一种可重复使用的免疫细胞培养罐的制作方法

1.本实用新型涉及细胞培养领域，具体为一种可重复使用的免疫细胞培养罐。


背景技术：

2.自然杀伤细胞(natural killer cell，nk)是机体重要的免疫细胞，主要分布于外周血，以外周血单个核细胞(pbmc)为起始种子细胞，结合多种细胞因子的诱导和刺激，实现nk细胞体外特异性的高效扩增。目前培养操作停留在人工操作阶段，培养规模较小，常用的培养器皿包括培养罐、细胞培养袋，均为一次性使用的、小规模培养的器皿，培养器皿使用具有很大的局限，不能重复使用进行免疫细胞培养，也无法进行在线检测，难以控制细胞的生长环境。


技术实现要素：

3.本实用新型目的在于提供一种可重复使用的免疫细胞培养罐，本发明为可重复使用的免疫细胞培养罐，可重复灭菌使用，容积不受限制，并配有多种在线检测电极，更有利于实时检测细胞的生长环境数据，优化nk细胞生长条件，提高细胞质量，减少批次间差异。
4.为达成上述目的，本实用新型提出如下技术方案：一种可重复使用的免疫细胞培养罐，包括罐盖、罐体和底板，所述罐体的顶部和底部分别连接有上压板和下压板，所述罐盖位于上压板的顶部，所述底板位于下压板的底部，所述罐体、下压板和底板形成一个容纳空间，所述罐盖覆盖在容纳空间上，所述底板的顶部安装有镂空的支撑板，所述支撑板上铺设有双层膜，所述双层膜的上层为亲水膜、下层为疏水膜，所述罐体、下压板和底板通过密封圈密封，所述罐体、下压板和底板之间通过螺栓连接固定，所述罐盖上安装有搅拌器；
5.所述罐盖上安装有ph电极、do溶氧电极和温度电极，所述罐盖上开设有细胞转移口、细胞收集口和葡萄糖取样口，所述罐盖上还开设有培养基进口、培养基出口、排气口和进气口。
6.进一步的，在本实用新型中，所述搅拌器包括搅拌电机和搅拌桨，所述搅拌电机安装在罐盖上，所述搅拌电机的输出端与搅拌桨固定连接，所述搅拌桨的底部延伸至容纳空间底部。
7.进一步的，在本实用新型中，所述上压板和下压板的直径大于罐体的直径，所述上压板和下压板之间固定连接有支撑杆，所述支撑杆位于罐体的外部。
8.进一步的，在本实用新型中，所述罐体材质为高硼硅玻璃、不锈钢或者塑料其中的一种，所述罐盖为不锈钢材质。
9.进一步的，在本实用新型中，所述罐体的高度为100mm-300mm，所述罐体底面积为150cm
2-3000cm2。
10.进一步的，在本实用新型中，所述罐体、上压板和罐盖通过密封圈密封，所述罐体、上压板和罐盖之间通过螺栓连接固定。
11.进一步的，在本实用新型中，所述罐体和罐盖均为圆柱状。
12.有益效果，本技术的技术方案具备如下技术效果：本技术的免疫细胞培养罐为可重复使用的免疫细胞培养罐，可拆卸、可清洗、可蒸汽灭菌、可重复使用，容积不受限制，并配有多种在线检测电极，更有利于实时检测细胞的生长环境数据，优化nk细胞生长条件，有利于细胞的生长，提高细胞质量，减少批次间差异。
13.应当理解，前述构思以及在下面更加详细地描述的额外构思的所有组合只要在这样的构思不相互矛盾的情况下都可以被视为本公开的实用新型主题的一部分。
14.结合附图从下面的描述中可以更加全面地理解本实用新型教导的前述和其他方面、实施例和特征。本实用新型的其他附加方面例如示例性实施方式的特征和/或有益效果将在下面的描述中显见，或通过根据本实用新型教导的具体实施方式的实践中得知。
附图说明
15.附图不意在按比例绘制。在附图中，在各个图中示出的每个相同或近似相同的组成部分可以用相同的标号表示。为了清晰起见，在每个图中，并非每个组成部分均被标记。现在，将通过例子并参考附图来描述本实用新型的各个方面的实施例，其中：
16.图1为本实用新型主视结构示意图。
17.图2为本实用新型俯视结构示意图。
18.图3为本实用新型底板、下压板和支撑板的结构示意图。
19.图4为本实用新型双层膜的结构示意图。
20.图中，各附图标记的含义如下：1、罐体；2、底板；3、上压板；4、下压板；5、支撑杆；6、支撑板；7、双层膜；8、罐盖；9、搅拌器；10、ph电极； 11、do溶氧电极；12、温度电极；13、细胞转移口；14、细胞收集口；15、葡萄糖取样口；16、培养基出口；17、培养基进口；18、排气口；19、进气口。
具体实施方式
