一种能够增强细胞能量并提高皮肤抵抗力的组合物及其制备方法与应用与流程

1.本发明属于化妆品领域，具体涉及一种能够增强细胞能量并提高皮肤抵抗力的组合物及其制备方法与应用。


背景技术：

2.皮肤是保护人体的天然屏障。它既可以保护人体内各组织和器官不受病原微生物等外界物质以及物理等机械损伤的侵袭，并防止人体的水分、电解质和营养物质等的流失，从而维持皮肤稳态的平衡。表皮细胞是皮肤细胞新陈代谢的主要功能细胞，其具有促进皮肤新陈代谢，提高皮肤细胞的活力，保持皮肤健康、年轻的重要作用。
3.表皮细胞中的线粒体，真核细胞的重要细胞器，是细胞氧化代谢的关键部位，是细胞产生atp的重要场所，其活性可以直接反映细胞的新陈代谢能力。线粒体通过参与细胞的有氧代谢过程，为皮肤细胞的其他各项生理功能和化学反应提供能量，保持细胞的正常运行，从而保持皮肤细胞充沛的活力。若线粒体受到损伤或者失去活性，皮肤细胞能量不足，功能性降低，就会导致皮肤屏障受损以及皮肤免疫抵抗力下降。因此，表皮细胞中的线粒体活性大小是衡量细胞活力的重要指标。
4.atp是细胞内的直接能源物质。细胞内的atp在atp酶的作用下，水解时可以释放出大量的能量，为细胞新陈代谢等化学反应的发生和进行提供动力。atp是细胞增殖、dna损伤修复和胶原合成所需的，通过提高细胞内atp含量，可以为肌肤细胞提供新生能量，使皮肤达到良好的新陈代谢平衡状态，全面改善肌肤状态。而atp主要由线粒体等细胞器产生的，当线粒体的活性降低时，就意味着产生更少的可被皮肤中细胞消耗的atp。因此，通过检测细胞内atp含量可以反映出细胞内线粒体活性的强弱。
5.中国专利申请cn110251447公开了一种增强皮肤抵御力与代谢力的护肤产品，该护肤品原料有葡萄籽提取液、胶原蛋白、尿囊素、透明质酸、甘油、薰衣草精油、黄芪提取液、蜂胶粉末、冬青提取液以及人参根部提取液的添加，能够减少对皮肤的刺激，有效减少皮肤的水分散失，同时促进皮肤新陈代谢，修复老化细胞，促进细胞吸收，增强皮肤抵抗力，全面调理皮肤营养和水分，能够满足不同人群的使用需求。但该专利只是从外因上增强了皮肤的防御能力，并没有从内因上通过提高细胞能量，调动皮肤自身力量，使皮肤变得更加强健来解决问题。


技术实现要素：

6.通过外界补充和激发自身细胞能量来提高皮肤的能级，提高皮肤细胞能量，促进皮肤良好的新陈代谢从而促进细胞活性和再生，对于修护皮肤屏障，增强皮肤细胞的免疫抵抗力具有积极的意义。
7.有鉴于此，本发明提供了一种可以从内因上提高细胞能量并提高皮肤抵抗力的组合物。
8.具体的，
9.1.本发明提供了一种能够增强细胞能量并提高皮肤抵抗力的组合物，其特征在于，包括以下组分：依克多因，腺苷，辅酶q10，甘油葡糖苷，氢化卵磷脂，透明质酸钠。
10.2.优选的，相对于100重量份的所述组合物，所述依克多因为0.5～6重量份，优选为1～3重量份；
11.进一步优选，所述腺苷为0.5～6重量份，优选为1～2重量份；
12.进一步优选，所述辅酶q10为0.8～6重量份，优选为0.8～3重量份；
13.进一步优选，所述甘油葡糖苷为0.1～5重量份，优选为0.5～2重量份；
14.进一步优选，所述氢化卵磷脂为1～10重量份，优选为2.5～5重量份；
15.进一步优选，所述透明质酸钠为1～10重量份，优选为2～6重量份。
16.3.根据项1或2所述的组合物，所述透明质酸钠为低分子量透明质酸钠，优选的，所述低分子量透明质酸钠分子量为1～10kda，优选的分子量为3～5kda。
17.4.根据项1～3任一项所述的组合物，所述组合物由依克多因，腺苷，辅酶q10，甘油葡糖苷，氢化卵磷脂，透明质酸钠组成。
18.5.本发明进一步提供了一种制备能够增强细胞能量并提高皮肤抵抗力的组合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
19.(1)将腺苷、辅酶q10、依克多因加入去离子水中，加热搅拌溶解，得到溶液1；
20.(2)向步骤(1)中得到的溶液中加入甘油葡糖苷、氢化卵磷脂、透明质酸钠，加热搅拌溶解，得到溶液2；
21.(3)将溶液2冷却至室温，得到所述组合物。
22.6.根据项5所述的制备方法，步骤(1)中的加热温度为75℃～85℃，搅拌速率为200～300r/min，搅拌时间为25min～45mim；
23.优选，步骤(2)中的加热温度为70℃～75℃，搅拌速率为250～300r/min，搅拌时间20min～35min。
24.7.根据项5或6所述的方法，其制造的组合物为项1～4任一项所述的组合物。
