一种治疗KRAS突变型肠癌的药物组合物及其联合用药物的制作方法

一种治疗kras突变型肠癌的药物组合物及其联合用药物
技术领域
1.本发明涉及抗癌药物领域，具体涉及一种治疗kras突变型肠癌的药物组合物及其联合用药物。


背景技术：

2.肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率和病死率分别位居城市恶性肿瘤第3位和第4位。与消化道其他晚期恶性肿瘤相比，由于早诊筛查的普及、新的分子靶点的发现以及相应靶向药物的运用，使得结直肠癌患者5年生存率得以明显提高。靶向药物西妥昔单抗的上市使得肠癌的治疗有了较大的进展，但约50％的肠癌患者存在kras基因的突变，这些患者并不能从西妥昔单抗治疗中获益，所以肠癌的治疗仍面临巨大挑战。探寻肠癌发生的新机制和潜在的新靶点，仍是肠癌临床转化研究中亟待解决的重要问题。
3.曲美替尼(gsk1120212)是一种新型的变构型小分子口服mek抑制剂，2013年，fda批准其与达拉非尼用于brafv600e/k突变的不可切除的/转移性黑色素瘤的治疗。2017年，该方案被批准用于brafv600e突变的非小细胞性肺癌。2020年，nccn指南推荐达拉非尼 曲美替尼 西妥昔单抗用于braf v600e突变结直肠癌患者。但由于研究数据并不算特别充分，暂时只放到iii级专家推荐。
4.sert(五羟色胺转运蛋白)由人体17号染色体上的slc4a6基因编码，是一种na

/cl-依赖型转运蛋白，具有12次跨膜结构，通过钠和氯化物依赖的方式内化5-ht。肠上皮细胞通过sert重吸收5-ht用于再循环和/或降解以终止信号传导。舍曲林是一种sert抑制剂，是抑郁症治疗的一线临床用药，多项流行病学研究报道其与包括肠癌在内的多种肿瘤风险降低有关，并在多项体内外研究中得到了证实。
[0005][0006]
但是，目前尚未将曲美替尼和舍曲林联合使用治疗肠癌，特别是kras突变型肠癌。


