苍术酮或苍术素作为FFA1激动剂的应用及药物组合物的制作方法

苍术酮或苍术素作为ffa1激动剂的应用及药物组合物
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，具体涉及苍术酮和苍术素作为ffa1激动剂，在治疗和预防ffa1受体相关疾病的药物中的应用。
技术背景
2.ffa1为一种g蛋白偶联受体，属于脂肪酸类受体家族中的一员，也叫做gpr40 受体，其内源性配体为中长链脂肪酸，这些脂肪酸在在各种生理过程中起着重要作用，如糖尿病、阿尔茨海默病、炎症、肥胖症、癌症、免疫调节、骨质疏松症、疼痛等。因此，发现ffa1新型配体将有助于相关疾病的治疗(陆琰,周金培.新型抗糖尿病药物ffa1 受体激动剂的研究进展[j].海峡药学,2016,28(04):4-8.)。
[0003]
苍术酮为一种倍半萜烯烃化合物，存在于苍术属植物中。据文献报道，苍术酮具有保肝，抗肿瘤，细胞毒性，抗炎等活性。苍术素为聚乙烯炔类，也是苍术中的有效成分。文献中苍术素的药理活性主要有抗肿瘤活性。
[0004]
目前关于苍术酮和苍术素作用于ffa1受体的内容尚未见报道。


