一种独脚金内酯类似物GR24在沼液处理中的应用的制作方法

一种独脚金内酯类似物gr24在沼液处理中的应用
技术领域
1.本发明属于有机物应用技术领域，具体而言，涉及一种独脚金内酯类似物gr24在沼液处理中的应用。


背景技术：

2.独脚金内酯(strigolactones，sls)是一种新型的植物激素，它是在对独脚金种子萌发的刺激中发现的，所以把其命名为独脚金内酯。独脚金内酯最早的提取是在棉花根部的分泌物中，随后，烟草、高粱、豇豆、小米、黄瓜等根的分泌物中也陆续发现存在独脚金内酯。天然独脚金内酯主要包括独脚金醇(strigol)、高粱内酯(sorgolactone)、列当醇(orobanchol)及其衍生物等。人工合成的独脚金内酯主要是独脚金醇类似物(germination releaser，gr)，如gr24、gr7、gr6、gr3等，其中gr24活性最高，常被用作独脚金内酯信号通路相关的研究中的常规阳性参照物。
3.最新的实验研究表明，藻菌共生体是实现农村农业固体废弃物厌氧发酵中沼液的资源化利用，是解决沼气品位低下等问题的一种新途径。其主要优势就是藻菌的共生系。因此，在沼气沼液的处理净化技术方面还必须充分借用现代高新技术手段，发展与建立沼液沼气同步处理净化新技术，才能突破传统的单一处理技术，加快沼气沼液的资源化利用。实验室前期研究发现，藻菌共生体具有很好的净化沼液沼气性能，较单一微藻处理工艺安全性更高，回收成本更低。但是在藻菌共生体处理沼气沼液过程中发现，其处理性能和稳定性还有待进一步提高。


技术实现要素：

4.针对上述问题，本发明提供了一种独脚金内酯类似物gr24在沼液处理中的应用。通过对沼液进行处理结果可知，对沼液中cod、tp、tn具有明显的去除效果
5.本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
6.本发明提供了一种独脚金内酯类似物gr24在沼液处理中的应用。
7.优选地，该应用具体包括以下步骤：
8.步骤(1)：以bg-11培养基作为基础培养基，将小球藻液与bg-11培养基按照1:5的比例培养至小球藻藻密度达到107个/ml，然后将小球藻溶液稀释10倍待用；
9.步骤(2)：将灵芝菌接种到pda培养基中25.5℃恒温培养箱培养2天，然后选取灵芝菌生长较好的区域，打孔器打眼，将打眼的培养基块转移至pdb培养基培养5-7天，直至形成灵芝菌孢子，待用；
10.步骤(3)：将小球藻溶液和灵芝菌孢子离心、洗涤，然后置于混合培养基中培养直至形成均匀的藻菌球，然后将藻菌球置于沼液中，所述沼液中独脚金内酯类似物gr24浓度为0～10-6
mol/l，然后将沼液置于一定条件下处理，得到处理后的沼液。
11.优选地，步骤(1)中所述bg-11培养基成分为：nano
3 0.15g/ml,k2hpo
4 0.004g/ml,mgso4·
7h2o 0.0075g/ml,cacl2·
2h2o 0.0036g/ml,柠檬酸0.006g/ml，柠檬酸铁0.006g/
ml，edtana
2 0.001g/ml，na2co
3 0.02g/ml。
12.优选地，步骤(1)中培养条件为：恒温25℃，设置光暗比为12h昼:12h夜，光照强度维持在2000lux，转速为170rpm。
13.优选地，步骤(2)中所述pda培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15～20g、蒸馏水1000ml；所述pdb培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000ml。
14.优选地，步骤(3)中所述离心条件为：转速6000rmp、时间5min。
15.优选地，步骤(3)中所述混合培养基配方及浓度为：bg-11 97.5％，麦芽糖2％以及酵母膏0.5％。
16.优选地，步骤(3)中所述培养条件为：温度为25.5℃，摇床转速设置为160rpm，光照2000lux；所述处理条件为：恒温25℃，设置光暗比为12h昼:12h夜，光照强度维持在2000lux，转速为160rpm。
17.优选地，步骤(3)中所述沼液成分及浓度为：葡萄糖0.8g/l，尿素0.752g/l，nah2po4·
2h2o 0.203g/l，kh2po
4 0.0203g/l,cacl
2 0.004g/l，mgso
4 0.002g/l。
18.优选地，步骤(3)中所述独脚金内酯类似物gr24的浓度为0mol/l、10-6
mol/l、10-7
mol/l、10-9
