada干扰作用和ada介导的fs118加速清除。[0464]总之，这项分析显示，fs118给药之后总slag-3水平的剂量依赖性升高可以用作fs118接合靶lag-3受体的药效动力学标志物。这项研究结果支持提议的fs118作用机理，其中与靶细胞表面上表达的lag-3受体结合的fs118潜在地通过细胞表面表达的lag-3脱落(shed)，导致系统性可溶性lag-3水平升高。[0465]2.3.2.3血液中增殖性和总效应子和中央记忆性cd4 和cd8 t细胞的频率[0466]随时间推移通过流式细胞分析监测血液中增殖性ki67 cd4 和ki67 cd8 效应子记忆性和中央记忆性t细胞的频率。简而言之，在cyto-中收集全血并且冷藏储存直至处理为止。每次测试使用100μl的每份样品。首先，用人bdfc阻断溶液阻断非特异性结合。随后将样品用表面抗体混合物(50μl)染色，随后用bdfacs裂解溶液裂解红细胞并固定。洗过的细胞用fix/perm缓冲液透化，随后用1xperm缓冲液洗涤两次。添加胞内抗体混合物(50μl)并且在2-8℃温育30分钟。随后将细胞用2％fbs洗涤两次并转移至trucount管以便在细胞计(bdlsr)上采集。[0467]确定cd4 或cd8 中央记忆性t细胞(分别由cd45 cd3 cd19negcd4 或cd8 限定，cd45ranegccr7pos表达)或cd4 或cd8 效应子记忆性t细胞(分别由cd45 cd3 cd19negcd4 或cd8 限定，cd45ranegccr7neg)的频率。另外，确定cd4 或cd8 效应子或中央记忆性t细胞群体内ki67 细胞的频率。对来自3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg患者队列的可用数据分析显示，在第1周期中给药之后、相对于基线测量值，fs118能够诱导增殖性ki67 cd4 和ki67 cd8 效应子记忆性和中央记忆性t细胞的频率升高。这种外周药效动力学响应的动力学和瞬时性能指示t细胞活化，与用临床前数据所观察到的情况一致。[0468]在上文描述的相同流式细胞分析中，随时间推移进行血液中免疫细胞亚类的计数。初始数据显示fs118给药导致cd3 、cd4 、cd8 t细胞和nk细胞的绝对数升高。响应动力学是瞬时的，类似于血液中增殖性效应子或中央记忆性cd4 和cd8 t细胞的频率所观察到的药效动力学效应。在4名分别患有间皮瘤、宫颈癌、甲状腺未分化癌和喉癌的患者中特别观察到这种情况。总之，初步数据表明fs118可以在患者中激发系统性免疫活化响应。[0469]2.3.2.4肿瘤中的pd-l1和lag-3表达[0470]小鼠肿瘤模型中的临床前的研究先前已经显示，mlag-3/mpd-l1双特异性抗体可以在表达lag-3的肿瘤浸润性淋巴细胞(tils)上诱导lag-3抑制作用，而用包含与替代物mlag-3/mpd-l1双特异性抗体相同的mlag-3结合位点和mpd-l1结合位点的两种抗体分子治疗小鼠时，lag-3表达增加(p2399alag-3/pd-l1mab2canovercomepd-l1-mediatedcompensatoryupregulationoflag-3inducedbysingle-agentcheckpointblockade(一种可以克服pd-l1介导的、由单一药物检查点阻断诱导的lag-3代偿性上调的lag-3/pd-l1mab2)，faroudi等人,americanassociationforcancerresearch(aacr)annualmeeting2019,29march-03april2019,atlanta,georgia,usa(美国癌症研究协会(aacr)2019年3月29日–2019年4月3日年度会议，美国佐治亚州亚特兰大市))。[0471]为了在fs118(这是一种双特异性hpd-l1/hlag-3抗体)背景下研究这种潜在效应，从给药之前(范围从第-3天至第-12天)和给药之后(范围从第19天至第41天)的患者获得成对的肿瘤样品(n＝4)。分别使用体外诊断(ivd)抗pd-l1(克隆sp263)试验(rochediagnostics/ventanamedicalsystems)和验证抗lag-3(克隆17b4)免疫组织化学(ihc)试验(ventanabenchmarkultra染色平台)，评估福尔马林固定的和石蜡包埋(ffpe)的肿瘤芯针活检样品中的pd-l1和lag-3表达。为了ihc染色后的后续评估，应用≥100个肿瘤细胞和》25％肿瘤含量的选择标准。评估包括在以下室：肿瘤内基质、上皮内肿瘤组分或瘤周区域(酌情)中，基于肿瘤细胞的膜抗pd-l1染色的百分数和强度来确定肿瘤阳性评分百分数(％tps)，以及在多达5个高倍视野内对pd-l1 或lag-3 免疫细胞进行定量。[0472]总之，该研究中在该点的初步结果显示在fs118给药后、肿瘤中没有pd-l1或lag-3表达代偿性上调的迹象。[0473]2.3.3结论[0474]截至2019年8月可获得的期中结果支持在2019年5月观察到的结论(参见实施例2.2.3)。简而言之，fs118是良好耐受的并且最大观察浓度(cmax)与预测自食蟹猴研究的cmax一致。fs118的清除率出乎意料地高于预测，但在测试剂量观察到持久药效动力学响应，这指示治疗功效。实际上，截至2019年8月，观察到11名患者已经出现一些病情稳定，代表34.4％的病情控制率(dcr)。这些结果证明，fs118能够使病情稳定，谨记患者群体包括多个不同类型的癌症，全部患者均患晚期恶性肿瘤，在进入试验之前已经出现多种替代治疗方案失败并且没有其他可用的治疗选项，并且一些患者可能已经过度受损，以至于不能够从fs118治疗获益。[0475]在进一步支持中，2019年8月结果显示，每周一次以3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量施用时，fs118能够诱导可溶性lag-3(slag-3)水平持久升高。slag3水平已经显示与小鼠中的治疗功效相关联。[0476]另外，fs118在3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg患者队列中已经显示诱导表示t细胞活化的动力学和瞬时外周药效动力学响应。另外，cd4 和cd8 中央记忆性和效应子t细胞在ctrough水平上的增长升高为ctrough水平时持久药效动力学响应提供了进一步证据，并且不存在fs118给药之后肿瘤中pd-l1或lag-3表达代偿性上调的迹象，这与假设的fs118作用机理一致。[0477]2.4期中数据(2020年4月)[0478]2.4.1期中临床数据(2020年4月)[0479]截至2020年4月，另外3名患者已经入选本研究。因此，总计43名患者入选。这43名患者当中，2位患者人积极进行治疗。剩余的41名患者已经完成/停止治疗：14名患者归因于icpd，4名患者归因于非相关的不良事件，10名患者归因于医生决定或病情进展的临床体征，并且10名患者归因于其他注意事项。这41名患者当中，对14人进行随访并且27人已经完成研究。[0480]关于3名入选本研究的患者，每周一次以20mg/kg剂量水平静脉内施用fs118是良好耐受的，并且未向申办方报告剂量限制性毒性。[0481]对于全部入选研究的患者，约20％观察到的治疗期间发生的不良作用与fs118有关，严重程度大部分为轻度至中度(1或2级，不良事件通用术语标准v4.3)。大约5％的fs118相关不良事件划归为3级。没有报道与fs118有关的严重不良事件(sae)。sae定义为导致死亡、威胁生命、需要住院、给患者身体造成致障、永久性损伤或先天性异常/出生缺陷、需要干预以防止永久性损害或损伤或其他严重事件(例如，过敏性支气管痉挛)的任何不良事件。研究期间没有出现被认定为与fs118有关的死亡。总之，未确定新的安全风险。[0482]截至月2020年3月25日，3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg队列的36名受试者中30/人具有可评估的肿瘤扫描。将17名患者记录为出现病情稳定(sd)并且将13名出现病情进展(pd)的患者记录为对fs118治疗出现最佳响应(bor和ibor)。这代表47.2％的病情控制率(dcr)，与从2019年8月起12.8％的增长相对应。表8(下文)中列出17名记录为出现病情稳定的患者。[0483]表8：以每周一次3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg的剂量施用fs118时显示病情稳定为bor/ibor的17名患者[0484][0485]nsclc-非小细胞肺癌；crc–结直肠癌；cup–未知原发性癌症[0486]**研究截至2020年3月25日正在进行[0487]参与i期研究的两名剩余患者(均接受每周一次20mg/kg的剂量)当中，1名患者罹患平滑肌肉瘤(软组织肉瘤)并且截至2020年3月25日已经参与研究32周；另一位患者罹患3-6个月亚组、sd6个月 亚组和pr亚组并且基于患者已经在既往抗pd-1/pd-l1疗法超过3个月时取得临床获益，随后出现病情进展，称作“获得性耐药性”。[0517]当将患者分为原发性耐药性组和获得性耐药性组时，当将各组与各组中的患者保持fs118治疗的周数比较时(mann-whitney-wilcoxon检验p＝0.059)，观察到这两个患者组之间显著的差异。更具体而言，观察到获得性耐药性组的患者更可能对fs118治疗出现响应并从中取得获益。具体而言，完成18周或更长时间fs118治疗的全部患者均来自获得性耐药性组，boe在既往抗pd-1疗法中未知的一名患者是例外。然而，对于未知的bor的后一位患者，他们在既往抗pd-1疗法保持超过一年并且因此怀疑这位患者将具有已经分类为具有获得性耐药性的bor。原发性耐药性患者无一能够保持参与研究超过17周。这些观察结果进一步得到2020年3月25日可获得的额外临床数据支持，其中归因于获得性耐药性组的患者持续保持治疗，通过所述临床数据发现，在原发性耐药性患者组和获得性耐药性患者组之间观察到的统计显著性差异改善(mann-whitney-wilcoxon检验p＝0.048，图7)。[0518]另外，需要注意的是，尽管这项分析来自正在进行的研究，但没有原发性耐药性患者保持参与研究。[0519]截至2019年12月，在fs118治疗时39名患者具有可评估的肿瘤扫描。图8中显示了这些患者，指示每名患者是否具有获得性耐药性表型或原发性耐药性表型的指示。尽管获得性耐药性组和原发性耐药性组中均观察到病情稳定，但是完成超过18周fs118治疗的全部患者(具有获得性耐药性表型)均具有至少一个病情稳定测量(图8)。[0520]就对fs118治疗的响应可能性而言，对获得性耐药性患者观察到的现象似乎与任何特定剂量水平(图7)或临床适应症(图8和图9)无关。[0521]3.4结论[0522]总之，已经出乎意料地发现，与原发性耐药性患者(定义为从既往抗pd-1/pd-l1疗法未取得临床获益或取得持续3个月或更短时间的某种临床获益)相比，获得性耐药性患者(定义为具有(sd、pr或cr)的bor并且因此在既往抗pd-1/pd-l1疗法超过3个月治疗持续时，已经取得某种临床获益，之后随即出现病情进展)更可能对fs118治疗积极响应更长时间。这特别有意义，原因是不推荐在含既往pd-(l)1的治疗方案的病情进展之后，用pd-(l)1抗体重新治疗患者，并且历史上患者获益寥寥(fujita等人,anticancerres.2019；fujita等人,thoraciccancer,2019；martini等人,j.immunotherapycancer,2017)。因此，发明人已经确定了选择更可能对fs118治疗响应的患者的阈值。这个阈值似乎与fs118剂量或癌症类型无关。[0523]作为一项旁注，发明人随后鉴定了与bi-754091(抗pd-1mab)组合的三个在临床研究进行中的igg4单克隆抗体bi-754111(抗lag-3)：nct03697304、nct03780725和nct03156114。这些研究指出对基于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法表现出继发耐药性(获得性耐药性)的患者队列的用途。没有与这些临床研究有关的可公开获得的信息指示为何已经选择这些队列、如何得出继发耐药性的限定，也没有提供相对于原发性耐药性患者群体，证明在继发耐药性患者队列中响应改进的任何启示或数据。这些临床研究因此在fs118背景下没有提供辅助作用，对现有研究似乎也没有意义。[0524]实施例4：pd-l1表达作为标志物以基于对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的耐药性来选择用于fs118治疗的患者[0525]4.1背景[0526]由于参与正在进行的fs118试验的全部患者均已经接受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，并且faroudi等人(americanassociationforcancerresearch(aacr)annualmeeting2019,29march–03april2019,atlanta,georgia,usa(美国癌症研究协会(aacr)2019年3月29日–2019年4月3日年度会议，美国佐治亚州亚特兰大市))已经证明，靶向这些途径可以改变检查点受体的水平，我们力图在用fs118治疗之前(“基线”)确定pd-l1和lag-3的表达水平，并且确定在这些表达水平与用fs118治疗的时间之间是否存在任何相关性。对于这项分析，将患者分组为如实施例3中所定义对其用抗pd-1或pd-l1疗法的既往治疗具有“获得性”耐药性或“原发性”耐药性。[0527]4.2方法[0528]用fs118治疗之前(“基线”)测量取自患者的活检样品中的pd-l1表达。为了使活检样品适合分析，肿瘤细胞含量须为25％或更大并且需要存在≥100个肿瘤细胞。将肿瘤样品如实施例2.3.2.4中所述那样，经福尔马林固定和石蜡包埋(ffpe)、染色和评估。将pd-l1肿瘤阳性评分百分数(％tps)计算为活检样品中显示pd-l1阳性染色的肿瘤细胞的百分数。测量全部可获得样品的％tps，其中：13名受试者具有获得性耐药性并且4名受试者具有原发性耐药性。[0529]4.3结果[0530]当基线处pd-l1％tps与fs118治疗周数比较时，对于获得性耐药性组观察到了正相关(单侧斯皮尔曼相关系数(one-tailedspearmancorrelationcoefficient)r＝0.57，p＝0.022)。反过来，原发性耐药性患者组没有发现pd-l1％tps和fs118治疗时间之间的相关性(单侧斯皮尔曼相关系数r＝-0.40，p＝0.37)。另外，在获得性耐药性组内部，三名患者用fs118治疗30周或更长时间，佐证了病情受fs118控制。这三名患者在组内部还具有最高的pd-l1％tps(参见图10)。使用获得性耐药性组的正相关，确定可能用来选择更可能对用fs118治疗响应的患者的预后性阈值。通过绘制相关性趋势线并且借助插值法做到这点，使用这种阈值确定与fs118治疗18周相关的pd-l1％tps评分。选择18周是因为在获得性耐药性组中观察到治疗持续18周或更长时间，但在原发性耐药性组中未观察到如此情况，并且因此18周被认定为fs118的临床获益的指示。以这种方式确定的pd-l1％tps评分是15％。[0531]4.4结论[0532]总之，这些结果表明获得性耐药性患者中肿瘤的pd-l1表达情况(pd-l1％tps)与fs118所实现的病情控制持久性正相关。获得性耐药性组内部具有最高pd-l1％tps的3名患者都具有通过fs118长的病情控制持续时间(fs118治疗30周或更长时间)。使用获得性耐药性组的正相关，确定15％的pd-l1％tps被确定为预后阈值，以在获得性耐药性组中选择特别可能对fs118治疗显示出持久响应的患者。[0533]实施例5：fs118对获得性耐药性和原发性耐药性患者中免疫响应的影响[0534]5.1背景[0535]根据实施例3中观察到获得性耐药性患者更可能比原发性耐药性患者在fs118治疗中保持更长时间，发明人力图确定这两组之间对fs118响应是否存在药理学差异。原发性耐药性患者可以使既往抗pd-1/pd-l1疗法失效，归因于肿瘤中的抑制性因素导致t细胞功能不足或缺少免疫系统识别肿瘤(nowicki等人,2018)。获得性耐药性患者起初可能具有t细胞响应，但被认为出现可能因多种机理(包括lag-3上调)导致的t细胞功能丧失。fs118活化t细胞已经被证明是fs118体外作用机理(wo2017220569a1)。因此，发明人假设患者的免疫系统对fs118的响应能力可能取决于它们对既往抗pd-1/pd-l1疗法的响应并且假设fs118加强免疫响应的能力可能在fs118提供临床获益时很重要。[0536]5.2方法体系[0537]在用fs118治疗期间，评估fs118对35名参与试验的患者的血流中外周免疫细胞计数的影响(24名患者具有获得性耐药性，8名患者具有原发性耐药性和3名患者耐药性未知–如实施例3中所定义)。从患者获得血液样品并且通过caprionbiosciences(caprionbiosciences,inc.,蒙特利尔,加拿大魁北克)进行全血免疫细胞的cd3 淋巴细胞、cd4 t细胞、cd8 t细胞、b细胞、和nk细胞(tbnk细胞计数)的绝对细胞计数。简而言之，采集的血液于4℃储存在cyto-bct管中直至处理为止。随后，100μl全血用来用预定的tbnk板通过caprion以单次重复染色。在染色后，24小时内在bdlsr流式细胞仪上采集样品并且使用flowjo软件定量。在fs118治疗之前(称作“基线”)和在fs118治疗期间的几个时间点测量绝对细胞计数。[0538]对后续的绝对细胞计数的数据分析时，仅考虑接受剂量大于或等于1mg/kgfs118的患者。[0539]如下计算每种细胞类型的细胞计数从基线变化的百分数：[0540]从基线变化的百分数＝[(细胞计数在治疗日–细胞计数基线时)/细胞计数基线时]*100[0541]对于每种细胞类型而言，将fs118治疗时从基线变化的百分数与时间进行绘制。基于每名患者的免疫细胞计数来计算免疫响应特征。[0542]患者划分成如实施例3中所定义的“原发性”耐药性或“获得性”耐药性。[0543]5.3结果[0544]图11显示两位代表性患者的从基线变化百分数：患者1004-0003作为“原发性耐药性”患者的免疫细胞响应特征的代表性示例，并且患者1002-0014作为“获得性耐药性”患者的免疫细胞响应特征的代表性示例。获得性耐药性患者显示cd3 淋巴细胞、cd4 t细胞、cd8 t细胞和nk细胞的数目相较于原发性耐药性患者升高的趋势(基于这些细胞细胞亚集从基线的变化百分数)。[0545]另外，对于每名患者、将fs118治疗期间观察到的cd3 淋巴细胞从基线的最高倍数变化与fs118治疗的时间进行作图。对原发性耐药性组和获得性耐药性组均进行这种作图。发现与基线相比，依据免疫细胞计数变化倍数测量的cd3 淋巴细胞响应的幅度显著地与获得性耐药性组中fs118治疗的持续时间正相关(单侧斯皮尔曼相关系数r＝0.45，p＝0.025)，然而原发性耐药性组中这种相关不显著(单侧斯皮尔曼相关系数r＝0.52，p＝0.098)。[0546]5.4结论[0547]这些数据表明，患者血液中观察到的t细胞和nk细胞升高、以及cd3 淋巴细胞的倍数变化升高是用fs118治疗的结果，并且指示获得性耐药性患者的免疫系统更能够在fs118治疗时提高免疫响应。因此，如本文定义的获得性耐药性可以用作阈值以选择更可能对fs118响应的患者。[0548]实施例6：基于fih数据和建模的、用于i期扩大试验和/或ii期试验的推荐剂量[0549]6.1.概述[0550]为了指导未来临床研究的剂量选择，采集和分析了(实施例2-5中描述的)fihi期试验数据的多个参数。根据fihi期试验测试的剂量，这些参数包括抗药物抗体(ada)和治疗期间发生的不良事件(teae)的存在、以及通过治疗时间、肿瘤生长速率、肿瘤大小(直径之和)以及响应者数量所评估的功效。还对血清中的lag3:fs118:pd-l1受体三聚体复合物形成、总slag3特征和总spd-l1特征进行模拟。尽管在剂量之间比较时，对大部分参数未观察到差异，但ada水平、通过响应者数量所评估的功效和三聚体复合物形成的模拟显示了剂量之间的显著差异，以能够推荐用于其他研究的优选剂量。[0551]6.2fih血清样品的ada分析[0552]施用蛋白质疗法(如fs118)可能诱导抗药物抗体(ada)，这些抗体可能影响其药代动力学/药效动力学特征。在fih研究中执行人血清样品中fs118的ada的检测和表征以支持临床研究。在bioagilytix实验室(lab)开发了fs118ada试验。简而言之，使用与实施例1.2.2中描述的相似电化学发光(ecl)msd平台的桥接试验用来测量与人血清中fs118结合的抗体；生物素酰化的fs118用来捕获ada，所述ada随后使用用msdtag-nhs-酯(msd#r91bn)标志的fs118检出。来自患者血清样品的ada水平(ecl信号)被测量，被归一化为由合并的未治疗人血清构成的阴性对照，并且通过fs118剂量进行分组(表9)。[0553]表9：fihi期试验患者中的归一化ada水平[0554][0555]与每周一次10mg/kg或20mg/kg的剂量方案比较时，每周一次3mg/kg的给药组具有显著更高的ada水平(p≤0.05，mannwhitney检验)。较低药物剂量时较高的ada水平是通常观察到的现象，这也可以称作“通过ada响应的较高剂量给药”(chirmule,2012)。尽管存在ada水平差异，但未观察到teae和fs118治疗之间明显的剂量关系(参见实施例2.3.1)。为了最大限度降低ada对免疫原性、药代动力学/药效动力学特征和毒性的可能影响，将优选每周一次10mg/kg和20mg/kg的剂量方案用于未来的研究。[0556]6.3来自fihi期试验的功效数据的贝叶斯分析[0557]使用响应fs118治疗而收集的fihbor/ibor功效数据，贝叶斯分析用来预测每周一次3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg给药组的各组中、将在未来试验中显示病情稳定的患者频率。[0558]对于每周一次3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的给药组患者、计算来自fihi期试验的患者中作为bor/ibor的病情稳定的出现频率。该数据用来评估未来试验中、患者在每个剂量水平显示病情稳定的概率，如下表10中所示：[0559]表10：患者在使用fs118的未来试验中、在不同剂量水平下显示病情稳定的估计概率[0560][0561]例如，假定在未来试验(例如i期扩大或ii期)中入选24名患者并且使用表10中所示的估计概率(考虑90％置信区间)，估计fs118的每个剂量下、响应者(即患者至少显示作为bor/ibor的病情稳定)的数量将如下：[0562]每周一次3mg/kg：4-14名响应者[0563]每周一次10mg/kg：11-19名响应者[0564]每周一次20mg/kg：11-19名响应者[0565]如上显示，预测每周一次10mg/kg的剂量和每周一次20mg/kg的剂量在最高比例的患者中引起病情稳定，实现最佳响应结果。因此，基于这个贝叶斯分析，这两种剂量中任一者将优选用于未来试验。[0566]6.4作为药效动力学标志物的三聚体lag3:fs118:pd-l1受体复合物形成[0567]已经展示fs118活化t细胞是fs118体外作用机理(wo2017220569a1)。假设fs118在肿瘤中的治疗功效原因在于：肿瘤特异性t细胞在肿瘤微环境下被活化是由于fs118同时与lag-3和pd-l1结合，且抑制由lag-3和pd-l1信号生成的免疫抑制信号。使用来自fihi期试验的血清数据，在血清和肿瘤微环境两者中模拟三聚体复合物形成，并且使用其作为剂量方案选择的药效动力学标志物，尤其用以在每周一次10mg/kg和20mg/kg的剂量方案之间进行选择。[0568]从fih研究中收集的药代动力学/药效动力学数据，得到在第1周和第4周中依据剂量的中位游离fs118浓度特征、总slag3和总spd-l1血清浓度特征。这些数据提供了预测fs118剂量越大、血清中和肿瘤微环境下游离fs118浓度均越高的基础。随后从这些数据，形成了晚期实体瘤患者中游离fs118、总slag-3和总spd-l1血清浓度的群体模型。这个模型用来模拟剂量方案与肿瘤中三聚体复合物形成之间的联系，旨在了解未来试验剂量药方案选择。阶梯式方案(stepwiseapproach)用于形成模型(表11)。首先，用一室pk模型和线性消除对游离fs118血清浓度进行模拟。随后，加入总slag-3血清浓度和总spd-l1血清浓度并用结合模型拟合。与游离slag-3和游离spd-l1相比、模拟与fs118结合以及与fs118:slag-3复合物和fs118:spd-l1复合物的较慢消除能够解释患者中观察到的fs118治疗时看到的总slag-3血清浓度和总spd-l1血清浓度的升高。起初，体外测量的平衡解离常数被用于相应的复合物，但是用估计的平衡解离常数值的模型能够更好地描述观察到的特征。对游离fs118血清浓度特征的拟合不通过加入添加slag-3和spd-l1的结合和消除来修正。slag-3和spd-l1被假定为从未指明的来源而恒定产生。[0569]此时，该模型能够描述观察到的游离fs118血清浓度、总slag-3血清浓度和总spd-l1血清浓度。为了使fs118剂量方案与功效联系，参数估计之后，向模型加入结合至血清和肿瘤微环境中的细胞表面lag-3和pd-l1受体，以确定血清和肿瘤微环境中的三聚体fs118:lag-3:pd-l1复合物。[0570]为了模拟肿瘤微环境，做出简化假设。