一种用于防治家禽冷应激的中药组合物的制备方法与流程

1.本发明涉及中兽药制备技术领域，尤其涉及一种用于防治家禽冷应激的中药组合物的制备方法。


背景技术：

2.随着养殖技术的发展，家禽养殖得到了迅速发展，集约化和工业化养殖逐渐成为主流养殖方式，但是规模化和工业化养殖容易导致家禽的生长发育状况不佳、生长性能和抗应激能力的下降。我国北方地区寒冷刺激是一种常见的应激原，过强或长期的应激会对家禽造成严重损害，改变家禽的内分泌状态，降低生产性能，破坏免疫系统，降低抗病能力。现实生产过程中，过去常用化学药物添加至饲料中，来防治寒冷应激反应对畜禽的影响，但由于其残留时间长、副作用明显，有些化学药物已被国家禁止在饲料中添加。
3.四逆汤源自张仲景的《伤寒论》，由附子、干姜、炙甘草3药组成，为温里剂，具有温中祛寒，回阳救逆之功效。现有技术中，四逆汤主治四肢厥冷，脉微欲绝，亡阳虚脱。将四逆汤用于防治家禽冷应激，其治疗效果好无副作用，并且低毒无残留。但是现有的四逆汤的制备方法存在药物利用率低、起效慢、中药资源浪费程度高等问题。


技术实现要素：

4.基于现有技术中存在的以上问题，本发明提供一种用于防治家禽冷应激的中药组合物的制备方法，本发明的制备方法药物利用率高，以本发明的制备方法制备得到的中药组合物可以有效防治家禽的冷应激能力，起效快且无毒副作用，克服了现有技术的缺陷，并且以本发明的方法制备得到的中药组合物不仅可以提高家禽的生长性能，还对家禽的免疫功能具有促进作用，能够降低家禽的发病率和死亡率。
5.为达到上述发明目的，本发明采用了如下的技术方案：
6.本发明实施例提供了一种用于防治家禽冷应激的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
7.步骤一，将干姜粉碎后进行二氧化碳超临界萃取，萃取完成后分离，得干姜挥发油和姜渣；
8.步骤二，将淡附片粉碎后加入水和酒石酸溶液，混合均匀，常温浸泡2～4h，煎煮，分离得淡附片提取液和淡附片渣；
9.步骤三，将炙甘草粉碎后加入酶解液，混合均匀，在50～70℃下酶解3～5h，加入乙醇溶液后进行超声提取，分离得炙甘草醇提液和炙甘草渣；
10.步骤四，向所述姜渣、所述淡附片渣和所述炙甘草渣中加入水煎煮1～2h，分离得药渣提取液；
11.步骤五，将所述淡附片提取液、所述炙甘草醇提液和所述药渣提取液合并，冷却至室温，加乙醇溶液，搅匀，浓缩，冷藏22～26h，滤过，加入所述干姜挥发油，搅匀，灭菌，即得所述中药组合物。
12.本发明提供的用于防治家禽冷应激的中药组合物的制备方法，针对不同的药物分别采取了不同的提取方法，相比于传统的提取工艺，本发明的制备方法更有利于药物有效成分的提取，进而提高药物的利用率。首先，本发明的制备方法通过将干姜粉碎后进行超临界萃取，获得干姜挥发油。通过控制超临界萃取的各项参数可以提高干姜挥发油的提取率，并且由于超临萃取分离过程温度低，可在接近室温的情况下完成，能够减少高温导致的干姜挥发油的损耗。其次，本发明提供的中药组合物的制备方法将淡附片先粉碎后再加到水和酒石酸溶液中浸泡和煎煮，一方面通过适量酒石酸的浸泡可以促使淡附片中的生物碱被充分浸出，并且适量的酒石酸还可以提高淡附片中生物碱的稳定性。另一方面，本发明将酒石酸溶液与煎煮相配合，可以将淡附片中具有毒性的乌头碱分解为毒性小的生物碱，降低提取液中不利于家禽机体健康的生物碱含量，从而降低提取液的毒性，并且，经过煎煮还有利于将淡附片中其他有利于防治家禽冷应激的有效成分被充分提取出来。再次，将炙甘草粉碎后先经过酶解，可以初步破坏炙甘草的细胞壁，便于活性物质的释放，再配合超声提取，加强了炙甘草胞内活性物质的释放、扩散和溶解，进而大大地提高了炙甘草有效成分的提取，并且经过酶解处理后的炙甘草的有效成分也更易被人体吸收。最后，将所有药渣合并后再次水提，可以提高药物利用率，节约中药资源，将所有提取液合并后冷却，再经过醇沉，所得提取液与干姜挥发油相配合后具有更好的防治家禽冷应激的效果，且醇沉后的提取液温度较低，可以减少干姜挥发油的高温损耗。
