含氟化合物在制备治疗癌症药物中的应用的制作方法

1.本发明属于癌症治疗领域，具体涉及溴苯取代的三氟甲基苯并环戊酮在癌症治疗中的应用。


背景技术：

2.癌症是由于机体细胞失去正常调控,过度增殖而引起的疾病。过度增殖的细胞称癌细胞，癌细胞常可侵犯周围组织(浸润，invasion), 甚至可经体内循环系统和/或淋巴系统转移到身体其他部分(癌症转移)。
3.同时，肺癌已成为致死率排名第一的癌症，其每年的新发病人数一直居高不下，已成为严重影响人类健康的疾病之一(siegel rl,millerkd,jemal a:cancer statistics,2020.ca cancer j clin 2020,70(1):7-30)。虽然随着医疗技术的发展，肺癌的早期诊断及治疗方法已经有了很大提高，但患者5年生存率依然不足15％(yan l,zhang y,li k,wang m, li j,qi z,wu j,wang z,ling l,liu h et al:mir-593-5p inhibit cellproliferation by targeting plk1 in non small cell lung cancer cells.patholres pract 2020,216(2):152786)。
4.因此，研究并发现一些治疗癌症，尤其是针对肺癌新的治疗药物，对提高患者的生活质量将会起到非常重要的作用。


