适合于IL23拮抗剂疗法的患者群体的制作方法

适合于il23拮抗剂疗法的患者群体
1.相关申请的交叉参考本技术要求2019年3月26日提交的美国临时专利申请号62/824,245的优先权，其特此通过参考以其全部结合。
2.领域本公开总体上涉及选择适合于治疗炎症性病症并且更具体地适合于治疗炎症性肠病的患者亚群的领域。
3.背景白细胞介素
‑
22 (il
‑
22)为一种il
‑
10细胞因子家族成员，其在克罗恩病(cd)和溃疡性结肠炎(uc)两者中均强烈表达。与这些观察结果一致，已显示il
‑
22具有促炎特性，但也已显示这种细胞因子在肝脏和肺部中会发挥器官保护作用。sonnenberg等人, j. exp. med. 207:1293
‑
1305 (2010); cobleigh等人, am. j. pathol. 182:21
‑
28 (2013)。il
‑
22由各种环境和内源性信号(比如il
‑
23)诱导。几项全基因组关联研究将il23r鉴定为易感基因，这与il
‑
23通路在炎症性肠病(ibd)中具有作用是一致的。il
‑
22在ibd患者的肠中上调。il
‑
22通常能够促进肠中的粘膜愈合；然而，当不受控制时，其可导致肠发病。因此，密切控制il
‑
22活性是必要的。il
‑
22结合蛋白(il
‑
22bp)通过特异性地结合il
‑
22并防止其结合膜结合的il
‑
22受体1 (il
‑
22r1)来发挥这种控制作用。il
‑
22与il
‑
22bp的结合亲和力为前者与膜结合的il
‑
22r1的20
‑
1000倍。il
‑
22和il
‑
22bp在小鼠模型中于肠中有组织损伤时表现出反向表达模式：il
‑
22bp在稳态和组织修复期间于结肠中表达最高，而il
‑
22在组织损伤的高峰期表达最高。因此，仔细调控il
‑
22和il
‑
22bp可控制肠内的稳态，但il
‑
22bp在人类ibd中的作用尚不确定。
4.干扰素
‑
γ (ifn
‑
γ)已被确定为一种经典的促进炎症反应的th1细胞因子，但其在各种炎症性病症中的作用尚不清楚。此外，已知ifn
‑
γ在先天性和适应性免疫反应两者中均发挥作用；其还在防御微生物感染(包括病毒及一些细菌和原生动物感染)中发挥作用。ifn
‑
γ会受到炎症反应的关键介质il
‑
23刺激，并且ifn
‑
γ已被确定为炎症性肠病的致病因素(ito等人, clin. and exper. immunol. 146:330
‑
338 (2006))。与这些观察结果一致，strober等人报道指出，ifn
‑
γ和il
‑
17/il
‑
22为参与炎症性肠病(ibd)的重要细胞因子。另外，芳妥珠单抗(fontolizumab)为一种抗ifn
‑
γ抗体，显示可降低克罗恩病的严重程度。ghosh等人, gut 55:1071
‑
1073 (2006)。harbour等人, proc. natl. acad. sci. usa 112:7061
‑
7066 (2015)在分析th17 t细胞并显示th17细胞的一个子集分化成th1细胞(ifn
‑
γ对于该th1细胞为一种定义标记物)时似乎证实了ifn
‑
γ的这种促炎性观点。然而，harbour等人还公开了结肠炎的诱导需要sta4和t
‑
bet而非ifn
‑
γ的表达。鉴于有报道称ifn
‑
γ在结肠炎早期具有抗炎特性，harbour等人的这后一个发现并不令人惊讶。sheikh等人, j. immunol. 184:4069
‑
4073 (2010)。因此，积累有关ifn
‑
γ在炎症反应中的作用的信息确立了细胞因子具有显著作用，但该作用的确切性质尚未完全阐明。
5.白细胞介素(il)
‑
23为一种促炎细胞因子，与各种炎症性病症的发病机制有关，所述炎症性病症包括(但不限于)克罗恩病(cd)、溃疡性结肠炎(uc)、银屑病、银屑病关节炎、
类风湿性关节炎和强直性脊柱炎。il23诱导t细胞表达多种炎症基因，包括il
‑
17a、il
‑
17a受体、tnf
‑
α和gm
‑
csf。il
‑
23的主要已知作用为驱动t辅助th17细胞以及巨噬细胞、自然杀伤(nk)细胞、树突状细胞和先天淋巴细胞的分化，导致il
‑
17、il
‑ꢀ
22、tnf
‑
α、gm
‑
csf和ifn
‑
γ的上调以及il
‑
10的下调。
6.il
‑
12细胞因子家族的成员il
‑
23为一种异二聚体细胞因子，其可有效地诱导促炎细胞因子。il
‑
23与异二聚体细胞因子白细胞介素12 (il
‑
12)相关，两者共有共同的p40亚基。在il
‑
23中，独特的p19亚基共价结合于p40亚基。在il
‑
12中，独特的亚基为p35 (oppmann等人, immunity, 2000, 13: 713
‑
715)。il
‑
23由抗原呈递细胞(比如树突状细胞和巨噬细胞)响应激活刺激(比如cd40连接、toll样受体激动剂和病原体)而表达。il
‑
23结合包含il
‑
12rβ1亚基(其与il
‑
12受体共有)和独特受体亚基il
‑
23r的异二聚体受体。
7.il
‑
23作用于活化和记忆性t细胞，并促进t细胞亚群th17的存活和扩增。th17细胞产生促炎细胞因子，包括il
‑
6、il
‑
17、tnfα、il
‑
22和gm
‑
csf。il
‑
23还作用于自然杀伤细胞、树突状细胞和巨噬细胞以诱导促炎细胞因子的表达。与il
‑
23不同，il
‑
12诱导幼稚cd4 t细胞分化成成熟的产生ifn
‑
γ的th1效应细胞，并通过刺激ifn
‑
γ的产生诱导nk和细胞毒性t细胞功能。由il
‑
12驱动的th1细胞先前认为是许多自身免疫性疾病中的致病性t细胞亚群；然而，最近以炎症性肠病、银屑病、炎症性关节炎和多发性硬化症模型进行的动物研究(其中评估了il
‑
12和il
‑
23的单个贡献)已经坚定地确定il
‑
23 (而非il
‑
12)为自身免疫性/炎症性疾病的关键驱动因素(ahern等人, immun. rev. 2008 226:147
‑
159; cua等人, nature 2003 421:744
‑
748; yago等人, arthritis res and ther. 2007 9(5): r96)。据信il
‑
12在针对许多细胞内病原体和病毒的保护性先天性和适应性免疫反应的发展以及肿瘤免疫监视中起关键作用。参见kastelein,等人, annual review of immunology, 2007, 25: 221
‑
42; liu,等人, rheumatology, 2007, 46(8): 1266
‑
73; bowman等人, current opinion in infectious diseases, 2006 19:245
‑
52; fieschi和casanova, eur. j. immunol. 2003 33:1461
‑
4; meeran等人, mol. cancer ther. 2006 5: 825
‑
32; langowski等人, nature 2006 442: 461
‑
5。因此，与il
‑
12和il
‑
23的双重抑制相比较，预计il
‑
23特异性抑制(放过il
‑
12或共有的p40亚基)具有更高的安全特性。
8.il
‑
23与异二聚体细胞因子白细胞介素12 (il
‑
12)相关，两者共有共同的p40亚基。在il
‑
23中，独特的p19亚基共价结合于p40亚基。在il
‑
12中，独特的亚基为p35 (oppmann等人, immunity, 2000, 13: 713
‑
715)。il
‑
23异二聚体蛋白被分泌。与il
‑
12一样，il
‑
23由抗原呈递细胞(比如树突状细胞和巨噬细胞)响应激活刺激(比如cd40连接、toll样受体激动剂和病原体)而表达。il
‑
23结合包含il
‑
12r131亚基(其与il
‑
12受体共有)和独特受体亚基il
‑
23r的异二聚体受体。il
‑
12受体由il
‑
12w和il
‑
12r132组成。il
‑
23结合其异二聚体受体并通过jak2和tyk2发出信号以活化stat1、3、4和5 (parham等人, j. immunol. 2002, 168:5699
‑
708)。受体的亚基主要在活化或记忆性t细胞和自然杀伤细胞上共表达，以及也在树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、角质形成细胞和滑膜成纤维细胞上以较低水平共表达。il
‑
23和il
‑
12作用于不同的t细胞亚群，并在体内起显著不同的作用。
9.il
‑
23作用于活化和记忆性t细胞，并促进t细胞亚群th17的存活和扩增。th17细胞产生促炎细胞因子，包括il
‑
6、il
‑
17、tnfα、il
‑
22和gm
‑
csf。il
‑
23还作用于自然杀伤细胞、
树突状细胞和巨噬细胞以诱导促炎细胞因子的表达。与il
‑
23不同，il
‑
12诱导诱导cd4 t细胞分化成成熟的产生ifn
‑
γ的th1效应细胞，并通过刺激ifn
‑
γ的产生诱导nk和细胞毒性t细胞功能。由il
‑
12驱动的th1细胞先前认为是许多自身免疫性疾病中的致病性t细胞亚群，然而，最近以炎症性肠病、银屑病、炎症性关节炎和多发性硬化症模型进行的动物研究(其中评估了il
‑
12相对于il
‑
23的单个贡献)已经坚定地确定il
‑
23 (而非il
‑
12)为自身免疫性/炎症性疾病的关键驱动因素(ahern等人, immun. rev. 2008 226:147
‑
159; cua等人, nature 2003 421:744
‑
748; yago等人, arthritis res and ther. 2007 9(5): r96)。据信il
‑
12在针对许多细胞内病原体和病毒的保护性先天性和适应性免疫反应的发展以及肿瘤免疫监视中起关键作用。参见kastelein,等人, annual review of immunology, 2007, 25: 221
‑
42; liu,等人, rheumatology, 2007, 46(8): 1266
‑
73; bowman等人, current opinion in infectious diseases, 2006 19:245
‑
52; fieschi和casanova, eur. j. immunol. 2003 33:1461
‑
4; meeran等人, mol. cancer ther. 2006 5: 825
‑
32; 和langowski等人, nature 2006 442: 461
‑
5。因此，与il
‑
12和il
‑
23的双重抑制相比较，il
‑
23特异性抑制(放过il
‑
12或共有的p40亚基)应具有潜在更高的安全特性。
10.使用抑制人类il
‑
23(比如至少结合独特的p19亚基或结合il
‑
23的p19和p40亚基两者的抗体)而放过il
‑
12的il
‑
23特异性拮抗剂应提供等于或大于il
‑
12拮抗剂或p40拮抗剂的功效而没有与il
‑
12抑制相关的潜在风险。已描述了选择用于抑制重组il
‑
23的鼠类、人源化和噬菌体展示抗体；参见例如美国专利7,491,391、wipo公开w01999/05280、wo2007/0244846、wo2007/027714、wo2007/076524、wo2007/147019、w02008/103473、wo2008/103432、w02009/043933和w02009/082624。能够抑制天然人类il
‑
23的完全人类治疗剂对靶标(特别是在体内)具有高度特异性。体内靶标的完全抑制可导致更低剂量的制剂、更低频率和/或更有效的给药，这继而导致成本降低和效率提高。
11.鉴于炎症性病症(比如炎症性肠病)在人类群体中的持续发病率，和鉴于对炎症作为生物过程的不完全理解，显然继续存在对以下的需要：有效鉴定适合于用于这种障碍和疾病的特定治疗(特别是当治疗有效且具有成本效益时)的受试者或患者。
12.概述本公开提供用于鉴定适合于以抗il
‑
23剂的形式进行抗细胞因子疗法的患者群体或亚群以治疗炎症性病症的有效方法。本文公开的数据表明，患有表现出ifn
‑
γ水平升高的炎症性病症的受试者更有可能对用抗白细胞介素
‑
23剂(比如抗il
‑
23抗体，例如布雷库单抗(brazikumab))治疗有反应。因此，本公开提供用于通过测量白细胞介素
‑
22结合蛋白的血清水平和/或ifn
‑
γ的血清水平而选择患有对用抗白细胞介素
‑
23疗法治疗有反应的炎症性病症(比如炎症性肠病)的受试者的方法。另外，该方法可用于鉴定患有适合于用抗il
‑
23疗法和/或抗ifn
‑
γ疗法治疗的炎症性障碍(比如银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎)的患者亚群。
13.本公开的一个方面为基于il
‑
22的促炎特性而非基于其器官保护功能，提供一种选择患有适合于用抗白细胞介素
‑
23 (抗il
‑
23)剂治疗的炎症性病症的受试者的方法，其包括： (a) 测量受试者中白细胞介素
‑
22结合蛋白(il
‑
22bp)的血清水平；(b) 将受试者中的il
‑
22bp血清水平与对照中的il
‑
22bp血清水平进行比较，其中对照为一个或多个未患炎症性病症的个体；和(c) 如果受试者中的il
‑
22bp血清水平低于对照中的il
‑
22bp血清水
平，则将受试者选为患有适合于用抗il
‑
23剂治疗的炎症性病症。从本公开这个方面的考虑显而易见的是这些方法部分地基于il
‑
22的促炎特性及其由il
‑
22bp提供的拮抗作用，而完全不是基于il
‑
22的器官保护功能或 il
‑
22bp对该功能的任何拮抗作用。因此，这些方法不会阻止公众对il
‑
22bp的所有使用。同样显而易见的是，本文公开的方法为至少部分地基于ifn
‑
γ在免疫反应(包括自身免疫反应)中的作用而完全不是基于ifn
‑
γ在防御感染中的作用。因此，这些方法不会阻止公众对ifn
‑
γ的所有使用。
14.在本公开该方面的一些实施方案中，抗il
‑
23剂为包含6个特异性地结合il
‑
23的互补决定区(即seq id no: 91的hcdr1、seq id no: 92的hcdr2、seq id no: 93的hcdr3、seq id no: 62的lcdr1、seq id no: 63的lcdr2和seq id no:64的lcdr3)的布雷库单抗。在一些实施方案中，布雷库单抗包含seq id no:153的v
h
序列和seq id no:154的v
l
序列。在一些实施方案中，布雷库单抗包含与重链恒定区融合的seq id no: 153的v
h
序列和与轻链恒定区融合的seq id no: 154的v
l
序列。在一些实施方案中，炎症性病症为炎症性肠病、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎或强直性脊柱炎。提供一些实施方案，其中炎症性肠病为克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一些实施方案中，炎症性病症对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的。在一些实施方案中，白细胞介素
‑
22结合蛋白的血清水平低于359 pg/ml。本公开进一步考虑所公开方法的实施方案，其中布雷库单抗无反应者中的il
‑
22bp血清水平为至少359 pg/ml或在359 pg/ml
‑
6,000 pg/ml之间。在一些实施方案中，布雷库单抗无反应者中的il
‑
22bp水平为 359
‑
5,000 pg/ml、359
‑
4,000 pg/ml、359
‑
2,500 pg/ml、359
‑
1,000 pg/ml、359
‑
500 pg/ml、400
‑
6,000 pg/ml、400
‑
5,000 pg/ml、400
‑
4,000 pg/ml、400
‑
2,500 pg/ml、400
‑
1,000 pg/ml、400
‑
500 pg/ml、500
‑
6,000 pg/ml、500
‑
5,000 pg/ml、500
‑
4,000 pg/ml、500
‑
2,500 pg/ml、500
‑
1,000 pg/ml、750
‑
6,000 pg/ml、750
‑
5,000 pg/ml、750
‑
4,000 pg/ml、750
‑
2,500 pg/ml、750
‑
1,000 pg/ml、1,000
‑
6,000 pg/ml、1,000
‑
5,000 pg/ml、1,000
‑
4,000 pg/ml、1,000
‑
2,500 pg/ml、1,500
‑
6,000 pg/ml、1,500
‑
5,000pg/ml、1,500
‑
4,000 pg/ml、1,500
‑
2,500 pg/ml、2,000
‑
6,000 pg/ml、2,000
‑
5,000 pg/ml或2,000
‑
2,500 pg/ml。在一些实施方案中，方法进一步包括确定受试者患有炎症性病症，其中炎症性病症通过进行体格检查、通过查阅受试者的医疗记录或通过咨询执业医师来确定。在一些实施方案中，方法进一步包括以有效治疗炎症性病症的量给予抗il
‑
23剂，比如其中抗il
‑
23剂为布雷库单抗。
15.在本公开前述方面的一些实施方案中，以足以达到12.5 ng/ml
‑
1,000 ng/ml的血清浓度的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，给予抗il23剂(例如异二聚体特异性抗il
‑
23抗体)以达到至少12.5 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、60 ng/ml、70 ng/ml、75 ng/ml、80 ng/ml、85 ng/ml、90 ng/ml、95 ng/ml、100 ng/ml、150 ng/ml、200 ng/ml、500 ng /ml或990 ng/ml的血清浓度。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.5个月15
‑
54 mg、每1.5
‑
4.5个月55
‑
149 mg、每4
‑
8个月150
‑
299 mg、每8
‑
14个月300
‑
1100 mg或每4
‑
12个月300
‑
1100 mg。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.0个月15
‑
21 mg、每1.5
‑
3.0个月55
‑
70 mg、每4
‑
6个月150
‑
260 mg或每4
‑
8个月300
‑
700 mg。在一些实施方案中，量和间隔为每个月21 mg、每3个月70 mg、每6个月210 mg或每6个月700 mg。在一些实施方案中，抗il
‑
23抗体以每3个月260 mg或每3个月700 mg给予。在一些实施方案中，每1个月给予260 mg的抗体或每1个月给予700 mg。在一些实施
方案中，给予受试者的抗il
‑
23剂的剂量为70 mg，例如给予每剂70 mg、140 mg、219 mg、420 mg或700 mg。
16.本公开的一个相关方面涉及在患者中治疗白细胞介素
‑
23 (il
‑
23)介导的炎症性病症的方法，其包括如果患者被确定具有低于对照样品中的il
‑
22bp水平的il
‑
22bp血清水平，则给予患者有效量的抗il
‑
23剂，其中对照样品获自一个或多个未患炎症性病症的个体。在一些实施方案中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，炎症性病症为炎症性肠病、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎或强直性脊柱炎。在一些实施方案中，炎症性肠病为克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一些实施方案中，炎症性病症对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的。在一些实施方案中，以足以达到12.5 ng/ml