21.为了更了解本实用新型的技术内容，特举具体实施例并配合所附图式说明如下。在本公开中参照附图来描述本实用新型的各方面，附图中示出了许多说明的实施例。本公开的实施例不必定意在包括本实用新型的所有方面。应当理解，上面介绍的多种构思和实施例，以及下面更加详细地描述的那些构思和实施方式可以以很多方式中任意一种来实施，这是因为本实用新型所公开的构思和实施例并不限于任何实施方式。另外，本实用新型公开的一些方面可以单独使用，或者与本实用新型公开的其他方面的任何适当组合来使用。
22.如图1-4所示，一种可重复使用的免疫细胞培养罐，包括罐盖8、罐体1和底板2，所述罐体1和罐盖8均为圆柱状，所述罐体1的顶部和底部分别连接有上压板3和下压板4，所述罐盖8位于上压板3的顶部，所述底板2位于下压板 4的底部，所述罐体1、下压板4和底板2形成一个容纳空间，所述罐盖8覆盖在容纳空间上，本实施例中，所述罐体1、上压板3和罐盖8通过密封圈密封，所述罐体1、上压板3和罐盖8之间通过螺栓连接固定。本罐体1容积可根据nk 细胞培养规模而定，底面积从150cm2～3000cm2，高度可做成100～300mm，培养基可装容积300ml～90000ml。
23.所述底板2的顶部安装有镂空的支撑板6，所述支撑板6上铺设有双层膜7，所述双
层膜7的上层为亲水膜、下层为疏水膜，采用亲水膜有利于细胞贴壁生长，采用疏水膜可利用液气间的浓度差，使气体及液体在罐内流动，有利于细胞的生长。所述罐体1、下压板4和底板2通过密封圈密封，所述罐体1、下压板4和底板2之间通过螺栓连接固定，所述罐盖8上安装有搅拌器9，搅拌器9 低速运转，可以分散细胞，有利计数。
24.所述罐盖8上安装有ph电极10、do溶氧电极11和温度电极12，所述罐盖8上开设有细胞转移口13、细胞收集口14和葡萄糖取样口15，所述罐盖8 上还开设有培养基进口17、培养基出口16、排气口18和进气口19，培养基进口17、培养基出口16、排气口18和进气口194个口各连接的管子，可根据ph电极10和do溶氧电极11检测到的值，通过氮气、氧气、二氧化碳和无菌空气调节罐内的ph和do值，温度电极12检测温度。可通过葡萄糖取样口 15进行葡萄糖检测得出数据，添加培养基，每次补加培养基，可低速启动搅拌器9，使新旧培养基混合均匀。通过细胞转移口13、细胞收集口14进行操作，收细胞前，培养基、细胞悬液可压送转移，可先把细胞上面培养基抽走，减少离心量。
25.本实施例中，所述搅拌器9包括搅拌电机和搅拌桨，所述搅拌电机安装在罐盖8上，所述搅拌电机的输出端与搅拌桨固定连接，所述搅拌桨的底部延伸至容纳空间底部。
26.本实施例中，所述上压板3和下压板4的直径大于罐体1的直径，所述上压板3和下压板4之间固定连接有支撑杆5，所述支撑杆5位于罐体1的外部。
27.本实施例中，所述罐体1材质为高硼硅玻璃，所述罐盖8为不锈钢材质。
28.免疫细胞培养罐在使用时：
29.s1：将清洗干净的培养罐组装好后，各开口连接有连接管的其内塞上棉花，用硫酸纸包裹，再用无毛布包裹，用粗棉线紧绕几圈系好，将培养罐置于高压蒸汽灭菌锅内灭菌30min，121℃。
30.s2：从培养基进口17加入包被液，铺满罐底，4℃过夜。
31.s3：使用前将包被液从培养基出口16排出，用pbs将包被好的培养罐洗涤两次备用。
32.s4：从培养基进口17将配置好密度的细胞悬液接种于培养罐中培养，可根据ph电极10和do溶氧电极11检测到的值，将氮气、氧气、二氧化碳和无菌空气通过排气口18和进气口19排入或排出，进而调节罐内的ph和do值，再根据葡萄糖检测数据，添加培养基。
33.s5：当细胞生长到一定数量收获细胞前，搅拌器9低速运转，即搅拌电机带动搅拌转动，让细胞分散悬浮于培养基中，可从细胞收集口14收获细胞，或从细胞转移口13，通过无菌空气压送至下一级培养罐继续扩增。
34.综上所述，本技术的免疫细胞培养罐为可重复使用的免疫细胞培养罐，可拆卸、可清洗、可蒸汽灭菌、可重复使用，容积不受限制，并配有多种在线检测电极，更有利于实时检测细胞的生长环境数据，优化nk细胞生长条件，有利于细胞的生长，提供细胞质量，减少批次间差异。
35.虽然本实用新型已以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本实用新型。本实用新型所属技术领域中具有通常知识者，在不脱离本实用新型的精神和范围内，当可作各种的更动与润饰。因此，本实用新型的保护范围当视权利要求书所界定者为准s。