技术实现要素：

[0007]
本发明的目的是提供一种治疗kras突变型肠癌的药物组合物及其联合用药物。
[0008]
本发明提供了一种治疗癌症的药物组合物，它是由sert抑制剂和mek抑制剂组成。
[0009]
进一步地，所述sert抑制剂为舍曲林；所述mek抑制剂为曲美替尼。
[0010]
进一步地，所述sert抑制剂和mek抑制剂的摩尔比为(20-200)：1。
[0011]
优选地，所述sert抑制剂和mek抑制剂的摩尔比为(27～200)：1。
[0012]
本发明还提供了一种制备前述的药物组合物的方法，它包括如下步骤：称取sert抑制剂和mek抑制剂，混合，即得。
[0013]
本发明还提供了前述的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途；优选地，所述癌症为肠癌；更优选地，所述癌症为kras突变型肠癌。
[0014]
本发明还提供了一种药物制剂，它是以前述的药物组合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
[0015]
本发明还提供了一种治疗癌症的联合用药物，它含有相同或者不同规格的同时或者分别给药的sert抑制剂和mek抑制剂，以及药学上可接受的载体。
[0016]
进一步地，所述sert抑制剂为舍曲林；所述mek抑制剂为曲美替尼。
[0017]
进一步地，所述sert抑制剂和mek抑制剂的摩尔比为(20～200)：1。
[0018]
优选地，所述sert抑制剂和mek抑制剂的摩尔比为(27～200)：1。
[0019]
本发明还提供了前述的联合用药物在制备治疗癌症的药物中的用途；优选地，所述癌症为肠癌；更优选地，所述癌症为kras突变型肠癌。
[0020]
本发明研究表明mek抑制剂曲美替尼和sert抑制剂舍曲林对肠癌细胞的增殖，特别是对kras突变型肠癌细胞的增殖具有良好的抑制作用，效果显著优于单独使用mek抑制剂曲美替尼和sert抑制剂舍曲林，发挥了协同增效作用。mek抑制剂曲美替尼和sert抑制剂舍曲林既可以采用联合用药的方式，又可制成药用组合物或制剂，可用于治疗肠癌，特别是kras突变型肠癌，具有良好的应用前景。
[0021]
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0022]
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
[0023]
图1为舍曲林和曲美替尼体外协同抑制肠癌细胞增殖的结果：a为舍曲林和曲美替尼对sw480细胞的协同指数；b为舍曲林(10μm)和曲美替尼(50nm)对sw480细胞增殖的联合抑制效果；c为舍曲林和曲美替尼对hct116细胞的协同指数；d为舍曲林(10μm)和曲美替尼(50nm)对hct116细胞增殖的联合抑制效果。
[0024]
图2为hct116细胞和sw480细胞克隆形成实验结果。
[0025]
图3为hct116细胞和sw480细胞蛋白免疫印迹显示结果。
[0026]
图4为舍曲林和曲美替尼在裸鼠皮下移植瘤模型中联合抑制肿瘤效果：a为实验第13天后裸鼠体内肿瘤实体图；b为随时间增加裸鼠体内肿瘤的体积；c为实验第13天后裸鼠体内肿瘤的重量。
具体实施方式
[0027]
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
[0028]
实施例1、sert抑制剂联合mek抑制剂在体外抑制肠癌细胞
[0029]
kras突变的人结肠癌细胞：sw480(kras g12v)，hct116(kras g13d)。
[0030]
sert抑制剂：舍曲林(sertra)。
[0031]
mek抑制剂：曲美替尼(trame)。
[0032]
1、实验方法
[0033]
实验分组：
①
对照组：使用dmso处理细胞；
②
舍曲林组，单独使用舍曲林处理细胞；
③
曲美替尼组，单独使用曲美替尼处理细胞；
④
舍曲林 曲美替尼组，使用舍曲林和曲美替尼同时处理细胞，舍曲林与曲美替尼的摩尔比为200:1。舍曲林和曲美替尼使用时用dmso配制成不同浓度的溶液。
[0034]
(1)cck8检测细胞活力
[0035]
分别对处于对数生长期的细胞sw480和hct116加入不同药物进行处理：
[0036]
对照组：加入dmso；
[0037]
舍曲林组(sertra)：分别加入浓度为5μm、10μm、15μm的舍曲林；
[0038]
曲美替尼组(trame)：分别加入浓度为25nm、50nm、75nm的曲美替尼；
[0039]
舍曲林 曲美替尼组(s t)：加入浓度为5μm的舍曲林和浓度为25nm的曲美替尼，或加入浓度为10μm的舍曲林和浓度为50nm的曲美替尼，或加入浓度为15μm的舍曲林和浓度为75nm的曲美替尼(舍曲林与曲美替尼的摩尔比为200:1)。
[0040]
各组加入药物的体积相同。
[0041]
加入药物后的细胞培养2天，然后采用cck8检测细胞活力，并结果运用chou-talalay公式计算协同指数(ci)，ci《1说明两种药物具有协同增效作用。