首先，假定肿瘤游离fs118浓度总是游离fs118血清浓度的分数(表述为生物分布系数)并且血清与肿瘤之间存在瞬时平衡。假设肿瘤质量低并且它将不影响系统性fs118浓度，且也不会模拟fs118从血清至肿瘤的质量流。因此，用估计的生物分布系数(bc)估计肿瘤中的游离fs118浓度为[fs118]肿瘤＝bc[fs118]血清。假定肿瘤中lag-3和pd-l1的浓度与血清中lag-3受体和pd-l1受体的浓度(假定为恒定)相同。使用估计的与可溶性靶标结合的相同平衡解离常数模拟与细胞表面受体的结合。[0571]表11：模型开发的主要步骤[0572][0573][0574]模拟以下剂量方案：(i)每周一次施用1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg，静脉内输注1小时，或(ii)每两周一次施用3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg，静脉内输注1小时。使用mlxr4.0.0库在r3.6.0(rdevelopmentcoreteam2008)中进行模拟。模拟使用来自fihi期试验患者的monolix的个体参数估计值(条件分布模型)。随后将这些个体的预测特征的均值进行作图。研究了哪种模拟的剂量方案在血清中和肿瘤中产生最高三聚体复合物浓度(lag3:fs118:pd-l1)。[0575]使用来自i期试验患者的个体估计值，获得不同bc的血清和肿瘤中模拟的个体细胞表面三聚体复合物(lag3:fs118:pd-l1)的均值，作为总lag-3受体的百分数，并且作图。模拟揭示了较高的游离fs118浓度导致较低的三聚体lag3:fs118:pd-l1复合物浓度，这有利于fs118:lag3和fs118:pd-l1二聚体复合物。还已经使用fih研究中收集的数据显示，fs118剂量越大，游离fs118浓度越高。最佳的游离fs118浓度范围是大约0.1–1μg/ml。对于10％的bc，假定最接近模拟体内肿瘤微环境，则每周一次10mg/kg的给药具有比每周一次20mg/kg的给药更高的三聚体复合物浓度，因为更可能产生0.1–1μg/ml范围内的游离fs118浓度。[0576]这还意味着，剂量过大和/或给药过于频繁将降低三聚体复合物浓度并且因此减少因同时结合fs118至lag-3和pd-l1引起的t细胞活化，并且因此导致肿瘤抑制作用下降。[0577]6.5结论[0578]将fihi期试验数据的多个要素分析并用来指导未来试验的剂量选择。首先，对不同fs118剂量时的ada分析显示，与每周一次10mg/kg或20mg/kg的给药相比，在每周一次3mg/kg的给药检出更高水平的ada。为了最大限度减少潜在免疫原性和毒性，相对于每周一次3mg/kg的方案，将优选每周一次10mg/kg和每周一次20mg/kg的方案。其次，对i期bor数据的贝叶斯分析估计，相比每周一次3mg/kg的方案，如果执行每周一次10mg/kg的方案或每周一次20mg/kg的方案，则患者显示作为bor/ibor的病情稳定的可能性将会更大。最后，对三聚体复合物形成的药代动力学/药效动力学建模和模拟揭示，假定bc为10％，三聚体lag3:fs118:pd-l1复合物的浓度在每周一次10mg/kg的剂量最高。假设更高的三聚体复合物转换成t细胞活化和肿瘤生长抑制。[0579]综合上述观察结果，优选每周一次10mg/kg的给药用于未来试验。[0580]从以上数据推导，还提出每周一次固定剂量700mg的替代选项。假定群体中患者平均体重是70kg，则每周一次700mg的剂量将等同于每周一次10mg/kg的剂量。如果群体中患者的实际体重是35–100kg，则每周一次700mg的剂量将等同于每周一次20mg/kg至7mg/kg范围内的剂量，这取决患者的实际体重。这个剂量将在fihi期试验中观察到的无eae的病情稳定响应的剂量范围内并且因此预计是有效的。相似的原理可以用于所讨论的任何特定患者群体，并因此本领域普通技术人员基于本文教导内容，将能够确定用于任何特定患者群体合适的固定剂量。例如，若群体中患者的平均体重估计80kg，则每周一次800mg的剂量将等同于每周一次10mg/kg的剂量。如果群体中患者的实际体重是40–100kg，则每周一次800mg的剂量将等同于每周一次20mg/kg至7mg/kg范围内的剂量，这取决患者的实际体重。根据上文解释，该剂量也被预计是有效的。[0581]实施例7：i期扩大试验的scchn研究方案[0582]为了探索fs118在特定肿瘤类型中的临床活性，计划扩大i期临床试验。这称作i期扩大队列并且涉及招募预先指定人数的患者，以进一步评估fs118的安全性、药代动力学/药效动力学和临床疗效。[0583]计划的扩大队列将仅包含复发性或转移性头颈部鳞状细胞癌(scchn)患者。特别选择scchn的原因是fihi期试验(参见实施例2)中存在分别以每周一次3mg/kg、10mg/kg和20mg/kgfs118给药的三名scchn患者，所述患者分别持续26周、15周和27周研究(参见实施例2.4.1，表8)，这表面fs118可以特别有效治疗scchn。另外，先前已经观察到scchn患者的肿瘤微环境中t细胞上的lag-3水平升高，同样已经观察到pd-1水平升高(hanna等人,2018；deng等人,2016)，表示pd-l1的水平也升高。因此，存在明确生物学原理，即同时靶向lag-3和pd-l1的fs118在scchn肿瘤微环境下是有效的。更具体而言，扩大队列将包含具有口腔、口咽喉或下咽疾病部位且不适合接受治愈性疗法(如手术或照射)的scchn患者。抗pd-1抗体目前由监管当局批准用于这些疾病部位，并且因此招募的患者将已经用抗pd-1抗体预先治疗，这对于下文所述的招募策略至关重要。人乳头瘤病毒(hpv)被认为引起大约20％的scchn，尤其口咽疾病，称作口咽癌、。相比其他可能由烟草和/或饮酒引起的其他scchn患者，这些患者一般对抗癌治疗响应具有更好的临床结局。因此，hpv状态将在患者加入本研究之前记录，并且如果不知道，则在患者进入该研究进行测试。[0584]出于以上解释的原因，全部患者先前均将已经用获批的抗pd-1抗体作为单药疗法、或与化学疗法联合治疗并且在加入该研究之前出现病情进展。该患者必须具有如本文定义的对既往pd-1疗法具有获得性耐药性(即患者在用既往抗pd-1疗法时出现完全或部分响应，或显示病情稳定超过3个月，但随后转换成病情进展)。这属于发明人的发现成果范围，即获得性耐药性患者明显更可能更好地对fs118响应(例如通过显示病情稳定并且保持治疗更长时间)–参见实施例3。[0585]为了用获批的抗pd-1抗体既往治疗，按照药品标签，患者必须已经依据综合正评分(cps)或肿瘤比例评分(tps)具有》1％的pd-l1水平。因此，预期进入i期扩大试验的患者全部将具有》1％的pd-l1水平并且将记录这些水平。这至关重要，因为发明人已经展示获得性耐药性患者中fs118治疗前的基线pd-l1水平与用fs118治疗时长正相关(参见实施例4)。为了让既往抗pd-1疗法从每名患者的系统清除，患者必须等待最少28天，之后才可以进入计划的i期扩大试验。另外，患者从停用最后抗pd-1疗法起、并开始fs118治疗不能超过12周。这确保进入i期扩大试验的患者需要立即对其病情进展进行进一步疗法。[0586]在进入i期扩大试验之前，将要求全部患者提供其肿瘤活检样品以及血液样品。从活检样品中，除患者癌症的其他特征如肿瘤微环境内部cd8 t细胞百分数之外，还将分别测量和分析肿瘤细胞和t细胞上的基线pd-l1和lag-3表达水平。血液样品将用来测量和分析免疫细胞群体(包括如实施例2.3.2.3中所述的ki67 免疫细胞)的水平和/或血浆中可溶性lag-3或可溶性pd-l1的水平。全部患者将在每周一次基础用10mg/kgfs118给药，与实施例6中所述的剂量方案建议一致。治疗24周后，将使用临床终点病情控制率(dcr)评估fs118在scchn中的功效。这是开始用fs118治疗的24周时间出现完全响应(cr)、部分响应(pr)和/或病情稳定(sd)的患者的百分数。因此，这将涵盖例如首先显示部分响应但随后进展到病情稳定或反之亦然的患者。基于主要研究者的经验，抗pd-1疗法之后接受医护标准疗法(例如：紫杉烷如多西他赛或紫杉醇、西妥昔单抗或氨甲喋呤)的患者一般将在24周时具有《20％的dcr率。这意味着》80％的这类患者从医护标准疗法开始后24周内出现病情进展。最低目标是fs118超过抗pd-1疗法之后施用的医护标准疗法的所述dcr率。鉴于i期扩大试验中的患者将比fih试验患者和剂量递增期i临床试验患者接收更少地高度预先治疗(参见实施例2)，认为这个目标可实现。[0587]i期扩大试验的统计设计将利用一种称作simon2阶段最大最小设计(simon，1989)的方法。在第一阶段，将招募10名患者。如果所述10名患者中1人或无人在fs118治疗开始24周时间内实现病情控制(cr，pr和/或sd)，则终止登记并且将认定fs118与医护标准疗法相比并非足够有效以保证持续招募。否则，另外12名患者将登记作为第二阶段。当完成第二阶段时，如果22名可评估患者中6人或更多患者在fs118治疗开始24周时间内实现病情控制(cr、pr和/或sd)，则将认定fs118在这些患者中有效。[0588]为了进一步了解哪些患者可能从fs118治疗获益最多，患者的癌中pd-l1和lag-3的表达水平(基线时使用强制性活检材料记录)将与对fs118的临床获益(研究期间cr、pr和/或sd和治疗的时间长短)进行比较，以确定是否存在任何相关性。另外，还将监测患者血浆样品中可溶性lag-3水平的变化和外周免疫细胞群体的频率和ki67表达水平的变化、以作为对fs118响应的药效动力学标志物。[0589]序列表[0590]抗人lag-3/pd-l1mab2fs118(具有lala突变)的重链的氨基酸序列(seqidno:1)[0591]将cdr加下划线。将ab、cd和ef环序列以粗体显示并加下划线。[0592][0593]抗人lag-3/pd-l1mab2fs118的轻链的氨基酸序列(seqidno:2)将cdr加下划线。[0594]diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqsissylnwyqqkpgkapkpliyvasslqsgvpssfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqsysnpitfgqgtrleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec[0595]抗小鼠lag-3/pd-l1mab2fs18-7-108-29/s1(具有lala突变)的重链的氨基酸序列(seqidno:3)[0596]将cdr加下划线。将ab、cd和ef环序列的位置以粗体显示并加下划线。lala突变的位置以粗体显示。2016；81:448-456.[0626]sharma等人,primary,adaptiveandacquiredresistancetocancerimmunotherapy.cell,2017,168(4):707-723[0627]seymour等人,irecist:guidelinesforresponsecriteriaforuseintrialtestingimmunotherapeutics,lancetoncol.,2017,18(3):e143-e152[0628]simonr,optimaltwo-stagedesignsforphaseiiclinicaltrials,controlledclinicaltrials,1989,10:1-10.当前第1页12当前第1页12
技术领域：
：1.本发明涉及用于结合程序性死亡-配体1(programmeddeath-ligand1，pd-l1)和淋巴细胞活化基因3(lymphocyte-activationgene3，lag-3)的抗体分子的施用的剂量方案(dosageregimes)及它们在人类患者癌症的治疗中的医学用途。本发明还提供用于预测人类患者对抗体进行响应的可能性的预后性阈值。
背景技术：
：：2.癌症是一种复杂的疾病，对于癌症而言仍然存在明显未满足的需求。近年来，宿主免疫系统与肿瘤之间的互作已经成为强烈非临床评定和临床评定的领域。肿瘤浸润淋巴细胞(tumourinfiltratinglymphocytes，tils)有能力控制肿瘤细胞生长，并且新出现临床证据表明tils增加的患者具有良好的预后。总体上，t细胞在对癌症的免疫防御中发挥主要作用并且t细胞活化的调节由t细胞、肿瘤细胞与肿瘤微环境之间刺激性和抑制性配体-受体相互作用的复杂互作介导，在该肿瘤微环境中肿瘤细胞充当免疫抑制的关键介体。3.对抵消肿瘤细胞的免疫抑制活性的免疫检查点抑制剂(checkpointinhibitor)的开发，代表了在临床肿瘤学实践中快速增长的治疗的途径，并且靶向pd-1/pd-l1(pd-1配体)的免疫检查点抑制剂已经展示了一些显著的抗肿瘤活性迹象。约20％的用单药疗法治疗的患者实现了具有深入而持久的响应的临床获益。但是，大部分患者似乎需要联用方案以克服对癌症免疫疗法的原发性、适应性和获得性耐药性，其中原发性耐药性已经划归为从未对该疗法响应并且因此进展的癌症，获得性耐药性已经划归为尽管最初对该疗法响应，但最终进展的癌症，并且适应性耐药性已经划归为对该疗法演变出耐药性机制的癌症，这种适应性耐药性可能临床上表现为原发性或获得性耐药性(sharma等人,2017)。对pd-1/pd-l1疗法耐药性的确立是复杂且多因素的，包括环境和遗传因素、个体疾病史以及先前疗法的效果(sharma等人,2017)。4.淋巴细胞活化基因3(lag-3)是对免疫检查点抑制剂的原发性耐药性和潜在的获得性耐药性的关键介体之一，并且在出现复发或对抗pd-1/pd-l1疗法难治的重度预治疗的晚期黑素瘤患者中的首个抗体联用研究显示了这个群体中克服pd-(l)1耐药性的早期证据。5.wo2017/220569a1(f-stardeltalimited)中描述了用于癌症的治疗的单特异性抗pd-1/pd-l1和抗lag-3抗体的联合施用的优越方法，所述文献公开了涵盖了用于pd-l1和lag-3二者的结合位点的双特异性抗体，包括抗体fs118。fs118是一种双特异性igg1(148,247da)单克隆抗体，fs118包含fc区内的lag-3抗原结合位点和用于pd-l1的fab结合位点，并且fs118以同等高的亲和力来靶向人pd-l1(hpd-l1)和人lag-3(hlag-3)、并且呈现出对lag-3和pd-l1介导的t细胞活化抑制作用的阻断。这个特征和经由lag-3和pd-l1的双重靶向来增强t细胞与肿瘤细胞之间的桥接(bridging)的能力以及使定位于肿瘤微环境内部的能力是fs118的独特属性，这些独特属性有望驱动fs118强力的抗肿瘤活性。6.具体地，淋巴结中的活化t细胞表达lag-3且抗lag-3/pd-l1双特异性抗体(如，lag-3withfs118,auniquebispecificantibody,inducescd8 t-cellactivationandmodulatesthetumourmicroenvironmenttopromoteantitumourimmuneresponses(用独特双特异性抗体fs118对pd-l1和lag-3的双重阻断来诱导cd8 t细胞活化并且调节肿瘤微环境以促进抗肿瘤免疫响应),cancerresearch,2018年7月,第78卷,第13期增刊；p2399alag-3/pd-l1mab2canovercomepd-l1-mediatedcompensatoryupregulationoflag-3inducedbysingle-agentcheckpointblockade(一种可以克服pd-l1介导的受单一药物检查点阻断作用诱导的lag-3代偿性上调的lag-3/pd-l1mab2)，faroudi等人,americanassociationforcancerresearch(aacr)annualmeeting2019,29march–03april2019,atlanta,georgia,usa(美国癌症研究协会(aacr)2019年3月29日–2019年4月3日年度会议，美国佐治亚州亚特兰大市))。11.然而，尽管与fs118替代物mlag-3/mpd-l1双特异性抗体有关的数据有力地指示了fs118分子本身将在人体中是治疗上有效，但所用的小鼠模型在预测人的具体治疗剂量方面具有缺陷。具体地说，替代物mlag-3/mpd-l1双特异性抗体具有人igg1主链，该人igg1主链将天然引起小鼠中强力免疫原性响应以及抗药物抗体(anti-drugantibodies，adas)的产生。因此，本领域普通技术人员将不会合理地期望，小鼠中所使用的有效剂量将在nhp中及最终在人体中是有效的。12.迄今尚未获得关于lag-3/pd-l1抗体(包括fs118)在人类患者或非人灵长类中特性(包括施用的剂量)的数据。技术实现要素：13.如以上发明背景部分中所解释，fs118是一种与lagg-3和pd-l1两者结合的双特异性抗体，并且与单特异性抗pd-l1抗体和抗lag-3抗体相比，fs118有望以独特方式介导其抗肿瘤作用。与单特异性双价抗体相比，考虑到fs118的双特异性、四价性质和结合的化学计量的结果差异以及在fs118作用机理方面的预期差异，fs118是否可以使用在人类中用于单特异性抗pd-l1抗体和抗lag3抗体的剂量水平和施用方案来给药是不明确的。14.经批准用于在人类患者中癌症治疗的抗pd-l1抗体，如阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗和阿特朱单抗分别以800mg(固定剂量(flatdose))或10mg/kg(每两周一次)、10mg/kg(每两周一次)和1200mg(每三周一次)(等同于标准100kg患者中约12mg/kg)的剂量给癌症患者施用。抗lag3单克隆抗体瑞拉利单抗(relatlimab)和抗pd1单克隆抗体纳武单抗(nivolumab)的联用目前正在i期临床试验中测试并且每四周施用一次。也已经在i期研究中也对单独瑞拉利单抗治疗进行了评估，在该研究中每2周给药一次抗体。15.当以相同剂量水平(1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg)并且根据相同剂量方案(dosageschedule)(3剂量，间隔3天)施用抗体时，在同基因小鼠肿瘤模型中与包含与mlag-3/mpd-l1双特异性抗体相同的mlag-3结合位点和mpd-l1结合位点的两种单特异性抗体分子相比，在小鼠实验中能够作为fs118的替代物的小鼠lag-3/pd-l1(mlag-3/mpd-l1；具有lala突变的fs18m-108-29/s1)双特异性抗体显示出更优或相似的抗肿瘤功效。然而，替代物mlag-3/mpd-l1双特异性抗体具有人igg1主链，该人igg1主链将在小鼠中天然引起强力免疫原性响应以及抗药物抗体(adas)的产生。因此，不可能预测在小鼠中所使用的有效剂量是否对在非人灵长类(nhps)中及最终在人体中有效。16.当在小鼠中(以1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg)评估mlag-3/mpd-l1双特异性抗体的pk时，本发明人出乎意料地发现，与包含与mlag-3/mpd-l1抗体相同的mpd-l1结合位点的单特异性抗体相比，mlag-3/mpd-l1双特异性抗体以更高的速率从血清清除。在与抗mpd-l1mab对照相比，mlag-3/mpd-l1双特异性抗体的非饱和清除率进一步显示出似乎是mpd-l1结合以及ch3结构域中容许残基的靶特异性变化组合的结果。(实施例1)17.通过将由发明人获得的小鼠pk数据与小鼠中的抗肿瘤功效数据合并，本发明人发现对于小鼠中的抗肿瘤功效，所需的小鼠替代物mab2的暴露量(cmax)≥6μg/ml并且出乎意料地在整个给药期间无需维持这个暴露量水平。然而，似乎确实出现了ada形成(实施例1)。18.在食蟹猴中，单剂量(4mg/kg)pk研究、药物非临床研究质量管理规范(non-goodlaboratorypractice，glp)剂量范围探索(doserangefinding，drf)研究(10mg/kg、50mg/kg和200mg/kg的每周一次静脉内(iv)剂量，持续4周(wks))和4周glp毒性研究中每周重复二次静脉内施用(60mg/kg和200mg/kg)发现fs118比单特异性抗hpd-l1mab清除得更快(实施例1)。19.发现在整个给药期间维持fs118血浆水平≥10μg/ml足以在食蟹猴中维持pd-l1捕获，并且依据推断足以维持pd-l1抑制作用和免疫药理学。这些研究还显示出fs118甚至在高剂量下也有良好耐受，并且指示了高剂量也将在人类中良好耐受。如在小鼠中那样，也观察到ada形成(实施例1)。20.从小鼠和食蟹猴pk研究获得的结果因此出乎意料地证明了尽管fs118和fs18m-108-29aa/s1的清除速率相对于各自的单特异性抗pd-l1抗体而言，各剂量之间观察到极低的抗体ctrough水平仍分别足以提供持久的抗肿瘤与药效动力学响应。然而，观察到在小鼠和食蟹猴中ada形成，这指示了就从观察到的结果外推至人类而言，这些动物模型的确具有局限性。21.随后设计并开始了fs118在患有晚期恶性肿瘤的患者(研究受试者)中的安全性、耐受性、药代动力学和活性的i期剂量递增和队列扩大(cohortexpansion)的首次人体内研究，该晚期恶性肿瘤在既往抗pd-1/pd-l1疗法中或之后已经进展。为了评估安全性，单个患者队列被施用800μg、2400μg、0.1mg/kg、0.3mg/kg和1.0mg/kg剂量的fs118。对于i期研究的剂量递增部分，患者被施用3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的fs118。全部剂量均每周施用一次(即每周一次)，并且因此比基于小鼠和食蟹猴单独的pk数据最初认为所需的频率更低(实施例1和2)。22.i期研究的起初来自24名受试者(增加至43名患者)的期中结果证实，最大观察到的浓度(cmax)与来自食蟹猴研究预测的cmax一致，但是，出乎意料地，fs118的清除率高于预测，auc(areaundertheconcentrationversustimecurve，浓度-时间曲线下面积)比预期低30％。这最初可能表明人体中将需要更高的fs118剂量。然而，尽管清除速率比最初预测更快，但观察到期限更长的药效动力学效果，指示了治疗功效(实施例2)。23.具体而言，以每周一次施用3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量的fs118显示出诱导可溶性lag-3(slag-3)水平中的持久升高，以及持久的lag-3受体占据。已经报道了slag-3通过自身与mhcii的结合来刺激抗原呈递细胞(如，巨噬细胞和树状细胞)、以活化t细胞响应及增强肿瘤特异性细胞毒素的t细胞，并且因而有望加强抗肿瘤免疫响应。另外，先前已经显示了slag3水平与小鼠中的肿瘤生长抑制相关，这指示了升高的slag3水平是治疗功效的指示。早期结果还表明了在fs118治疗之后spd-l1水平也升高(实施例2)。24.来自i期研究中招募的第一批24名受试者(增加至43名患者)的期中结果因此出乎意料地证明了：25.(i)以每周一次3mg/kg至20mg/kg的剂量向人类癌症患者施用fs118带来了持久的药效动力学响应，尽管从患者血清中fs118的清除速率比预测更快，但是该药效动力学响应有望与抗肿瘤功效相互关联并且26.(ii)人类患者中的药效动力学效果不需要整个给药间隔的fs118暴露。27.另外，正在进行的i期研究的初始结果已经提供了在治疗癌症中fs118的功效的早期直接证据(尽管这并非该研究的主要目标)。更具体而言，截至2019年5月，已经报告其至少1个“研究中”扫描的14名患者中5名显示出一些病情稳定。截至2019年8月，已经升至22名患者中有11名显示出一些病情稳定，截至2020至4月日，升至30名患者中有17名显示出一些病情稳定(实施例2)。28.分析了来自i期研究的数据以对未来试验的剂量选择进行指导(实施例6)。对i期最佳总体反应(bestoverallresponse)(bor/ibor)数据的贝叶斯分析进行估计，与每周一次3mg/kgfs118相比，如果接受每周一次10mg/kg或20mg/kgfs118，则患者表现为bor/ibor病情稳定的可能性更大。与接受每周一次10mg/kg或20mg/kgfs118的患者相比，接受每周一次3mg/kgfs118的患者还具有更高水平的抗药物抗体。因此从使潜在免疫原性和毒性最小化的角度看，优选fs118以10mg/kg至20mg/kg每周一次给药。对三聚体复合物形成的药代动力学/药效动力学进行建模和模拟进一步显示出，假定10％的生物分布系数，三聚体lag3:fs118:pd-l1复合物的浓度预期在以每周一次10mg/kgfs118的剂量下是最高的。假设较高的三聚体复合物形成转化成t细胞活化和肿瘤生长抑制。尽管接受每周一次低至3mg/kg剂量的患者已经显示出病情稳定(表8)，基于增强的功效并且对降低毒性和免疫原性的期望，优选每周一次施用10mg/kg至20mg/kg的fs118。特别优选该范围的下限(lowerend)的剂量(如，每周一次10mg/kg的fs118)，因为认为较低的剂量降低了t细胞过度刺激风险并且因此降低t细胞耗竭，因此升高持久治疗功效以及降低治疗费用的可能性。29.fs118抗体包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列。30.因此，在一个方面，本发明提供了一种用于在治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，31.其中该抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且32.