mol/l、10-11
mol/l。
19.借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点：本发明公开了不同独脚金内酯类似物gr24浓度下，藻菌共生体对沼液中n和p营养盐、cod去除效果的应用。通过对沼液中cod、tp、tn前后处理结果分析可知，本发明的独脚金内酯类似物gr24在沼液中对cod、tp、tn的去除率方面有明显的优势。独脚金内酯类似物gr24浓度在10-7
～10-6
mol/l之间的改善效果最为显著。
20.上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例详细说明如后。
具体实施方式
21.为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
22.实施例1
23.独脚金内酯类似物gr24在沼液处理中的应用，该应用具体包括以下步骤：
24.以bg-11培养基作为基础培养基，bg-11培养基成分为：nano
3 0.15g/ml,k2hpo40.004g/ml,mgso4·
7h2o 0.0075g/ml,cacl2·
2h2o 0.0036g/ml,柠檬酸0.006g/ml，柠檬酸铁0.006g/ml，edtana
2 0.001g/ml，na2co
3 0.02g/ml，其中，各物质用量分别为10ml/l、10ml/l 10ml/l、10ml/l、1ml/l、1ml/l、1ml/l、1ml/l。将小球藻液与bg-11培养基按照1:5的比例在恒温25℃，设置光暗比为12h昼:12h夜，光照强度维持在2000lux，转速为170rpm条件下培养至小球藻藻密度达到107个/ml，然后将小球藻溶液稀释10倍待用。
25.将灵芝菌接种到pda培养基中25.5℃恒温培养箱培养2天，pda培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18g、蒸馏水1000ml。然后选取灵芝菌生长较好的区域，打孔器打
眼，将打眼的培养基块转移至pdb培养基培养6天，pdb培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000ml。直至形成灵芝菌孢子，待用。
26.将小球藻溶液和灵芝菌孢子在6000rmp下离心5min、然后用无菌水洗涤3次，将离心的小球藻和孢子置于混合培养基中培养直至形成均匀的藻菌球，混合培养基配方及浓度为：bg-11 97.5％，麦芽糖2％以及酵母膏0.5％。然后将藻菌球置于沼液中，该沼液成分及浓度为：葡萄糖0.8g/l，尿素0.752g/l，nah2po4·
2h2o 0.203g/l，kh2po40.0203g/l,cacl
2 0.004g/l，mgso
4 0.002g/l。向沼液中加入独脚金内酯类似物gr24浓度为10-6
mol/l，然后将沼液置于恒温25℃，设置光暗比为12h昼:12h夜，光照强度维持在2000lux，转速为160rpm条件下处理，得到处理后的沼液。
27.通过分别对处理第0天和第12天沼液中cod、tn以及tp浓度测定，计算得到各去除率，结果见表1。
28.实施例2
29.独脚金内酯类似物gr24在沼液处理中的应用，该应用具体包括以下步骤：
30.以bg-11培养基作为基础培养基，bg-11培养基成分为：nano
3 0.15g/ml,k2hpo40.004g/ml,mgso4·
7h2o 0.0075g/ml,cacl2·
2h2o 0.0036g/ml,柠檬酸0.006g/ml，柠檬酸铁0.006g/ml，edtana
2 0.001g/ml，na2co
3 0.02g/ml，其中，各物质用量分别为10ml/l、10ml/l 10ml/l、10ml/l、1ml/l、1ml/l、1ml/l、1ml/l。将小球藻液与bg-11培养基按照1:5的比例在恒温25℃，设置光暗比为12h昼:12h夜，光照强度维持在2000lux，转速为170rpm条件下培养至小球藻藻密度达到107个/ml，然后将小球藻溶液稀释10倍待用。
31.将灵芝菌接种到pda培养基中25.5℃恒温培养箱培养2天，pda培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18g、蒸馏水1000ml。然后选取灵芝菌生长较好的区域，打孔器打眼，将打眼的培养基块转移至pdb培养基培养6天，pdb培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000ml。直至形成灵芝菌孢子，待用。