‑
1,000 ng/ml的血清浓度的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.5个月15
‑
54 mg、每1.5
‑
4.5个月55
‑
149 mg；每4
‑
8个月150
‑
299 mg、每8
‑
14个月300
‑
1100 mg或每4
‑
12个月300
‑
1100 mg。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.0个月15
‑
21 mg、每1.5
‑
3.0个月55
‑
70 mg、每4
‑
6个月150
‑
260 mg或每4
‑
8个月300
‑
700 mg。在一些实施方案中，量和间隔为每个月21 mg、每3个月70 mg、每6个月210 mg或每6个月700 mg。在一些实施方案中，抗il
‑
23抗体以每3个月260 mg或以每3个月700 mg给予。在一些实施方案中，每1个月给予260 mg的抗体或每1个月给予700 mg。在一些实施方案中，给予受试者的抗il
‑
23剂的剂量为70 mg，例如给予每剂70 mg、140 mg、219 mg、420 mg或700 mg。
17.本公开的另一方面涉及一种从患有炎症性肠病(ibd)的患者群体中选择适合于用抗白细胞介素
‑
23 (抗il
‑
23)剂治疗的ibd患者亚群的至少一个成员的方法，其中患者亚群患有对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的ibd，患者亚群患有未曾为此接受过治疗的ibd，和/或患者亚群不能耐受用抗tnf剂治疗，所述方法包括：(a) 测量ibd患者中的白细胞介素
‑
22结合蛋白(il
‑
22bp)血清水平；(b) 将ibd患者中的血清il
‑
22bp水平与对照中的il
‑
22bp血清水平进行比较，其中对照中的il
‑
22bp血清水平为以下任何一种：未患ibd的个体中的il
‑
22bp血清水平、多个未患ibd的个体中的il
‑
22bp平均水平或多个患有ibd的个体中的il
‑
22bp平均水平；和(c) 如果受试者中的il
‑
22bp血清水平低于对照中的il
‑
22bp血清水平，则选择患者为患有对用抗il
‑
23剂治疗有反应的ibd，和任选地，(d) 给予患者有效量的抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，ibd患者亚群的成员为克罗恩病患者或溃疡性结肠炎患者。在一些实施方案中，对照中的il
‑
22bp血清水平为多个患有ibd的个体中的il
‑
22bp平均值，并且这些实施方案中的一些为其中ibd为克罗恩病或溃疡性结肠炎的实施方案。在一些实施方案中，患有ibd的患者群体为患有对tnf治疗为难治性的ibd的患者群体。在本公开该方面的一些实施方案中，方法进一步包括确定受试者患有炎症性肠病，其中炎症性肠病通过进行体格检查、通过查阅受试者的医疗记录或通过咨询执业医师来确定。在一些实施方案中，方法进一步包括以有效治疗炎症性肠病的量给予抗il
‑
23剂，比如其中抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，以足以达到12.5 ng/ml
‑
1,000 ng/ml的血清浓度的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.5个月15
‑
54 mg、每1.5
‑
4.5个月55
‑
149 mg；每4
‑
8个月150
‑
299 mg、每8
‑
14个月300
‑
1100 mg或每4
‑
12个月300
‑
1100 mg。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.0个月15
‑
21 mg、每1.5
‑
3.0个月
55
‑
70 mg、每4
‑
6个月150
‑
260 mg或每4
‑
8个月300
‑
700 mg。在一些实施方案中，量和间隔为每个月21 mg、每3个月70 mg、每6个月210 mg或每6个月700 mg。 在一些实施方案中，抗il
‑
23抗体以每3个月260 mg或以每3个月700 mg给予。在一些实施方案中，每1个月给予260 mg的抗体或每1个月给予700 mg。在一些实施方案中，给予受试者的抗il
‑
23剂的剂量为70 mg，例如给予每剂70 mg、140 mg、219 mg、420 mg或700 mg。
18.在一个相关方面，本公开提供一种治疗患者的方法，患者为适合于用抗白细胞介素
‑
23 (抗il
‑
23)剂治疗的炎症性肠病(ibd)患者亚群的成员，其中患者亚群患有对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的ibd，患者亚群患有未曾为此接受过治疗的ibd，和/或患者亚群不能耐受用抗tnf剂治疗，所述方法包括：如果患者中的il
‑
22bp血清水平低于对照中的il
‑
22bp血清水平，则给予有效量的抗il
‑
23剂，其中对照为以下任何一种：未患ibd的个体中的il
‑
22bp血清水平、多个未患ibd的个体中的il
‑
22bp平均水平或多个患有ibd的个体中的il
‑
22bp平均值。在一些实施方案中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，患者患有克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一些实施方案中，以足以达到12.5 ng/ml
‑
1,000 ng/ml的血清浓度的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.5个月15
‑
54 mg、每1.5
‑
4.5个月55
‑
149 mg；每4
‑
8个月150
‑
299 mg、每8
‑
14个月300
‑
1100 mg或每4
‑
12个月300
‑
1100 mg。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.0个月15
‑
21 mg、每1.5
‑
3.0个月55
‑
70 mg、每4
‑
6个月150
‑
260 mg或每4
‑
8个月300
‑
700 mg。在一些实施方案中，量和间隔为每个月21 mg、每3个月70 mg、每6个月210 mg或每6个月700 mg。在一些实施方案中，抗il
‑
23抗体以每3个月260 mg或以每3个月700 mg给予。在一些实施方案中，每1个月给予260 mg的抗体或每1个月给予700 mg。在一些实施方案中，给予受试者的抗il
‑
23剂的剂量为70 mg，例如给予每剂70 mg、140 mg、219 mg、420 mg或700 mg。
19.本公开的仍然另一方面涉及从患有对肿瘤坏死因子治疗为难治性的炎症性病症的患者群体中选择患有适合于用抗白细胞介素
‑
23 (抗il
‑
23)剂治疗的炎症性病症的受试者的方法，其包括：(a) 测量受试者中的白细胞介素
‑
22结合蛋白(il
‑
22bp)血清水平；(b) 将受试者中的血清il
‑
22bp水平与对照中的il
‑
22bp血清水平进行比较，其中对照为一个或多个未患对肿瘤坏死因子治疗为难治性的炎症性病症的个体；和(c) 如果受试者中的il
‑
22bp血清水平低于对照中的il
‑
22bp血清水平，则将受试者选为患有适合于用抗il
‑
23剂治疗的炎症性病症。在一些实施方案中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。还设想其中炎症性病症为炎症性肠病、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎或强直性脊柱炎的实施方案。在一些实施方案中，炎症性肠病为克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一些实施方案中，选为患有适合于用抗il
‑
23剂治疗的炎症性病症的受试者具有低于359 pg/ml的il
‑
22bp血清水平。在本公开该方面的一些实施方案中，方法进一步包括确定受试者患有对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的炎症性病症，其中对tnf治疗为难治性的炎症性病症通过进行体格检查、通过查阅受试者的医疗记录或通过咨询执业医师来确定。在一些实施方案中，方法进一步包括以有效治疗对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的炎症性病症的量给予抗il
‑
23剂，比如其中抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，以足以达到12.5 ng/ml
‑
1,000 ng/ml的血清浓度的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.5个月15
‑
54 mg、每1.5
‑
4.5个月55
‑
149 mg；每4
‑
8个月150
‑
299 mg、每8
‑
14个月
300
‑
1100 mg或每4
‑
12个月300
‑
1100 mg。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.0个月15
‑
21 mg、每1.5
‑
3.0个月55
‑
70 mg、每4
‑
6个月150
‑
260 mg或每4
‑
8个月300
‑
700 mg。在一些实施方案中，量和间隔为每个月21 mg、每3个月70 mg、每6个月210 mg或每6个月700 mg。在一些实施方案中，抗il
‑
23抗体以每3个月260 mg或以每3个月700 mg给予。在一些实施方案中，每1个月给予260 mg的抗体或每1个月给予700 mg。在一些实施方案中，给予受试者的抗il
‑
23剂的剂量为70 mg，例如给予每剂70 mg、140 mg、219 mg、420 mg或700 mg。
20.本公开的一个相关方面涉及一种治疗患有对肿瘤坏死因子治疗为难治性的炎症性病症的受试者的方法，其包括：如果受试者中的il
‑
22bp血清水平低于对照中的il
‑
22bp血清水平，则给予有效量的抗il
‑
23剂，其中对照为一个或多个未患对肿瘤坏死因子治疗为难治性的炎症性病症的个体。在一些实施方案中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，炎症性病症为炎症性肠病、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎或强直性脊柱炎。在一些实施方案中，炎症性肠病为克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一些实施方案中，受试者具有低于359 pg/ml的il
‑
22bp血清水平。在一些实施方案中，以足以达到12.5 ng/ml
‑
1,000 ng/ml的血清浓度的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.5个月15
‑
54 mg、每1.5
‑
4.5个月55
‑
149 mg；每4
‑
8个月150
‑
299 mg、每8
‑
14个月300
‑
1100 mg或每4
‑
12个月300
‑
1100 mg。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.0个月15
‑
21 mg、每1.5
‑
3.0个月55
‑
70 mg、每4
‑
6个月150
‑
260 mg或每4
‑
8个月300
‑
700 mg。在一些实施方案中，量和间隔为每个月21 mg、每3个月70 mg、每6个月210 mg或每6个月700 mg。在一些实施方案中，抗il
‑
23抗体以每3个月260 mg或以每3个月700 mg给予。在一些实施方案中，每1个月给予260 mg的抗体或每1个月给予700 mg。在一些实施方案中，给予受试者的抗il
‑
23剂的剂量为70 mg，例如给予每剂70 mg、140 mg、219 mg、420 mg或700 mg。
21.本公开的仍然另一方面提供一种选择患有适合于用抗白细胞介素
‑
23 (抗il
‑
23)剂治疗的炎症性病症的受试者的方法， 其包括：(a) 测量受试者中的血清干扰素
‑
γ (ifn
‑
γ)水平；(b) 将受试者中的血清ifn
‑
γ水平与对照中的血清ifn
‑
γ水平进行比较，其中对照为一个或多个未患炎症性病症的个体；和(c) 如果受试者中的血清ifn
‑
γ水平高于对照中的血清ifn
‑
γ水平，则将受试者选为患有适合于用抗il
‑
23剂治疗的炎症性病症。在一些实施方案中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，炎症性病症为炎症性肠病、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎或强直性脊柱炎。在一些实施方案中，炎症性肠病为克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一些实施方案中，所选受试者具有大于15 pg/ml的血清干扰素
‑
γ浓度。 在一些实施方案中，炎症性病症对肿瘤坏死因子治疗为难治性的。在本公开该方面的一些实施方案中，方法进一步包括确定受试者患有炎症性病症，其中炎症性病症通过进行体格检查、通过查阅受试者的医疗记录或通过咨询执业医师来确定。在一些实施方案中，方法进一步包括以有效治疗炎症性病症的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，以足以达到12.5 ng/ml
‑
1,000 ng/ml的血清浓度的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.5个月15
‑
54 mg、每1.5
‑
4.5个月55
‑
149 mg；每4
‑
8个月150
‑
299 mg、每8
‑
14个月300
‑
1100 mg或每4
‑
12个月300
‑
1100 mg。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和
ng/ml
‑
1,000 ng/ml的血清浓度的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.5个月15
‑
54 mg、每1.5
‑
4.5个月55
‑
149 mg；每4
‑
8个月150
‑
299 mg、每8
‑
14个月300
‑
1100 mg或每4
‑
12个月300
‑
1100 mg。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.0个月15
‑
21 mg、每1.5
‑
3.0个月55
‑
70 mg、每4
‑
6个月150
‑
260 mg或每4
‑
8个月300
‑
700 mg。在一些实施方案中，量和间隔为每个月21 mg、每3个月70 mg、每6个月210 mg或每6个月700 mg。在一些实施方案中，抗il
‑
23抗体以每3个月260 mg或以每3个月700 mg给予。在一些实施方案中，每1个月给予260 mg的抗体或每1个月给予700 mg。在一些实施方案中，给予受试者的抗il
‑
23剂的剂量为70 mg，例如给予每剂70 mg、140 mg、219 mg、420 mg或700 mg。
24.一个相关方面涉及一种治疗患者的方法，患者为适合于用抗白细胞介素
‑
23 (抗il
‑
23)剂治疗的炎症性肠病(ibd)患者亚群的成员，其中患者亚群患有对肿瘤坏死因子治疗为难治性的ibd，患者亚群患有未曾为此接受过治疗的ibd，和/或患者亚群不能耐受用抗tnf剂治疗，所述方法包括：如果患者中的血清干扰素
‑
γ (ifn
‑
γ)水平高于对照中的ifn
‑
γ水平，则给予有效量的抗il
‑
23剂，其中对照为以下任何一种：未患ibd的个体中的血清ifn
‑
γ水平、多个未患ibd的个体中的ifn
‑
γ平均水平或多个患有ibd的个体中的ifn
‑
γ平均水平。在一些实施方案中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，炎症性肠病为克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一些实施方案中，所选受试者具有大于15 pg/ml的血清干扰素
‑
γ浓度。在一些实施方案中，以足以达到12.5 ng/ml
‑
1,000 ng/ml的血清浓度的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.5个月15
‑
54 mg、每1.5
‑
4.5个月55
‑
149 mg；每4
‑
8个月150
‑
299 mg、每8
‑
14个月300
‑
1100 mg或每4
‑
12个月300
‑
1100 mg。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.0个月15
‑
21 mg、每1.5
‑
3.0个月55
‑
70 mg、每4
‑
6个月150
‑
260 mg或每4
‑
8个月300
‑
700 mg。在一些实施方案中，量和间隔为每个月21 mg、每3个月70 mg、每6个月210 mg或每6个月700 mg。在一些实施方案中，抗il
‑
23抗体以每3个月260 mg或以每3个月700 mg给予。在一些实施方案中，每1个月给予260 mg的抗体或每1个月给予700 mg。在一些实施方案中，给予受试者的抗il
‑
23剂的剂量为70 mg，例如给予每剂70 mg、140 mg、219 mg、420 mg或700 mg。
25.本公开的仍然另一方面涉及从患有对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的炎症性病症的患者群体中选择患有适合于用抗白细胞介素
‑
23 (抗il
‑
23)剂治疗的炎症性病症的受试者的方法，其包括：(a) 测量受试者中的血清干扰素
‑
γ (ifn
‑
γ)水平；(b) 将受试者中的血清ifn
‑
γ水平与对照中的血清ifn
‑
γ水平进行比较，其中对照为一个或多个未患炎症性病症的个体；和(c) 如果受试者中的血清ifn
‑
γ水平高于对照中的血清ifn
‑
γ水平，则将受试者选为患有适合于用抗il
‑
23剂治疗的炎症性病症。在一些实施方案中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，炎症性病症为炎症性肠病、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎或强直性脊柱炎。在一些实施方案中，炎症性肠病为克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一些实施方案中，所选受试者具有大于15 pg/ml的血清干扰素
‑
γ浓度。在本公开该方面的一些实施方案中，方法进一步包括确定受试者患有对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的炎症性病症，其中对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的炎症性病症通过进行体格检查、通过查阅受试者的医疗记录或通过咨询执业医师来确定。在一些实施方案中，方法进