25.8.根据项1～4任一项所述的组合物或根据项5或6所述的方法制备的能够增强细胞能量并提高皮肤抵抗力的组合物在增强细胞能量并提高皮肤抵抗力方面的应用。
26.9.根据项1～4任一项所述的组合物在皮肤护理品中的应用。
27.10.本发明还提供了一种皮肤护理品，其包含重量百分比为0.8％～4％的项1～4任一项所述的组合物。
28.发明效果
29.1.本发明从针对于解决增强细胞能量并提高皮肤抵抗力的问题出发，在组合物中，依克多因与其他组分按照特定的比例复配形成多元功效组合物，所含的有效成分互补、协同、配合，得到了更合理高效的利用。具体地，加入依克多因可提升皮肤细胞的免疫防护能力，增加细胞修复能力，在此基础上额外加入腺苷、辅酶q10两种成分，从内到外的对皮肤进行调理，能够增加细胞能量，并提高皮肤中细胞的再生能力，重建皮肤肌理，使皮肤保持活力。其中腺苷可直接进去细胞补充能量，而辅酶q10可以将细胞内的营养物质转换为能量，来增加人体细胞的能量，并能增强机体的细胞免疫功能。腺苷和辅酶q10搭配依克多因，三者起到协同增效作用，增强细胞能量和细胞修复能力，提高皮肤的新陈代谢，激活再生皮
肤细胞活性，提升皮肤细胞的防御能力。
30.2.本发明还添加甘油葡糖苷具有天然保湿作用的成分，能增强皮肤的抗氧化性，清除细胞内外的自由基，避免过多的自由基对皮肤细胞产生损害，影响细胞活性，而且添加透明质酸钠和氢化卵磷脂可以提高透皮吸收的能力，提高自由基的清除效率，抗氧化效果更好，明显增强皮肤屏障修复能力。因此，该组合物成分之间相互配合，协同增效，从皮肤内到外的通过增强细胞能量及活性、修护角质屏障、提高免疫屏障，将有害侵扰因素隔绝在皮肤之外，构筑完整健康的肌肤防御线，从根本上解决各种皮肤问题。
具体实施方式
31.下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
32.需要说明的是，在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可以理解，技术人员可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名词的差异作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然而所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
33.本发明提供了一种具有增强细胞能量并提高皮肤抵抗力的组合物，包括依克多因，腺苷，辅酶q10，甘油葡糖苷，氢化卵磷脂，透明质酸钠。
34.依克多因即四氢甲基嘧啶羧酸，是维持渗透压平衡的重要物质，其独特分子结构使之具有很强的水分子络合能力。依克多因能够作为一种稳定剂，保护酶、dna、细胞等抵抗高盐分、干燥、冷冻、高温等逆环境，起到抗逆协助等作用。对皮肤来说是一种极好的保湿剂，同时能提高皮肤细胞免疫防护的能力，增加细胞修护能力，有效抵御微生物及过敏原的入侵，起到抗过敏、消炎、修复保护的作用，增强微生态的屏障。
35.在本发明的组合物中，加入依克多因可提升皮肤细胞的免疫防护能力，增加细胞修复能力。
36.在本发明的某些具体的实施方式中，相对于100重量份的所述组合物，所述依克多因的添加量为0.5～6重量份，例如可以是0.5重量份、0.6重量份、0.8重量份、1重量份、2重量份、3重量份、4重量份、5重量份、6重量份，优选的，添加量为1～3重量份。
37.腺苷，作为小分子成分可以快速的渗透进皮肤中，除能够直接转化为能量为细胞直接使用外，还可以促进细胞的增殖，同时也可以有效的促进皮肤的补水保湿。
38.在本发明的组合物中，加入腺苷可直接进去细胞补充能量。
39.在本发明的某些具体的实施方式中，相对于100重量份的所述组合物，所述腺苷为0.5～6重量份，例如可以是0.5重量份、0.6重量份、0.7重量份、0.8重量份、0.9重量份、1重量份、2重量份、3重量份、4重量份、5重量份，优选的，添加量为1～2重量份。
40.辅酶q10存在于自然界的脂溶性醌类化合物，是一种脂溶性抗氧化剂，其结构与维生素k、维生素e与质体醌相似。在体内，辅酶q10是细胞线粒体中的能量转换剂，它通过转移
和传递电子参与“三羧酸循环”产生atp(三磷酸腺苷)，即能量因子供细胞代谢使用。因此，辅酶q10是细胞呼吸和代谢的重要辅助因子，是生成atp的重要辅酶。同时辅酶q10能清除自由基，增强机体的细胞免疫功能，提高人体的免疫力。
41.在本发明的组合物中，辅酶q10可以将细胞内的营养物质转换为能量，来增加人体细胞的能量，并能增强机体的细胞免疫功能。