技术实现要素：

5.(一)解决的技术问题
6.本发明提供了一种治疗癌症的药物，尤其是提供一种治疗肺癌的药物，以延长癌症患者的寿命。
7.(二)技术方案
8.为实现以上目的，在一个实施例中，本发明提供了化合物ⅰ在制备治疗癌症药物中的应用，所述化合物ⅰ的结构式如下：
[0009][0010]
优选地，所述癌症选自肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、结直肠癌、白血病、脑瘤、鼻咽癌、胰腺癌、膀胱癌、乳腺癌、骨癌、子宫颈癌。
[0011]
优选地，所述癌症选自肺癌。
[0012]
在一个实施例中，本发明提供了一种药物制剂，所述药物制剂包括化合物ⅰ，所述化合物ⅰ的结构式如下：
[0013][0014]
优选地，所述制剂选自液体剂型、固体剂型、半固体剂型或气体剂型。
[0015]
优选地，所述液体剂型包括溶液剂、注射剂、输液剂或口服液。
[0016]
优选地，所述固体剂型包括片剂、胶囊剂、散剂或颗粒剂。
[0017]
优选地，所述半固体剂型包括软膏剂或凝胶剂。
[0018]
优选地，所述气体剂型包括气雾剂或喷雾剂。
[0019]
在另一个实施例中，本发明提供了上述任一项药物制剂在制备治疗癌症药物中的应用；优选地，所述癌症选自肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、结直肠癌、白血病、脑瘤、鼻咽癌、胰腺癌、膀胱癌、乳腺癌、骨癌、子宫颈癌；优选地，所述癌症选自肺癌。
[0020]
(三)有益效果
[0021]
本发明提供的化合物ⅰ以浓度依赖性抑制肺癌a549细胞的增殖，本发明结果揭示了化合物ⅰ具有抗肺癌增殖的活性及其可能的作用机制，为肺癌的化疗药物研发提供了一个潜在的目标分子。
附图说明
[0022]
图1化合物ⅰ的结构式
[0023]
图2应用cck-8法检测化合物ⅰ对a549细胞活力的影响程度
[0024]
图3应用cck-8法检测化合物ⅱ对a549细胞活力的影响程度
[0025]
图4应用cck-8法检测化合物ⅲ对a549细胞活力的影响程度
[0026]
图5应用cck-8法检测化合物ⅳ对a549细胞活力的影响程度图6化合物ⅰ对a549细胞增殖的影响程度
[0027]
图7采用western blot法检测化合物ⅰ对细胞增殖相关信号通路的影响
具体实施方式
[0028]
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0029]
下面通过具体的实施例进行详细的说明。
[0030]
本发明人肺癌细胞株a549购于中国科学院上海细胞库，胎牛血清购自sigma，edu试剂盒购于广州锐博生物科技有限公司；cck-8试剂盒购于北京凯基生物科技有限公司；p-akt、akt、p-mtor、mtor 和gapdh一抗购于cell signaling technology；二抗购于santa cruz 公司。
[0031]
化合物
ⅰ‑
化合物ⅳ的结构式如下：
[0032][0033]
化合物ⅰ(代号为xx0235)
[0034][0035]
化合物ⅱ(代号为xx00125)
[0036][0037]
化合物ⅲ(代号为xx00126)
[0038][0039]
化合物ⅳ(代号为xx00136)
[0040]
数据处理和统计分析采用spss19.0软件。所有数据以均数
±
标准差(mean
±
sd)表示，组间比较采用单因素方差分析，以p《0.05表示差异具有统计学意义。
[0041]
实施例1化合物
ⅰ‑
化合物ⅳ抑制a549细胞活力
[0042]
肺癌a549细胞培养在37℃、5％的co2环境中，培养液配方为含 10％的胎牛血清的dmem完全培养基。待细胞培养到对数期后进行后续实验。
[0043]
使用浓度为6.25、12.5、25和50μg/ml的含氟化合物-化合物
ⅰ‑ꢀ
化合物ⅳ处理a549细胞24h后，通过cck-8法检测细胞活力。结果表明：与dmso对照组相比，浓度为6.25、12.5、25和50μg/ml的化合物ⅰ(xx0235)处理后细胞的相对活力分别下降，且呈现浓度下降，表明化合物ⅰ可以剂量依耐性抑制a549细胞的活力(见图2)。运用 graphpad软件(v8.0)计算了化合物ⅰ的ic
50
值为41.25μg/ml(图2)。而化合物
ⅱ‑
化合物ⅳ处理后，a549细胞的相对活力并未呈现浓度下降趋势，没有剂量依耐性抑制a549细胞活力的作用(见图3-5)。
[0044]
所述cck-8法检测细胞活力具体为：将人肺癌细胞a549按照密度为每孔5
×
103个细胞，接种到96孔板中。待细胞贴壁后，加入浓度为(6.25、12.5、25和50μg/ml)的处理细胞。24h后，加入cck-8 试剂使其浓度为每孔2.5g/l，继续培养2h，在450nm波长下使用酶标仪测
定每孔的吸光度(a)值。细胞相对活力的计算公式为：细胞相对活力＝实验组
a450值
/空白对照组
a450值
。
[0045]
实施例2化合物ⅰ抑制a549细胞增殖
[0046]
使用edu试剂盒检测化合物ⅰ对a549细胞增殖的影响。实验结果表明，与dmso对照组相比，浓度为6.25、12.5、25和50μg/ml的化合物ⅰ处理后edu阳性细胞相对数分别下降29％(p《0.05)、42％ (p《0.01)、50％(p《0.01)和61％(p《0.0001)，见图6，说明化合物ⅰ可以浓度依赖性抑制a549细胞增殖。
[0047]
所述edu试剂盒检测细胞增殖情况具体为：将人肺癌细胞a549 按照密度为每孔3
×
105个细胞，接种到24孔板中。细胞贴壁后，加入浓度为(0、6.25、12.5、25和50μg/ml)的化合物ⅰ处理细胞。24h 后，用细胞完全培养基按照1000:1的比例稀释edu溶液(试剂a), 制备300μl的50μm的edu培养基，37℃孵育2h；pbs清洗细胞3 次，每次5min；随后每孔加入150μl浓度为4％多聚甲醛，固定30min；随后弃去固定液，每孔加入150μl浓度为2mg/ml甘氨酸，孵育5min；弃去溶液，加入pbs脱色摇床清洗细胞3次，每次5min；每孔加入300μl 渗透剂(含0.5％tritonx100的pbs)脱色摇床孵育10min，pbs清洗 1次；随后每孔加入300μl的apollo染色液，避光、室温、脱色摇床孵育30min；再用渗透剂清洗2-3次，每次10min；最后制备适量 1
×
hoechst 33342反应液进行dna染色，每孔加入300μl染色液，避光、室温、脱色摇床孵育30min，再用pbs清洗3次；染色完成后立即通过荧光倒置显微镜观察并拍照。
[0048]
实施例3化合物ⅰ通过抑制akt-mtor信号通路抑制a549细胞增殖
[0049]
cck-8及edu实验表明，化合物ⅰ抑制了肺癌a549细胞的活力与增殖，因此我们采用western blot法对细胞增殖相关信号通路进行了测定。结果表明：与dmso对照组相比，浓度为6.25、12.5、25和50μg/ml 的化合物ⅰ处理后细胞后，akt及mtor的磷酸化水平受到了明显抑制，且其本底蛋白表达水平未发生任何变化(见图7)。
[0050]
所述western blot法对细胞增殖相关信号通路进行测定，以检测细胞增殖相关蛋白表达具体包括：将人肺癌细胞a549按照密度为每孔 6
×
105个细胞，接种到12孔板中。细胞贴壁后，加入浓度为(6.25、12.5、 25和50μg/ml)的化合物ⅰ处理细胞。24h后，收集细胞加入rapi 裂解细胞，12000
×
g离心5min，收集上清液。bca法测定各组样品蛋白浓度，加入5
×
蛋白上样缓冲液，100℃，5min。根据各组的蛋白浓度，按照80μg蛋白量进行sds-page电泳，电泳结束后将蛋白转移到 pvdf膜上。用tbst配制的5％的bsa封闭pvdf膜，室温孵育1h。然后加入稀释的一抗(1∶1500)，4℃孵育过夜。tbst清洗3次，每次10min。加入稀释好的二抗(1:5000)，室温孵育1h，tbst清洗3 次，每次10min。清洗好的膜放入曝光暗盒中，正面朝上，加入发光底物，暗室压片曝光。
[0051]
本发明表明化合物ⅰ以浓度依耐性抑制肺癌a549细胞的增殖，本发明结果揭示了化合物ⅰ具有抗肺癌增殖的活性及其可能的作用机制，为肺癌的化疗药物研发提供了一个潜在的目标分子。
[0052]
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备
所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个
……”
限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
[0053]
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。