13.干姜为温里之药，具有温中散寒，回阳通脉，温肺化饮的功效。淡附片也是一味温里药，能够回阳救逆、补火助阳、散寒止痛。淡附片上可以温心阳，中可以温脾阳，下可以温肾阳，可以补全身之阳气。炙甘草，能够补脾和胃，益气复脉，用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心动悸，脉结代。结合上述三味药的功效及其提取方法，优选干姜、淡附片和炙甘草的质量比为2:3～4:3～4。
14.优选地，步骤一中，干姜粉碎成过1000～1700微米的干姜粉，超临界萃取的温度为40～50℃、压力为10～40mpa、二氧化碳的流量为12～16kg/h，萃取的时间为1.5～2h。
15.通过控制超临界萃取的温度、压力和时间以及二氧化碳的流量，可以显著提高干姜挥发油的提取率。
16.优选地，步骤一中，分离通过分离釜进行，分离温度为25～40℃，分离压力为3～10mpa。
17.通过控制分离温度和分离压力，既可以使干姜挥发油的提取在接近室温的情况下完成，减少高温导致的干姜挥发油的损耗，又可以保证干姜挥发油被充分提取。
18.优选地，步骤一中，还包括向干姜挥发油中加入氯化钠，静置10～30min，使油水分离，形成油层和水层，油层为精制干姜挥发油。
19.向干姜挥发油中加入氯化钠，氯化钠溶于水，可以增加水的密度，促进水油分离。将初步提取出的干姜挥发油进行精制，除去其中水分及溶于水的杂质，为后续更好地控制干姜挥发油的质量提供了可靠保障。
20.优选地，步骤二中，淡附片粉碎至粒径为250～380微米。
21.优选地，步骤二中，水的添加量为淡附片质量的10～12倍。
22.优选地，步骤二中，酒石酸溶液的浓度为3～10g/l，酒石酸溶液的添加量为淡附片质量的0.5～1倍。
23.通过使用浓度范围在3～10g/l的酒石酸浸泡淡附片，既可以促进淡附片中生物碱的浸出，又可以提高淡附片中生物碱的稳定性。
24.优选地，步骤二中，煎煮的温度为80～100℃，煎煮的时间为0.5～1h。
25.淡附片有毒，将淡附片煎煮半小时到一小时左右，可以将淡附片中具有毒性的乌头碱分解为毒性小的生物碱，从而降低淡附片的毒性。
26.优选地，步骤三中，炙甘草粉碎至粒径为250～380微米。
27.优选地，步骤三中，酶解液与炙甘草的质量比为10～35:1。
28.优选地，步骤三中，酶解液中包含果胶酶、纤维素酶和半纤维素酶。
29.本发明通过混合生物酶酶解法处理炙甘草，炙甘草中由于细胞壁等物质的存在不同程度地影响或阻碍着炙甘草中活性物质的释放，将果胶酶和纤维素酶酶协同半纤维素酶一起使用，可破坏炙甘草的细胞壁，便于活性物质的释放，从而提高萃取率，并且经过酶解处理后的有效成分也更易被人体吸收。
30.优选地，步骤三中，酶解液的制备方法为，将果胶酶、纤维素酶和半纤维素酶液加入30～55℃的去离子水中，搅拌分散均匀即得，果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶与去离子水的质量比为1～2:1～2:1～2：40。
31.采用酶解法提取条件温和，可以有效的保留炙甘草中的活性成分，从而提炙甘草有效成分的稳定性。
