一种分析检测噻吩乙胺及其有关物质的方法与流程

1.本发明涉及化学分析技术领域，具体而言，本发明涉及分析检测噻吩乙胺及其有关物质的方法。


背景技术：

2.噻吩乙胺是生产4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶盐酸盐的关键原料，4,5,6,7-四氢噻吩并[3,2-c]吡啶盐酸盐又是一种重要的医药中间体，主要用于合成血小板凝结抑制剂如氯吡格雷药物。为了提高氯吡格雷药品生产的质量，按照药品生产规范及产品标准，如美国药典(usp)的规定，需要对噻吩乙胺的质量进行有效的分析和控制。分析噻吩乙胺工艺路线，可能存在的几种杂质组分为：
[0003][0004]
而目前，暂未报道能够简便、快速、低成本的分析检测噻吩乙胺及其有关物质的方法。
[0005]
因此，亟需开发一种简单快速方便地分析检测噻吩乙胺及其有关物质的方法，从而实现氯吡格雷原料药及其制剂的质量控制。


技术实现要素：

[0006]
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提供一种分析检测噻吩乙胺及其有关物质的方法，利用高效液相色谱分析方法，将噻吩乙胺及其有关物质进行有效分离，进而分析噻吩乙胺的纯度，从而实现氯吡格雷原料药及其制剂的质量控制。
[0007]
为此，本发明第一方面提供了一种分析检测噻吩乙胺及其有关物质的方法。根据本发明的实施例，所述方法利用高效液相色谱法对待测样品进行检测，以便获得色谱图；以及
[0008]
基于所述色谱图，获得待测样品中噻吩乙胺的含量；
[0009]
其中，所述高效液相色谱法的色谱条件如下所述：
[0010]
色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；
[0011]
鬼峰捕集柱为welch ghost-buster；
[0012]
以缓冲液为流动相a，以有机溶剂为流动相b进行梯度洗脱，
[0013]
所述梯度洗脱条件为：
[0014]
时间(min)a(％)b(％)09552020802520802695540955
[0015]
其中，所述流动相a为铵盐溶液，优选为氯化铵水溶液，所述流动相b为乙腈。
[0016]
采用本发明的分析检测方法可将噻吩乙胺与其生产过程中存在的杂质a(2-(噻吩-3-基)乙胺)、杂质c(噻吩-2-甲醛)以及杂质d(噻吩)进行分离，进而分析检测噻吩乙胺的纯度，以实现对噻吩乙胺的质量控制，从而实现氯吡格雷原料药及其制剂的质量控制。
[0017]
根据本发明实施例的分析检测噻吩乙胺及其有关物质的方法，还可以具有以下附加技术特征的至少之一：
[0018]
根据本发明的实施例，所述流动相a的浓度为10mm。
[0019]
根据本发明的实施例，所述流动相a的ph值为9.10
±
0.05。
[0020]
优选地，流动相a为氯化铵水溶液，其配制方法为：取一定量氯化铵固体溶解于水中，超声溶解，用氨水调节ph值为9.10
±
0.05。
[0021]
所述流动相a的ph值会对分离结果产生影响，ph值过高或过低均会使主成分峰产生拖尾现象，峰形差，干扰与其他杂质峰的分离效果。
[0022]
根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法中色谱柱为waters xbridge c18。
[0023]
根据本发明优选的实施例，所述高效液相色谱法中色谱柱为waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)，所述鬼峰捕集柱为welch ghost-buster(50mm
×
2.1mm)。
[0024]
在色谱分离中，特别在梯度洗脱过程中容易产生莫名其妙的色谱峰，俗称鬼峰，主要来源于流动相和管路，方法开发中一旦出现鬼峰，消除鬼峰则需要花费分析人员较多的时间和精力。本发明为了有效捕集产生的鬼峰，消除鬼峰对物质分析的干扰，设置一个鬼峰捕集柱，能够去除溶剂包括有机溶剂中的杂质，且还可以有效捕集管路和混合器中的杂质；吸附杂质，让峰看起来更平缓，减少杂质峰及其溶剂峰的干扰。
[0025]
根据本发明的实施例，所述色谱柱的柱温为38～42℃，优选为40℃。
[0026]
根据本发明的实施例，所述流动相的流速为0.9～1.1ml/min，优选为0.9～1.0ml/min。
[0027]
色谱柱的柱温和流动相的流速会影响分离效果，如果色谱柱的柱温或流动相的流速不在上述范围内，则会导致分离效果不好，使分离度＜1.5，主峰与杂质峰之间不能达到良好分离，也会使峰形较差。
[0028]
根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法中检测波长为208～212nm，优选为210nm。
[0029]
根据本发明的实施例，所述方法还包括如下步骤：
[0030]
(1)取含噻吩乙胺的待测样品，用乙腈溶解，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0031]
