技术特征：
1.一种构建重组人巨细胞病毒的方法，其特征在于：包括利用crispr/cas9方法敲除目的人巨细胞病毒中mirna基因，得到所述mirna表达量低于所述目的人巨细胞病毒的重组病毒。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述mirna能抑制宿主ifnar1表达，所述mirna的核苷酸序列是序列表中序列1。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述crispr/cas9方法利用crispr/cas9系统敲除目的人巨细胞病毒中mirna基因，所述crispr/cas9系统包括表达sgrna的载体，所述sgrna的编码序列为序列表中序列2第1-19位序列和/或序列表中序列2第1-19位序列的反向互补序列。4.权利要求1-3任一项所述的方法在鉴定人巨细胞病毒mirna功能中的应用。5.权利要求1-3任一项所述的方法在制备鉴定人巨细胞病毒mirna功能的产品中的应用。6.由权利要求1-3任一项所述的方法构建的重组人巨细胞病毒。7.权利要求6所述的重组人巨细胞病毒在鉴定人巨细胞病毒mirna功能中的应用。8.权利要求6所述的重组人巨细胞病毒在制备鉴定人巨细胞病毒mirna功能的产品中的应用。9.抑制mirna分子的活性和/或降低所述mirna分子的表达量和/或降低所述mirna分子的含量的物质在制备抗病毒药物中的应用，其特征在于：所述mirna分子能抑制宿主ifnar1表达，所述mirna分子的核苷酸序列是序列表中序列1。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述抗病毒药物为抗疱疹病毒的药物，具体为抗巨细胞病毒的药物，更具体为抗人巨细胞病毒的药物。
技术总结
本发明提供一种构建重组人巨细胞病毒的方法及其应用。本发明构建重组人巨细胞病毒的方法利用Crispr-Cas9技术快速、高特异性的构建了HCMV编码miRNA缺失株，所得HCMV编码miRNA缺失株在编码hcmv-miR-US33as-5p部位发生基因突变，而在其他部位序列无改变，可在易感染细胞中传代。本发明还利用构建的HCMV编码miRNA缺失株，证实了IFNAR1是hcmv-miR-US33as-5p的靶标，抑制该miRNA分子的表达可导致宿主细胞IFNAR1的恢复性上调。针对hcmv-miR-US33as-5p的抑制物有作为抗疱疹病毒感染防治候选药物中应用的价值。防治候选药物中应用的价值。防治候选药物中应用的价值。
技术研发人员：张艳宇 邓江 宋鑫 马平 吕丽萍 张骞 张阳阳 周锡鹏 许金波
受保护的技术使用者：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
技术研发日：2020.07.10
技术公布日：2022/1/10
再多了解一些
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