42.在本发明的某些具体的实施方式中，相对于100重量份的所述组合物，所述辅酶q10为0.8～6重量份，0.8重量份、0.9重量份、1重量份、2重量份、3重量份、4重量份、5重量份、6重量份，优选，添加量为0.8～3重量份。
43.在本发明的组合物中，加入腺苷、辅酶q10两种成分，从内到外的对皮肤进行调理，能够增加细胞能量，并提高皮肤中细胞的再生能力，重建皮肤肌理，使皮肤保持活力。
44.而腺苷和辅酶q10搭配依克多因，三者起到协同增效作用，增强细胞能量和细胞修复能力，提高皮肤的新陈代谢，激活再生皮肤细胞活性，提升皮肤细胞的防御能力。
45.甘油葡糖苷是一种糖苷化合物，由葡萄糖基和甘油组成，是微生物在胁迫条件下一保护物质，具有保湿、抗氧化、抗衰老以及细胞修复等功效。它能够增强细胞活力和新陈代谢，增强皮肤细胞的抗氧化性。所以甘油葡糖苷是一种天然的绿色植物的重要保湿功效成分。
46.在本发明的组合物中，加入甘油葡糖苷具有天然的保湿成分，能增强皮肤的抗氧化性，清除细胞内外的自由基，避免过多的自由基对皮肤细胞产生损害，影响细胞活性。
47.在本发明的某些具体的实施方式中，相对于100重量份的所述组合物，所述甘油葡糖苷为0.1～5重量份，例如可以是0.1重量份、0.2重量份、0.3重量份、0.4、0.5重量份、0.6重量份、0.7重量份、0.8重量份、0.9重量份、1重量份、2重量份、3重量份、4重量份、5重量份，优选为0.5～2重量份。
48.氢化卵磷脂，是生物细胞的活性成分，与细胞膜的磷脂结构十分相似，在细胞渗透性和新陈代谢中起重要作用，氢化卵磷脂能维持皮肤正常水分平衡、防止脱皮、增加皮肤柔软性、增厚角质层，并且能够降低产品的刺激，减少过敏几率，在修复皮肤屏障方面发挥重要作用。
49.在本发明的某些具体的实施方式中，相对于100重量份的所述组合物，所述氢化卵磷脂为1～10重量份，例如可以是1重量份、1.5重量份、2重量份、2.5重量份、3重量份、4重量份、5重量份、6重量份、7重量份、8重量份、9重量份、10重量份，优选为2.5～5重量份。
50.水解透明质酸钠的主要作用是皮肤调理剂，是一种酸性粘多糖，可吸收其本身重量1000倍水分，以达到通过保留皮肤水分、阻止水分经表皮流失，以及当皮肤受到损伤时的屏障修复，可改善皮肤营养代谢，使皮肤光滑而富有弹性，在保湿的同时又是良好的透皮吸收促进剂。
51.在本发明的某些具体的实施方式中，相对于100重量份的所述组合物，所述透明质酸钠为1～10重量份，例如可以是1重量份、2重量份、3重量份、4重量份、5重量份、6重量份、7重量份、8重量份、9重量份、10重量份，优选的，添加量为2～6重量份。
52.本发明的组合物中透明质酸钠的种类不受限制，在某些实施方式中，所述透明质酸钠为低分子量透明质酸钠，在某些优选的实施方式中，所述低分子量透明质酸钠分子量为1～10kda，例如可以是1kda、2kda、2.2kda、2.5kda、2.8kda、3kda、3.1kda、3.2kda、
3.3kda、3.4kda、3.5kda、3.6kda、3.7kda、3.8kda、3.9kda、4kda、4.1kda、4.2kda、4.3kda、4.4kda、4.5kda、4.6kda、4.7kda、4.8kda、4.9kda、5kda、6kda、6.5kda、7kda、7.5kda、8kda、9kda、10kda。优选的，分子量为3～5kda。
53.在本发明的组合物中，加入透明质酸钠和氢化卵磷脂可以提高透皮吸收的能力，提高自由基的清除效率，抗氧化效果更好，明显增强皮肤屏障修复能力。
54.在本发明的某些具体实施方式中，所述具有增强细胞能量并提高皮肤抵抗力的组合物，仅有依克多因，腺苷，辅酶q10，甘油葡糖苷，氢化卵磷脂，透明质酸钠六种组分。
55.本发明提供了一种制备具有增强细胞能量并提高皮肤抵抗力的组合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
56.(1)将腺苷、辅酶q10、依克多因加入去离子水中，加热搅拌溶解，得到溶液1；
57.(2)向步骤(1)中得到的溶液中加入甘油葡糖苷、氢化卵磷脂、透明质酸钠，加热搅拌溶解，得到溶液2；
58.(3)将溶液2冷却至室温，得到所述的组合物。
59.进一步的，在上述制备方法中，步骤(1)中的加热温度为75℃～85℃，例如，温度可以为75℃、76℃、77℃、78℃、79℃、80℃、81℃、82℃、83℃、84℃、85℃。搅拌速率为200～300r/min，搅拌时间为25min～45mim。