32.优选地，步骤三中，乙醇溶液为体积百分浓度为70％～85％的乙醇水溶液。
33.本发明采用体积百分浓度为70％～85％的乙醇溶液作为提取液，相比于100％的乙醇溶液，本发明采用的提取液的极性适宜，能够有效提取出炙甘草中脂溶性物质，达到对炙甘草有效成分最好的溶出效果。
34.优选地，步骤三中，乙醇溶液与炙甘草的质量比为20～30:1。
35.优选地，步骤三中，超声提取的温度为30～40℃，超声的功率为300～420w，超声提取的总时间为30～50min，每超声3s间歇3～4s。
36.通过控制超声提取的温度和功率，可以增加炙甘草胞内活性物质的释放、扩散和溶解，从而提高炙甘草有效成分的提取效率。
37.优选地，步骤四中，水的添加量为所有药渣总质量的10～15倍，煎煮的温度为90～100℃。
38.优选地，步骤五中，乙醇溶液的体积百分浓度为70％～85％，乙醇溶液与合并的提取液的体积比为3～4:1，冷藏的温度为0～8℃，干姜挥发油的质量为中药组合物质量的8％～10％。
39.利用有效成分能溶于乙醇而杂质不溶于乙醇的特性，在加入乙醇后，有效成分转溶于乙醇中而杂质被沉淀出来，可达到除去杂质保留药物有效成分的目的。在0～8℃的条件下冷藏可以加速杂质的析出和沉淀。
40.本发明提供的用于防治家禽冷应激的中药组合物的制备方法针对不同药物分别分别采取了不同的提取方法，相比于传统的提取工艺本发明的制备方法的药物利用率更高，以本发明的制备方法制备得到的中药组合物可以有效防治家禽的冷应激能力，起效快且无毒副作用，并且以本发明的方法制备得到的中药组合物不仅可以提高家禽的生长性能，还对家禽的免疫功能具有促进作用，能够降低家禽的发病率和死亡率。
具体实施方式
41.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
42.实施例1
43.本实施例提供一种用于防治家禽冷应激的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
44.(1)将200g干姜粉碎至粒径为1000微米，将干姜粉进行二氧化碳超临界萃取，萃取的温度为40℃、压力为30mpa、二氧化碳的流量为16kg/h，萃取的时间为1.5h，萃取完成后通过分离釜进行分离，分离温度为25℃，分离压力为3mpa，得干姜挥发油和姜渣，向干姜挥发油中加入氯化钠，静置30min，使油水分离，形成油层和水层，油层为精制干姜挥发油。
45.(2)将300g淡附片粉碎至粒径为380后加到3000g水和300g浓度为10g/l的酒石酸溶液中，混合均匀，常温浸泡2h，煎煮，煎煮的温度为80℃，煎煮的时间为1h，煎煮完成后分离得淡附片煎煮液和淡附片渣。
46.(3)将200g果胶酶、200g纤维素酶和200g半纤维素酶液加入30℃的8000g去离子水中，搅拌分散均匀得到酶解液，将300g炙甘草粉碎至粒径为250微米后加到6000g酶解液中，混合均匀，在50℃下酶解5h，得酶解后的炙甘草，向酶解后的炙甘草中加入体积百分浓度为70％的乙醇水溶液，制得混悬液，乙醇水溶液与酶解后的炙甘草的质量比为20:1，将混悬液经超声提取后分离得炙甘草醇提液和炙甘草渣，超声提取的温度为40℃，超声的功率为300w，超声提取的总时间为30min，每超声3s间歇3s。
47.(4)向姜渣、淡附片渣和炙甘草渣中加入水煎煮2h，水的添加量为所有药渣总质量的10倍，煎煮完成后分离得药渣提取液。
