丁酸梭菌、菌剂及其制备方法和应用以及饲料与流程

1.本发明涉及发酵领域，公开了一株丁酸梭菌、一种菌剂、一种菌剂的制 备方法以及根据该方法制备的菌剂、所述丁酸梭菌或所述菌剂在禽畜和水产 养殖领域中用作抗生素替代品的应用、一种饲料。


背景技术：

2.为了提高饲养禽畜效益，通常在饲料中添加抗生素来预防动物疾病、促 进畜禽生长、提高饲料转化率和畜产品品质等，但随着抗生素的大量使用， 出现了禽畜内源性感染、机体免疫力下降、耐药菌株和抗生素残留等诸多安 全性问题，严重威胁到畜牧业效益和人类健康。自2020年7月1日起，饲 料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)的商品饲 料，然而饲料端禁用抗生素，将对养殖过程中畜禽发生各种疾病提出挑战。 生物发酵饲料将成为今后畜禽养殖的主要饲料选择，特别是微生物发酵饲料， 将是极具潜力的解决方案之一，其技术的核心在于给禽畜源源不断地补充高 活性益生菌，抑制致病性细菌的大量繁殖，达到重建或恢复禽畜肠道微生态 平衡，实现主动抗病、促生长、减少药残、改善微环境的目的。
3.丁酸梭菌是一种以丁酸、乳酸和乙酸为主要代谢产物的专性厌氧革兰氏 阳性芽孢杆菌，广泛分布于人和动物的肠道中，是人和动物肠道内的正常菌 群。早在2003年欧盟批准丁酸梭菌作为断奶仔猪和肉鸡的饲料添加剂，2013 年我国将其纳入《中国饲料添加剂品种目录(2013)》的《附录二》中。丁 酸梭菌作为饲料添加剂已在实际生产中广泛应用，其主要特征包括调整肠道 微生态平衡，减少肠毒素产生，避免肠道疾病；可产生氨基酸、b族维生素 等多种促生长因子，提高动物对脂肪和蛋白质的消化吸收能力；可耐受体内 高酸度和消化酶的作用等等。近年来，丁酸梭菌在提高畜禽生产性能、防治 动物细菌性疾病和提高动物性食品安全等方面已经表现出积极的作用，开发 新的具有优良抑菌效果的丁酸梭菌是本领域的一个主要研发方向。


技术实现要素：

4.本发明的目的是为了提供抑菌能力强的丁酸梭菌，提供一株丁酸梭菌、 一种菌剂、一种菌剂的制备方法以及根据该方法制备的菌剂、所述丁酸梭菌 或所述菌剂在禽畜和水产养殖领域中用作抗生素替代品的应用、一种饲料， 该丁酸梭菌具有抑菌能力强的特点，在用于生产饲料和饵料时，还可显著降 低料重比，提高免疫球蛋白含量，可替代抗生素等药物类添加剂的使用，改 善动物健康水平。
5.为了实现上述目的，本发明第一方面提供一株丁酸梭菌clostridiumbutyricum，该丁酸梭菌的保藏号为cctcc no.m 2021607。
6.本发明第二方面提供一种菌剂，所述菌剂包含如上所述的丁酸梭菌。
7.本发明第三方面提供一种菌剂的制备方法，该菌剂由如上所述的丁酸梭 菌在发酵培养基中发酵后制得。
8.本发明第四方面提供根据如上所述的方法制备得到的菌剂。
9.本发明第五方面提供如上所述的丁酸梭菌或如上所述的菌剂在禽畜和 水产养殖领域中用作抗生素替代品的应用。
10.本发明第六方面提供一种饲料，其特征在于，所述饲料包含如上所述的 丁酸梭菌或如上所述的菌剂。
11.通过本发明的技术方案，能够获得如下的有益效果：
12.1、本发明提供的丁酸梭菌cctcc no.m 2021607是从健康断奶仔猪粪 便分离的可用于饲料添加的安全菌株，无致病性；
13.2、本发明提供的丁酸梭菌具有抑菌能力强的特点；在用于生产饲料和 饵料时，还可显著降低料重比，提高免疫球蛋白含量，可替代抗生素等药物 类添加剂的使用，改善动物健康水平；能够解决商品饲料抗生素滥用情况， 缓解环境安全与食品安全问题；
14.3、本发明提供的丁酸梭菌用于制备菌剂时，易于培养和制备，菌剂丁 酸梭菌活菌浓度高，稳定性好。
15.本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
16.生物保藏
