控制肥胖的黄酮-蛋白质纤维水凝胶及其制备方法与流程

1.本发明涉及控制肥胖的黄酮-蛋白质纤维水凝胶及其制备方法的技术领域。


背景技术：

2.肥胖被定义为一种与许多健康问题和预期寿命缩短相关的疾病。越来越多的证据表明，肥胖与慢性低度炎症密切相关，这可能导致胰岛素抵抗、2型糖尿病、脂肪肝、心血管疾病、阻塞性睡眠呼吸暂停和癌症。目前，全球有5亿肥胖人口和14亿超重人口，肥胖的高发病率对公众健康构成了重大威胁。因此，预防肥胖是现代社会的一大挑战。近年来食品和植物中的黄酮类物质对于预防和治疗肥胖引起了广泛的兴趣，许多黄酮类已被用于预防和治疗啮齿动物模型中的肥胖症。在之前的研究中黄酮类已被证明能够诱导淀粉样肽向无序和无定形聚集体的进展，但在本发明中简单地将黄酮类添加到存在于向列相中的淀粉样原纤维中，通过自组装能成功地驱动水凝胶的形成，完善了黄酮类与蛋白质淀粉样纤维相互作用的理论。本发明在高浓度淀粉样纤维条件下，添加黄酮类来驱动淀粉样纤维的自组装，极大地提高了黄酮类的负载量，同时该水凝胶能够缓解高脂膳食诱导的小鼠肥胖。本发明所使用的材料均为食品级，具有良好的生物相容性及安全性。


技术实现要素：

3.本发明旨在提供一种控制肥胖的黄酮-蛋白质纤维水凝胶及其制备方法。
4.本方法的技术方案如下：
5.(1)溶菌酶淀粉样纤维的制备，其特征在于：对鸡蛋清溶菌酶用超纯水于4℃下透析纯化，然后对透析后溶菌酶溶液进行冻干处理。称取一定质量的鸡蛋清溶菌酶冻干粉溶于超纯水中制得2wt％鸡蛋清溶菌酶溶液，用2m hcl调节ph至2，在90℃下，磁力搅拌孵育8h后制得鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维母液(2wt％，ph 2)。
6.(2)黄酮类诱导鸡蛋清溶菌酶纤维自组装形成的可逆型水凝胶的制备，其特征在于：称取一定质量的黄酮类物质溶于bis-tris缓冲液(10mm，ph 7.2)中，将步骤(1)所得的鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维与黄酮类溶液以一定体积比混合，磁力搅拌30s，静置形成水凝胶。
7.(3)本研究中的黄酮类物质为egcg(epigallocatechin-3-gallate)、tf(theaflavin)、tf-3(theaflavin-3-monogallate)、tf-3’(theaflavin-3
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monogallate)和tf-33’(theaflavin-3，3
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digallate)，用于制备水凝胶。
8.(4)小鼠肥胖模型的构建及治疗，其特征在于：将24只c57bl/6j雄性小鼠随机分为正常饮食空白组(nc)、高脂模型组(hfd)、hfd 水凝胶组(o-h)3组，每组8只。所有小鼠经一周适应性饲养后，开始为期8周的动物试验。每天给nc组和hfd组小鼠灌胃200ul工作液，o-h组小鼠灌胃200ul的水凝胶。试验期间，每周记录小鼠体重和食物摄入量。试验结束，通过眼球取血，血液经处理后得到血清于-80℃保存。随后采用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖小鼠，收集各组织器官。解剖过程中，结肠组织(从盲肠到肛门)被完整的取出并测量其长度，测量其
长度后放入液氮中并转移到-80℃冰箱用于qpcr分析。将肝脏、附睾脂肪相同部位固定于4％多聚甲醛溶液中用于病理学分析，剩余肝脏和附睾脂肪组织立刻放入液氮中并转移到-80℃冰箱用于qpcr分析。试验结果显示水凝胶显著缓解了高脂膳食引起的肥胖。
9.(5)本研究中小鼠肥胖模型的治疗，所用水凝胶是由黄酮类物质中的egcg制备的。
10.本发明具有以下优点：
11.首次制备黄酮类诱导的鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维自组装形成的可逆型水凝胶，大大提高了黄酮类的负载量。
12.该可逆型水凝胶能够显著缓解高脂膳食引起的小鼠肥胖，且使用的材料均为食品级，具有很好地生物相容性及安全性。
附图说明
13.图1不同处理组对小鼠体重和体重增加量的影响
14.图2不同处理组对小鼠血清中血脂水平tc、ldl-c的影响
15.图3不同处理组小鼠的肝脏苏木精和伊红(h&e)染色切片图
具体实施方式
16.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行进一步描述。所描述的实施例是本发明的部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
17.实施例一：
18.(1)对鸡蛋清溶菌酶用超纯水于4℃下透析纯化，然后对透析后溶菌酶溶液进行冻干处理。称取一定质量的鸡蛋清溶菌酶冻干粉溶于超纯水中制得2wt％鸡蛋清溶菌酶溶液，用2m hcl调节ph至2，在90℃下，磁力搅拌孵育8h后制得鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维母液。
19.(2)黄酮类诱导鸡蛋清溶菌酶纤维自组装形成的可逆型水凝胶的制备，其特征在于：称取一定质量的黄酮类物质包括egcg(epigallocatechin-3-gallate)、tf(theaflavin)、tf-3(theaflavin-3-monogallate)、tf-3’(theaflavin-3
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monogallate)和tf-33’(theaflavin-3，3
’-
digallate)，溶于bis-tris缓冲液(10mm，ph 7.2)中，将步骤(1)所得的鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维与黄酮类溶液以一定体积比混合，磁力搅拌30s，静置形成水凝胶。
20.(3)肥胖小鼠模型中所用水凝胶由egcg与鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维制备而成。将24只c57bl/6j雄性小鼠随机分为正常饮食空白组(nc)、高脂模型组(hfd)、hfd 水凝胶组(o-h)3组，每组8只。所有小鼠经一周适应性饲养后，开始为期8周的动物试验。每天给nc组和hfd组小鼠灌胃200ul工作液，o-h组小鼠灌胃200ul的水凝胶。试验期间，每周记录小鼠体重和食物摄入量。试验结束，通过眼球取血，血液经处理后得到血清于-80℃保存。随后采用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖小鼠，收集各组织器官。解剖过程中，结肠组织(从盲肠到肛门)被完整的取出并测量其长度，测量其长度后放入液氮中并转移到-80℃冰箱用于qpcr分析。将肝脏、附睾脂肪相同部位固定于4％多聚甲醛溶液中用于病理学分析，剩余肝脏和附睾脂肪组织立刻放入液氮中并转移到-80℃冰箱用于qpcr分析。试验结果显示水凝胶显著缓解
了高脂膳食引起的肥胖。
21.实施例二：
22.(1)血清中血脂水平测定
23.按市售南京建成生化试剂盒说明书，对血清中总胆固醇tc和低密度脂蛋白胆固醇ldl-c含量进行检测。
24.(2)组织病理学研究
25.将新鲜肝脏组织在4％多聚甲醛中固定超过24小时，将组织包埋在石蜡中并切成4μm全厚切片。随后用苏木精和伊红(h&e)染色切片以表征组织学变化，并通过nikon eclipse ti-sr(tokyo，japan)荧光显微镜观察。
26.从图1～图3可以看出，以黄酮类诱导鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维自组装形成的可逆型水凝胶能显著缓解高脂膳食引起的小鼠肥胖。