一步包括以有效治疗对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的炎症性病症的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，以足以达到12.5 ng/ml
‑
1,000 ng/ml的血清浓度的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.5个月15
‑
54 mg、每1.5
‑
4.5个月55
‑
149 mg；每4
‑
8个月150
‑
299 mg、每8
‑
14个月300
‑
1100 mg或每4
‑
12个月300
‑
1100 mg。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.0个月15
‑
21 mg、每1.5
‑
3.0个月55
‑
70 mg、每4
‑
6个月150
‑
260 mg或每4
‑
8个月300
‑
700 mg。在一些实施方案中，量和间隔为每个月21 mg、每3个月70 mg、每6个月210 mg或每6个月700 mg。在一些实施方案中，抗il
‑
23抗体以每3个月260 mg或以每3个月700 mg给予。在一些实施方案中，每1个月给予260 mg的抗体或每1个月给予700 mg。在一些实施方案中，给予受试者的抗il
‑
23剂的剂量为70 mg，例如给予每剂70 mg、140 mg、219 mg、420 mg或700 mg。
26.本公开的另一方面关注于治疗患有适合于用抗白细胞介素
‑
23 (抗il
‑
23)剂治疗的炎症性病症的受试者的方法，其中受试者为患有对肿瘤坏死因子治疗为难治性的炎症性病症的患者群体的成员，所述方法包括：如果受试者中的血清ifn
‑
γ水平高于对照中的血清ifn
‑
γ水平，则给予有效量的抗il
‑
23剂，其中对照为一个或多个未患炎症性病症的个体。在一些实施方案中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，炎症性病症为炎症性肠病、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎或强直性脊柱炎。在一些实施方案中，炎症性肠病为克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一些实施方案中，所选受试者具有大于15 pg/ml的血清干扰素
‑
γ浓度。在一些实施方案中，以足以达到12.5 ng/ml
‑
1,000 ng/ml的血清浓度的量给予抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.5个月15
‑
54 mg、每1.5
‑
4.5个月55
‑
149 mg；每4
‑
8个月150
‑
299 mg、每8
‑
14个月300
‑
1100 mg或每4
‑
12个月300
‑
1100 mg。在一些实施方案中，以以下量的抗il
‑
23剂和以下间隔给予治疗：每0.5
‑
1.0个月15
‑
21 mg、每1.5
‑
3.0个月55
‑
70 mg、每4
‑
6个月150
‑
260 mg或每4
‑
8个月300
‑
700 mg。在一些实施方案中，量和间隔为每个月21 mg、每3个月70 mg、每6个月210 mg或每6个月700 mg。在一些实施方案中，抗il
‑
23抗体以每3个月260 mg或以每3个月700 mg给予。在一些实施方案中，每1个月给予260 mg的抗体或每1个月给予700 mg。在一些实施方案中，给予受试者的抗il
‑
23剂的剂量为70 mg，例如给予每剂70 mg、140 mg、219 mg、420 mg或700 mg。
27.本公开的另一方面涉及一种选择患有适合于用抗白细胞介素
‑
23 (抗il
‑
23)剂治疗的炎症性病症的受试者的方法，其包括：(a) 测量受试者中白细胞介素
‑
22结合蛋白(il
‑
22bp)、干扰素
‑
γ (ifn
‑
γ)或il
‑
22bp和ifn
‑
γ两者的血清水平；(b) 将受试者中il
‑
22bp、ifn
‑
γ或il
‑
22bp和ifn
‑
γ两者的血清水平与对照中的il
‑
22bp、ifn
‑
γ或il
‑
22bp和ifn
‑
γ两者的血清水平进行比较，其中对照为一个或多个未患炎症性病症的个体；和(c) 如果受试者中的il
‑
22bp血清水平低于对照中的il
‑
22bp血清水平，受试者中的血清ifn
‑
γ水平高于对照中的血清ifn
‑
γ水平，或者受试者中的il
‑
22bp血清水平低于对照中的il
‑
22bp血清水平和受试者中的血清ifn
‑
γ水平高于对照中的血清ifn
‑
γ水平，则选择受试者为患有适合于用抗il
‑
23剂治疗的炎症性病症。在这些实施方案的一些中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在这些实施方案的一些中，炎症性病症为炎症性肠病、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎或强直性脊柱炎。在这些实施方案的一些中，炎症性肠病为克罗恩病或溃疡
性结肠炎。在一些实施方案中，所选受试者具有大于15 pg/ml的血清干扰素
‑
γ浓度。在这些实施方案的一些中，方法进一步包括确定受试者患有对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的炎症性病症，其中对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的炎症性病症通过进行体格检查、通过查阅受试者的医疗记录或通过咨询执业医师来确定。在这些实施方案的一些中，方法进一步包括以有效治疗对肿瘤坏死因子(tnf)治疗为难治性的炎症性病症的量给予抗il
‑
23剂。在这些实施方案的一些中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，方法进一步包括如果患者中的血清ifn
‑
γ水平高于对照中的血清ifn
‑
γ水平和任选地患者中的il
‑
22bp的血清水平低于对照中的il
‑
22bp血清水平，则给予患者有效量的抗il
‑
23剂。在一些实施方案中，抗il
‑
23剂为布雷库单抗。在一些实施方案中，炎症性病症为炎症性肠病、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎或强直性脊柱炎。在一些实施方案中，炎症性肠病为克罗恩病或溃疡性结肠炎。
28.通过参考以下详述(包括实施例)将更好地理解本公开的其他特征和优点。
29.附图简述图1. 在m5 elisa读板器(molecular devices, inc., san jose ca)上使用softmax软件对elisa板的原始光密度(od)读数。小图a提供板布局，小图b提供原始od值，和小图c提供用于测定的调整值。a1
‑
g1和a2
‑
g2为人类il
‑
22 bp标准曲线的技术副本。a3
‑
a11、b3
‑
b11、c3
‑
c11、d3
‑
d11、e3
‑
e11、f3
‑
f11、g3
‑
g10和h3
‑
h10为健康男性、健康女性、克罗恩病患者、溃疡性结肠炎患者和medimmune 2a期临床试验(medi2070
‑
1147)安慰剂组血清样品的原始od读数。使用softmax软件将原始od读数转换为以下图2
‑
8中的il
‑
22bp血清浓度。
30.图2. il
‑
22bp标准曲线由在100
‑
6000 pg/ml范围内的7个校准浓度组成。该elisa的精确度(cv%)和准确度(恢复%)在所接受的范围内(cv% ≤ 20%和恢复%在80
‑
120%范围之内)，表明该分析运行的有效性。
31.图3. 来自10名健康男性的il
‑
22 bp血清水平基于图8中呈现的标准曲线计算得出，标准曲线数据呈现于图2中。
32.图4. 来自10名健康女性的il
‑
22 bp血清水平基于图8中呈现的标准曲线计算得出，标准曲线数据呈现于图2中。
33.图5. 来自19名克罗恩病患者的il
‑
22 bp血清水平基于图8中呈现的标准曲线计算得出，标准曲线数据呈现于图2中。
34.图 6. 来自11名溃疡性结肠炎患者的il
‑
22 bp血清水平基于图8中呈现的标准曲线计算得出，标准曲线数据呈现于图2中。
35.图7. 来自medimmune 2a期试验(medi2070
‑
1147)安慰剂组血清样品中20名克罗恩病患者(对抗tnfα治疗无反应者)的il
‑
22 bp血清水平基于图8中呈现的标准曲线计算得出，标准曲线数据呈现于图2中。
36.图8. 使用softmax软件生成的il
‑
22 bp标准曲线图。il
‑
22 bp浓度以pg/ml表示。
37.图9. 来自图3
‑
7的结果汇总。数据显示克罗恩病(cd)和溃疡性结肠炎患者中il
‑
22 bp的中值和平均血清浓度两者均高于健康或正常人(男性和女性)中il
‑
22 bp的中值和平均血清浓度。此外，抗tnfα无反应cd患者中的il
‑
22bp水平低于健康人类中的il
‑
22bp水平。预计血清中表达的il
‑
22bp水平在布雷库单抗反应者相对于无反应者亚群中表现出极
化模式，无论布雷库单抗反应者和无反应者亚群是否对tnf
‑
α治疗为难治性的。
38.图10. 抗tnf
‑
α难治性克罗恩病患者的血清ifn
‑
γ水平。血清样品获自在medimmune 2a期试验(medi2070
‑
1147)中用布雷库单抗治疗的患者组。临床试验中对布雷库单抗的反应者在小图a的“反应者”栏中标为“0”；临床试验中对布雷库单抗的无反应者在如小图b所示的该栏中用“1”标识。
39.图11. elisa结果显示，克罗恩病患者的布雷库单抗反应者亚群(参见小图b)中il
‑
22 bp的中值和平均血清浓度两者均低于布雷库单抗无反应者cd患者(参见小图a)中il
‑
22 bp的中值和平均血清浓度。血清样品获自medimmune 2a期试验(medi2070
‑
1147)中用布雷库单抗治疗的cd患者组。该2a期试验中包括的所有患者均为对抗tnfα治疗无反应者。
40.详述本公开提供用于选择适合于抗细胞因子疗法，并且更具体地讲抗il
‑
23疗法(包括抗il
‑
23免疫疗法)的患者群体或亚群以治疗炎症性病症的方法和材料。基于本文公开的实验数据，并且与对抗il
‑
23疗法有反应的患者中il
‑
22bp会升高的常规观点相反，提供选择适合于抗il
‑
23疗法的患者以治疗炎症性病症的方法，其确定患者的血清样品是否显示白细胞介素
‑
22结合蛋白(il
‑
22bp)水平降低和/或干扰素
‑
γ (ifn
‑
γ)水平升高。
41.本公开进一步提供il
‑
23抗原结合蛋白，包括拮抗il
‑
23的分子，比如抗il
‑
23抗体、抗体片段和抗体衍生物，例如拮抗性抗il
‑
23抗体、抗体片段或抗体衍生物。还提供多核苷酸及其衍生物和片段(其包含编码与il
‑
23结合的多肽的全部或一部分的核酸序列，例如编码抗il
‑
23抗体、抗体片段或抗体衍生物的全部或一部分的多核苷酸)、包含这种核酸的质粒和载体以及包含这种多核苷酸和/或载体和质粒的细胞或细胞系。所提供的方法包括例如制备、鉴定或分离il
‑
23抗原结合蛋白(比如抗il
‑
23抗体)的方法、确定分子是否与il
‑
23结合的方法、确定分子是否拮抗il
‑
23的方法、制备包含il
‑
23抗原结合蛋白的组合物(比如药用组合物)的方法以及用于给予受试者il
‑
23抗原结合蛋白的方法(例如用于治疗由il
‑
23介导的病症以及在体内或体外拮抗il
‑
23的生物活性的方法)。
42.除非本文另外定义，否则与本公开相关使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。进一步地，除非上下文另外要求，否则单数术语应包括复数并且复数术语应包括单数。通常，与本文所述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学及蛋白质和核酸化学以及杂交相关使用的命名法和它们的技术为本领域众所周知和通常使用的那些。本公开的方法和技术通常根据本领域众所周知的常规方法和如本说明书通篇引用和讨论的各种一般性和更具体的参考文献中所描述地进行，除非另外指明。参见例如sambrook等人, molecular cloning: a laboratorymanual, 3rd ed., cold spring harbor laboratory press, cold spring harbor, n.y. (2001)和ausubel等人, current protocols in molecular biology, greene publishing associates (1992), 以及harlow和lane, antibodies: a laboratory manual cold spring harbor laboratory press, cold spring harbor,n.y. (1990)。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书进行，如本领域中通常完成的或如本文所述。与本文所述的分析化学、合成有机化学以及医药和药物化学相关使用的术语以及它们的实验室程序和技术为本领域众所周知和通常使用的那些。标准技术可用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送以及患者
的治疗。
43.人类il
‑
23的p19亚基(seq id no:144和145)、共有的p40亚基(seq id no:146和147)、人类il
‑
23受体异二聚体亚基il
‑
12rβ1 (seq id no:150和151)和il
‑
23r (seq id no:148和149)的多核苷酸和蛋白序列为本领域已知的。参见例如genbank登录号ab030000；m65272、nm 005535、nm 144701，来自其他哺乳动物物种的那些亦是如此。重组il
‑
23和il
‑
23受体蛋白(包括单链和fc蛋白)以及表达il
‑
23受体的细胞已被描述或可从商业来源获得(参见例如oppmann等人, immunity, 2000, 13: 713
‑
715; r&d systems, minneapolis, minnesota; united states biological, swampscott, massachusetts; wipo公开号wo 2007/076524)。可使用本领域已知的方法(包括本文所述的那些方法)从人类细胞(比如树突状细胞)获得天然人类il
‑
23。
44.il
‑
23为一种包含共价结合于共有的p40亚基的独特的p19亚基的异二聚体细胞因子。p19亚基包含4个以上上下下基序的由a和b螺旋之间、b和c螺旋之间以及c和d螺旋之间的3个螺旋内环连接的α
‑
螺旋(“a”、“b”、“c”和“d”)，参见oppmann等人, immunity, 2000, 13: 713
‑
715 andbeyer,等人, j mol biol, 2008. 382(4): 942
‑
55。据信4螺旋束细胞因子的a和d螺旋与受体结合有关。p40亚基包含3个β
‑
折叠夹心式结构域d1、d2和d3 (lupardus和garcia, j. mol. biol., 2008, 382:931
‑
941)。
45.术语“多核苷酸”包括单链和双链核酸两者，并且包括基因组dna、rna、mrna、cdna或者与自然界中通常发现的序列无关的合成来源或其一些组合。包含特定序列的分离的多核苷酸除特定序列之外，还可包括多达10个或者甚至多达20个其他蛋白或其部分的编码序列，或者可包括控制所述核酸序列的编码区表达的可操作地连接的调控序列和/或可包括载体序列。包含多核苷酸的核苷酸可为核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或任一类型核苷酸的修饰形式。修饰包括碱基修饰(比如溴尿苷和肌苷衍生物)、核糖修饰(比如2',3'
‑
双脱氧核糖)以及核苷酸间连键修饰(比如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺硫代磷酸酯、苯胺磷酸酯和氨基磷酸酯)。
46.术语“寡核苷酸”意指包含100或更少个核苷酸的多核苷酸。在一些实施方案中，寡核苷酸的长度为10
‑
60个碱基。在其他实施方案中，寡核苷酸的长度为12、13、14、15、16、17、18、19或20
‑
40个核苷酸。寡核苷酸可为单链或双链的，例如用于构建突变基因。寡核苷酸可为有义或反义寡核苷酸。寡核苷酸可包括用于检测测定的可检测标记，比如放射性标记、荧光标记、半抗原或抗原标记。寡核苷酸可用作例如pcr引物、克隆引物或杂交探针。
47.术语“多肽”或“蛋白”意指具有天然蛋白(即由天然存在和非重组细胞产生的蛋白)的氨基酸序列的大分子；或其由基因工程或重组细胞产生，并且包含具有天然蛋白的氨基酸序列的分子或者具有对天然序列的氨基酸残基的一个或多个缺失、插入和/或取代的分子。该术语还包括氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸为相应天然存在的氨基酸和聚合物的化学类似物。术语“多肽”和“蛋白”包括具有一个或多个对抗原结合蛋白序列的氨基酸残基的缺失、添加和/或取代的il
‑
23抗原结合蛋白(比如抗体)和序列。术语“多肽片段”是指与全长天然蛋白相比较具有氨基末端缺失、羧基末端缺失和/或内部缺失的多肽。与天然蛋白相比较，这种片段还可含有修饰的氨基酸。在某些实施方案中，片段长约5
‑
500个氨基酸。例如，片段可为至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、50、70、100、110、150、200、250、300、350、400或450 个氨基酸长。有用的多肽片段包括抗体的免疫功能
性片段，包括结合结构域。在il
‑
23抗原结合蛋白(比如抗体)的情況下，有用的片段包括(但不限于)一个或多个cdr区、重链或轻链的可变结构域、抗体链的一部分、包括少于3个cdr的可变区的一部分等。
[0048]“氨基酸”赋予其在本领域中的正常含义。20种天然存在的氨基酸及其缩写遵循常规用法。参见immunology
‑
a synthesis, 第2版, (e. s. golub和d. r. gren, eds.), sinauer associates: sunderland, mass. (1991)。20种常规氨基酸、非天然氨基酸(比如α
‑
,α
‑
二取代的氨基酸、n
‑
烷基氨基酸和其他非常规氨基酸)的立体异构体(例如d
‑
氨基酸)也可为多肽的适合组分。非常规氨基酸的实例包括：4
‑
羟基脯氨酸、γ
‑
羧基谷氨酸、ε
‑
n,n,n
‑
三甲基赖氨酸、ε
‑
n
‑
乙酰赖氨酸、o
‑
磷酸丝氨酸、n
‑
乙酰丝氨酸、n
‑
甲酰甲硫氨酸、3
‑
甲基组氨酸、5
‑
羟基赖氨酸、σ
‑
n
‑
甲基精氨酸和其他类似的氨基酸和亚氨基酸(例如4
‑
羟基脯氨酸)。在本文使用的多肽符号中，根据标准用法和惯例，左手方向为氨基末端方向，和右手方向为羧基末端方向。
[0049]
术语“分离的蛋白”是指从会干扰其治疗、诊断、预防、研究或其他用途的蛋白或多肽或其他污染物中纯化的蛋白，比如抗原结合蛋白(其实例可为抗体)。如本文使用的，“基本上纯的”意指所描述的分子种类为存在的主要种类，即以摩尔计，其比同一混合物中的任何其他单个种类更丰富。在某些实施方案中，基本上纯的分子为组合物，其中目标种类占存在的所有大分子种类的至少50% (以摩尔计)。在其他实施方案中，基本上纯的组合物将包含至少80%、85%、90%、95%或99%的组合物中存在的所有大分子种类。在某些实施方案中，基本上均质的物质已被纯化至通过常规检测方法无法在组合物中检测到污染种类，从而组合物由单一可检测的大分子种类组成的这种程度。