17.本发明提供的丁酸梭菌(clostridium butyricum)，于2021年5月24日 被保藏在中国典型培养物保藏中心(地址：武汉市武昌珞珈山，武汉大学， 邮政编码：430072)(保藏单位的缩写为cctcc)，保藏编号为cctcc no： m 2021607。
附图说明
18.图1为本发明所述的丁酸梭菌的显微镜形态。
具体实施方式
19.在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这 些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各 个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点 值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视 为在本文中具体公开。
20.本发明第一方面提供一株丁酸梭菌clostridium butyricum，该丁酸梭菌 的保藏号为cctcc no.m 2021607。
21.本发明所述的丁酸梭菌cctcc no.m 2021607分离自健康断奶仔猪粪 便。
22.具体的，无菌称取健康断奶仔猪的新鲜粪便，进行梯度稀释后，接种于 梭菌选择培养基(tsn培养基)，置于37℃下厌氧培养48-72h，挑取疑似 菌落接种于梭菌增殖培养基(rcm培养基)继续培养，直至获得疑似菌落 的纯培养物。进一步进行生理生化鉴定与16s rdna分子鉴定，确定为丁酸 梭菌，命名为hjjbc 50096。
23.所述的丁酸梭菌cctcc no.m 2021607具有下述性质：
24.形态学特征：在rcm固体培养基上培养20-24h，生长的菌落表面形态 直径1-3mm，呈圆形凸起，边缘不整齐，表面湿润、奶黄色或白色，不透 明，且略带酸臭味；显微镜下细胞形态为短杆状(见图1)，革兰氏染色阳 性。
25.生理生化特征符合丁酸梭菌特性。
26.16s rdna鉴定结果与ncbi丁酸梭菌(clostridium butyricum)的序列 比对，鉴定出此菌株为丁酸梭菌(clostridium butyricum)，命名为hjjbc 50096。
27.本发明提供的丁酸梭菌(clostridium butyricum)，于2021年5月24日 被保藏在中国典型培养物保藏中心(地址：武汉市武昌珞珈山，武汉大学， 邮政编码：430072)(保藏单位的缩写为cctcc)，保藏编号为cctcc no： m 2021607。
28.经实验发现，本发明提供的丁酸梭菌对大肠埃希氏菌、肠炎沙门氏菌和 痢疾志贺氏菌均有较好的抑菌活性，且抑菌圈均能达25mm以上，说明本发 明提供的丁酸梭菌具有优异的抑菌活性。
29.采用本发明提供的丁酸梭菌制备固体菌剂，在保存2年后，其活菌数仍 能保持在109cfu/g以上，说明菌剂的稳定性良好。
30.本发明提供的丁酸梭菌制备得到的菌剂在用于禽畜和水产养殖领域时， 能够显著降低料重比，提高免疫球蛋白含量。
31.本发明第二方面提供一种菌剂，所述菌剂包含如上所述的丁酸梭菌 (clostridium butyricum)。
32.根据本发明，所述菌剂的形式可以不受特别的限制，比如可以为液体菌 剂、半液体菌剂、浓缩菌剂或固体菌剂。其中，固体菌剂可以是干燥菌剂， 例如，可以为冻干菌剂、喷雾干燥菌剂等。
33.其中，所述半液体菌剂是指浓缩后的发酵液或者是和发酵底物混合的发 酵液，固体菌剂可以是干燥制备得到的菌剂，例如，可以为冻干菌剂、喷雾 干燥菌剂或真空干燥菌剂等。
34.优选地，所述菌剂中的活菌数为108cfu/ml以上，更优选为109cfu/ml 以上。
35.所述菌剂的产品形态可以包括但不限于胶囊、片剂、口服液和粉剂。