60.进一步的，在上述制备方法中，步骤(2)中的加热温度为70℃～75℃，例如，温度可以为70℃、71℃、72℃、73℃、74℃、75℃，搅拌速率为250～300r/min，搅拌时间20min～35min。
61.进一步的，上述任一种制备方法所制备出的组合物为本发明提供的任何一种具有增强细胞能量并提高皮肤抵抗力的组合物。
62.进一步的，本发明提供了如前所述的本发明提供的任何一种组合物在增强细胞能量并提高皮肤抵抗力方面的应用。
63.进一步的，本发明提供了如前所述的本发明提供的任何一种组合物在皮肤护理品中的应用。
64.所述应用包括但不限于，将本发明所提供的具有增强细胞能量并提高皮肤抵抗力的组合物添加到皮肤护理品中、与皮肤护理品直接组合使用、与其他护肤品间接组合使用。
65.所述皮肤护理品包括但不限于水、乳、膏、霜、精华液、防晒霜、油类、爽身类、沐浴类、眼周护肤类、面膜类、洗面类、卸妆类、粉底类、粉饼类、胭脂类、涂身彩妆类、描眉类、眼影类、眼睑类、眼毛类、眼部彩妆卸除剂、护唇膏类、亮唇油类、普色唇膏类、唇线笔。
66.发明进一步提供了一种皮肤护理品，其包含了如前所述任一种具有增强细胞能量并提高皮肤抵抗力的组合物，含量为0.8％～4％。
67.有益效果
68.1.本发明提供的组合物对细胞的能量具有明显的提高，最高接近50％，其中各组分之间协同增效，对细胞能量的提升要优于单独使用任何一种组分所起到的效果，本发明通过组分之间合理的配比使该组合物对细胞的能量提升的效果更好。
69.2.本发明提供的组合物对细胞的增殖率的提高作用非常明显，最高达到40％，优于单独使用任何一种组分所起到的效果，同时对细胞的迁移能力具有非常明显的提高，最高接近50％，比对照组的迁移率高出接近150％，细胞迁移率越高表明促进细胞划痕修复的
能力越强，本发明提供的组合物使用多种活性成分的有效组合和用量配比，对细胞具有良好的促增殖和创伤修复作用。
70.3.在细胞修复方面，本发明提供的组合物细胞先干燥后保护，对细胞的修复效果使细胞活力提升了16.73％
‑
28.63％，预保护后干燥，使细胞活力提升了21.88％
‑
30.22％，相对于省略其中一种或几种组分细胞活力提升只有10.53％
‑
11.73％。本发明的组合物在细胞修复方面的效果非常突出，对修复皮肤屏障具有显著的效果，有利于抵御人皮肤角质细胞受损。
71.实施例
72.下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
73.下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径购买得到。
74.表1各实施例与对比例成分表
[0075][0076]
[0077]
实施例1
[0078]
(1)称取依克多因1.5g，腺苷1g，辅酶q10 2g，加入到88g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0079]
(2)称取甘油葡萄糖苷1.5g，氢化卵磷脂4g，分子量为3.5kda的透明质酸钠2g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0080]
实施例2
[0081]
(1)称取依克多因3g，腺苷2g，辅酶q10 1g，加入到84g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0082]
(2)称取甘油葡萄糖苷2g，氢化卵磷脂2.5g，分子量为3.5kda的透明质酸钠5.5g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0083]
实施例3
[0084]
(1)称取依克多因2g，腺苷2.5g，辅酶q10 1.5g，加入到86g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0085]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0086]
实施例4
[0087]
(1)称取依克多因2g，腺苷2.5g，辅酶q10 1.5g，加入到86g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0088]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为2kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0089]
实施例5
[0090]