48.(5)将淡附片煎煮液、炙甘草醇提液和药渣提取液合并，冷却至室温，加入体积百分浓度为85％乙醇溶液，乙醇溶液与淡附片煎煮液、炙甘草醇提液和药渣提取液合并液的体积比为3:1，搅匀，浓缩，冷藏22h，冷藏的温度为8℃，滤过，向滤液中加入精制干姜挥发油，精制干姜挥发油的质量为中药组合物质量的8％，搅匀，灭菌，即得中药组合物。
49.实施例2
50.本实施例提供一种用于防治家禽冷应激的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
51.(1)将200g干姜粉碎至粒径为1500微米，将干姜粉进行二氧化碳超临界萃取，萃取的温度为50℃、压力为10mpa、二氧化碳的流量为12kg/h，萃取的时间为2h，萃取完成后通过分离釜进行分离，分离温度为30℃，分离压力为10mpa，得干姜挥发油和姜渣，向干姜挥发油中加入氯化钠，静置10min，使油水分离，形成油层和水层，油层为精制干姜挥发油。
52.(2)将400g淡附片粉碎至粒径为250微米后加到4800g水和200g浓度为3g/l的酒石酸溶液中，混合均匀，常温浸泡4h，煎煮，煎煮的温度为100℃，煎煮的时间为0.5h，煎煮完成后分离得淡附片煎煮液和淡附片渣。
53.(3)将1000g果胶酶、1000g纤维素酶和1000g半纤维素酶液加入55℃的20000g去离子水中，搅拌分散均匀得到酶解液，将300g炙甘草粉碎至粒径为380微米后加到10500g酶解液中，混合均匀，在70℃下酶解3h，得炙甘草，向炙甘草中加入体积百分浓度为85％的乙醇
水溶液，制得混悬液，乙醇水溶液与炙甘草的质量比为20:1，将混悬液经超声提取后分离得炙甘草醇提液和炙甘草渣，超声提取的温度为30℃，超声的功率为420w，超声提取的总时间为50min，每超声3s间歇4s。
54.(4)向姜渣、淡附片渣和炙甘草渣中加入水煎煮1h，煎煮的温度为100℃，水的添加量为所有药渣总质量的15倍，煎煮完成后分离得药渣提取液。
55.(5)将淡附片煎煮液、炙甘草醇提液和药渣提取液合并，冷却至室温，加入体积百分浓度为70％乙醇溶液，乙醇溶液与淡附片煎煮液、炙甘草醇提液和药渣提取液合并液的体积比为4:1，搅匀，浓缩，冷藏26h，冷藏的温度为5℃，滤过，向滤液中加入精制干姜挥发油，精制干姜挥发油的质量为中药组合物质量的9％，搅匀，灭菌，即得中药组合物。
56.实施例3
57.本实施例提供一种用于防治家禽冷应激的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
58.(1)将200g干姜粉碎至粒径为1700微米，将干姜粉进行二氧化碳超临界萃取，萃取的温度为45℃、压力为40mpa、二氧化碳的流量为14kg/h，萃取的时间为1.8h，萃取完成后通过分离釜进行分离，分离温度为40℃，分离压力为8mpa，得干姜挥发油和姜渣，向干姜挥发油中加入氯化钠，静置20min，使油水分离，形成油层和水层，油层为精制干姜挥发油。
59.(2)将300g淡附片粉碎至粒径为350微米后加到3000g水和150g浓度为8g/l的酒石酸溶液中，混合均匀，常温浸泡3h，煎煮，煎煮的温度为90℃，煎煮的时间为0.8h，煎煮完成后分离得淡附片煎煮液和淡附片渣。
60.(3)将200g果胶酶、100g纤维素酶和100g半纤维素酶液加入45℃的8000g去离子水中，搅拌分散均匀得到酶解液，将400g炙甘草粉碎至粒径为350微米后加到8000g酶解液中，混合均匀，在60℃下酶解4h，得炙甘草，向炙甘草中加入体积百分浓度为80％的乙醇水溶液，制得混悬液，乙醇水溶液与炙甘草的质量比为20:1，将混悬液经超声提取后分离得炙甘草醇提液和炙甘草渣，超声提取的温度为35℃，超声的功率为400w，超声提取的总时间为40min，每超声3s间歇3s。