36.本发明第三方面提供一种菌剂的制备方法，该菌剂由如上所述的丁酸梭 菌在发酵培养基中进行发酵培养后制得。
37.所述丁酸梭菌可以通过冻存管保存，冻存管中的丁酸梭菌在使用前，可 以先通过斜面培养，使其恢复活力。斜面培养基可以是本领域常用的培养基， 比如可以为rcm固体培养基。
38.斜面培养的条件可以是本领域常规的条件，比如温度可以为30-38℃， 时间为2-3天，厌氧培养。经过斜面培养的丁酸梭菌可以恢复活力，用于后 续的培养和发酵。
39.优选地，所述丁酸梭菌以种子液的形式接种。
40.本发明提供的丁酸梭菌经过液体培养获得种子液，所述培养的方法没有 特别的要求，只要是能使所述丁酸梭菌增殖即可，例如可以将丁酸梭菌菌体 接种于丁酸梭菌培养基中，并且在厌氧条件下，在30-38℃的温度下厌氧培 养2-3天后，得到种子液。
41.所述丁酸梭菌培养基可以为本领域公知的各种适合丁酸梭菌培养的培 养基，例如可以为rcm培养基。
42.其中，rcm培养基优选包括：酵母浸粉1-5g/l、牛肉膏5-15g/l、蛋 白胨5-15g/l、可溶性淀粉0.5-1.5g/l、葡萄糖2-8g/l、半胱氨酸盐酸盐0.2-0.8 g/l、氯化钠1-5g/l和乙酸钠1-5g/l，ph自然。121℃高压灭菌15-20min。 当培养基为固体培养基时，优选还包含琼脂15-20g/l。
43.所述种子液接种到发酵培养基中发酵，得到发酵液。优选地，所述种子 液的接种量为5-15％。
44.根据本发明，所述发酵培养基可以是本领域常规的发酵培养基，优选地， 所述发酵培养基包括碳源、氮源和无机盐；其中，所述碳源选自淀粉、葡萄 糖、甘油、蔗糖和糖蜜中的至少一种；其中，所述氮源为酵母浸粉和/或硫酸 铵；其中，所述无机盐选自磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钙和硫酸锰中的至少 一种。
45.在本发明的一种优选的情况下，所述发酵培养基包括淀粉、酵母浸粉、 磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钙和硫酸锰；其中，所述发酵培养基中，所述淀 粉的含量为15-25g/l，所述酵母浸粉的含量为5-15g/l，所述磷酸氢二钾的 含量为1-3g/l，所述硫酸镁的含量为2-4g/l，所述氯化钙的含量为0.1-1g/l， 所述硫酸锰的含量为0.5-1.5g/l。
46.根据本发明，所述发酵的条件可以为本领域公知的常规的用于丁酸梭菌 发酵的条件，优选地，所述发酵在厌氧条件下进行。优选地，所述发酵的条 件包括：温度为30-37℃，ph为6-7，时间为60-120h。
47.其中，所述厌氧条件可以通过氮吹或石蜡液封提供。
48.所述发酵过程中的搅拌转速根据发酵罐的体积确定，本领域技术人员可 以根据实际情况进行调整。
49.根据本发明，发酵得到的发酵液可以直接作为菌剂，也可以通过对发酵 液与可选的保护剂和/或固体载体混合并进行干燥处理，制备得到菌剂。
50.根据本发明，所述保护剂可以为本领域常规的各种保护剂，例如，可以 为脱脂乳粉、麦芽糊精、海藻糖、葡聚糖及甘油等中的至少一种。本领域技 术人员可以根据需要选择并调整保护剂的用量，所述保护剂的用量为15-20 重量％。上述保护剂通常用于制备纯度较高的冻干型菌粉。
51.根据本发明，所述菌剂的固体载体包括但不限于麸皮、豆粕和玉米粉。
52.根据本发明，优选地，在向所述浓缩菌剂中加入保护剂之前，优选的， 该方法还包括使用缓冲液对所述浓缩菌剂进行洗涤。其中，所述缓冲液可以 为本领域常规的用于对菌体进行冲洗的缓冲液，例如，可以为生理盐水或 pbs缓冲液。
53.所述干燥处理的方式可以为本领域常规的制备方式，比如，可以为风干、 冻干、喷雾干燥、烘干和真空干燥等方式。
54.在本发明的一种实施方式中，将发酵得到的所述丁酸梭菌的发酵液进行 浓缩处理，得到丁酸梭菌菌泥，将所述菌泥与保护剂混合并(冷冻)干燥， 制备得到所述菌剂。
