一种抗糖化植物来源组合物及其制备方法和在美容产品中的应用与流程

1.本发明涉及一种抗糖化植物来源组合物，其制备方法，以及用来制作美容产品的用途，属于化妆品领域。


背景技术：

2.1984年brownlee首先报道了体内生物大分子存在晚期糖基化终末产物(ages)的现象。ages是指生物大分子(核酸、蛋白质和脂类)通过非酶催化机制而生成地一类复杂糖基化产物。非酶催化的糖基化反应主要指还原性单糖分子的末端游离羰基与核酸、蛋白质和脂类大分子中的游离氨基之间发生的一系列化学反应(图1)。研究发现，体内的ages产物可以分为三大类：非交联型无荧光产物、交联无荧光产物、非交联荧光产物。研究者从人类血液、组织和食品中已经分离鉴定出20多种ages。
3.ages是潜在的威胁人类健康的有毒分子，体内大量蓄积的ages会造成皮肤老化，骨头变脆弱，早老性痴呆以及眼睛异常。例如体内蛋白质分子的糖基化可能会造成蛋白质分子二级结构的改变，从而影响蛋白质的功能，直至导致细胞损伤。另外，胶原蛋白是皮肤中重要的组织蛋白，随着年龄的增长及高糖饮食习惯，胶原蛋白逐渐糖化，并造成皮肤变硬、变黑，最终导致皮肤衰老且影响美观。所以，如果能够有效抑制体内生物大分子的糖基化水平，有助于改善一些疾病状态，且延缓衰老，保持皮肤的年轻状态。研究发现，部分具有抗氧化活性的天然产物能够有效抑制ages的形成，即抗糖化(anti
‑
glycation)活性，同时这些天然产物的细胞毒性又比较小。随着研究的深入，越来越多能够抑制ages形成的天然产物被发现，他们包括多酚、多糖、萜类化合物、维生素、生物碱和多肽。这些天然产物通过不同的机制抑制ages的形成。
4.天然产物是抗糖化活性产物的重要来源。项目组前期筛选获得部分植物提取物具有明显的抗糖化活性，不同的天然产物富含通过不同的机制来对抗ages的形成，而不同的植物提取物富含不同的天然产物成分。对于不同的植物提取物进行组合，组合不同的ages抑制机制，力求寻找具有协同增强的抗糖化活性植物提取物组合物。
5.人类使用植物草本进行美容的历史可追溯到数千年前，经历民间及宫廷的广泛实践，植物草本在美容方面的作用深入人心。加上植物草本类美容产品，刺激性小，安全性高，备受广大消费者的欢迎。白扁豆(dolichos lablab),一年生缠绕草质藤本。白扁豆药用功能有健脾，化湿，消暑提取物。白扁豆中主要含有棕榈酸、亚油酸、反油酸、油酸、硬脂酸、皂苷、多糖、单糖和蛋白质等。另外，绿藻(chlorophyta)是生活在淡水中的单细胞藻类，绿藻富含蛋白质、氨基酸、不饱和脂肪酸和多糖等。绿藻是天然的碱性食品，可以调节调节体质健康，增强人体免疫力。迄今为止尚未见有关白扁豆(dolichos lablab)提取物和绿藻(chlorophyta)提取物，单一组分或者组合物在抑制ages形成方面的药效活性的报道。