(2)取步骤(1)中样品溶液5μl注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，完成所述含噻吩乙胺样品的分离检测。
[0032]
本发明第二方面提供第一方面所述的方法在以噻吩乙胺为原料生产氯吡格雷或其盐的分析检测中的应用。
[0033]
本发明提供的分析检测噻吩乙胺及其有关物质的方法，可以依照以下方法实现：
[0034]
色谱条件：
[0035]
色谱柱：waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)；
[0036]
鬼峰捕集柱：welch ghost-buster 50mm
×
2.1mm；
[0037]
流动相：a相：10mm氯化铵缓冲液(ph＝9.10
±
0.05)；b相：乙腈
[0038]
流动相流速：0.9～1.1ml/min；
[0039]
色谱柱柱温：38～42℃；
[0040]
检测波长：208～212nm
[0041]
进样量：5μl；
[0042]
所述梯度洗脱条件为：
[0043]
时间(min)a(％)b(％)09552020802520802695540955
[0044]
1)取含噻吩乙胺的样品，用流动相b乙腈溶解样品，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0045]
2)取5μl步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，完成所述含噻吩乙胺的样品的分析分离。
[0046]
溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。高效液相色谱便是基于此原理实现物质分离的。
[0047]
本发明的发明人创造性的发现，采用本发明提供的分析检测噻吩乙胺及其有关物质的方法，能够分析噻吩乙胺的纯度，从而实现噻吩乙胺的质量控制，进一步实现氯吡格雷原料药及其制剂的质量控制，若待测样品中噻吩乙胺含量不达标，则该待测样品不能作为生产氯吡格雷的原料进行氯吡格雷的生产。
[0048]
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
[0049]
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
[0050]
图1显示了根据本发明的实施例1，所得样品的高效液相色谱图；
[0051]
图2显示了根据本发明的实施例2，所得样品的高效液相色谱图；
[0052]
图3显示了根据本发明的实施例3，所得样品的高效液相色谱图；
[0053]
图4显示了根据本发明的实施例4，所得样品的高效液相色谱图；
[0054]
图5显示了根据本发明的实施例5，所得样品的高效液相色谱图；
[0055]
图6显示了根据本发明的实施例6，所得样品的高效液相色谱图；
[0056]
图7显示了根据本发明的实施例7，所得样品的高效液相色谱图；
[0057]
图8显示了本发明的实施例8以及对比例1-7的样品的高效液相色谱图(主峰附近放大的色谱合并图)。
具体实施方式
[0058]
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0059]
本发明实施例中含噻吩乙胺的样品购自麦克林，高效液相色谱仪：岛津lc-20a系列高效液相色谱仪。
[0060]
实施例1
[0061]
1)取含噻吩乙胺的样品，用乙腈溶解样品，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0062]
2)取5μl步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，如图1所示，完成所述含噻吩乙胺的样品的分析分离。
[0063]
色谱条件：
[0064]
色谱柱：waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)；
[0065]
鬼峰捕集柱：welch ghost-buster 50mm
×
2.1mm；
[0066]
流动相：a相：10mm氯化铵缓冲液(ph＝9.10
±
0.05)；b相：乙腈
[0067]
流动相流速：1.0ml/min；
[0068]
色谱柱柱温：40℃；
[0069]
检测波长：210nm；
[0070]
进样量：5μl；
[0071]
所述梯度洗脱条件为：
[0072]
时间(min)a(％)b(％)09552020802520802695540955
[0073]
图1中1号峰为杂质a，2号峰为噻吩乙胺，4号峰为杂质c，11号峰为杂质d。可以看出在该条件下噻吩乙胺主峰可以与杂质分离良好，主峰与其相邻峰的分离度均＞1.5，且噻吩乙胺主峰在8.560min左右。
[0074]
实施例2
[0075]