55.其中，所述浓缩处理的方法可以是本领域常规的浓缩方法，比如可以通 过离心或过滤的方法进行浓缩，只要能够获得丁酸梭菌菌泥即可。
56.在本发明的一种优选的实施方式中，所述菌剂为固体菌剂，所述菌剂的 制备方法包括：
57.(1)将如上所述的丁酸梭菌的种子液接种到发酵培养基中进行发酵， 得到发酵液；
58.(2)将步骤(1)得到的发酵液进行离心处理，得到菌泥；
59.(3)将菌泥与保护剂混合，并调整活菌浓度至109cfu/g以上，选择麸 皮为载体，将麸皮与丁酸梭菌菌泥(比如以1:1-10：1的比例)搅拌混匀， 在40-45℃烘箱中干燥(比如1-2
天)，得到所述菌剂。
60.本发明第四方面提供根据如上所述的方法制备得到的菌剂。
61.本发明第五方面提供如上所述的丁酸梭菌或如上所述的菌剂在禽畜和 水产养殖领域中用作抗生素替代品的应用。
62.根据本发明，所述丁酸梭菌可以替代抗生素的使用，与基础饲料或基础 饵料混合，投喂禽畜或水产品。
63.本发明第六方面提供一种饲料，所述饲料包含如上所述的丁酸梭菌或如 上所述的菌剂。
64.所述丁酸梭菌或菌剂的添加量可以在较宽的范围内选择，本领域技术人 员可以根据实际需要进行调整，比如当所述饲料中包含菌剂时，所述菌剂的 添加量可以为0.01-1重量％。
65.以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
66.梭菌选择培养基(tsn培养基)，用于丁酸梭菌的分离培养，其配方为： 胰蛋白胨17g/l、大豆蛋白胨3g/l、氯化钠5g/l、磷酸二氢钾2.5g/l和葡 萄糖2.5g/l；
67.rcm培养基，用于丁酸梭菌的纯培养，其配方为：酵母浸粉3g/l、牛 肉膏10g/l、蛋白胨10g/l、可溶性淀粉1g/l、葡萄糖5g/l、半胱氨酸盐 酸盐0.5g/l、氯化钠3g/l和乙酸钠3g/l；
68.营养肉汤(nb)培养基：蛋白胨10g/l、牛肉膏5g/l和氯化钠5g/l。
69.上述各培养基分别加入2％琼脂即可配成相应的固体培养基。
70.如无特殊说明，使用的试剂或材料均可通过商购获得，操作为本领域常 规的操作。
71.对照菌株为购自中国工业微生物菌种保藏管理中心的丁酸梭菌cicc 10390。
72.以下实施例中，使用spss17.0(spss inc.，usa)统计软件的单因素方 法分析进行显著性分析，差异显著则进行dunan氏法多重比较分析。数据 用平均值
±
标准误表示。
73.实施例1
74.本实施例用于说明本发明所述的丁酸梭菌(clostridium butyricum) hjjbc 50096菌株的分离、纯化及其鉴定。
75.无菌称取健康断奶仔猪的新鲜粪便50g，加入450g无菌生理盐水或者 磷酸盐缓冲液中，充分拍打混匀制成菌悬液，将菌悬液稀释至10-4
、10-5
、 10-6
、10-7
、10-8 5个梯度，分别取100μl粪便稀释液以倾注方式接种于tsn 培养基中，置于37℃恒温培养箱中静置厌氧培养48-72h，观察菌落形态特 征。选取符合丁酸梭菌形态特征的菌落划线接种rcm培养基继续培养，直 到得到可疑菌落的纯培养物。对分离菌株参照《伯杰氏手册》进行生理生化 鉴定，使用pcr鉴定方法进行分子生物学鉴定。具体鉴定结果如下：
76.(1)形态学观察：在rcm固体培养基上培养48-72h，生长的菌落表 面形态直径1～3mm，呈圆形凸起，边缘不整齐，表面湿润、奶黄色或白色， 不透明，且略带酸臭味；显微镜下细胞形态为短杆状(见图1)，革兰氏染 色阳性。
77.(2)生理生化鉴定结果如表1所示：
78.表1
79.葡萄糖 甘露醇 w乳糖 蔗糖
麦芽糖 柳醇 木糖 阿拉伯糖 甘油-纤维二糖 甘露糖 松叁糖-棉籽糖 山梨醇-鼠李糖-海藻糖 吲哚生成-尿素水解-明胶水解-七叶灵水解 过氧化氢酶-gmb培养基生长
