一种测定小飞扬草中没食子酸含量的方法与流程

1.本发明属于涉及分析检测技术领域，具体涉及一种测定小飞扬草中没食子酸含量的方法。


背景技术：

2.小飞扬草其广泛分布在广东、广西、福建及海南等热带与亚热带地区的一年生的草本植物。其中化学成分主要有没食子酸、槲皮苷、杨梅苷等。其具有清热，解毒，渗湿，杀虫止痒功效，可用于治疗急性肠炎，菌痢，呼吸道感染，尿路感染等疾病，外治顽癣，皮炎，湿疹等皮肤病，也是典型的南药资源。
3.目前检测没食子酸含量的测定方法常见为：hplc、薄层扫描法、近红外测定等测定方法。但上述测定方法存在以下缺陷：灵敏度、精密度和准确度较差，有机溶剂使用量较多，对环境污染大；因此，有必要开发出一种更为快速简便、绿色环保的测定方法。


技术实现要素：

4.本发明目的在于为克服现有的技术缺陷，提供一种测定小飞扬草中没食子酸含量的方法，具有重现性好，灵敏度、精密度和准确度高，有机溶剂用量少的优点。
5.为了解决上述技术问题，本发明提供了一种测定小飞扬草中没食子酸含量的方法，包括以下步骤：
6.步骤1：取小飞扬草药材粉碎成粗粉，加入有机溶剂没过粗粉后浸泡，进行超声提取后冷却过滤蒸干得到滤渣，滤渣用甲醇溶解并定容，滴加显色剂显色，得到待检测样品；
7.步骤2：在波长610-620nm处测定待检测样品的吸光度y，并根据线性回归方程计算得到待检测样品中没食子酸含量；
8.所述线性回归方程为：y＝0.67602x 0.00032；
9.其中，y为待检测样品的吸光度，x为待检测样品中没食子酸含量。
10.进一步地，步骤1中，所述有机溶剂为乙醇。
11.进一步地，所述乙醇为60％～95％乙醇。
12.进一步地，所述步骤1中，浸泡时间为1～3h。
13.进一步地，步骤1中，所述超声提取的时间为30～60min。
14.进一步地，步骤1中，所述超声提取次数为2次。
15.进一步地，步骤1中，所述显色剂为1％三氯化铁乙醇溶液。
16.进一步地，步骤2中，所述检测波长为615nm。
17.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
18.本发明利用紫外可见分光光度法灵敏度高、选择性好、精密度和准确度较高、操作比较简单、分析速度快的优点，通过推导出特定的线性回归方程，直接采用紫外可见分光光度法测定待测样品的吸光度，代入线性回归方程即可计算出待检测样品中没食子酸含量；与现有技术相比，本发明的测定方法，具有专属性强，重现性较好，结果准确，灵敏度、精密
度和准确度高，有机溶剂用量少的优点。
具体实施方式
19.为了更充分的理解本发明的技术内容，下面将结合本发明的实施例中，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
20.对于本领域的技术人员来说，通过阅读本说明书的公开内容，本发明的特征、有益效果和优点将变得显而易见。
21.本文中“包括”、“包含”、“含”、“含有”、“具有”或其它变体意在涵盖非封闭式包括，这些术语之间不作区分。术语“包含”是指可加入不影响最终结果的其它步骤和成分。术语“包含”还包括术语“由
…
组成”和“基本上由
…
组成”。
22.本发明采用的仪器和试剂如下所示：
23.仪器：uv-2600紫外可见分光光度计，kq-500de数控超声清洗器，dfy300c快速开盖高速粉碎机，ms105du分析天平，me204e分析天平；
24.试剂：所用试剂均为分析纯，水为纯化水。
25.显色剂：1％三氯化铁乙醇溶液。
26.本发明实施例中的小飞扬草药材均取自同一批次产品。
27.实施例1：线性回归方程的确定
28.精密称取20mg没食子酸对照品置于20ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为1mg/ml的对照品贮备液。
29.分别量取该对照品贮备液0.5、1、2、3、5ml，置10ml量瓶，加入显色剂，甲醇定容摇匀，并测定其在615nm波长下的吸光度，测试结果如下表1所示。