其中该方法包括每周一次以至少3mg每千克患者体重的剂量向患者施用抗体分子。33.在另一个方面，本发明提供一种治疗人类患者中癌症的方法，其中该方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，34.其中该抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且35.其中该方法包括每周一次以至少3mg/kg每千克患者体重的剂量向患者施用抗体分子。36.在又一个方面，本发明提供抗体分子在制备用于治疗人类患者中癌症的药物中的用途，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，37.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且38.其中治疗包括每周一次以至少3mg每千克患者体重的剂量向患者施用抗体分子。39.可以以每千克患者体重至少4mg(mg/kg)、至少5mg/kg、至少6mg/kg、至少7mg/kg、至少8mg/kg、至少9mg/kg、至少10mg/kg、至少11mg/kg、至少12mg/kg、至少13mg/kg、至少14mg/kg、至少15mg/kg、至少16mg/kg、至少17mg/kg、至少18mg/kg、至少19mg/kg或至少20mg/kg的剂量向患者施用fs118。在一个优选的实施方式中，以至少10mg/kg的剂量向患者施用fs118。在替代的优选实施方式中，以至少20mg/kg的剂量向患者施用fs118。也考虑接受其他剂量，如以至少1mg/kg的剂量施用fs118。40.额外或替代地，可以以多达10mg/kg、多达11mg/kg、多达12mg/kg、多达13mg/kg、多达14mg/kg、多达15mg/kg、多达16mg/kg、多达17mg/kg、多达18mg/kg、多达19mg/kg或多达20mg/kg的剂量施用fs118。在一个优选的实施方式中，以多达10mg/kg的剂量施用fs118。在替代的优选实施方式中，以多达20mg/kg的剂量施用fs118。41.因此，可以以1mg/kg至20mg/kg、3mg/kg至20mg/kg、或10mg/kg至20mg/kg的剂量施用fs118。替代地，可以以1mg/kg至10mg/kg、或3mg/kg至10mg/kg的剂量施用fs118。在一个优选的实施方式中，以3mg/kg至20mg/kg的剂量、更优选地以10mg/kg至20mg/kg的剂量施用fs118。42.在一个实施方式中，以3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、或20mg/kg的剂量向患者施用fs118。例如，可以以3mg/kg的剂量向患者施用fs118。在一个优选的实施方式中，以10mg/kg的剂量向患者施用fs118。在替代的优选实施方式中，以20mg/kg的剂量向患者施用fs118。43.fs118可以以如上文所述的基于患者体重(以千克(kg))计算的剂量向患者进行施用。接受10mg/kg的剂量和体重70kg的患者因此将接受700mg的fs118的剂量。替代地，fs118可以以固定剂量(flatdose)向患者进行施用，即不基于患者个体重量的剂量。可以基于患者群体的患者平均体重(如，70kg、75kg、80kg、85kg、90kg、95kg或100kg)来计算用于fs118的合适固定剂量。在一个优选的实施方式中，基于以70kg作为平均患者体重来计算fs118的固定剂量。在替代的优选实施方式中，基于以80kg作为平均患者体重来计算fs118的固定剂量。在又一个优选的实施方式中，基于以100kg作为平均患者体重来计算fs118的固定剂量。44.假定平均患者体重为100kg，本发明因此提供了：45.一种用于治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，46.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且47.其中该方法包括每周一次以至少300mg的剂量向患者施用抗体分子。48.一种治疗人类患者中癌症的方法，其中该方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，49.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且50.其中该方法包括每周一次以至少300mg的剂量向患者施用抗体分子。51.抗体分子在制备用于治疗人类患者中癌症的药物中的用途，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，52.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且53.其中该治疗包括每周一次以至少300mg的剂量向患者施用抗体分子。54.假定平均患者体重为100kg，可以替代地以至少400mg、至少500mg、至少600mg、至少700mg、至少800mg、至少900mg、至少1000mg、至少1100mg、至少1200mg、至少1300mg、至少1400mg、至少1500mg、至少1600mg、至少1700mg、至少1800mg、至少1900mg、或至少2000mg的剂量向患者施用fs118。例如，可以以至少300mg的剂量向患者施用fs118。在一个优选的实施方式中，以至少1000mg的剂量向患者施用fs118。在替代的优选实施方式中，以至少2000mg的剂量向患者施用fs118。也考虑接受其他剂量，如以至少100mg的剂量施用fs118。额外或替代地，假定平均患者体重为100kg，可以以多达1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、1700mg、1800mg、1900mg或2000mg的剂量施用fs118。在一个优选的实施方式中，以多达1000mg的剂量施用fs118。在替代的优选实施方式中，以多达2000mg的剂量施用fs118。55.因此，假定平均患者体重为100kg，可以以100mg至2000mg、300mg至2000mg或1000mg至2000mg的剂量施用fs118。替代地，可以以100mg至1000mg、或300mg至1000mg的剂量施用fs118。在一个优选的实施方式中，以300mg至2000mg的剂量、更优选地以剂量1000mg至2000mg的剂量施用fs118。56.例如，假定平均患者体重为100kg，可以以300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、1700mg、1800mg、1900mg、或2000mg的剂量向患者施用fs118。例如，可以以300mg的剂量向患者施用fs118。在一个优选的实施方式中，以1000mg的剂量向患者施用fs118。在替代的优选实施方式中，以2000mg的剂量向患者施用fs118。57.fs118的替代固定剂量和固定剂量范围可以使用患者群体的替代平均体重(如70kg、75kg、80kg、85kg、90kg、或95kg、尤其70kg或80kg)来计算，并且根据本发明向人类癌症患者施用。58.例如，假定平均患者体重为70kg，本发明提供了：59.一种用于治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，60.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且61.其中该方法包括每周一次以至少210mg的剂量向患者施用抗体分子。62.一种治疗人类患者中癌症的方法，其中该方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，63.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且64.其中该方法包括每周一次以至少210mg的剂量向患者施用抗体分子。65.抗体分子在制备用于治疗人类患者中癌症的药物中的用途，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，66.其中抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；并且67.其中治疗包括每周一次以至少210mg的剂量向患者施用抗体分子。68.假定平均患者体重为70kg，可以替代地以至少280mg、至少350mg、至少420mg、至少490mg、至少560mg、至少630mg、至少700mg、至少770mg、至少840mg、至少910mg、至少980mg、至少1050mg、至少1120mg、至少1190mg、至少1260mg、至少1330mg或至少1400mg的剂量向患者施用fs118。例如，可以以至少210mg的剂量向患者施用fs118。在一个优选的实施方式中，以至少700mg的剂量向患者施用fs118。在替代的优选实施方式中，以至少1400mg的剂量向患者施用fs118。69.额外或替代地，假定平均患者体重为70kg，可以以多达700mg、770mg、840mg、910mg、980mg、1050mg、1120mg、1190mg、1260mg、1330mg或1400mg的剂量施用fs118。在一个优选的实施方式中，以多达700mg的剂量施用fs118。在替代的优选实施方式中，以多达1400mg的剂量施用fs118。还考虑接受其他剂量，如以至少70mg的剂量施用fs118。70.因此，假定平均患者体重为70kg，可以以70mg至1400mg、210mg至1400mg或700mg至1400mg的剂量施用fs118。替代地，可以以70mg至700mg、或210mg至700mg的剂量施用fs118。在一个优选的实施方式中，以210mg至1400mg的剂量、更优选地以700mg至1400mg的剂量施用fs118。71.例如，假定平均患者体重为70kg，可以以210mg、280mg、350mg、420mg、490mg、560mg、630mg、700mg、770mg、840mg、910mg、980mg、1050mg、1120mg、1190mg、1260mg、1330mg或1400mg的剂量向患者施用fs118。例如，可以以210mg的剂量向患者施用fs118。在一个优选的实施方式中，以700mg的剂量向患者施用fs118。在替代的优选实施方式中，以1400mg的剂量向患者施用fs118。72.作为进一步替代的，可以以足以在剂量之间实现至少0.1-10μg/ml的平均谷血浆浓度(meantroughplasmaconcentration)(ctrough)的剂量向患者施用fs118。在不希望受理论约束的情况下，这些ctrough水平与体外人原代细胞功能试验中fs118的ec50相互关联并且因此可以代表fs118的药理活性水平。73.至少10μg/ml的平均谷血浆浓度有望提供连续的pd-l1抑制作用。74.在向患者每周一次施用fs118的情况下，fs118的剂量可以在时间上间隔7天或8天。如本领域将领会的，剂量之间的时间可以变动至某种程度，以便每一剂量不是精确地按相同时间间隔。这往往将根据施用医生的决定来指导。因此，fs118的剂量可以在时间上按临床可接受的时间范围(如，约7天或8天)间隔。75.可以以三周治疗循环向患者施用fs118。76.优选地通过静脉内注射向患者施用fs118。77.根据本发明待治疗的癌症已经优选地经受除fs118之外的一种或多种免疫检查点抑制剂既往治疗。78.根据本发明待治疗的癌症(i)可以对用一种或多种免疫检查点抑制剂的治疗是难治的，(ii)可以在用一种或多种免疫检查点抑制剂的治疗期间或之后已经复发，或(iii)可以是对用一种或多种免疫检查点抑制剂的治疗有响应。在一个优选的实施方式中，根据本发明待治疗的癌症在用一种或多种免疫检查点抑制剂(除fs118之外)既往治疗期间或之后已经复发。免疫检查点抑制剂优选地是pd-1或pd-l1抑制剂，更优选地是抗pd-1或抗pd-l1抗体。用一种或多种免疫检查点抑制剂(除fs118之外)的既往治疗可以被单独施用、或者与一种或多种额外的疗法(例如一种或多种化疗剂)联用。79.本发明人已经出人意料地识别出更可能因fs118治疗而经历长期病情控制(即，持久病情控制)的癌症患者亚组。这个亚组中的患者是携带肿瘤的患者，该肿瘤对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法显示出部分响应，或在经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法时显示超过3个月的病情稳定。因此这些肿瘤被认为对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有“获得性耐药性表型(acquiredresistancephenotype)”。对抗pd-1或抗pd-l1疗法显示出完全响应的患者还有望落入这个亚组内。可以根据recist1.1标准(eisenhauer,2009)或irecist标准(seymour,2017)、优选地根据recist1.1标准来评估用抗癌疗法(如，抗pd-1或抗pd-l1疗法)治疗期间肿瘤是否显示完全响应、部分响应、病情稳定或病情进展。这种可能涉及获得患者肿瘤的扫描(例如mri扫描)和测量肿瘤病灶的尺寸/体积。为了限定本文中获得性耐药性的目的，假定在患者具有例如分类为显示病情稳定(或部分响应或完全响应)的第一扫描、接着是分类为显示病情进展的稍后扫描的情况下，该患者显示病情稳定(或部分响应或完全响应)的时间段直至获得显示病情进展的扫描为止。换句话说，获得性耐药性表型可以限定为以下肿瘤：(a)对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有完全响应或部分响应的最佳总体响应(bor)，或(b)具有作为最佳总体响应(bor)的病情稳定并且用抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗超过3个月。可以根据recist1.1标准(eisenhauer,2009)或irecist标准(seymour,2017)、优选地根据recist1.1标准来限定临床终点(如，bor)。80.相反地，在经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法时，显示出病情稳定3个月或更短时间的肿瘤(因此包括未显示病情稳定并且因此从治疗开始就显示病情进展的肿瘤)(换而言之，具有病情稳定的bor并且治疗3个月或更短时间的肿瘤，包括具有病情进展的bor的肿瘤)的患者没有经历病情控制持久性，并且因此这些肿瘤被认为对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有“原发性耐药性表型”。携带具有对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法获得性耐药性表型的肿瘤的患者可以称为对抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性。类似地，携带具有对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法原发性耐药性表型的肿瘤的患者可以称为对抗pd-1或抗pd-l1疗法具有原发性耐药性。既往抗pd-1或抗pd-l1疗法可以单独施用或与一种或多种额外的疗法(例如，一种或多种化疗剂和/或免疫治疗剂)联用。81.具体而言，完成18周或更长时间fs118治疗的全部患者均显示携带具有对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法获得性耐药性表型的肿瘤，例外是一名未知其bor的患者(图7和图8)。然而，对于该具有bor未知的后一名患者已知的是其保持用既往抗pd-1疗法超过一年并因此怀疑这位患者将具有被分类为具有获得性耐药性的bor。在i期研究中，存在携带具有对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法原发性耐药性表型的肿瘤的患者都没有接受fs118治疗超过17周(图7和图8)。在携带对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型的肿瘤的患者中观察到对fs118疗法出现增强型持久性响应的可能性升高，与施用的fs118剂量和肿瘤类型无关(图7至图9)。因此，肿瘤对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的耐药性状态是对fs118疗法出现持久响应概率的指示。具体而言，与具有对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法原发性耐药性表型的肿瘤相比，具有对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法获得性耐药性表型的肿瘤具有更高的对用fs118治疗进行响应的可能性，尤其对fs118疗法响应18周或更长时间、19周或更长时间、或20周或更长时间，但是优选地为18周或更长时间。对用fs118治疗的响应因此优选地指肿瘤对fs118治疗表现出病情稳定、部分响应或完全响应，例如持续18周或更长时间、19周或更长时间、或20周或更长时间，但优选地持续18周或更长时间。82.发明人的上述研究结果是特别有意义的，因为不推荐在病情进展后用pd-(l)1抗体对患者进行既往含pd-(l)1的治疗方案的再治疗，并且历史患者已经显示从这种疗法中获益寥寥(fujita等人,anticancerres.2019；fujita等人,thoraciccancer,2019；martini等人,j.immunotherapycancer,2017)。83.因此，在又一个方面，本发明提供了一种用于治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，该抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；84.其中患者的肿瘤已经被确定为相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，以及85.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。86.如本文提到，肿瘤可以是肿瘤病灶。87.本发明还提供一种用于治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，所述抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列、以及seqidno:2中列出的轻链序列；88.其中该方法包括确定患者的肿瘤是否相对于抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，其中89.具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤，并且90.用抗体治疗经确定对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型的肿瘤。91.还提供是一种治疗人类患者中癌症的方法，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，所述方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，所述抗体分子结合pd-l1和lag-3、并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列；92.其中已经确定患者的肿瘤相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，和93.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。94.进一步提供是一种治疗人类患者中癌症的方法，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，所述方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，所述抗体分子结合pd-l1和lag-3、并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列；95.其中该方法包括确定患者的肿瘤是否相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，并且96.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤，并且97.用抗体治疗经确定对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型的肿瘤。98.在进一步的实施方式中，本发明提供抗体分子在制备用于治疗人类患者中癌症的药物中的用途，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，所述抗体分子结合pd-l1和lag-3、并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，99.其中已经确定患者的肿瘤相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，和100.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。101.在又一进一步的实施方式中，本发明提供一种确定癌症患者是否能够对抗体分子治疗响应的方法，该癌症患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，抗体分子结合pd-l1和lag-3并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，102.该方法包括确定患者的肿瘤是否相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型或原发性耐药性表型，103.其中与具有原发性耐药性表型的肿瘤相比，具有获得性耐药性表型的肿瘤具有更高的对用抗体的治疗进行响应的可能性；和104.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤，105.并且具有原发性耐药性表型的肿瘤是经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时实现病情稳定3个月或更短时间的肿瘤，包括具有病情进展的最佳总体响应的肿瘤。106.响应的可能性优选地指以下可能性：肿瘤将对用fs118的治疗显示病情稳定、部分响应或完全响应，例如持续18周或更长时间、19周或更长时间、或20周或更长时间，但优选地持续18周或更长时间。107.本发明还提供一种预测癌症患者对抗体分子响应的可能性的方法，所述抗体分子结合pd-l1和lag-3、并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，108.其中如果已经确定患者的肿瘤相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，则预测该患者可能对抗体响应，109.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。110.在另一个实施方式中，本发明提供一种选择已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗的癌症患者来用于用抗体分子治疗的方法，该抗体分子结合pd-l1和lag-3、并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，111.该方法包括确定患者的肿瘤是否相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型或原发性耐药性表型，112.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤，并且113.具有原发性耐药性表型的肿瘤是经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时实现病情稳定3个月或更短时间的肿瘤，包括具有病情进展的最佳总体响应的肿瘤；并且114.选择携带经确定具有获得性耐药性表型的肿瘤的患者以用于用抗体的治疗。115.抗pd-1或抗pd-l1疗法可以指用抗pd-1或抗pd-l1抗体(除与pd-l1和lag-3二者结合的抗体(如fs118)之外)治疗，包括但不限于，用纳武单抗、派姆单抗(pembrolizumab)、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗或阿特朱单抗治疗。116.本发明人已经进一步显示出在具有获得性耐药性表型的肿瘤中用fs118治疗之前显示pd-l1阳性染色的肿瘤细胞的百分数与用fs118治疗所致的病情控制持久性正相关。在获得性耐药性群体中，用fs118治疗30周或更长时间的三名患者在基线处还具有显示对pd-l1阳性染色的肿瘤细胞的最高百分数。在对抗pd-1或抗pd-l1疗法具有原发性耐药性患者中未见这种相关性(图10)。这些结果显示，对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型的肿瘤(该肿瘤包含15％或更多、20％或更多、或25％或更多、但优选地15％或更多pd-l1阳性肿瘤细胞)更可能对用fs118的治疗进行响应。