ꢀꢀꢀꢀ
80.(3)16s rdna鉴定：使用细菌基因组脱氧核糖核酸快速提取试剂盒提 取丁酸梭菌基因组，由生工生物工程(上海)有限公司完成序列测定。16s rdna鉴定结果与ncbi丁酸梭菌(clostridium butyricum)的序列比对，鉴 定出此菌株为丁酸梭菌(clostridium butyricum)。
81.(4)鉴定结果：16s rdna测序结果结合生理生化鉴定结果，认定该菌 株为丁酸梭菌，命名为hjjbc 50096。
82.实施例2
83.本实施例用于说明丁酸梭菌(clostridium butyricum)抑制肠道致病菌性 能。
84.分别使用本发明提供的丁酸梭菌cctcc no.m 2021607和对照菌株 cicc 10390按照如下所述的方法进行抑菌性能评价。
85.使用nb液体培养基，于37℃下培养大肠埃希氏菌(escherichia coli)、 肠炎沙门氏菌(salmonella enterica)和痢疾志贺氏菌(shigella dysenteriae) 24h获得菌液。其中大肠埃希氏菌、肠炎沙门氏菌和痢疾志贺氏菌均采购自 中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号分别为cicc 10389、cicc 21513 和cicc 10983。
86.使用rcm液体培养基，于37℃下培养丁酸梭菌48-72h，获得菌液。
87.(1)牛津杯法
88.向培养皿中倒入约2-3mm左右冷却至55～60℃的琼脂培养基，静置待其 凝固完全。用镊子等距离放置4个无菌牛津杯，待100ml rcm培养基冷却至 50℃左右时，加入相应已制备好的大肠埃希氏菌、肠炎沙门氏菌和痢疾志贺 氏菌菌液250μl，充分混匀，倒入已放置好牛津杯的培养基中，水平放置直 至凝固完全。待其凝固完全后，用无菌镊子取出牛津杯，形成圆孔，向圆孔 中加入150μl丁酸梭菌菌液上清液，用封口膜将培养皿四周封口。将培养皿 水平放置于4℃冰箱，扩散2-3h。待孔内液体外圈扩散后转移至37℃厌氧培 养24-48h，测量各孔抑菌圈的直径，结果见表2。
89.(2)活菌计数法
90.调整大肠埃希氏菌、肠炎沙门氏菌和痢疾志贺氏菌的菌液浓度至1
×
10
7 cfu/ml，将浓度为1
×
107cfu/ml丁酸梭菌菌液分别与浓度为1
×
107cfu/ml 的大肠埃希氏菌、肠炎沙门氏菌和痢疾志贺氏菌的菌液以等体积混合，放置 于37℃厌氧条件下分别培养1h、2h和3h后，取100μl混合菌液涂布于nb固体 培养基上，37℃好氧条件下培养24h，进行大肠埃希氏菌、肠炎沙门氏菌和 痢疾志贺氏菌的菌落计数，结果见表3。
91.表2
[0092][0093]
表3
[0094][0095]
注：活菌数单位为107cfu/ml。
[0096]
表3的数据说明本发明所述的丁酸梭菌能够不同程度抑制大肠埃希氏菌、 肠炎沙门氏菌和痢疾志贺氏菌等肠道致病菌的生长，且抑菌效果好于对照菌 株。
[0097]
实施例3
[0098]
本实施例用于说明丁酸梭菌(clostridium butyricum)菌剂存放稳定性。
[0099]
分别使用本发明提供的丁酸梭菌cctcc no.m 2021607和对照菌株按 照如下所述的方法制备菌剂并进行保存稳定性评价。
[0100]
将放置于-80℃、以冻存管形式保存的丁酸梭菌以蛇形划线方式接种至 rcm斜面培养基中，37℃厌氧条件下培养48-72h，收集试管斜面菌种；挑取 一接种环斜面菌苔至10ml rcm液体培养基中，37℃厌氧条件下培养48-72h， 保证菌种完全恢复活性，后扩大培养，至此获得种子液；将种子液按照10％ 的接种量接种到液体发酵罐培养基中，然后在30-32℃的厌氧条件下发酵扩 大培养72h，得到发酵液。