61.(4)向姜渣、淡附片渣和炙甘草渣中加入水煎煮1.5h，煎煮的温度为95℃，水的添加量为所有药渣总质量的13倍，煎煮完成后分离得药渣提取液。
62.(5)将淡附片煎煮液、炙甘草醇提液和药渣提取液合并，冷却至室温，加入体积百分浓度为80％乙醇溶液，乙醇溶液与淡附片煎煮液、炙甘草醇提液和药渣提取液合并液的体积比为4:1，搅匀，浓缩，冷藏25h，冷藏的温度为0℃，滤过，向滤液中加入精制干姜挥发油，精制干姜挥发油的质量为中药组合物质量的10％，搅匀，灭菌，即得中药组合物。
63.实施例4
64.本实施例提供一种用于防治家禽冷应激的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
65.(1)将200g干姜粉碎至粒径为1200微米，将干姜粉进行二氧化碳超临界萃取，萃取的温度为48℃、压力为20mpa、二氧化碳的流量为15kg/h，萃取的时间为1.6h，萃取完成后通过分离釜进行分离，分离温度为30℃，分离压力为5mpa，得干姜挥发油和姜渣，向干姜挥发油中加入氯化钠，静置25min，使油水分离，形成油层和水层，油层为精制干姜挥发油。
66.(2)将400g淡附片粉碎至粒径为300微米后加到4400g水和400g浓度为5g/l的酒石
酸溶液中，混合均匀，常温浸泡3.5h，煎煮，煎煮的温度为95℃，煎煮的时间为0.6h，煎煮完成后分离得淡附片煎煮液和淡附片渣。
67.(3)将100g果胶酶、100g纤维素酶和200g半纤维素酶液加入50℃的8000g去离子水中，搅拌分散均匀得到酶解液，将400g炙甘草粉碎至粒径为300微米后加到8000g酶解液中，混合均匀，在65℃下酶解4.5h，得炙甘草，向炙甘草中加入体积百分浓度为75％的乙醇水溶液，制得混悬液，乙醇水溶液与炙甘草的质量比为20:1，将混悬液经超声提取后分离得炙甘草醇提液和炙甘草渣，超声提取的温度为38℃，超声的功率为320w，超声提取的总时间为45min，每超声3s间歇4s。
68.(4)向姜渣、淡附片渣和炙甘草渣中加入水煎煮1.2h，煎煮的温度为98℃，水的添加量为所有药渣总质量的11倍，煎煮完成后分离得药渣提取液。
69.(5)将淡附片煎煮液、炙甘草醇提液和药渣提取液合并，冷却至室温，加入体积百分浓度为82％乙醇溶液，乙醇溶液与淡附片煎煮液、炙甘草醇提液和药渣提取液合并液的体积比为3:1，搅匀，浓缩，冷藏23h，冷藏的温度为4℃，滤过，向滤液中加入精制干姜挥发油，精制干姜挥发油的质量为中药组合物质量的8％，搅匀，灭菌，即得中药组合物。
70.对比例1
71.本对比例提供一种传统的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
72.(1)取300g淡附片、300g炙甘草加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液，滤过。
73.(2)取200g干姜通水蒸气蒸馏提取干姜挥发油，干姜挥发油和蒸馏后的水溶液备用；姜渣再加水煎煮1小时，煎液与上述水溶液合并，滤过，再与淡附片、炙甘草的煎液合并，浓缩至约400ml，放冷，加体积百分浓度为85％乙醇溶液1200ml，搅匀，浓缩，冷藏22小时，冷藏的温度为8℃，滤过，向滤液中加入干姜挥发油，干姜挥发油的质量为中药组合物质量的8％，搅匀，灭菌，即得中药组合物。
74.试验例
75.将本发明实施例1
‑
