用于改进的固相DNA杂交和扩增的低结合载体的制作方法

技术特征：
1.一种进行核酸序列测定的方法，所述方法包括：(a)提供：(i)基底，所述基底包含一表面；(ii)在所述表面上的至少一层亲水性聚合物涂层，其中所述至少一层亲水性聚合物涂层包含：(1)第一层，所述第一层包含栓系至所述基底的所述表面上的聚合物分子的第一单层；(2)第二层，所述第二层包含栓系至所述第一单层的所述聚合物分子的聚合物分子的第二单层；和(3)第三层，所述第三层包含栓系至所述第二单层的所述聚合物分子的聚合物分子的第三单层，其中所述第一单层、所述第二单层和所述第三单层中的至少一层的所述聚合物分子包含支化聚合物分子；以及(iii)附接至所述至少一层亲水性聚合物涂层的多个寡核苷酸分子，其中所述多个寡核苷酸分子以至少1,000个分子/平方微米(μm2)的表面密度存在；(b)使多个样品核酸分子与附接至所述至少一层亲水性聚合物涂层的所述多个寡核苷酸分子接触；和(c)用标记有可检测标签的核苷酸和所述多个样品核酸分子或其衍生物中的样品核酸分子至少进行核苷酸结合反应或核苷酸掺入反应。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个寡核苷酸中的寡核苷酸被栓系至所述第二单层或第三单层的所述聚合物分子，并且分布在整个所述第二层或所述第三层的多个深度处。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个样品核酸分子以至少10,000个分子/平方毫米(mm2)的表面密度存在。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一层亲水性聚合物涂层表现出小于50度的水接触角。5.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括扩增所述多个样品核酸分子。6.根据权利要求5所述的方法，其中扩增包括桥扩增反应。7.根据权利要求5所述的方法，其中扩增包括滚环扩增(rca)反应。8.根据权利要求5所述的方法，其中扩增包括解旋酶依赖性扩增反应或重组酶依赖性扩增反应。9.根据权利要求1所述的方法，其中在(b)中的接触使用浓度不大于10nm的所述多个样品核酸分子进行。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一层亲水性聚合物涂层包含选自以下的分子：聚乙二醇(peg)、聚(乙烯醇)(pva)、聚(乙烯基吡啶)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(pvp)、聚(丙烯酸)(paa)、聚丙烯酰胺、聚(n-异丙基丙烯酰胺)(pnipam)、聚(甲基丙烯酸甲酯)(pma)、聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)(phema)、聚(低聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯)(poegma)、聚谷氨酸(pga)、聚赖氨酸、聚葡萄糖苷、链霉亲和素和右旋糖苷。11.一种进行核酸序列测定的方法，所述方法包括：(a)提供：(i)基底，所述基底包含表面；
(ii)在所述表面上的至少一层亲水性聚合物涂层；和(iii)附接至所述至少一层亲水性聚合物涂层的多个寡核苷酸分子，其中所述多个寡核苷酸分子以至少1,000个分子/μm2的表面密度存在；(b)使多个样品核酸分子与附接至所述至少一层亲水性聚合物涂层的所述多个寡核苷酸分子接触；和(c)用标记有可检测标签的核苷酸和所述多个样品核酸分子或其衍生物中的样品核酸分子至少进行核苷酸结合反应或核苷酸掺入反应，其中当所述可检测标签为花青染料-3(cy3)时并且在将所述表面浸入缓冲液中的同时，使用倒置荧光显微镜和相机在非信号饱和条件下获取所述表面的荧光图像时，所述表面的所述荧光图像表现出至少20的对比度噪声比。12.根据权利要求11所述的方法，所述方法还包括扩增所述多个样品核酸分子。13.根据权利要求12所述的方法，其中扩增包括桥扩增反应。14.根据权利要求12所述的方法，其中扩增包括滚环扩增(rca)反应。15.根据权利要求12所述的方法，其中扩增包括解旋酶依赖性扩增反应或重组酶依赖性扩增反应。16.根据权利要求11所述的方法，其中在(b)中的接触使用浓度不大于10nm的所述多个样品核酸分子进行。17.根据权利要求11所述的方法，其中所述至少一层亲水性聚合物涂层表现出小于50度的水接触角。18.根据权利要求11所述的方法，其中所述至少一层亲水性聚合物涂层包含选自以下的分子：聚乙二醇(peg)、聚(乙烯醇)(pva)、聚(乙烯基吡啶)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(pvp)、聚(丙烯酸)(paa)、聚丙烯酰胺、聚(n-异丙基丙烯酰胺)(pnipam)、聚(甲基丙烯酸甲酯)(pma)、聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)(phema)、聚(低聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯)(poegma)、聚谷氨酸(pga)、聚赖氨酸、聚葡萄糖苷、链霉亲和素和右旋糖苷。19.根据权利要求11所述的方法，其中所述多个样品核酸分子中的至少一个样品核酸包含单链多聚核酸分子，所述单链多聚核酸分子包含规则出现的单体单元的重复。20.根据权利要求11所述的方法，其中所述多个样品核酸分子中的至少一个样品核酸包含双链多聚核酸分子，所述双链多聚核酸分子包含规则出现的单体单元的重复。

技术总结
描述了用于进行固相核酸杂交和扩增的低非特异性结合载体和制剂，其为核酸检测、扩增和测序应用提供改进的性能。这些载体表现出高对比度噪声比(CNR)，有助于更准确的数据收集和更准确的序列读取。和更准确的序列读取。和更准确的序列读取。


技术研发人员：锡南
受保护的技术使用者：元素生物科学公司
技术研发日：2019.11.14
技术公布日：2022/1/18