30.以对照品浓度(mg/ml)为横坐标，吸光度(a)为纵坐标，绘制标准曲线，并对测得的数据进行回归分析，得到回归方程为y＝0.67602x 0.00032，相关系数r2＝0.99995。
31.表1：吸光度测试结果以及线性关系考察试验数据
[0032][0033]
根据表1结果表明，浓度在0.05～0.5mg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系，可根据测得的吸光度y通过上述线性回归方程计算出没食子酸的浓度x。
[0034]
实施例2：精密度试验
[0035]
取同一浓度(0.2mg/ml)的对照品溶液，在615nm波长下连续测定6次。结果见下表2。
[0036]
表2：精密度试验数据
[0037][0038]
结论：根据吸光度结果计算得相对标准偏差为0.78％，表明实施例1的精密度良好。
[0039]
实施例3：重复性试验
[0040]
取小飞扬草药材10g，粉碎成粗粉，加入适量的95％乙醇没过药面浸泡3h，超声提取60min，提取2次，冷却，过滤，蒸干，滤渣用甲醇溶解并定容至10ml量瓶，滴加1％三氯化铁乙醇溶液显色。采用该方法连续制备6份供试品，在615nm波长下分别测定吸光度y，并计算得到没食子酸含量，试验数据见表3。
[0041]
表3：重复性试验数据
[0042][0043]
由表3的测试结果可得，6份供试品吸光度测定值的平均值为0.313％，rsd为1.562％，表明该方法重复性良好。
[0044]
实施例4：稳定性试验
[0045]
取小飞扬草药材10g，粉碎成粗粉，加入95％乙醇过药面浸泡3h，超声提取60min，提取2次，冷却，过滤，蒸干，滤渣用甲醇溶解并定容至10ml量瓶，滴加1％三氯化铁乙醇溶液显色。在615nm波长下分别在0、1、2、3、8、12h测定吸光度。吸光度测定值的平均值为0.210，rsd为0.89％，数据见表4。
[0046]
表4：稳定性试验数据
[0047]
[0048]
根据表4的测试数据可知，本发明的测定方法具有较强的稳定性。
[0049]
实施例5：加样回收率试验
[0050]
为了验证所建立的方法对供试品含量测定是否有影响，对相同浓度的同一批供试品进行6次的回收率实验，测试结果见下表5。
[0051]
表5：加样回收率结果
[0052][0053]
结果表明，测得没食子酸的平均回收率为99.85％，rsd％＝0.46％，所测得结果符合规定的平均回收率85％～120％范围，表明该方法可行。
[0054]
实施例6：样品含量测定
[0055]
取小飞扬草药材10g，粉碎成粗粉，加入适量的60％乙醇没过药面浸泡1h，超声提取30min，提取2次，冷却，过滤，蒸干，滤渣用甲醇溶解并定容至10ml量瓶，滴加1％三氯化铁乙醇溶液显色，得到样品1；
[0056]
取小飞扬草药材10g，粉碎成粗粉，加入适量的75％乙醇没过药面浸泡2h，超声提取45min，提取2次，冷却，过滤，蒸干，滤渣用甲醇溶解并定容至10ml量瓶，滴加1％三氯化铁乙醇溶液显色，得到样品2；
[0057]
取小飞扬草药材10g，粉碎成粗粉，加入适量的95％乙醇没过药面浸泡3h，超声提取60min，提取2次，冷却，过滤，蒸干，滤渣用甲醇溶解并定容至10ml量瓶，滴加1％三氯化铁乙醇溶液显色，得到样品3；
[0058]
采用上述方法测试吸光度并根据线性回归方程计算样品1、样品2和样品3中没食子酸含量，结果如表6所示。
[0059]
表6：样品含量测定结果
[0060][0061]
由表6的测试结果可知，采用本发明的方法对同一批次的小飞扬草药材进行测试，其测试结果的rsd＝1.604640688％，不大于5％，说明本发明的测定方法准确度良好。
[0062]
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。