[0050]
多肽(例如抗原结合蛋白，比如抗体)的“变体”包含其中相对于另一个多肽序列将一个或多个氨基酸残基插入到氨基酸序列中、自其缺失和/或取代到其中的氨基酸序列。变体包括融合蛋白。多肽的“衍生物”为已经以不同于插入、缺失或取代变体的某种方式(例如经与另一化学部分缀合)进行化学修饰的多肽。
[0051]
如说明书通篇与生物材料(比如多肽、核酸、宿主细胞等)相关使用的术语“天然存在的”或“天然的”是指在自然界中发现的材料，比如天然人类il
‑
23。在某些方面，提供结合天然il
‑
23的重组抗原结合蛋白。在该上下文中，“重组蛋白”为使用重组技术(即通过如本文所述的重组核酸的表达)制备的蛋白。用于产生重组蛋白的方法和技术为本领域众所周知的。
[0052]
术语“抗体”是指可与完整抗体竞争与靶抗原的特异性结合的任何同种型的完整免疫球蛋白或其片段，并且包括例如嵌合、人源化、完全人类和双特异性抗体。抗体为抗原结合蛋白的一种类型。除非另外指明，术语“抗体”除包含两条全长重链和两条全长轻链的抗体之外，还包括其衍生物、变体、片段和突变蛋白，其实例如下所述。完整抗体通常将包含至少两条全长重链和两条全长轻链，但在一些情况下可包括更少的链，比如骆驼科中天然存在的可仅包含重链的抗体。抗体可仅衍生于单一来源，或者可为“嵌合的”，即抗体的不同部分可衍生于两种不同的抗体，如以下进一步描述。抗原结合蛋白、抗体或结合片段可通过重组dna技术在杂交瘤中产生或通过完整抗体的酶促或化学裂解而产生。
[0053]
如本文使用的术语抗体或免疫球蛋白链(重链或轻链)的“功能性片段”(或简称“片段”)为以下抗原结合蛋白，其包含至少缺少全长链中存在的氨基酸中的一些，但能够与
抗原特异性结合的抗体的一部分(无论该部分如何获得或合成)。这种片段具有生物活性，因为其与靶抗原特异性地结合，并且可与其他抗原结合蛋白(包括完整抗体)竞争与给定表位的特异性结合。一方面，这种片段将保留全长轻链或重链中存在的至少一个cdr，并且在一些实施方案中将包含单一重链和/或轻链或其部分。这些生物活性片段可通过重组dna技术产生，或者可通过抗原结合蛋白(包括完整抗体)的酶促或化学裂解产生。片段包括(但不限于)免疫功能性片段，比如fab、fab'、f(ab')2、fv、结构域抗体和单链抗体，并且可衍生于任何哺乳动物来源，包括(但不限于)人类、小鼠、大鼠、骆驼科或兔子。进一步考虑本文公开的抗原结合蛋白的功能性部分(例如一个或多个cdr)可与第二蛋白或小分子共价结合以产生针对体内特定靶标的治疗剂，其具有双功能治疗特性或具有延长的血清半衰期。
[0054]
当在抗原结合蛋白(例如中和抗原结合蛋白或中和抗体)的上下文中使用时，术语“竞争”意指如通过其中正在测试的抗原结合蛋白(例如抗体或其免疫功能性片段)防止或抑制参考抗原结合蛋白(例如配体或参考抗体)与共同抗原(例如il
‑
23蛋白或其片段)的特异性结合的测定所测定的抗原结合蛋白之间的竞争。可使用许多种类型的竞争性结合测定，例如：固相直接或间接放射免疫测定(ria)、固相直接或间接酶免疫测定(eia)、夹心式竞争测定(参见例如stahli等人, 1983, methods inenzymology 92:242
‑
253)；固相直接生物素
‑
亲和素eia (参见例如kirkland等人, 1986, j.immunol. 137:3614
‑
3619)、固相直接标记式测定、固相直接标记夹心式测定(参见例如harlow和lane, 1988, antibodies, a laboratory manual, cold spring harbor press)；使用
125
i标记的固相直接标记ria (参见例如morel等人, 1988, molec. immunol. 25:7
‑
15)；固相直接生物素
‑
亲和素eia (参见例如 cheung,等人, 1990, virology 176:546
‑
552)；和直接标记式ria (moldenhauer等人, 1990, scand. j. immunol. 32:77
‑
82)。一般地，这种测定涉及使用结合于固体表面或带有以下这些中任一种的细胞的纯化抗原：未标记的测试抗原结合蛋白和标记的参考抗原结合蛋白。
[0055]
在存在测试抗原结合蛋白的情况下，通过确定结合于固体表面或细胞的标记物的量来测量竞争性抑制。通常测试抗原结合蛋白过量存在。通过竞争测定鉴定的抗原结合蛋白(竞争性抗原结合蛋白)包括结合于与参考抗原结合蛋白相同的表位的抗原结合蛋白和结合于与参考抗原结合蛋白结合的表位足够靠近的相邻表位以发生立体位阻的抗原结合蛋白。通常，当竞争性抗原结合蛋白过量存在时，其将抑制参考抗原结合蛋白与共同抗原的特异性结合至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或75%。 在一些情况下，结合被抑制至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多。
[0056]
术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原结合蛋白与其结合的抗原上的位点。表位可由邻接氨基酸或通过蛋白的三级折叠并列的非邻接氨基酸两者形成。由邻接氨基酸形成的表位一般地在暴露于变性溶剂时仍会保留，而由三级折叠形成的表位一般地在用变性溶剂处理时会丧失。表位决定簇可包括分子的化学活性表面分组，比如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，并且可具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。表位一般地包括呈独特空间构象的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35个氨基酸。表位可使用本领域已知的方法来确定。
[0057]
il
‑
23抗原结合蛋白如本文使用的“抗原结合蛋白”意指特异性地结合特定靶抗原的蛋白；如本文提供
的抗原为il
‑
23，特别是人类il
‑
23，包括天然人类il
‑
23。如本文提供的抗原结合蛋白与il
‑
23的独特p19亚基的至少一部分相互作用，从而可检测地结合il
‑
23；但与il
‑
12 (例如il
‑
12的p40和/或p35亚基)没有任何显著结合，从而
ꢀ“
放过il
‑
12”。因此，本文提供的抗原结合蛋白能够影响 il
‑
23活性而没有与抑制il
‑
12或il
‑
12和il
‑
23共有的p40亚基相关的潜在风险。抗原结合蛋白可影响il
‑
23与其受体相互作用的能力，例如通过影响il
‑
23与受体的结合，比如通过干扰受体缔合。特別是，这种抗原结合蛋白完全或部分地降低、抑制、干扰或调节il
‑
23的一种或多种生物活性。与不存在抗原结合蛋白的情况下的反应相比较，这种抑制或中和在存在抗原结合蛋白的情况下破坏生物反应，并且可使用本领域已知的和本文所述的测定来确定。本文提供的抗原结合蛋白抑制il
‑
23诱导的促炎细胞因子产生，例如全血细胞中il
‑
23诱导的il
‑
22产生以及nk和全血细胞中il
‑
23诱导的ifn
‑
γ表达。生物活性的降低可为约20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多。
[0058]
抗原结合蛋白可包含与抗原结合的部分和任选地使得抗原结合部分能够采用促进抗原结合蛋白与抗原结合的构象的支架或框架部分。抗原结合蛋白的实例包括抗体、抗体片段(例如抗体的抗原结合部分)、抗体衍生物和抗体类似物。抗原结合蛋白可包含具有接枝cdr或cdr衍生物的备选蛋白支架或人工支架。这种支架包括(但不限于)包含引入以例如稳定抗原结合蛋白的三维结构的突变的抗体衍生支架以及包含例如生物相容性聚合物的全合成支架。参见例如korndorfer等人, proteins:structure, function, and bioinformatics, (2003) 第53卷, 第1期:121
‑
129; roque等人, biotechnol.prog., 2004, 20:639
‑
654。另外，可使用肽抗体模拟物(“pam”)以及基于利用纤连蛋白组分作为支架的抗体模拟物的支架。
[0059]
本文所述的某些抗原结合蛋白为抗体或衍生于抗体。这种抗原结合蛋白包括(但不限于)单克隆抗体、双特异性抗体、微型抗体、域抗体、合成抗体、抗体模拟物、嵌合抗体、人源化抗体、人类抗体、抗体融合物、抗体缀合物、单链抗体及其各自片段。在一些情况下，抗原结合蛋白为抗体的免疫片段(例如fab、fab'、f(ab')2或scfv)。各种结构在本文进一步描述和定义。
[0060]
所提供的某些抗原结合蛋白可包含一个或多个如本文所述的cdr (例如1、2、3、4、5、6或更多个cdr)。在一些情况下，抗原结合蛋白包含(a) 多肽结构和(b) 一个或多个插入和/或连接于多肽结构的cdr。多肽结构可采取多种不同形式。例如，其可为或包含天然存在的抗体或其片段或变体的框架，或者实质上可为完全合成的。各种多肽结构的实例以下进一步描述。
[0061]
当解离平衡常数(k
d
)小于或等于10
‑
8 m时，本公开的抗原结合蛋白称为“特异性地结合”其靶抗原。当k
d
至少为5 x 10
‑
9 m时，抗原结合蛋白以“高亲和力”特异性地结合抗原，而当k
d
至少为5 x 10
‑
10 m时，抗原结合蛋白以“非常高的亲和力”特异性地结合抗原。在一个实施方案中，抗原结合蛋白将以5 x 10
‑
12 m的k
d
与人类il
‑
23结合，而在仍然另一个实施方案中，其将以5 x 10
‑
13 m的k
d 结合。在本发明的另一个实施方案中，抗原结合蛋白具有5 x 10
‑
12 m的kd和约5x10
‑
6 1/s的k
off
。在另一个实施方案中，k
off
为5x10
‑71/s。
[0062]
另一方面提供一种在体外或体内(例如当给予人类受试者时)具有至少1天半衰期的抗原结合蛋白。在一个实施方案中，抗原结合蛋白具有至少3天的半衰期。在另一个实施
方案中，抗体或其部分具有4天或更长的半衰期。在另一个实施方案中，抗体或其部分具有8天或更长的半衰期。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分被衍生化或修饰，使得其与未衍生化或未修饰的抗体相比较具有更长的半衰期。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白含有点突变以增加血清半衰期，比如在wipo公开号wo 00/09560中所述。
[0063]
在其中抗原结合蛋白用于治疗应用的实施方案中，抗原结合蛋白可降低、抑制、干扰或调节il
‑
23的一种或多种生物活性，比如诱导促炎细胞因子的产生。il
‑
23具有许多不同的生物效应，其可在不同细胞类型的许多不同测定中进行测量； 这种测定的实例为已知的并且在本文中提供。
[0064]
所提供的抗原结合蛋白中的一些具有一般地与天然存在的抗体相关的结构。这些抗体的结构单元一般地包含一个或多个四聚体，每个四聚体由两个相同的多肽链偶联体构成，不过一些种类的哺乳动物也会产生仅具有单条重链的抗体。在典型的抗体中，每一对或偶联体包括一条全长“轻”链(在某些实施方案中为约25 kda)和一条全长“重”链(在某些实施方案中为约50
‑
70 kda)。每个单个免疫球蛋白链由几个“免疫球蛋白结构域”构成，每个结构域由大约90
‑
110个氨基酸组成并表现特征性折叠模式。这些结构域为构成抗体多肽的基本单元。每条链的氨基末端部分通常包括负责抗原识别的可变区。。羧基末端部分在进化上比链的另一端更加保守，并且称为“恒定区”或“c区”。人类轻链通常分类为κ轻链和λ轻链，并且这些链中的每一个均含有一个可变区和一个恒定结构域(cl1)。z重链一般地分类为
µ
、δ、γ、α或ε链，并且这些链将抗体的同种型分别定义为igm、igd、igg、iga和ige。igg具有几种亚型，包括(但不限于) igg1、igg2、igg3和igg4。igm亚型包括igm和igm2。iga亚型包括iga1和iga2。在人类中，iga和igd同种型含有4条重链和4条轻链；igg和ige同种型含有两条重链和两条轻链；和igm同种型含有5条重链和5条轻链。重链恒定区(ch)一般地包含一个或多个可能负责效应子功能的结构域。重链恒定区结构域的数量将取决于同种型。例如igg重链每条均含有3个称为ch1、ch2和ch3的ch区结构域。所提供的抗体可具有这些同种型和亚型中的任何一种，例如il
‑
23抗原结合蛋白具有igg1、igg2或igg4亚型。如果期望igg4，则还可期望在铰链区引入点突变 (cpscp
‑
>cppcp) (如bloom等人, 1997, protein science 6:407中所述)，以减轻形成h链内二硫键的趋势，这可导致igg4抗体中的异质性。可使用亚类转换方法将本文提供的属于一种类型的抗体改变为不同类型。参见例如lantto等人, 2002, methods mol. biol. 178:303
‑
316。
[0065]
在全长轻链和重链中，可变区和恒定区由约12或更多个氨基酸的“j”区连接，重链还包括约10多个氨基酸的“d”区。参见例如fundamental immunology, 2nd ed., ch. 7 (paul, w., ed.) 1989, newyork: raven press。每个轻链/重链对的可变区一般地形成抗原结合位点。
[0066]
可变区本文提供的各种重链和轻链可变区(或结构域)均描绘于表1和2中。这些可变区中的每一个可附接于例如上述重链和轻链恒定区。进一步地，每个如此产生的重链和轻链序列可以组合以形成完整的抗原结合蛋白结构。
[0067]
提供含有以下的抗原结合蛋白：至少一个选自vh1、vh2、vh3、vh4、vh5、vh6、vh7、vh8、vh9、vh10、vh11、vh12、vh13、vh14、vh15和vh16的重链可变区(vh)和/或至少一个选自 vl1、vl2、vl3、vl4、vl5、vl6、vl7、vl8、vl9、vl10、vl11、vl12、vl13、vl14、vl15和vl16的轻链
可变区(vl)，如以下表1和2所示。
[0068]
表2中所列的重链可变区中的每一个可与表1中所示的轻链可变区中的任何一个组合以形成抗原结合蛋白。在一些情况下，抗原结合蛋白包括来自表1和2中所列的那些的至少一个重链可变区和/或一个轻链可变区。在一些情况下，抗原结合蛋白包括来自表1和2中所列的那些的至少两个不同的重链可变区和/或轻链可变区。重链可变区的各种组合可与轻链可变区的各种组合中的任何一种组合。
[0069]
在其他情况下，抗原结合蛋白含有两个相同的轻链可变区和/或两个相同的重链可变区。作为一个实例，抗原结合蛋白可为抗体或免疫功能性片段，其包含呈如表1和2中所列的轻链可变区对和重链可变区对的组合的两个轻链可变区和两个重链可变区。包含两个相同的重链和轻链可变区的这种抗原结合蛋白的实例包括：抗体a vh14/vl14；抗体b vh9/vl9；抗体c vh10/vl10；抗体d vh15/vl15；抗体e vh1/vl1、抗体f vh11/vl11；抗体g vh12/vl12；抗体h vh13/vl13；抗体i vh8/vl8；抗体j vh3/vl3；抗体k vh7/vl7；抗体l vh4/vl4；抗体m vh5/vl5和抗体n vh6/vl6。
[0070]
所提供的一些抗原结合蛋白包含重链可变区和/或轻链可变区，并且重链可变区和/或轻链可变区包含仅在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基处不同于选自表1和表2的重链可变区和/或轻链可变区的序列的氨基酸序列，其中每个这种序列差异独立地为一个氨基酸的缺失、插入或取代。在一些抗原结合蛋白中，轻链和重链可变区包含与表1和表2中提供的氨基酸序列具有至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。仍然其他抗原结合蛋白(例如抗体或免疫功能性片段)也包括如本文所述的变体重链区形式和/或变体轻链区形式。
[0071]
术语“同一性”是指如通过比对和比较序列确定的两个或更多个多肽分子或者两个或更多个多核苷酸的序列之间的关系。“同一性百分比”意指比较分子中的氨基酸或核苷酸之间相同残基的百分比，并基于被比较分子中的最小分子大小来计算。
[0072]
表1示例性变体轻链区序列
(smith, d. w., ed.), 1993, new york: academic press; computer analysis of sequence data, part i, (griffin, a. m.,和griffin, h. g., eds.), 1994, new jersey: humana press; von heinje, g., 1987, sequence analysis in molecular biology, new york: academic press; sequence analysis primer, (gribskov, m.和devereux, j., eds.), 1991, new york: m. stockton press; 和carillo等人, 1988, siam j. applied math. 48:1073。
[0073]
在计算同一性百分比时，所比较的序列以在序列之间给出最大匹配的方式进行比对。用于确定同一性百分比的计算机程序为gcg程序包，其包括gap (devereux等人, 1984, nucl. acids res. 12:387; genetics computer group, university of wisconsin, madison, wi)。计算机算法gap用于比对待确定序列同一性百分比的两个多肽或多核苷酸。序列进行比对以获得其相应氨基酸或核苷酸的最佳匹配(“匹配跨度”，如通过算法确定)。空位开放罚分(计算为平均对角线的3x，其中“平均对角线”为所用比较矩阵的对角线的平均值；“对角线”为由特定比较矩阵指派给每个完美氨基酸匹配的分数或数字)和空位扩展罚分(通常为空位开放罚分的1/10倍)以及比较矩阵(比如pam 250或blosum 62)与算法结合使用。在某些实施方案中，算法还使用标准比较矩阵(关于pam 250比较矩阵，参见dayhoff等人, 1978, atlas of protein sequence and structure 5:345
‑
352 for the ; 关于blosum 62比较矩阵，参见henikoff等人, 1992, proc. natl. acad. sci. u.s.a. 89:10915
‑
10919)。
[0074]
使用gap程序确定多肽或核苷酸序列的同一性百分比的推荐参数如下：算法：needleman等人, 1970, j. mol. biol.48:443
‑
453；比较矩阵：来自henikoff等人, 1992, 同上的blosum 62；空位罚分：12 (但对末端空位没有罚分)，空位长度罚分：4，相似性阈值：0。用于比对两个氨基酸序列的某些比对方案可导致两个序列中仅短的区域的匹配，并且这个小的比对区域可能具有非常高的序列同一性，即使两个全长序列之间没有显著关系。因此，如果需要的话，可调整所选的比对方法(gap程序)以产生跨越目标多肽的至少50个邻接氨基酸的比对。本文公开的重链和轻链可变区包括衍生自相关抗原结合蛋白组的共有序列。分析重链和轻链可变区的氨基酸序列的相似性。出现4组，一组具有κ轻链可变区(vh9/vl9、vh10/vl10、vh11/vl11、vh13/vl13、vh14/vl14和vh15/vl15)和3组具有λ轻链可变区：λ组1 (vh5/vas、vh6/vl6和vh7/vl7)、λ组2 (vh3/vl3和vh4/vl4)和λ组3 (vh1/vl1和vh2/vl2)。代表的轻链种系包括vk1/a30和vk1/l19。代表的轻链λ种系包括vl1/1e、vl3/3p、vl5/5c和vl9/9a。代表的重链种系包括vh3/3