例如，对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型的肿瘤可以包含15％或更多、16％或更多、17％或更多、18％或更多、或19％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞。117.用于确定肿瘤样品中pd-l1阳性肿瘤细胞百分数的方法是本领域已知的，并且可以包含用抗pd-l1抗体对肿瘤样品染色并且检测抗体与肿瘤细胞的直接或间接结合。可以通过计数肿瘤细胞数(例如在5个高倍视野下)、并确定与抗体结合的所述肿瘤细胞的百分数来确定pd-l1阳性肿瘤细胞百分数。118.在又一个实施方式中，本发明因此提供一种用于治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列；119.其中患者的肿瘤已经确定为相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，并且已经确定肿瘤样品包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞，该肿瘤样品从用抗体治疗前的患者获得，120.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示出完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示出病情稳定超过3个月的肿瘤。121.本发明还提供一种用于治疗人类患者中癌症的方法的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3，该人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，该抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列；并且122.其中该方法包括确定：123.(i)患者的肿瘤是否对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型；和124.(ii)从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品中是否包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞；并且125.用抗体治疗确定具有获得性耐药性表型且包含15％或更多pd-l1阳性肿瘤细胞的肿瘤；126.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示出病情稳定超过3个月的肿瘤。127.还提供是一种治疗人类患者中癌症的方法，所述人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，该方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3的抗体分子并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列；128.其中患者的肿瘤已经被确定为相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，并且已经确定从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞；129.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。130.进一步提供是一种治疗人类患者中癌症的方法，人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，该方法包括向患者施用治疗有效量的抗体分子，该抗体分子结合pd-l1和lag-3、并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列；131.其中该方法包括确定：132.(i)患者的肿瘤是否相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型；和133.(ii)从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品是否包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞；并且134.用抗体治疗确定具有获得性耐药性表型且包含15％或更多pd-l1阳性肿瘤细胞的肿瘤；135.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。136.在又一个实施方案中，本发明提供抗体分子在制备用于治疗人类患者中癌症的药物中的用途，所述人类患者已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，该抗体分子结合pd-l1和lag-3并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，137.其中已经确定患者的肿瘤相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，并且已经确定从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞；138.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示出完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。139.在又一个实施方案中，本发明提供一种确定已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗的癌症患者是否能够对用抗体分子治疗响应的方法，该抗体分子结合pd-l1和lag-3并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，140.该方法包括确定：141.(i)患者的肿瘤是否相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型或原发性耐药性表型；和142.(ii)从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品是否包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞；143.其中与具有原发性耐药性表型的肿瘤、或包含小于15％的pd-l1阳性肿瘤细胞的具有获得性耐药性表型的肿瘤相比，包含至少15％的pd-l1阳性肿瘤细胞的具有获得性耐药性表型的肿瘤具有更高的对用抗体治疗进行响应的可能性；144.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤，并且145.其中具有原发性耐药性表型的肿瘤是经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时实现病情稳定3个月或更短时间的肿瘤，包括具有病情进展的最佳总体响应的肿瘤。该方法还可以进一步包括选择确定对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型且包含15％或更多pd-l1阳性肿瘤细胞的肿瘤用于治疗，或用抗体治疗确定对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型且包含15％或更多pd-l1阳性肿瘤细胞的肿瘤。146.本发明还提供一种预测癌症患者对抗体分子响应的可能性的方法，该抗体分子结合pd-l1和lag-3并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，147.其中如果已经确定患者的肿瘤相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型，并且已经确定从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞，则预测该患者可能对抗体抗体响应，148.其中具有获得性耐药性表型的肿瘤是对用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗显示完全或部分响应的肿瘤，或经受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗时显示病情稳定超过3个月的肿瘤。149.在另一个实施方式中，本发明提供一种选择已经经受既往抗pd-1或抗pd-l1疗法治疗的患者来用于用抗体分子治疗的方法，该患者，所述抗体分子结合pd-l1和lag-3并且包含seqidno:1中列出的重链序列和seqidno:2中列出的轻链序列，150.该方法包括确定：151.(i)患者的肿瘤是否相对于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型或原发性耐药性表型；和152.(ii)从用抗体治疗前的患者获得的肿瘤样品是否包含15％或更多的pd-l1阳性肿瘤细胞；并且3mab；igg对照＝g1aa/4420。b显示pk数据-单剂量静脉内施用10mg/kg的mlag-3/pd-l1(空心圆圈和三角形)和抗pd-l1mab(实心圆圈和三角形)。分别显示来自由圆圈和三角形所代表的两项不同研究的数据。166.图4显示了c57bl/6小鼠中皮下生长的mc38同基因肿瘤模型的肿瘤体积测量值，该c57bl/6小鼠用3剂量的g1aa/4420(igg对照，10mg/kg)和4个不同剂量(1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg)的抗小鼠lag-3/pd-l1mab2fs18m-108-29aa/s1治疗。用x-轴上的竖直黑色箭头指示各剂量。y-轴上显示平均肿瘤体积加或减均值的标准误(standarderrormean，sem)。使用单因素方差分析(anova)，在研究第17天比较同种型对照组(g1aa/4420)与lag-3/pd-l1mab2治疗组之间的肿瘤大小。使用杜基(tukey’s)多重比较试验确定组之间的显著性差异：***p≤0.001；****p≤0.0001。167.图5显示了二室群体pk模型(2-compartmentpopulationpkmodel)的结构，该模型描述从nhp非glp和glppk数据构建的fs118的系统性暴露量(给药后0-7天)。vp(其也可以称作v1)＝中央体积；vt(其也可以称作v2)＝外周体积；cld(其也可以称作cl2)＝交换系数；clp(其也可以称作cl1)＝fs118清除率；cp＝血浆室；ct＝组织室。168.图6显示了实施例2中i期研究的首次人体内(first-in-human，fih)研究设计。169.图7显示了相对于耐药性组和剂量(菱形＝1mg/kg；圆圈＝3mg/kg；三角形＝10mg/kg；正方形＝20mg/kg)，截至2020年3月25日已完成fs118治疗的周数。与如本文定义的对抗pd-1/pd-l1疗法具有原发性耐药性的患者相比，在如本文定义的对pd-1/pd-l1疗法具有获得性耐药性的患者之间观察到显著差异，其中无论施用的fs118剂量如何，具有获得性耐药性的患者对fs118治疗的平均持续时间均长于具有原发性耐药性的患者。170.图8显示了被划归为对抗pd-1/pd-l1疗法具有原发性耐药性或获得性耐药性(依据fs118剂量排序)的39名患者的游动图(swimmerplot)，所述患者截至2019年11月27日在接受fs118治疗时进行了可评估的肿瘤扫描。具有原发性耐药性的患者显示为灰色条，而具有获得性耐药性的患者显示为深灰色条。显示完成的fs118治疗的周数(pd＝病情进展；sd＝病情稳定)。完成超过18周fs118治疗的全部患者(全部条，其中一者携带具有获得性耐药性表型的肿瘤)均具有至少一个病情稳定的测量。171.图9显示了基于与图7中所示的数据相同的数据，但相对于耐药性组和肿瘤类型，截至2020年3月25日已经完成fs118治疗的周数。对fs118治疗响应的可能性与具有获得性耐药性表型的肿瘤有关，但似乎与临床适应症(肿瘤类型)无关。172.图10显示了相对于截至2019年12月12日已经完成fs118治疗的周数，fs118治疗之前显示pd-l1阳性染色的肿瘤活检样品中肿瘤细胞的百分数(pd-l1百分数肿瘤阳性评分[pd-l1％tps])。a：对pd-1/pd-l1疗法具有获得性耐药性的患者，高基线pd-l1％tps显示与fs118治疗时长正相关。在获得性耐药性组内部具有最高pd-l1％tps的三名患者用fs118治疗30周或更长时间，表明病情受fs118控制。b：对抗pd-1/pd-l1疗法具有原发性耐药性患者，未观察到pd-l1％tps与fs118治疗时长之间的相关性。[0173]图11显示了用fs118治疗时，与对抗pd-1/pd-l1疗法具有原发性耐药性的患者相比，对抗pd-1/pd-l1疗法具有获得性耐药性的患者显示较高量级的免疫细胞响应。将免疫细胞计数随时间的百分数变化(空心圆圈：cd3 t细胞；实心正方形：cd4 t细胞，实心三角形：cd8 t细胞，实心菱形：nk细胞)绘制为fs118治疗开始之前从基线变化的百分数。a：患者1004-0003是具有原发性耐药性的代表性患者特征。b：患者1002-0014是具有获得性耐药性的代表性患者。2019年11月26日获得显示的数据。具体实施方式[0174]抗lag-3/pd-l1双特异性抗体[0175]wo2017/220569a1中描述了适用于在本发明中使用的抗lag-3/pd-l1双特异性抗体(如本文所述的fs118)，所述文献的内容在本文中全文引入并适于所有目的。fs118抗体分子包含seqidno:1中列出的重链序列，以及seqidno:2中列出的轻链序列。[0176]癌症[0177]pd-1、其配体pd-l1和lag-3是免疫检查点蛋白的示例。结合且抑制这些蛋白质的分子(如，抗体)统称为免疫检查点抑制剂。已经显示了用抗pd-1/pd-l1抗体作为单药疗法治疗癌症患者导致t细胞上的lag-3表达上调，导致了对抗pd-l1/pd-1疗法的耐药性(图1)。用抗pd-1/pd-l1抗体和抗lag-3抗体联合治疗不能够阻止t细胞上的lag-3表达增加，尽管与单独pd-l1/pd-1疗法相比，表达的增加被减少(图1)。相反，已经显示用fs118(和小鼠替代物抗体fs18m-108-29aa/s1)的治疗导致了t细胞lag-3表达减少，以及slag-3水平增加(图1)。因此与抗pd-l1/pd-1和抗lag-3抗体相比，fs118具有不同的作用模式并且能够阻止和/或逆转lag-3介导的、对pd-l1/pd-1抑制剂的耐药性，如来自i期研究的早期结果所证明的，该早期结果显示在fs118治疗后的数名患者中的药效动力学响应以及病情稳定，该患者患有在进行抗pd-1/pd-l1疗法时或之后已经进展的局部晚期、不可切除或转移性实体瘤或血液恶性肿瘤。[0178]不受理论约束，图2中显示了fs118治疗对抗pd-1/pd-l1单药疗法难治的、已在抗pd-1/pd-l1单药疗法期间或之后复发的肿瘤以及对抗pd-1/pd-l1单药疗法有响应的肿瘤的预期影响。[0179]对用一种或多种免疫检查点抑制剂治疗难治的癌症优选地指对用一种或多种免疫检查点抑制剂(除lag-3/pd-l1双特异性抗体(如，fs118)之外)治疗难治的癌症。已经在用一种或多种免疫检查点抑制剂治疗期间或之后复发的癌症优选地指在用所述免疫检查点抑制剂治疗期间或之后已经对一种或多种免疫检查点抑制剂(除lag-3/pd-l1双特异性抗体(如，fs118)之外)具有获得性耐药性的癌症。[0180]具体地，图2显示在对抗pd-1/pd-l1单药疗法难治的或已经在抗pd-1/pd-l1单药疗法期间或之后复发并且表现出t细胞耗尽或免疫抑制的肿瘤中，fs118治疗有望通过逆转t细胞耗竭/免疫抑制的作用来增强免疫介导的抗癌作用，这是由于与t细胞表面表达的lag-3结合(否则其充当免疫细胞的抑制性信号)、减少lag-3的t细胞表面过度表达并促进可溶性lag-3(slag-3)释放的结果。fs118因此具有显著拓宽免疫检查点阻断的临床获益的潜力，因为fs118有挽救对“医护标准”免疫检查点抑制剂疗法具有原发性耐药性或适应性耐药性的患者的能力。[0181]在对pd-1/pd-l1单药疗法响应的肿瘤中，tils有望在其表面上表达lag-3且肿瘤是高pd-l1的。通过与所述lag-3和pd-l1结合，fs118有望比抗pd-1/pd-l1单药疗法更能增强这些患者中的t细胞活化，以及阻止对抗pd-l1治疗响应的lag-3的过度表达。因此，对pd-l1阻断的耐药性的发展有望被抑制。如本文中公开的fs118剂量因此有望适合于有效地治疗对pd-1/pd-l1单药疗法响应的癌症，本文已经显示使得数名患者中的药效动力学响应以及病情稳定，该患者患有在进行抗pd-1/pd-l1疗法时或之后已进展的肿瘤或血液恶性肿瘤的。[0182]显示对免疫检查点抑制剂治疗响应的癌症必须包含tils以介导所述效果。因此，对用除抗pd-1/pd-l1抑制剂之外的免疫检查点抑制剂治疗是难治的，或在所述治疗期间或之后已经复发的癌症预期包含无活性tils(即，耗竭或免疫抑制的)，而对用除抗pd-1/pd-l1抑制剂之外的免疫检查点抑制剂治疗响应的癌症有望包含活化的tils。作为结果，fs118将有望对表达pd-l1的癌症具有相似的效果，该癌症对用除抗pd-1/pd-l1抑制剂之外的免疫检查点抑制剂治疗是难治的，或在所述治疗期间或之后已经复发，或对用除抗pd-1/pd-l1抑制剂之外的免疫检查点抑制剂治疗响应，如对以上抗pd-1/pd-l1抑制剂治疗是难治的、或已经复发或对其响应的癌症所描述的那样。[0183]在一个优选的实施方式中，根据本发明的、待治疗的癌症因此已经经受一种或多种免疫检查点抑制剂(除lag-3/pd-l1双特异性抗体(如，fs118)之外)的既往治疗。[0184]根据本发明待的、待治疗的癌症因此可以、或已经确定对用一种或多种免疫检查点抑制剂(除lag-3/pd-l1双特异性抗体(如，fs118)之外)的治疗是难治的。替代地，根据本发明的、待治疗的癌症可以用一种或多种免疫检查点抑制剂(除lag-3/pd-l1双特异性抗体(如，fs118)之外)治疗期间或之后已经复发。作为进一步替代地，根据本发明的、待治疗的癌症可能是或已经确定对用一种或多种免疫检查点抑制剂的治疗有响应。在用一种或多种免疫检查点抑制剂治疗期间或之后的癌症的复发优选地指在用一种或多种免疫检查点抑制剂治疗期间或之后的癌症进展。癌症进展的检测完全处于本领域普通技术人员的能力范围内。[0185]免疫检查点抑制剂可以是pd-1、pdl-1、pd-l2、ctla-4、cd80、cd86、lag-3、b7-h3、vista、b7-h4、b7-h5、b7-h6、nkp30、nkg2a、半乳糖凝集素9、tim-3、hvem、btla、kir、cd47或sirpα抑制剂。免疫检查点抑制剂可以是能够抑制所讨论的免疫检查点分子的抗体。在一个优选的实施方式中，免疫检查点抑制剂是pd-1或pd-l1抑制剂，如抗pd1/pd-l1抗体。能够抑制免疫检查点分子的抗体是本领域已知的，并且包括用于抑制ctla-4的易普利姆玛(ipilimumab)；用于pd-1的纳武单抗、派姆单抗和西米普利单抗(cemiplimab)；以及，用于pd-l1的阿特朱单抗、阿维鲁单抗和德瓦鲁单抗。marin-acevedo等人,journalofhematology&oncology(2018)中综述了免疫检查点分子、其配体和抑制剂。[0186]根据本发明的、待治疗的癌症表达pd-l1。优选地，已经确定该癌症表达pd-l1。另外，根据本发明的、待治疗的癌症包含表达lag-3的免疫细胞，如tils。优选地，已经确定该癌症包含表达lag-3的免疫细胞。在一个优选的实施方式中，癌症可以是因由癌细胞表达pd-l1和免疫细胞表面上lag-3的表达而对用一种或多种免疫检查点抑制剂(除lag-3/pd-l1双特异性抗体(如fs118)之外)治疗耐药性的癌症。在具体的实施方式中，肿瘤微环境内部pd-l1在癌细胞表面上的表达和lag-3在免疫细胞表面上的表达相对于正常组织细胞和活化的免疫细胞可以分别是高的。[0187]本发明人已经出乎意料地显示了，对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型的肿瘤，以及尤其对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法具有获得性耐药性表型且在用fs118治疗之前包含至少15％pd-l1阳性肿瘤细胞的肿瘤，响应用fs118治疗而显示持久响应、尤celllungcancer，sclc)和莫克细胞癌。[0194]在替代的优选实施方案中，癌症是选自以下构成的组的罕见癌症：甲状腺癌(优选地甲状腺未分化癌)、肉瘤(优选地软组织肉瘤)、多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme，gbm)、肉瘤(例如，软组织肉瘤，包括去分化脂肪肉瘤、未分化多形性肉瘤和平滑肌肉瘤)、卵巢癌(例如，卵巢高/低度浆液性或透明细胞组织学(ovarianhigh/low-gradeserousorclearcellhistology))、基底细胞癌、msi-h实体瘤、三阴性乳腺癌(triplenegativebreastcancer，tnbc)、宫颈癌、食管癌(例如，食管胃交界腺癌(gej)或食管鳞状细胞癌)、多发性骨髓瘤(multiplemyeloma，mm)、胰腺癌(如，胰脏腺癌)、脑膜瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌(如，msi-h子宫内膜癌)、胸腺癌、妊娠滋养细胞肿瘤、淋巴瘤(如，弥漫性大b细胞淋巴瘤(diffuselargeb-celllymphoma，dlbcl)或外周t细胞淋巴瘤)、腹膜转移癌、微卫星稳定(microsatellitestable，mss)结直肠癌和胃肠间质肿瘤(gastrointestinalstromaltumours，gist)(如不可切除性gist)。[0195]在一个优选的实施方案中，癌症是甲状腺癌，优选地甲状腺未分化癌。在替代的优选实施方案中，癌症是肉瘤，优选地软组织肉瘤。最近已经表明肉瘤肿瘤组织内部三级淋巴样结构(tertiaryiymphoidstructures，tls)的存在可以预测对免疫检查点阻断疗法的响应(petitprez等人,2020)。[0196]在另一个实施方式中，待治疗的癌症可以选自：头颈癌(如，scchn)、胃癌、食管癌、nsclc、间皮瘤、宫颈癌、甲状腺癌(如，甲状腺未分化癌)和肉瘤(如，软组织肉瘤)。[0197]在一个具体实施方式中，待治疗的癌症是头颈癌，优选为头颈部鳞状细胞癌(scchn)，更优选为口腔、口咽(oropharynx)、喉(larynx)或下咽部(hypopharynx)的鳞状细胞癌。癌症可以是复发的或转移性的。scchn患者的肿瘤微环境中t细胞上更高水平的lag-3和pd-1共表达已经与缺乏抗pd-1/pd-l1剂的响应性相关(hanna等人,2018)，并且阴性淋巴结状态的scchn患者中tils上的lag-3表达已经显示是较低存活率的预后标志(deng等人,2016)。同时靶向lag-3和pd-l1的双特异性抗体(如，fs118)的治疗可以如本文所描述的那样重振免疫响应。头颈癌(如，scchn)可能已经或可能尚未用单独或与另一种疗法(例如化疗药)联合施用的既往抗pd-1或抗pd-l1疗法(除，fs118之外)治疗且进展。患者可能对人乳头瘤病毒(hpv)呈阳性或阴性。在一个实施方式中，患者均对hpv呈阳性。在一个替代实施方式中，患者均对hpv呈阴性。[0198]在另一个实施方式中，待治疗的癌症是已知表达高水平lag-3的胃癌(morgado等人,2018)。胃癌可能已经或可能尚未用单独或与另一种疗法药(例如，化疗药)联合施用的既往抗pd-1或抗pd-l1疗法(除fs118之外)治疗且进展。在进一步的实施方式中，待治疗的癌症是nsclc、优选地是iv期鳞状和/或iii期的nsclc。nsclc可能尚未用单独或与另一种疗法(例如，化疗药)联合施用的既往抗pd-1或抗pd-l1疗法(除fs118之外)治疗且进展。在进一步的实施方式中，待治疗的癌症是sclc、优选地是扩散期的sclc。sclc可能尚未用单独或与另一种疗法(例如化疗药)联合施用的既往抗pd-1或抗pd-l1疗法(除fs118之外)治疗且进展。在又一进一步的实施方式中，待治疗的癌症是卵巢癌。卵巢癌可能是铂剂难治的和/或可以已经或可能尚未用先前用免疫疗法(例如，单独或与另一种疗法(例如化疗药)联合施用的既往抗pd-1或抗pd-l1疗法(除fs118之外))治疗。[0199]在本技术指出一个特定类型的癌症(如，乳腺癌)的情况下，这指的是相关组织(在乳腺组织的情况下)的恶性转变。源自不同组织(例如，卵巢组织)的恶性转变的癌症可以在体内另一个位置(如，乳腺)产生转移性病灶，但不因而是如本文所提到的乳腺癌，而是卵巢癌。[0200]根据本发明的、待治疗的癌症可以是原发性癌症。替代地，癌症可以是转移性癌症。[0201]施用途径[0202]优选地通过静脉内注射向患者施用fs118。例如，可以通过静脉内团注或静脉内输注(例如，使用连续输注泵)向患者施用fs118。对于多达2400μg的剂量而言，可以使用连续输注泵执行长达30分钟的静脉内输注，并且对于高于2400μg的剂量而言，执行长达60分钟的静脉内输注。这些施用类型被成功地用于i期研究中的fs118(实施例2)。