1)取含噻吩乙胺的样品，用乙腈溶解样品，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0076]
2)取5μl步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，如图2所示，完成所述含噻吩乙胺的样品的分析分离。
[0077]
色谱条件：
[0078]
色谱柱：waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)；
[0079]
鬼峰捕集柱：welch ghost-buster 50mm
×
2.1mm；
[0080]
流动相：a相：10mm氯化铵缓冲液(ph＝9.10
±
0.05)；b相：乙腈
[0081]
流动相流速：1.0ml/min；
[0082]
色谱柱柱温：40℃；
[0083]
检测波长：208nm；
[0084]
进样量：5μl；
[0085]
所述梯度洗脱条件为：
[0086]
时间(min)a(％)b(％)09552020802520802695540955
[0087]
图2中1号峰为杂质a，2号峰为噻吩乙胺，4号峰为杂质c，12号峰为杂质d。可以看出在该条件下噻吩乙胺主峰可以与杂质分离良好，主峰与其相邻峰的分离度均＞1.5，且噻吩乙胺主峰在8.560min左右。
[0088]
实施例3
[0089]
1)取含噻吩乙胺的样品，用乙腈溶解样品，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0090]
2)取5μl步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，如图3所示，完成所述含噻吩乙胺的样品的分析分离。
[0091]
色谱条件：
[0092]
色谱柱：waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)；
[0093]
鬼峰捕集柱：welch ghost-buster 50mm
×
2.1mm；
[0094]
流动相：a相：10mm氯化铵缓冲液(ph＝9.10
±
0.05)；b相：乙腈
[0095]
流动相流速：1.0ml/min；
[0096]
色谱柱柱温：40℃；
[0097]
检测波长：212nm；
[0098]
进样量：5μl；
[0099]
所述梯度洗脱条件为：
[0100]
时间(min)a(％)b(％)0955202080252080
2695540955
[0101]
图3中1号峰为杂质a，2号峰为噻吩乙胺，4号峰为杂质c，11号峰为杂质d。可以看出在该条件下噻吩乙胺主峰可以与杂质分离良好，主峰与其相邻峰的分离度均＞1.5，且噻吩乙胺主峰在8.560min左右。
[0102]
实施例4
[0103]
1)取含噻吩乙胺的样品，用乙腈溶解样品，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0104]
2)取5μl步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，如图4所示，完成所述含噻吩乙胺的样品的分析分离。
[0105]
色谱条件：
[0106]
色谱柱：waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)；
[0107]
鬼峰捕集柱：welch ghost-buster 50mm
×
2.1mm；
[0108]
流动相：a相：10mm氯化铵缓冲液(ph＝9.10
±
0.05)；b相：乙腈
[0109]
流动相流速：0.9ml/min；
[0110]
色谱柱柱温：40℃；
[0111]
检测波长：210nm；
[0112]
进样量：5μl；
[0113]
所述梯度洗脱条件为：
[0114]
时间(min)a(％)b(％)09552020802520802695540955
[0115]
图4中1号峰为杂质a，2号峰为噻吩乙胺，5号峰为杂质c，11号峰为杂质d。可以看出在该条件下噻吩乙胺主峰可以与杂质分离良好，主峰与其相邻峰的分离度均＞1.5，且噻吩乙胺主峰在9.309min左右。
[0116]
实施例5
[0117]
1)取含噻吩乙胺的样品，用乙腈溶解样品，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0118]
2)取5μl步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，如图5所示，完成所述含噻吩乙胺的样品的分析分离。
[0119]
色谱条件：
[0120]
色谱柱：waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)；
[0121]
鬼峰捕集柱：welch ghost-buster 50mm
×
2.1mm；
[0122]
流动相：a相：10mm氯化铵缓冲液(ph＝9.10