‑
30、vh3/3
‑
30.3、vh3/3
‑
33、vh3/3
‑
48、vh4/4
‑
31和vh4/4
‑
59。如本文使用的“共有序列”是指具有在许多序列中共有的保守氨基酸和在给定氨基酸序列内变化的可变氨基酸的氨基酸序列。可使用对应于本文公开的il
‑
23抗原结合蛋白的轻链和重链可变区的标准系统发育分析来确定共有序列。
[0075]
κ组的轻链可变区共有序列为dx1qx2tqspssvsasvgdrvtitcrasqgx3x4sx5wx6awyqqkpgx7apx8lliyaasslqsgvpsrfsgsx0sgtx
10
ftltisslqpx
11
dfatyx
12
cqqansfpftfgpgtkvdx
13
k (seq id no:30)；其中x1选自i或s；x2选自m或l；x3选自g或v和x4选自s、f或i；x5选自s或g；x6选自f或l；x7选自k或q；x8选自k、n或s；x9选自g或v；x
10
选自d或e，x
11
选自e或a；x
12
选自y或f；和x
13
选自i、v或f。
[0076]
λ组1的轻链可变区共有序列为qpx1ltqppsasaslgasvtltctlx2sgysdykvdwyqx3rp
2001, 309(3):657
‑
670)。本文提供的cdr不仅可用于定义传统抗体结构的抗原结合结构域，而且可嵌入多种其他多肽结构中，如本文所述。
[0083]
本文公开的抗原结合蛋白为其中可接枝、插入、嵌入和/或连接一个或多个cdr的多肽。抗原结合蛋白可具有例如一个重链cdr1 (“cdrh1”)和/或一个重链cdr2 (“cdrh2”)和/或一个重链cdr3 (“cdrh3”)和/或一个轻链cdr1 (“cdrl1”)和/或一个轻链cdr2 (“cdrl2”)和/或一个轻链cdr3 (“cdrl3”)。一些抗原结合蛋白包括cdrh3和cdrl3两者。具体实施方案通常利用非重复性cdr的组合，例如抗原结合蛋白通常不是由两个cdrh2区在一个可变重链区中等制成。抗原结合蛋白可包含一个或多个氨基酸序列，其与表3中呈现的一个或多个cdr的氨基酸序列相同或仅在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基处不同，其中每个这种序列差异独立地为一个氨基酸的缺失、插入或取代。一些抗原结合蛋白中的cdr包含与表3中所列的cdr序列具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列。在一些抗原结合蛋白中，cdr嵌入到“框架”区中，其会定向cdr使得实现cdr的适当抗原结合特性。
[0084]
表3例示性的cdrh和cdrl序列
本文提供包含以下的cdr1区：seq idno: 7和11的氨基酸残基23
‑
34；seq id no: 9、13、15、17、19、21、23、25、27和29的氨基酸残基24
‑
34；seq id no: 1、3和4的氨基酸残基23
‑
36；seq id no: 31、33、34、38、40、44、52和60的氨基酸残基31
‑
35和seq id no: 46、48、50、54、56和58的氨基酸残基31
‑
37。
[0085]
提供包含以下的cdr2区：seq id no: 9、13、15、17、19、21、23、25、27和29的氨基酸残基50
‑
56；seq id no: 7和11的氨基酸残基50
‑
61；seq id no: 4的氨基酸残基52
‑
62；seq id no: 31、33、44和52的氨基酸残基50
‑
65；seq id no: 36、38、40、42和60的氨基酸残基50
‑
66；seq id no: 1和3的氨基酸残基52
‑
58和seq id no: 46、48、50、54、56和58的氨基酸残基52
‑
67。
[0086]
还提供包含以下的cdr3区：seq id no: 13、15、17、19、21、23、25、27和29的氨基酸残基89
‑
97；seq id no: 1和3的氨基酸残基91
‑
101；seq id no: 7、9和11的氨基酸残基94
‑
106；seq id no: 44和52的氨基酸残基98
‑
107；seq id no: 4的氨基酸残基97
‑
105；seq id no: 34和36的氨基酸残基99
‑
110；seq id no: 112的氨基酸残基99
‑
112；seq id no: 31和33的氨基酸残基99
‑
113；seq id no: 38、40和42的氨基酸残基99
‑
114；seq id no: 46、48、54、56和58的氨基酸残基100
‑
109；和seq id no: 50的氨基酸残基101
‑
019。
[0087]
本文公开的cdr包括衍生于相关序列组的共有序列。如先前所述，鉴定了4组可变区序列，1个κ组和3个λ组。来自κ组的cdrl1共有序列由rasqx1x2sx3wx4a (seq id no:123)组成，其中x1选自g或v；x2选自i、f或s；x3选自s或g和x4选自f或l。来自λ组1的cdrl1共有序列由tlx1sgysdykvd (seq id no:124)组成，其中x1选自n或s。来自λ组3的cdrl1共有序列由tgsssnx1gagydvh (seq id no:125)组成，其中x1选自i或t。
[0088]
来自λ组1的cdrl2共有序列由vgtggx1vgskgx
2 (seq id no: 126)组成，其中x1选自i或t和x2选自d或e。来自λ组3的cdrl2共有序列由gsx1nrps (seq id no: 127)组成，其中x1选自n或g。
[0089]
cdrl3共有序列包括gadhgsgx1nfvyv (seq id no:128)，其中x1为s或n。
[0090]
来自κ组的cdrh1共有序列由sggyywx
1 (seq idno:129)组成，其中x1选自s或t。来自λ组1的cdrh1共有序列由x1x2smn (seq id no:131)组成，其中x1选自s或t和x2选自y或f。
来自λ组2的cdrh1共有序列由syx1mh (seq id no:130)组成，其中x1选自g或a。
[0091]
来自κ组的cdrh2共有序列由x1ix2ysgx3x4yynpslks (seq id no:132)组成，其中x1选自y或h；x2选自y或h；x3选自s或n；和x4选自t或s。来自λ组1的共有序列由yissx1sstx2yx3adsvkg (seq id no:134)组成，其中x1选自r或s，x2选自i或r，和x3选自i、h或y。来自λ组2的共有序列由visx1dgsx2kyyadsvkg (seq id no:133)组成，其中x1为f或h和x2为l或t。来自λ组3的cdrh2共有序列由viwydgsnx1yyadsvkg (seq id no:135)组成，其中x1选自k或e。
[0092]
来自κ组的cdrh3共有序列由x1rgx2yygmdv (seqid no:136)组成，其中x1选自n或d和x2选自h、y或f。来自λ组1的cdrh3共有序列由riaaagx1x2x3yyyax4dv (seq id no:137)组成，其中x1选自g或p；x2选自f或w；x3选自h或g和x4选自l和m。来自λ组3的cdrh3共有序列由drgyx1sswypdafdi (seq id no:138)组成，其中x1选自s或t。
[0093]
单克隆抗体提供的抗原结合蛋白包括与il
‑
23结合的单克隆抗体。单克隆抗体可使用本领域已知的任何技术产生，例如通过使完成免疫程序之后从转基因动物收获的脾细胞永生化。可使用本领域已知的任何技术使脾细胞永生化，例如通过使其与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤。用于产生杂交瘤的融合程序的骨髓瘤细胞优选地不产生抗体、具有高融合效率和酶缺乏，这使其在仅支持期望的融合细胞(杂交瘤)生长的某些选择性培养基中无法生长。用于小鼠融合的合适细胞系的实例包括sp
‑
20、p3
‑
x63/ag8、p3
‑
x63
‑
ag8.653、ns1/1.ag 4 1、sp210
‑
ag14、fo、nso/u、mpc
‑
11、mpc11
‑
x45
‑
gtg 1.7和s194/5xxo bul；用于大鼠融合的细胞系的实例包括r210.rcy3、y3
‑
ag 1.2.3、ir983f和413210。可用于细胞融合的其他细胞系为u
‑
266、gm1500
‑
grg2、licr
‑
lon
‑
hmy2和uc729
‑
6。
[0094]
在一些情况下，杂交瘤细胞系通过以下方式来产生：用il
‑
23免疫原使动物(例如具有人类免疫球蛋白序列的转基因动物)免疫；从经免疫的动物中收获脾细胞；使收获的脾细胞与骨髓瘤细胞系融合，从而产生杂交瘤细胞；从杂交瘤细胞建立杂交瘤细胞系，并鉴定产生结合il
‑
23多肽同时放过il
‑
12的抗体的杂交瘤细胞系。
[0095]
由杂交瘤细胞系分泌的单克隆抗体可使用本领域已知的任何技术进行纯化。可进一步筛选杂交瘤或单克隆抗体(mab)以鉴定具有特定特性(比如抑制il
‑
23诱导的活性的能力)的mab。
[0096]
嵌合和人源化抗体还提供基于前述序列的嵌合和人源化抗体。用作治疗剂的单克隆抗体可在使用之前以各种方式进行修饰。一个实例为嵌合抗体，其为由共价连接以产生功能性免疫球蛋白轻链或重链或其免疫功能性部分的来自不同抗体的蛋白区段组成的抗体。通常，重链和/或轻链的一部分与衍生于特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的其余部分与衍生于另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源。对于与嵌合抗体相关的方法，参见例如美国专利号4,816,567；和morrison等人, 1985, proc. natl. acad.sci. usa 81:6851
‑
6855。cdr接枝描述于例如美国专利号6,180,370、5,693,762、5,693,761、5,585,089和5,530,101中。
[0097]
一种有用类型的嵌合抗体为“人源化”抗体。通常，人源化抗体由最初在非人类动物中出现的单克隆抗体产生。该单克隆抗体中的某些氨基酸残基(一般地来自抗体的非抗
原识别部分)被修饰为与相应同种型的人类抗体中的相应残基同源。可例如使用各种方法通过将啮齿动物可变区的至少一部分取代为人类抗体的相应区域来进行人源化(参见例如美国专利号5,585,089和5,693,762；jones等人, 1986, nature321:522
‑
525; riechmann等人, 1988, nature 332:323
‑
27; verhoeyen等人, 1988, science 239:1534
‑
1536)。
[0098]
在某些实施方案中，来自除人类以外的物种的恒定区可与人类可变区一起使用以产生杂交抗体。
[0099]
完全人类抗体还提供完全人类抗体。可获得用于制备对给定抗原具有特异性的完全人类抗体而不会使人类暴露于该抗原(“完全人类抗体”)的方法。提供用于实施完全人类抗体的产生的一种特定手段为小鼠体液免疫系统的“人源化”。将人免疫球蛋白(ig)基因座引入到其中内源性ig基因已失活的小鼠中为在小鼠中产生完全人类单克隆抗体(mab)的一种手段，小鼠为可用任何期望的抗原进行免疫的动物。使用完全人类抗体可使免疫原性和过敏反应最小化，这些反应有时可通过将小鼠或小鼠衍生的mab作为治疗剂给予人类而引起。
[0100]
完全人类抗体可通过使能够在不存在内源性免疫球蛋白产生的情况下产生人类抗体库的转基因动物(通常为小鼠)免疫来产生。用于该目的的抗原一般地具有六个或更多个邻接氨基酸，并且任选地与载剂缀合，比如半抗原。参见例如jakobovits等人, 1993, proc. natl. acad. sci. usa 90:2551
‑
2555; jakobovits等人, 1993, nature 362:255
‑
258; 和bruggermann等人, 1993, year in immunol. 7:33。在这种方法的一个实例中，通过使其中编码小鼠免疫球蛋白重链和轻链的内源性小鼠免疫球蛋白基因座失去能力，并将含有编码人类重链和轻链蛋白的基因座的人类基因组dna的大片段插入到小鼠基因组中，来产生转基因动物。然后将部分修饰的动物(其具有少于人类免疫球蛋白基因座的完全互补物)进行杂交，以获得具有所有期望的免疫系统修饰的动物。当给予免疫原时，这些转基因动物产生对免疫原具有免疫特异性但具有人类而非鼠类氨基酸序列(包括可变区)的抗体。对于这种方法的进一步细节，例如参见wipo专利公开wo96/33735和wo94/02602。与用于制备人类抗体的转基因小鼠相关的另外方法描述于美国专利号5,545,807；6,713,610；6,673,986；6,162,963；5,545,807；6,300,129；6,255,458；5,877,397；5,874,299和5,545,806；wipo专利公开w091/10741、w090/04036和ep 546073b1和ep 546073a1中。
[0101]
上述转基因小鼠含有人类免疫球蛋白基因迷你基因座，其编码未重排的人类重链(μ和γ)和κ轻链免疫球蛋白序列以及使内源性μ和κ链基因座失活的靶向性突变(lonberg等人, 1994, nature 368:856
‑
859)。因此，小鼠响应免疫而表现出小鼠igm或[κ]的表达降低，并且引入的人类重链和轻链转基因会经历类别转换和体细胞突变以产生高亲和力人类igg [κ]单克隆抗体(lonberg等人, 同上; lonberg和huszar, 1995, intern. rev.immunol. 13: 65
‑
93; harding和lonberg, 1995, ann. n.y acad. sci. 764:536
‑
546)。这种小鼠的制备详细描述于taylor等人, 1992, nucleic acids research 20:6287
‑
6295; chen等人, 1993, international immunology 5:647
‑
656; tuaillon等人, 1994, j. immunol. 152:2912
‑
2920; lonberg等人, 1994, nature 368:856
‑
859; lonberg, 1994, handbook of exp. pharmacology 113:49
‑
101; taylor等人, 1994, international immunology 6:579
‑
591; lonberg和huszar, 1995, intern. rev.immunol. 13:65
‑
93; harding和lonberg, 1995, ann. n.y acad. sci. 764:536
‑
546; fishwild等人, 1996, nature biotechnology 14:845
‑
85中。进一步参见美国专利号5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,789,650、5,877,397、5,661,016、5,814,318、5,874,299和5,770,429；以及美国专利号5,545,807；wipo公布号wo 93/1227；wo 92/22646；和wo 92/03918。用于在这些转基因小鼠中产生人类抗体的技术也在wipo公开号wo 98/24893和mendez等人, 1997, nature genetics 15:146
‑
156中公开。例如，hco7和hco12转基因小鼠品系可用于产生抗il
‑
23抗体。
[0102]
使用杂交瘤技术，可从转基因小鼠(比如上述那些)中产生和选择具有期望的特异性的抗原特异性人类mab。可使用合适的载体和宿主细胞克隆和表达这种抗体，或者可从培养的杂交瘤细胞中收获抗体。
[0103]
完全人类抗体也可衍生于噬菌体展示文库(比如在hoogenboom等人, 1991, j. mol. biol. 227:381; marks等人, 1991, j. mol. biol. 222:581；wipo公开号wo 99/10494中公开的)。噬菌体展示技术通过在丝状噬菌体的表面展示抗体库，并随后通过其与选择的抗原结合来选择噬菌体而模拟免疫选择。
[0104]
双特异性或双功能性抗原结合蛋白“双特异性”、“双重特异性”或“双功能性”抗原结合蛋白或抗体分别为杂交抗原结合蛋白或抗体，具有两个不同的抗原结合位点，比如如上所述的一个或多个cdr或者一个或多个可变区。在一些情况下，其为具有两个不同重链/轻链对和两个不同结合位点的人工杂交抗体。多特异性抗原结合蛋白或“多特异性抗体”是一种靶向不止一种抗原或表位的蛋白。双特异性抗原结合蛋白和抗体为一种多特异性抗原结合蛋白抗体，并且可通过多种方法产生，包括(但不限于)杂交瘤的融合或fab’片段的连接。参见例如songsivilai和lachmann, 1990, clin. exp. immunol. 79:315
‑
321; kostelny等人, 1992, j. lmmunol. 148:1547
‑
1553。
[0105]
免疫片段抗原结合蛋白还包括抗体的免疫片段(例如fab、fab’、f(ab’)2或scfv)。“fab片段”包含一条轻链(轻链可变区(vl)及其相应的恒定结构域(cl))和一条重链(重链可变区(vh)和第一恒定结构域(ch1))。fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。“fab’片段”含有一条轻链和一条重链的一部分，该重链部分还含有ch1和ch2结构域之间的区域，使得可在两个fab’片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成f(ab’)2分子。因此，“f(ab’)2片段”由通过两条重链之间的二硫键保持在一起的两个fab’片段组成。“fv片段”由抗体单臂的可变轻链区和可变重链区组成。单链抗体“scfv”为fv分子，其中重链和轻链可变区通过柔性接头连接形成单一多肽链，其形成抗原结合区。单链抗体在wipo公开号wo 88/01649、美国专利号4,946,778和5,260,203; bird, 1988, science 242:423; huston等人, 1988, proc. natl. acad. sci. u.s.a. 85:5879; ward等人, 1989, nature 334:544; de graaf等人, 2002, methods mol biol. 178:379
‑
387; kortt等人, 1997, prot. eng. 10:423; kortt等人, 2001, biomol. eng. 18:95
‑
108和kriangkum等人, 2001, biomol. eng. 18:31
‑
40中详细讨论。“fc”区含有两个包含抗体的ch1和ch2结构域的重链片段。两个重链片段通过两个或更多个二硫键和通过ch3结构域的疏水相互作用保持在一起。
[0106]
还包括结构域抗体，即仅含有重链可变区或轻链可变区的免疫功能性免疫球蛋白
