二价环状DNA链的制备方法、二价环状核酸适体及其应用与流程

技术特征：
1.二价环状dna链的制备方法，其特征在于，两条dna单链的两端分别修饰基团，然后通过化学反应将两条dna单链连接起来形成二价环状dna链；两条dna单链的序列相同或者不同；每条dna单链的3’和5’端修饰的基团相同，且能够与另一条dna单链修饰的基团至少发生下述的任一反应：叠氮基团和二苯基环辛炔基团的点击化学反应；叠氮基团和环辛炔基基团的点击化学反应；叠氮基团和炔基基团的点击化学反应；马来酰亚胺基基团和呋喃基团的加成反应；nhs酯基基团和氨基基团的取代反应；硫代磷酸基团和氯乙酰基基团的sn2反应；氨基基团和羧基基团的缩合反应。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，dna单链的长度为10个碱基-75个碱基。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，发生反应的两种dna单链浓度均为2.5μm～50μm；优选2.5μm～10μm。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，用dpbs做溶剂时，反应温度为-25℃～30℃，优选-20℃～25℃；用水做溶剂时，反应温度为-22～-18℃。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，反应时间0.5-24h，优选1h-24h。6.二价环状dna链，由权利要求1-5任一项所述的方法制备而成。7.二价环状核酸适体，其特征在于，由权利要求1-5任一项所述的方法制备而成，两条dna单链均选自以下核酸适体中的任一种，或者两条dna单链选自以下不同核酸适体中任两种：sgc8：atctaactgctgcgccgccgggaaaatactgtacggttaga；xq-2d：actcatagggttaggggctgctggccagatactcagatggtagggttactatgagc；td05：aggaggatagttcggtggctgttcagggtctcctcct；ld201t1：tagccaaggtaaccagtacaaggtgctaaacgtaatg gcttcggcttac；te02：taggcagtggtttgacgtccgcatgttgggaatagccacg cct。8.权利要求7所述的二价环状核酸适体的应用，其特征在于，靶向结合一种以上的靶标。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，靶向识别病灶靶标并结合t细胞或者药物进行治疗。10.权利要求7所述的二价环状核酸适体的应用，其特征在于，用于制备靶向结合一种以上靶标的制剂。

技术总结
本发明公开了一种二价环状DNA链的制备方法、二价环状核酸适体及其应用。该方法通过在两条DNA单链的两端分别修饰基团，然后通过化学反应可以快速的将两条DNA单链连接起来，反应过程无需模板链，只需在DPBS缓冲液和室温下就可进行。并且不需要粘性末端进行碱基互补配对，所以对于短链DNA也是适用的，适用范围更广。此方法很好的克服了通过DNA连接酶的方法构建二价环形结构的不足。构建二价环形结构的不足。


技术研发人员：王雪强 谭蔚泓 张晓静
受保护的技术使用者：湖南大学
技术研发日：2021.06.16
技术公布日：2022/1/10