一种来那度胺中有关物质的检测方法与流程

1.本发明涉及一种来那度胺中有关物质的检测方法


背景技术：

2.来那度胺(lenalidomide，i)是美国新基(celgene)生物制药公司开发的新一代抗肿瘤药，主要用于治疗骨髓增生异常综合症和多发性骨髓瘤。 2005年12月27日，fda通过快速审批程序批准新基研制的来那度胺胶囊上市。2006年6月29日，fda批准来那度胺联合地塞米松用于治疗预先接受过至少一种治疗的多发性骨髓瘤患者。作为一线用药治疗多发性骨髓瘤，来那度胺已经取得了全球范围内医生和患者的广泛认可。
[0003][0004]
根据中国药物化学杂志，2014，24，4，327-329报道，来那度胺的制备过程中产生的杂质有多种，例如杂质i(2-溴甲基-3-硝基苯甲酸甲酯，cas： 98475-07-1)、杂质ii(3-(4
′-
亚硝基异吲哚-1-酮)-1-哌啶-2,6-二酮)、杂质iii (3-(4-羟胺-1-氧代-1,3-二氢异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)、杂质iv(2-甲基-3
-ꢀ
硝基苯甲酸甲酯)、杂质v(2-氯甲基-3-硝基苯甲酸甲酯)和杂质vi(4-硝基-3h-异苯并呋喃-1-酮，cas：65399-18-0)。但是，目前为止没有一种分析方法能将上述六种杂质有效的进行检测。
[0005][0006]
[0007]
因此，急需开发一种能够有效检测来那度胺的多种杂质的方法，以更好的对来那度胺药品进行质量控制。