片段。在一些情况下，两个或更多个vh区与肽接头共价连接以产生二价结构域抗体。二价结构域抗体的两个vh区可靶向相同或不同的抗原。双链抗体为包含两条多肽链的二价抗体，其中每条多肽链包含通过接头连接的vh和vl结构域，接头太短以致不允许在同一链上的两个结构域之间配对，从而允许每个结构域与另一条多肽链上的互补结构域配对(参见例如holliger等人, proc. natl. acad. sci. usa 90:6444
‑
48, 1993和poljak等人, structure 2:1121
‑
23, 1994)。类似地，三链抗体和四链抗体为分别包含3条和4条多肽链并分别形成3个和4个可以相同或不同的抗原结合位点的抗体。大抗体(maxibody)包含共价附接于iggi的fc区的二价scfv (参见例如fredericks等人, 2004, protein engineering, design & selection, 17:95
‑
106; powers等人, 2001, journal of immunological methods, 251:123
‑
135; shu等人, 1993, proc. natl. acad. sci. usa 90:7995
‑
7999; hayden等人, 1994, therapeutic immunology 1:3
‑
15)。
[0107]
各种其他形式还提供以上公开的抗原结合蛋白的变体形式，抗原结合蛋白中的一些例如在表1和表2中所列的一个或多个重链或轻链、可变区或cdr中具有一个或多个保守氨基酸取代。天然存在的氨基酸可基于常见的侧链特性分类：疏水性(正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile)；中性亲水性(cys、ser、thr、asn、gln)；酸性(asp、glu)；碱性(his、lys、arg)；影响链方向的残基(gly、pro)；和芳族(trp、tyr、phe)。
[0108]
保守氨基酸取代可涉及这些类别之一的成员与同一类别另一成员的交换。保守氨基酸取代可包括非天然存在的氨基酸残基，其一般地通过化学肽合成而非通过生物系统中的合成来掺入。这些包括肽模拟物和氨基酸部分的其他反转或倒置形式。本文所述的抗原结合蛋白的功能特性和/或生化特性的这种实质性修饰可通过在重链和轻链的氨基酸序列中产生取代来实现，这些取代在其维持以下的效果方面显著不同：(a) 取代区域中分子主链的结构，例如作为折叠或螺旋构象，(b) 分子在靶位点处的电荷或疏水性，或(c) 侧链的庞大。
[0109]
非保守取代可涉及将以上类别之一的成员交换为来自另一类别的成员。这种取代的残基可被引入到与人类抗体同源的抗体区域中，或者引入到分子的非同源区域中。
[0110]
在进行这种改变时，根据某些实施方案，可考虑氨基酸的亲疏水性指数(hydropathic index)。蛋白的亲疏水性特性通过为每种氨基酸指派一个数值(“亲疏水性指数”)并然后沿着肽链重复地平均这些值来计算。每种氨基酸均基于其疏水性和电荷特性指派一个亲疏水性指数。它们为：异亮氨酸( 4.5)；缬氨酸( 4.2)；亮氨酸( 3.8)；苯丙氨酸( 2.8)；半胱氨酸/胱氨酸( 2.5)；甲硫氨酸( 1.9)；丙氨酸( 1.8)；甘氨酸(
‑
0.4)；苏氨酸(
‑
0.7)；丝氨酸(
‑
0.8)；色氨酸(
‑
0.9)； 酪氨酸(
‑
1.3)；脯氨酸(
‑
1.6)；组氨酸(
‑
3.2)；谷氨酸(
‑
3.5)；谷氨酰胺(
‑
3.5)；天冬氨酸(
‑
3.5)；天冬酰胺(
‑
3.5)；赖氨酸(
‑
3.9)；和精氨酸(
‑
4.5)。
[0111]
本领域理解亲疏水性特性在赋予蛋白相互作用的生物功能方面的重要性(参见例如kyte等人, 1982, j. mol. biol. 157:105
‑
131)。已知某些氨基酸可取代为具有相似亲疏水性指数或分数的其他氨基酸并且仍保留相似的生物活性。在基于亲疏水性指数进行改变时，在某些实施方案中，包括其亲疏水性指数在
±
2之内的氨基酸的取代。在一些方面，包括在
±
1之内的那些，而在其他方面，包括在
±
0.5之内的那些。
[0112]
本领域还理解，可基于亲水性有效地进行类似氨基酸的取代，特别是当由此产生的生物功能性蛋白或肽旨在用于免疫实施方案时，如在本发明情況下。在某些实施方案中，蛋白的最大局部平均亲水性(如由其相邻氨基酸的亲水性所控制)与其免疫原性和抗原结合或免疫原性相关，即与蛋白的生物特性相关。
[0113]
以下亲水性值已指派给这些氨基酸残基：精氨酸( 3.0)；赖氨酸( 3.0)；天冬氨酸( 3.0
±
1)；谷氨酸( 3.0
±
1)；丝氨酸( 0.3)；天冬酰胺( 0.2)；谷氨酰胺( 0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(
‑
0.4)；脯氨酸(
‑
0.5
±
1)；丙氨酸(
‑
0.5)；组氨酸(
‑
0.5)；半胱氨酸(
‑
1.0)；甲硫氨酸(
‑
1.3)；缬氨酸(
‑
1.5)；亮氨酸(
‑
1.8)；异亮氨酸(
‑
1.8)；酪氨酸(
‑
2.3)；苯丙氨酸(
‑
2.5)和色氨酸 (
‑
3.4)。在基于相似的亲水性值进行改变时，在某些实施方案中，包括其亲水性值在
±
2之内的氨基酸的取代，在其他实施方案中，包括在
±
1之内的那些氨基酸，和在仍然其他的实施方案中，包括在
±
0.5之内的那些氨基酸。在一些情况下，还可基于亲水性从一级氨基酸序列中鉴定表位。这些区域也称为“表位核心区”。
[0114]
示例性的保守氨基酸取代如表4所述。
[0115]
表4保守氨基酸取代技术人员将能够使用众所周知的技术确定如本文所述的多肽的合适变体。本领域的技术人员可通过靶向认为对活性不重要的区域来鉴定可进行改变而不会破坏活性的分子的合适区域。技术人员还将能够鉴定出在类似多肽中保守的分子残基和部分。在进一步的实施方案中，甚至对于生物活性或结构可能重要的区域可进行保守氨基酸取代而不会破坏生物活性或不会不利地影响多肽结构。
[0116]
另外，本领域的技术人员可回顾结构
‑
功能研究，以鉴定类似多肽中对活性或结构重要的残基。鉴于这种比较，可预测蛋白中氨基酸残基的重要性，这些氨基酸残基对应于类似蛋白中对活性或结构重要的氨基酸残基。本领域的技术人员可选择对这种预测的重要氨基酸残基进行化学上相似的氨基酸取代。
[0117]
本领域的技术人员还可分析类似多肽中与该结构相关的3维结构和氨基酸序列。鉴于这种信息，本领域的技术人员可关于其三维结构来预测抗体的氨基酸残基的比对。本领域的技术人员可选择不对预测会在蛋白表面上的氨基酸残基进行极端改变，因为这种残基可能参与与其他分子的重要相互作用。此外，本领域的技术人员可产生在每个期望的氨
基酸残基处含有单个氨基酸取代的测试变体。然后可使用 il
‑
23活性测定筛选这些变体(参见以下实例)，从而产生关于哪些氨基酸可以改变和哪些不得改变的信息。换言之，基于从这种常规实验收集的信息，本领域的技术人员可易于确定其中应避免单独或与其他突变组合的进一步取代的氨基酸位置。
[0118]
许多科学出版物均致力于二级结构的预测。参见moult, 1996, curr. op. in biotech. 7:422
‑
427; chou等人, 1974, biochem. 13:222
‑
245; chou等人, 1974, biochemistry 113:211
‑
222; chou等人, 1978, adv. enzymol. relat. areas mol.biol. 47:45
‑
148; chou等人, 1979, ann. rev. biochem. 47:251
‑
276; 和chou等人, 1979, biophys.j. 26:367
‑
384。此外，目前可获得计算机程序来辅助预测二级结构。 预测二级结构的一种方法为基于同源建模。例如，序列同一性大于30%或相似性大于40%的两种多肽或蛋白通常具有类似的结构拓扑。蛋白结构数据库(pdb)的最近扩展增强了二级结构的可预测性，包括多肽或蛋白结构内的可能折叠数目。参见holm等人,1999, nucl. acid. res. 27:244
‑
247。已建议(brenner等人, 1997, curr. op. struct.biol. 7:369
‑
376)在给定的多肽或蛋白中存在有限数目的折叠，并且一旦解析出临界数目的结构，结构预测将变得明显更加准确。
[0119]
预测二级结构的另外方法包括“多线程(threading)”(jones, 1997, curr.opin. struct. biol. 7:377
‑
387; sippl等人, 1996, structure 4:15
‑
19)、“剖面分析(profile analysis)”(bowie等人,1991, science 253:164
‑
170; gribskov等人, 1990, meth. enzymol. 183:146
‑
159; gribskov等人, 1987,proc. nat. acad. sci. 84:4355
‑
4358)和“进化联动(evolutionary linkage)”(参见holm, 1999, 同上; 和brenner, 1997, 同上)。
[0120]
在一些实施方案中，进行氨基酸取代，其：(1) 降低对蛋白水解的敏感性，(2) 降低对氧化的敏感性，(3) 改变对形成蛋白复合物的结合亲和力，(4) 改变配体或抗原结合亲和力，和/或(4) 赋予或修改这种多肽的其他物理化学或功能特性，比如在取代区域保持分子主链的结构，例如作为折叠或螺旋构象；保持或改变目标位点处分子的电荷或疏水性或者保持或改变侧链的庞大。
[0121]
例如，可在天然存在的序列中进行单个或多个氨基酸取代(在某些实施方案中，为保守氨基酸取代)。取代可在位于形成分子间接触的结构域之外的抗体部分中进行。在这种实施方案中，可使用不显著改变母体序列的结构特征的保守氨基酸取代(例如一个或多个不破坏表征母体或天然抗原结合蛋白的二级结构的置换氨基酸)。领域公认的多肽二级和三级结构的实例描述于proteins, structures and molecular principles (creighton,ed.), 1984, w. h. new york: freeman and company; introduction to protein structure (branden和tooze, eds.), 1991, new york: garland publishing;和thornton等人, 1991, nature 354:105。
[0122]
另外的变体包括半胱氨酸变体，其中母体或天然氨基酸序列中的一个或多个半胱氨酸残基为从另一氨基酸(例如丝氨酸)中缺失或用其取代。半胱氨酸变体为有用的，尤其是当抗体(例如)必须重新折叠成生物活性构象时。半胱氨酸变体可具有比天然蛋白更少的半胱氨酸残基，并且一般地具有偶数以使由未配对的半胱氨酸所致的相互作用最小化。
[0123]
所公开的重链和轻链可变区和cdr可用于制备含有可特异性地与il
‑
23多肽结合
的抗原结合区的抗原结合蛋白。“抗原结合区”意指特异性地结合特定抗原的蛋白或蛋白的一部分，比如含有与抗原相互作用并赋予抗原结合蛋白其对靶抗原的特异性及亲和力的氨基酸残基的区域。抗原结合区可包括一个或多个cdr，并且某些抗原结合区还包括一个或多个“框架”区。例如，可将表3中所列的一个或多个cdr共价或非共价地掺入到分子(例如多肽)中以进行免疫粘附。免疫粘附可掺入cdr作为较大多肽链的一部分，可将cdr共价连接至另一条多肽链，或者可非共价地掺入cdr。cdr使得免疫粘附能够特异性地与感兴趣的特定抗原(例如il
‑
23多肽)结合。
[0124]
其他抗原结合蛋白包括基于本文所述的可变区和cdr的模拟物(例如“肽模拟物(peptide mimetics)”或“肽模拟物(peptidomimetics)”)。这些类似物可为肽、非肽或者肽和非肽区的组合。fauchere, 1986, adv. drug res. 15:29; veber和freidinger, 1985, tins p. 392; 和evans等人, 1987, j. med. chem. 30:1229。结构上与治疗上有用的肽相似的肽模拟物可用于产生类似的治疗或预防效果。这种化合物通常借助于计算机分子建模来开发。通常，肽模拟物为结构上类似于展示所期望的生物活性(比如结合il
‑
23的能力)的抗原结合蛋白的蛋白，但肽模拟物通过本领域众所周知的方法而具有一个或多个任选地被选自例如以下的键置换的肽键：
‑
ch2nh
‑
、
‑
ch2s
‑
、
‑
ch2
‑
ch2
‑
、
‑
ch
‑
ch
‑
(顺式和反式)、
‑
coch2
‑
、
‑
ch(oh)ch2
‑
和
‑
ch2so
‑
。在某些实施方案中，可使用以相同类型的d
‑
氨基酸(例如d
‑
赖氨酸替代l
‑
赖氨酸)对共有序列的一个或多个氨基酸进行系统性取代，以产生更稳定的蛋白。另外，可通过本领域已知的方法(rizo和gierasch, 1992, ann. rev. biochem. 61:387)，例如通过添加能够形成环化肽的分子内二硫键的内部半胱氨酸残基来产生包含共有序列或基本上相同的共有序列变异的限制性肽。
[0125]
还提供本文所述的抗原结合蛋白的衍生物。衍生的抗原结合蛋白可包含赋予抗原结合蛋白或片段期望的特性的任何分子或物质，比如增加特定用途中的半衰期。衍生的抗原结合蛋白可包含例如可检测(或标记)部分(例如放射性、比色、抗原或酶分子、可检测珠粒(比如磁性或电子致密(例如金)珠粒)或与另一分子(例如生物素或链霉亲和素)结合的分子)、治疗性或诊断性部分(例如放射性、细胞毒性或药用活性部分)，或增加抗原结合蛋白对特定用途(例如给予受试者(比如人类受试者)或者其他体内或体外用途)的适用性的分子。可用于衍生抗原结合蛋白的分子的实例包括白蛋白(例如人类血清白蛋白)和聚乙二醇(peg)。可使用本领域众所周知的技术制备抗原结合蛋白的白蛋白连接的和peg化的衍生物。在一个实施方案中，抗原结合蛋白与转甲状腺素蛋白(ttr)或ttr变体缀合或者以其他方式连接。ttr或ttr变体可用例如选自葡聚糖、聚(n
‑
乙烯基吡咯烷酮)、聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇和聚乙烯醇的化学品进行化学修饰。
[0126]
其他衍生物包括il
‑
23抗原结合蛋白与其他蛋白或多肽的共价或聚集缀合物，比如通过包含与il
‑
23抗原结合蛋白的n
‑
末端或c
‑
末端融合的异源多肽的重组融合蛋白的表达。例如，缀合的肽可为异源信号(或前导)多肽，例如酵母α
‑
因子前导或肽(比如表位标签)。含有il
‑
23抗原结合蛋白的融合蛋白可包含添加以促进il
‑
23抗原结合蛋白的纯化或鉴定的肽(例如聚his)。il
‑
23抗原结合蛋白也可与flag肽连接，如hopp等人, 1988, bio/technology 6:1204；和美国专利号5,011,912所述。flag肽具有高度抗原性并提供由特定单克隆抗体 (mab)可逆结合的表位，从而使得可快速测定和易于纯化表达的重组蛋白。可
用于制备其中flag肽与给定的多肽融合的融合蛋白的试剂可商购获得(sigma, st. louis, mo)。
[0127]
含有一种或多种il
‑
23抗原结合蛋白的寡聚体可用作il
‑
23 拮抗剂。寡聚体可呈共价连接的或非共价连接的二聚体、三聚体或更高级寡聚体的形式。考虑使用包含两种或更多种il
‑
23抗原结合蛋白的寡聚体寡聚体，其中一个实例为同二聚体。其他寡聚体包括异二聚体、同三聚体、异三聚体、同四聚体、异四聚体等。还包括包含经与il
‑
23抗原结合蛋白融合的肽部分之间的共价或非共价相互作用连接的多个il
‑
23结合蛋白的寡聚体。这种肽可为肽接头(间隔子)或者具有促进寡聚化特性的肽。在合适的肽接头中有美国专利号4,751,180和4,935,233中描述的那些。亮氨酸拉链和某些衍生于抗体的多肽属于可促进与其附接的il
‑
23抗原结合蛋白寡聚化的肽。适用于产生可溶性寡聚蛋白的亮氨酸拉链结构域的实例描述于wipo公开号wo94/10308；hoppe等人, 1994, febs letters 344:191; 和fanslow等人, 1994, semin.immunol. 6:267
‑
278中。在一种方法中，使包含与亮氨酸拉链肽融合的il
‑
23抗原结合蛋白片段或衍生物的重组融合蛋白在合适的宿主细胞中表达，并从培养上清液回收形成的可溶性寡聚il
‑
23抗原结合蛋白片段或衍生物。
[0128]
这种寡聚体可包含2
‑
4种il
‑
23抗原结合蛋白。寡聚体的il
‑
23抗原结合蛋白部分可呈任何上述形式，例如变体或片段。优选地，寡聚体包含具有il
‑
23结合活性的il
‑
23抗原结合蛋白。寡聚体可使用衍生于免疫球蛋白的多肽制备。包含某些与抗体衍生的多肽的各个部分(包括fc结构域)融合的异源多肽的融合蛋白的制备例如描述于ashkenazi等人, 1991, proc. natl. acad. sci. usa 88:10535; byrn等人, 1990, nature 344:677; 和hollenbaugh等人, 1992 "construction of immunoglobulin fusion proteins",载于current protocols in immunology,suppl. 4, 第10.19.1
‑
10.19.11页中。
[0129]
还包括包含两种通过将il
‑
23抗原结合蛋白与抗体的fc区融合而产生的融合蛋白的二聚体。二聚体可通过例如将编码融合蛋白的基因融合物插入到适当的表达载体中，在用重组表达载体转化的宿主细胞中表达基因融合物，并使得表达的融合蛋白能够组装成很类似于抗体分子，于是在fc部分之间形成链间二硫键以产生二聚体来制备。这种fc多肽包括衍生于抗体fc区的多肽的天然和突变蛋白形式。还包括含有促进二聚化的铰链区的这种多肽的截短形式。包含fc部分(和由其形成的寡聚体)的融合蛋白提供通过亲和色谱法经蛋白a或蛋白g柱易于纯化的优点。wipo公开号wo 93/10151和美国专利号5,426,048和5,262,522中描述的一种合适的fc多肽为从n
‑
末端铰链区延伸至人类igg1抗体fc区的天然c
‑
末端的单链多肽。另一种有用的fc多肽为美国专利号5,457,035和baum等人, 1994, embo j. 13:3992
‑
4001中描述的fc突变蛋白。该突变蛋白的氨基酸序列与wipo公开号wo93/10151中呈现的天然fc序列相同，除了氨基酸 19已从leu变为ala，氨基酸20已从leu变为glu，和氨基酸22已从gly变为ala以外。突变蛋白表现出对fc受体的亲和力降低。
[0130]
糖基化抗原结合蛋白可具有与天然物种中发现的不同或改变的糖基化模式。如本领域已知的，糖基化模式可取决于蛋白的序列(例如特定糖基化氨基酸残基的存在或不存在，如下所述)或者其中产生蛋白的宿主细胞或生物体。特定的表达系统如下所述。
[0131]
多肽的糖基化一般地为n
‑
连接的或o
‑
连接的。n
‑
连接的是指碳水化合物部分附接于天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺
‑
x
‑
丝氨酸和天冬酰胺
‑
x
‑
苏氨酸(其中x为除脯
氨酸之外的任何氨基酸)为碳水化合物部分酶促附接于天冬酰胺侧链连接的识别序列。因此，多肽中这些三肽序列中的任一个的存在产生潜在的糖基化位点。o
‑
连接的糖基化是指将糖n
‑
乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一附接于羟基氨基酸，最常见的为丝氨酸或苏氨酸，尽管也可使用5
‑
羟基脯氨酸或5
‑
羟基赖氨酸。
[0132]
将糖基化位点添加至抗原结合蛋白可便利地通过改变氨基酸序列，使得其含有一个或多个上述三肽序列(对于n
‑
