一种中性粒细胞缺失小鼠模型构建方法与流程

技术特征：
10min。8.如权利要求5所述的中性粒细胞缺失小鼠模型构建方法，其特征在于，针对5’同源臂的引物为引物529和引物718，核苷酸序列分别如seq id no:14和seq id no:15所示；针对3’同源臂的引物为引物681和引物727，核苷酸序列分别如seq id no:12和seq id no:13所示；针对sgrna串联表达单元部分的引物为引物679和引物682，核苷酸序列分别如seq id no:16和seq id no:17所示。9.如权利要求8所述的中性粒细胞缺失小鼠模型构建方法，其特征在于，pcr体系如下：引物各0.2μl，2
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taq master mix 5μl，基因组dna 1μl，补充h2o至总体积10μl；pcr反应程序如下：95℃ 5min；94℃ 30sec，60℃ 30sec，72℃ 70sec，35个循环；72℃ 10min。10.如权利要求1～3中任一项所述的中性粒细胞缺失小鼠模型构建方法，其特征在于，使用毛细管电泳，对中性粒细胞缺失的小鼠模型不同组织和器官的gfi1打靶位点进行切割检测，其中用于pcr扩增的特异性引物序列为：f-tgaaggagcggcacatttct，如seq id no:6所示；r-gcacagctgttgacatagagga，如seq id no:7所示。

技术总结
本发明属于基因工程和遗传修饰技术领域，具体涉及一种中性粒细胞缺失小鼠模型构建方法。本发明通过CRISPR/Cas9基因组编辑技术将特异性打靶小鼠Gfi1基因的sgRNA串联表达单元敲入进入小鼠Rosa26位点，然后将此表达sgRNA的基因敲入小鼠纯合子与过表达Cas9蛋白的基因敲入小鼠纯合子进行杂交，即可以获得中性粒细胞缺失小鼠模型。对此小鼠外周血使用流式细胞术进行免疫表型检测，结果表明，此小鼠中性粒细胞的清除效率高达100％，为研究中性粒细胞在疾病中的作用提供了一种全新的遗传模型。胞在疾病中的作用提供了一种全新的遗传模型。胞在疾病中的作用提供了一种全新的遗传模型。


技术研发人员：梁银明 张黎琛 卢燎勋 黄蓉 谷妍蓉 晁天柱 李天函 周斌辉
受保护的技术使用者：新乡医学院
技术研发日：2021.09.30
技术公布日：2022/1/10