[0203]制剂[0204]为了治疗性用途，fs118抗体与载体一起配制，该载体为药学上可接受的且适合通过选定的施用途径(如静脉内施用)输送fs118抗体。合适的药学上可接受的载体是常规用于静脉内抗体分子的施用的那些载体，如稀释剂和辅料等。用于治疗性用途的药学上可接受的载体是制药领域熟知的，并且例如在雷明顿药物科学(remington'spharmaceuticalsciences),马克出版有限公司(mackpublishingco.)(a.r.gennaro编著1985)中描述的。[0205]联合治疗[0206]治疗如本文中公开的癌症的方法可以包括单独或与其他治疗联合的向患者施用fs118抗体。例如，取决于待治疗的癌症，fs118抗体可以同时、或依次、或作为与另一种治疗剂联合制剂施用。例如，fs118抗体可以与已知用于待治疗癌症的治疗剂联合施用。例如，fs118抗体可以与第二抗癌疗法(如化学疗法、抗肿瘤疫苗(也称作癌症疫苗)、放射治疗、免疫疗法、溶瘤病毒、嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)t细胞疗法或激素疗法)联合向患者进行施用。[0207]fs118抗体将有望在抗癌疗法(如化学疗法、抗肿瘤疫苗接种或放射疗法)中充当佐剂。不希望受理论约束，据认为，与用化学疗法、抗肿瘤疫苗、或放射疗法所实现的对肿瘤相关抗原的免疫响应相比，fs118抗体与化学疗法、抗肿瘤疫苗接种或放射疗法联合向患者进行施用将触发对肿瘤相关抗原更大的免疫响应。[0208]治疗患者中癌症的方法因此包括向患者与化疗剂、抗肿瘤疫苗、放射性核素、免疫治疗剂、溶瘤病毒、car-t细胞或用于激素疗法的试剂联合施用治疗有效量的fs118抗体。化疗剂、抗肿瘤疫苗、放射性核素、免疫治疗剂、溶瘤病毒、car-t细胞或用于激素疗法的试剂优选地为用于所讨论癌症的化疗剂、抗肿瘤疫苗、放射性核素、免疫治疗剂、溶瘤病毒、car-t细胞、或用于激素疗法的试剂，即已经显示在所讨论癌症的治疗中有效的化疗剂、抗肿瘤疫苗、放射性核素、免疫治疗剂、溶瘤病毒、car-t细胞或用于激素疗法的试剂。已经显示对所讨论癌症有效的合适化疗剂、抗肿瘤疫苗、放射性核素、免疫治疗剂、溶瘤病毒、car-t细胞、或用于激素疗法的试剂的选择完全在熟练从业人员的能力范围内。[0209]例如，在该方法包括向该患者与化疗药联合施用治疗有效量的fs118抗体的情况下，化疗剂可以选自由以下构成的组：紫杉烷、细胞毒性抗生素、酪氨酸激酶抑制剂、parp抑制剂、b_raf酶抑制剂、hdac抑制剂、mtor抑制剂、烷基化剂、铂类似物、核苷类似物、沙立度胺(thalidomide)衍生物、抗肿瘤化疗剂和其他。紫杉烷包括多西他赛、紫杉醇和白蛋白结合型紫杉醇(nab-paclitaxel)；细胞毒性抗生素包括放线菌素d、博来霉素、蒽环类、多柔比星和戊柔比星(valrubicin)；酪氨酸激酶抑制剂包括厄洛替尼、吉非替尼、奥希替尼(osimertinib)、阿法替尼、阿昔替尼、plx3397、伊马替尼、考比替尼(cobimitinib)、曲美替尼、仑伐替尼、卡博替尼(cabozantinib)、尼洛替尼(nlotinib)、索拉非尼、西地尼布(cediranib)、瑞戈菲尼(regorafrinib)、司曲替尼(sitravatinib)、帕唑哌尼(pazopinib)和地法替尼(defactinib)；parp抑制剂包含尼拉帕尼、奥拉帕尼(olaparib)、卢卡帕尼(rucaparib)和维利帕尼(veliparib)；b-raf酶抑制剂包括威罗菲尼和达拉菲尼；烷基化剂包括达卡巴嗪、环磷酰胺、替莫唑胺；铂类似物包括卡铂、顺铂和奥沙利铂；核苷类似物包括吉西他滨和阿扎胞苷(azacitidine)；抗肿瘤药包括氟达拉滨。hdac抑制剂包括恩替诺特、帕比司他和伏立诺他(varinostat)；mtor抑制剂包括依维莫司和西罗莫司(sirolimus)。适用于本发明中的其他化疗剂包括甲氨蝶呤、培美曲塞、卡培他滨、艾瑞布林(eribulin)、伊立替康、氟尿嘧啶和长春花碱。[0210]用于治疗癌症的疫苗策略已经在门诊实施并且在科学文献内部详细讨论(如rosenberg,s.2000developmentofcancervaccines)。这种主要涉及在有或没有粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor，gm-csf)的情况下，通过使用自体癌细胞或同种异体癌细胞作为疫苗方法，促进免疫系统对由自体癌细胞或同种异体癌细胞表达的多种细胞标志物响应的策略。gm-csf在抗原呈递过程中引起强力响应并且与所述策略一起采用特别有效。[0211]鉴于包括以下实验性示例的本公开，本发明的其他方面和实施方式将对本领域技术人员是显而易见的。[0212]本说明书中所提到的全部文件均通过引用的方式并入本文。[0213]在本文使用的情况下，“和/或”应理解为两种指定特征或组件的每一者的具体公开，同时公开或未公开另一者。例如“a和/或b”应理解为(i)a、(ii)b和(iii)a和b的每一者的具体公开，正如本文中单独提到每一者那样。[0214]除非上下文指出，否则对上述特征的描述和定义不限于本发明的任何具体方面或实施方式并且同等地适用于描述的全部方面和实施方式。[0215]除非上下另行规定，否则通过用术语“由……构成”或”基本上由……构成”替换术语“包含”，本发明的其他方面和实施方式提供上述方面和实施方式。[0216]现在将以举例方式并参考上文描述的附图，说明本发明的某些方面和实施方式。[0217]实施例[0218]实施例1：用于fs118的首次人体内(firstinhuman，fih)剂量论证和剂量递增策略[0219]fs118是同时靶向两种免疫检查点蛋白lag-3和pd-l1的双特异性抗体分子。fs118已经在许多重要方面方面显示出不同于单特异性免疫检查点抑制剂，如抗pd-l1抗体。这些差异需要详细分析以确定用于人类患者中fs118的i期研究的适宜剂量。具体地，在体外和体内研究中测试fs118，以确定用于i期人体研究的最佳起始剂量和剂量递增策略，所述i期人体研究研究设计为确定fs118在患有在既往含pd-1/pd-l1疗法中或之后已经进展的晚期恶性肿瘤患者中的安全性、耐受性、药代动力学和活性(参见下文实施例2)。[0220]1.1fs118和mlag-3/pd-l1：非临床研究概况h缓冲液中稀释至1:10并添加至板，该板随后被加载至gyrolabxp工作站上。通过荧光发射检测fs118。使用响应作为gyrolab评价(evaluator)软件中的加权因子(1/y2)的4参数对数曲线来回归标准曲线。验证试验的lloq为39.1ng/ml。[0229]1.2.2nhp中血浆抗fs118抗体(ada)的测量[0230]在nhp剂量范围探索(drf)研究和4周药物非临床研究质量管理规范(4周glp)毒性研究(分别参见实施例1.3.2.2和1.3.2.3)中使用标准电化学光桥接样式来测量对fs118有反应的抗体的存在。为了限制药物干扰，将生物素酰化的fs118和硫代靶向的fs118与酸解离的样品温育，并且将标记的ada复合物固定在链霉亲和素板上，之后进行洗涤和后续检测。对于多克隆兔阳性对照抗fs118抗体，试验灵敏度是75ng/ml，并且在96.5μg/mlfs118存在下可以检测到150ng/ml阳性对照。[0231]1.2.3血浆总可溶性pd-l1(spd-l1)的测量[0232]根据生产商的操作方案，使用人/食蟹猴b7-h1/pd-l1免疫分析法(r&dsystems#db7h10)，在nhpdrf研究和4周glp毒性研究(分别参见实施例1.3.2.2和1.3.2.3地)中定量施用fs118后的总spd-l1变化。在这个试验中，fs118干扰fc标记的pd-l1的检测，但是似乎不干扰对内源pd-l1的检测，并且因此该试验假定测量总pd-l1(即，游离pd-l1和fs118-pd-l1复合物)。这个试验的已验证lloq是25pg/ml。[0233]1.3动物中的药代动力学和药效动力学[0234]1.3.1小鼠[0235]1.3.1.1野生型(wt)小鼠和lag-3敲除(ko)小鼠中的fs118pk[0236]尽管fs118与mlag-3结合(与hlag-3相比亲和力较低)，但fs118不与mpd-l1结合并且对任一种靶标没有功能活性。fs118在c57/bl6wt小鼠中具有与同种型对照抗体类似的正常igg动力学(表1)。还向lag-3ko小鼠施用fs118，并且在这些动物中fs118显示正常的igg动力学(表1)。[0237]表1：野生型小鼠和lag-3ko小鼠中的fs118pk[0238][0239]auc(0-6)-在给药(单剂量)后0-6天的auc[0240]值是平均[95％ci]n＝每给药组多达3[0241]数据源：[f-starstudyreportfs118_pharm_015][0242]1.3.1.2野生型(wt)小鼠和lag-3敲除小鼠中的mlag-3/pd-l1mab2pk[0243]与fs118相反，野生型小鼠中小鼠替代物mab2(mlag-3/pd-l1)更快速地从血清中清除(表2)。在野生型小鼠中单次施用之后，将小鼠替代物mab2的pk特征与抗pd-l1mab(igg1构架(framework)相同，fabpd-l1结合部分相同)比较。尽管pd-l1结合表位相同，mab2构建体的清除率高于mab的清除率(图3b)。最初，这表明mlag-3靶向结合可能与小鼠替代物mab2的清除率有关，因为抗pd-l1mab不表现相同的清除率(图3b)。然而，在用lag-3ko小鼠后续研究中，小鼠替代物mab2继续显示先前观察到的清除率(表2)，起初表明这个过程最有可能由pd-l1结合mab2样式驱动的。然而，对其他mab2并未观察到这种现象，指示了mab2样式本身不是原因。因此，与抗mpd-l1mab相比，替代物mab2清除率可能是因pd-l1结合与ch3结构域中容许残基的靶向特异性变化的组合所致。[0244]还应当注意的是尽管与抗pd-l1mab相比，小鼠替代物mab2的清除率较高，但是两种构建体均在mc38同基因肿瘤模型中实现明显的抗肿瘤响应(图3a)，这证明观察到的清除率似乎与长期药效动力学效果无关并且不排除抗肿瘤功效。[0245]表2：野生型小鼠和lag-3ko小鼠中的mlag-3/pd-l1mab2pk[0246][0247]auc(0-6)-在给药(单剂量)后0-6天的auc[0248]值是平均[95％ci]n＝每给药组多达3[0249]数据源：[f-starstudyreportfs118_pharm_015][0250]1.3.1.3mc38肿瘤模型中的mlag-3/pd-l1mab2pk[0251]将1×106个mc38小鼠结肠癌细胞(美国国家癌症研究所(bethesda,md,usa))接种到10-11周龄和体重17.73-21.23g(平均19.49g)的各雌性c57/bl6小鼠(streetbarharbor,me,usa)动物右肩正下方的皮下间隙中。接种后八天(研究第0天)，使用配对分布法、基于肿瘤大小(平均肿瘤体积是约55.6mm3(2.1％的可变性))，将六十只接种动物随机分组至12个每组的六个组中，并且开始治疗。每个组的动物以固定容量200μl/动物接受用fs18m-108-29aa/s1(以0.40mg/动物、0.20mg/动物、0.06mg/动物或0.02mg/动物的剂量，等同于约20mg/kg、10mg/kg、3mg/kg和1mg/kg)或阴性对照抗体g1aa/4420(0.20mg/动物，等同于大约10mg/kg)的腹膜内(intrapertoneal，i.p.)治疗。每次施用三剂量(研究第0天、第3天和第6天)。将fs18m-108-29aa/s1在配制缓冲液中稀释并且将g1aa/4420在杜氏磷酸盐缓冲盐水中稀释。用相同的手持式测径器(fowlerultra-calv电子卡钳)获得全部肿瘤量值。在第一治疗日(研究第0天)测量全部动物的肿瘤大小(长度和宽度)并且随后每周测量二次(即每周两次)直至研究第53天为止。使用以下等式计算肿瘤体积：肿瘤体积(mm3)＝长度×宽度2×π/6。[0252]在第一次给药之前一小时并且随后在第一次给药之后71h、143h、148h、152h、168h、192h、240h和288h时通过末端心脏采血取得血清样品。在0h、71h和143h施用各剂量。将样品在-80℃储存并且在干冰上运输以用于分析。定量每剂量血清替代物mab2浓度：表3中显示ctrough水平和cmax水平及auc。谷浓度在第二次给药和上一次给药之前显著降低，表明ada响应。[0253]表3：mc38肿瘤模型中的mlag-3/pd-l1mab2pk[0254][0255]ctrough(1)-在紧接着第二次给药之前、剂量1之后的谷浓度值是平均[95％ci][0256]ctrough(2)-在紧接着最终给药之前、剂量2之后的谷浓度[0257]ctrough(1)-在最终给药72h之后、剂量3之后的谷浓度[0258]d3cmax-在上一次给药后观察到的浓度的最大值[0259]d3auc(0-3)-在第三次(即上一次)给药的之后0-3天的auc[0260]数据源：[f-starstudyreportfs118_pharm_012][0261]尽管给药期间存在暴露量明显下降，但是在全部受测剂量均观察到明显的肿瘤缩减，与g1aa/4420相比，使用混合模式分析(p≤0.05)，fs18m-108-29aa/s1在剂量3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg、跨整个研究时间观察到肿瘤生长率的显著抑制(图4)。使用单因素方差分析(anova)，在研究第17天特别比较同种型对照组(g1aa/4420)与fs18m-108-29aa/s1治疗组之间的肿瘤大小；使用杜基多重比较测试，发现与同种型对照组相比，全部剂量组(1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg)的肿瘤大小在fs18m-108-29aa/s1治疗后均显著地缩减(p《0.05)。kaplan-meier生存分析显示在剂量为3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg时，与mc38同基因模型中的同种型对照相比，fs18m-108-29aa/s1mab2引起了统计显著的生存获益。上一次给药后的观察到cmax和auc(0-3天)高度可变并且不可能从这项研究做出关于剂量比例关系的任何明确结论。[0262]总之，这些数据表明，抗肿瘤功效所需的小鼠替代物mab2的暴露量(cmax，上一次给药，3mg/kg)≥6μg/ml并且在整个给药阶段期间无需维持这个暴露量水平。在野生型小鼠中，小鼠替代物mab2单剂量10mg/kg之后的平均cmax是82.9μg/ml(表2)；假定剂量比例性，3mg/kg剂量等同于25μg/ml。归因于ada形成的可能影响，这种较高的cmax是在携带mc38肿瘤的小鼠中以3mg/kg剂量第一次给药之后实现。[0263]1.3.2非人灵长类[0264]在三个独立研究中表征fs118在nhp中的药代动力学-药效动力学行为：在(i)单剂量(4mg/kg)pk研究、(ii)非glpdrf研究(每周一次静脉内(iv)剂量10mg/kg、50mg/kg和200mg/kg，持续4周(wks))和(iii)一个4周glp毒性研究中每周二次静脉内施用(60mg/kg和200mg/kg)中静脉内施用fs118。[0265]nhp中、fs118的清除率高于预期的人igg样分子的清除率，并且在多达200mg/kg的剂量下、清除率未显示出常见的“靶向-介导”行为(即，在高暴露水平下、靶向-介导的清除饱和)。总之，在nhp研究中，在第一次给药后cmax在横跨4mg/kg-200mg/kg的剂量范围以近似剂量比例增加，并且在第一次给药后的一个剂量间隔下以及在稳定状态下、auc的略微过比例增加。在全部受测剂量水平的pk特征充分地由线性pk模型描述，这表明在给予每周二次多达200mg/kg的剂量时，清除过程不饱和。[0266]1.3.2.1fs118单剂量pk[0267]在该静脉内单剂量研究中，将4mg/kgfs118的清除率与单静脉内施用抗hpd-l1mab进行比较。注意，与fs118相比，这种抗hpd-l1mab具有相同的人igg1构架和不同的抗pd-l1fab结合部分(克隆s1)。抗hpd-l1mab在给药后第一个7天内显示常见的igg动力学，随后暴露量快速损耗，指示ada响应；相反地，fs118表现出明显更快的清除率。fs118和抗hpd-l1mab均与pd-l1结合，尽管未知结合表位的相似性。对其他mab2并未观察到这种现象，指示了mab2样式本身不是原因。反而，与抗hpd-l1mab相比，fs118的ch3结构域内容许残基的靶向变化和/或lag-3结合似乎是fs118清除率更高的原因。[0268]1.3.2.2fs118剂量范围探索(drf)研究[0269]在drf研究(每周一次静脉内(iv)给药10mg/kg、50mg/kg和200mg/kg，持续4周)中，分别如实施例1.2.1和1.2.2中所述那样执行血浆fs118和血浆ada的测量。fs118的暴露量(auc)在上一次给药后降低；这种降低在10mg/kg剂量组特别明显并且指示免疫响应，这由ada的存在证实的。归因于这种免疫响应，在drf研究中，对fs118的暴露量在整个给药间隔期间、在10mg/kg和50mg/kg剂量组中并不维持，在200mg/kg剂量组中的1/3动物中也不维持。这种现象对于向nhp施用人igg并不罕见，因为nhp模型中对人igg预期的免疫原性响应。[0270]1.3.2.3fs1184周glp毒性研究[0271]由于《50mg/kg/wk重复给药之后不大可能实现暴露量维持，故在4周glp毒性研究中fs118以60mg/kg和200mg/kg每周二次静脉内给药。尽管全部治疗的动物在4周glp毒性研究中均出现ada响应，与预测的临床暴露量相比，几乎不影响fs118暴露量并且维持足够的暴露余量。[0272]重复每周二次给药之后不存在fs118明显蓄积且性别不影响fs118的pk。[0273]1.3.2.4总可溶性pd-l1(spd-l1)[0274]在如实施例1.2.3所述的drf和4周glp毒性研究中测量总spd-l1的血浆水平。如果spd-l1-fs118复合物的清除率慢于spd-l1的清除率，导致血浆中spd-l1-fs118复合物的水平升高，则捕获spd-l1指示靶标接合。尽管膜结合型pd-l1是主要的靶标，系统性总spd-l1升高可以是靶标饱和的潜在生物标记物。[0275]以10mg/kg至200mg/kg范围的剂量施用fs118后、24小时内观察到血浆总spd-l1增长≥10倍。在drf研究中，全部三个剂量组中第一次给药之后、0-96h期间总spd-l1有相似的增长轨迹；仅200mg/kg剂量组在第一给药间隔范围内总spd-l1连续增长。在这项研究中，对第一次给药后超过7天的总spd-l1增长的任何进一步分析皆因存在对fs118的ada受损。在4周glp毒性研究中实现的更高暴露水平，平均总spd-l1捕获在研究存续期间继续增长，动物间可变性巨大，尤其对于200mg/kg剂量组。直到每周二次60mg/kg或200mg/kg治疗2-4周后才观察到平台期(指示最大靶向捕获)。鉴于高的可变性，不可能得出这项研究中实现了最大靶向捕获的结论。然而，正如预期的那样，当fs118浓度跌至低于10μg/ml时，康复动物中fs118暴露量的损失明确地与spd-l1捕获的损失相关。除了在研究第22天在60mg/kg剂量组的一些动物中fs118暴露量暂时降低之外，对于60mg/kg和200mg/kg剂量组二者、血浆fs118在整个给药期间均维持高于10μg/ml，从而指示在这个阶段也维持pd-l1抑制作用。[0276]应当注意的是，当摩尔基表述时，血浆spd-l1-fs118复合物(即，总spd-l1)仅占总fs118浓度的小部分。例如，每周二次重复施用200mg/kg之后平均fs118谷浓度是220μg/ml(1.5μm)；在相同时间点平均总spd-l1浓度是约5ng/ml(0.2nm)。因此，系统性fs118-pd-l1复合物不能是fs118清除率的原因。[0277]综上所述，全部剂量水平的fs118均观察到总spd-l1快速增长，全部剂量水平间的增长率相似。关于是否已经实现最大靶向捕获，不能得出明确结论。然而，靶向接合作用可能在10mg/kgfs118以上时饱和。在恢复期结束时，总spd-l1值返回基线。动物血浆中高于10μg/ml的fs118阈值与持久增长的总spd-l1水平相关。[0278]1.4fs118和mlag-3/pd-l1的清除率的研究[0279]总体上，可获得的pk数据表明，野生型小鼠和lag-3ko小鼠中mlag-3/pd-l1mab2的清除率主要是功能pd-l1与ch3结构域中容许残基的靶向特异性变化的组合以能够结合至lag-3的结果。nhp中观察到的fs118的清除率很可能由相同机理驱动，不过不能排除源于nhp和人中更高的lag-3结合亲和力(相比小鼠)的贡献。[0280]下面总结了可能有助于这种清除率的额外因素：[0281]·fs118对fcrn显示出预期的ph-敏感性结合特征并且这个特征不受与lag-3结合的影响。[0282]·用nhp和人体组织中fs118的组织交叉反应性研究未显示任何脱靶结合，这可以解释观察到的fs118的清除率。另外，fs118未显示与密切相关靶标的任何结合。[0283]·在37℃温育长达15天时，在血清中fs118维持功能活性，这指示分解代谢不大可能是原因。[0284]·与抗cd3抗体相比，fs118和小鼠替代物mab2分别与活化的人t细胞和小鼠t细胞温育，3小时的温育时间并不导致测试样品的内化作用。这些结果指示，尽管尚未评估由其他细胞上表达的靶标所致的靶向接合和内化作用，但是不由内化作用介导fs118的清除。[0285]总体上，这些数据指示，尽管在nhp中不能排除lag-3结合作出贡献的可能性，但是fs118和小鼠替代物mab2的非可饱和清除率为pd-l1靶向驱动型并且与mab2构建体中lag-3靶向的ch3修饰相关。归因于fs118对nhppd-l1&lag-3和人pd-l1&lag-3具有相似的结合特性，因此预测人体中清除率相似。[0286]1.5人体中预测的药代动力学-药效动力学行为[0287]1.5.1nhppk模型[0288]从nhp单剂量pk研究、drf研究和glp研究pk数据(给药后0-7；参见实施例1.3.2.1-1.3.2.3)构建了描述fs118系统性暴露量的二室群体pk模型。全部pk建模、拟合和模拟均使用adapt第5版(d’argenio等人,2009)执行。[0289]每只个体动物的pk进行二室模型的初始拟合，每只动物产生四个pk参数(cl1、cl2、v1和v2)。这样做为了评估全部动物的pk是否均可以汇总在一起并且作为群体pk模型的一部分使用。[0290]依据以下假设进行群体pk拟合：每只动物的pk参数从对数正态分布抽取，由某些群体平均向量和协方差矩阵表征。这大幅度减少未知数的数目，从各个pk案例中的4×(动物数目)＝112至14(四个群体均值和4×4协方差矩阵的10个不同协方差矩阵元素)，因而显著改善已知-未知比率。[0291]图5中显示了描述fs118线性动力学的nhp和人pk模型的总体结构。该模型充分描述nhp中观察到的数据(表4)并且预测后4周glp毒性研究中重复施用之后观察到的数据；换而言之，没有证据表明fs118清除率中存在明显可饱和组分。异速地缩放这个模型以预测fs118的人体pk，对于清除率和区室间交换系数使用0.75的指数(exponent)而对于体积使用1.0的指数(表4)。由于未观察到靶向-介导动力学，故靶向结合亲和力不并入该pk模型。鉴于这些假设，预测不同剂量方案的人体fs118暴露量。使用这些参数值，在1000名人类受试者中执行pk模拟，以在首次人体内(fih)临床试验之前评估人类群体中的pk范围。这些模拟进一步预测，20mg/kg以下剂量将在体内产生远低于最高无严重中毒剂量(hnstd；参见以下实施例1.5.2)的fs118暴露水平并且因此这些剂量未表现出安全顾虑。[0292]应当注意的是，nhp中观察到的fs118清除率高于常规在nhp中观察到的单特异性抗体的清除率，但不至于高到无法排除药理学效应。[0293]表4：fs118–pk模型参数[0294][0295]体重nhp2.88kg；人类70kg[0296]数据源：[f-starstudyreport022，表7和8][0297]1.5.2最高无严重中毒剂量(hnstd)[0298]fs118在nhp4周glp毒性研究中是良好耐受的(参见实施例1.3.2.3)并且确立hnstd为200mg/kg每周二次。在体外试验中，使用以人pbmc湿法涂敷的固定样式或使用人全血样式，均未观察到fs118相关的细胞因子升高。另外，未在nhp4周glp毒性研究中观察到fs118治疗相关的血清细胞因子组(il-2、il-6、il-8、il-10、ifn-γ和tnf-α)升高。[0299]对于晚期癌症患者的fih研究而言，ichs9指南(ichs9)推荐初始临床剂量为hnstd的1/6(表5)；然而，来自美国食品药品监督管理局(fda)的最新出版物建议，该剂量可能对免疫-肿瘤学药物不合适并且应当考虑与靶标占有率(targetoccupancy)和功能活性有关的额外因素(saber等人,2016)。[0300]将提议的800μg提升至20mg/kg(每周给药)的fih起始固定剂量(参见实施例1.5.3.1)至少比hnstd低10倍，远低于推荐的ichs9指南。[0301]表5：fda指南：s9非临床评估抗癌药物[0302][0303]*-ichs9(fda行业指南，2010年3月)[0304]1.5.3fih研究设计[0305]将首次人体内(fih)研究(实施例2)设计为开放标记的、多剂量、剂量递增和队列扩大研究。决定在诊断患有晚期肿瘤的成人患者中实施研究，以表征fs118的安全性、耐受性、药代动力学(pk)和活性。