龟鹿补肾胶囊中陈皮组分的HPLC检测方法与流程

龟鹿补肾胶囊中陈皮组分的hplc检测方法
技术领域
1.本发明属于中医中药技术领域，具体涉及一种龟鹿补肾胶囊中陈皮组分的hplc检测方法。


背景技术：

2.龟鹿补肾胶囊是一种中药成方制剂，具有壮筋骨，益气血，补肾壮阳之功效，收载于卫生部颁药品标准《中药成方制剂》第十七册国家食品药品监督管理局标准ybz00672012。临床上主治身体虚弱，精神疲乏，腰腿酸软，头晕目眩，肾亏精冷，性欲减退，夜多小便，健忘失眠。由于其疗效确切，广泛应用于临床，其处方组成为菟丝子、淫羊藿、续断、锁阳、狗脊、酸枣仁、制何首乌、炙甘草、陈皮、鹿角胶、熟地黄、龟甲胶、金樱子、炙黄芪、山药、覆盆子。
3.陈皮作为龟鹿补肾胶囊处方的主要有效组成之一，具有理气健脾，燥湿化痰之功效。主治脘腹胀满，食少吐泻，咳嗽痰多。其主要的有效成分有挥发油和黄酮类物质(其中以橙皮苷为主)，一般通过测定橙皮苷的含量作为评价陈皮的质量标准。龟鹿补肾胶囊的现行标准中，卫生部颁药品标准《中药成方制剂》第十七册国家食品药品监督管理局标准ybz00672012，不控制陈皮组分橙皮苷的含量，仅以淫羊藿苷为质控指标控制淫羊藿的含量，不够全面，不尽合理。
4.本发明的目的是针对现有技术存在的不足而提供的一种龟鹿补肾胶囊中陈皮组分的hplc检测方法，采用该方法对陈皮中的黄酮类物质橙皮苷进行测定，操作简单，检测效率高，误差小，重现性好，专属性强，检验方法较稳定，适用性广，能有效的控制龟鹿补肾胶囊的质量。


技术实现要素：

5.为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：一种龟鹿补肾胶囊中陈皮组分的hplc检测方法，包括以下步骤：(1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：waterst3 c18柱，4.6
×
250mm，5μm或等效柱，流动相：乙腈-水(22∶78)。流速：1.0ml/min，检测波长：283nm，柱温：35℃，进样量：10μl，理论板数按橙皮苷峰计算应不低于5000。(2)溶液制备：
①
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，混匀，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，5000转/min离心5min后用0.45μm的滤膜过滤，即得供试品溶液。
②
对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品适量，用甲醇定量稀释制成每1ml含
0.4mg的溶液，即得。(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定，记录色谱图。供试品溶液中橙皮苷的含量用对照品溶液以外标法计算。
6.上述的龟鹿补肾胶囊中陈皮组分的hplc检测方法，所述的检测器为紫外-可见分光检测器。
7.所述的龟鹿补肾胶囊中陈皮组分的hplc检测方法，用hplc法检测龟鹿补肾胶囊中陈皮组分橙皮苷的含量，将陈皮的主要质控指标橙皮苷与其它组分分离，可单独测定橙皮苷的含量。
8.以下为本发明龟鹿补肾胶囊中陈皮组分的hplc检测方法的方法学验证情况：1、专属性试验阴性对照溶液配制：参照处方比例及供试品溶液的制备方法，配制阴性对照溶液。分别精密吸取溶剂、阴性对照溶液、供试品溶液及对照品溶液各10μl，按前述检测方法进行测定，记录色谱图(见图1、图2、图3、图4)。从图中可见，供试品溶液色谱图中，橙皮苷与邻近峰均能达到基线分离，溶剂及阴性对照均无干扰，说明本发明方法的专属性良好。
9.2、线性关系考察精密称取橙皮苷对照品10.50mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定量稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备溶液，精密量取对照品储备溶液适量，用甲醇定量稀释制得不同浓度标准曲线溶液1～7，取制备得到的标准曲线溶液，进样测定，以浓度x(μg/ml)对峰面积y进行线性回归，结果：在51.37μg/ml～1027.42μg/ml 范围内线性关系良好，线性方程为y＝18.513x-99.937，相关系数r为0.9994(见图5)。
10.3、溶液稳定性考察取广西华天宝药业有限公司生产的一批样品(批号190902)制备供试品溶液，分别在放置0、4、8、12、16小时后进样测定，测定橙皮苷的峰面积，结果表明供试品溶液在16小时内稳定，橙皮苷峰面积的rsd 为0.45％，测定结果见下表1。表1溶液稳定性试验
11.4、进样精密度试验取广西华天宝药业有限公司生产的一批样品(批号190902)按前述检测方法中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液1份，连续进样6针，测定橙皮苷的峰面积，考察仪器的精密度，结果橙皮苷峰面积的rsd为 0.51％，表明仪器的精密度良好。测定结果见下表2。表2进样精密度试验
12.5、重复性试验
取广西华天宝药业有限公司生产的一批样品(批号190902)，按前述检测方法中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液6份，进样测定，计算橙皮苷的含量及rsd，结果见下表3。表3重复性试验
13.6、加样回收率试验精密称取橙皮苷对照品22.36mg，置500ml容量瓶中，加甲醇溶解并定量稀释至刻度，摇匀，即得对照品加样溶液，精密称取已知含量的样品(广西华天宝药业有限公司生产的批号为190902的样品)6份，每份 0.5g，置具塞锥形瓶中，精密量取对照品加样溶液50ml至上述具塞锥形瓶中，按前述检测方法中供试品溶液的制备方法制成100％的回收率溶液，进样测定，结果见下表4。从测定结果可见，本发明龟鹿补肾胶囊中陈皮组分的hplc检测方法操作简单，适用性广。表4加样回收率试验
14.本发明的有益效果为本发明龟鹿补肾胶囊中陈皮组分的hplc检测方法，该方法操作简单，检测效率高，误差小，重现性好，专属性强，检验方法较稳定，受影响的因素较少，适用性广；本发明方法的专属性、稳定性、精密度、准确度等均符合方法学验证要求，具有很强实用性。
附图说明
15.图1溶剂的液相色谱图图2阴性对照溶液的液相色谱图图3供试品溶液的液相色谱图图4对照品溶液的液相色谱图图5本发明制备的标准曲线溶液中橙皮苷的浓度x(μg/ml)与峰面积y的线性关系图
具体实施方式
16.实施例1一种龟鹿补肾胶囊中陈皮组分的hplc检测方法，包括以下步骤：(1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：waterst3 c18柱，4.6
×
250mm，5μm或等效柱，流动相：乙腈-水(22∶78)。流速：1.0ml/min，检测波长：283nm，柱温：35℃，进样量：10μl，理论板数按橙皮苷峰计算应不低于5000。
(2)溶液制备：
①
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，混匀，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，5000转/min离心5min后用0.45μm的滤膜过滤，即得供试品溶液。
②
对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品适量，用甲醇定量稀释制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。(3)测定：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定，记录色谱图。供试品溶液中橙皮苷的含量用对照品溶液以外标法计算。
17.由上所述可见，采用本发明龟鹿补肾胶囊中陈皮组分的hplc检测方法，操作简单，检测效率高，误差小，重现性好，适用性广；采用该方法对龟鹿补肾胶囊中陈皮组分进行检测，能够快速准确检测出橙皮苷的含量，从而有利于对龟鹿补肾胶囊质量进行判定。