(1)称取依克多因2g，腺苷2.5g，辅酶q10 1.5g，加入到86g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0091]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为7kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0092]
对比例1
[0093]
(1)称取依克多因2g，加入到90g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0094]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0095]
对比例2
[0096]
(1)称取依克多因6g，加入到86g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0097]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0098]
对比例3
[0099]
(1)称取腺苷1.5g，加入到90.5g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0100]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0101]
对比例4
[0102]
(1)称取腺苷6g，加入到86g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0103]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0104]
对比例5
[0105]
(1)称取辅酶q10 2.5g，加入到89.5g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0106]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0107]
对比例6
[0108]
(1)称取辅酶q10 6g，加入到86g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0109]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0110]
对比例7
[0111]
(1)称取依克多因2g，辅酶q10 2.5g，加入到87.5g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0112]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0113]
对比例8
[0114]
(1)称取依克多因3g，辅酶q10 3g，加入到86g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0115]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0116]
对比例9
[0117]
(1)称取腺苷1.5g，辅酶q10 2.5g加入到88g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0118]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0119]
对比例10
[0120]
(1)称取腺苷2.5g，辅酶q10 3.5g，加入到86g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0121]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0122]
对比例11
[0123]
(1)称取依克多因2g，腺苷1.5g，加入到88.5g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0124]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0125]
对比例12
[0126]