[0101]
将上述活菌数达到10
9-10
10
cfu/ml以上的丁酸梭菌发酵液通过离心分 离，得到菌泥。使用生理盐水对菌泥进行洗涤，然后向所述菌泥中以1:1的比 例加入麸皮，45℃干燥2天后，粉碎得到丁酸梭菌菌剂。
[0102]
将制备完成的菌剂存储于15-18℃干燥环境下，定期使用rcm培养基， 在厌氧条件下复苏培养，用于检测菌剂存放稳定性，活菌数的结果如表4所 示。
[0103]
表4
[0104]
存储时间(月)本发明的丁酸梭菌cfu/g对照菌株cfu/g05.0
×
1096.1
×
109247.5
×
1088.7
×
106[0105]
从表4可以看出，本发明所述的丁酸梭菌制备得到的固体菌剂稳定性良 好，在保存2年后，活菌数仍可达108cfu/g以上，好于对照菌株。
[0106]
实施例4
[0107]
本实施例用于说明丁酸梭菌(clostridium butyricum)菌剂对于肉鸡生长 状态及免疫力的影响。
[0108]
分别使用实施例3制备的两种丁酸梭菌菌剂，并对肉鸡生长状态及免疫 力的影响进行评价。
[0109]
选取200只1日龄肉鸡鸡仔为实验对象，随机分成5组，组别设置分别为： 基础饲料组(1号)、添加0.01％本发明的丁酸梭菌菌剂饲料组(2号)、添加 0.1％本发明的丁酸梭菌菌剂饲料组(3号)、添加1％本发明的丁酸梭菌菌剂 饲料组(4号)、添加150mg/kg金霉素饲料组(5号)和1％对照菌株菌剂饲料 组(6号)，小鸡幼崽饲养于有供料器和乳头式饮水器的笼子中，自由采食， 供水充足，日常管理按照常规，共进行为期42天的饲喂实验。其中：
[0110]
1-21天基础饲料成分组成：玉米粉53.78％，豆饼粉38.75％，豆油3.15％， 磷酸氢钙1.98％，石灰粉1.05％，氯化钠0.35％，dl-蛋氨酸0.18％，赖氨酸0.04％， 胆碱0.30％，复合维生素0.03％，矿物质0.30％。
[0111]
22-42天基础饲料成分组成：玉米粉61.28％，豆饼粉32.04％，豆油2.85％， 磷酸氢钙1.69％，石灰粉1.08％，氯化钠0.35％，dl-蛋氨酸0.12％，赖氨酸0.02％， 胆碱0.25％，复合维生素0.02％，矿物质0.30％。
[0112]
平均日采食量、平均日增重量和料重比的结果如表5所示。
[0113]
表5
[0114][0115][0116]
从表5的1-42天内肉鸡的料重比来看，添加0.01％本发明的丁酸梭菌菌剂 饲料组稍稍低于添加抗生素饲料组，二者明显低于基础饲料组和1％对照菌 株菌剂饲料组(p＜0.05)。
[0117]
通过测定肉鸡血清中igg含量表征其免疫力情况，结果见表6。
[0118]
表6
[0119]
时间1号2号3号4号5号6号21天59467272873067063142天564640696706628593
[0120]
从表6可看出，添加0.01％本发明的丁酸梭菌菌剂饲料组的肉鸡血清中ig 含量略高于添加抗生素饲料组，明显高于基础饲料组和1％对照菌株菌剂饲 料组(p＜0.05)。
[0121]
实施例5
[0122]
本实施例用于说明丁酸梭菌(clostridium butyricum)菌剂对于仔猪生长 状态及免疫力的影响。
[0123]
分别使用实施例3制备的两种丁酸梭菌菌剂，并对仔猪生长及免疫力的 影响进行评价。
[0124]
选取21日龄(6.2kg)左右断奶仔猪50头，随机分成5组，组别设置分别 为：基础饲料组(1号)、添加0.01％丁酸梭菌菌剂饲料组(2号)、添加0.1％ 丁酸梭菌菌剂饲料组(3号)、添加1％丁酸梭菌菌剂饲料组(4号)、添加 150mg/kg金霉素饲料组(5号)和1％对照菌株菌剂饲料组(6号)，采用漏斗 式饲槽自由采食，供水充足，日常管理按照常规，共进行为期30天的饲喂实 验。其中：