技术实现要素：

6.本发明要解决的一个技术问题是，提供一种由两种植物提取物，即白扁豆(dolichos lablab)提取物和绿藻(chlorophyta)提取物混合而成的组合物，及其制备方法。
7.本发明要解决的又一个技术问题是，相比较单一成分，白扁豆提取物和绿藻提取物，二者的混合物具有显著增强的协同抗糖化活性。另外白扁豆提取物、绿藻提取物和二者的混合物均具有非常低的细胞毒性。
8.本发明要解决的又一个技术问题是，植物提取物组合物展现出良好的抗糖化活性有助于改善皮肤的老化状态。采用上述制备植物提取物组合物作为美容成分制备美容产品，如面霜，的应用。
9.为了解决本发明的技术问题，本发明采取如下的技术方案:
10.本发明第一方面涉及一种由两种植物提取物即白扁豆提取物和绿藻提取物，按照一定比例混合而成的组合物，其制备方法为：
11.组合物由白扁豆提取物与绿藻提取物按照一定的重量比进行混合，组合物中白扁豆提取物含量多于绿藻提取物，二者的重量百分比为，白扁豆提取物：绿藻提取物＝60
‑
90％：10
‑
40％，称量后进行混匀。
12.进一步优选组合物的制备方法如下：白扁豆提取物：绿藻提取物＝60％：40％的重量百分比进行称量与混匀。
13.本发明第二方面涉及植物提取物组合物对白蛋白糖基化的影响，证明相比较于单一提取物，组合物具有显著增强的协同抗糖化活性，组合物适合作为抗糖化成分用于制备相应美容产品。
14.本发明第三方面涉及上述植物来源的组合物在制备具有抗糖化活性美容产品的用途，以及一种面霜产品中含有上述植物来源的组合物。
附图说明
15.图1：晚期糖基化终末产物(ages)的形成机理。
16.图2：不同组分的抗糖化活性研究。四种检测组分为氨基胍、白扁豆提取物、绿藻提取物和提取物优选组合物。
17.图3：四种组分的抗糖化活性ic
50
。四种检测组分为氨基胍、白扁豆提取物、绿藻提取物和提取物优选组合物。
具体实施方式
18.下面的实施例及活性实验用来进一步说明本发明，实施例仅用于说明，不能限制本发明的范围。
19.实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
20.下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
21.实施例1：植物来源提取物组合物的制备方法
22.白扁豆(dolichos lablab)提取物，棕色粉末，易溶于水，购自陕西新天域生物科技有限公司。绿藻(chlorophyta)提取物，绿色粉末，易溶于水，购买自陕西缔都医药化工有限公司。组合物的制备方法：组合物由白扁豆提取物与绿藻提取物按照白扁豆提取物含量多于绿藻提取物，二者的重量百分比为，白扁豆提取物：绿藻提取物＝60
‑
90％：10
‑
40％，称量后混匀。
23.进一步，优选组合物的制备方法如下：白扁豆提取物：绿藻提取物＝60％：40％的重量百分比进行称量与混匀。称量6g白扁豆提取物和4g绿藻提取物，将粉末进行混匀，即为组合物。
24.实施例2：植物来源提取物组合物的抗糖化活性
25.实验方法：按照vinson和howard在1996年提出的研究方法，检测白扁豆提取物、绿藻提取物和实验例1中制备的优选组合物对ages形成的抑制活性。将0.5ml的浓度10,20,50,100,200μg/ml的样品添加到含有0.5ml 20mg/ml bsa、0.5ml 0.5m葡萄糖和1.0ml 1％叠氮化钠的0.1m pbs缓冲液，ph＝7.4。37℃孵育7天，采用荧光光谱仪(perkin
‑
elmer,ma,usa)，设置检测条件为e
x
＝330nm,e
m
＝410nm,测量ages形成的荧光强度(fi)。对照组中不加抑制物。抗糖化阳性参考化合物采用氨基胍进行比较。
26.通过下式计算对ages形成的抑制活性：
27.抑制活性(％)＝[1
–
(fi样品
–
fi样品空白)/(fi对照
–
fi对照空白)]
×
100％
[0028]
通过不同浓度组分的抗糖化抑制率来计算ic
50
，计算采用软件graphpad prism 8.0进行。
[0029]
结果如下：
[0030]
表1，不同组分的抗糖化活性研究
[0031][0032]
