新型配体测定的制作方法

技术特征：
no:8)的序列，其中n为a、t、g或c；c.孕酮应答元件(pre)，所述pre包含但不限于包括5'-ggtacaaactgttct-3'(seq id no:10)的序列；d.盐皮质激素应答元件(mre)，所述mre包含但不限于包括5'-agaacanaatgttct-3'(seq id no:12)的序列，其中n为a、t、g或c；以及e.糖皮质激素应答元件(gre)，所述gre包含但不限于包括5'-agaacanaatgttct-3'(seq id no:12)的序列，其中n为a、t、g或c。12.根据权利要求1到11中任一项所述的测试试剂盒，其中所述测试试剂盒被配置成检测与雄激素受体结合的配体，并且所述核酸分子包括由seq id no:14定义的序列，或其中所述测试试剂盒被配置成检测与雌激素受体结合的配体，并且所述核酸分子包括由seq id no:15定义的序列。13.一种用于在样品中检测配体的测定方法，所述配体能够引发类固醇激素基因组应答，所述测定方法包括以下步骤：(i)使样品与以下接触：(a)类固醇激素受体，所述类固醇激素受体与来自所述样品的配体形成配体-受体复合物；以及(b)核酸分子，所述核酸分子包括：(1)聚合酶启动子序列；(2)应答元件，所述应答元件被所述配体-受体复合物结合；以及(3)报告构建体，其中所述应答元件(b)位于所述启动子序列(a)与所述报告构建体(c)之间，并且(a)、(b)和(c)可操作地连接；(c)单多肽聚合酶；以及(d)核苷三磷酸；以及(ii)测量由所述配体-受体复合物与所述应答元件的结合引起的所述报告构建体的转录减少或抑制，其中所述报告构建体的所测得的转录减少或抑制反映在所述样品中检测到配体。14.一种用于确定运动员的兴奋剂状态的方法，所述方法包括对从所述运动员获得的样品执行根据权利要求1到13中任一项所述的测试试剂盒或测定方法以确定所述样品是否包括足以与类固醇激素受体结合并激活所述类固醇激素受体并且引起所述报告构建体的物理性质变化的配体，其中所述报告构建体的物理性质变化提供关于所述运动员的所述兴奋剂状态的信息。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述运动员选自人类运动员、马科运动员、犬科运动员和骆驼科运动员。

技术总结
本发明涉及对与类固醇激素受体结合并且激活所述类固醇激素受体的配体的检测。具体地，本发明提供了用于从测试样品中选择性地鉴定类固醇激素受体配体的测试试剂盒和测定方法。重要的是，本文所述的测试试剂盒和测定方法是无细胞的，并且不需要制造费用高昂的核提取物来实现对所述测试试剂盒和测定方法的执行。相反，本文所述的测试试剂盒和测定方法采用如T7RNA聚合酶等与报告构建体连接的单多肽聚合酶。所述酶的活性被仅在目标配体存在的情况下才形成的配体结合的类固醇激素受体复合物抑制，而不是被激活。因此，可以使用所述报告构建体的物理性质(例如，荧光输出)的所测得的变化来确定所研究的样品中目标配体的存在。变化来确定所研究的样品中目标配体的存在。变化来确定所研究的样品中目标配体的存在。


技术研发人员：A
受保护的技术使用者：因斯图根有限公司
技术研发日：2020.05.07
技术公布日：2022/3/4