(1)称取依克多因3g，腺苷3g加入到86g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0127]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，将三种物质依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0128]
对比例13
[0129]
(1)称取依克多因2g，腺苷2.5g，辅酶q10 1.5g，加入到87g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0130]
(2)称取甘油葡萄糖苷1g，加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0131]
对比例14
[0132]
(1)称取依克多因2g，腺苷2.5g，辅酶q10 1.5g，加入到81g去离子水中，将混合溶液加热至75℃，200r/min搅拌溶解25min；
[0133]
(2)称取氢化卵磷脂3g，分子量为3.5kda的透明质酸钠4g，依次加入到步骤(1)中的混合溶液中，加热至70℃，300r/min搅拌溶解20min，然后冷却室温，即得到所述的组合物。
[0134]
试验例
[0135]
1.细胞能量水平测定
[0136]
atp(adenosine 5
’‑
triphosphate)即三磷酸腺苷，是生物体内能量装换最基本的载体，其含量的变化直接关系到各器官的能量代谢。atp作为最重要的能量分子在细胞的各
种生理、病理过程中起着重要的作用。atp水平的改变会影响细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，atp水平会下降。
[0137]
本试验采用atp含量测定试剂盒检测细胞内的atp水平表征细胞能量的水平。
[0138]
试验步骤：
[0139]
1.取处于对数生长期的hacat细胞(人表皮角质形成细胞)用胰酶消化后，调节细胞密度5
×
104/ml，接种于96孔细胞培养板(black plate)，每孔100ul细胞悬液，为实验组，设置只含培养基不含细胞的对照组，置于二氧化碳培养箱37℃、5％co2常规培养24h。
[0140]
2.样品添加：实施例1～5和对比例1～14的组合物用无血清dmem培养基稀释至0.2％浓度，并用0.22μm滤膜过滤除菌。实验组和对照组弃去旧培养液，实验组加入上述用无血清培养液配置的特定浓度的实施例1～5和对比例1～14的组合物100μl，对照组加入等量无血清培养液。继续培养24h。
[0141]
3.检测：按照atp试剂盒(购买于厂家：promega，型号：g7571)检测要求做实验。提前取出atp试剂盒，融化celltiter
‑
glo缓冲液，并平衡至室温。将培养板及内容物平衡至室温，约30min。然后每孔加入100μlcelltiter
‑
glo试剂，再振荡器上混合2min，诱导细胞裂解。最后室温孵育10min，用酶标仪化学发光法检测atp荧光信号值。
[0142]
表2各实施例与对比例细胞能量水平表
[0143]
[0144][0145]
备注：n＝4，*表示p＜0.05，与对照组相比，差异显著；**表示p＜0.01，与对照组相比，差异极显著。
[0146]
根据表2中数据可知，与对照组相比，本发明提供的组合物溶液对细胞的能量具有明显的提高，特别是实施例3对细胞能量的增加效果最为显著，提高程度接近50％，而对比例中，省去依克多因、腺苷或和辅酶q10中的一种或两种物质所形成的组合物，对细胞能量的提高作用均不明显，由此可见，本发明的组合物使用依克多因、腺苷或和辅酶q10三种物质进行复配缺一不可，这三种物质起到协同增效的作用，其最终对细胞能量的提升要优于任何其中一种或两种物质所起到的效果。当本发明的组合物中省去甘油葡萄糖苷时，对细胞能量的提升效果相对于本发明的组合物也具有明显的下降，当本发明的组合物中同时省去氢化卵磷脂和透明质酸钠时，对细胞能量的提升效果相对于本发明的组合物同样具有明显的下降，由此可见，甘油葡萄糖、苷氢化卵磷脂和透明质酸钠这三种物质在本发明的组合物中同样起到不可或缺的作用。
[0147]
2.细胞增殖活性的检测
[0148]
叠氮类四唑盐是一种类似于mtt(噻唑蓝)的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶能够被还原成橙黄色水溶性的甲臜。生成的甲臜能够溶解在组织培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。此法是用于测定细胞增殖中活细胞数目的一种高灵敏度、高稳定性且无放射性的比色检测法，也称为wst