实验结果如表1和图2所示。白扁豆提取物和绿藻提取物均具有一定的抗糖化活性，但是抗糖化活性弱于阳性化合物氨基胍。例如在浓度为200μg/ml时，白扁豆提取物和绿藻提取物的抗糖化活性分别为51％和45％。阳性化合物氨基胍的抗糖抑制活性为81％(与文献报道数据类似)。但是提取物的组合物按照60％：40％的重量百分比混合得到的优选组合物具有明显提高的抗糖化抑制活性。
[0033]
如图3所示，采用graphpad prism 8.0计算上述四种组分对于ages形成抑制活性ic
50
分别为，62.54μg/ml
‑
氨基胍，213.9μg/ml
‑
绿藻提取物，166.7
‑
μg/ml白扁豆提取物，71.2μg/ml
‑
提取物组合物。
[0034]
实施例3：植物来源提取物组合物的抗糖化活性的协同效应证实
[0035]
实验方法：协同指数采用金正均q值法进行判定，q值由以下的公式求得：
[0036]
q＝p
a b
/(p
a
p
b
‑
p
a
×
p
b
)。式中p
a
、p
b
和p
a b
分别为a组、b组和两联用组治疗率。
[0037]
q＜1说明两提取物合用后产生拮抗作用；q＞1，说明两提取物合用后产生协同作用，q＝1说明两提取物合用后产生相加作用。
[0038]
按照上述的协同指数计算方法，我们分别测定单剂量的绿藻提取物、白扁豆提取物、二者重量百分比60％：40％混合的优选组合，具体浓度见表2。按照实施例2相同的方法进行ages形成的抑制活性检测。
[0039]
结果如下：
[0040]
表2，两种组分的抗糖化活性研究
[0041][0042]
经过测定，实验结果如表2所示。在三组选定的浓度下，优选组合物在抗糖化活性方面获得显著的增强，表现出两种提取物的协同抗糖化活性。本项目前期我们筛选了一些具有抗糖化活性的植物提取物，两两组合筛选具有明显增强效果的组合物。我们推测由于不同的提取物富含不同的抗糖化活性天然产物组分，如多酚或者多糖。如果两种提取物采用不同的抗糖抑制机制，其组合可能具有互相增强效果，最终达到协同抗糖化活性。相较于单一提取物，组合物，尤其是优选组合物，具有协同增强的抗糖化效果，可以用来作为抗糖化成分。
[0043]
实施例4：植物来源提取物组合物的细胞毒性
[0044]
实验方法：化合物细胞毒性的检测采用cck
‑
8试剂盒进行。具体操作为，分别接种hepg2细胞、mcf
‑
7细胞、a549细胞，到96孔板中，每孔约5000细胞/200μl培养液，细胞过夜培养。向每孔中加入不同浓度的待测化合物，继续培养48小时。向每孔中加入10μl的cck
‑
8试剂，混匀后继续培养1
‑
4小时，观察培养液颜色发生明显变化，采用酶标仪进行检测，测定450nm吸光值。紫杉醇为阳性对照物。
[0045]
结果如下：
[0046]
结果如表3，细胞实验检测发现，白扁豆提取物、绿藻提取物和二者的优选组合物没有明显的细胞毒性。这与他们来源于植物提取物有关。结合实施例2和实施例3，二者的组合物尤其是优选组合物适合用来作为抗糖化成分制备美容产品。
[0047]
表3，不同组分对于哺乳动物细胞的细胞毒性
[0048][0049]
实施例4：植物来源提取物组合物作为美容成分制备抗糖化面霜
[0050]
一种抗糖化面霜，其配方和重量份数如下：
[0051]
文中出现的化妆品成分名称均为inci(international nomenclature of cosmetic ingredients)，即国际化妆品原料命名所规定的名称。
[0052]
油相：矿油3.0份、角鲨烷2.0份、辛酸/癸酸甘油三酯2.0份、聚氧乙烯鲸蜡基硬脂基双醚0.4份、聚二甲基硅氧烷2.0份、甘油硬脂酸/peg
‑
100硬脂酸4.0份；
[0053]
水相：抗糖化组合物(实施例1中优选组合物)10.0份、甘油3.0份、丙二醇4.0份、尿囊素0.1份卡波姆0.15份、去离子水69.03份、香精0.02份、羟苯甲酯0.15份、羟苯丙酯0.15份。
[0054]
制备方法，包括以下步骤：按照上述配方，称量各个组分，其中每个质量份为1g。将油相组分混合，搅拌加热至80℃；将水相组分(除香精外)混匀，搅拌加热至80℃；将油相缓慢加入水相，边加入边搅拌，保持水相温度恒定80℃，继续搅拌5分钟；降温至45℃后加入香精，继续搅拌混匀，冷却至25℃，灌装。
[0055]
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。