连接的糖基化位点)来完成。改变也可通过向起始序列添加一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基或者用一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基对起始序列进行取代来进行(对于o
‑
连接的糖基化位点)。为简便起见，抗原结合蛋白的氨基酸序列可通过dna水平的变化来改变，特别是通过在预选碱基处使编码靶多肽的dna突变，使得产生将翻译成期望的氨基酸的密码子。
[0133]
增加抗原结合蛋白上碳水化合物部分的数量的另一种手段为通过糖苷与蛋白的化学或酶促偶联。这些程序的有利之处在于其不需要在具有用于n
‑
和o
‑
连接的糖基化的糖基化能力的宿主细胞中产生蛋白。根据所使用的偶联模式，糖可附接于(a) 精氨酸和组氨酸，(b) 游离羧基，(c) 游离巯基，比如半胱氨酸的巯基，(d) 游离羟基，比如丝氨酸、苏氨酸或羟基脯氨酸的那些羟基，(e) 芳族残基，比如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的那些残基，或(f) 谷氨酰胺的酰胺基团。这些方法描述于pct公开号wo 87/05330和aplin和wriston, 1981, crc crit. rev, biochem., pp. 259
‑
306中。
[0134]
存在于起始抗原结合蛋白上的碳水化合物部分的去除可以化学或酶促完成。化学去糖基化需要使蛋白暴露于化合物三氟甲磺酸或等效化合物。这种处理导致除连接糖(n
‑
乙酰葡糖胺或n
‑
乙酰半乳糖胺)之外的大部分或所有糖裂解，同时使多肽完整。化学去糖基化描述于hakimuddin等人, 1987, arch. biochem. biophys. 259:52和edge等人, 1981, anal. biochem.118:131中。可通过使用多种内切和外切糖苷酶来实现多肽上碳水化合物部分的酶促裂解，如thotakura等人, 1987, meth. enzymol.138:350所述。可通过使用化合物衣霉素防止潜在糖基化位点的糖基化，如duskin等人, 1982, j. biol. chem. 257:3105所述。衣霉素阻断蛋白
‑
n
‑
糖苷键的形成。
[0135]
因此，方面包括抗原结合蛋白的糖基化变体，其中糖基化位点的数量和/或类型与母体多肽的氨基酸序列相比较已经改变。在某些实施方案中，抗原结合蛋白变体包含比母体多肽更多或更少数量的n
‑
连接的糖基化位点。消除或改变该序列的取代将阻止添加存在于母体多肽中的n
‑
连接的碳水化合物链。例如，可通过缺失asn或通过用不同的氨基酸取代asn来减少糖基化。抗体一般地在fc区具有n
‑
连接的糖基化位点。
[0136]
标记及效应子基团抗原结合蛋白可包含一种或多种标记。术语“标记”或“标记基团”是指任何可检测的标记。通常，标记分为多种类别，具体取决于要检测它们的测定：a) 同位素标记，可为放射性或重同位素；b) 磁性标记(例如磁性粒子)；c) 氧化还原活性部分；d) 光学染料；酶促基团(例如辣根过氧化物酶、3
‑
半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酯酶)；e) 生物素化基团；和f) 由二级报告子(例如亮氨酸拉链对序列、二级抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签等)识别的预定多肽表位。在一些实施方案中，标记基团经各种长度的间隔臂与抗原结合蛋白偶联以减少潜在的立体位阻。用于标记蛋白的各种方法为本领域已知的。合适的标记基团的实例包括(但不限于)以下：放射性同位素或放射性核素(例如3h、
14
c、
15
n、
35
s、
90
y、
n.y.和current protocols in molecular biology, 1995, ausubel等人, eds., john wiley & sons, inc。如本文定义的中度严格杂交条件使用含有5x氯化钠/枸橼酸钠(ssc)、0.5% sds、1.0 mm edta (ph 8.0)的预洗涤溶液、约50%甲酰胺的杂交缓冲液、6x ssc和55℃的杂交温度(或其他类似的杂交溶液，比如含有约50%甲酰胺的溶液，杂交温度为42℃)以及洗涤条件为60℃，在0.5x ssc、0.1% sds中。严格杂交条件在6x ssc中于45℃下杂交，然后在0.1x ssc、0.2% sds中于68℃下洗涤一次或多次。此外，本领域的技术人员可操控杂交和/或洗涤条件以提高或降低杂交的严格性，使得包含彼此具有至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99% (包括其间的所有值)同一性的核酸序列的多核苷酸一般地保持彼此杂交。
[0142]
变化可通过突变引入到多核苷酸中，从而导致其编码的多肽(例如抗原结合蛋白或抗原结合蛋白衍生物)的氨基酸序列的变化。突变可使用本领域已知的任何技术引入，比如定点诱变和随机诱变。可针对期望的特性表达和选择突变多肽。可将突变引入到多核苷酸中而不会显著改变其编码的多肽的生物活性。例如在非必需氨基酸残基处的取代。或者，可将一个或多个突变引入到选择性地改变其编码的多肽的生物活性的多核苷酸中。例如，突变可定量或定性地改变生物活性，比如增加、降低或消除活性以及改变抗原结合蛋白的抗原特异性。
[0143]
另一方面提供适合用作用于检测核酸序列的引物或杂交探针的多核苷酸。多核苷酸可仅包含编码全长多肽的核酸序列的一部分，例如可用作探针或引物的片段或编码多肽的活性部分(例如il
‑
23结合部分)的片段。基于核酸序列的探针可用于检测核酸或类似的核酸，例如编码多肽的转录物。探针可包含标记基团，例如放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子。这种探针可用于鉴定表达多肽的细胞。
[0144]
表达抗原结合蛋白的方法本文提供的抗原结合蛋白可通过多种常规技术中的任何一种制备。例如，il
‑
23抗原结合蛋白可使用本领域已知的任何技术通过重组表达系统产生。参见例如monoclonal antibodies, hybridomas: a new dimension in biological analyses, kennet等人(eds.) plenum press,new york (1980); 和antibodies: a laboratory manual, harlow和lane (eds.), cold spring harborlaboratory press, cold spring harbor, n.y. (1988)。
[0145]
本文中还提供呈包含至少一种上述多核苷酸的质粒、表达载体、转录或表达盒形式的表达系统和构建体，以及包含这种表达系统或构建体的宿主细胞。如本文使用的“载体”意指适合用于将蛋白编码信息转移到宿主细胞中的任何分子或实体(例如核酸、质粒、噬菌体或病毒)。载体的实例包括(但不限于)质粒、病毒载体、非附加型哺乳动物载体和表达载体(例如重组表达载体)。表达载体(比如重组表达载体)可用于转化宿主细胞并含有指导和/或控制(与宿主细胞结合)与其可操作地连接的一个或多个异源编码区表达的核酸序列。表达构建体可包括(但不限于)影响或控制与其可操作地连接的编码区的转录、翻译以及如果存在内含子的话影响与其可操作地连接的编码区的rna剪接的序列。“可操作地连接的”意指术语所应用的组分处于使得其能够实施其固有功能的关系中。例如，在与蛋白编码序列“可操作地连接的”载体中的控制序列(例如启动子)经排列使得控制序列的正常活性导致蛋白编码序列的转录，从而导致所编码蛋白的重组表达。
末端的寡核苷酸分子；该寡核苷酸序列编码聚组氨酸(比如六聚组氨酸；seq id no: 152)，或另一种“标签”，比如flag
®
、ha (血凝素流感病毒)或myc，针对其存在可商购获得的抗体。该标签一般地在多肽表达后与多肽融合，并可用作亲和纯化或检测来自宿主细胞的il
‑
23抗原结合蛋白的手段。亲和纯化可例如通过使用针对标签的抗体作为亲和基质的柱层析来完成。任选地，标签随后可通过各种手段(比如使用某些肽酶进行切割)而从纯化的il
‑
23抗原结合蛋白去除。
[0151]
侧翼序列可为同源(即来自与宿主细胞相同的物种和/或品系)、异源(即来自不同于宿主细胞物种或品系的物种)、杂交(即来自多于一种来源的侧翼序列的组合)、合成或天然的。因此，侧翼序列的来源可为任何原核或真核生物体、任何脊椎动物或无脊椎动物生物体或者任何植物，条件是侧翼序列在宿主细胞机构中具有功能性并且可被宿主细胞机构活化。
[0152]
可用于载体中的侧翼序列可通过本领域众所周知的几种方法中的任何一种获得。一般地，本文中有用的侧翼序列先前已通过映射和/或通过限制性内切核酸酶消化来鉴定，并因此可使用适当的限制性内切核酸酶从适当的组织来源中分离。在一些情况下，侧翼序列的完整核苷酸序列可为已知的。在此，侧翼序列可使用本文所述的用于核酸合成或克隆的方法来合成。
[0153]
无论已知侧翼序列的全部还是仅有一部分，其均可使用聚合酶链反应(pcr)和/或通过用合适的探针筛选基因组文库(比如来自相同或另一物种的寡核苷酸和/或侧翼序列片段)获得。在侧翼序列未知的情况下，含有侧翼序列的dna片段可从可能含有例如编码序列或者甚至另一个或多个基因的较大一段dna中分离。分离可通过限制性内切核酸酶消化以产生适当的dna片段，然后使用琼脂糖凝胶纯化、qiagen
®
柱层析(qiagen, chatsworth, ca)或技术人员已知的其他方法进行分离来完成。选择合适的酶来实现这一目的对于本领域的普通技术人员为易于显而易见的。
[0154]
复制起点一般地为商业购买的那些原核表达载体的一部分，并且该起点助于载体在宿主细胞中的扩增。如果选择的载体不含复制起点位点，则可基于已知序列进行化学合成，并连接到载体中。例如，来自质粒pbr322 (new england biolabs, beverly, ma)的复制起点适合于大多数革兰氏阴性细菌和各种病毒来源(例如sv40、多瘤、腺病毒、水泡性口炎病毒(vsv)或乳头瘤病毒(比如hpv或bpv)可用于在哺乳动物细胞中克隆载体。通常，哺乳动物表达载体不需要复制起点组件(例如通常使用sv40来源只是因为其也含有病毒早期启动子)。
[0155]
转录终止序列一般地位于多肽编码区末端的3’，并且用于终止转录。通常，原核细胞中的转录终止序列为富含g
‑
c的片段，然后为多聚t序列。尽管序列易于从文库中克隆或者甚至作为载体的一部分商业购买，但其也可易于使用用于核酸合成的方法(比如本文所述的方法)合成。
[0156]
可选的标记基因编码在选择性培养基中生长的宿主细胞的存活和生长所必需的蛋白。典型的选择标记基因编码以下蛋白，其(a) 赋予对抗生素或其他毒素(例如对于原核宿主细胞为氨苄青霉素、四环素或卡那霉素)的抗性；(b) 补充细胞的营养缺陷型缺乏；或(c) 提供从复杂或限定培养基无法获得的关键营养素。具体的可选标记物为卡那霉素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因。有利的是，新霉素抗性基因也可用于在原核
和真核宿主细胞两者中进行选择。
[0157]
其他可选基因可用于扩增将要表达的基因。扩增为其中对于产生对生长或细胞存活至关重要的蛋白所需的基因在连续世代重组细胞的染色体内串联重复的过程。用于哺乳动物细胞的合适的可选标记物的实例包括二氢叶酸还原酶(dhfr)和无启动子的胸苷激酶基因。将哺乳动物细胞转化体置于选择压力下，其中仅转化体凭借载体中存在的可选基因而独特地适合于存活。通过在其中选择剂在培养基中的浓度连续增加的条件下培养转化的细胞来施加选择压力，从而导致可选基因和编码另一基因(比如与il
‑
23结合的抗原结合蛋白)的dna两者的扩增。结果，从扩增的dna合成增加量的多肽，比如抗原结合蛋白。
[0158]
核糖体结合位点通常为mrna翻译起始所必需的，并且其特征为shine
‑
dalgarno序列(原核生物)或kozak序列(真核生物)。该元件一般地位于启动子的3’和待表达的多肽的编码序列的5’。
[0159]
在一些情况下，比如当期望在真核宿主细胞表达系统中糖基化时，可操控各种前序列或原序列以增加糖基化或产量。例如，可改变特定信号肽的肽酶切割位点，或添加原序列，这也可影响糖基化。最终蛋白产物可在
‑
1位(相对于成熟蛋白的第一个氨基酸)具有一个或多个伴随表达而来的另外氨基酸，其可能不会被完全去除。例如，最终蛋白产物可具有一个或两个附接于氨基末端的在肽酶切割位点中发现的氨基酸残基。或者，如果酶在成熟多肽内的这种区域进行切割，则使用一些酶切割位点可能导致所期望多肽的略微截短形式。
[0160]
表达和克隆一般地将含有被宿主生物体识别并与编码il
‑
23抗原结合蛋白的分子可操作地连接的启动子。启动子为位于结构基因的起始密码子上游(即5’)(通常在约100
‑
1000 bp之内)的未转录序列，其控制结构基因的转录。启动子常规分成两种类别之一：诱导型启动子和组成型启动子。诱导型启动子响应培养条件的一些变化(比如营养素的存在或不存在或者温度的变化)而在其控制下启动来自dna的转录水平升高。另一方面，组成型启动子一致地转录与其可操作地连接的基因，即对基因表达几乎没有或没有控制。被多种潜在宿主细胞识别的大量启动子为众所周知的。通过经限制性内切酶消化从来源dna中去除启动子并将期望的启动子序列插入到载体中，将合适的启动子可操作地连接于编码il
‑
23抗原结合蛋白的重链可变区或轻链可变区的dna。
[0161]
用于与酵母宿主一起使用的合适启动子也为本领域众所周知的。酵母增强子有利地与酵母启动子一起使用。用于与哺乳动物宿主细胞一起使用的合适启动子为众所周知的，并且包括(但不限于)获自病毒(比如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(比如腺病毒2)、牛乳头瘤病毒、禽肉瘤病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、乙型肝炎病毒和猿猴病毒40 (sv40))基因组的那些。其他合适的哺乳动物启动子包括异源哺乳动物启动子，例如热休克启动子和肌动蛋白启动子。
[0162]
其他感兴趣的启动子包括(但不限于)：sv40早期启动子(benoist和chambon, 1981, nature 290:304
‑
310)；cmv启动子(thornsen等人, 1984, proc. natl. acad. u.s.a. 81:659
‑
663)；劳斯肉瘤病毒的3’长末端重复序列中含有的启动子(yamamoto等人, 1980, cell 22:787
‑
797)；疱疹胸苷激酶启动子(wagner等人, 1981, proc. natl. acad. sci. u.s.a. 78:1444
‑
1445)；来自金属硫蛋白基因的启动子和调控序列(prinster等人, 1982, nature 296:39
‑
42)；和原核生物启动子，比如β
‑
内酰胺酶启动子(villa
‑
kamaroff
cold springharbor, n.y. (2001)中。
[0165]
宿主细胞当在适当条件下培养时合成蛋白，随后可从培养基中收集(如果宿主细胞将其分泌到培养基中)或者直接从产生它的宿主细胞中收集(如果其不分泌)该蛋白。适当的宿主细胞的选择将取决于各种因素，比如期望的表达水平、活性期望或必需的多肽修饰(比如糖基化或磷酸化)以及折叠成生物活性分子的难易程度。
[0166]
可用作表达宿主的哺乳动物细胞系为本领域众所周知的，并且包括(但不限于)可从美国典型培养物保藏中心(american type culture collection) (atcc)获得的永生化细胞系，包括(但不限于)中国仓鼠卵巢(cho)细胞、 hela细胞、幼仓鼠肾(bhk)细胞、猴肾细胞(cos)、人类肝细胞癌细胞(例如hep g2)和许多其他细胞系。在某些实施方案中，细胞系可通过确定哪些细胞系具有高表达水平并且组成性地产生具有il
‑
23结合特性的抗原结合蛋白来选择。在另一个实施方案中，也可选择来自b细胞谱系、不产生其自身抗体但具有产生和分泌异源抗体的能力的细胞系。
[0167]
人类il
‑
23抗原结合蛋白用于诊断和治疗目的的用途抗原结合蛋白可用于检测生物样品中的il
‑
23和鉴定产生il
‑
23的细胞或组织。与il
‑
23特异性地结合的抗原结合蛋白可用于在需要它的患者中诊断和/或治疗与il
‑
23相关的疾病。举个例子说，il
‑
23抗原结合蛋白可用于诊断测定，例如检测和/或量化在血液、血清、细胞或组织中表达的il
‑
23的结合测定。另外，il
‑
23抗原结合蛋白可用于降低、抑制、干扰或调节细胞或组织中il
‑
23的一种或多种生物活性。因此，与il
‑
23结合的抗原结合蛋白可在改善与il
‑
23相关的疾病方面具有治疗用途。
[0168]
适应症本公开还涉及il
‑
23抗原结合蛋白在医学障碍(比如本文公开的那些)的预防或治疗性治疗方面的用途。il
‑
23抗原结合蛋白可用于治疗其中il
‑
23与促成潜在疾病或障碍相关或在其中起作用或者以其他方式促成负面症状的多种病症。
[0169]
通过il
‑
23抗原结合蛋白有效治疗的病症在炎症反应中发挥作用。这种炎症性障碍包括牙周病；肺部障碍，比如哮喘；皮肤障碍，比如银屑病、特应性皮炎、接触性皮炎；风湿性障碍，比如类风湿性关节炎、进行性系统性硬化症(硬皮病)；系统性红斑狼疮；脊柱关节炎，包括强直性脊柱炎、银屑病关节炎、肠病性关节炎和反应性关节炎。还考虑葡萄膜炎，包括vogt
‑
koyanagi
‑
harada病、特发性前部和后部葡萄膜炎以及与脊柱关节炎相关的葡萄膜炎。还考虑il
‑
23抗原结合蛋白用于治疗以下的用途：自身免疫性障碍，包括多发性硬化症；自身免疫性心肌炎；1型糖尿病和自身免疫性甲状腺炎。
[0170]
胃肠系统的退行性病症可用il
‑
23抗原结合蛋白治疗或预防。这种胃肠障碍包括炎症性肠病：克罗恩病、溃疡性结肠炎和乳糜泻。
[0171]
还包括il
‑
23抗原结合蛋白在治疗移植物抗宿主病和并发症比如移植排斥(由实体器官移植(比如心脏、肝脏、皮肤、肾脏、肺部或其他移植，包括骨髓移植)所致的)方面的用途。
[0172]
本文还提供使用il
‑
23抗原结合蛋白治疗各种肿瘤障碍(包括各种形式的癌症，包括结肠癌、胃癌、前列腺癌、肾细胞癌、宫颈癌和卵巢癌及肺癌(sclc和nsclc))的方法。还包括实体肿瘤(包括肉瘤、骨肉瘤和癌，比如腺癌和鳞状细胞癌、食管癌、胃癌、胆囊癌)、白血病(包括急性髓性白血病、慢性髓性白血病、髓样白血病、慢性或急性淋巴母细胞性白血病
和毛细胞白血病)及多发性骨髓瘤。
[0173]
检测方法所述的抗原结合蛋白可用于诊断目的以检测、诊断或监测与il
‑
23相关的疾病和/或病症。用于检测il
‑
23的存在的方法的实例包括免疫测定，比如酶联免疫吸附测定(elisa)和放射免疫测定(ria)。
[0174]
对于诊断应用，抗原结合蛋白一般地用可检测的标记基团标记。合适的标记基团包括(但不限于)以下：放射性同位素或放射性核素(例如例如3h、
14
c、
15
n、
35
s、
90
y、
99
tc、
111
in、
125
i、
131
i)、荧光基团(例如fitc、罗丹明、镧系元素磷光体)、酶促基团(例如辣根过氧化物酶、p
‑
半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酯酶)、化学发光基团、生物素化基团或由二级报告子(例如亮氨酸拉链对序列、二级抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)识别的预定多肽表位。在一些实施方案中，标记基团经各种长度的间隔臂与抗原结合蛋白偶联以减少潜在的立体位阻。用于标记蛋白的各种方法为本领域已知的并且可以使用。
[0175]
提供用于鉴定表达il
‑