‑
1(水溶性四唑盐)法。
[0149]
本实验例采用上述比色检测法进行检测细胞细胞增殖活性。
[0150]
试验步骤：
[0151]
1.取对数生长期hacat细胞(人表皮角质形成细胞)，以2
×
104个/ml密度接种于96
孔板，每孔100ul，培养体系是dmem培养液，添加10％胎牛血清，为实验组，设置只含培养基不含细胞的对照组，置于二氧化碳培养箱37℃、5％co2常规培养24h。
[0152]
2.样品添加：实施例1～5和对比例1～14的组合物用无血清dmem培养基稀释至0.2％浓度，并用0.22μm滤膜过滤除菌。弃去旧培养液，实验组加入上述用无血清培养液配置的特定浓度的实施例1～5和对比例1～14的组合物100μl，对照组加入等量无血清培养液，继续培养24h。
[0153]
3.wst
‑
1法检测：继续培养24h后，采用wst
‑
1(购买厂家：凯基生物，型号：kga315)法检测细胞相对增殖率，每孔加入10μl wst
‑
1，放入细胞培养箱中继续孵育2h
‑
3h，于450nm波长处用酶标仪测定吸光度。对照组的吸光度为a0，实验组的吸光度为a
n
，以空白样为基准，计算出各个样品的细胞增殖率。
[0154]
细胞增殖率(％)＝(a
n
－a0)/a0×
100％
[0155]
表3各实施例与对比例细胞增殖水平表
[0156]
[0157][0158]
备注：n＝4，*表示p＜0.05，与对照组相比，差异显著；**表示p＜0.01，与对照组相比，差异极显著。
[0159]
根据表3中数据可知，与对照组相比，本发明提供的组合物溶液对细胞的增殖率具有明显的提高，特别是实施例3对细胞能量的增殖率的提高效果最为显著，提高程度接近40％，而对比例中，省去依克多因、腺苷或和辅酶q10中的一种或两种物质所形成的组合物，对细胞增殖的作用均不明显，由此可见，本发明的组合物使用依克多因、腺苷或和辅酶q10三种物质进行复配缺一不可，这三种物质起到协同增效的作用，其最终对细胞增殖的作用要优于任何其中一种或两种物质所起到的效果。
[0160]
当本发明的组合物中省去甘油葡萄糖苷或者同时省去氢化卵磷脂和透明质酸钠时，对细胞增殖的作用同样并不显著甚至没有起到细胞增殖的作用，由此可见，依克多因、腺苷和辅酶q10三者协同增效，能够增加细胞能量，促进细胞的增殖。但是另一方面甘油葡糖苷可以清除细胞内外的自由基，避免自由基损伤细胞，同时添加的氢化卵磷脂可以在细胞增殖中被利用，提高细胞活性，而透明质酸钠可以促进有效成分的吸收，更好的作用细胞，更进一步促进皮肤细胞的再生能力。因此，甘油葡萄苷，氢化卵磷脂和透明质酸钠三者成分复配后，可以提高细胞的活性和再生能力，使皮肤保持活力。对细胞的增殖起着重要作用。
[0161]
3.促进细胞自我修复效果的试验研究
[0162]
试验方法：ibidi伤口愈合和迁移系列产品是ibidi公司根据伤口愈合迁移实验要求设计的，本发明的修复试验采用ibidi小室(型号：80209)进行，在24孔培养板中形成规则的划痕区域，考察组合物对hacat细胞(人表皮角质形成细胞)向划痕区域迁移能力的影响，以评价组合物是否具有创伤修复的能力，细胞迁移率越高表明促进细胞划痕修复的能力越强。
[0163]
试验步骤：将ibidi小室放入24孔细胞培养板中间，然后向细胞培养板加入对数生
长期hacat细胞(人表皮角质形成细胞)，密度为2
×
104个/ml，小室内加入70ul细胞悬液(培养体系是dmem培养液，添加10％胎牛血清)，小室外加入400ul培养基，置二氧化碳培养箱37℃、5％co2常规培养24h。然后拔掉小室，拍照；分为实验组和对照组，实验组每孔再加入1ml实施例1～5和对比例1～14的组合物溶液，对照组加入等量的新鲜无血清培养液，培养箱继续培养24h后，再次拍照，结果用image j软件统计划痕面积并计算迁移率。
[0164]
表4各实施例与对比例细胞迁移水平表
[0165][0166][0167]
备注：n＝3，*表示p＜0.05，与对照组相比，差异显著；**表示p＜0.01，与对照组相比，差异极显著。
[0168]
根据表4中数据可知，与对照组相比，本发明提供的组合物溶液对细胞的迁移能力具有非常明显的提高，特别是实施例3对细胞的迁移率接近50％，比对照组的迁移率高出接
近150％，而对比例中，省去依克多因、腺苷或和辅酶q10中的一种或两种物质所形成的组合物，对细胞增殖的作用均不明显，由此可见，本发明提供的组合物使用多种活性成分的有效组合和用量配比，对细胞具有良好的促增殖和创伤修复作用。
[0169]
4.细胞修复屏障