4和对比例1制备的中药组合物对雏鸡进行动物学实验：
76.1.试验方法
77.1.1实验分组及处理：在密集养殖的雏鸡群中选取生长状况良好的14日龄的雏鸡120只，每天定时将养殖这120只雏鸡的鸡舍温度迅速降低15℃，并维持4个小时，持续七天，诱导雏鸡产生冷应激反应，七天以后雏鸡产生明显的冷应激反应，具体表现特征为，雏鸡的采食量和体重明显下降，病死率上升。将产生冷应激反应的21日龄的雏鸡分为对照组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4和对比例1组各20只，并分别做标记。对照组为基础饲料喂食，实施例各组的喂食方法为：将实施例1
‑
4和对比例1制备的用于防治家禽冷应激的中药组合物，按中药组合物的总重量占基础饲料重量2
‰
的比例拌合在基础饲料中喂食，喂食7天，之后仍采用基础饲料喂食。对照组及各实施例组的喂食次数为每天喂食两次，喂食时间分别为早上9:30
‑
11:0和下午13:00
‑
14:30，按照正常的免疫程序进行免疫、驱虫。所述基础饲料的品牌是农大利511雏鸡配合饲料。
78.1.2指标测定：实验期间，每天观察各组雏鸡的生长状况，并测定采食量、体重和病死率，观察精神状态，此外，测定35日龄各组雏鸡的脾指数、胸腺指数、法氏囊指数。
79.2实验结果
80.2.1本发明的中药组合物对雏鸡的生长性能的影响
81.表1
[0082][0083]
如表1所示，与对照组相比，实施例1
‑
4组的雏鸡平均日增重分别有不同程度的增加，较之对照组差异显著(p＜0.05)，实施例1
‑
4组的雏鸡料重比分别有不同程度的降低，且通过观察，实施例1
‑
4组的雏鸡精神状况良好、不易受惊吓。对比例1组雏鸡平均日增重与对照组相比也有所增加，但不如实施例1
‑
4组增加的多，对比例1组的雏鸡料重比与对照组相比也有所降低，但不如实施例1
‑
4组降低的明显，对比例1组的雏鸡精神状况比对照组雏鸡的精神状况稍好，对照组的雏鸡仍较为沉郁。
[0084]
2.2本发明的中药组合物对雏鸡的免疫器官指数的影响
[0085]
表2
[0086][0087][0088]
如表2所示，与对照组相比，实施例1
‑
4组的鸡脾指数、胸腺指数、法氏囊指数分别有不同程度的增加，较之对照组差异显著(p＜0.05)，表明其相应的免疫器官，即脾、胸腺、法氏囊较对照组发育良好，说明本发明的中药组合物可以防治家禽冷应激，并且对家禽的免疫功能具有促进作用，对比例1组的鸡脾指数略有增加，胸腺指数、法氏囊指数几乎没有发生变化。
[0089]
2.3本发明的中药组合物对雏鸡健康的影响
[0090]
表3
[0091] 35日龄时发病率(％)35日龄时死亡率(％)实施例1组5.832.81
实施例2组5.853.17实施例3组5.893.19实施例4组5.843.08对比例1组6.814.58对照组7.965.37
[0092]
由表3可知，相比于对照组，实施例1
‑
4组雏鸡发病率和死亡率都显著降低了，对比例1组的雏鸡发病率和死亡率也略有降低，但不如实施例1
‑
4组的的雏鸡发病率和死亡率降低的明显，说明实施例1
‑
4组雏鸡健康水平显著优于对比例1组和对照组。
[0093]
以上数据说明，以本发明的制备方法制备得到的中药组合物，可以有效防治家禽冷应激，与对比例1组相比本发明制备的中药组合物起效快，无残留，不仅可以提高家禽的生长性能，还对家禽的免疫功能具有促进作用，降低家禽的发病率和死亡率。
[0094]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。