[0042]
(2)观察细胞克隆形成
[0043]
采用有限稀释法克隆培养细胞sw480和hct116。
[0044]
按照“(1)cck8检测细胞活力”的分组对细胞进行不同的药物处理，
[0045]
对照组：加入dmso；
[0046]
舍曲林组(sertra)：加入浓度为15μm的舍曲林；
[0047]
曲美替尼组(trame)：加入浓度为75nm的曲美替尼；
[0048]
舍曲林 曲美替尼组(s t)：加入浓度为15μm的舍曲林和浓度为75nm的曲美替尼(舍曲林与曲美替尼的摩尔比为200：1)。
[0049]
加入药物后的细胞培养7天，7天后使用结晶紫染色，观察细胞克隆数量。
[0050]
(3)蛋白免疫印迹
[0051]
分别对处于对数生长期的细胞sw480和hct116加入不同药物进行处理：分组按照“(2)观察细胞克隆形成”所述：
[0052]
对照组：加入dmso；
[0053]
舍曲林组(sertra)：加入浓度为15μm的舍曲林；
[0054]
曲美替尼组(trame)：加入浓度为75nm的曲美替尼；
[0055]
舍曲林 曲美替尼组(s t)：加入浓度为15μm的舍曲林和浓度为75nm的曲美替尼(舍曲林与曲美替尼的摩尔比为200：1)。
[0056]
细胞培养24h后，提取细胞总蛋白，进行蛋白免疫印迹实验，检测c-myc(增殖相关蛋白)、cyclin d1(周期相关蛋白)、parp1(凋亡相关蛋白)、bcl-xl(凋亡相关蛋白)和gapdh(作为内参)的蛋白水平。
[0057]
2、实验结果
[0058]
实验结果显示：对于kras突变的hct116细胞和sw480细胞，舍曲林 曲美替尼组的相对细胞增殖比例均显著低于单药舍曲林组和曲美替尼组，并ci值均小于1(图1)，说明舍曲林联合曲美替尼使用对于治疗kras突变的肠癌具有协同增效作用。
[0059]
图2为hct116细胞和sw480细胞克隆形成实验结果，由图2可知舍曲林 曲美替尼组的两种细胞克隆数均明显少于单药舍曲林组和曲美替尼组。说明舍曲林和曲美替尼联合使用可抑制细胞增殖。
[0060]
图3为hct116细胞和sw480细胞蛋白免疫印迹显示结果，由图3可知在两种肠癌细胞中，舍曲林和曲美替尼联合用药都显著升高了cleaved parp1的表达，降低了bcl-xl、cyclind1的表达，与cck8和克隆形成实验的结果一致。
[0061]
3、结论
[0062]
联合使用舍曲林和曲美替尼，相比舍曲林或曲美替尼单独使用，对抑制kras突变型肠癌细胞增殖发挥了协同增效的作用，有更好的抑制kras突变型肠癌细胞增殖的能力。
[0063]
实施例2、sert抑制剂联合mek抑制剂在体内抑制肠癌细胞
[0064]
肠癌细胞株：hct116(kras g13d)。
[0065]
sert抑制剂：舍曲林。
[0066]
mek抑制剂：曲美替尼。
[0067]
动物模型构建与分组：将肠癌细胞株异种移植到裸鼠(balb/c，4-5周，购于北京华阜康生物科技有限公司)皮下，待肿瘤可触及之后(移植后5天，小鼠体内肿瘤体积大约为100mm3)，将裸鼠随机分为4组，分别为对照组、舍曲林组、曲美替尼组、舍曲林 曲美替尼组。
[0068]
1、实验方法
[0069]
1.1实验处理：
①
对照组：即模型组，不使用药物治疗，使用生理盐水替代治疗；
②
舍曲林组，单独使用舍曲林治疗，口服舍曲林30mg/kg，每天一次；
③
曲美替尼组，单独使用曲美替尼治疗，腹腔注射曲美替尼2mg/kg，每天一次；
④
舍曲林 曲美替尼组，使用舍曲林和曲美替尼同时治疗，口服舍曲林30mg/kg和腹腔注射曲美替尼2mg/kg，每天一次，舍曲林与曲美替尼的摩尔比为27:1。从移植后第5天开始给药，共给药8天(即实验的第13天)，然后处死小鼠，进行观察。
[0070]
1.2实验观察：每两天测定一次裸鼠移植肿瘤体积，并在实验的第13天分批处死动物，取出肿瘤并测量肿瘤大小与体积。
[0071]
2、实验结果
[0072]
实验第13天裸鼠体内肿瘤如图4a所示；随移植时间增加，裸鼠体内肿瘤体积的变化如图4b所示；实验第13天裸鼠体内肿瘤重量如图4c所示。由图4可知：联合用药(舍曲林 曲美替尼)组的肿瘤体积最小，重量最轻；且联合用药组肿瘤增长趋势最缓慢。与对照组和单独用药组相比，联合用药组对体内肿瘤增长的抑制效果最佳。
[0073]
3、结论
[0074]
联合使用舍曲林和曲美替尼，相比舍曲林或曲美替尼单独使用，对于肠癌组织的抑制具有协同增效作用，能在体内发挥更为有效的抑制肠癌的能力。
[0075]
综上，本发明研究表明mek抑制剂曲美替尼和sert抑制剂舍曲林对肠癌细胞的增殖，特别是对kras突变型肠癌细胞的增殖具有良好的抑制作用，效果显著优于单独使用mek抑制剂曲美替尼和sert抑制剂舍曲林，发挥了协同增效作用。mek抑制剂曲美替尼和sert抑
制剂舍曲林既可以采用联合用药的方式，又可制成药用组合物或制剂，可用于治疗肠癌，特别是kras突变型肠癌，具有良好的应用前景。