[0125]
基础饲料成分组成：玉米粉60.1％，豆饼粉28.75％，麸皮4％，豆油2.72％， 磷酸氢钙1.98％，石灰粉1.25％，氯化钠0.35％，dl-蛋氨酸0.18％，赖氨酸0.04％， 胆碱0.30％，复合维生素0.03％，矿物质0.30％。
[0126]
平均日采食量、平均日增重量和料重比的结果如表7所示，仔猪血清igg 含量(ng/ml)如表8所示。
[0127]
表7
[0128]
检测指标1号2号3号4号5号6号平均日采食量(g/d)579580583581582582平均日增重量(g/d)244257264267262250料重比2.372.262.212.182.222.32
[0129]
表8
[0130]
组别1号2号3号4号5号6号igg含量229262320331257239
[0131]
从表7和表8可看出，添加0.01％本发明的丁酸梭菌菌剂饲料组略高于添 加抗生素饲料组的料重，但二者明显低于基础饲料组和1％对照菌株菌剂饲 料组(p＜0.05)；添加0.01％本发明的丁酸梭菌菌剂饲料组的仔猪血清中ig 含量略高于添加抗生素饲料组，明显高于基础饲料组和1％对照菌株菌剂饲 料组(p＜0.05)。
[0132]
实施例6
[0133]
本实施例用于说明丁酸梭菌(clostridium butyricum)菌剂对于淡水草鱼 生长状态及免疫力的影响。
[0134]
分别使用实施例3制备的两种丁酸梭菌菌剂，并对淡水草鱼生长状态及 免疫力的影响进行评价。
[0135]
选取50g左右草鱼200条，随机分为5组，组别设置分别为：基础饲料组 (1号)、添加0.01％丁酸梭菌菌剂饲料组(2号)、添加0.1％丁酸梭菌菌剂饲 料组(3号)、添加1％丁酸梭菌菌剂饲料组(4号)、添加150mg/kg金霉素饲 料组(5号)和1％对照菌株菌剂饲料组(6号)。养殖于体积为1.5m3已清洗消 毒的水泥池中，每天投喂两次，投喂量约为鱼体重的2-3％，每天换水池中水 体三分之一，共进行为期30天的饲喂实验。
[0136]
基础饲料成分组成：豆粕36％，鱼粉25％，小麦粉20％，玉米粉15％，α
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淀粉1％，矿物质0.5％，复合维生素0.05％，大豆油2％。
[0137]
平均日采食量、平均日增重量和料重比的结果如表9所示，草鱼血清igg 含量(ng/
ml)如表10所示。
[0138]
表9
[0139]
检测指标1号2号3号4号5号6号平均日采食量(g/d)1.611.581.591.621.621.61平均日增重量(g/d)1.431.491.541.581.531.48料重比1.121.061.031.021.061.09
[0140]
表10
[0141]
组别1号2号3号4号5号6号igg含量178202218.4219201183
[0142]
从表9和表10可看出，添加0.01％本发明的丁酸梭菌菌剂饲料组与添加抗 生素饲料组的料重比无明显差异，但是二者明显低于基础饲料组和1％对照 菌株菌剂饲料组(p＜0.05)；添加0.01％本发明的丁酸梭菌菌剂饲料组的草 鱼血清中ig含量略高于添加抗生素饲料组，明显高于基础饲料组和1％对照菌 株菌剂饲料组(p＜0.05)。
[0143]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在 本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包 括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样 应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。