23的一种或多种细胞的其他诊断方法。在一个具体实施方案中，抗原结合蛋白用标记基团标记并且检测标记的抗原结合蛋白与il
‑
23的结合。在另一个具体实施方案中，体内检测抗原结合蛋白与il
‑
23的结合。在另一个具体实施方案中，使用本领域已知的技术分离和测量il
‑
23抗原结合蛋白。参见例如harlow和lane, 1988, antibodies: a laboratory manual, new york: cold spring harbor (ed. 1991和周期性增刊); john e. coligan, ed., 1993, current protocols in immunology new york: john wiley & sons。
[0176]
其他方法提供检测与提供的抗原结合蛋白竞争与il
‑
23的结合的测试分子的存在。一种这样测定的实例涉及在存在或不存在测试分子的情况下检测含有一定量il
‑
23的溶液中游离抗原结合蛋白的量。游离抗原结合蛋白(即未与il
‑
23结合的抗原结合蛋白)的量的增加表明测试分子能够与抗原结合蛋白竞争il
‑
23结合。在一个实施方案中，抗原结合蛋白用标记基团标记。或者，标记测试分子并在存在和不存在抗原结合蛋白的情况下监测游离测试分子的量。
[0177]
治疗方法：药用制剂、给予途径提供包含治疗有效量的一种或多种抗原结合蛋白和药学上可接受的赋形剂、稀释剂、载剂、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂的药用组合物。另外，还包括通过给予这种药用组合物来治疗患者的方法。术语“患者”包括人类患者。术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”包括减轻或预防障碍的至少一种症状或其他方面，或者降低疾病严重程度等。术语“治疗有效量”或“有效量”是指确定可在哺乳动物中产生任何治疗反应的il
‑
23抗原结合蛋白的量。本领域的普通技术人员易于确定这种治疗有效量。
[0178]
例如，治疗方法可对受试者具有普遍有益的效果，例如它们可增加受试者的预期寿命。或者，该方法可例如治疗、预防、治愈、缓解或改善(“治疗”)疾病、障碍、病症或不适(“病症”)。一些实施方案提供在受试者中治疗病症的方法，其包括给予受试者包含特异性抗体的药用组合物，其中病症可通过降低受试者体内il
‑
23的活性(部分或完全)来治疗。治疗包括治疗性给予(即当疾病或病症的体征和症状明显时给予)以及治疗以诱导缓解和/或保持缓解两者。因此，可以(部分、显著或完全)降低疾病或病症的严重程度。积极治疗包括上述治疗形式和预防性或维持性疗法(即在疾病或病症静止时给予)，或者可预防或延迟体
征和症状(延迟发作、延长缓解或静止)。
[0179]
应当理解，治疗本文所述疾病的方法将给予有效量的抗il
‑
23抗体。根据待治疗的适应症，治疗有效量足以造成靶向的病况的至少一种症状相对于未经治疗的受试者减轻至少约5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多。
[0180]
抗原结合蛋白不需要实现完全治愈或根除疾病的每一种症状或表现即可构成可行的治疗剂。正如相关领域所认识到的，用作治疗剂的药物可降低给定疾病状态的严重程度，但不需要消除疾病的每一种表现才可视为有用的治疗剂。类似地，为了构成可行的预防剂，预防性地给予的治疗不需要完全有效地预防病症的发作。简单地降低疾病的影响(例如通过减少其症状的数目或严重程度，或通过提高另一种治疗的有效性，或通过产生另一种有益的效果)，或降低疾病在受试者中发生或恶化的可能性便已足够。本文中提供的某些方法包括以足以诱导相对于反映特定障碍的严重程度的指标的基线的持续改善的量和时间给予患者il
‑
23拮抗剂(比如本文中公开的抗原结合蛋白)。
[0181]
如相关领域中理解的，包含本发明分子的药用组合物以适合于适应症的方式给予患者。药用组合物可通过任何合适的技术给予，包括(但不限于)胃肠外、局部或通过吸入。如果注射，药用组合物可例如经关节内、静脉内、肌内、病灶内、腹膜内或皮下途径，通过快速推注或连续输注给予。考虑例如在疾病或损伤部位处的局部给予，亦考虑经皮递送和从植入物的持续释放。通过吸入递送包括例如鼻腔或口腔吸入、使用喷雾器、呈气雾剂形式的拮抗剂吸入等。其他备选方案包括滴眼剂；口服制剂(包括丸剂、糖浆剂、锭剂或口香糖)；和局部制剂(比如洗剂、凝胶剂、喷雾剂和软膏剂)。
[0182]
还考虑在离体程序中使用抗原结合蛋白。例如，患者的血液或其他体液可与结合il
‑
23的抗原结合蛋白离体接触。抗原结合蛋白可与合适的不溶性基质或固体支持性材料结合。
[0183]
有利的是，抗原结合蛋白以包含一种或多种另外的组分(比如生理学上可接受的载剂、赋形剂或稀释剂)的组合物的形式给予。任选地，组合物另外包含一种或多种用于组合疗法的生理活性剂。药用组合物可包含il
‑
23抗原结合蛋白以及一种或多种选自以下的物质：缓冲剂、抗氧化剂(比如抗坏血酸)、低分子量多肽(比如具有少于10个氨基酸的那些多肽)、蛋白、氨基酸、碳水化合物(比如葡萄糖、蔗糖或糊精)、螯合剂(比如edta)、谷胱甘肽、稳定剂和赋形剂。中性缓冲盐水或与同种血清白蛋白混合的盐水为适当的稀释剂的实例。根据适当的行业标准，还可添加防腐剂比如苄醇。可使用适当的赋形剂溶液(例如蔗糖)作为稀释剂将组合物配制为冻干物。在所采用的剂量和浓度下，合适的组分对接受者为非毒性的。可用于药用制剂的组分的进一步实例呈现于任何remington's pharmaceutical sciences (包括第21版(2005), mackpublishing company, easton, pa)中。
[0184]
由执业医师使用的试剂盒包括il
‑
23抗原结合蛋白和用于治疗本文所述的任何病症的标签或其他说明。在一个实施方案中，试剂盒包括一种或多种il
‑
23结合抗原结合蛋白的无菌制剂，其可呈如上所述的组合物形式，并且可位于一个或多个小瓶中。
[0185]
剂量和给予频率可根据因素比如给予途径、所采用的特定抗原结合蛋白、待治疗疾病的性质和严重程度、病症为急性还是慢性以及受试者的体型和一般状况而变化。适当的剂量可通过相关领域已知的程序(例如可能涉及剂量递增研究的临床试验)确定。
[0186]
取决于上述因素，典型的剂量可在约0.1 pg/kg
‑
高达约30 mg/kg或更多的范围内。在具体的实施方案中，剂量可在0.1 pg/kg
‑
高达约30 mg/kg，任选地在1 pg/kg
‑
高达约30 mg/kg，任选地在10 pg/kg
‑
高达20 mg/kg
‑
约10 mg/kg，任选地在约0.1 mg/kg
‑
5 mg/kg或任选地在约0.3 mg/kg
‑
3 mg/kg的范围内。
[0187]
给药频率将取决于所用制剂中特定人类il
‑
23抗原结合蛋白的药代动力学参数。一般地，临床医师给予组合物直至达到获得期望的效果的剂量。因此，组合物可作为单次剂量，或者随着时间的推移作为两次或更多次剂量(其可含有或可以不含相同量的期望的分子)，或者作为经植入装置或导管的连续输注给予。适当的剂量可通过使用适当的剂量反应数据来确定。本发明的il
‑
23抗原结合蛋白可例如在一段时间内以规则间隔给予例如一次或多于一次。在特定实施方案中，il
‑
23抗原结合蛋白在至少一个月或更长的时间段内(例如1、2或3个月)或者甚至无限期地给予。对于治疗慢性病症，长期治疗通常最有效。然而，对于治疗急性病症，给予较短时间(例如1
‑
6周)可能足够。通常，给予抗原结合蛋白直至患者表现出相对于一种或多种所选指标的基线的医学相关程度的改善。
[0188]
考虑将il
‑
23抗原结合蛋白以足以在至少一种反映所治疗的障碍的严重程度的指标上诱导改善(优选地持续改善)的量和时间给予患者。可测量反映患者的不适、疾病或病症的程度的各种指标以确定治疗的量和时间是否足够。这种指标包括例如所关注的障碍的疾病严重程度、症状或表现的临床上公认的指标。在一个实施方案中，如果受试者在间隔2
‑
4周的至少两个时刻表现出改善，则认为改善是持续的。改善的程度通常由医生确定，医生可基于体征、症状、活检或其他测试结果做出这种确定，并且还可采用发予受试者的问卷调查，比如针对给定疾病开发的生活质量问卷调查。
[0189]
可以例如使用如本文所述的测定达到和/或保持每体积血清一定量的il
‑
23特异性抗体的量和/或足够间隔，给予用il
‑
23特异性抗体治疗受试者。例如，给予异二聚体特异性抗体以达到12.5 ng/ml
‑
1,000 ng/ml的血清浓度。在一个实施方案中，给予异二聚体特异性抗体以达到至少12.5 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、60 ng/ml、70 ng/ml、75 ng/ml、80 ng/ml、85 ng/ml、90 ng/ml、95 ng/ml、100 ng/ml、150 ng/ml、200 ng/ml、500 ng/ml或990 ng/ml。本领域的技术人员将理解在此给出的量适用于全长抗体或免疫球蛋白分子。如果使用其抗原结合片段，则绝对量将不同于以可基于片段的分子量相对于全长抗体的分子量计算的方式给出的绝对量。
[0190]
在示例性实施方案中，以每0.5
‑
1.5个月15
‑
54 mg；每1.5
‑
4.5个月55
‑
149 mg；每4
‑
8个月150
‑
299 mg；每8
‑
14个月300
‑
1100 mg或每4
‑ꢀ
12个月300
ꢀ‑ꢀ
1100 mg的量和间隔给予用il
‑
23特异性抗体治疗受试者。在一些实施方案中，以每0.5
‑
1.0个月15
‑
21 mg、每1.5
‑
3.0个月55
‑
70 mg、每4
‑
6个月150
‑
260 mg或每4
‑
8个月300
‑
700 mg的剂量给予抗il
‑
23抗体。在一些实施方案中，量和间隔选自：每个月21 mg；每3个月70 mg；每6个月210 mg；或每6个月700 mg。在一些实施方案中，抗il
‑
23抗体以每3个月260 mg或每3个月700 mg给予。在一些实施方案中，每1个月给予260 mg抗体或每1个月给予700 mg。
[0191]
可调整抗il
‑
23抗体的给予和剂量方案，以提供获得最佳治疗反应的有效量。例如，可给予单次推注，可随着时间的推移给予几个分开的剂量，或者可按照治疗情况的紧迫性所示按比例减少或增加剂量。
[0192]
还考虑将本文公开的抗il
‑
23疗法与多于一种抗il
‑
23治疗剂或与其他疗法一起
使用。当共同给予多种治疗剂时，可相应地调整剂量，如相关领域认可的或已知的那样。
[0193]
本发明的方法和组合物的特定实施方案涉及使用il
‑
23抗原结合蛋白和一种或多种另外的il
‑
23拮抗剂，例如两种或更多种本发明的抗原结合蛋白或者本发明的抗原结合蛋白和一种或多种其他il
‑
23拮抗剂。还提供单独或与用于治疗患者所患病症的其他药物组合给予的il
‑
23抗原结合蛋白。这种药物的实例包括蛋白和非蛋白药物两者。这种药物包括具有抗炎特性的治疗部分(例如非甾体抗炎剂、类固醇、免疫调节剂和/或其他细胞因子抑制剂，比如拮抗例如ifn
‑
γ、gm
‑
csf、il
‑
6、il
‑
8、il
‑
17、il
‑
22和tnf的那些)，或者il
‑
23抗原结合蛋白和一种或多种其他治疗(例如手术、超声或有效减轻炎症的治疗)的治疗部分。当共同给予多种治疗剂时，可相应地调整剂量，如相关领域认可或已知的。可与il
‑
23抗原结合蛋白组合的有用药物包括用于治疗例如克罗恩病或溃疡性结肠炎的那些，比如氨基水杨酸盐类(例如美沙拉明)、皮质类固醇类(包括泼尼松)、抗生素(比如甲硝唑或环丙沙星或其他可用于治疗例如患有瘘管的患者的抗生素)和免疫抑制剂(比如硫唑嘌呤、6
‑
巯基嘌呤、甲氨蝶呤、他克莫司和环孢菌素。这种药物可口服或通过另一种途径(例如经栓剂或灌肠剂)给予。可与il
‑
23结合蛋白组合治疗银屑病的药物包括局部或全身使用的皮质类固醇、卡泊三烯和其他维生素d衍生物、阿维a酸和其他视黄酸衍生物、甲氨蝶呤、他克莫司和环孢菌素。这种药物可同时、连续、交替或根据使得疗法的整个过程能够有效的任何其他方案给予。
[0194]
除人类患者之外，il
‑
23抗原结合蛋白还可用于治疗非人类动物，比如家养宠物(狗、猫、鸟、灵长类动物等)和驯养农场动物(马、牛、绵羊、猪、鸟等)。在这种情况下，可根据动物的体重确定适当的剂量。例如，可使用0.2
‑
1 mg/kg的剂量。或者，剂量根据动物的表面积确定，示例性的剂量在0.1
‑
20 mg/m2，或者更优选地在5
‑
12 mg/m2的范围内。对于小型动物，比如狗或猫，合适的剂量为0.4 mg/kg。il
‑
23抗原结合蛋白(优选地由衍生于接受者物种的基因构建)每周一次或多次通过注射或其他合适的途径给予，直至动物的病症得到改善，或者其可无限期地给予。
[0195]
在本发明的一个方面，布雷库单抗无反应者中的il
‑
22bp水平可为至少359 pg/ml，例如359 pg/ml
‑
6,000 pg/ml，其中具有低于这种水平的il
‑
22bp血清水平的受试者对于针对炎症性病症的抗il
‑
23剂有反应。对照中的il
‑
22bp水平可基于未患有这种炎症性病症、先前确定对布雷库单抗有反应或先前确定对布雷库单抗无反应的受试者来确定。在一些实施方案中，布雷库单抗无反应者中的il
‑
22bp水平为359
‑
5,000 pg/ml、359
‑
4,000 pg/ml、359
‑
2,500 pg/ml、359
‑
1,000 pg/ml、359
‑
500 pg/ml、400
‑
6,000 pg/ml、400
‑
5,000 pg/ml、400
‑
4,000 pg/ml、400
‑
2,500 pg/ml、400
‑
1,000 pg/ml、400
‑
500 pg/ml、500
‑
6,000 pg/ml、500
‑
5,000 pg/ml、500
‑
4,000 pg/ml、500
‑
2,500 pg/ml、500
‑
1,000 pg/ml、750
‑
6,000 pg/ml、750
‑
5,000 pg/ml、750
‑
4,000 pg/ml、750
‑‑
2,500 pg/ml、750
‑
1,000 pg/ml、1,000
‑
6,000 pg/ml、1,000
‑
5,000 pg/ml、1,000
‑
4,000 pg/ml、1,000
‑
2,500 pg/ml、1,500
‑
6,000 pg/ml、1,500
‑
5,000 pg/ml、1,500
‑
4,000 pg/ml、1,500
‑
2,500 pg/ml、2,000
‑
6,000 pg/ml、2,000
‑
5,000 pg/ml或2,000
‑
2,500 pg/ml。
[0196]
在本发明的一个方面，布雷库单抗无反应者中的ifn
‑
γ水平低于15 pg/ml，其中具有至少15 pg/ml的ifn
‑
γ血清水平的受试者对于针对炎症性病症的抗il
‑
23剂有反应。对照中的ifn
‑
γ水平可基于未患有这种炎症性病症、先前确定对布雷库单抗有反应或先前
确定对布雷库单抗无反应的受试者来确定。
[0197]
提供以下实施例(包括进行的实验和获得的结果)仅用于说明性目的，并且不应解释为限制所附权利要求的范围。
实施例
[0198]
实施例1使用r&d system的商业il
‑
22bp试剂盒(r&d systems, inc., minneapolis, mn)，通过酶联免疫吸附测定(enzyme
‑
linked immunosorbent assays) (elisa)获得从这些实施例中描述的实验产生并呈现于图1
‑
10中的数据。将来自健康人类的il
‑
22bp血清水平与克罗恩病(cd)患者、溃疡性结肠炎(uc)患者和对抗tnfα治疗为难治性的克罗恩病患者进行比较。结果显示，cd和uc患者中的il
‑
22bp血清水平高于健康人类中的il
‑
22bp血清水平。然而，对抗tnfα治疗为难治性的cd患者中的il
‑
22bp水平低于健康人类中的il
‑
22bp水平。
[0199]
在ibd患者发炎的肠组织中，与健康对照相比较，il
‑
23调控的炎性细胞因子(包括il
‑
22、il
‑
17a和ifn
‑
γ)增加。出乎意料的是，il
‑
22的可溶性抑制剂 il
‑
22bp也增加，表明肠道中的il
‑
22活性受到严密调控。本文公开的来自2a期临床试验(即medi 2a期临床试验)的数据表明，ibd患者(其对抗tnfα治疗均为无反应者)的全身性(血清) il
‑
22bp水平低于健康人类对照的全身性(血清) il
‑
22bp水平。参见图9和图11。然而，一般cd患者的中值il
‑
22bp血清水平高于健康对照的中值il
‑
22bp血清水平。medi 2a期结果显示，tnf难治性活动性cd患者的il
‑
22基线水平升高与布雷库单抗治疗功效强烈相关。也就是说，这些患者中较高的il
‑
22基线水平可预测最有可能受益于布雷库单抗治疗的患者亚群。由于高il
‑
22水平在这种情况下与抗tnfα无反应者中降低的il
‑
22bp水平相关，因此本公开提供一种鉴定由于il
‑
22bp基线血清水平降低而适合于用抗il
‑
23剂治疗的患者或患者亚群的方法，本文中公开il
‑
22bp基线血清水平作为比未表现出降低的il
‑
22bp基线血清水平的患者更可能受益于抗il
‑
23剂治疗的患者或患者亚组的预测性生物标记物。图11中的患者亚组为从抗tnf剂治疗失败的患者群体(即对这种治疗无反应的患者、对这种治疗不能耐受的患者或未曾治疗的ibd患者(即未接受过ibd治疗的患者))中鉴定的。图1
‑
8中呈现的数据(如图9和11中汇总的)表明正常或健康人类男性中的平均il
‑
22bp血清水平为680 pg/ml (679.86 pg/ml)，和正常或健康人类女性中的平均血清水平为440 pg/ml (440.03 pg/ml)。因此，健康人类的平均il
‑
22bp血清水平不高于680 pg/ml。相比之下，患有克罗恩病的人类表现出2350 pg/ml (2355.78 pg/ml)的平均il
‑
22bp血清水平。图9中的汇总数据还表明患有溃疡性结肠炎的人类具有895 pg/ml (894.27 pg/ml)的平均il
‑
22bp血清水平。
[0200]
来自对抗tnf
‑
α疗法为难治性的克罗恩病患者的血清样品也进行了血清干扰素
‑
γ水平的elisa 测定。使用meso scale discovery (nsd) 9plex细胞因子测定试剂盒(meso scale discovery, rockville, md)进行免疫测定。血清样品获自参与medimmune 2a期(medi2070
‑
1147)临床试验的克罗恩病患者。所有样品均获自布雷库单抗治疗组中的患者，并且所有提供样品的患者均为对抗tnf
‑
α治疗无反应者，如上所述。图10中显示的结果表明，布雷库单抗反应者的ifn
‑
γ血清水平高于无反应者的ifn
‑
γ血清水平，表明ifn
‑
γ的血清水平可用于鉴定对布雷库单抗治疗有反应的cd患者亚群。
[0201]
实施例2对基线ifn
‑
γ血清水平的回顾性分析显示，升高的ifn
‑
γ水平与用抗tnf剂治疗失败、无反应或不能耐受抗tnf剂治疗的患者对布雷库单抗治疗有积极反应相关联。参见图10。因此，升高的基线ifn
‑
γ血清水平可预测或鉴定将受益于抗il
‑
23治疗的tnf难治性患者亚群。
[0202]
申请中提及的所有出版物和专利均通过参考以其全部或以相关部分结合至本文中，如从上下文显而易见的。所公开的主题的各种修改和变化对于本领域技术人员将为显而易见的，并且不背离本公开的范围和精神。尽管本公开已经结合特定优选的实施方案进行描述，但是应当理解，所要求保护的本发明不应过度地限于这种特定的实施方案。对相关领域的技术人员显而易见的用于制备或使用所公开的主题的所述模式的各种修改旨在处于所附权利要求的范围内。