±
0.05)；b相：乙腈
[0123]
流动相流速：1.1ml/min；
[0124]
色谱柱柱温：40℃；
[0125]
检测波长：210nm；
[0126]
进样量：5μl；
[0127]
所述梯度洗脱条件为：
[0128]
时间(min)a(％)b(％)09552020802520802695540955
[0129]
图5中1号峰为杂质a，2号峰为噻吩乙胺，4号峰为杂质c，10号峰为杂质d。可以看出在该条件下噻吩乙胺主峰可以与杂质分离良好，主峰与其相邻峰的分离度均＞1.5，且噻吩乙胺主峰在7.944min左右。
[0130]
实施例6
[0131]
1)取含噻吩乙胺的样品，用乙腈溶解样品，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0132]
2)取5μl步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，如图6所示，完成所述含噻吩乙胺的样品的分析分离。
[0133]
色谱条件：
[0134]
色谱柱：waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)；
[0135]
鬼峰捕集柱：welch ghost-buster 50mm
×
2.1mm；
[0136]
流动相：a相：10mm氯化铵缓冲液(ph＝9.10
±
0.05)；b相：乙腈
[0137]
流动相流速：1.0ml/min；
[0138]
色谱柱柱温：38℃；
[0139]
检测波长：210nm；
[0140]
进样量：5μl；
[0141]
所述梯度洗脱条件为：
[0142]
时间(min)a(％)b(％)09552020802520802695540955
[0143]
图6中1号峰为杂质a，3号峰为噻吩乙胺，5号峰为杂质c，12号峰为杂质d。可以看出在该条件下噻吩乙胺主峰可以与杂质分离良好，主峰与其相邻峰的分离度均＞1.5，且噻吩乙胺主峰在8.197min左右。
[0144]
实施例7
[0145]
1)取含噻吩乙胺的样品，用乙腈溶解样品，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0146]
2)取5μl步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，如图7所示，完成所述含噻吩乙胺的样品的分析分离。
[0147]
色谱条件：
[0148]
色谱柱：waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)；
[0149]
鬼峰捕集柱：welch ghost-buster 50mm
×
2.1mm；
[0150]
流动相：a相：10mm氯化铵缓冲液(ph＝9.10
±
0.05)；b相：乙腈
[0151]
流动相流速：1.0ml/min；
[0152]
色谱柱柱温：42℃；
[0153]
检测波长：210nm；
[0154]
进样量：5μl；
[0155]
所述梯度洗脱条件为：
[0156]
时间(min)a(％)b(％)09552020802520802695540955
[0157]
图7中1号峰为杂质a，2号峰为噻吩乙胺，4号峰为杂质c，11号峰为杂质d。可以看出在该条件下噻吩乙胺主峰可以与杂质分离良好，主峰与其相邻峰的分离度均＞1.5，且噻吩乙胺主峰在8.035min左右。
[0158]
实施例8
[0159]
与实施例1相比，其区别仅在于色谱条件中色谱柱柱温由40℃变为了41℃，其他均相同，色谱图如图8a所示。图8a中主成分峰对称性好，峰型较好，且与相邻峰分离度较好。
[0160]
对比例1
[0161]
与实施例8相比，其区别仅在于色谱条件中流动相a相氯化铵缓冲液的ph为8.07，其他均相同，获得的图谱如附图8b所示，图8b中主峰呈三角形，对称性差，出峰时间提前，主成分峰有一些拖尾现象，无法判断其与其他峰是否分离。
[0162]
对比例2
[0163]
与实施例8相比，其区别仅在于色谱条件中流动相a相氯化铵缓冲液的ph为7.77，其他均相同，获得的图谱如附图8c所示。图8c中主峰呈三角形，出峰时间提前，对称性差，响应低，主成分峰有一些拖尾现象，无法判断其与其他峰是否分离。
[0164]
对比例3
[0165]
1、色谱条件：
[0166]
色谱柱：csh-c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)；
[0167]
鬼峰捕集柱：welch ghost-buster 50mm
×
2.1mm；
[0168]
流动相：a相：10mmnh4fa缓冲液(ph＝8.32)；b相：乙腈
[0169]
流动相流速：1.0ml/min；
[0170]
色谱柱柱温：40℃；
[0171]
检测波长：210nm；
[0172]
进样量：5μl；
[0173]
所述梯度洗脱条件为：
[0174]
