检测16型和18型HPV的LAMP引物组合、反应体系和方法与流程

技术特征：
1.一种lamp检测引物组，包括hpv16和/或hpv18的引物组；所述hpv16的引物组的核酸序列如下所示：外引物：f3：tgtaaccttttgttgcaagtgt(seq id no.1)；b3：agcatcccctgtttttttttcca(seq id no.2)；内引物：fip：cagatggggcacacaattccta-caaagcacacacgtagaca(seq id no.3)；bip：accataatctaccatggctg-aaccatccattacatcccgtacc(seq id no.4)；环引物：lf：gtgcccattaacaggtcttcc(seq id no.5)；lb：caggtaccaatggggaagag(seq id no.6)；所述hpv18的引物组的核酸序列如下所示：外引物：f3：agcgactcagaggaagaaaac(seq id no.7)；b3：gccattgttgcttactgctg(seq id no.8)；内引物：fip：tctggcttcacacttacttcacata-gttaatcatcaacatttaccag(seq id no.9)；bip：gctagtagtagaaagctcagcag-accacggacacacaaagg(seq id no.10)；环引物：lf：ttgtgtgacgttgtggttcggc(seq id no.11)；lb：ttcgagcattccagcagctgtt(seq id no.12)。2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述外引物、内引物、环引物在反应体系中的摩尔比为1：(1～2)：1。3.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的lamp检测引物组。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含buffer、dna聚合酶、指示剂。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述buffer包含：180～220mm tris-clph8.6～9.0、90～110mm kcl、70～90mm mgso4、90～110mm(nh4)2so4、0.9～1.1％tween20、7～9m甜菜碱、12～16mm dntps。6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述dna聚合酶为bst dna聚合酶。7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述指示剂为荧光染料；所述荧光染料优选为sybr green。8.权利要求1或2所述引物组或权利要求3～7任一项所述试剂盒在检测hpv16和/或hpv18中的应用。9.一种检测hpv16和/或hpv18的方法，包含以下步骤：s1：提取待测样品的dna；s2：使用权利要求1或2所述引物组或3～7任一项所述的lamp试剂盒扩增样品dna；s3：根据指示剂的指示情况判断结果；该方法不用于疾病的诊断。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述扩增条件为：55℃～65℃反应10～
30min。

技术总结
本发明公开了一种检测16型和18型HPV的LAMP引物组合、反应体系和方法，包含外引物、内引物和环引物。本发明提供的引物组合、反应体系和方法用于HPV16和HPV18的核酸检测，采用SYBR Green染料进行荧光PCR仪器检测和可视化的染色显色检测，在55℃～65℃条件下均可实现靶基因的有效扩增及检测，不需变温和复杂仪器；能快速获得检测结果，30min内即可完成反应，特异性为100％，检测灵敏度为10～100copies/mL。操作简单、快速、灵敏，对硬件要求低，成本较低，有利于制备成试剂盒用于广泛推广，为HPV16和HPV18的现场快速检测筛查提供有效的技术手段，具有重要意义。具有重要意义。


技术研发人员：邹刚军 夏婷 谭芷晴 卢智俊
受保护的技术使用者：广州朗坤生物科技有限公司
技术研发日：2021.11.03
技术公布日：2022/2/28