鉴别百日草花瓣萼片化雄性不育和平瓣可育性状的共显性CAPS分子标记及其应用的制作方法

技术特征：
1.一种鉴别百日草花瓣萼片化雄性不育和平瓣可育性状的共显性caps分子标记，其特征在于：所述共显性caps分子标记的核苷酸序列分别为如seq id no.1，其序列上的第71bp处为一个snp位点，该snp位点为a/c的碱基突变。2.用于获得权利要求1所述分子标记的引物对，所述引物对为：正向引物：5＇-tttccgccaccttgactgtt-3＇；反向引物：5＇-gtggactcattcccattccca-3＇。3.一种权利要求1所述共显性caps分子标记或权利要求2所述引物对在鉴别百日草花瓣萼片化雄性不育和平瓣可育性状中的应用。4.一种鉴别百日草花瓣萼片化雄性不育和平瓣可育性状的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求2所述引物对，其中，所述引物对为：正向引物：5＇-tttccgccaccttgactgtt-3＇；反向引物：5＇-gtggactcattcccattccca-3＇。5.一种权利要求4所述试剂盒的鉴别方法，其特征在于：包括以下步骤：1)提取待鉴别的百日草的基因组dna；2)以待鉴别的百日草的基因组dna为模板，采用以下引物对：正向引物：5＇-tttccgccaccttgactgtt-3＇；反向引物：5＇-gtggactcattcccattccca-3＇；进行pcr扩增，得到pcr产物，再用限制性核酸内切酶hhai酶切，得到酶切产物；3)检测pcr酶切产物：pcr产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测，记录基因型，在紫外灯下拍照；若电泳条带中含有154bp的条带时，该待鉴别的百日草为平瓣可育株，其为纯合；或，若电泳条带中同时含有82bp和72bp的两条条带时，该待鉴别的百日草为花瓣萼片化雄性不育株，其为纯合；或，若电泳条带中同时含有154bp、82bp和72bp的三条条带时，该待鉴别的百日草为平瓣可育株，其为杂合。6.根据权利要求5所述鉴别方法，其特征在于：所述步骤2)中，pcr扩增的反应体系：pcr扩增的反应为：94℃预变性10min后，循环30次94℃变性30s、57℃退火、72℃延伸5min；酶切反应体系：
caps酶切反应为：37℃恒温培养箱放置6h。

技术总结
本发明公开了一种鉴别百日草花瓣萼片化雄性不育和平瓣可育性状的共显性CAPS分子标记及其应用，所述共显性CAPS分子标记的核苷酸序列分别为如SEQ ID NO.1，其序列上的第71bp处为一个SNP位点，该SNP位点为A/C的碱基突变。本发明首先利用BSA-seq技术将百日草花瓣萼片化基因和雄性不育基因定位于近缘物种向日葵16号染色体上10485288至10869078区域内，将单侧标记的SNP位点开发成CAPS标记，进而利用该CAPS标记对百日草花瓣萼片化雄性不育株和平瓣可育株进行鉴定。本发明中提及的CAPS标记与目的基因的距离更近，与雄性不育基因和花瓣萼片化基因连锁度更高。片化基因连锁度更高。片化基因连锁度更高。


技术研发人员：叶要妹 邢加成 严玉阳 朱欣悦 潘雨荷 胡妙 李娟
受保护的技术使用者：华中农业大学
技术研发日：2021.11.30
技术公布日：2022/3/8