进一步决定将按加速滴定设计(其中将评估单名患者队列)招募初始患者，随后进行3 3增长剂量递增设计(图6)。该研究设计为系统地评估安全性和耐受性、及确认患有晚期肿瘤的患者中fs118的最大耐受剂量(mtd)和/或ii期推荐剂量(recommendedphase2dose，rp2d)。rp2d定义为具有可接受毒性的最大生物有效剂量。[0306]选定起始剂量与最高剂量之间的剂量增量以允许安全的剂量递增，并且该剂量增量由pk建模指导以捕获足够的fs118剂量-暴露量关系。决定使用测量游离fs118(lag-3捕获/pd-l1检测样式)的验证gyros试验来评估人体中的pk，并且确保pk数据在患者间剂量递增阶段结束时将可用的，以允许评估与预测的人pk相比的剂量-暴露量关系。还决定测量总血浆slag-3和spd-l1的增长作为靶标接合的潜在生物标记物，并且还决定评估从每3周治疗周期之后取得的样品中生成ada的潜力。[0307]1.5.3.1论证fih起始剂量和剂量递增策略[0308]为临床测试设定可接受的起始剂量时，重要的是考虑相似分子的潜在药理活性以及公开可用的临床经验(saber等人,2016)。基于全部可用数据，提出的fih起始剂量是静脉内800μg，并且提出患者内部加速剂量递增阶段，旨在安全地将fs118暴露量升高至预期有抗肿瘤功效的暴露量；最小化现在无效剂量方案的暴露量。fih研究还设计为研究在整个给药间隔期间维持靶标抑制的剂量方案的必要性。[0309]支持选定给药策略的要点如下：[0310]·来自用小鼠替代物mab2的小鼠同基因肿瘤模型中的暴露量数据表明，抗肿瘤功效不需要fs118的连续高暴露量，并且这与单特异性抗pd-l1mab形成鲜明反差。在这个肿瘤模型中，小鼠替代物mab2≥1mg/kg的剂量与抑制肿瘤进展相关，3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量具有统计显著性。图3a中显示每3天按10mg/kg施用(3剂量)抗pd-l1mab和小鼠替代物mab2的抗肿瘤功效，以及野生型非携瘤小鼠中两种分子单次给药之后的暴露量特征。尽管对抗pd-l1mab的暴露量在3天时段内维持高于100μg/ml，但对mlag-3/pd-l1的暴露量在相同的时间段跌至约10μg/ml。应当注意的是，在mc38模型中对小鼠替代物mab2的谷暴露量随时间推移而降低，可能与ada形成有关。在每3天3mg/kg小鼠替代物mab2时，第一次给药之后的估计cmax是25μg/ml并且上一次给药后的观察到的cmax是6μg/ml。[0311]·fs118在nhp4周glp毒性研究中是良好耐受的。在脑和其他组织中观察到混合的单核细胞浸润，与观察到的其他免疫检查点抑制剂类似。[0312]·体外试验中未观察到fs118相关细胞因子的增长并且nhp4周glp毒性研究中未观察到血清细胞因子水平升高。这与他免疫-肿瘤学生物治疗药一致，即，在与》90％靶标占有率相关的剂量与急性细胞因子释放综合征不相关的情况下，(herbst等人2014；heery等人2017)。[0313]·与fs118与hpd-l1的结合比较时，小鼠替代物mab2对mpd-l1的biacore结合亲和力已经显示出高约10倍。相反地，与fs118对hlag-3结合比较时，小鼠替代物mab2对mlag-3的biacore结合亲和力已经显示低约20倍。然而，当比较结合至过度表达相应靶蛋白的hek细胞的ec50值与功能性t细胞活化试验中的ec50值时，这些差异明显小得多。鉴于fs118和小鼠替代物mab2的清除率相似，在功能性pd-l1靶标结合的存在下，这些观察到的靶标结合亲和力差异不大可能影响人体中fs118pk的预测。[0314]·对免疫-肿瘤学药物的可用非临床和临床安全性数据的分析显示，基于20-80％靶标占有率和/或20-80％体外功能活性的fih剂量具有可接受的临床毒性。对于具有正常或沉默型adcc活性的抗体，高于靶标饱和的fih系统性暴露量也是可接受的(saber等人,2016)，并且应当注意的是fs118具有lala突变以降低adcc活性。在提出的800μg的起始剂量下cmax(0.26μg/ml)的系统性靶标占有率和体外功能活性(作为最大值的百分数)的估计值在35.8％与79.2％之间并且认为对fih剂量适宜。[0315]·在用次优活化(sub-optimalactivation)的人t细胞活化分析中，尽管观察到相当大的可变性，fs118刺激ifnγ产生，平均ec50为0.22μg/ml。[0316]·与对相同靶标的单特异性抗体相比，fs118显示出具有高清除率，并且机理似乎主要地由这种双特异性构建体中的pd-l1结合组分驱动，至少在小鼠中是这样。注意到fs118在野生型小鼠和lag-3ko小鼠中具有正常的igg动力学(不存在功能性pd-l1结合)，而替代物mab2在野生型小鼠和lag-3ko小鼠两者中均被迅速清除。在nhp中、剂量多达200mg/kg时清除过程未饱和，并且人体中的预测终末半衰期是3.7天(95％置信区间：0.35–10.4天)。[0317]·将nhp4周毒性研究中hnstd的稳定状态下cmax和auc(在一个7天剂量间隔下)与人体中按提议的剂量递增方案时各剂量的预测稳定状态暴露量进行比较，并且表6中显示所得的暴露量安全余量。提议的800μg的起始剂量(70kg受试者约11μg/kg)预期产生比nhp中hnstd低》15,000倍的暴露量，并且在患者内加速滴定阶段结束时，这种差异降低至》190倍。fih剂量的巨大安全余量允许fs118在人体中具有出人意料的正常igg动力学，且将继续研究的剂量递增部分之前证实fs118在人体中的pk行为。在临床中，20mg/kg/wk的剂量预期产生》10μg/ml的fs118ctrough浓度和比nhp中hnstd低10倍的暴露量(cmax和auc)。实现这个靶浓度的剂量和给药频率可以在加速剂量滴定阶段结束时来调整。[0318]表6：预测的暴露余量：fih研究[0319]预测暴露余量-人类vsnhp[0320][0321]在4wkglp毒理学研究中测试的高剂量下，预测的暴露余量，cmax和auc(稳态)与cmax和auc(0-7天，稳态)进行比较:200mg/kg/每周两次nhp(即，观察到的auc(0-tau)×2)[0322]·尽管来自nhp的证据表明血浆总spd-l1可能是靶标接合的良好生物标记物，但血浆总spd-l1未纳入pk模型中，并且将在fih研究中进行测量。小鼠同基因肿瘤模型还表明，可能不需要在贯穿每个治疗周期完全抑制pd-l1。在nhp中，≥10μg/ml的血浆fs118浓度与维持pd-l1捕获(并且通过推断，pd-l1抑制)相关，并且fih临床研究设计为探索有限时间段对pd-l1的最大抑制(cmax≥10μg/ml)和贯穿每个给药周期对pd-l1的持续抑制(ctrough≥10μg/ml)。[0323]总之，这些数据指示800μg是fs118临床测试的适当起始剂量。预测这个提议的起始剂量在1小时输注结束时产生最大浓度(cmax0.26μg/ml)，就靶标受体占有率和体外功能活性而言，这是可接受的。此外，这个cmax比与fs118mab2替代物分子的抗肿瘤功效相关的cmax低约10倍至100倍，并且比nhp中hnstd下fs118的cmax暴露量低》15,000倍；在给药间隔下auc维持相似的暴露余量(表6)。提出了患者内部剂量递增方案、以快速和安全地实现对fs118的治疗相关的暴露量，在维持安全性的情况下，使患者对亚治疗剂量的暴露量最小化。在患者内剂量递增期结束时，预期平均cmax是25μg/ml，这是在mc38肿瘤模型中与小鼠替代物mab2的抗肿瘤功效相关的暴露量范围内并且高于与nhp中维持spd-l1捕获相关的fs118暴露量(10μg/ml)。[0324]虽然非临床肿瘤功效数据表明，不需要持续抑制pd-l1，但还决定探索在fih研究期间贯穿给药间隔期维持pd-l1捕获的fs118剂量，并且≥10mg/kg/wk的fs118剂量预期产生≥10μg/ml的平均ctrough浓度。[0325]1.6总结和结论[0326]来自用小鼠替代物mab2(mlag-3/pd-l1)的小鼠同基因肿瘤模型中的暴露量数据表面，抗肿瘤功效不需要fs118的连续高暴露量，与单特异性抗pd-l1mab形成对比。在这个肿瘤模型中，小鼠替代物mab2≥1mg/kg的剂量与抑制肿瘤进展相关，3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量具有统计显著性。[0327]在功能性pd-l1结合存在下，fs118和小鼠替代物mab2两者的清除率高于标准单特异性igg样分子观察到的清除率。虽然暴露量伴随剂量递增存在略微超比例的增长，但在nhp中这个清除过程在每周二次多达200mg/kg的剂量时似乎未饱和并且由线性pk模型充分描述。也就是说，fs118未显示可饱和的靶标-介导的动力学行为，如有时靶向膜受体的igg样分子所观察到的那样。然而，这个清除过程似乎取决于mab2构建体的功能性pd-l1结合，因为在野生型小鼠和lag-3ko小鼠中观察到fs118的正常igg动力学(在小鼠中fs118缺少显著的pd-l1结合)。[0328]在nhp4周glp毒性研究中，fs118已经显示良好耐受，提供用于临床测试的足够暴露余量的剂量。预测提议的800μg的fih起始剂量在1小时输注结束时产生0.26μg/ml的最大浓度(cmax)，该浓度比与小鼠替代物mab2分子的抗肿瘤功效相关的cmax低约10倍，并且比nhp中hnstd下fs118的cmax暴露量低》15,000倍。在给药间隔下auc维持相似的暴露余量。[0329]血浆总spd-l1已经显示是nhp中pd-l1靶向接合的有用的生物标记物。在nhp中，≥10μg/ml的血浆fs118浓度与维持pd-l1捕获(并且通过推断，pd-l1抑制)相关，并且fih临床研究设计为探索有限时间段对pd-l1的最大抑制(fs118cmax≥10μg/ml)和贯穿每个给药周期对pd-l1的持续抑制(fs118ctrough≥10μg/ml)。剂量递增策略设计为患者内加速剂量滴定阶段(按1mg/kg/wkfs118)结束时实现约10μg/ml的cmax并且随后探索在给药间隔内维持fs118≥10μg/ml的更高暴露量水平。10mg/kg/wk和20mg/kg/wk的剂量被预测在整个剂量间隔期间实现》10μg/ml的fs118平均血浆浓度。[0330]实施例2：lag-3/pd-l1双特异性抗体fs118在既往含pd-1/pd-l1的疗法之时或之后出现进展的晚期恶性肿瘤患者中安全性、耐受性、药代动力学和活性的i期、开放标记的、剂量递增和队列扩大首次人体内研究[0331]2.1研究设计与参数[0332]在诊断患有晚期肿瘤的成人患者中进行研究，以表征fs118的安全性、耐受性、药代动力学(pk)和活性。用加速滴定设计(在此期间评估单名患者队列)，随后用3 3增长剂量递增设计开始该i期、多中心、开放标记的、多剂量、首次人体内研究。该研究设计为系统地评估安全性和耐受性、及确认患有晚期肿瘤的患者中fs118的最大耐受剂量(mtd)和/或ii期推荐剂量(rp2d)。rp2d定义为具有可接受毒性的最大生物有效剂量。还评估药代动力学、药效动力学、免疫原性和响应。[0333]在签署知情同意书之后，全部患者均在开始治疗前28天内经历筛选以确定合格性。患者在3周治疗周期中、每周静脉内(iv)给药，直至icpd(即，免疫确认的病情进展)(或根据用于具有淋巴瘤患者的lugano分类的病情进展)、不可接受的毒性、由患者取消同意、研究者中止患者、申办方决定终止研究或治疗、开始替代性抗癌疗法或死亡。患者在最后一次fs118给药后约28天(±7天)接受或将接受治疗结束(end-of-treatment，eot)访视，并在最后一次fs118给药后约90天(±7天)进行90天随访。对于全部患者，详实记录icpd(或根据用于具有淋巴瘤患者的lugano分类的病情进展)后，每3个月评估或将评估总生存期(overallsurvival，os)以评估存活率和研究后施用的癌症疗法。[0334]在第1周期期间，对前5名作为单患者队列顺序登记，观察患者的剂量限制性毒性(dlt)。由于每个队列中未观察到没有明确归因于患者的潜在疾病、其他医学疾病或伴随药物治疗或操作的dlt或≥2级不良事件，在下一个更高剂量的队列中对新患者进行给药并且在dlt阶段观察新患者。在没有明确归因于患者的潜在疾病、其他医学疾病或伴随药物治疗或操作的dlt或≥2级不良事件的情况下、在队列5中完成第1周期之后，从队列6起以3 3设计继续剂量递增方案。如果患者耐受其初始剂量，在没有明确归因于患者的潜在性疾病、其他医学疾病或伴随药物治疗或操作的dlt或≥2级不良事件的证据的情况下患者在下一个更高剂量的队列中已经完成dlt阶段，并且安全评审委员(src)已经宣布该剂量安全，则患者内剂量递增在单名患者队列中进行。[0335]如果在任何单名患者队列中，患者在dlt阶段期间出现没有明确归因于患者的潜在疾病、其他医学疾病或伴随药物治疗或操作的≥2级不良事件，额外的2名患者将在该剂量水平入选并且使用3 3设计规则以评估，但这种情况并未发生。全部后续的队列依照3 3设计入选。如果dlt出现，队列本应扩充至6名患者，但是未观察到dlt。[0336]根据国家癌症研究所(nci)不良事件通用术语标准(ctcae)第4.03版评估毒性。[0337]主要目的[0338]这项研究的主要目标是：[0339]1.评估fs118的安全性并且确定fs118的mtd和/或rp2d，以及[0340]2.确定fs118的pk参数。[0341]次要目的[0342]这项研究的次要目的是：[0343]1.根据实体瘤疗效评估标准(responseevaluationcriteriainsolidtumours,recist)1.1或lugano分类法(如适用)，以及irecist(用于基于免疫的疗法的改良recist1.1)评估fs118抗癌活性的初步证据；以及[0344]2.表征fs118的免疫原性(抗药物抗体[adas])。[0345]探索性目的[0346]这项研究的探索性目的是表征药效动力学特征并且将潜在的初级药理学与暴露量相关联。[0347]患者群体和患者数量[0348]截至2019年5月，24名患者入选，截至2019年8月增加至40名患者并且截至2020年4月增加至43名患者。患者在美国跨4个研究中心入选。患有晚期肿瘤的患者年龄≥18岁。[0349]治疗施用[0350]将fs118作为缓慢团注、以静脉内方式向第一队进行施用并且在3周治疗周期中每周通过连续输注泵以静脉内方式向后续队进行施用，直至icpd(或根据用于具有淋巴瘤的患者的lugano分类出现病情进展)、不可接受的毒性、由患者取消同意、研究者中止患者、申办方决定终止研究或治疗、开始替代性抗癌疗法或死亡。[0351]治疗和研究持续时间[0352]如果患者完成16个周期的fs118治疗(或12个月)，或如果患者出现了确认的病情进展，则认定他们已经完成治疗。在全部入选本研究的患者已经有机会完成16个用fs118治疗周期并且在在最后一次研究药物施用后追踪90天之后，将执行主要终点的最终分析并编纂单个最终临床研究报告。研究完成的估计时间期限是36个月。[0353]合格性标准[0354]每名入选的患者须符合全部以下进一步的要求以符合入选本研究的资格：[0355]1.对于剂量递增而言：患有在抗程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)疗法或抗程序性死亡-配体1(pd-l1)疗法中或之后的情况下进展的组织学确认、局部晚期、不可切除的或转移性实体瘤或血液恶性肿瘤的患者，该患者没有可用的有效标准疗法或标准疗法已经对其失效；[0356]2.对于剂量扩大而言：在抗pd-1或pd-l1疗法中或之后的情况下患有进展的组织学确认、局部晚期、不可切除的或转移性宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌、头颈部鳞状细胞癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、三阴性乳腺癌或非霍奇金或霍奇金淋巴瘤的患者，该患者没有可用的有效标准疗法或标准疗法已经失效；[0357]3.既往含pd-1或pd-l1的方案的最短治疗持续时间是12周(或等同于2次响应评估)；[0358]4.可测量病情(定义为中枢神经系统[cns]外部至少1个可测量病灶)，如由研究者使用recist1.1或lugano分类法(如适用)所确定的；[0359]5.美国东部肿瘤协作组体能状态(easterncooperativeoncologygroup,ecog)≤1[0360]6.估计的预期寿命为至少3个月；[0361]7.患者同意进行肿瘤的治疗前和治疗中活检且研究者没有判定活检为高风险。对于单名患者队列的患者，可用的基线肿瘤样品包括新获得的肿瘤活检样品和/或来自初始诊断的归档组织样品(《6月龄)(如果可用)；[0362]8.如果存在受孕风险，男性和女性患者的高效的避孕措施(即，失败率小于每年1％的方法)。在首次研究治疗施用之前28天、研究治疗期间及停止研究治疗之后至少60天必须使用高效的避孕措施。若女性患者在本人或其伴侣参与这项研究之时已经怀孕或疑似怀孕，将立即告知治疗医生和申办方(或委派人员)；以及[0363]9.愿意且能够提供书面知情同意书[0364]筛查时满足以下标准之任一者的患者不符合进入研究的资格：[0365]1.在第一次研究药物给药的28天或5个半衰期(以较短者为准)以内接受系统性抗癌化学疗法、接受用多于1种并非医护标准的免疫检查点抑制剂(例外是获批适应症作为某种联用)的既往治疗、或接受用淋巴细胞活化基因3(lag-3)抑制剂或多特异性免疫检查点抑制剂分子的既往治疗；[0366]2.患者在先前2年内具有需要治疗的活动性自身免疫疾病及患者具有的任何自身免疫疾病史的记录史。注意：这包括具有以下病史的患者：炎症性肠病、溃疡性结肠炎和克罗恩(crohn)病、类风湿性关节炎、系统性性进展性硬化(硬皮病)、系统性红斑狼疮、自身免疫性血管炎(例如，韦格纳(wegener)肉芽肿)、视为有自身免疫起源的cns或运动神经病(例如，格林-巴利(guillainbarré)综合征、重症肌无力、多发性硬化症)和中度或重度银屑病。然而，在研究医学监查员的批准下允许具有以下疾病的患者入选：稳定响应至少6个月且没有可能与皮质类固醇类联合治疗免疫相关性不良事件禁忌的类风湿性关节炎或银屑病、白斑症、斯耶格伦综合征、间质性膀胱炎、格夫雷斯氏(grave’s)病或桥本氏(hashimoto’s)病，或激素替代时稳定的甲状腺功能减退症；[0367]3.非受控的并发疾病史，包括但不限于：[0368]ο用标准疗法治疗的非受控的高血压的纪录史(未稳定化至150/90mmhg或更低)，或[0369]ο非受控的糖尿病的纪录史。注意：可能考虑在胰岛素稳定替代疗法下控制良好糖尿病至少6个月且没有可能与皮质类固醇类联合治疗免疫相关性不良事件禁忌的患者；[0370]4.已知的感染：[0371]ο人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒(hbv)(即，乙型肝炎表面抗原)或丙型肝炎病毒(hcv)(即，可检出的hcv核糖核酸[rna])。注意：可能考虑具有既往已治疗hbv感染史的抗原阴性患者或具有既往已治疗hbv感染史的hcvrna不可检出患者；或[0372]ο活动性感染(包括病毒滴度为阳性的无症状感染和研究者判断病症可能随研究治疗加重或病症将会损害/禁止患者参与研究)；[0373]5.未控制的cns转移灶、原发性cns肿瘤或具有以cns转移灶作为唯一可测量病情的实体瘤。有活动性疾病但cns疾病稳定的患者可以入选；[0374]6.用既往含pd-1/pd-l1的治疗时活动性间质性肺病或肺炎、脑炎、癫痫发作、重度免疫相关性不良事件(即，肺炎、肝炎、结肠炎、垂体炎、胰腺炎、心肌炎、cns或眼炎)的既往史或前述病症、其他免疫刺激性抗癌药既往治疗时重度或危及生命的皮肤不良反应史；[0375]7.使用免疫抑制剂、需要免疫抑制的既往器官移植、对单克隆抗体或其辅料有超敏反应或不耐受，或与既往疗法有关的》1级ncictcaev4.03的持续毒性，例外如下：[0376]ο全部等级脱发均可接受；[0377]ο替代疗法时的内分泌功能障碍是可接受的(包括接受激素替代疗法时稳定的垂体炎)；[0378]ο非系统性类固醇；允许局部用、眼内、鼻内、关节内或吸入性类固醇；[0379]ο允许在肾上腺功能减退患者以等于或低于10mg/天泼尼松当量的系统性类固醇替代治疗；并且[0380]ο应与医学监查员和/或申办方讨论入选以等于或低于10mg/天泼尼松当量的系统性类固醇治疗作为其姑息治疗或症状性病情控制的一部分的患者；[0381]8.明显的心脏异常，包括以下病史：长qtc综合征和/或起搏器、脑血管意外/卒中(入选前《6个月)、心肌梗死(入选前《6个月)、不稳定型心绞痛、充血性心力衰竭(纽约心脏学会分类法≥ii类)或用药物尚未控制至少6个月的有临床意义和有症状的心律失常；[0382]9.用以下标准筛选实验室值(使用ncictcae4.03版)：[0383]ο血红蛋白《9.0g/dl(5.7μmol/l)；[0384]ο中性粒细胞绝对计数(anc)《1.0×109/l；[0385]ο血小板《100×109/l；[0386]ο血清肌酐》1.5×正常值上限(uln)；[0387]ο总胆红素》1.5×uln；或天冬氨酸氨基转移酶(ast)和丙氨酸氨基转移酶(alt)》2.5×uln(如果肝转移，≥5×uln)；或[0388]10.根据研究者判断，不耐受研究用产品或其辅料，或将严重损害和/或禁止患者参与研究的任何病症。[0389]评估和分析的主要标准[0390]这项研究的主要终点是：[0391]·不良事件的发生率、严重程度和持续时间；和[0392]·pk参数，包括最大观察浓度(cmax)、至cmax的时间(tmax)、观察血清谷浓度(ctrough)、终末清除半衰期(t1/2)、1个给药间隔内的浓度-时间曲线下面积(auc)[auc(tau)]、给药间隔内的平均浓度[auc(tau)/τ]、系统清除率(cl)、稳定状态分布体积(vss)和从第一次给药至稳定状态的蓄积率。[0393]这项研究的次要终点是：[0394]·如依据recist1.1或lugano分类法(如适用)和irecist所评估的响应。这些响应已经用来确定病情控制率(dcr)、客观响应率(orr)、响应持续时间(dor)和无进展存活率(pfs)/ipfs。还将评估总体生率；以及[0395]·fs118免疫原性的发生率，包括ada检测和分析。[0396]这项研究的探索性终点包括：[0397]·依据外周血单核细胞流式细胞术，cd3 、cd4 和cd8 t细胞群体中pd-l1和lag-3受体占有率的百分数；[0398]·可溶性pd-l1和lag-3定量。[0399]统计注意事项[0400]对全部入选患者、患者分配情况被制表。使用用于安全分析集的描述性统计量来总结人口统计数据和基线数据(即，年龄、性别、人种、族裔、高度和体重)和疾病史和特征。[0401]已经使用功效分析集(efficacyanalysisset)执行了功效分析。已经使用根据recist1.1标准或lugano分类法(如适用)和根据irecist标准的肿瘤响应数据。对于orr和dcr，已经/将提供点估计值和95％精确置信区间。响应情况未知或遗失的患者将作为无响应者对待(即计算百分数时，他们将会纳入分母)。[0402]已经根据recist1.1标准或lugano分类法(如适用)和根据irecist标准确定最佳总体响应。[0403]时间-至-事件变量，包括治愈持续时间、dor、pfs、ipfs和os已经/将使用kaplan-meier法进行描述性概述。对时间-至-事件变量的审查方法将在统计分析计划中进行描述。将生成时间-至-事件变量的kaplan-meier曲线。[0404]pk分析集已经用于概述全部pk数据。已经以图形方式展示了血清浓度对时间曲线，以及(在必要时)每名患者和按计量队列在剂量间隔范围内的非参数性参量cmax、tmax、ctrough和auc的表格概述。若适宜，使用从浓度和时间曲线的终末阶段无限外推并且允许导出血清t1/2、cl和vss，已经计算出总auc。[0405]药效动力学分析集已经用于药效动力学分析。[0406]研究期间已经概述了fs118ada阳性的患者比例以及中和性(neutralizing)fs118ada阳性的患者比例。已经进行fs118ada滴度和pk的相关性分析。[0407]安全性特征已经以不良事件(包括dlt和严重不良事件)、体检结果(包括ecog体能状态)、生命体征量值、标准临床实验室量值和心电图记录为基础。[0408]样本量论证[0409]截至2019年5月，24名患者入选，截至2019年8月增加至40名患者并且截至2020年4月增加至43名患者。加速滴定部分由最少5名患者构成，并且该研究的3 3增长剂量递增部分由每剂量水平3至6名患者构成。可以出于安全原因(多达3名患者)、为了富集pk和/或药效动力学(多达10名患者)和为了进一步表征rp2d水平处或之前的临床疗效(多达24名患者)而扩大了队列。依据实用的注意事项已经确定该研究的样本量。尚未进行正式统计评估。[0410]2.2期中结果(2019年5月)[0411]2.2.1期中临床数据[0412]截至2019年5月，已经完成加速滴定设计(800μg、2400μg、0.1mg/kg、0.3mg/kg和1.0mg/kg的剂量)的单名患者队列。在i期研究的3 3增长剂量递增设计部分中，已经完成3mg/kg剂量水平给药并且正在进行10mg/kg和20mg/kg剂量水平给药。已经扩大两个队列(3位受试者为1mg/kg；10位受试者为3mg/kg)。[0413]截至2019年5月入选i期研究的24名患者当中，8名患者正进行有效治疗。16名患者停止治疗，4名患者归因于icpd，2名患者归因于recist1.1病情进展，和10名患者归因于其他注意事项：tbc/临床pd/pi决定。[0414]该研究的i期期间直至2019年5月观察到的治疗期间发生的不良事件当中，20％事件评定为与fs118有关，均为轻度至中度。