技术实现要素：

[0005]
本发明发现了苍术酮和苍术素在医药方面的新用途，具体涉及苍术酮和苍术素以及此类化合物它们对应药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶形物及药物组合物的作用靶点的发现，涉及的作用靶点为ffa1受体，涉及的药学上的应用可能为ffa1受体相关疾病。
[0006]
本发明提出了苍术酮和苍术素和/或者它们对应药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶形物及药物组合物为ffa1受体激动剂，在ffa1受体相关疾病的应用。
[0007]
本发明所说的化合物苍术酮和苍术素的化学结构如下：
[0008]
所述的对应药学上可接受的盐是指对活生物体基本无毒的本发明化合物的盐，例如与盐酸、硫酸、磷酸等酸形成的盐，或者与氢氧化钠、氢氧化钾等碱形成的盐。
[0009]
所述的溶剂化物是指通过溶剂化作用形成的本发明化合物与溶剂分子的组合，例如化合物与水的组合形成水合物。
[0010]
所述的多晶形物是指以不同的晶格形式存在的本发明化合物。
[0011]
一种药物组合物，包括所述的ffa1受体激动剂，其中还可添加药学上可接受的载体或赋形剂，对载体或赋形剂的选择不做限制，如：淀粉、氯化钠、微晶纤维素、山梨酸和/或甘露醇等。该组合物的给药方式可以是但不限于经静脉注射、口服、肌肉、皮下、皮肤表面、局部注射等方式给药，其剂型可以但不限于是注射液、冻干粉针剂、注射微球、脂质体、片剂、双层/多层片、口含片、舌下片、胶囊剂、水剂、散剂、糊剂、喷雾剂、颗粒剂、软胶囊、滴丸剂、凝胶剂、贴片、膏剂等，其中优选注射液、冻干粉针剂、片剂和胶囊剂。
[0012]
本发明的技术方案为：利用无标记整合药理学技术epic测试所述化合物的ffa1 靶点活性。
[0013]
体外细胞靶点测试实验表明，本发明的苍术酮和苍术素作用于ffa1受体，因此可以拓展此类化合物的临床应用范围。
附图说明
[0014]
图1为实施案列苍术酮和苍术素在转染ffa1受体的中国仓鼠卵巢细胞 (cho-k1)上的dmr响应；
[0015]
其中，图1a为150μm苍术酮、1μm gw9508(一种商业的ffa1探针分子激动剂)和150μm苍术酮预处理1h后1μm gw9508在转染ffa1受体的cho-k1细胞上的60min内的最大dmr响应；图1b为150μm苍术素、1μm gw9508和150μm 苍术素预处理1h后1μm gw9508在转染ffa1受体的cho-k1细胞上的60min内的最大dmr响应；
[0016]
图2为实施案列1中苍术酮和苍术素在转染ffa1受体的cho-k1细胞上的激动和以及拮抗剂处理后苍术酮和苍术素的最大dmr响应图。
[0017]
其中，图2a为20μm的gw1100(种商业的ffa1拮抗剂剂)预处理1h后，50μm苍术酮在转染ffa1受体的cho-k1细胞上的最大dmr响应值。图2b为20μm 的gw1100预处理1h后，50μm苍术素在转染ffa1受体的cho-k1细胞上的最大 dmr响应值图；图2c为苍术酮在转染ffa1受体的cho-k1细胞上的剂量-响应曲线； 2d为苍术素在转染ffa1受体的cho-k1细胞上的剂量-响应曲线；
具体实施方式
[0018]
现结合实例，对本发明做进一步说明，实例仅限于说明本发明，而非对本发明的限定。
[0019]
在转染ffa1受体的cho-k1细胞上(转染方法参照文献rsc adv.,2019, 9,15073)，苍术酮和苍术素作用于ffa1靶点的发现。
[0020]
探针分子激动剂gw9508和拮抗剂gw1100，分别购买于tocris和mce公司。检测平台为康宁第三代epic成像仪，检测的信号为细胞动态质量重置(dmr)引起的波长位移。
[0021]
将处于对数生长期的转染ffa1受体的cho-k1细胞接种到epic配套的384微孔板中，细胞培养于添加10％胎牛血清(fbs)的ham's f-12k完全培养基中，每孔的细胞悬液体积为40μl，接种的密度为1.5
×
104个/孔，然后将接种好的384板置于细胞培养箱，在含体积浓度5％co2的空气和37℃培养18-24h，当细胞融合度达到95％以上时，进行实验。在进行epic上机检测前，弃掉384微孔板中的培养基，然后换上30μl 测试缓冲液(1
×
hanks balanced salt solution(hbss)，10mm hepes,ph＝7.4)。
[0022]
首先，分别实时监测加入测试缓冲液配制的10μl空白阴性对照(control)的 384微孔板中的转染ffa1受体的cho-k1细胞、测试缓冲液配制的10μl终浓度150μm 苍术酮处理的384微孔板中转染ffa1受体的cho-k1细胞、测试缓冲液配制的10μl 终浓度1μm gw9508处理的384微孔板中转染ffa1受体的cho-k1细胞，以及测试缓冲液配制的10μl终150μm苍术酮预处理1h后的再加测试缓冲液配制的10μl终浓度为1μm gw9508在转染ffa1受体的cho-k1细胞上引起的dmr信号，监测信号1h，以所检测的1h内最大响应的dmr信号作图，如图1a。
gw9508为已报道的高活性的ffa1激动剂，在此作为阳性对照比较苍术酮的激动活性。结果表明，阴性对照control没有引起明显的响应信号，150μm苍术酮在转染ffa1受体的cho-k1细胞引起的dmr响应为gw9508(1μm)的71.4％,而细胞经过150μm苍术酮预处理之后，再用1μm gw9508处理，此时在转染ffa1受体的cho-k1细胞引起的信号为单独gw9508处理时的30.8％，说明苍术酮能使gw9508部分脱敏。综合表明苍术酮和 gw9508可能作用于同一受体(ffa1受体)。类似的，分别实时监测10μl的空白阴性对照(control)、150μm苍术素、1μm gw9508、以及150μm苍术素预处理1h后的1 μm gw9508在转染ffa1受体的cho-k1细胞上引起的dmr信号，监测1h之后,以所检测的1h内最大响应的dmr信号作图，如图1b。结果显示，阴性对照control没有引起明显的响应信号，150μm苍术素在转染ffa1受体的cho-k1细胞引起的dmr响应为gw9508(1μm)的54.8％,而细胞经过150μm苍术素预处理之后，再用1μmgw9508处理，此时在转染ffa1受体的cho-k1细胞引起的信号为单独gw9508处理时的11.4％，说明苍术素能使gw9508部分脱敏结果表明，综合表明苍术素和gw9508 也可能作用于同一受体ffa1。
[0023]
受体活性验证实验：通过拮抗分析，验证了苍术酮和苍术素对ffa1的激动活性。
[0024]
拮抗分析：目的为了进一步证明苍术酮和苍术素作用于ffa1靶点。先用测试缓冲液配制的10μl终浓度20μm的ffa1拮抗剂gw1100预处理转染ffa1受体的 cho-k1细胞，预处理1h，然后分别加入测试缓冲液配制的10μl终浓度为50μm的苍术酮和测试缓冲液配制的10μl终浓度为50μm的苍术素，继续监测1h，结果如图 2a和2b所示，用gw1100预处理后的苍术酮和苍术素的响应信号比单独苍术酮和苍术素的响应信号低，这进一步说明苍术酮和苍术素作用于ffa1靶点。
[0025]
激动活性量效分析：将不同浓度的苍术酮(150μm,125μm,100μm,80μm,60 μm,30μm,15μm,7.5μm,3.75μm,1.88μm,0.94μm,0.47μm,0.23μm)和苍术素(150 μm,125μm,100μm,50μm,25μm,12.5μm,6.25μm)，加入接种转染ffa1受体的 cho-k1细胞的384板中，在epic仪器上监测1h，得到苍术酮和苍术素的浓度-响应曲线(图2c和2d)。结果表明苍术酮和苍术素引起的dmr响应呈剂量依赖关系，其ec
50
分别为53.6μm、87.2μm。