技术实现要素：

[0008]
本发明提供了一种与现有技术完全不同的来那度胺中有关物质的检测方法。本发明的检测方法，能够同时检测来那度胺中的6种杂质(包括杂质 i、杂质ii、杂质iii、杂质iv、杂质v和杂质vi)、且分离度高达到2.5以上，方法操作简单，适合于来那度胺原料药及制剂的质量控制。
[0009]
本发明提供了一种来那度胺中有关物质的检测方法，其包括以下步骤：采用高效液相色谱法检测来那度胺中的杂质含量，所述的高效液相色谱的测试条件为：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱welchultimate xb-c18，以ph2.0～ 2.1的磷酸盐缓冲溶液为流动相a，以乙睛为流动相b，流速1.0ml/min～ 1.1ml/min，柱温25℃～33℃；所述的杂质为杂质i，2-溴甲基-3-硝基苯甲酸甲酯，cas：98475-07-1；杂质ii，3-(4
′-
亚硝基异吲哚-1-酮)-1-哌啶-2,6
-ꢀ
二酮；杂质iii，3-(4-羟胺-1-氧代-1,3-二氢异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮；杂质 iv，2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯；杂质v，2-氯甲基-3-硝基苯甲酸甲酯；杂质 vi，4-硝基-3h-异苯并呋喃-1-酮，cas：65399-18-0；所述的杂质i-vi的结构如下所示：
[0010][0011]
本发明中，所述的来那度胺包括来那度胺原料药以及以来那度胺为活性成分的药物制剂，例如来那度胺胶囊剂、来那度胺片剂、来那度胺缓释片、来那度胺微丸等。
[0012]
本发明中所述的高效液相色谱法检测在高效液相色谱分析仪中进行，所述的高效液相色谱分析仪优选配备紫外检测器。
[0013]
本发明中，所述的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱welchultimate xb-c18 优选
welchultimate xb-c18，4.6mm
×
250mm，5μm色谱柱。
[0014]
本发明中，所述的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱welchultimate xb-c18 的柱温优选28℃～32℃，例如30℃。
[0015]
本发明中，所述的流动相a的浓度优选0.010mol/l～0.030mol/l，进一步优选0.015mol/l～0.025mol/l，例如0.020mol/l。
[0016]
本发明中，所述的流动相a的ph可以为2.0或2.1。
[0017]
本发明中，所述的流动相a中的磷酸盐优选磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾和磷酸氢二钠中的一种或多种，进一步优选磷酸二氢钾。
[0018]
本发明中，所述的流动相a的配制步骤优选：将磷酸盐的溶液中加入磷酸，调节ph至2.0～2.1即可。
[0019]
本发明中，所述的高效液相色谱的测试的检测波长优选208nm～212nm，进一步优选209nm～211nm，例如210nm。
[0020]
本发明中，所述的高效液相色谱的测试的进样量优选5μl～15μl，进一步优选8μl～12μl，例如10μl。
[0021]
本发明中，所述的高效液相色谱的测试的运行时间优选55分钟～65分钟，进一步优选58分钟～62分钟，例如60分钟。
[0022]
本发明中，所述的流动相a与流动相b的梯度洗脱梯度优选如下：
[0023]
时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)095520901045257550257550.195560955
[0024]
本发明中，所述的一种来那度胺中有关物质的检测方法，优选包括以下步骤：稀释剂配制、供试样品溶液配制、杂质对照储备液配制、对照品溶液配制以及系统适应性溶液配制的步骤；以上溶液配制的步骤不分先后。
[0025]
所述的稀释剂(空白溶液)优选采用以下步骤配制：用流动相a对二甲亚砜定容，其中二甲亚砜的体积占溶液总体积的15％～45％，进一步优选 25％～35％，例如30％。
[0026]
所述的供试样品优选采用以下步骤配制：将供试样品，用所述的稀释剂溶解、稀释、摇匀，即可。所述的溶解优选超声溶解。所述的稀释优选在量瓶中进行。
[0027]
所述的杂质对照储备液优选采用以下步骤配制：分别取所述的杂质i-杂质vi对照品(所述的杂质i、杂质ii、杂质iii、杂质iv、杂质v和杂质 vi)，加乙腈溶解、稀释、摇匀即可。所述的定容优选在量瓶中进行。所述的杂质的浓度优选10μg/ml～20μg/ml，例如15μg/ml。
[0028]
所述的对照品溶液优选以下步骤配制：精密移取所述的杂质对照贮备液 1ml，置于50ml量瓶中，加二甲基亚砜15ml，并用所述的流动相a定量稀释至刻度，摇匀即可。
[0029]
所述的系统适应性溶液配制优选以下步骤：取所述的来那度胺供试品 250mg，精密称定，置于50ml量瓶中，加二甲基亚砜15ml超声溶解，另精密移取所述的杂质对照贮备液
1ml，用所述的流动相a定量至刻度，摇匀即得。
[0030]
本发明中，所述的一种来那度胺中有关物质的检测方法，进一步优选包括以下步骤：
[0031]
步骤1稀释剂配制(即空白溶液配制)：用流动相a对二甲亚砜定容，其中二甲亚砜的体积占溶液总体积的15％～45％，进一步优选25％～35％，例如30％；
[0032]
步骤2供试样品配制：将来那度胺供试样品，用步骤1配制的稀释剂溶解、稀释、摇匀，即可；所述的溶解优选超声溶解；所述的稀释优选在量瓶中进行；
[0033]
步骤3杂质对照储备液配制：分别取所述的杂质i-杂质vi对照品(所述的杂质i、ii、iii、iv、v和vi)，加乙腈溶解、稀释、摇匀即可；所述的定容优选在量瓶中进行；所述的杂质的浓度优选10μg/ml～20μg/ml，例如 15μg/ml；
[0034]
步骤4对照品溶液配制：精密移取步骤3制备的杂质对照贮备液1ml，置于50ml量瓶中，加二甲基亚砜15ml，并用流动相a定量稀释至刻度，摇匀即可；
[0035]
步骤5系统适应性溶液配制：取来那度胺供试品250mg，精密称定，置于50ml量瓶中，加二甲基亚砜15ml超声溶解，另精密移取步骤3制备的杂质对照贮备液1ml，用所述的流动相a定量至刻度，摇匀即得；
[0036]
步骤6进样：系统充分平衡后，步骤1配制的稀释剂(即空白溶液)1～2 针；步骤5配制的系统适用性溶液1针；步骤4配制的对照品溶液5针，步骤2配制的供试品溶液1针，记录色谱图；
[0037]
步骤7系统适应性：空白溶液应对系统适用性溶液色谱图中各杂质峰无干扰；系统适用性溶液色谱图中，各杂质峰的分离度不得小于1.2；对照品溶液连续进样6次，主峰峰面积和保留时间的相对标准偏差(rsd)不得过 5.0％；
[0038]
步骤1-5顺序可以调整。
[0039]
本发明中，所述的一种来那度胺中有关物质的检测方法中来那度胺及有关物质的含量优选采用外标法以峰面积计算；
[0040][0041]m对
：对照品称样量，mg；p
对
：对照品含量；a
对
：对照品溶液待测成分的峰面积；d
对
：对照品稀释倍数；a
样
：供试品溶液中待测成分的峰面积； d
样
：供试品稀释倍数；m
样
：供试品称样量，mg。
[0042]
本发明的一种来那度胺中有关物质的检测方法，各杂质间分离度大于等于2.5。
[0043]
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
[0044]
本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0045]
本发明的积极进步效果在于：本发明的检测方法，能够同时那度胺6种杂质(包括杂质i、ii、iii、iv、v和vi)、且分离度高达到2.5以上，方法操作简单，适合于来那度胺原料药及药物制剂的质量控制。
附图说明
[0046]
图1表示实施例1制得的来那度胺的高效液相色谱谱图。其中，1表示杂质i的色谱
峰；2表示杂质ii的色谱峰；3表示杂质iii的色谱峰；4表示杂质iv的色谱峰；5表示杂质v的色谱峰；6表示杂质vi的色谱峰。
具体实施方式
[0047]
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0048]
实施例1：
[0049]
分析方法：
[0050]
[0051]
[0052][0053]
高效液相色谱的测试谱图见图1，测试数据见表1。可见，该方法能有效的将所述的杂质i-杂质vi有效分离，分离度大于2.5。
[0054]
表1实施例1的高效液相色谱测试数据
[0055][0056]
对比实施例
[0057]
高效液相色谱的测试条件的耐用性范围筛选：
[0058][0059][0060]
注：上述
“-”
标记部分说明与相邻色谱峰未基线分离。
[0061]
流动相梯度条件筛选：
[0062][0063]
2.色谱柱筛选
[0064]
采用waters xselect hss c18(4.6mm
×
250mm，5μm)，杂质ii与相邻色谱峰未基线分离。该色谱柱无法有效分离各杂质。