观察到的10例严重不良事件当中，无一与fs118有关。在测试的任一剂量均未观察到dlt。这证明多达20mg/kg的剂量良好耐受并且fs118的安全性特性与其他免疫检查点阻断剂一致。[0415]用fs118治疗的持续时间持续了平均9.2周＝3个周期(0-24周)。对于14名受试者，报告至少1个“研究中”的扫描。这14名患者当中，5名出现病情稳定并且9名出现病情进展。尽管确定功效不是i期研究的主要目标，但患者在fs118治疗上花费的平均时间和研究中扫描显示了14名患者中5人疾病稳定的事实，证明了fs118能够稳定病情，并且因此fs118具有抑制人类患者中肿瘤生长的潜力。在评估这个数据时，应当谨记，入选i期研究的患者均患晚期恶性肿瘤并且可能已经受损过甚，以至于不能够从fs118治疗获益。受损较轻的癌症患者的治疗，如可能在ii期研究中研究那样，可能显示甚至更高的fs118功效。[0416]2.2.2期中药代动力学/药效动力学数据[0417]对跨首次7个队列(800μg、2400μg、0.1mg/kg/q1wk、0.3mg/kg/q1wk、1mg/kg/q1wk、3mg/kg/q1wk、10mg/kg/q1wk的剂量)的20名患者进行药代动力学/药效动力学分析，测量pk和药效动力学(血液中lag-3或pd-l1受体的fs118接合[可溶性或t细胞表达的])。仅对一名来自20mg/kg/q1wk剂量队列患者进行pk分析。[0418]2.2.2.1pk分析[0419]对于pk分析，使用验证配体结合试验测量血清fs118水平，该试验用生物素酰化lag-3捕获和alexa647-标记pd-l1检测的gyros平台。简而言之，将血清样品在rexxiphn中稀释至最低要求稀释度(mrd)1:10并添加至板，随后将板连同bioaffy1000cd(s)一起装载至gyrolabxp工作站上。通过荧光发射检测fs118。使用响应作为gyrolab评价应用程序中的加权因子(1/y2)的5参数对数曲线回归标准曲线。验证试验的lloq为100ng/ml。[0420]结果显示，横跨7个队列(800μg、2400μg、0.1mg/kg/q1wk、0.3mg/kg/q1wk、1mg/kg/q1wk、3mg/kg/q1wk、10mg/kg/q1wk的剂量)，随着剂量增长，暴露量呈剂量线性增长(cmax、auc)。cmax与来自非人灵长类的比例近似，但清除率高于预测(auc比预测低30％)。暴露量(cmax)存在线性增长并且每周给药剂量达3mg/kg时无fs118的蓄积。在3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg队列中一些受试者具有可测量的ctroughfs118浓度。对于剂量《1mg/kg的全部患者而言，给药后7天(在下一次输注之前)的血清fs118浓度低于100ng/ml(lloq)。[0421]2.2.2.2可溶性lag-3[0422]在饱和量的fs118存在下，使用验证酶联免疫测定(elisa)定量血清总slag-3。简而言之，用涂敷抗lag-3单克隆抗体的板捕获血清样品中的slag-3(非竞争性结合)。体外添加fs118以饱和slag-3的结合。用针对与slag-3受体接合的fs118fcab结构域的、生物素酰化的抗独特型抗体检出捕获的slag-3:fs118复合物，随后添加链霉亲和素缀合的hrp和生色原。验证试验的lloq为0.675ng/ml。[0423]分析1mg/kg/q1wk、3mg/kg/q1wk和10mg/kg/q1wk剂量水平下的可溶性lag-3(slag-3)，显示第1周期和第2周期的第一次给药后总slag-3升高大约10倍，在给药后2-3天cmax到达最高值。[0424]slag-3水平升高证实受体的fs118接合。在1mg/kg剂量水平，总slag-3浓度在下一次给药(第1周期第8天；c1d8)之前返回基线值。在3mg/kg/q1wk和10mg/kg/q1wk队列，存在下一次给药之前总slag-3积累(谷浓度)的一些证据。3mg/kg和10mg/kg剂量下总可溶性lag-3增长的程度和持续时间建议用fs118捕获可溶性lag-3几乎已经饱和。[0425]2.2.2.3可溶性pd-l1[0426]在饱和量的fs118存在下，使用meso-scalediscovery免疫试验定量血浆总可溶性pd-l1(spd-l1)。该试验的lloq为0.458ng/ml。结果显示每次给药之后总可溶性pd-l1(spd-l1)暂时升高的早期证据，不过这个结果在全部患者之间不一致并且许多患者具有低于试验定量水平的基线浓度。[0427]2.2.2.4pd-l1和lag-3受体占有率[0428]在全血t细胞和单核细胞中测量pd-l1和lag-3受体占有率。简而言之，该方法包括在cyto-管中收集全血，储存在4℃直至处理(每次试验100μl)。首先，在室温用5μl人bdfc阻断溶液阻断非特异性结合10分钟。随后将样品用三组(游离受体、总受体和fmo/同种型)抗体混合物(50μl)之一染色并且在室温温育30分钟，随后在室温用900μlbdfacs裂解溶液裂解红细胞并固定10分钟。随后用2％fbs洗涤样品两次，之后在细胞计(lsrfortessa)上采集。使用以下公式计算受体占有率(假设：pd-l1或lag-3靶标表达水平在研究时间范围内保持不变)：[0429][0430]c-来自同种型游离靶标(竞争性)mab的中位荧光强度(mdfi)[0431]d-来自游离靶标(竞争性)mab的mdfi[0432]c0，d0：来自药物施用前样品的mdfi值[0433]ct，dt：给定时间点处从药物施用后样品的mdfi[0434]总体上，与pd-l1表达比较时，lag-3的表达低40倍至130倍并且估计的受体占有率可变性相当高(cv一般》50％)。在第一次给药之后3小时，3mg/kg和10mg/kg剂量队列的平均pd-l1受体占有率分别是49％和54％，并且pd-l1受体占有率和血清fs118浓度之间不存在明显关系。类似地，在第一次给药之后3小时，3mg/kg和10mg/kg剂量队列的平均lag-3受体占有率分别是23％和32％，并且lag-3受体占有率和血清fs118浓度之间不存在明显关系。紧邻第二次给药之前，与给药后3小时时间点比较时，pd-l1和lag-3受体占有率较低。[0435]对于pk值低于定量水平或十分低的3mg/kg/q1wk、10mg/kg/q1wk和20mg/kg/q1wk队列，在ctrough水平的一些患者的血液中总slag-3和spd-l1和lag-3t细胞受体占有率的累积提供了ctrough水平时药效动力学反应持久的证据，因此出乎意料地显示，人类患者中的药效动力学效果无需整个给药间隔期间fs118暴露。[0436]以上结果表明，与具有小鼠替代物抗lag3/pd-l1抗体的小鼠中观察到的结果相反，人体中fs118的清除率主要为lag-3介导，更具体地为膜lag-3介导，因为发现与fs118复合的slag-3的清除率低于fs118的清除率。[0437]2.2.3结论[0438]截至2019年5月从i期研究可获得的期中结果证明，fs118是良好耐受的并且最大观察浓度(cmax)与预测自食蟹猴研究的cmax一致，但是fs118的清除率出乎意料地高于预测。这最初建议，人体中可能需要更高剂量的fs118，不过尽管清除率更快，在较低测试剂量观察到持久药效动力学反应，这指示治疗功效。[0439]具体而言，获得的结果显示，在每周施用的剂量为3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg时，fs118能够诱导可溶性lag-3(slag-3)水平持久升高，以及持久的lag-3受体占有率。slag3水平已经显示与小鼠中的治疗功效相关。这些期中结果还建议在fs118治疗之后spd-l1水平升高。[0440]2.3期中数据(2019年8月)[0441]2.3.1期中临床数据(2019年8月)[0442]截至2019年8月，另外16名患者已经入选i期研究。因此，总计40名患者已经入选。这40名患者当中，16人正积极进行治疗。剩余的24名患者停止治疗：11名患者归因于icpd，3名患者归因于非相关的不良事件，8名患者归因于医生决定或病情进展的临床体征，并且2名患者归因于其他注意事项。[0443]每周一次的fs118给药是良好耐受的，多达20mg/kg，并且在第1周期或后续周期中未观察到剂量限制毒性(dlt)。在62.5％患者中观察到研究相关性治疗期间发生的不良事件(teae)。这些事件均认定不是治疗期间发生的严重不良事件(te-seaes)；基于升高的氨基转移酶水平，认定2例是3级teae。这后2例由该试验的安全委员会评审，该委员会认定升高的水平并没有明显的临床影响并且将升高的水平划归为非限制性毒性。未观察到teae与fs118治疗之间明显的剂量关系。未观察到与fs118相关的死亡或te-sae。[0444]在接受3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg的队列的32名受试者中22人具有可评估的肿瘤扫描。这22名患者当中，基于最佳总体响应(bor和ibor)，11人出现某种病情稳定并且11出现病情进展。这代表34.4％的病情控制率(dcr)。[0445]例如，表7(下文)中的全部患者在正在进行的试验期间表现出一些病情稳定并且保持参与研究至少10周。[0446]表7：表现出某种病情稳定并且保持参与研究至少10周的患者[0447][0448][0449]*nsclc-非小细胞肺癌；h&n–头颈癌；crc–结直肠癌[0450]**研究截至2019年8月正在进行[0451]具体而言，受试者1004-0001(患有nsclc)出现病情稳定(recist1.1最佳响应)并且显示28.13％的最佳肿瘤减小(以直径总和计(sod)的从基线变化)，这是在fs118给药后第8周和第16周观察到的，在第24周略微减少至25％肿瘤减小。因此，基于这名具体患者的靶标病灶的测量，这名具体患者出现近乎部分响应。[0452]这些结果因此表明，fs118能够使病情稳定，谨记患者群体包括多个不同类型的癌症，全部患者均患晚期恶性肿瘤，在进入试验之前已经出现多种替代治疗方案失败并且一些患者可能已经过度受损，以至于不能够从fs118治疗获益。[0453]2.3.2期中药代动力学/药效动力学数据[0454]截至2019年8月，已经对跨8个队列(800μg、2400μg、0.1、0.3、1、3、10和20mg/kg/q1wk剂量)的多达29名患者执行药代动力学/药效动力学的分析。如实施例2.2.2中所描述的，测量了游离fs118血清浓度与可溶性lag-3浓度。另外，测量了血液中增殖性(ki67 )和总效应子记忆性或中央记忆性cd4 和cd8 t细胞的频率，计数了免疫细胞亚类以及对fs118第一次给药之前和之后肿瘤组织中的lag-3和pd-l1表达定量。[0455]2.3.2.1pk分析[0456]根据2019年5月结果(参见实施例2.2.2.1)，对另外9名患者(包括20mg/kg每周给药(q1w)队列中的患者)中的游离fs118血清浓度水平进行定量。使用实施例2.2.2.1中所述的验证配体结合性试验，定量了游离fs118血清浓度水平。[0457]对第1治疗周期和第2治疗周期(每个周期3周)开始之后第一周内游离fs118血清pk特征的分析显示，横跨接受800μg、2400μg、0.1mg/kgq1w、0.3mg/kgq1w、1mg/kgq1w、3mg/kgq1w或10mg/kgq1w的患者队列，暴露量(cmax、auc)呈剂量线性增长。继续进行接受20mg/kg的患者的样品的pk分析。cmax和auc的估计值在每个患者队列内部的第1周期与第2周期的pk特征之间是类似的，这指示低的抗药物抗体(ada)响应、低的ada-介导的fs118加速清除或fs118不存在。[0458]如2019年5月结果中所见的，cmax与来自非人灵长类的比例近似，但清除率高于预测(auc比预测低30％)。来自1室建模、依据可获得的i期研究数据拟合的游离fs118终末清除半衰期(t1/2)估计是19.6小时。[0459]在给药开始(在第1周期和第2周期中)之后一周和在下一次给药fs118之前，对于接受≤1mg/kg的患者，血清中游离fs118的ctrough水平低于试验的定量下限(lloq)，这表明在《1mg/kgq1w剂量方案时，血液中缺少游离fs118积累。在给药后第7天，3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg队列中一些受试者具有约0.1至10μg/ml范围内的可定量的游离fs118ctrough水平。[0460]2.3.2.2可溶性lag-3[0461]根据2019年5月结果(参见实施例2.2.2.2)，对另外9名患者(包括20mg/kg每周给药(q1w)队列中的患者)中的血清总可溶性lag-3(slag-3)水平进行定量。使用实施例2.2.2.2中所述的验证elisa，定量了血清总可溶性lag-3(slag-3)水平。[0462]与2019年5月期中结果一致，分析显示血清总slag-3的剂量依赖性升高。更具体而言，接受1mg/kg/q1wk、3mg/kg/q1wk、10mg/kg/q1wk或20mg/kg/q1wk剂量水平的患者显示在第1周期和第2周期的第一次给药后总slag-3升高大约10至150倍增加，在大约给药后2-3天观察到达到最大浓度的时间(tmax)。在1mg/kg剂量水平，总slag-3浓度在下一次给药(c1d8)之前返回基线值。在3mg/kg/q1wk、10mg/kg/q1wk和20mg/kg/q1wk队列，存在下一次给药之前总slag-3积累(谷浓度)的某种证据；这进一步得到佐证，即，与第1周期相比，在第2周期中观察更高水平的slag-3。进一步开展2019年5月分析，10mg/kg和20mg/kg剂量时总可溶性lag-3升高的程度和持续时间特别表明，在这些计量水平下用fs118捕获的可溶性lag-3几乎已经实现饱和。然而，对于20mg/kg患者队列，需要额外的患者以确认这个明显的观察结果。[0463]使用这种数据，一室建模估计slag-3:fs118复合物的终末清除半衰期(t1/2)为15.8天。游离slag-3的估计终末t1/2是1.6小时。观察到fs118pk和slag-3数据的群体分析和个体分析、与药代动力学/药效动力学建模的数据高度相关。这证实不存在ada干扰作用和ada介导的fs118加速清除。[0464]总之，这项分析显示，fs118给药之后总slag-3水平的剂量依赖性升高可以用作fs118接合靶lag-3受体的药效动力学标志物。这项研究结果支持提议的fs118作用机理，其中与靶细胞表面上表达的lag-3受体结合的fs118潜在地通过细胞表面表达的lag-3脱落(shed)，导致系统性可溶性lag-3水平升高。[0465]2.3.2.3血液中增殖性和总效应子和中央记忆性cd4 和cd8 t细胞的频率[0466]随时间推移通过流式细胞分析监测血液中增殖性ki67 cd4 和ki67 cd8 效应子记忆性和中央记忆性t细胞的频率。简而言之，在cyto-中收集全血并且冷藏储存直至处理为止。每次测试使用100μl的每份样品。首先，用人bdfc阻断溶液阻断非特异性结合。随后将样品用表面抗体混合物(50μl)染色，随后用bdfacs裂解溶液裂解红细胞并固定。洗过的细胞用fix/perm缓冲液透化，随后用1xperm缓冲液洗涤两次。添加胞内抗体混合物(50μl)并且在2-8℃温育30分钟。随后将细胞用2％fbs洗涤两次并转移至trucount管以便在细胞计(bdlsr)上采集。[0467]确定cd4 或cd8 中央记忆性t细胞(分别由cd45 cd3 cd19negcd4 或cd8 限定，cd45ranegccr7pos表达)或cd4 或cd8 效应子记忆性t细胞(分别由cd45 cd3 cd19negcd4 或cd8 限定，cd45ranegccr7neg)的频率。另外，确定cd4 或cd8 效应子或中央记忆性t细胞群体内ki67 细胞的频率。对来自3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg患者队列的可用数据分析显示，在第1周期中给药之后、相对于基线测量值，fs118能够诱导增殖性ki67 cd4 和ki67 cd8 效应子记忆性和中央记忆性t细胞的频率升高。这种外周药效动力学响应的动力学和瞬时性能指示t细胞活化，与用临床前数据所观察到的情况一致。[0468]在上文描述的相同流式细胞分析中，随时间推移进行血液中免疫细胞亚类的计数。初始数据显示fs118给药导致cd3 、cd4 、cd8 t细胞和nk细胞的绝对数升高。响应动力学是瞬时的，类似于血液中增殖性效应子或中央记忆性cd4 和cd8 t细胞的频率所观察到的药效动力学效应。在4名分别患有间皮瘤、宫颈癌、甲状腺未分化癌和喉癌的患者中特别观察到这种情况。总之，初步数据表明fs118可以在患者中激发系统性免疫活化响应。[0469]2.3.2.4肿瘤中的pd-l1和lag-3表达[0470]小鼠肿瘤模型中的临床前的研究先前已经显示，mlag-3/mpd-l1双特异性抗体可以在表达lag-3的肿瘤浸润性淋巴细胞(tils)上诱导lag-3抑制作用，而用包含与替代物mlag-3/mpd-l1双特异性抗体相同的mlag-3结合位点和mpd-l1结合位点的两种抗体分子治疗小鼠时，lag-3表达增加(p2399alag-3/pd-l1mab2canovercomepd-l1-mediatedcompensatoryupregulationoflag-3inducedbysingle-agentcheckpointblockade(一种可以克服pd-l1介导的、由单一药物检查点阻断诱导的lag-3代偿性上调的lag-3/pd-l1mab2)，faroudi等人,americanassociationforcancerresearch(aacr)annualmeeting2019,29march-03april2019,atlanta,georgia,usa(美国癌症研究协会(aacr)2019年3月29日–2019年4月3日年度会议，美国佐治亚州亚特兰大市))。[0471]为了在fs118(这是一种双特异性hpd-l1/hlag-3抗体)背景下研究这种潜在效应，从给药之前(范围从第-3天至第-12天)和给药之后(范围从第19天至第41天)的患者获得成对的肿瘤样品(n＝4)。分别使用体外诊断(ivd)抗pd-l1(克隆sp263)试验(rochediagnostics/ventanamedicalsystems)和验证抗lag-3(克隆17b4)免疫组织化学(ihc)试验(ventanabenchmarkultra染色平台)，评估福尔马林固定的和石蜡包埋(ffpe)的肿瘤芯针活检样品中的pd-l1和lag-3表达。为了ihc染色后的后续评估，应用≥100个肿瘤细胞和》25％肿瘤含量的选择标准。评估包括在以下室：肿瘤内基质、上皮内肿瘤组分或瘤周区域(酌情)中，基于肿瘤细胞的膜抗pd-l1染色的百分数和强度来确定肿瘤阳性评分百分数(％tps)，以及在多达5个高倍视野内对pd-l1 或lag-3 免疫细胞进行定量。[0472]总之，该研究中在该点的初步结果显示在fs118给药后、肿瘤中没有pd-l1或lag-3表达代偿性上调的迹象。[0473]2.3.3结论[0474]截至2019年8月可获得的期中结果支持在2019年5月观察到的结论(参见实施例2.2.3)。简而言之，fs118是良好耐受的并且最大观察浓度(cmax)与预测自食蟹猴研究的cmax一致。fs118的清除率出乎意料地高于预测，但在测试剂量观察到持久药效动力学响应，这指示治疗功效。实际上，截至2019年8月，观察到11名患者已经出现一些病情稳定，代表34.4％的病情控制率(dcr)。这些结果证明，fs118能够使病情稳定，谨记患者群体包括多个不同类型的癌症，全部患者均患晚期恶性肿瘤，在进入试验之前已经出现多种替代治疗方案失败并且没有其他可用的治疗选项，并且一些患者可能已经过度受损，以至于不能够从fs118治疗获益。[0475]在进一步支持中，2019年8月结果显示，每周一次以3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的剂量施用时，fs118能够诱导可溶性lag-3(slag-3)水平持久升高。slag3水平已经显示与小鼠中的治疗功效相关联。[0476]另外，fs118在3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg患者队列中已经显示诱导表示t细胞活化的动力学和瞬时外周药效动力学响应。另外，cd4 和cd8 中央记忆性和效应子t细胞在ctrough水平上的增长升高为ctrough水平时持久药效动力学响应提供了进一步证据，并且不存在fs118给药之后肿瘤中pd-l1或lag-3表达代偿性上调的迹象，这与假设的fs118作用机理一致。[0477]2.4期中数据(2020年4月)[0478]2.4.1期中临床数据(2020年4月)[0479]截至2020年4月，另外3名患者已经入选本研究。因此，总计43名患者入选。这43名患者当中，2位患者人积极进行治疗。剩余的41名患者已经完成/停止治疗：14名患者归因于icpd，4名患者归因于非相关的不良事件，10名患者归因于医生决定或病情进展的临床体征，并且10名患者归因于其他注意事项。这41名患者当中，对14人进行随访并且27人已经完成研究。[0480]关于3名入选本研究的患者，每周一次以20mg/kg剂量水平静脉内施用fs118是良好耐受的，并且未向申办方报告剂量限制性毒性。[0481]对于全部入选研究的患者，约20％观察到的治疗期间发生的不良作用与fs118有关，严重程度大部分为轻度至中度(1或2级，不良事件通用术语标准v4.3)。大约5％的fs118相关不良事件划归为3级。没有报道与fs118有关的严重不良事件(sae)。sae定义为导致死亡、威胁生命、需要住院、给患者身体造成致障、永久性损伤或先天性异常/出生缺陷、需要干预以防止永久性损害或损伤或其他严重事件(例如，过敏性支气管痉挛)的任何不良事件。研究期间没有出现被认定为与fs118有关的死亡。总之，未确定新的安全风险。[0482]截至月2020年3月25日，3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg队列的36名受试者中30/人具有可评估的肿瘤扫描。将17名患者记录为出现病情稳定(sd)并且将13名出现病情进展(pd)的患者记录为对fs118治疗出现最佳响应(bor和ibor)。这代表47.2％的病情控制率(dcr)，与从2019年8月起12.8％的增长相对应。表8(下文)中列出17名记录为出现病情稳定的患者。[0483]表8：以每周一次3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg的剂量施用fs118时显示病情稳定为bor/ibor的17名患者[0484][0485]nsclc-非小细胞肺癌；crc–结直肠癌；cup–未知原发性癌症[0486]**研究截至2020年3月25日正在进行[0487]参与i期研究的两名剩余患者(均接受每周一次20mg/kg的剂量)当中，1名患者罹患平滑肌肉瘤(软组织肉瘤)并且截至2020年3月25日已经参与研究32周；另一位患者罹患3-6个月亚组、sd6个月 亚组和pr亚组并且基于患者已经在既往抗pd-1/pd-l1疗法超过3个月时取得临床获益，随后出现病情进展，称作“获得性耐药性”。[0517]当将患者分为原发性耐药性组和获得性耐药性组时，当将各组与各组中的患者保持fs118治疗的周数比较时(mann-whitney-wilcoxon检验p＝0.059)，观察到这两个患者组之间显著的差异。更具体而言，观察到获得性耐药性组的患者更可能对fs118治疗出现响应并从中取得获益。具体而言，完成18周或更长时间fs118治疗的全部患者均来自获得性耐药性组，boe在既往抗pd-1疗法中未知的一名患者是例外。然而，对于未知的bor的后一位患者，他们在既往抗pd-1疗法保持超过一年并且因此怀疑这位患者将具有已经分类为具有获得性耐药性的bor。原发性耐药性患者无一能够保持参与研究超过17周。这些观察结果进一步得到2020年3月25日可获得的额外临床数据支持，其中归因于获得性耐药性组的患者持续保持治疗，通过所述临床数据发现，在原发性耐药性患者组和获得性耐药性患者组之间观察到的统计显著性差异改善(mann-whitney-wilcoxon检验p＝0.048，图7)。[0518]另外，需要注意的是，尽管这项分析来自正在进行的研究，但没有原发性耐药性患者保持参与研究。[0519]截至2019年12月，在fs118治疗时39名患者具有可评估的肿瘤扫描。图8中显示了这些患者，指示每名患者是否具有获得性耐药性表型或原发性耐药性表型的指示。尽管获得性耐药性组和原发性耐药性组中均观察到病情稳定，但是完成超过18周fs118治疗的全部患者(具有获得性耐药性表型)均具有至少一个病情稳定测量(图8)。[0520]就对fs118治疗的响应可能性而言，对获得性耐药性患者观察到的现象似乎与任何特定剂量水平(图7)或临床适应症(图8和图9)无关。[0521]3.4结论[0522]总之，已经出乎意料地发现，与原发性耐药性患者(定义为从既往抗pd-1/pd-l1疗法未取得临床获益或取得持续3个月或更短时间的某种临床获益)相比，获得性耐药性患者(定义为具有(sd、pr或cr)的bor并且因此在既往抗pd-1/pd-l1疗法超过3个月治疗持续时，已经取得某种临床获益，之后随即出现病情进展)更可能对fs118治疗积极响应更长时间。这特别有意义，原因是不推荐在含既往pd-(l)1的治疗方案的病情进展之后，用pd-(l)1抗体重新治疗患者，并且历史上患者获益寥寥(fujita等人,anticancerres.2019；fujita等人,thoraciccancer,2019；martini等人,j.immunotherapycancer,2017)。