32.将小球藻溶液和灵芝菌孢子在6000rmp下离心5min、然后用无菌水洗涤3次，将离心的小球藻和孢子置于混合培养基中培养直至形成均匀的藻菌球，混合培养基配方及浓度为：bg-11 97.5％，麦芽糖2％以及酵母膏0.5％。然后将藻菌球置于沼液中，该沼液成分及浓度为：葡萄糖0.8g/l，尿素0.752g/l，nah2po4·
2h2o 0.203g/l，kh2po40.0203g/l,cacl
2 0.004g/l，mgso
4 0.002g/l。向沼液中加入独脚金内酯类似物gr24浓度为10-7
mol/l，然后将沼液置于恒温25℃，设置光暗比为12h昼:12h夜，光照强度维持在2000lux，转速为160rpm条件下处理，得到处理后的沼液。
33.通过分别对处理第0天和第12天沼液中cod、tn以及tp浓度测定，计算得到各去除率，结果见表1。
34.实施例3
35.独脚金内酯类似物gr24在沼液处理中的应用，该应用具体包括以下步骤：
36.以bg-11培养基作为基础培养基，bg-11培养基成分为：nano
3 0.15g/ml,k2hpo40.004g/ml,mgso4·
7h2o 0.0075g/ml,cacl2·
2h2o 0.0036g/ml,柠檬酸0.006g/ml，柠檬酸铁0.006g/ml，edtana
2 0.001g/ml，na2co
3 0.02g/ml，其中，各物质用量分别为10ml/l、10ml/l 10ml/l、10ml/l、1ml/l、1ml/l、1ml/l、1ml/l。将小球藻液与bg-11培养基按照1:5的比例在恒温25℃，设置光暗比为12h昼:12h夜，光照强度维持在2000lux，转速为170rpm条
件下培养至小球藻藻密度达到107个/ml，然后将小球藻溶液稀释10倍待用。
37.将灵芝菌接种到pda培养基中25.5℃恒温培养箱培养2天，pda培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18g、蒸馏水1000ml。然后选取灵芝菌生长较好的区域，打孔器打眼，将打眼的培养基块转移至pdb培养基培养6天，pdb培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000ml。直至形成灵芝菌孢子，待用。
38.将小球藻溶液和灵芝菌孢子在6000rmp下离心5min、然后用无菌水洗涤3次，将离心的小球藻和孢子置于混合培养基中培养直至形成均匀的藻菌球，混合培养基配方及浓度为：bg-11 97.5％，麦芽糖2％以及酵母膏0.5％。然后将藻菌球置于沼液中，该沼液成分及浓度为：葡萄糖0.8g/l，尿素0.752g/l，nah2po4·
2h2o 0.203g/l，kh2po40.0203g/l,cacl
2 0.004g/l，mgso
4 0.002g/l。向沼液中加入独脚金内酯类似物gr24浓度为10-9
mol/l，然后将沼液置于恒温25℃，设置光暗比为12h昼:12h夜，光照强度维持在2000lux，转速为160rpm条件下处理，得到处理后的沼液。
39.通过分别对处理第0天和第12天沼液中cod、tn以及tp浓度测定，计算得到各去除率，结果见表1。
40.实施例4
41.独脚金内酯类似物gr24在沼液处理中的应用，该应用具体包括以下步骤：
42.以bg-11培养基作为基础培养基，bg-11培养基成分为：nano
3 0.15g/ml,k2hpo40.004g/ml,mgso4·
7h2o 0.0075g/ml,cacl2·
2h2o 0.0036g/ml,柠檬酸0.006g/ml，柠檬酸铁0.006g/ml，edtana
2 0.001g/ml，na2co
3 0.02g/ml，其中，各物质用量分别为10ml/l、10ml/l 10ml/l、10ml/l、1ml/l、1ml/l、1ml/l、1ml/l。将小球藻液与bg-11培养基按照1:5的比例在恒温25℃，设置光暗比为12h昼:12h夜，光照强度维持在2000lux，转速为170rpm条件下培养至小球藻藻密度达到107个/ml，然后将小球藻溶液稀释10倍待用。
43.将灵芝菌接种到pda培养基中25.5℃恒温培养箱培养2天，pda培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18g、蒸馏水1000ml。然后选取灵芝菌生长较好的区域，打孔器打眼，将打眼的培养基块转移至pdb培养基培养6天，pdb培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000ml。直至形成灵芝菌孢子，待用。