[0170]
通过hacat细胞(人表皮角质形成细胞)干燥试验检测本发明组合物的修复皮肤屏障功能。
[0171]
实验步骤：
[0172]
先干燥后保护实验：
[0173]
1.将hacat细胞(人表皮角质形成细胞)以5
×
104/孔接种于96孔板中，加入dmem 10％的胎牛血清培养基，37℃下5％co2培养箱中培养24h。
[0174]
2.将用于培养细胞的细胞培养板向下倾斜30
‑
60度角，吸净孔内培养液，然后将上述吸干培养液之后的细胞放入干燥器内进行干燥。干燥器内温度为25℃，干燥时间10min。分别得到实验组和干燥模型组。
[0175]
3.向上述干燥模型组的细胞中加入新鲜无血清培养液，实验组加入用无血清培养液配置0.2％浓度的实施例1～5和对比例1～14的组合物，各组加入量一样，每孔100ul，继续培养24小时。
[0176]
4.各组每孔加入10ul wst
‑
1，在培养箱内孵育2
‑
3小时后使用酶标仪测定其细胞活力。
[0177]
表5先干燥后保护条件下各实施例与对比例细胞活力水平表
[0178]
组合物细胞活力(％)干燥模型组51.68实施例168.41
±
0.13**实施例272.59
±
0.11**实施例380.31
±
0.06**实施例472.99
±
0.1**实施例573.62
±
0.11**对比例160.98
±
0.27对比例259.49
±
0.3对比例354.98
±
0.28对比例455.44
±
0.3对比例559.91
±
0.27对比例660.34
±
0.27对比例757.17
±
0.28对比例858.48
±
0.26对比例957.42
±
0.26对比例1058.29
±
0.29对比例1157.98
±
0.32对比例1259.92
±
0.28对比例1361.57
±
0.23
对比例1462.21
±
0.18
[0179]
备注：n＝3，*表示p＜0.05，与干燥模型组相比，差异显著；**表示p＜0.01，与干燥模型组相比，差异极显著。
[0180]
预保护后干燥再保护实验：
[0181]
1.将hacat细胞(人表皮角质形成细胞)以5
×
104/孔接种于96孔板中，加入dmem 10％的胎牛血清培养基，37℃下5％co2培养箱中培养24h。
[0182]
2.将用于培养细胞的细胞培养板向下倾斜30
‑
60度角，吸净孔内培养液，分为实验组、干燥模型组，实验组加入用无血清培养液配置0.2％浓度的实施例1～5和对比例1～14的组合物，干燥模型组中加入同体积的新鲜无血清培养液，培养箱内培养24h。
[0183]
3.然后将上述培养板内培养基吸干净，实验组和干燥模型组放入干燥器内进行干燥。干燥器内温度为25℃，干燥时间10min。
[0184]
4.向上述干燥模型组细胞中加入新鲜无血清培养液，实验组加入用无血清培养液配置特定浓度实施例1～5和对比例1～14的的组合物，各组加入量一样，每孔100ul，继续培养24h。
[0185]
5.各组每孔加入10ul wst
‑
1，在培养箱内孵育2
‑
3小时后使用酶标仪测定其细胞活力。
[0186]
表6预保护后干燥条件下各实施例与对比例细胞活力水平表
[0187][0188][0189]
备注：n＝3，*表示p＜0.05，与干燥模型组相比，差异显著；**表示p＜0.01，与干燥模型组相比，差异极显著。
[0190]
根据表5和表6中数据可知，先干燥10min后，hacat细胞的细胞活力显著下降到51.68％(p<0.01)，而实施例1～5中，采用了本发明提供的组合物保护细胞后，细胞的活力仅仅下降至68.41％
‑
80.31％，与干燥模型组相比，细胞活力提高16.73％
‑
28.63％。预保护后干燥再保护处理条件下，干燥模型组细胞活力下降至57.18％(p<0.01)，而实施例1～5中，采用了本发明提供的组合物保护细胞后，hacat细胞的活力仅仅下降到79.06％
‑
87.40％，比干燥模型组提升了21.88％
‑
30.22％，尤其是实施例3的组合物在两种实验条件下，细胞活力仍然能保留到80％以上，而在对比例中，省去依克多因、腺苷或和辅酶q10中的一种或两种物质所形成的组合物，或，省去甘油葡萄糖苷或者同时省去氢化卵磷脂和透明
质酸钠所形成的组合物，对hacat细胞进行处理后，若先干燥后保护，对比例最高只有62.21％，若预保护后干燥，对比例最高只有68.91％，无论是干燥后保护或者预保护后干燥，相对于干燥模型组提升10.53％
‑
11.73％。由此可见，本发明提供的组合物对修复皮肤屏障具有显著的效果，有利于抵御人皮肤角质细胞受损。