因此，发明人已经确定了选择更可能对fs118治疗响应的患者的阈值。这个阈值似乎与fs118剂量或癌症类型无关。[0523]作为一项旁注，发明人随后鉴定了与bi-754091(抗pd-1mab)组合的三个在临床研究进行中的igg4单克隆抗体bi-754111(抗lag-3)：nct03697304、nct03780725和nct03156114。这些研究指出对基于既往抗pd-1或抗pd-l1疗法表现出继发耐药性(获得性耐药性)的患者队列的用途。没有与这些临床研究有关的可公开获得的信息指示为何已经选择这些队列、如何得出继发耐药性的限定，也没有提供相对于原发性耐药性患者群体，证明在继发耐药性患者队列中响应改进的任何启示或数据。这些临床研究因此在fs118背景下没有提供辅助作用，对现有研究似乎也没有意义。[0524]实施例4：pd-l1表达作为标志物以基于对既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的耐药性来选择用于fs118治疗的患者[0525]4.1背景[0526]由于参与正在进行的fs118试验的全部患者均已经接受用既往抗pd-1或抗pd-l1疗法的治疗，并且faroudi等人(americanassociationforcancerresearch(aacr)annualmeeting2019,29march–03april2019,atlanta,georgia,usa(美国癌症研究协会(aacr)2019年3月29日–2019年4月3日年度会议，美国佐治亚州亚特兰大市))已经证明，靶向这些途径可以改变检查点受体的水平，我们力图在用fs118治疗之前(“基线”)确定pd-l1和lag-3的表达水平，并且确定在这些表达水平与用fs118治疗的时间之间是否存在任何相关性。对于这项分析，将患者分组为如实施例3中所定义对其用抗pd-1或pd-l1疗法的既往治疗具有“获得性”耐药性或“原发性”耐药性。[0527]4.2方法[0528]用fs118治疗之前(“基线”)测量取自患者的活检样品中的pd-l1表达。为了使活检样品适合分析，肿瘤细胞含量须为25％或更大并且需要存在≥100个肿瘤细胞。将肿瘤样品如实施例2.3.2.4中所述那样，经福尔马林固定和石蜡包埋(ffpe)、染色和评估。将pd-l1肿瘤阳性评分百分数(％tps)计算为活检样品中显示pd-l1阳性染色的肿瘤细胞的百分数。测量全部可获得样品的％tps，其中：13名受试者具有获得性耐药性并且4名受试者具有原发性耐药性。[0529]4.3结果[0530]当基线处pd-l1％tps与fs118治疗周数比较时，对于获得性耐药性组观察到了正相关(单侧斯皮尔曼相关系数(one-tailedspearmancorrelationcoefficient)r＝0.57，p＝0.022)。反过来，原发性耐药性患者组没有发现pd-l1％tps和fs118治疗时间之间的相关性(单侧斯皮尔曼相关系数r＝-0.40，p＝0.37)。另外，在获得性耐药性组内部，三名患者用fs118治疗30周或更长时间，佐证了病情受fs118控制。这三名患者在组内部还具有最高的pd-l1％tps(参见图10)。使用获得性耐药性组的正相关，确定可能用来选择更可能对用fs118治疗响应的患者的预后性阈值。通过绘制相关性趋势线并且借助插值法做到这点，使用这种阈值确定与fs118治疗18周相关的pd-l1％tps评分。选择18周是因为在获得性耐药性组中观察到治疗持续18周或更长时间，但在原发性耐药性组中未观察到如此情况，并且因此18周被认定为fs118的临床获益的指示。以这种方式确定的pd-l1％tps评分是15％。[0531]4.4结论[0532]总之，这些结果表明获得性耐药性患者中肿瘤的pd-l1表达情况(pd-l1％tps)与fs118所实现的病情控制持久性正相关。获得性耐药性组内部具有最高pd-l1％tps的3名患者都具有通过fs118长的病情控制持续时间(fs118治疗30周或更长时间)。使用获得性耐药性组的正相关，确定15％的pd-l1％tps被确定为预后阈值，以在获得性耐药性组中选择特别可能对fs118治疗显示出持久响应的患者。[0533]实施例5：fs118对获得性耐药性和原发性耐药性患者中免疫响应的影响[0534]5.1背景[0535]根据实施例3中观察到获得性耐药性患者更可能比原发性耐药性患者在fs118治疗中保持更长时间，发明人力图确定这两组之间对fs118响应是否存在药理学差异。原发性耐药性患者可以使既往抗pd-1/pd-l1疗法失效，归因于肿瘤中的抑制性因素导致t细胞功能不足或缺少免疫系统识别肿瘤(nowicki等人,2018)。获得性耐药性患者起初可能具有t细胞响应，但被认为出现可能因多种机理(包括lag-3上调)导致的t细胞功能丧失。fs118活化t细胞已经被证明是fs118体外作用机理(wo2017220569a1)。因此，发明人假设患者的免疫系统对fs118的响应能力可能取决于它们对既往抗pd-1/pd-l1疗法的响应并且假设fs118加强免疫响应的能力可能在fs118提供临床获益时很重要。[0536]5.2方法体系[0537]在用fs118治疗期间，评估fs118对35名参与试验的患者的血流中外周免疫细胞计数的影响(24名患者具有获得性耐药性，8名患者具有原发性耐药性和3名患者耐药性未知–如实施例3中所定义)。从患者获得血液样品并且通过caprionbiosciences(caprionbiosciences,inc.,蒙特利尔,加拿大魁北克)进行全血免疫细胞的cd3 淋巴细胞、cd4 t细胞、cd8 t细胞、b细胞、和nk细胞(tbnk细胞计数)的绝对细胞计数。简而言之，采集的血液于4℃储存在cyto-bct管中直至处理为止。随后，100μl全血用来用预定的tbnk板通过caprion以单次重复染色。在染色后，24小时内在bdlsr流式细胞仪上采集样品并且使用flowjo软件定量。在fs118治疗之前(称作“基线”)和在fs118治疗期间的几个时间点测量绝对细胞计数。[0538]对后续的绝对细胞计数的数据分析时，仅考虑接受剂量大于或等于1mg/kgfs118的患者。[0539]如下计算每种细胞类型的细胞计数从基线变化的百分数：[0540]从基线变化的百分数＝[(细胞计数在治疗日–细胞计数基线时)/细胞计数基线时]*100[0541]对于每种细胞类型而言，将fs118治疗时从基线变化的百分数与时间进行绘制。基于每名患者的免疫细胞计数来计算免疫响应特征。[0542]患者划分成如实施例3中所定义的“原发性”耐药性或“获得性”耐药性。[0543]5.3结果[0544]图11显示两位代表性患者的从基线变化百分数：患者1004-0003作为“原发性耐药性”患者的免疫细胞响应特征的代表性示例，并且患者1002-0014作为“获得性耐药性”患者的免疫细胞响应特征的代表性示例。获得性耐药性患者显示cd3 淋巴细胞、cd4 t细胞、cd8 t细胞和nk细胞的数目相较于原发性耐药性患者升高的趋势(基于这些细胞细胞亚集从基线的变化百分数)。[0545]另外，对于每名患者、将fs118治疗期间观察到的cd3 淋巴细胞从基线的最高倍数变化与fs118治疗的时间进行作图。对原发性耐药性组和获得性耐药性组均进行这种作图。发现与基线相比，依据免疫细胞计数变化倍数测量的cd3 淋巴细胞响应的幅度显著地与获得性耐药性组中fs118治疗的持续时间正相关(单侧斯皮尔曼相关系数r＝0.45，p＝0.025)，然而原发性耐药性组中这种相关不显著(单侧斯皮尔曼相关系数r＝0.52，p＝0.098)。[0546]5.4结论[0547]这些数据表明，患者血液中观察到的t细胞和nk细胞升高、以及cd3 淋巴细胞的倍数变化升高是用fs118治疗的结果，并且指示获得性耐药性患者的免疫系统更能够在fs118治疗时提高免疫响应。因此，如本文定义的获得性耐药性可以用作阈值以选择更可能对fs118响应的患者。[0548]实施例6：基于fih数据和建模的、用于i期扩大试验和/或ii期试验的推荐剂量[0549]6.1.概述[0550]为了指导未来临床研究的剂量选择，采集和分析了(实施例2-5中描述的)fihi期试验数据的多个参数。根据fihi期试验测试的剂量，这些参数包括抗药物抗体(ada)和治疗期间发生的不良事件(teae)的存在、以及通过治疗时间、肿瘤生长速率、肿瘤大小(直径之和)以及响应者数量所评估的功效。还对血清中的lag3:fs118:pd-l1受体三聚体复合物形成、总slag3特征和总spd-l1特征进行模拟。尽管在剂量之间比较时，对大部分参数未观察到差异，但ada水平、通过响应者数量所评估的功效和三聚体复合物形成的模拟显示了剂量之间的显著差异，以能够推荐用于其他研究的优选剂量。[0551]6.2fih血清样品的ada分析[0552]施用蛋白质疗法(如fs118)可能诱导抗药物抗体(ada)，这些抗体可能影响其药代动力学/药效动力学特征。在fih研究中执行人血清样品中fs118的ada的检测和表征以支持临床研究。在bioagilytix实验室(lab)开发了fs118ada试验。简而言之，使用与实施例1.2.2中描述的相似电化学发光(ecl)msd平台的桥接试验用来测量与人血清中fs118结合的抗体；生物素酰化的fs118用来捕获ada，所述ada随后使用用msdtag-nhs-酯(msd#r91bn)标志的fs118检出。来自患者血清样品的ada水平(ecl信号)被测量，被归一化为由合并的未治疗人血清构成的阴性对照，并且通过fs118剂量进行分组(表9)。[0553]表9：fihi期试验患者中的归一化ada水平[0554][0555]与每周一次10mg/kg或20mg/kg的剂量方案比较时，每周一次3mg/kg的给药组具有显著更高的ada水平(p≤0.05，mannwhitney检验)。较低药物剂量时较高的ada水平是通常观察到的现象，这也可以称作“通过ada响应的较高剂量给药”(chirmule,2012)。尽管存在ada水平差异，但未观察到teae和fs118治疗之间明显的剂量关系(参见实施例2.3.1)。为了最大限度降低ada对免疫原性、药代动力学/药效动力学特征和毒性的可能影响，将优选每周一次10mg/kg和20mg/kg的剂量方案用于未来的研究。[0556]6.3来自fihi期试验的功效数据的贝叶斯分析[0557]使用响应fs118治疗而收集的fihbor/ibor功效数据，贝叶斯分析用来预测每周一次3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg给药组的各组中、将在未来试验中显示病情稳定的患者频率。[0558]对于每周一次3mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的给药组患者、计算来自fihi期试验的患者中作为bor/ibor的病情稳定的出现频率。该数据用来评估未来试验中、患者在每个剂量水平显示病情稳定的概率，如下表10中所示：[0559]表10：患者在使用fs118的未来试验中、在不同剂量水平下显示病情稳定的估计概率[0560][0561]例如，假定在未来试验(例如i期扩大或ii期)中入选24名患者并且使用表10中所示的估计概率(考虑90％置信区间)，估计fs118的每个剂量下、响应者(即患者至少显示作为bor/ibor的病情稳定)的数量将如下：[0562]每周一次3mg/kg：4-14名响应者[0563]每周一次10mg/kg：11-19名响应者[0564]每周一次20mg/kg：11-19名响应者[0565]如上显示，预测每周一次10mg/kg的剂量和每周一次20mg/kg的剂量在最高比例的患者中引起病情稳定，实现最佳响应结果。因此，基于这个贝叶斯分析，这两种剂量中任一者将优选用于未来试验。[0566]6.4作为药效动力学标志物的三聚体lag3:fs118:pd-l1受体复合物形成[0567]已经展示fs118活化t细胞是fs118体外作用机理(wo2017220569a1)。假设fs118在肿瘤中的治疗功效原因在于：肿瘤特异性t细胞在肿瘤微环境下被活化是由于fs118同时与lag-3和pd-l1结合，且抑制由lag-3和pd-l1信号生成的免疫抑制信号。使用来自fihi期试验的血清数据，在血清和肿瘤微环境两者中模拟三聚体复合物形成，并且使用其作为剂量方案选择的药效动力学标志物，尤其用以在每周一次10mg/kg和20mg/kg的剂量方案之间进行选择。[0568]从fih研究中收集的药代动力学/药效动力学数据，得到在第1周和第4周中依据剂量的中位游离fs118浓度特征、总slag3和总spd-l1血清浓度特征。这些数据提供了预测fs118剂量越大、血清中和肿瘤微环境下游离fs118浓度均越高的基础。随后从这些数据，形成了晚期实体瘤患者中游离fs118、总slag-3和总spd-l1血清浓度的群体模型。这个模型用来模拟剂量方案与肿瘤中三聚体复合物形成之间的联系，旨在了解未来试验剂量药方案选择。阶梯式方案(stepwiseapproach)用于形成模型(表11)。首先，用一室pk模型和线性消除对游离fs118血清浓度进行模拟。随后，加入总slag-3血清浓度和总spd-l1血清浓度并用结合模型拟合。与游离slag-3和游离spd-l1相比、模拟与fs118结合以及与fs118:slag-3复合物和fs118:spd-l1复合物的较慢消除能够解释患者中观察到的fs118治疗时看到的总slag-3血清浓度和总spd-l1血清浓度的升高。起初，体外测量的平衡解离常数被用于相应的复合物，但是用估计的平衡解离常数值的模型能够更好地描述观察到的特征。对游离fs118血清浓度特征的拟合不通过加入添加slag-3和spd-l1的结合和消除来修正。slag-3和spd-l1被假定为从未指明的来源而恒定产生。[0569]此时，该模型能够描述观察到的游离fs118血清浓度、总slag-3血清浓度和总spd-l1血清浓度。为了使fs118剂量方案与功效联系，参数估计之后，向模型加入结合至血清和肿瘤微环境中的细胞表面lag-3和pd-l1受体，以确定血清和肿瘤微环境中的三聚体fs118:lag-3:pd-l1复合物。[0570]为了模拟肿瘤微环境，做出简化假设。首先，假定肿瘤游离fs118浓度总是游离fs118血清浓度的分数(表述为生物分布系数)并且血清与肿瘤之间存在瞬时平衡。假设肿瘤质量低并且它将不影响系统性fs118浓度，且也不会模拟fs118从血清至肿瘤的质量流。因此，用估计的生物分布系数(bc)估计肿瘤中的游离fs118浓度为[fs118]肿瘤＝bc[fs118]血清。假定肿瘤中lag-3和pd-l1的浓度与血清中lag-3受体和pd-l1受体的浓度(假定为恒定)相同。使用估计的与可溶性靶标结合的相同平衡解离常数模拟与细胞表面受体的结合。[0571]表11：模型开发的主要步骤[0572][0573][0574]模拟以下剂量方案：(i)每周一次施用1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg，静脉内输注1小时，或(ii)每两周一次施用3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg，静脉内输注1小时。使用mlxr4.0.0库在r3.6.0(rdevelopmentcoreteam2008)中进行模拟。模拟使用来自fihi期试验患者的monolix的个体参数估计值(条件分布模型)。随后将这些个体的预测特征的均值进行作图。研究了哪种模拟的剂量方案在血清中和肿瘤中产生最高三聚体复合物浓度(lag3:fs118:pd-l1)。[0575]使用来自i期试验患者的个体估计值，获得不同bc的血清和肿瘤中模拟的个体细胞表面三聚体复合物(lag3:fs118:pd-l1)的均值，作为总lag-3受体的百分数，并且作图。模拟揭示了较高的游离fs118浓度导致较低的三聚体lag3:fs118:pd-l1复合物浓度，这有利于fs118:lag3和fs118:pd-l1二聚体复合物。还已经使用fih研究中收集的数据显示，fs118剂量越大，游离fs118浓度越高。最佳的游离fs118浓度范围是大约0.1–1μg/ml。对于10％的bc，假定最接近模拟体内肿瘤微环境，则每周一次10mg/kg的给药具有比每周一次20mg/kg的给药更高的三聚体复合物浓度，因为更可能产生0.1–1μg/ml范围内的游离fs118浓度。[0576]这还意味着，剂量过大和/或给药过于频繁将降低三聚体复合物浓度并且因此减少因同时结合fs118至lag-3和pd-l1引起的t细胞活化，并且因此导致肿瘤抑制作用下降。[0577]6.5结论[0578]将fihi期试验数据的多个要素分析并用来指导未来试验的剂量选择。首先，对不同fs118剂量时的ada分析显示，与每周一次10mg/kg或20mg/kg的给药相比，在每周一次3mg/kg的给药检出更高水平的ada。为了最大限度减少潜在免疫原性和毒性，相对于每周一次3mg/kg的方案，将优选每周一次10mg/kg和每周一次20mg/kg的方案。其次，对i期bor数据的贝叶斯分析估计，相比每周一次3mg/kg的方案，如果执行每周一次10mg/kg的方案或每周一次20mg/kg的方案，则患者显示作为bor/ibor的病情稳定的可能性将会更大。最后，对三聚体复合物形成的药代动力学/药效动力学建模和模拟揭示，假定bc为10％，三聚体lag3:fs118:pd-l1复合物的浓度在每周一次10mg/kg的剂量最高。假设更高的三聚体复合物转换成t细胞活化和肿瘤生长抑制。[0579]综合上述观察结果，优选每周一次10mg/kg的给药用于未来试验。[0580]从以上数据推导，还提出每周一次固定剂量700mg的替代选项。假定群体中患者平均体重是70kg，则每周一次700mg的剂量将等同于每周一次10mg/kg的剂量。如果群体中患者的实际体重是35–100kg，则每周一次700mg的剂量将等同于每周一次20mg/kg至7mg/kg范围内的剂量，这取决患者的实际体重。这个剂量将在fihi期试验中观察到的无eae的病情稳定响应的剂量范围内并且因此预计是有效的。相似的原理可以用于所讨论的任何特定患者群体，并因此本领域普通技术人员基于本文教导内容，将能够确定用于任何特定患者群体合适的固定剂量。例如，若群体中患者的平均体重估计80kg，则每周一次800mg的剂量将等同于每周一次10mg/kg的剂量。如果群体中患者的实际体重是40–100kg，则每周一次800mg的剂量将等同于每周一次20mg/kg至7mg/kg范围内的剂量，这取决患者的实际体重。根据上文解释，该剂量也被预计是有效的。[0581]实施例7：i期扩大试验的scchn研究方案[0582]为了探索fs118在特定肿瘤类型中的临床活性，计划扩大i期临床试验。这称作i期扩大队列并且涉及招募预先指定人数的患者，以进一步评估fs118的安全性、药代动力学/药效动力学和临床疗效。[0583]计划的扩大队列将仅包含复发性或转移性头颈部鳞状细胞癌(scchn)患者。特别选择scchn的原因是fihi期试验(参见实施例2)中存在分别以每周一次3mg/kg、10mg/kg和20mg/kgfs118给药的三名scchn患者，所述患者分别持续26周、15周和27周研究(参见实施例2.4.1，表8)，这表面fs118可以特别有效治疗scchn。另外，先前已经观察到scchn患者的肿瘤微环境中t细胞上的lag-3水平升高，同样已经观察到pd-1水平升高(hanna等人,2018；deng等人,2016)，表示pd-l1的水平也升高。因此，存在明确生物学原理，即同时靶向lag-3和pd-l1的fs118在scchn肿瘤微环境下是有效的。更具体而言，扩大队列将包含具有口腔、口咽喉或下咽疾病部位且不适合接受治愈性疗法(如手术或照射)的scchn患者。抗pd-1抗体目前由监管当局批准用于这些疾病部位，并且因此招募的患者将已经用抗pd-1抗体预先治疗，这对于下文所述的招募策略至关重要。人乳头瘤病毒(hpv)被认为引起大约20％的scchn，尤其口咽疾病，称作口咽癌、。相比其他可能由烟草和/或饮酒引起的其他scchn患者，这些患者一般对抗癌治疗响应具有更好的临床结局。因此，hpv状态将在患者加入本研究之前记录，并且如果不知道，则在患者进入该研究进行测试。[0584]出于以上解释的原因，全部患者先前均将已经用获批的抗pd-1抗体作为单药疗法、或与化学疗法联合治疗并且在加入该研究之前出现病情进展。该患者必须具有如本文定义的对既往pd-1疗法具有获得性耐药性(即患者在用既往抗pd-1疗法时出现完全或部分响应，或显示病情稳定超过3个月，但随后转换成病情进展)。这属于发明人的发现成果范围，即获得性耐药性患者明显更可能更好地对fs118响应(例如通过显示病情稳定并且保持治疗更长时间)–参见实施例3。[0585]为了用获批的抗pd-1抗体既往治疗，按照药品标签，患者必须已经依据综合正评分(cps)或肿瘤比例评分(tps)具有》1％的pd-l1水平。因此，预期进入i期扩大试验的患者全部将具有》1％的pd-l1水平并且将记录这些水平。这至关重要，因为发明人已经展示获得性耐药性患者中fs118治疗前的基线pd-l1水平与用fs118治疗时长正相关(参见实施例4)。为了让既往抗pd-1疗法从每名患者的系统清除，患者必须等待最少28天，之后才可以进入计划的i期扩大试验。另外，患者从停用最后抗pd-1疗法起、并开始fs118治疗不能超过12周。这确保进入i期扩大试验的患者需要立即对其病情进展进行进一步疗法。[0586]在进入i期扩大试验之前，将要求全部患者提供其肿瘤活检样品以及血液样品。从活检样品中，除患者癌症的其他特征如肿瘤微环境内部cd8 t细胞百分数之外，还将分别测量和分析肿瘤细胞和t细胞上的基线pd-l1和lag-3表达水平。血液样品将用来测量和分析免疫细胞群体(包括如实施例2.3.2.3中所述的ki67 免疫细胞)的水平和/或血浆中可溶性lag-3或可溶性pd-l1的水平。全部患者将在每周一次基础用10mg/kgfs118给药，与实施例6中所述的剂量方案建议一致。治疗24周后，将使用临床终点病情控制率(dcr)评估fs118在scchn中的功效。这是开始用fs118治疗的24周时间出现完全响应(cr)、部分响应(pr)和/或病情稳定(sd)的患者的百分数。因此，这将涵盖例如首先显示部分响应但随后进展到病情稳定或反之亦然的患者。基于主要研究者的经验，抗pd-1疗法之后接受医护标准疗法(例如：紫杉烷如多西他赛或紫杉醇、西妥昔单抗或氨甲喋呤)的患者一般将在24周时具有《20％的dcr率。这意味着》80％的这类患者从医护标准疗法开始后24周内出现病情进展。最低目标是fs118超过抗pd-1疗法之后施用的医护标准疗法的所述dcr率。鉴于i期扩大试验中的患者将比fih试验患者和剂量递增期i临床试验患者接收更少地高度预先治疗(参见实施例2)，认为这个目标可实现。[0587]i期扩大试验的统计设计将利用一种称作simon2阶段最大最小设计(simon，1989)的方法。在第一阶段，将招募10名患者。如果所述10名患者中1人或无人在fs118治疗开始24周时间内实现病情控制(cr，pr和/或sd)，则终止登记并且将认定fs118与医护标准疗法相比并非足够有效以保证持续招募。否则，另外12名患者将登记作为第二阶段。当完成第二阶段时，如果22名可评估患者中6人或更多患者在fs118治疗开始24周时间内实现病情控制(cr、pr和/或sd)，则将认定fs118在这些患者中有效。[0588]为了进一步了解哪些患者可能从fs118治疗获益最多，患者的癌中pd-l1和lag-3的表达水平(基线时使用强制性活检材料记录)将与对fs118的临床获益(研究期间cr、pr和/或sd和治疗的时间长短)进行比较，以确定是否存在任何相关性。另外，还将监测患者血浆样品中可溶性lag-3水平的变化和外周免疫细胞群体的频率和ki67表达水平的变化、以作为对fs118响应的药效动力学标志物。[0589]序列表[0590]抗人lag-3/pd-l1mab2fs118(具有lala突变)的重链的氨基酸序列(seqidno:1)[0591]将cdr加下划线。将ab、cd和ef环序列以粗体显示并加下划线。[0592][0593]抗人lag-3/pd-l1mab2fs118的轻链的氨基酸序列(seqidno:2)将cdr加下划线。[0594]diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqsissylnwyqqkpgkapkpliyvasslqsgvpssfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqsysnpitfgqgtrleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec[0595]抗小鼠lag-3/pd-l1mab2fs18-7-108-29/s1(具有lala突变)的重链的氨基酸序列(seqidno:3)[0596]将cdr加下划线。将ab、cd和ef环序列的位置以粗体显示并加下划线。lala突变的位置以粗体显示。2016；81:448-456.[0626]sharma等人,primary,adaptiveandacquiredresistancetocancerimmunotherapy.cell,2017,168(4):707-723[0627]seymour等人,irecist:guidelinesforresponsecriteriaforuseintrialtestingimmunotherapeutics,lancetoncol.,2017,18(3):e143-e152[0628]simonr,optimaltwo-stagedesignsforphaseiiclinicaltrials,controlledclinicaltrials,1989,10:1-10.当前第1页12当前第1页12
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