44.将小球藻溶液和灵芝菌孢子在6000rmp下离心5min、然后用无菌水洗涤3次，将离心的小球藻和孢子置于混合培养基中培养直至形成均匀的藻菌球，混合培养基配方及浓度为：bg-11 97.5％，麦芽糖2％以及酵母膏0.5％。然后将藻菌球置于沼液中，该沼液成分及浓度为：葡萄糖0.8g/l，尿素0.752g/l，nah2po4·
2h2o 0.203g/l，kh2po40.0203g/l,cacl
2 0.004g/l，mgso
4 0.002g/l。向沼液中加入独脚金内酯类似物gr24浓度为10-11
mol/l，然后将沼液置于恒温25℃，设置光暗比为12h昼:12h夜，光照强度维持在2000lux，转速为160rpm条件下处理，得到处理后的沼液。
45.通过分别对处理第0天和第12天沼液中cod、tn以及tp浓度测定，计算得到各去除率，结果见表1。
46.实施例5
47.独脚金内酯类似物gr24在沼液处理中的应用，该应用具体包括以下步骤：
48.以bg-11培养基作为基础培养基，bg-11培养基成分为：nano
3 0.15g/ml,k2hpo40.004g/ml,mgso4·
7h2o 0.0075g/ml,cacl2·
2h2o 0.0036g/ml,柠檬酸0.006g/ml，
柠檬酸铁0.006g/ml，edtana
2 0.001g/ml，na2co
3 0.02g/ml，其中，各物质用量分别为10ml/l、10ml/l 10ml/l、10ml/l、1ml/l、1ml/l、1ml/l、1ml/l。将小球藻液与bg-11培养基按照1:5的比例在恒温25℃，设置光暗比为12h昼:12h夜，光照强度维持在2000lux，转速为170rpm条件下培养至小球藻藻密度达到107个/ml，然后将小球藻溶液稀释10倍待用。
49.将灵芝菌接种到pda培养基中25.5℃恒温培养箱培养2天，pda培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18g、蒸馏水1000ml。然后选取灵芝菌生长较好的区域，打孔器打眼，将打眼的培养基块转移至pdb培养基培养6天，pdb培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000ml。直至形成灵芝菌孢子，待用。
50.将小球藻溶液和灵芝菌孢子在6000rmp下离心5min、然后用无菌水洗涤3次，将离心的小球藻和孢子置于混合培养基中培养直至形成均匀的藻菌球，混合培养基配方及浓度为：bg-11 97.5％，麦芽糖2％以及酵母膏0.5％。然后将藻菌球置于沼液中，该沼液成分及浓度为：葡萄糖0.8g/l，尿素0.752g/l，nah2po4·
2h2o 0.203g/l，kh2po40.0203g/l,cacl
2 0.004g/l，mgso
4 0.002g/l。向沼液中加入独脚金内酯类似物gr24浓度为0mol/l，然后将沼液置于恒温25℃，设置光暗比为12h昼:12h夜，光照强度维持在2000lux，转速为160rpm条件下处理，得到处理后的沼液。
51.通过分别对处理第0天和第12天沼液中cod、tn以及tp浓度测定，计算得到各去除率，结果见表1。
52.表1处理第12天不同实施例的独脚金内酯类似物gr24对沼液中cod、tn以及tp去除率
[0053][0054][0055]
由表1的结果可知，实施例1中第12天cod和tp的去除率最优，实施2中tn的去除率最优。相对于实施例5中独角金内酯类似物gr24浓度为0的情况，添加独脚金内酯类似物gr24能够明显提高藻菌共生体对沼液中cod、tn以及tp的去除，且去除率与独角金内酯类似物gr24浓度具有一定的正相关关系。本发明的独脚金内酯类似物gr24在沼液中cod、tp、tn的去除率方面有明显的优势。独脚金内酯gr24浓度在10-7
～10-6
mol/l之间的改善效果最为显著。
[0056]
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人
员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的方法及技术内容作出些许的更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。