一种非诊断目的的基因定位方法与流程

技术特征：
1.一种非诊断目的的基因定位方法，其特征在于，所述方法包括：通过pcr将环形单链dna扩增成双链dna或将线性双链的dna扩增成合适长度的双链dna，加入至少一种切刻内切酶消化后得到具有“缺口”的dna链，纯化后，加入三嵌段引物与dna连接酶，先利用pcr退火让三嵌段引物与“缺口”互补，再加入dna连接酶使三嵌段引物3’端的羟基与“缺口”的5’端磷酸基团相连从而得到所需模板链；最后加入dna折纸探针，pcr退火使模板链捕获到游离的dna折纸探针，利用原子力显微镜观察成像实现可视化基因定位；其中，所述dna折纸探针为具有至少一条捕获链的dna折纸纳米结构；所述三嵌段引物包括与所述“缺口”互补的端部序列m1、若干t碱基的中间序列m2和与所述捕获链互补的端部序列m3。2.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的基因定位方法，其特征在于，所述将线性双链的dna扩增成合适长度的双链dna，具体步骤包括：设计上下游引物，线性双链的dna中加入dna聚合酶经pcr扩增出所需序列。3.根据权利要求2所述的一种非诊断目的的基因定位方法，其特征在于，所述dna聚合酶为la taq dna聚合酶。4.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的基因定位方法，其特征在于，所述通过pcr将环形单链dna扩增成双链dna，具体步骤包括：在环形单链dna中加入部分互补的dna序列，加入dna聚合酶，经pcr扩增成环形双链dna。5.根据权利要求4所述的一种非诊断目的的基因定位方法，其特征在于，所述dna聚合酶为vent(exo
‑
) dna聚合酶。6.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的基因定位方法，其特征在于，所述切刻内切酶为nb.bbvci或nb.bsssi，或是nb.bbvci和nb.bsssi这两种切刻内切酶同时使用以实现同一模板链上多组序列的可视化定位。7.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的基因定位方法，其特征在于，所述dna连接酶为t4 dna ligase。8.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的基因定位方法，其特征在于，所述序列m1的碱基数为6个，中间序列m2的t碱基数为5个，端部序列m3的碱基数为10个。9.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的基因定位方法，其特征在于，所述dna折纸探针的捕获链有三条，三条捕获链设置在dna折纸纳米结构端部，且三条捕获链在dna折纸纳米结构上的伸出位置间隔3
‑
4纳米。10.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的基因定位方法，其特征在于，所述dna折纸探针的dna折纸纳米结构为三角形折纸纳米结构或十字形折纸纳米结构。

技术总结
本发明公开了一种非诊断目的的基因定位方法，适用于不同形态的DNA，所述不同形态的DNA包括环形单链DNA和线性双链DNA，具体操作步骤包括：首先通过PCR将环形单链的DNA变成双链DNA以及将线性双链的DNA变成合适长度的双链DNA，加入限制性核酸内切酶消化后得到具有“缺口”的DNA链，再加入三嵌段引物与DNA连接酶，从而得到所需模板，最后加入DNA折纸探针，利用PCR退火使得模板捕获到游离的DNA折纸探针，经过原子力显微镜表征达到可视化的基因定位。本发明的基因定位的方法可以对6


技术研发人员：晁洁 熊金鑫
受保护的技术使用者：南京邮电大学
技术研发日：2021.12.08
技术公布日：2022/1/4