时间(min)a(％)b(％)0955202080
2520802695540955
[0175]
1)取含噻吩乙胺的样品，用乙腈溶解样品，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0176]
2)取5μl步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，完成所述含噻吩乙胺的样品的分析分离。
[0177]
获得的分离结果如附图8d中所示，主峰前有小峰出现，说明主成分峰与其他杂质峰分离效果不好。
[0178]
对比例4
[0179]
对比例4与对比例3的不同之处仅在于所用的色谱柱：waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)，获得的分离结果如附图8e中所示，主成分峰有一些拖尾现象。
[0180]
对比例5
[0181]
1、色谱条件：
[0182]
色谱柱：waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)；
[0183]
鬼峰捕集柱：welch ghost-buster 50mm
×
2.1mm；
[0184]
流动相：a相：10mmnh4hco3缓冲液(ph＝9.56)；b相：乙腈
[0185]
流动相流速：1.0ml/min；
[0186]
色谱柱柱温：40℃；
[0187]
检测波长：210nm；
[0188]
进样量：5μl；
[0189]
所述梯度洗脱条件为：
[0190]
时间(min)a(％)b(％)09552020802520802695540955
[0191]
1)取含噻吩乙胺的样品，用乙腈溶解样品，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0192]
2)取5μl步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，完成所述含噻吩乙胺的样品的分析分离。
[0193]
获得的分离结果如附图8f中所示，主成分峰有一些拖尾现象。
[0194]
对比例6
[0195]
1、色谱条件：
[0196]
色谱柱：waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)；
[0197]
鬼峰捕集柱：welch ghost-buster 50mm
×
2.1mm；
[0198]
流动相：a相：10mmk2hpo4缓冲液(ph＝9.05)；b相：乙腈
[0199]
流动相流速：1.0ml/min；
[0200]
色谱柱柱温：40℃；
[0201]
检测波长：210nm；
[0202]
进样量：5μl；
[0203]
所述梯度洗脱条件为：
[0204]
时间(min)a(％)b(％)09552020802520802695540955
[0205]
1)取含噻吩乙胺的样品，用乙腈溶解样品，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0206]
2)取5μl步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，完成所述含噻吩乙胺的样品的分析分离。
[0207]
获得的分离结果如附图8g中所示，主成分峰峰形为三角形，峰形不对称且尖锐，峰形较差。
[0208]
对比例7
[0209]
1、色谱条件：
[0210]
色谱柱：waters xbridge c18(150mm
×
4.6mm，3.5μm)；
[0211]
鬼峰捕集柱：welch ghost-buster 50mm
×
2.1mm；
[0212]
流动相：a相：0.01％nh3.h2o缓冲液(ph＝9.17)；b相：乙腈
[0213]
流动相流速：1.0ml/min；
[0214]
色谱柱柱温：40℃；
[0215]
检测波长：210nm；
[0216]
进样量：5μl；
[0217]
所述梯度洗脱条件为：
[0218]
时间(min)a(％)b(％)09552020802520802695540955
[0219]
1)取含噻吩乙胺的样品，用乙腈溶解样品，配制成浓度为2mg/ml的样品溶液；
[0220]
2)取5μl步骤1)中所得样品溶液注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，完成所述含噻吩乙胺的样品的分析分离。
[0221]
获得的分离结果如附图8h中所示，主成分峰峰形为三角形，峰形不对称且尖锐，峰形较差。
[0222]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技
术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
[0223]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。